Universidad Autnoma del Estado de Mxico

Aplicacin de tcnicas de biologa molecular en microbiologa.

Jesus Snchez Delgado
PCR
Una de las tcnicas ms recientes y a la vez ms utilizadas actualmente en biologa molecular es
la de la PCR(Polymerase Chain Reaction/ Reaccin en Cadena de la Polimerasa).
Permite amplificar de forma selectiva fragmentos pequeos de DNA, de manera que partiendo de
una pequea cantidad de DNA podemos multiplicar su nmero por un factor de varios millones,
amplificando especficamente slo el gen de inters, pero no los dems. Esta tcnica se basa en el
uso de unos enzimas (polimerasas) aislados de bacterias termfilas, que pueden trabajar a
temperaturas de casi 100 C.
Aplicaciones.

Comparacin gentica de dos grupos taxonmicos distintos. As, cada grupo taxonmico
debera tener un DNA con caractersticas propias, y grupos diferentes presentaran
secuencias diferenciables. Asi es como es posible realizar comparaciones entre individuos
alejados filogenticamente, y comparar si cada grupo puede caracterizarse
molecularmente.

RFLP( Restriction Fragment Length Polimorfism/ polimorfismo de longitud de fragmentos de

restriccin)
Es aquel segmento de DNA, de tamao variable entre individuos, que se encuentra entre dos
secuencias de DNA que llamamos sitios de restriccin porque, con esta tcnica una enzima de
restriccin la reconoce y corta por estas secuencias. Dando lugar a fragmentos de restriccin.
Que es un fragmento de restriccion?

Son un tipo de polimorfismo que resulta de la variacin en la secuencia de ADN

reconocida por las enzimas de restriccin.
Aplicaciones

Se puede usar para identificar el gen coa que codifica para la coagulasa o el gen spa que
codifica para la protena A de S. aureus resistente a meticilina.

RAPD
Es una tcnica que consiste en la amplificacin de segmentos de ADN con iniciadores pequeos
(generalmente de 10 nucletidos de longitud) de secuencias aleatorias no-palindrmicas, con un
contenido de G + C entre 50 y 80%. Los fragmentos obtenidos se visualizan como un patrn de
bandeo caracterstico del individuo y cada banda observada se considera un locus. La presencia o
la ausencia de las bandas entre individuos se deben a cambios en la secuencia (o a la prdida) de
los sitios a los que se alinea el iniciador. La insercin o eliminacin de nucletidos en la secuencia

intermedia entre los dos sitios de acoplamiento, aumentar o disminuir el tamao de la molcula
amplificada.
Aplicaciones.

Identificacin de fragmentos de DNA posiblemente relacionados con virulencia en hongos

entomopatogenos.
La clasificacin de diversas cepas bacterianas (Staphylococcus aureus resistente a
meticilina, enterobacterias, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Legionella
pneumophila, etc.) y hongos (Aspergillus fumigatus y Candida albicans).

Fish
Es una tcnica que emplea sondas de oligonucletidos marcadas con fluorocromos las cuales van
dirigidas hacia secuencias especficas del cido ribonucleico ribosomal (ARNr), lo que permite la
identificacin rpida y especfica de clulas microbianas ya sea que estn como clulas
individuales o se encuentren agrupadas en su ambiente natural.
Aplicaciones

La identificacin de los microorganismos presentes en un micro hbitat o poblacin

microbiana.

ARDRA.(Amplified rDNA Restriction Analysis)

Es una herramienta adecuada para diferenciar los productos de PCR sobre la base de la digestin
con enzimas. Los perfiles electroforticos obtenidos pueden ser utilizados para identificar especies,
siempre y cuando se cuente con el nmero y tipo adecuado de enzimas de restriccin. Esta tcnica
se basa en la digestin del gen ribosomal 16S previamente amplificado mediante la PCR, se
separa mediante electroforesis en gel de agarosa para una identificacin adecuada.
Aplicacin.

Identificacin de microorganismos en especfico bacterias lcticas y acticas en el proceso

de vinificacin.
Identificacin de las bacterias coliformes en humedales.

DGGE("Denaturing Gradient Gel Electrophoresis)

Es un tipo de electroforesis que permite la separacin de fragmentos de ADN del mismo tamao
pero con diferente secuencia de nucletidos. Para ello, un gradiente lineal creciente de agentes
qumicos desnaturalizantes del ADN (una mezcla de urea y formamida) se incorpora a lo largo de
un gel de poliacrilamida. Durante la electroforesis, se mantiene una temperatura constante de 5065 C y los fragmentos de ADN de doble cadena migran por el gel hasta encontrar una
determinada concentracin de urea y formamida (concentracin desnaturalizante) a la cual las
cadenas se separan localmente y el desplazamiento de las molculas disminuye o se interrumpe.
Aplicaciones.
-Biorremediacin
-Tratamiento de aguas

-Compostaje
-Fermentaciones de inters alimentario
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