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INTRODUO
O uso de corantes naturais no ensino mdio e superior, principalmente de qumica geral e analtica, tem sido proposto freqentemente. As principais vantagens so relacionadas com a atrao
do interesse dos estudantes para o contedo abordado, devido
colorao das espcies qumicas contidas nos tecidos vegetais e
suas mudanas de cor em funo do pH1,2. Some-se a isto o fato de
usar algo presente no cotidiano dos estudantes para esta finalidade,
ligando a qumica ao seu dia-a-dia.
Neste contexto, os corantes foram propostos para demonstrao
de conceitos de pH1-3, como indicadores em titulaes cido-base,
com deteco visual do ponto final4, para demonstrao de fundamentos de cromatografia em camada delgada5 e aplicao em mtodos ticos de anlise6, de princpios de anlise em fluxo7 e na determinao de sulfito em vinhos8 e de nitrito em guas9.
As mudanas na colorao de extratos de tecidos vegetais foram
abordadas inicialmente por Geissman10, que as atribuiu s antocianinas.
As antocianinas so as formas glicosiladas das antocianidinas que, por
sua vez, so compostos da classe dos flavonides e que conferem colorao azul ou vermelha aos tecidos vegetais1,10.
As transformaes estruturais que provocam tais mudanas de
cor em funo do pH foram tambm descritas previamente por
Brouillard e colaboradores11,12 e por Epp13.
As estrutras qumicas das antocianinas e as mudanas estruturais, que ocorrem com a variao do pH e provocam as mudanas de
cor, podem ser encontradas nas referncias citadas acima. Uma discusso mais aprofundada sobre esta classe interessante de flavonides
pode ser encontrada no trabalho de Timberlake e Bridle14.
Neste artigo, prope-se o aproveitamento da mudana de cor
de extratos brutos de espcies vegetais contendo antocianinas para
a deteco espectrofotomtrica de pontos finais de titulaes cido-base. Conceitos importantes como deteco de ponto final, cores complementares, fundamentos de espectroscopia, Lei de Beer,
*e-mail: cavalheiro@iqsc.usp.br
hidrlise e seu efeito no pH do ponto final e escolha de indicadores, entre outros, podem ser abordados com a vantagem de atrair a
ateno dos alunos pelo uso dos corantes naturais.
FUNDAMENTAO
Titulaes espectrofotomtricas15-18
Medidas espectrofotomtricas, ou fotomtricas, podem ser utilizadas na deteco do ponto final de titulaes, desde que haja
variao na colorao das espcies envolvidas, ou de um indicador,
no ponto final.
No caso de titulaes cido-base, normalmente adiciona-se a
base ao cido e mede-se a absorbncia do sistema em funo do
volume adicionado, em um comprimento de onda () pr-estabelecido. O deve ser tal, que represente o mximo de absoro do
cido ou da base, caso sejam coloridos, ou do indicador cuja cor
mude no ponto final. A absoro de radiao tambm pode ocorrer
na regio do ultravioleta.
Assim, o resultado de uma titulao espectrofotomtrica um
grfico que representa a variao da absorbncia, no max de absoro da espcie que est sendo monitorada, em funo do volume do
titulante adicionado.
Esse grfico pode apresentar formas diferentes dependendo das
caractersticas da absoro de radiao pelas espcies envolvidas, no
comprimento de onda monitorado. A Figura 1 mostra tais possibilidades, como a reao de titulado que no absorve com titulante colorido, gerando produto que tambm no absorve no monitorado (Figura 1a); formao de produto colorido a partir de reagentes que no
absorvem neste comprimento de onda (Figura 1b), alm de vrias
outras possibilidades. Nesta figura, representa o coeficiente de
absortividade molar da espcie, enquanto a, t e p representam o titulado (amostra), o titulante e o produto da reao, respectivamente.
A absorbncia deve ser corrigida a cada adio do titulante pois,
segundo a Lei de Lambert-Beer, proporcional concentrao das
espcies presentes e a adio do titulante provoca diluio do sistema. A correo feita pela Equao 116
1015
madamente 0,1 mol L-1. Diariamente, antes de iniciar os experimentos, determinava-se o pH destas solues empregando-se eletrodo de vidro e um pH-metro com resoluo de 0,01 unidades de
pH. Previamente o pH-metro era calibrado com solues tampo
da Merck (pH 4,0 e 10,0). Estas solues foram utilizadas para
controle de pH nas medidas de absoro na regio do visvel.
Solues de cido clordrico (HCl), cido actico (HAc),
hidrxido de sdio (NaOH) e hidrxido de amnio (NH4OH) foram
preparadas, em concentraes prximas de 0,1 mol L-1 e a seguir
padronizadas59.
Equipamentos
(1)
na qual Acorr a absorbncia corrigida, Alida a absorbncia obtida
em cada ponto, V o volume inicial e o incremento de volume a
cada ponto.
A determinao do ponto final pode ser feita extrapolando-se os
segmentos lineares na regio do ponto final. A interseco destas
pores indica a regio da mudana de comportamento do indicador, refletindo o ponto final.
A literatura apresenta inmeros exemplos do uso destas titulaes, demonstrando sua importncia. Exemplos deste tipo de procedimento incluem revises bibliogrficas19,20, descrio de fundamentos e instrumentao21-39, determinao de metais usando
reaes de complexao40-51, reaes em meio no aquoso52-55. Alm
destes, h vrios outros trabalhos envolvendo este tipo de titulaes,
todos apresentando potencialidades para aplicaes didticas.
Trabalhos envolvendo experimentos didticos tambm podem
ser encontrados. Destaca-se o uso de dispositivos para deteco do
ponto final56 e deteo simultnea de pontos finais de titulaes
colomtricas e fotomtricas57.
A principal vantagem que os dados experimentais so obtidos
fora da regio de equivalncia, favorecendo sistemas cujo equilbrio no esteja totalmente deslocado para a formao de produtos,
como ocorre na potenciometria, ou no caso do uso de indicadores
visuais, o que permite titular sistemas relativamente diludos15. A
escolha adequada do comprimento de onda da espcie a ser
monitorada permite realizar a titulao na presena de outras espcies coloridas.
importante ressaltar que, apesar da simplicidade instrumental requerida, preciso e riqueza dos aspectos conceituais envolvidos, relativamente pouco se explora da fotometria em relao s
titulaes, em aulas prticas.
PARTE EXPERIMENTAL
Reagentes e solues
gua destilada e desionizada foi utilizada no preparo das solues. Todos os reagentes foram de grau analtico (PA) e utilizados
sem purificao prvia. Solues tampo universal foram preparadas conforme descrito por Perrin e Dempsey58: tetraborato de sdio
5,7 mmol L-1; fosfato dissdico monocido 20 mmol L-1 e citrato
trissdico 13 mmol L-1. Foram feitas solues para pH 2,0; 5,0;
6,0...; 9,0, ajustando-se com cido clordrico ou hidrxido de sdio.
Com esta composio, a fora inica das solues era de aproxi-
Todas as medidas podem ser realizadas em um espectrofotmetro convencional capaz de realizar leituras na regio do visvel. No caso deste trabalho, os espectros de absoro das solues
contendo uma concentrao de corante em diferentes pH foram
obtidos com auxlio de espectrofotmetro MultiSpec 1501
(Shimadzu, Japo), usando-se cubetas de polimetacrilato com caminho tico de 1,0 cm.
As titulaes espectrofotomtricas foram realizadas usando-se
espectrofotmetro Genesis-20 (Spectronics, EUA), sendo as solues transferidas com auxlio de bomba peristltica IPC-4 (Ismatec,
Sua) e uma clula de fluxo preparada nas oficinas do IQSC/USP.
Alternativamente, um fotmetro capaz de monitorar o max da
espcie a ser acompanhada tambm pode ser utilizado, simplificando a instrumentao.
Preparao dos extratos brutos
Dependendo da disponibilidade do tempo, os estudantes podem preparar os extratos brutos de flores antes do experimento ou,
alternativamente, a equipe instrutora pode prepar-los e fornecer
para os estudantes no incio da aula. Os extratos podem ser preparados com as ptalas recm-colhidas ou congeladas por at 1 ms.
Para obteno do extrato bruto, foram utilizadas aproximadamente
25 g de ptalas de Rhododendron simsii (azala), ou Tibouchina
granulosa (quaresmeira), imersas em 100 mL de etanol. O tempo
de extrao estabelecido foi de 48 h, mantendo-se o material em
frasco de vidro envolvido em papel alumnio e temperatura ambiente1,4. Aps filtrao, o extrato foi evaporado em evaporador
rotatrio at obteno de um lquido viscoso.
Alternativamente, flores de outras espcies que contenham
antocianinas1,4,7 podem ser empregadas como fonte dos indicadores naturais. Sugere-se determinar os espectros de absoro em
funo do pH, para a espcie escolhida, pois a composio de corantes no extrato pode variar dependendo da espcie.
Medidas espectrofotomtricas
Obteno do espectro de absoro e determinao do comprimento
de onda no mximo de absoro para os extratos
Espectros das solues contendo os corantes vegetais foram
obtidos na regio do visvel, em diferentes pHs, para determinao
dos comprimentos de onda dos mximos de absoro e para avaliar
as mudanas espectrais em funo do pH. Para obter os espectros
de absoro sugere-se usar uma soluo contendo 100 mg de extrato bruto dissolvidos em 10,0 mL de gua (10 g L-1). A partir desta
soluo, sugere-se que sejam preparadas solues de trabalho em
pH 2,0; 5,0; 6,0; 7,0; 8,0 e 9,0; adicionando-se 1,0 mL da soluo
de extrato bruto a um balo volumtrico com capacidade para
10,0 mL. O volume deve ser completado com soluo tampo universal, no pH desejado que foi previamente ajustado.
1016
Cortes et al.
Quim. Nova
BH+ + OH-
B + H3O+
(2)
Segundo esta reao formam-se ons OH-, que conferem carter bsico soluo no ponto final.
Em = 525 nm para os dois extratos observa-se que a absorbncia diminui entre pH 2,0 e 5,0, aumenta entre pH 5,0 e 7,0 e se
torna constante acima de pH 8,0, podendo-se monitorar este tipo
de sistema com o indicador natural, neste comprimento de onda.
base fraca titulada com cido forte: analogamente, neste caso, temse a hidrlise do ction, cido conjugado da base fraca:
BH+ + H2O
1017
(3)
Figura 4. Titulao de 20,0 mL HCl 1,10 x 10-1 mol L-1 com NaOH 9,40 x
10-2 mol L-1 com deteco espectrofotomtrica (a) e potenciomtrica (b).
Volume de extrato bruto (10 g L-1) = 2,0 mL, O = 525 nm para Rhododendron
simsii. No caso da Tibouchina granulosa (quaresmeira): (c) curva
espectrofotomtrica com deteco em 625 nm e (d) curva potenciomtrica
Como sugerem os espectros da Figura 3a, a absorbncia diminui com o consumo de ons H3O+, at pH 5,0. Com novas adies
de NaOH, a absorbncia volta a aumentar. O menor valor na curva
de absorbncia corrigida em funo do volume de NaOH adicionado foi considerado como sendo o volume do final para clculo.
O erro pode ser minimizado diminuindo-se o incremento do volume adicionado na regio do salto de pH. Um exemplo tpico adotando
este procedimento foi realizado usando o extrato bruto de Tibouchina
granulosa (quaresmeira), apresentado na Figura 4c curva espectrofotomtrica (com deteco em 625 nm), o qual tambm foi comparado com o resultado potenciomtrico apresentado na Figura 4d.
Na Figura 5 so apresentadas as curvas das respostas espectrofotomtrica (Figura 5a) e potenciomtrica (Figura 5b) obtidas na
titulao de HAc com NaOH. Pode-se observar que o perfil da curva
Figura 5. Titulao de 20,0 mL HAc 1,08 x 10-1 mol L-1 com NaOH 9,40 x
10-2 mol L-1 com deteco espectrofotomtrica (a) e potenciomtrica (b).
Volume de extrato bruto (10 g L-1) = 2,0 mL, O = 520 nm
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Cortes et al.
Quim. Nova
Figura 6. Titulao de 20,0 mL HCl 1,10 x 10-1 mol L-1 com NH4OH 6,67 x
10-2 mol L-1 com deteco espectrofotomtrica (a) e potenciomtrica (b).
Volume de extrato bruto (10 g L-1) = 2,0 mL, O = 620 nm
Tabela 1. Resultados obtidos nas titulaes espectrofotomtricas para os diferentes sistemas cido-base, usando como indicador o extrato
bruto de Rhododendron simsii (azala) comparados com os valores obtidos nas titulaes potenciomtricas
Sistema
HCl x NaOH
HAc x NaOH
HCl x NH4OH
/ nm
525
520
620
23,0 0,0
23,0 0,3
33,1 0,1
Erro1 / %
Erro2 / %
2
0,4
0,3
2
0
0,9
Calc.
23,4
22,9
32,8
*mdia de trs determinaes; | Erro1 | % = ((espectrofotomtrico potenciomtrico) / potenciomtrico) x 100; | Erro2 | % = ((espectrofotomtrico
calculado) / calculado) x 100
Tabela 2. Resultados obtidos nas titulaes espectrofotomtricas para deferentes sistemas cido-base usando como indicador o extrato bruto
de Tibouchina granulosa (quaresmeira) comparados com os valores obtidos nas titulaes potenciomtricas
Sistema
HCl x NaOH
HAc x NaOH
HCl x NH4OH
/ nm
525
625
550
23,5 0,0
22,2 0,6
21,4 0,1
| Erro1 | / %
| Erro2 | / %
0,5
0,7
0,6
2
1
1
Calc.
23,8
22,0
21,6
*media de trs determinaes; NaOH = 8,90 x 10-2 mol L-1, NH4OH = 9,80 x 10-2 mol L-1 , HCl = 10,6 x 10-2 mol L-1, HAc = 9,80 x 10-2 mol L-1;
| Erro1 | % = ((espectrofotomtrico potenciomtrico) / potenciomtrico) x 100; | Erro2 | % = ((espectrofotomtrico calculado) / calculado) x 100
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
27.
28.
29.
30.
31.
32.
33.
34.
35.
36.
37.
38.
39.
40.
41.
42.
43.
44.
45.
46.
47.
48.
49.
50.
51.
52.
53.
54.
55.
56.
57.
58.
59.
60.
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