1084 3353 1 PB

MANUAL DE PRCTICAS
DE LABORATORIO
EN BIOGENTICA
Claudia Elena Espinal-Correa
(Compiladora)
Universidad Cooperativa de Colombia
Sede Medelln
Documentos de docencia | Course Work
coursework.ucc.edu.co
No. 14, diciembre, 2015
http://dx.doi.org/10.16925/greylit.1084
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Acerca del compilador

Claudia Elena Espinal-Correa es profesora de tiempo completo de la Facultad de
Medicina de la Universidad Cooperativa de Colombia, sede Medelln, Colombia.
Correo electrnico:
Cmo citar este documento

Espinal-Correa, C. E., Gmez-Gallego, D. M., Ossa-Giraldo, A. C. y Solarte, V.
(2015). Manual de prcticas de laboratorio en biogentica. (Documento de
docencia No. 14). Bogot: Ediciones Universidad Cooperativa de Colombia. doi:
http://dx.doi.org/10.16925/greylit.1084
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Internacional. http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
RESUMEN
La presente obra es el resultado de un esfuerzo acadmico que busca compendiar, a

la luz de las habilidades y destrezas de los futuros profesionales de Ciencias de la
Salud de la Universidad Cooperativa de Colombia, los conceptos de las ciencias
bsicas anclados a los conceptos especficos de la prctica clnica profesional,
aminorando el divorcio histrico con las mal llamadas ciencias duras (biologa,
qumica, fsica). Las ciencias bsicas constituyen un soporte conceptual sobre el cual
se edifica la compresin holstica del individuo como unidad orgnica fisiolgica
psicolgica y social; de su interaccin resulta la fascinante complejidad de lo
viviente, complejidad cuyos parmetros de normalidad y patologa son el soporte
sobre el cual trabaja el personal profesional de la salud. Formular entonces las
competencias a desarrollar en el futuro personal de salud en reas como la
biogentica, articulado a ambientes prcticos de aprendizaje inteligentemente
diseados para ello, aminora el divorcio acadmico entre bsicas y clnicas y
robustece la formacin acadmica que como institucin nos ha sido dado llevar a
cabo .
Palabras clave: cultivos celulares, dermatoglifos, genealoga sangunea, cariotipo,
electroforesis, anticancergeno
TABLA DE CONTENIDO
Introduccin 5
Captulo 1: Evaluacin de un medicamento anticancergeno mediante un cultivo celular in
vitro 7
8|| Metodologa
8|| Temario que lo apoya
8|| Objetivos
8|| Fundamento terico
11|| Descripcin de la actividad a realizar
16|| Ejercicio de aplicacin
17|| Bibliografa.
Captulo 2: Genealoga sangunea 19
20|| Objetivos
25|| Bibliografa
Captulo 3: Dermatoglifos 27
28|| Objetivos
43|| Bibliografa
Captulo 4: Extendidos cromosmicos 45
46|| Objetivos
50|| Bibliografa
Captulo 5: Cariotipo 51
52|| Objetivos
60|| Bibliografa
Captulo 6: Biologa molecular aplicada a la clnica: extraccin de ADN, reaccin en cadena
de la polimerasa (PCR) y electroforesis de ADN 63
64|| Metodologa
64|| Objetivos
77|| Ejercicio de aplicacin
79|| Bibliografa
Anexos 81
Guas de prctica Manual de prcticas de laboratorio en biogentica
INTRODUCCIN
itar la formacin mdica por competencias implica no solo un marco conceptual

sobre el cual estas se sustentan, sino formular un componente que haga referencia a
las habilidades prcticas en el marco del desempeo profesional del mdico.
Adems, implica que la dotacin de habilidades prcticas tambin estn enmarcadas en el
cumplimiento de normas legales vigentes que regulan el rea del diagnstico clnico y las
pruebas clnicas que ello requiere.
Introducir al estudiante en la adquisicin de habilidades que le permitan un adecuado
manejo del componente clnico durante su prctica profesional, en el rea de la gentica
clnica y molecular, implica regirse por los acuerdos normativos del Ministerio de Salud
Nacional, que reglamenta y da potestad a los profesionales de la salud para hacer uso de los
diagnsticos genticos especficos para la determinacin de patologas de origen
cromosmico, todas aquellas ligadas al cromosoma X y al cromosoma Y, y las ligadas a
leucemias.
En este orden de ideas se inscribe el presente manual, con el propsito de articular las
conceptualizaciones tericas en un contexto prctico que garantice el desarrollo de
habilidades diagnsticas de interpretacin de pruebas genticas y tcnicas moleculares,
estas ltimas como herramienta diagnstica.
As pues, la competencia especfica y la conclusin de este componente prctico
quedan adscritas al desarrollo de las habilidades necesarias para reconocer patologas
genticas, de tal suerte que en su prctica profesional diaria el mdico general pueda contar
con los elementos conceptuales y prcticos para tomar una decisin adecuada en la
anamnesis, el diagnstico, el pronstico, la eleccin y la interpretacin acertada de los
resultados de las pruebas diagnsticas remitidas.
La competencia especfica adquirida hace parte de aquella formulada en el plan de
curso de esta, as como la evidencia, nmero de crditos y temas.
Con el presente manual de prcticas de laboratorio se pretende que el estudiante de
pregrado de Medicina de la Universidad Cooperativa de Colombia tome el curso y sus
prcticas obedeciendo a las siguientes competencias previas y desarrollando las que debe
adquirir, como son:
1. Identificar las estructuras de los seres vivos que les permiten desarrollarse en un
entorno y que puedo utilizar con criterios de clasificacin.
2. Identificar condiciones de cambio y de equilibrio en los seres vivos y en los
ecosistemas.
3. Explicar la variabilidad en las poblaciones y la diversidad biolgica como

consecuencia de estrategias de reproduccin, cambios genticos y seleccin
natural.
4. Identificar aplicaciones de algunos conocimientos sobre la herencia y la
reproduccin al mejoramiento de la calidad de vida de las poblaciones.
5. Comprensin lecto-escritora.
6. Comunicacin grupal asertiva.
7. Uso de las tecnologas de la informacin y la comunicacin (TIC).
La competencia especfica a desarrollar es la siguiente: explicar los determinantes
biolgicos y genticos inherentes a la condicin de normalidad para establecer los estados
de salud enfermedad a partir de los conocimientos avalados por la comunidad cientfica.
Ser competentes en este sentido implica:
Clasificar los componentes celulares, sus funciones y patologas asociadas.

Diferenciar los componentes de la gentica mendeliana y no mendeliana.
Identificar los principios bsicos de tcnicas de diagnstico molecular.
Justificar el empleo de tcnicas moleculares en las ciencias de la salud.
Utilizar tcnicas de diagnstico molecular.
Las prcticas son el apoyo y la extensin del curso de Biogentica, el cual est
diseado para proveer a los programas de Ciencias de la Salud de las conceptualizaciones
cientficas pertenecientes a las ciencias bsicas, fundamentando el quehacer disciplinar de
los programas adscritos con el mtodo cientfico desarrollado en disciplinas como la
biologa, la gentica y la biologa molecular, lo que permite un alcance acadmico de
mayor impacto.
Las prcticas proporcionan a los estudiantes de las ciencias de la salud las
herramientas analticas necesarias para comprender la relacin entre los procesos biolgicos
a nivel celular, y su incidencia en el desarrollo de patologas o en el mantenimiento de la
homeostasis corporal. Las prcticas estn organizadas en sesiones consecutivas, las cuales
se realizarn en los laboratorios de biologa molecular o laboratorios multifuncionales o
similares de la Universidad Cooperativa de Colombia. Cada sesin est estructurada con
una breve introduccin terica de los conceptos ms importantes y bsicos, necesarios para
la mejor comprensin y desarrollo de la parte experimental que se har a continuacin.
Dicha parte experimental consta de actividades individuales o en grupo. As mismo, al final
de cada sesin, el profesor puede suministrar un cuestionario que ayudar a consolidar los
aspectos prcticos ms relevantes de la sesin.
Para el buen aprovechamiento de las prcticas se debe leer previamente el tema a
desarrollar, el cual puede ser objeto de evaluacin. Adems, el docente debe de evaluar y
realizar un control de asistencia de los estudiantes.
Captulo Evaluacin de un medicamento anticancergeno

1
mediante un cultivo celular in vitro
Diana Maryory Gmez-Gallego*
Resumen
Los cultivos celulares son una serie de tcnicas que permiten aislar, mantener y
multiplicar clulas in vitro (en vidrio= en recipientes en el laboratorio). Los
cultivos celulares son una herramienta esencial en diversas investigaciones y
aplicaciones biomdicas, se usan por ejemplo en la evaluacin de la actividad o
toxicidad de sustancias y frmacos. El objetivo de esta prctica es explicar los
principios bsicos sobre las tcnicas de cultivos celulares y aclarar por qu el efecto
de un frmaco en el ciclo celular puede ser evaluado mediante estos. Para lograrlo,
se realizarn dos sesiones de laboratorio, en la primera cada equipo de estudiantes
har su propio cultivo celular manejando tcnica asptica; estos cultivos sern
sometidos al frmaco anticancergeno, se cosecharn y las clulas se gotearn en una
placa. En la segunda sesin se realizar un clculo de ndice mittico (mediante
conteo de la placa), con el cual el estudiante establecer el efecto del frmaco.
Palabras clave: cultivo celular, cultivo primario, lnea celular, ciclo celular,
frmaco anticancergeno, colcemid.
Ingeniera biolgica y estudiante de maestra en Microbiologa y Bioanlisis. Profesora instructora de la

Facultad de Medicina de la Universidad Cooperativa de Colombia, sede Medelln, Colombia. Correo
electrnico: diana.gomeza@campusucc.edu.co.
*
Metodologa
Se llevar a cabo en dos momentos o sesiones diferentes.
Temario que lo apoya

Ciclo celular y anticancergenos.
Objetivos
General
Establecer los principios bsicos por los cuales una sustancia bioactiva con posibles
efectos anticancergenos puede ser evaluada mediante cultivos celulares in vitro.
Especficos
Evaluar el efecto sobre el ciclo celular de linfocitos de una droga
anticancergena.
Determinar el efecto de la droga anticancergena.
Establecer el principio por el cual una droga anticancergena, que tenga efecto
de acumulacin en el ciclo celular, determina su actividad anticancergena.
Fundamento terico
Cultivos celulares
Los cultivos celulares han constituido una fuente de
conocimiento extraordinaria en un amplio abanico de
especialidades de las ciencias bsicas y aplicadas a la salud.
Se trata de un conjunto de tcnicas que estn contribuyendo
de forma decisiva al avance de las ciencias biomdicas por
su aplicaciones diagnsticas e incluso teraputicas y que
permiten encarar nuevas lneas de investigacin orientadas
hacia la industria farmacutica, la agricultura, la
toxicologa, etc. [1]
Actualmente se entiende por cultivo celular el conjunto de tcnicas que permiten el
sostenimiento de clulas in vitro en condiciones especiales propicias para su
supervivencia y multiplicacin, manteniendo al mximo sus propiedades
metablicas, fisiolgicas, bioqumicas y genticas [2].
El cultivo de clulas de mamfero naci como una valiosa herramienta de
investigacin en 1950 cuando la primera lnea celular, HeLa, fue exitosamente
8
cultivada a partir de clulas humanas de cncer de crvix. Sin embargo, fue solo
hasta mediados de 1980 que cultivos reproducibles y confiables de clulas de
mamfero fueron logrados [3].
El desarrollo del cultivo de clulas ha dado lugar a nuevas aproximaciones
experimentales sobre la fisiologa celular, en las cuales las clulas aisladas y
funcionalmente diferenciadas pueden ser mantenidas en cultivo en condiciones que
permiten la manipulacin directa de su medio ambiente y la medicin de los
cambios resultantes en la funcin de un solo tipo de clulas [3].
Tipos de cultivos celulares
Los cultivos de clulas animales pueden clasificarse segn su capacidad de
adherencia, y segn si han sido recientemente aisladas de un rgano determinado o
proceden de clulas que hayan experimentado algn tipo de transformacin.
Segn su capacidad para crecer adheridas o no a una superficie determinada, lo
que est muy relacionado con el tipo de clula de la cual derivan, pueden clasificarse
en:
Cultivo en monocapa: generalmente provienen de rganos. Forman una
monocapa que cubre la superficie del recipiente en que estn en crecimiento y
su multiplicacin es inhibida cuando establecen contacto entre s.
Cultivo en suspensin: corresponde a clulas que crecen en medio lquido sin
unirse a una superficie.
Cultivo primario: cuando proviene de clulas que han sido recientemente
disgregadas de su tejido u rgano original.
Lneas celulares: estn constituidas por clulas que se diferencian gentica y
morfolgicamente de las clulas originarias. Pueden provenir de un cultivo
primario sometido a procesos de transformacin o de clulas derivadas de
tumores. Tienen una capacidad ilimitada de divisin [2, 4].
Aplicaciones de los cultivos celulares
Actividad intracelular: replicacin y transcripcin del DNA, sntesis de
protenas, metabolismo energtico, metabolismo de frmacos, ciclo celular,
diferenciacin, apoptosis.
Flujo intracelular: procesamiento del RNA, receptores de hormonas y su
resultante seal de traduccin, trfico de membrana, flujo de metabolitos,
movilizacin de calcio, transduccin de seal.
Farmacologa: accin de una droga, interacciones ligando receptor, resistencia
a un frmaco.
Inmunologa: eptopos de la superficie celular, hibridomas, citoquinas y
sealizacin, inflamacin.
Genmica: anlisis genticos, transfeccin, infeccin, transformacin,
inmortalizacin, senescencia.
Ingeniera de tejidos: constructos de tejidos, matrices y scaffolds, clulas
madres, propagacin, diferenciacin.
9
Toxicologa: infeccin, citotoxicidad, mutagnesis, carcinognesis, irritacin,

inflamacin.
Interacciones clula-clula: morfognesis, control paracrino, cintica de la
proliferacin celular, cooperacin metablica, adhesin celular y
motricidad, modelos organotpicos para prtesis mdicas e invasin.
Productos y secreciones celulares: protemica, biotecnologa, diseo de
biorreactores, etc. [4].
El desarrollo de los cultivos celulares se debi en gran parte a las necesidades
de las dos principales ramas de la investigacin mdica: la produccin de vacunas
antivirales y el estudio de las neoplasias [4].
Requerimientos para un ptimo crecimiento celular
Requerimientos nutricionales
Medios de cultivo: compuesto que brinda a las clulas los nutrientes esenciales balanceados
cuantitativamente. Contiene aminocidos, hidratos de carbono, iones inorgnicos,
vitaminas, entre otros.
Suero: compuesto no definido que tiene una gran variedad de componentes con actividad
promotora del crecimiento celular.
Requerimientos fisiolgicos
Temperatura: generalmente 37C
pH: entre 7,2 y 7,4
Tensin de gas (CO2): generalmente 5%
Presin osmtica: Isoosmtica
Humedad relativa: cercana a la saturacin (95%)
Requerimientos ambientales
Esterilidad
Tcnica asptica
Esterilizacin
Antibiticos y fungicidas
Frascos de cultivo [5, 6]
Ciclo celular y cncer

El ciclo celular representa un proceso fisiolgico controlado por medio del cual una clula
se divide para formar dos clulas hijas. Gracias a este proceso los tejidos crecen en los
organismos pluricelulares. En un organismo en homestasis, el equilibrio entre
proliferacin y muerte celular programada (apoptosis) se mantiene regulado para garantizar
la integridad de los rganos y de los tejidos del cuerpo.
10
El trmino cncer denota un muy amplio y complejo grupo de enfermedades que se

caracterizan por alteraciones del ciclo celular que conducen finalmente a la destruccin de
estos procesos fisiolgicos coordinados, lo que tiene como consecuencia un descontrol
celular que ocasiona una proliferacin autnoma, desordenada, irreversible y progresiva
[7].
Frmacos anticancergenos
Diferentes agentes qumicos han sido utilizados para el tratamiento del cncer durante cinco
dcadas y todava siguen teniendo un papel importante. Durante este tiempo, muchas
drogas con diversos mecanismos de accin han sido sintetizadas y adaptadas para uso
clnico.
La mayora de frmacos quimioteraputicos anticncer que se usan en clnica
incluyen agentes que atacan especficamente el ciclo celular con el fin de inhibir el estado
de hiperproliferacin de las clulas tumorales y luego inducir la apoptosis, que es el
resultado deseado de la quimioterapia [8]. Basados en su modo de accin, estos frmacos
quimioteraputicos pueden subdividirse en grupos distintos: 1) frmacos que interfieren con
la sntesis de ADN; 2) frmacos que introducen dao en el ADN; y 3) frmacos que inhiben
la funcin del huso mittico [8-10].
La separacin precisa de los cromosomas replicados para ser repartidos a las clulas
hijas durante la mitosis depende de la formacin de un huso bipolar compuesto
principalmente de los microtbulos (MT). Dado que los MT son estructuras altamente
dinmicas cuya organizacin espacial es fundamental para la funcin correcta del huso, los
agentes fsicos y qumicos que interfieren con el comportamiento de los MT interrumpen
infaliblemente la mitosis [11, 12].
Quizs el ms notable de estos agentes qumicos es la colchicina, derivada de las
plantas del gnero Colchicum. La colchicina y su anlogo colcemid (menos txico) han
sido conocidos por ser potentes inhibidores de la divisin celular a travs de sus efectos
sobre el ensamblaje del huso: este compuesto se une a los monmeros de alfa y beta
tubulina inhibiendo la polimerizacin de los MT. Dado que la despolimerizacin no se ve
afectada, el huso mittico se disocia rpidamente o no se forma y las clulas se acumulan
en un estado de metafase, en muchos casos por un perodo prolongado, parando el ciclo
celular [11-13].
Descripcin de la actividad a realizar

Primera sesin: cultivo celular primario
Materiales y reactivos
Reactivos
Medio de cultivo RPMI 1640 + glutamax
Suero fetal Bovino _ Mxico
11
Antibitico: 10.000 und/ml penicilina; 10.000 g/ml de streptomicina

L-glutamina 200 mM
Phitohemaglutinina (PHA) (10 g/ml)
Alcohol etlico 70%
Materiales
Frasco de cultivo T25 falcn
Toallas desechables
Pipeta estril de 10 mL
Pipeteador
Gradilla para tubos vacutainer
Muestra
1 mL de sangre perifrica
Equipos
Cmara de flujo laminar vertical
Incubadora de CO2
Microscopio invertido
Micropipeta y puntas de 100-1000 L
Micropipeta y puntas de 20-200 L
Equipo de seguridad personal requerido
Pijama institucional
Bata de laboratorio para fluidos limpia
Tapabocas
Guantes de ltex/vinilo
En el caso de personas con cabello largo, sujetador de cabello
Tiempo estimado
20 minutos.
Procedimiento
1. Verificacin de condiciones de asepsia, esterilidad y requerimientos para efectuar el
procedimiento de cultivo celular (hecho por el analista del laboratorio).
2. Inicio de la prctica para los estudiantes: desplazamiento del analista con los estudiantes
al cuarto de cultivo.
3. Dentro de la cmara de flujo laminar se realiza lo siguiente:
Adicionar 8,2 ml de medio de cultivo previamente atemperado a 37C al frasco de
cultivo.
12
Adicionar 1 ml de sangre perifrica.

Adicionar 0,5 ml de suero fetal bovino.
Adicionar 0,1 ml de antibiticos.
Adicionar 0,1 ml de l-glutamina.
Adicionar 0,1 ml de PHA al frasco de cultivo.
Agitar suavemente y llevar a la incubadora de CO2 por 72 horas, con las siguientes
condiciones: 37,5C, 5% CO2.
Segunda sesin: reconocimiento de mitosis e ndice mittico

Muestra
Placa con extendidos cromosmicos de la prctica anterior. Recuerde que aqu encontrar
placas con mitosis normales y placas cuyo ndice mittico ha variado por efecto de la droga
anticancergena; lo anterior se mide con el clculo del ndice mittico.
Equipos
Microscopio
Bata de laboratorio limpia
Tiempo estimado
2 horas.
Procedimiento
Previo a esta sesin, y tras 71 horas de cultivo, el analista del laboratorio agregar a la
mitad de los cultivos 0,1 mL de la droga anticancergena y dejar la otra mitad sin el
frmaco. Trascurrida una hora proceder a cosechar la muestra: lavado, centrifugado (para
concentrarlas), hipotonizacin, fijacin, goteo en lminas portaobjetos, tincin y
conservacin de las placas.
A los estudiantes en grupos de a cinco se les entregar las placas con extendidos
13
cromosmicos para observar lo que se describe a continuacin, y, con ello, harn el clculo
en dichas placas del ndice mittico, que finalmente es lo que indica el efecto de la droga
anticancergena.
Haciendo un uso correcto del microscopio, colocar la placa para empezar a
observarla. Comience un barrido de la placa ordenadamente, como se indica en la figura 1.
13
Figura 1. Correcto barrido de la placa con extendidos cromosmicos. Laboratorio de

Biologa Molecular, Universidad Cooperativa de Colombia, sede Medelln
a) Identificacin de ncleos activos (color rosado-violeta) e inactivos (color morado). La
principal diferencia es el tamao; las clulas que se encontraban en el momento de la
obtencin de cromosomas en actividad, presentan ncleos ms grandes que las que no
estaban activas en el ciclo celular. Por otra parte, la coloracin de los ncleos
inactivos es ms intensa.
b) Identificar metafases y, en ellas, distinguir la morfologa de los cromosomas.
c) Una vez identificadas las diferentes estructuras a encontrar en la placa, proceda a
calcular el ndice mittico, contando 500 ncleos (entre metafases, ncleos activos y
ncleos inactivos).
IM =
Metafases
Ncleos totales
(1)
x 100
Ncleos totales= Ncleos activos + Ncleos inactivos + Mitosis= 500

Recordar: la observacin en el microscopio debe empezarse en el objetivo de menor valor
(4x), para empezar a enfocar e identificar campos adecuados. Debe pasarse luego al
objetivo de 10x (imagen 1) y por ltimo al de 40x (imagen 2), en el cual se har el conteo e
identificacin de estructuras.
14
Figura 1. Extendidos cromosmicos de linfocitos T humanos. Aumento 10x. Tomada en el

Laboratorio de Biologa Molecular, Universidad Cooperativa de Colombia, sede Medelln
Figura 2. Extendidos cromosmicos de linfocitos T humanos. Aumento 40x. Tomada en el

Laboratorio de Biologa Molecular, Universidad Cooperativa de Colombia, sede Medelln
15
Ejercicio de aplicacin
En la bsqueda de nuevas posibilidades teraputicas para el tratamiento del cncer, que
minimicen los efectos colaterales, se han reportado numerosos hallazgos que demuestran
la actividad antitumoral de extractos derivados diferentes especies de macroalgas marinas.
En un trabajo experimental realizado por un grupo multidisciplinar de cientficos se
evalu el efecto antitumoral del extracto de dos especies de macroalgas; especficamente se
realiz una evaluacin sobre el efecto en el ciclo celular en clulas cancergenas aisladas y
cultivadas de una biopsia de un paciente con diagnstico de cncer de enca.
Metodologa
Las clulas en fase exponencial de cultivo fueron tratadas con 20 g/mL de los diferentes
extractos por un tiempo de 4 horas, al trmino del cual se detuvo la accin de los extractos
mediante un lavado con medio de cultivo y posterior cosecha de las clulas (sedimentacin,
hipotonizacin, fijacin, goteo en lminas portaobjetos y tincin de las placas). Posterior a
esto, se hace un anlisis de ndice mittico mediante recuento en placa (ecuacin 1), usando
un microscopio con el objetivo de 40x. Se contaron 1000 clulas en total por cada
tratamiento utilizado (cada uno de los 2 extractos de algas marinas). Adems de los
extractos, se us como control positivo clulas tratadas con colcemid, un agente inhibidor
del ciclo celular, y como control negativo, clulas sin ningn tratamiento.
Resultados
La figura 3 resume los hallazgos encontrados.
ndice Mittico (IM) de los diferentes tratamientos
ndice mittico (IM)
25%
20%
15%
10%
5%
0%
Control
negativo
Colcemid
Extracto 1
Extracto 2
Tratamiento
Figura 3. ndice mittico (IM) de los diferentes tratamientos. Elaboracin propia.
16
Anlisis
Segn los resultados anteriores, responda:
1. Los extractos 1 y 2 tienen efecto en el ciclo celular? Por qu?
2. Cul fue el agente (colcemid, extracto 1 o extracto 2) que present mayor efecto de
inhibicin o bloqueo del ciclo celular? Por qu?
3. Sobre qu fase del ciclo celular estn actuando los extractos 1 y 2? Por qu?
Bibliografa
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17
18
Captulo Genealoga sangunea

2
Vctor Alfonso Solarte-David*
Resumen
Los patrones heredables sanguneos en las familias constituyen una herramienta

elemental en el anlisis de la herencia. Dichos patrones genealgicos sanguneos son
predecibles y obedecen a los postulados de la gentica mendeliana para un carcter o
para alelos mltiples, los cuales determinan el tipo de sangre ABO, ilustrando los
conceptos de dominancia, codominancia y recesividad. La genealoga sangunea
permite establecer caractersticas heredables, tiles en trasplantes, compatibilidad
gestacional y enfermedades, entre muchas otras aplicaciones en reas como la
epidemiologia. Los patrones sanguneos en una familia pueden ser fcilmente
analizados mediante la construccin de un rbol sanguneo genealgico, para lo cual
solo se requieren los datos documentados de los grupos sanguneos y, en algunos
casos, la hemoclasificacin.
Palabras clave: alelo, dominancia, codominancia, recesividad.
Ingeniero biomdico, especialista y magster en Biotecnologa y doctor en Ciencias Biomdicas de la

Universidad Nacional de Colombia. Actualmente es profesor de tiempo completo de la Universidad
Cooperativa de Colombia, sede Medelln, Colombia. Correo electrnico: victor.solarte@campusucc.edu.co.
19
Temario al que apoya

Herencia mendeliana y no mendeliana.
Objetivos
Objetivo general
Reconocer las caractersticas heredables de tipo sanguneo segn las leyes de Mendel.
Objetivos especficos
1. Realizar la prctica de hemoclasificacin.
2. Construccin de un rbol genealgico.
3. Evaluar estadsticamente la probabilidad de la heredabilidad del tipo sanguneo.
Fundamento terico
Los llamados grupos sanguneos humanos obedecen a una clasificacin sangunea en
concordancia con las caractersticas de los grupos proteicos ABO o Rh presentes o no en la
membrana de los glbulos y en el suero. Dicho sistema de clasificacin se ha mantenido a
lo largo de las ciencias biomdicas por hechos y registros que datan desde la antigedad,
segn Echeverry [1]. El descubrimiento del sistema ABO se le atribuye a Karl Landsteiner
en 1901, quien recibi el Premio Nobel de Fisiologa en 1930 por sus trabajos en la
caracterizacin de los tipos sanguneos o sistema ABO. Su denominacin de grupos o
sistema proviene de los tres tipos de grupos proteicos identificables en las superficie de los
glbulos rojos: antgeno A, antgeno B, o ninguno de los anteriores O. Su
conocimiento, papel y efecto en los sistemas humanos radica principalmente en que de ellos
depende el xito de transfusiones sanguneas, como lo afirman Lefrere y Berche [2].
En la mayora de los casos, cada individuo con un grupo sanguneo porta anticuerpos
contra los antgenos leucocitarios que no posee, de ah la reaccin inmunitaria al ser
transfundido con grupos sanguneos denominados incompatibles (de diferente tipo
sanguneo), dando lugar a situaciones de riesgo, tales como hemlisis, anemia, fallo renal,
shock o muerte. El mecanismo mediante el cual se generan anticuerpos contra un antgeno
al que nunca se ha sido expuesto an no est completamente dilucidado, sin embargo, hay
supuestos tericos que sostienen que algunos antgenos bacterianos son lo bastante
similares a los antgenos A y B y son estos anticuerpos los que reaccionan contra los
glbulos rojos incompatibles tras una transfusin, segn Kirkwood y Lewis [3].
La heredabilidad de los grupos sanguneos sigue la dinmica de la llamada herencia
mendeliana para un carcter; los grupos sanguneos son heredados de los progenitores y
controlados por un solo gen llamado ABO, localizado en el cromosoma 9 (9q34.1-q34.2).
Esta heredabilidad se rige por un sistema de alelos mltiples (L) que determina la presencia
de los aglutingenos en los glbulos rojos, y que son los siguientes:
20
LA,
que determina el aglutingeno A.

LB, que determina el aglutingeno B.
LO, que no determinan aglutingeno alguno.
Los alelos mltiples que determinan el tipo de sangre ABO permiten ilustrar los
conceptos de dominancia, codominancia y recesividad, lo que explica que las personas
posean tipos sanguneos AA, AB, BB, AO, BO, OO, con base en la recombinacin allica de sus
padres.
Los individuos tipificados con el grupo sanguneo A poseen glbulos rojos que
expresan protenas antignicas de tipo A en su superficie, y anticuerpos contra los antgenos
B en el suero de su sangre. Caso contrario, los individuos tipificados con el grupo
sanguneo B poseen glbulos rojos que expresan protenas antignicas de tipo B en su
superficie y anticuerpos contra los antgenos A en el suero de su sangre. Los individuos con
sangre del tipo O no expresan ninguno de los dos antgenos (A o B) en la superficie de sus
glbulos rojos, pero pueden producir anticuerpos contra ambos tipos; en cambio, los
individuos tipificados AB expresan ambos antgenos en su superficie y no producen ninguno
de los dos anticuerpos. Con base en lo anterior, el tipo O puede ser transfundido sin ningn
problema a cualquier persona donante de sangre con cualquier tipo sanguneo del grupo
ABO y el tipo AB puede recibir sangre de cualquier donante, todo esto teniendo en cuenta el
grupo Rh, como lo anotan Dodd, Lincoln y Soto [4].
Dipta y Hossain afirman que existen otros tipos de grupos sanguneos, tales como
Bombay, el cual es poco frecuente y en este se heredan dos genes recesivos del tipo hh en
correspondencia con el fenotipo denominado Oh, y, por tanto, no producen la protena H
que es la precursora de los antgenos A y B. De esta forma, no supone ningn problema la
presencia de anticuerpos A o B en el suero pues los antgenos respectivos no son
producidos al no existir su precursor. Las personas con este grupo sanguneo, sin embargo,
s producen anticuerpos para H, el cual est presente en los glbulos rojos excepto en
aquellos con fenotipo hh, por tanto solo son compatibles con donantes del mismo tipo hh.
Es decir, las personas con el grupo sanguneo con el fenotipo Bombay pueden ser
nicamente transfundidas con personas del mismo grupo sanguneo [5].
Factor Rh
El factor Rh (encontrado en el mono Rhesus, de ah su nombre factor Rh) fue descubierto
por Karl Landsteiner y Wiener en 1940. El factor Rh, al igual que los antgenos
eritrocitarios, se define como una protena estructural de membrana anclada a las clulas
sanguneas dndoles una entidad particular y que, como ABO, tiene la condicin de ser
aglutingena de los glbulos rojos; dicha protena es codificada por la accin de 3 genes
alelos. Se define como individuos con fenotipo Rh positivo aquellos que expresan el
antgeno D en sus eritrocitos y Rh negativo quienes no presentan este antgeno (el 85% de
la poblacin lo posee aproximadamente). Existen variaciones o polimorfismos en la
21
secuencia de aminocidos de esta protena, identificndose ms de 45 variantes antignicas

del factor Rh, lo que da lugar a diferentes tipos poblacionales, segn Kirkwood y Lewis [3].
Su importancia radica en los procesos de transfusin clnica, de ah que el
conocimiento previo de estas caractersticas proteicas eritrocitarias en los pacientes sea
fundamental para no poner en riesgo la vida. La transfusin de sangre de un individuo Rh+
a un Rh- conduce a la formacin, lo que conlleva a la aglutinacin de la sangre y, por tanto,
a la formacin de cogulos en el torrente sanguneo. De igual modo, se puede producir una
reaccin inmunitaria en el caso de las mujeres gestantes al momento del parto por
diferencias entre el factor Rh de la madre en relacin con el del hijo; si la madre es Rh- y el
feto es Rh+ y posee los anticuerpos contra Rh+, puede destruir las clulas Rh+ del feto. En
este caso se recomienda que si la madre decide tener un segundo hijo deber someterse a
tratamientos que limiten los anti-Rh [6].
Genograma
El patrn de segregacin o heredabilidad de los antgenos del sistema ABO y del Rh a nivel
familiar es importante y til en el campo de la gentica mdica ya que, desde el punto de
vista de las probabilidades, muestra mediante los llamados genogramas (o mapas
genealgicos) una correlacin hereditaria de estos genotipos y fenotipos. La construccin
de un genograma consiste en un formato que permite dibujar un rbol genealgico que
registra informacin sobre los miembros de una familia y la relacin entre sus generaciones
cercanas, mostrando caractersticas hereditarias especficas que se quieran rastrear. Para su
creacin se hace uso de smbolos cuyo reconocimiento, interpretacin y uso es conocido y
avalado por la comunidad cientfica [7, 8].
En la tabla 1 se muestran los simbolismos ms importantes para construir un
genograma [8].
Tabla 1.
Simbolismos utilizados en la construccin de genogramas
Smbolo
Significado
Hombre
Mujer
Sujeto principal
Fallecido
Embarazo
Muerte al nacer
Aborto espontaneo
Aborto inducido
Adoptado
Mellizos (igual en mujeres)
22
Gemelos (igual en mujeres)
Nota. McGoldrick y Gerson [8]

Informacin de grupos sanguneos familiares.

Ninguno.
Tiempo estimado
1 hora y 45 minutos.
Genograma familiar
Recopilar en lo posible la mayor cantidad de informacin familiar tras las generaciones con
su correspondiente tipo sanguneo personales y construir el genograma. Indique las
probabilidades de heredabilidad al tipo de sangre en cada persona, edad y si presenta
patologas que puedan asociarse a la herencia, entre otros que usted considere pertinentes.
Ejercicios
Analiza los siguientes casos clnicos.
Caso 1.
En el siguiente rbol genealgico (figura 1) realizado a un mamfero con cariotipo 60, XY
(XX: hembra, XY: macho), se indica la transmisin de una anomala gentica (ilustrada con
los crculos y cuadrados en color gris), la cual lleva a una enfermedad neurodegenerativa en
su adultez. Estudios clnicos muestran que la anomala se produce por un solo gen ligado al
sexo, y est situado en el cromosoma X.
23
Figura 1. rbol genealgico. Elaboracin propia.

1. Explica si la anomala es de tipo dominante o recesivo.
2. Indica los posibles genotipos para los individuos con la anormalidad (letra A para
alelo dominante, letra a para alelo recesivo).
3. Contando solo son la informacin dada en este caso, considera usted que el carcter
podra ser autosmico?
4. Qu recomendaciones dara usted a una pareja que desea tener hijos, si se sabe que en
la familia por parte de la mujer se presenta esta anomala gentica?
5. Si el padre tiene el sndrome y la madre no, qu probabilidad tiene el hijo de padecer el
sndrome?
Caso 2
El siguiente rbol genealgico (figura 2) muestra en gris personas albinas. A partir de este
establecer si el albinismo est determinado por un gen dominante o recesivo y si est ligado
o no al sexo.
Figura 2. rbol genealgico. Elaboracin propia

24
Bibliografa
[1] Echeverry MA. Grupo sanguneo y factor Rh en los vascos. Buenos Aires: s.n.; 1949.
[2] Lefrere JJ, Berche P. Karl Landsteiner discovers the blood groups. Transfus Clin
Biol. 2010 (Feb); 17(1): 1-8.
[3] Kirkwood EM, Lewis CJ. Inmunologa mdica bsica. 2 ed.; 1990.
[4] Dodd BE, Lincoln PJ, Soto A. Inmunologa de los grupos sanguneos. Mxico: El
manual moderno; 1976.
[5] Dipta TF, Hossain AZ. The Bombay blood group: are we out of risk? Mymensingh
Med J. 2011 (Jul); 20(3): 536-40.
[6] Scheffer PG, de HM, van der Schoot CE. The controversy about controls for fetal
blood group genotyping by cell-free fetal DNA in maternal plasma. Curr Opin
Hematol. 2011 (Nov); 18(6): 467-73.
[7] Lasanta Sez MJ. Instrumentos para el conocimiento de la familia: el genograma.
[8] McGoldrick M, Gerson R. Genogramas en la evaluacin familiar. Barcelona: Gedisa;
2005.
25
26
Captulo Dermatoglifos
3
Resumen
Este captulo intenta promover en el estudiante el reconocimiento la gentica
asociada a los dermatoglifos a travs del reconocimiento de los principales patrones
normales de las lneas dermatopapilares de las manos y los pies, expresando los
resultados en una frmula dactiloscpica resumida. Con base en el temario, la
fundamentacin terica y las actividades que se proponen, se espera que el
estudiante logre establecer la frecuencia de los patrones palmares; comparar los
patrones individuales con los padres y hermanos para establecer el tipo de herencia
de estos rasgos; discutir las aplicaciones de estos estudios en las poblaciones como
marcadores genticos y como ayuda diagnstica para algunos sndromes genticos;
reconocer la gran variabilidad que puede presentar una caracterstica determinada
por varios pares de genes; realizar la verificacin de la distribucin continua y
normal de una caracterstica polignica; manejar los parmetros estadsticos en el
procesamiento de datos de rasgos genticos multifactoriales; y, establecer relaciones
entre algunas caractersticas especficas de estos rasgos en su grupo con otros rasgos
diferentes no patolgicos.
Palabras clave: dermatoglifos, gentica, lneas dermatopapilares.

27

Penetrancia.
Expresividad.
Pleiotropa.
Fenotipos influidos por el sexo.
Herencia mitocondria.
Mosaicismo somtico.
Mosaicismo germinal.
Huella genmica.
Sndromes de Prader-Willi y de Angelman.
Disoma uniparental.
Inactivacin del x.
Mutaciones dinmicas.
Caractersticas principales de la poblacin humana.
Ley de Hardy-Weinberg.
Equilibrio Hardy-Weinberg.
Factores que modifican el equilibrio.
Estratificacin.
Unin dirigida.
Consanguinidad.
Seleccin natural.
Deriva gnica.
Cuellos de botella.
Efecto fundador.
Migracin.
Aplicaciones de la ley de Hardy-Weinberg.
Clculo de riesgos.
rbol genealgico e interrogatorio familiar.
Exploracin fsica en gentica clnica.
Dermatoglifos.
Objetivos
Objetivo principal
Reconocer la gentica asociada a los dermatoglifos.
1. Reconocer los principales patrones normales de las lneas dermatopapilares de las manos
y los pies, expresando los resultados en una frmula dactiloscpica resumida.
2. Establecer la frecuencia de los patrones palmares entre los estudiantes de la clase.
28
3. Comparar los patrones individuales con los padres y hermanos para establecer el tipo de
herencia de estos rasgos.
4. Discutir las aplicaciones de estos estudios en las poblaciones como marcadores
genticos y como ayuda diagnstica para algunos sndromes genticos.
5. Reconocer la gran variabilidad que puede presentar una caracterstica determinada por
varios pares de genes.
6. Realizar la verificacin de la distribucin continua y normal de una caracterstica
polignica.
7. Introducir al estudiante en el manejo de parmetros estadsticos en el procesamiento de
datos de rasgos genticos multifactoriales.
8. Establecer relaciones entre algunas caractersticas especficas de estos rasgos en su
grupo con otros rasgos diferentes no patolgicos.
Fundamento terico
Las primeras referencias sobre el uso de las impresiones digitopalmares datan de antiguos
documentos chinos encontrados en cavernas, las cuales eran usadas, segn se supone, para
identificacin de un individuo. Entre 1684 y 1686 se describieron cientficamente por
primera vez las figuras palmares y planares formadas por la epidermis de algunos primates.
Esta descripcin fue hecha por Grez, Bidloo y Malphighi. En 1823 Purkinge clasific las
huellas dactilares en nueve tipos diferentes y, ms tarde, Faulds y Herschel, las
introdujeron como factor de identificacin personal. En 1888 Galton public un trabajo en
el cual clasificaba las impresiones digitopalmares en tres categoras: arcos, presillas y
verticillos. Galton indicaba, adems, en su trabajo la metodologa para operar con estas
impresiones. De esta manera naci la aplicacin de estas caractersticas en el estudio de la
gentica humana [1-3].
Con el trmino dermatoglifos, propuesto por Cummins en 1926, se designan las
crestas dermopapilares y sus configuraciones. Los dermatoglifos son consecuencia de
modificaciones especializadas de la piel que resultan en ondulaciones de su porcin
epidrmica [4]. Estas ondulaciones estn presentes en la palma y en superficies digitales de
la mano, en la planta y en las superficies digitales de los pies [5]. Las reas donde se
presentan los dermatoglifos o crestas dermopapilares estn desprovistas de glndulas
sebceas, de pelos y tienen cierto grado de pigmentacin, pero abundan en estas reas
terminaciones nerviosas. El significado funcional y evolutivo de las crestas dermopapilares
probablemente est relacionado con funciones tactiles-sensitivas y de afinamiento de la
capacidad prensil [3].
Los dermatoglifos se diferencian embriolgicamente durante el curso del cuarto mes
de vida fetal y se elevan a la superficie de la piel tiempo despus, primero en la pulpa de los
dedos, luego en la palma y finalmente en la planta de los pies. Una vez formados no sufren
alteraciones o modificaciones debidas al ambiente en el curso de toda la vida del individuo.
Sin embargo, durante el periodo de vida intrauterina en que los dermatoglifos estn en
formacin, pueden verse alterados por factores que interfieren en el normal desarrollo
embrionario [5, 6]. Estos factores pueden ser genticos, como las alteraciones
29
cromosmicas numricas y estructurales, o ambientales, tales como los efectos

teratogenticos inducidos por enfermedades maternas o el uso de drogas y alcohol durante
el embarazo. Respecto al tipo de herencia de estos caracteres hay consenso en que se trata
de rasgos de herencia polignica, con mayor heredabilidad que muchos otros caracteres
antropomtricos, ejemplos tambin de herencia polignica [7].
Dada su transmisin hereditaria, son patrones nicos para cada individuo que
muestran una gran diversidad tanto por sus detalles como por las combinaciones que
presentan en una persona determinada. Adems, existen variaciones considerables en las
frecuencias de las diferentes configuraciones dermatoglficas tanto en los dos sexos como
en los diferentes grupos tnicos, desde el punto de vista embriolgico y gentico [8].
En la actualidad existe una gran cantidad de trabajos en los cuales relacionan las
diferentes configuraciones con factores tales como raza, grupos sanguneos, aberraciones
cromosmicas y desrdenes metablicos hereditarios. Dichos estudios son posibles debido
a que estas huellas no sufren ninguna alteracin despus de que se han formado
embriolgicamente, entre el tercero y sptimo mes de vida intrauterina. Los estudios sobre
dermatoglifos destacan la relacin de ciertos patrones anormales con una serie de
sndromes genticos y cromosmicos, como son la trisomia 21 (sndrome de Down), turner,
patau, entre muchos otros [9].
Las poblaciones muestran diferentes tipos de disposiciones dermatoglficas:
Los patrones drmicos normales estn presentes en la mayora de la poblacin.
Los inusuales estn presentes en un porcentaje pequeo de la poblacin sana y en
algunos de los sndromes malformativos.
Los anormales estn presentes en un alto porcentaje de sndromes malformativos
de origen mono o polignicos, cromosmicos o ambientales y tambin en alguna
ocasin en personas sanas.
Los dermatoglifos estn relacionados con las crestas epidrmicas (figura 1) que
forman un sistema de lneas paralelas en campos pequeos de la superficie del
estrato corneo. Los poros de las glndulas sudorparas se localizan a lo largo del
centro de estas crestas. Las depresiones entre las crestas se conocen como surcos.
Internamente, bajo la epidermis, se encuentra el estrato germinativo, los pliegues
glandulares y los pliegues de los surcos [9].
30
Figura 1. Representacin diagramtica de los pliegues de la piel con la nomenclatura de las

estructuras de la epidermis y la dermis. Andrade et al. [9]
La nomenclatura empleada para identificar las diferentes reas en las manos se

muestra en las figuras 2 y 3.
Figura 2. Nomenclatura y posicin de reas y trirradios en manos. Andrade et al. [9]
31
Figura 3. Nomenclatura y posicin de reas y trirradios en pies. Andrade et al. [9]
Dimensiones
El ancho entre dos crestas es la distancia existente entre los puntos centrales de dos crestas
consecutivas. Para calcular esta distancia promedio se traza una lnea de un centmetro que
corte en ngulo recto una serie de crestas y se cuenta el nmero de ellas cortado por la
lnea. Para cuantificar las impresiones dactiloscpicas se emplea tambin el conteo total de
crestas o CTC (figura 4).
Figura 4. Conteo de crestas en los arcos. (a) Por definicin, carecen de trirradios y el
conteo de crestas es 0-0. (b) Los bucles con el trirradio tienen en este caso 16-0. (c) En el
espiral, el nmero de crestas a cada uno de los trirradios puede ser diferente: 10-16.
32
Para esto se cuenta en cada una de las impresiones digitales el nmero de lneas que
son cortadas por una recta que une el centro geomtrico del trirradio con el centro de la
configuracin palmar (figura 5).
Figura 5. Los trirradios estn conformados por la confluencia de tres sistemas de crestas:
(a) el centro geomtrico de confluencia del trirradio se denomina punto del trirradio.
Idealmente es la confluencia de las tres lneas, puede estar representado por un punto (b), p
la terminacin de una cresta (c). En otros casos (d, e) estn en espacios abiertos
intersticiales.
Principales configuraciones
Algunos elementos pueden ser detallados en el estudio exacto de los dermatoglifos, algunos
de ellos se identificarn segn la nomenclatura empleada para su descripcin (figura 6).
Figura 6. Nomenclatura empleada en la descripcin de las formas finas que presentan las
crestas. Andrade et al. [9]
33
Isla o punto: es una pequea cresta de forma redondeada que contiene un solo poro.
Cortada: es un fragmento de una cresta ms largo que una isla y puede contener dos o tres
poros.
Lnea intersticial: es una pequea lnea angosta, muy rara vez contiene poros; en general,
son ms bajas que las crestas y no se consideran cuando se hace el conteo de crestas.
Cerco: es una bifurcacin y posterior unin de una cresta que rodea un surco formando una
laguna.
Bifurcacin: es la divisin de una lnea formando una Y.
Peine: es la configuracin de una lnea en la cual tres o ms crestas confluyen.
Anastomosis: es la unin de dos lneas por intermedio de una lnea subsidiaria.
Campos abiertos
Son reas llenas de lneas paralelas o casi rectas. Se designan generalmente con la letra
O. Entre las configuraciones ms frecuentes en estas reas estn los arcos, que se forman
cuando las lneas son un poco curvas, y los abanicos, que se forman en reas por mltiples
bifurcaciones de las crestas. Si las bifurcaciones se hacen en sentidos opuestos, el resultado
es una configuracin que se conoce como escalera.
Trirradios
Los trirradios se forman cuando hay discontinuidad en lneas paralelas. Geomtricamente,
el punto del trirradio (figura 5a) es el punto de encuentro de tres lneas radiales que hacen
entre ellas ngulos cercanos a 120. En la figura 5 se presentan los diferentes tipos de
confluencia de las lneas; en cada caso el punto geomtrico del trirradio se encuentra
marcado con un crculo. Idealmente, el trirradio est representado por una bifurcacin de la
cual irradian tres lneas; algunas veces el centro est marcado por una isla (figura 5b) o por
el fin de una cortada (figura 5c). En algunos casos el centro geomtrico no reposa sobre
ninguna lnea (figura 5d y 5e). Si el trirradio ocurre en una regin con un peine, el punto
geomtrico se toma en el punto donde los tres ngulos sean lo ms cercano posible a los
120 (figura 5e). Las configuraciones con arcos verdaderos carecen de trirradios.
Impresiones digitales
En las impresiones digitales se reconocen tres tipos principales de configuraciones:
presillas, verticilos o torbellinos, y los arcos.
34
Figura 7. Las presillas (L). Pueden ser de diferentes tipos: a) varilla: cuando estn
conformadas por lneas caso paralelas con una cresta central, b) en forma de aro o argolla
cuando el centro es libre, c) presilla convergente o invadida, y d) ganchosa o nutable. Los
arcos en tienda e) son los nicos arcos que poseen trirradio. Andrade et al. [9]
Presillas o asas (L): generalmente son configuraciones formadas por lneas que
entran y emergen por el mismo margen del modelo, poseen solamente un trirradio, situado
al lado opuesto de donde se abre el dibujo. Las presillas pueden ser de diferentes tipos
(figura 7): en varilla, cuando estn conformadas por lneas casi paralelas con una cresta
central (figura 7a), o en forma de aro o argolla cuando el centro es libre (figura 7b); en la
figura 7c se esquematiza la presilla convergente o invadida, y en la figura 8d la ganchosa o
nutable; los arcos en tienda (figura 7e) son los nicos arcos que poseen trirradio. Algunas
configuraciones presentan un patrn caracterstico de dos trirradios, como las presillas
dobles o los verticilos (figura 7d y 7e). Tres trirradios son tambin posibles en configuraciones que presentan verticilos y presillas, como la esquematizada en la figura 12.
Las presillas pueden ser:
Cubitales: cuando el modelo se abre hacia la lnea media del cuerpo (o hacia el dedo
meique) estando este en posicin anatmica. Posee un solo trirradio, situado al lado
opuesto de donde se abre el dibujo.
Cuando el modelo se abre hacia fuera de la lnea media del cuerpo (o hacia el dedo
pulgar) posee un solo trirradio.
En la figura 8 se muestra una presilla; si esta figura corresponde a la mano derecha, es
asa radial, y si pertenece a la mano izquierda corresponde a un asa cubital.
35
Figura 8. Presilla
Verticilos rizos o remolinos (W): este grupo incluye todas las muestras cuyas lneas
presenta contornos circulares en forma de S, elpticas o espiriliformes. Los verticilos
constituyen los patrones ms complejos y variables. Una forma simple (w) consta de un
patrn concntrico circular o elptico (figura 9a y 9b). Las configuraciones pueden ser muy
variadas (figura 9), y se pueden encontrar figuras con dos o tres trirradios, los cuales se
diferencian por la configuracin central y la orientacin de las figuras.
Generalmente pueden ser de dos tipos:
Verticilo simtrico: formado por lneas concntricas. Posee dos centros y dos
trirradios situados a lado y lado del dibujo (figura 9a).
Verticilo espiral: formado por lneas en espiral. Posee un centro y dos trirradios
a lado y lado del dibujo (figura 9b).
Figura 9. Verticilos simples (a y b) y bucles o asas dobles. Andrade et al. [9]

Arcos (A): con configuraciones formadas por lneas que van de uno a otro margen del dedo
y que forman elevaciones en el eje medio de este, lor arcos pueden ser:
36
Arco plano o simple: cuando las elevaciones son suaves y no poseen trirradio (figura
4a).
Arco tienda: cuando las elevaciones son pronunciadas y poseen un trirradio, situado
hacia el eje medio de la configuracin (figura 7e).
Existen otras configuraciones ms complejas y menos frecuentes como:
Presilla doble o verticillo-presilla: posee dos centros y dos trirradios situados a lado y lado
del dibujo. Para lo relacionado con el recuento de crestas se lo considera verticilo (figura
10).
Arco atienda prensilla (figura 11).
Verticilos con tres trirradios.
Verticilo-presilla con los dos trirradios a un mismo lado.
Configuraciones sin trirradios.
Figura 10. Presilla doble o verticillopresilla
Figura 11. Arco atienda prensilla
La palma de la mano
Existen seis reas bien definidas que corresponden a las regiones o los pliegues
embrionarios. Estas son las reas hipotenares (figura 2, H), tenares (Th), y las interdigitales
I, II, III y IV. Normalmente existen cuatro trirradios interdigitales en la base de los dedos y
son denotados con a, b, c, d (figura 2). Un trirradio adicional puede presentarse en el rea
interdigital y en esos casos se denota como a, b, c, d, segn el rea interdigital en la cual
se encuentre localizado.
Trirradios hipotenares: el principal es un trirradio localizado en la palma y prximo
al lugar de pliegue de la mano, normalmente en el eje o cerca del eje del cuarto
metacarpiano, y se conoce como t (tabla 1). Cuando la posicin de este trirradio es ms
distal, tiene el aspecto de una T invertida, cuyo pie estara dirigido hacia la eminencia
hipotenar, a la que se le llama t. La posicin t es mediopalmar, muy distal y tiene forma
de Y mayscula. Una medida objetiva para la situacin de t viene representada por la
magnitud del ngulo que forman los trirradios extremos a y d con el trirradio t,
37
37
denominado ngulo de Penrose, o atd (figura 13). El ngulo atd tiene diferentes valores
segn sea la localizacin del trirradio t; en individuos normales tiene un valor promedio de
48, y cuando se forma un ngulo mayor de 56 el ngulo recibe el nombre de distal. Para
determinar la posicin del trirradio t, se mide el ngulo atd; los tres puntos pueden ser
localizados con exactitud, pero si el trirradio t est colocado hacia el lado cubital de la
palma, como ocurre algunas veces con individuos que padecen el sndrome de Down, la
abertura del ngulo no indicar su posicin distal. Adems, algunos piensan que como la
mano tiende a ser ms larga y estrecha con la edad de la persona, el valor del ngulo
depender en gran parte de la edad.
Por ltimo, pueden encontrarse diferencias hasta de 10 en la medicin del ngulo, lo
cual depende de si los dedos estn separados o superpuestos en el momento de tomar la
huella de la palma.
Ocasionalmente, puede encontrarse ms de un trirradio axial, en este caso, para la
medicin del ngulo atd se tiene en cuenta el ms distal.
Tabla 1.
Tipo de posicin del ngulo de Penrose segn su medida
Medida del ngulo

<45
45-56
> 56
Tipo de posicin
Posicin t
Posicin t
Posicin
t
Nota. Elaboracin propia
Figura 12. Varios tipos de patrones en el rea hipotecar. W, verticilos: L, bucles; T, arcos
en tienda; A, arcos simples. Los superndices determinan la direccin: r, radial; u, ulmar; c,
calpar; d, patrn doble; s, espiral. Andrade et al. [9]
38
Figura 13. Medida del ngulo atd de la palma de la mano. Observe que entre ms distal
est el trirradio t, ms pequeo es el ngulo. Andrade et al. [9]
Pliegues de flexin
Son diferentes a los dermatoglifos, pero se asocian con estos. En la palma suele haber tres
de ellos, aunque en algunos casos los dos pliegues distales se pueden fusionar formando un
solo horizontal. Esta nica lnea resultante se ha denominado de diferente manera: pliegue
del simio, lnea de los cuatro dedos, pliegue transversal nico (figura 14).
Figura 14. Pliegues de flexin. Andrade et al. [9]

39
Relacin entre dermatoglifos y algunos rasgos patolgicos y no patolgicos

1. En algunos sndromes, los valores promedio del ngulo atd soncomo se muestra en la
tabla 2.
Tabla 2.
Relacin entre dermatoglifos y algunos rasgos patolgicos y no patolgicos
Sndrome
Turner (X0)
Down (trisomia 12)
Patau (trisomia 18)
ngulo
66
81
108

2. Con los grupos sanguneo. Ciertos autores han encontrado relaciones con los grupos
sanguneos del sistema ABO y el sistema MN, con el sistema Lewis, con el factor Rh, etc.
Hesh dice que existe una posible relacin entre rizos y el grupo B, y entre asas y el
grupo A.
3. Con la estatura. Algunos sugieren que hay un mayor nmero de rizos en personas altas.
Frmula dactiloscpica
La frmula dactiloscpica consiste en la expresin resumida, por medio de smbolos, de los
patrones dermatoglficas verificados en los dedos de las manos. Se presenta segn el
sistema propuesto por Vucetich (1858-1925), famoso dactiloscopista yugoslavo, como una
fraccin en la cual el numerador resume los patrones de los dedos de la mano derecha y el
denominador los de la mano izquierda. Segn este sistema, todos los arcos estn designados
por la letra A en el pulgar y el nmero 1 en los otros dedos. Los verticilos son designados
por la letra V en el pulgar y con el nmero 4 en cualquiera de los otros dedos. Las presillas
se consideran internas cuando el trirradio est a la derecha del observador y se designan con
la letra I (en el pulgar) y con el nmero 2 para los otros dedos. La letra E y el nmero 3 se
emplean para presillas externas, con el trirradio izquierdo o externo.
Ejemplo: E-3333/I-2222
Significado: mano derecha, presillas externas que se abren para el lado ulnar en todos los
dedos. En la izquierda, todas son presillas internas.
La planta del pie

Las impresiones plantares son homlogas a las verificadas en las palmas de las manos,
como se observa en la figura 3b. Las nicas diferencias consisten en considerar el rea
tenar como distal si est cerca del rea halucal (del dedo gordo), y proximal, la cercana al
calcneo. Con respecto a los trirradios correspondientes a los dedos II a V, son designados
40
como a, b, c, d, respectivamente. El trirradio de la regin halucal se denota como e, y,

dependiendo de su posicin, pueden ser empleadas las letras e para el ms proximal y e
para el ms distal.
Un trirradio generalmente muy prximo al rea halucal es el trirradio p (proximal).
Cuando est desplazado hacia el rea hipotenar distal puede llamarse p o p dependiendo
del desplazamiento.

Materiales
Papel para dermatoglifos
Tinta
Rodillo
Talcos
Tiza
Fotocopiadora
Estereoscopio
Regla milimetrada
Comps de dos puntas
Transportador

Pijama institucional
Bata de laboratorio
Tiempo estimado
Una hora y 45 minutos.
Procedimiento
Recolectar los datos dactilopalmartes necesarios y plantear la frmula dactiloscpica de
usted y sus padres, segn convencin que aparece en la tabla 3
Tabla 3.
Convenciones para recolectar datos dactilopalmartes
A ---- pulgar
1 ---- otros dedos
I ----- Pulgar
Presillas, tirradio a la derecha Interna o tenar
2 ---- otros dedos
E ---- pulgar
Tirradio a la izquierda Externa o Ulnar
3 ---- otros dedos
V ---- pulgar
Vertilicios
4 ---- otros dedos
X: si no puede definir por cicatriz o dao de la impresin
Arcos

41
Diligenciar las siguientes tablas.

Frmula observada:
Mano
Derecha
Izquierda
Pulgar
ndice
Medio
Anular
Meique
ndice
4
4
Medio
4
4
Anular
4
4
Meique
4
4
ndice
3
2
Medio
3
2
Anular
4
2
Meique
1
2
Ejemplos:
1. Frmula observada:
Mano
Derecha
Izquierda
Pulgar
V
V
2. Frmula observada:
Mano
Derecha
Izquierda
Pulgar
A
V
Mano derecha: arco en el pulgar, presillas en los dedos ndice y medio, verticilo en el
anular y arco en el meique. Mano izquierda: verticilo en el pulgar, presillas tenares o
internas en los otros dedos.
Conteo total de crestas (CTC).
Otro de los parmetros descriptivos de las impresiones dactilares es el CTC, que se
efecta trazando con lpiz una lnea (lnea de Galton) entre el trirradio ms prximo y el
centro nuclear de la figura.
Nota: No se cuentan las lneas del trirradio.
Si la figura tiene dos trirradios (verticilos, crculos concntricos, etc.) se considera el conteo
mayor.
Par los arcos en tienda, arcos planos y abanicos que no tienen trirradio, su conteo es de
cero. CTC = Conteo del nmero de lneas en las impresiones de los diez dedos.
Conteo total de crestas (CTC):
42
Mano
Derecha
Izquierda
Pulgar
ndice
Medio
Anular
Meique
Total
Localizar los trirradios digitales a, b, c, d. Si existen otros adicionales se designarn como

a, b, c, d.
Localizar los trirradios palmares y determinar si hay uno o ms y describir su
posicin: trirradio axial proximal (t), en forma de Y invertida, axial distal (t), una Y en
posicin normal, o un trirradio en posicin intermedia entre t y t.
Para clasificar el trirradio palmar puede usarse el ngulo de Penrose: atd. Este ngulo
es formado por los segmentos de recta que se trazan uniendo los trirradios digitales a y d
con el trirradio palmar. Entre ms distal est el trirradio palmar menor ser el ngulo atd. Se
considera que es t para ngulos menores de 58.
Bibliografa
[1]
[2]
[3]
[4]
[5]
[6]
[7]
[8]
[9]
Gmez BD. Determinacin de patrones dermatoglficos digitales en un grupo de la

Universidad de Antioquia y la universidad de San Buenaventura. Medelln. [Tesis de
grado]. Universidad de Antioquia, Medelln; 1977.
Thompson and Thompson. Gentica mdica. Ed. Salvat. S.A.; 1968.
Beiguelman B. Citogentica humana. Ro de Janeiro: Guanabara Koogan; 1982
Egozcue J, Antich, J, Ballesta F et al. Gentica mdica. Barcelona: Es-paxs; 1976.
Penrose LS. Memorandun on Dermatoglyphic Nomenclature. Birth Defects Orig
Series IV. 1968; (3): 1-13.
Schaumann B, Alter M. Dermatoglyphics in medical disorders. New York:
Springer-Verlang; 1976.
Vargas MV. Dermatoglifos en individuos con sndrome de Down. [Tesis para optar
el ttulo de biloga], Universidad Nacional de Colombia, Bogot; 1982.
Thompson JS, Thompson MW. Gentica Mdica. Salvat Editores, S.A; 1979.
Andrade E, Bueno ME, Burbano C, Chaparro A, Garca LF, Matta N, Nates G,
Usaqun W. Manual de guas de laboratorio. Gentica mendeliana, poblaciones,
citogentica y gentica molecular. Bogot: Universidad Nacional de Colombia,
Facultad de Ciencias, Departamento de Biologa, Unidad de Gentica y Biologa
Molecular; 2006.
43
44
Captulo Extendidos cromosmicos

4
Vctor Alfonso Solarte-David*, Diana Maryory Gmez-Gallego**
Resumen
Los extendidos cromosmicos permiten examinar el material nuclear condensado en
metafase, siendo actualmente la metodologa bsica implementada en el estudio de
cariotipos. Son tiles en el diagnstico de enfermedades y sndromes relativos a
ganancias o prdidas importantes de material gentico, y, con tratamientos
adecuados, pueden ser teidos con patrones de bandas, que permiten determinar
cambios estructurales importantes en el diagnstico de enfermedades, sirviendo
tambin en la determinacin de polimorfismos poblacionales y aspectos de
reproduccin, entre muchas otras aplicaciones a nivel de investigacin. La obtencin
de extendidos cromosmicos presenta limitantes respecto a la cantidad de clulas y
la necesidad de que estas sean cultivadas in vitro, sin embargo ofrecen un
acercamiento importante como modelos para el desarrollo de nuevos frmacos.
Palabras clave: cariotipo, cromosomas, fases del ciclo celular, modelo in vivo/vitro.

** Ingeniera biolgica y estudiante de maestra en Microbiologa y Bioanlisis. Profesora instructora de la
Facultad de Medicina de la Universidad Cooperativa de Colombia, sede Medelln, Colombia. Correo
electrnico: diana.gomeza@campusucc.edu.co.
45

Cultivo celular y obtencin de extendidos cromosmicos.
Objetivos
Objetivo principal
Obtener cultivos primarios a partir de sangre perifrica humana, estableciendo los
principios bsicos de cultivo celular in vitro.
1. Establecer los principios bsicos para la obtencin de extendidos cromosmicos a partir
de cultivos primarios de sangre perifrica humana.
2. Identificacin de estructuras cromosomales.
3. Adquirir pautas bsicas para el reconocimiento de los cromosomas humanos en el
microscopio.
Fundamento terico
Extendidos cromosmicos
El laboratorio de citogentica es fundamental para la gentica clnica. La citogentica es el
campo de la gentica que se encarga del estudio de la morfologa y la funcin de los
cromosomas y sus patologas relacionadas, causadas por un nmero o una estructura
anormal de estos. Los cromosomas son estructuras complejas ubicadas en el ncleo de las
clulas, compuestos por DNA, histonas y otras protenas, como lo afirman Saez y Cardoso
[1]. Durante la divisin celular, especficamente durante la mitosis, se condensan tanto que
pueden ser fcilmente observados y analizados en un microscopio ptico. Para recoger
clulas con sus cromosomas en este estado condensado, es necesario hacer un extendido
cromosmico, con el cual se puede distinguir entre clulas normales y malignas por el
nmero y morfologa de los cromosomas, segn Freshney [2].
Se pueden usar distintos tejidos para obtener preparaciones de cromosomas, por
ejemplo, sangre perifrica, piel, medula sea, fluido amnitico, entre muchos otros.
Los cultivos de sangre perifrica son en general los ms empleados para hacer
extendidos cromosmicos en las investigaciones de citogentica clnica. Solo
ocasionalmente, cuando hay indicaciones clnicas especiales, se deben efectuar extendidos
cromosmicos a partir de dos tejidos diferentes del mismo individuo. El ms usado
comnmente es la biopsia de piel que solamente presenta un complejo cromosmico
diferente al de los linfocitos cuando se presentan mosaicismos genticos, como aparece en
el trabajo de Rooney y Czepulkowski [3].
Aunque las tcnicas especficas difieren segn el tejido usado, el mtodo bsico para
obtener preparaciones de cromosomas es el siguiente (figura 1):
46
Figura 1. Preparaciones de cromosomas. Fuente: Freshney [2]

Cultivo de las clulas en un medio apropiado y empleando un mitgeno adecuado.
Acumulacin de clulas en metafase ya sea en cultivo (por utilizacin de colchicina,
colcemid u otro agente sincronizador) o en preparaciones directas.
Tratamiento hipotnico que conduce a un aumento del volumen celular provocado
por la entrada de lquido a las clulas, lo que permite la lisis por mtodos fsicos de la
clula en metafase y dispersin de los cromosomas.
47
Una fijacin adecuada del material con Carnoy (3 metanol:1 cido actico glacial)
fresco y fro, permitiendo lavado de las clulas y conservacin del material.
La dispersin de los cromosomas sobre la lmina limpia, libre de grasa, con un
mtodo apropiado, como el goteo de las clulas hipotonizadas sobre la placa.
Identificacin y anlisis al microscopio de las estructuras cromosomales [2].

Reconocimiento de mitosis.
Muestra
Placa con extendidos cromosmicos de linfocitos T y de las lneas celulares Jurkat y HeLa
suministrados por el laboratorio de Biologa Molecular.
Equipos
Microscopio

Bata de laboratorio limpia.
Tiempo estimado
Una hora.
Procedimiento
A los estudiantes se les entregarn las placas con extendidos cromosmicos de linfocitos T,
adems de placas con extendidos cromosmicos con lneas celulares de clulas
transformadas Jurkat.
Reconocimiento de mitosis
Haciendo un correcto uso del microscopio, colocar la placa para empezar a observarla.
Empiece enfocando en el objetivo de 4x, pase por el de 10x y por ltimo enfoque en 40x.
En este objetivo, comience un barrido de la placa ordenadamente, como se indica en la
figura 2.
Figura 2. Reconocimiento de mitosis

48
Durante el recorrido deber:

Identificar ncleos activos (color rosado-violeta) e inactivos (color morado). La
principal diferencia es el tamao, las clulas que se encontraban en el momento de la
obtencin de cromosomas en actividad presentan ncleos ms grandes que las que no estn
activas en el ciclo celular; por otra parte, la coloracin en los ncleos inactivos es ms
intensa.
Cuidadosamente, y usando aceite de inmersin, enfocar la placa en 100x y observar
ms detalladamente la morfologa de los cromosomas: telmeros y centrmeros. El
estudiante debe adems tratar de identificar las diferencias entre las mitosis de clulas
normales (linfocitos T) y clulas con anormalidades (Jurkat).
Figura 3. Ejemplo de morfologa de los cromosomas. Gmez, Ossa y Espinal [4]

49
Bibliografa
[1]
[2]
[3]
[4]
Saez F, Cardoso H. Citogentica bsica y biologa de los cromosomas. Programa

Regional de Desarrollo Cientfico y Tecnolgico, Departamento de Asuntos
Cientficos, Secretara General de la Organizacin de los Estados Americanos; 1973.
Freshney R. Culture of Animals Cells: A manual of basic technique. 4 ed. Nueva
York: Wiley- Liss; 2000.
Rooney D, Czepulkowski B. Human cytogenetics: a practical approach. Washington,
D.C.: Oirl Press; 1987.
Gmez D, Ossa A, Espinal C. Extendidos cromosmicos de la lnea celular Jurkat.
Medelln: Laboratorio Biologa Molecular, Facultad de Medicina, Univeridad
Cooperativa de Colombia; 2013.
50
Captulo Cariotipo
5
Resumen
El patrn cromosmico de una especie es nico, y puede ser ordenado y
caracterizado mediante patrones especficos en sus cromosomas, lo cual es llamado
cariotipo. El estudio del cariotipo se realiza mediante la citogentica, la cual hace
uso de tcnicas que permiten identificar patrones o porciones especficas en los
cromosomas, haciendo posible la construccin de cariogramas o ideograma
(diagrama en el cual se ordena los cromosomas en metafase segn sus
caractersticas, bajo reglas establecidas en comn acuerdo a nivel internacional). El
cariotipo humano consta de 46 cromosomas (23 pares al ser organismo diploide 2n), los cuales estn organizados en 22 pares autosmicos y un par sexual (XX:
mujer, XY: hombre); cada brazo en cada cromosoma ha sido caracterizado y se han
establecido bandas y subbandas que los identifican. Estas caractersticas nicas y
comunes en nuestra especie han permitido establecer y correlacionar anormalidades
cromosmicas a enfermedades como la leucemia mieloide crnica (cromosoma
filadelfia) o sndromes como el Down (trisoma del cromosoma 21), entre muchos
otros. Adems, ha permitido establecer polimorfismos que identifican a poblaciones.
El cariotipo es una herramienta elemental en el rea clnica debido a que se han
identificacin de manera confiable gran cantidad de anormalidades cromosmicas
asociadas a enfermedades, que ahora se encuentran en bases de datos y, as, al
alcance del diagnstico oportuno.
Palabras clave: cromosomas, centrmero, metafase, ideograma.

51
Objetivos
Objetivo principal
Identificar las diversas estructuras cromosomales, su clasificacin mediante mtodos de
tincin y morfologa, y reconocer algunas patologas asociadas con alteraciones
cromosmicas.
1. Introducir a los estudiantes en los conceptos bsicos de las tcnicas de cultivo celular.
2. Identificacin de estructuras cromosomales.
3. Adquirir pautas bsicas para el reconocimiento de los cromosomas humanos en el
microscopio.
4. Clasificar cada uno de los cromosomas en una mitosis mediante la realizacin de un
ideograma.
5. Clculo del ndice mittico.
6. Definir un arreglo cromosmico sistemtico (cariotipo) para la mitosis con bandas R a
analizar, respecto al tamao relativo de cada cromosoma en relacin con la longitud
genmica total haploide femenina.
7. Realizar una representacin diagramtica de cada uno de los cromosomas (ideograma)
del cariotipo con bandas.
8. Identificar la problemtica presentada por el paciente y sus repercusiones.
Fundamento terico
La historia de la citogentica humana es relativamente corta. Fue solo hasta 1956 que Tjio y
Levan reportaron el nmero correcto de cromosomas en el hombre, cultivando clulas del
pulmn fetal. Hasta los ltimos aos de la dcada de los cincuenta, las clulas utilizadas
para el anlisis cromosmico provenan de tejidos proliferativos (por ejemplo, mdula sea)
o clulas que podran ser cultivadas in vitro usando las tcnicas de cultivo de tejidos (por
ejemplo, fibroblastos, tejidos embrionarios) [1].
Nowell, en 1960, realiz un descubrimiento que revolucion el anlisis cromosmico
en el hombre: una sustancia llamada fitohemaglutinina, extrada del frjol rojo (Phaseolus
vulgaris), que, al adicionarla a la sangre en un medio rico en nutrientes, estimulaba la
divisin de los linfocitos. De esta manera, fue posible obtener un mayor nmero de clulas
a partir de una muestra ms accesible. Adems, los tratamientos hipotnicos fueron
determinantes para la mejor visualizacin y conteo de los cromosomas [2].
Inicialmente los 22 pares de autosomas se clasifican, segn el tamao y la posicin del
centrmero, en siete grupos identificados con letras de la A a la G:
Grupo A: al cual pertenecen los cromosomas ms grandes, metacntricos o
submetacntricos (pares 1-3).
52
Grupo B: pares 4 y 5, grandes submetacntricos.

Grupo C: constituido por siete pares cromosmicos (6-12), medianos, con centrmero en
posicin medial o submedial. Dentro de este grupo se encuentra tambin el
cromosoma X, que podra ubicarse entre los cromosomas 7 y 8 por tamao.
Grupo D: en l se localizan los cromosomas acrocntricos grandes (pares 13, 14 y 15).
Grupo E: a l pertenecen los cromosomas 16, 17 y 18, pequeos metacntricos o
submetacntricos.
Grupo F: dos pares de cromosomas 19 y 20, pequeos y metacntricos.
Grupo G: corresponde a dos pares de cromosomas acrocntricos pequeos, (pares 21 y 22).
Por tamao y morfologa, el cromosoma Y corresponde a este grupo.
De esta manera, los cromosomas podran ser ubicados dentro de un grupo, pero la
posicin dentro del grupo se haca ms o menos tentativamente [3]. A principios de los
setenta se desarrollaron las tcnicas de bandeo que permitieron no solo la identificacin
exacta de la totalidad de los pares cromosmicos, sino tambin la deteccin de la mayora
de las alteraciones estructurales. Caspersson, Zech y Johansson encontraron que al teir con
quinacrina o compuestos relacionados y observar en el microscopio de fluorescencia, en
cada par cromosmico se produce un patrn especfico de bandas brillantes y opacas que
llamaron bandas Q (QFQ) por la utilizacin de la quinacrina [4].
Arrighi Hsu y Summer descubrieron un mtodo especfico de bandeamiento que tie
el rea pericentromrica, las constricciones primarias de los cromosomas 1, 9 y 16, y el
segmento distal del brazo largo del cromosoma Y [5]. Estas reas contienen
heterocromatina constitutiva (regiones ricas en G C), de ah el nombre de bandas C (BCG).
Seabright publica una tcnica basada en la desnaturalizacin y renaturalizacin del DNA,
que produce un patrn de bandas claras y oscuras que corresponde a los patrones opacos y
brillantes de las bandas Q. Esta tcnica fue llamada bandas G por la utilizacin de Giemsa
como colorante (GTG) [6].
Las bandas R, descritas por Dutrillaux y Leujeune, tienen caractersticas de tincin
opuestas a las bandas Q o G y por esto reciben el nombre de bandas R (de reversa). Tanto
las bandas Q como las G y R permiten un anlisis claro y preciso de la morfologa de los
cromosomas [7].
No obstante, las bandas G y R presentan una ventaja sobre las bandas Q al ser
preparaciones permanentes y no requerir equipos pticos y de iluminacin especiales. Las
bandas Q no necesitan maduracin ni procedimientos trmicos o enzimticos, y son una
herramienta importante en el estudio de segmentos heterocromticos, particularmente en
estudios de paternidad, usando como marcador la regin heterocromtica del cromosoma
Y.
Otra tcnica selectiva son las bandas N, descritas por Matsui y Sasaki [8], y
Goodpasture y Bloom [9]. Estas bandas tien los tallos y los satlites de los brazos cortos
de los cromosomas acrocntricos y son de especial importancia en el estudio de anomalas
55
que incluyen los brazos cortos de estos cromosomas.
53
Los patrones de bandeamiento obtenidos con la banda Q se usaron para construir un

ideograma humano con el objeto de establecer una nomenclatura unificada de cada uno de
los pares cromosmicos. Segn lo establecido en la Conferencia de Pars en 1971, un sitio o
segmento de un cromosoma puede ser fcilmente identificado describiendo: el nmero del
cromosoma, el smbolo de brazo (p = brazo corto, q = brazo largo), el nmero de la regin
(rea localizada entre dos lmites adyacentes bien definidos) y el nmero de la banda. El
centrmero se utiliza como punto de referencia para la numeracin de las regiones o
bandas, de tal manera que para los brazos la numeracin se efecta desde el centrmero
hacia el telmero [10].
No fue sino hasta 1973 que se empezaron a desarrollar tcnicas para obtener
cromosomas en estados tempranos de la divisin celular, en los cuales se observan mayor
nmero de bandas y subbandas. Estos cromosomas son ms alargados entre ms temprano
sea el estadio de divisin celular, de tal manera que mientras en metafase tarda (tcnicas
convencionales de cultivo) se observa un total de 300 bandas por complemento haploide, en
metafases medias se observan entre 320 y 554 bandas, y en profase tarda cerca de 2000
bandas. Esto demuestra que el nmero de bandas observadas en metafase resulta de la
fusin progresiva de las bandas y subbandas de la profase temprana [7].
La aplicacin de estos mtodos de bandeo y la estandarizacin de la nomenclatura
han permitido la correcta identificacin de las anomalas ocurridas durante la divisin
celular. Las anomalas cromosmicas pueden ser de dos tipos: de nmero (aneuploidias o
poliploidias) o de estructura (translocaciones, inversiones, deleciones).
Las anomalas numricas se pueden originar:
Por la no disyuncin, es decir, por la migracin de las dos cromtides de un
cromosoma (mitosis o meiosis II) o de dos cromosomas de un bivalente (meiosis I)
a un mismo polo.
Por un retraso anafsico que ocurre cuando un miembro de un par cromosmico
no efecta la sinapsis y, por lo tanto, no se une correctamente al huso, por lo que
no tiene ningn desplazamiento hacia los polos, quedando por fuera durante la
divisin.
Las anomalas estructurales se producen principalmente durante la reparacin de
las lesiones cromosmicas inducidas por agentes teratognicos internos o
externos del organismo. Estas variantes cromosmicas anmalas se pueden
clasificar en:
Variantes inestables (fragmentos acntricos) que se pierden en el curso de las
divisiones celulares.
Variantes semiestables (cromosomas dicntricos y anillos) que tienden a fallar en
el curso de las divisiones normales, dado que no existe coordinacin entre los
centrmeros.
54
Variantes estables (deleciones, duplicaciones, inversiones, isocromosomas y

translocaciones) que son capaces de pasar inalteradas a travs de la divisin celular
pero que, en muchos casos, dan lugar a problemas meiticos, aunque pueden
alterar la composicin cromosmica de los gametos y, en consecuencia, a la
fertilidad y a la progenie de los portadores.
Los cultivos de sangre perifrica son, en general, los ms empleados en las
investigaciones citogenticas para la mayora de pacientes.
En condiciones normales los linfocitos circulantes no se dividen espontneamente en
cultivos; la estimulacin de los linfocitos se logra agregando un agente mitgeno (cualquier
sustancia extracelular, como protenas complejas que estimulan la proliferacin de los
leucocitos). Los ms usados son las lectinas vegetales como concanavalina A o
fitohemaglutinina (PHA). La PHA estimula la fraccin de los linfocitos T y es obtenida
del frjol comn (Phaseolus vulgaris), el pokeweed mitogen es obtenido de la Phytolaca
americana, la concanavalina A, de Canavalia ensiformis, y la Favina, del haba Vicia faba,
que muestra excelentes resultados como estimulante de los linfocitos en algunas especies
animales [12].
La muestra sangunea se toma con un anticoagulante, uno de los ms indicados en
humanos es la heparina (liquemine) a una concentracin de trabajo de 5000 UI; otros
anticoagulantes como el citrato y el EDTA no permiten una adecuada estimulacin de los
linfocitos T para la obtencin de extendidos cromosmicos. El cultivo de los linfocitos T
presentes en la muestra de sangre generalmente se lleva a cabo en medio de cultivo RPMI
1640 o Hams F-12, suplementado con suero fetal bovino (SFB) entre el 5 y 10% Vol. Los
tiempos de cultivo en una muestra de un paciente que no posea registro de tiempo de ciclo
in vitro se debe estandarizar segn el comportamiento propio de clulas de cultivo para
cada especie. Se pueden ensayar inicialmente con tiempos de duracin de cultivos que
pueden estar entre 48, 54, 60, 66 y 72 horas de cultivo, segn la especie, tomando de
referencia el tiempo de cultivo de linfocitos humanos (72 horas, en las que las clulas
alcanzan a realizar tres ciclos), el cual es ampliamente conocido [13].
Durante el cultivo de las clulas lo que se busca son clulas en estado metafsicos en
los posibles estadios tempranos de replicacin, por esto es necesario contemplar tcnicas de
sincronizacin para asegurar la presencia de un mayor nmero de clulas en metafase. Para
ello se puede recurrir a una sincronizacin del cultivo, es decir, llevar a todas las clulas
que por naturaleza se encuentran dispersas en las diferentes fases del ciclo celular a una
sola fase. Para la sincronizacin celular se puede utilizar sustancias que metablicamente
depriven a la clula de elementos fundamentales en el proceso de duplicacin, lo que
propiciara una condicin de paro o estancamiento, hasta que se realice una suplementacin
exgena del componente deprivado. Entre estas sustancias antimitticas est el MTX que no
permite la sntesis de timina y el 5-fluoruracilo (5-FU) que ha demostrado la sincronizacin
parcial de clulas en la fase S, ms precisamente donde se ha duplicado la eucromtina
57 e
inicia la duplicacin de la heterocromatina, tanto la constitutiva como la facultativa. Este
ltimo hecho nos permite distinguir desde el punto de vista duplicativo el cromosoma X
55
inactivo, lo cual resulta de gran importancia en el momento de identificar los cromosomas

sexuales en especies donde an no se han caracterizado. El bloqueo producido por el MTX
puede ser liberado con la adicin en el medio de BrdUrd que se incorpora va exgena
(timinas en donde el grupo metilo se sustituye por un bromo) para suplir la deficiencia que
induce el tratamiento con la droga ya que es un anlogo de la T. Luego de 15 horas
posliberacin en clulas humanas del bloqueo, las clulas estn pasando por estadios
tempranos replicativos en metafase, lo que permite aumentar la resolucin de las bandas
observadas debido al menor grado de compactacin de los cromosomas [14].
Tambin se usan antimitticos que se involucran directamente con la polimerizacin
o despolimerizacin, como colcemid o colchicina, los cuales paran el crecimiento de las
clulas justo en la mitosis (fase M del ciclo), permitiendo un mayor porcentaje de clulas en
las que se pueden visualizar cromosomas condensados. De un lado, el colcemid produce
una estructura menos compacta y la colchicina produce efectos de compactacin ms
rpida, por lo tanto, dependiendo de los objetivos del experimento, se puede seleccionar
uno u otro compuesto. En algunos casos se pueden combinar el bromuro de etidio a
concentraciones de 5 g/ml ms el colcemid durante una hora para lograr extendidos
prometafsicos de alta resolucin combinado con alto nmero de mitosis. La tcnica de
cultivo de linfocitos empleada en la mayora de los laboratorios es la de Moorhead et al.,
comnmente conocida como el mtodo de secado al aire [15-17].
Una vez realizado el cultivo y la correspondiente fijacin de las mitosis, las placas del
extendido obtenido en principio tendrn tres tipos de clulas: estimuladas, es decir que
estn pasando por una fase del ciclo diferente a la metafase y conllevan el ciclo mittico,
generalmente son de color rosado y de mayor tamao que los ncleos no estimulados;
ncleos inactivos o clulas que no lograron acoplarse a las condiciones de cultivo y no
mantienen un menor tamao que las clulas estimuladas y se visualizan de un color
morado; y clulas en mitosis propiamente en metafase. Es importante realizar una medida
del nmero de mitosis en relacin con el nmero de clulas totales en el ciclo (estimuladas
mitticas), ya que pueden ser indicativos directos que evidencian problemticas
patolgicas, entre otras. Una de estas medidas es el ndice mittico, el cual da el porcentaje
de clulas totales sin tener en cuenta las no estimuladas en correlacin con el nmero de
mitosis obtenidas, y se calcula de la siguiente manera:
IM= ((cantidad de mitosis)) ((clulas totales)) x 100.
El nmero de clulas totales a contar por placa generalmente es de 2000 a 3000
clulas, a un aumento de 40x, procurando realizar el conteo recorriendo la placa con la
fijacin de una manera ordenada.
56

Microscopio.
Placa con extendido cromosmico.
Aceite de inmersin.
Placas para coordinar la posicin de las mitosis (placas forradas con cinta de papel).

Pijama institucional.
Bata de laboratorio.
Guantes de ltex/vinilo.
En el caso de personas con cabello largo, sujetador de cabello.
Tiempo estimado
Una hora y 45 minutos.
Elaboracin de un cariotipo
Metodologa
Conteo cromosmico
A cada estudiante se le asignar una fotografa de una mitosis que ser el objeto de estudio,
y con la cual el estudiante realizar el cariotipo.
Localizacin del centrmero
Los cromosomas metafsicos se encuentran en estructuras en forma de diadas (dos
cromtidas) unidas por el centrmero identificado por ser un estrechamiento en el
cromosoma. La identificacin del centrmero permite determinar los dos brazos que posee
un cromosoma: p o brazo corto y q o brazo largo.
Clculo del ndice centromrico (IC)
Se obtiene relacionando la longitud del brazo corto (Lp) con la longitud total de cada
cromosoma (LT,i) y se expresa en porcentaje segn la siguiente relacin:
=
,
,
100
(1)
Clculo del ndice braquial (IB)

Se obtiene mediante la relacin de la longitud del brazo corto (Lp) respecto al brazo largo
(Lq), mediante la siguiente relacin:
=
57
,
,
(2)
Clasificacin del cromosoma por ubicacin del centrmero

Una vez determinados el IC y el IB se procede a la clasificacin de los cromosomas en
metacntricos, submetacntricos, acrocntrico y subtelocntrico mediante el criterio que se
muestra en la tabla 1.
Tabla 1.
Calcificacin cromosmica morfolgica
IC
IB
50-46
1-17
45-26
1.7-3
25-25
3-7
<15
>7
Clasificacin
Metacntrico
Submetacntricos
Acrocntrico
Subtelocntrico
Apareamiento de cromosomas homlogos

Calculados el IC o el IB y asocindose con la longitud de cada cromosoma junto con la
morfologa del bandeo, se pueden organizar los cromosomas homlogos. Una correlacin
que puede ayudar en el apareamiento de cromosomas homlogos y ms an en el caso de
cromosomas con coloracin homognea es el ndice de homologa.
=
,
,
(3)
Este valor depende del error de la medida y la presencia o no de polimorfismos en los

cromosomas, pero junto con el bandeo pueden ayudar en el reconocimiento de los
cromosomas homlogos.
Longitud relativa (Lr)
Para proponer el cariotipo es necesario establecer un orden dentro de los cromosomas, lo
cual se logra calculando la longitud relativa de cada par homlogo, expresado en
porcentaje, lo cual se obtiene al dividir el tamao del cromosoma entre la longitud total del
grupo haploide femenino (lthf). Para el caso de un organismo con genoma 2n se tiene:
=
1
2
(4)
Al tratarse de una hembra con cromosomas sexuales XX la anterior correlacin se

aplica, por el contrario para el caso de tratarse de un macho XY, lthf se halla restando la
longitud del cromosoma Y y sumando dos veces el cromosoma X. Para el caso de trisomas
y aneuploidas somticas o sexuales se rearregla el genoma a condiciones de normalidad, y
58
para el caso de la trisoma se elimina el cromosoma causante de la trisoma. Para el caso de

aneuploidas se multiplica por dos el cromosoma unitario en ausencia de su homlogo.
Despus, el clculo de la longitud relativa de cada cromosoma se obtiene de la
siguiente manera:
, =
100
(5)
Esquema general de clasificacin cromosmica

Los cromosomas de una especie cualquiera pueden ser organizados en grupos. En el caso
del genoma humano se han clasificados en los que se muestre en la tabla 2.
Tabla 2.
Esquema general de clasificacin cromosmica
Grupo A
Grupo B
Grupo C
Grupo D
Grupo E
Grupo F
Grupo G
Grandes cromosomas metacntricos o submetacntricos

Cromosomas submetacntricos
Cromosomas submetacntricos de tamao medio
Cromosomas acrocntricos de tamao medio con satlites
Cromosomas subtelocntricos Cromosomas submetacntricos
relativamente cortos
Cromosomas metacntricos relativamente cortos
Cromosomas acrocntricos cortos con satlites

El estudiante podr contar, adems, con ejemplos de cariotipos de trabajos anteriores como
una gua para el desarrollo del cariotipo.
Idiograma
Se construir un patrn de bandas manteniendo la proporcin de longitud de cada
cromosoma en el genoma, bosquejando la problemtica cromosmica y posibles
polimorfismos, entre otros. Un ideograma para el caso de cromosomas humanos segn
diferentes patrones de bandeos se muestra en la figura 1.
59
Figura 1. Ideograma para humano normal.
Bibliografa
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61
62
Biologa molecular aplicada a la clnica: extraccin

Captulo de ADN, reaccin en cadena de la polimerasa
6
y electroforesis
Ana Claudia Ossa-Giraldo*
Resumen
Desde el descubrimiento de la composicin y estructura del ADN por Watson y
Crick, se han logrado grandes avances en el entendimiento de las complejas
interacciones y comportamientos al interior de la clula, desde el punto de vista
molecular. El estudio de las interacciones de aquellas molculas biolgicamente
activas, conocido como biologa molecular, ha brindado interesantes herramientas
para la deteccin, caracterizacin y evidencia de estas. Dichas herramientas, a su
vez, han permitido su aplicacin ya no solo en la investigacin bsica sino tambin
en diferentes campos biomdicos como el diagnstico clnico, el pronstico, el
tratamiento de patologas o el uso en el campo forense, entre muchos otros, que son
transversales a las profesiones u oficios biomdicos como la medicina de humanos,
la medicina veterinaria y la odontologa, entre otros. Existen innumerables tcnicas
y protocolos que se pueden usar para cualquiera de los objetivos mencionados. En
este captulo se estudiarn algunas de sus aplicaciones y se llevar a la prctica tres
tcnicas moleculares bsicas que permiten la obtencin, replicacin y visualizacin
del ADN a partir de cualquier muestra biolgica que contenga clulas nucleadas.
Palabras clave: biologa molecular, ADN, reaccin en cadena de la polimerasa
(PCR), electroforesis.
Microbiloga y bioanalista, especialista en Microbiologa Clnica y estudiante del doctorado en Ciencias

Bsicas Biomdicas de la Universidad de Antioquia. Actualmente, es profesora auxiliar de la Universidad
Cooperativa de Colombia, sede Medelln, Colombia. Correo electrnico: ana.ossag@campusucc.edu.co
63
Metodologa
Se realizarn dos prcticas demostrativas de tcnicas de biologa molecular enfocando su
aplicacin a la clnica, con la discusin de casos clnicos cuyo diagnstico es guiado por la
biologa molecular.

Biologa molecular en la clnica, extraccin de ADN, reaccin en cadena de la polimerasa
(PCR) y electroforesis en gel de agarosa.
Objetivos
Objetivo principal
Entender y aprender las tcnicas de biologa molecular descritas y su aplicacin en las reas
clnicas.
1. Extraer ADN de calidad a partir de muestras biolgicas como sangre perifrica de
humano.
2. Verificar la calidad del ADN extrado.
3. Entender y aplicar los principios bsicos de la reaccin en cadena de la polimerasa
(PCR).
4. Realizar electroforesis de ADN en gel de agarosa.
5. Integrar los conocimientos adquiridos sobre tcnicas de biologa molecular y su
aplicacin en la prctica clnica.
Fundamento terico
Biologa molecular en la clnica
La posibilidad de estudiar cidos nucleicos a partir de muestras biolgicas ha abierto un
amplio campo para las ciencias mdicas y biolgicas, toda vez que su obtencin permite
hacer estudios especficos del material gentico de diversas especies para evaluar su
estructura y funcionalidad, lo que, en la perspectiva clnica, se ha traducido en un avance en
el descubrimiento, entendimiento, diagnstico e intervencin de un sinfn de patologas
para las cuales, antes del conocimiento de la biologa molecular, su abordaje era limitado o
imposible.
Se puede describir un sinnmero de aplicaciones clnicas de las tcnicas de biologa
molecular, las cuales se emplean de manera rutinaria en investigacin y cada vez ms
habitualmente en el campo asistencial alrededor de todo el mundo, incluyendo pases en
va de desarrollo como el nuestro. Si bien esta prctica se limita al entendimiento de tres de
las tcnicas de biologa molecular, a continuacin se enumeran algunos ejemplos de la
aplicacin de esta disciplina cientfica, incluyendo otras tcnicas:
64
Trasplante de rganos: Colombia y Medelln se han convertido en referentes en

trasplantes de rganos, gracias al trabajo arduo de diversas especialidades y equipos
interdisciplinarios en biomedicina. Parte del proceso y resultado exitoso del trasplante
de rganos ha sido posible gracias a las tcnicas de biologa molecular, especialmente
la PCR, a travs de la cual se pueden amplificar y estudiar los genes del complejo
mayor de histocompatibilidad (CMH I y II) de los donantes y futuros receptores de
rganos, permitiendo encontrar el receptor ms parecido al donante desde el punto de
vista gentico, el cual tiene el mejor pronstico de aceptacin biolgica del injerto [1,
2].
Diagnstico de patologas hereditarias: diversas enfermedades padecidas por el humano
tienen un origen gentico y, en muchos casos, hereditario, y para muchas de estas ya
se tiene la posibilidad de hacer diagnstico rpido y preciso a travs de tcnicas de
biologa molecular. Un ejemplo de ello es la deteccin de alteraciones estructurales
de una secuencia especfica del material gentico por medio de tcnicas como PCR
con hibridacin alelo especfica, la cual es usada comnmente para la deteccin de
polimorfismos en el diagnstico de enfermedades como la hemofilia A y la anemia de
clulas falciformes [3].
Diagnstico precoz y prevencin de enfermedades: otra aplicacin de la biologa
molecular en la clnica se ha direccionado por el diagnstico temprano de patologas
o sus desencadenantes, para prevenir la aparicin o complicacin de estas. En este
sentido, se puede mencionar la posible deteccin prenatal del gen RHD que codifica
para la glicoprotena del RH (factor RH) en fetos que son hijos de madres RH negativo,
para prevenir en estos la aparicin de la anemia hemoltica del recin nacido o
eritroblastosis fetal [4].
Tratamiento de patologas: las tcnicas de biologa molecular e ingeniera gentica
tambin han permitido desarrollar molculas de uso teraputico en diferentes
patologas. Un clsico ejemplo de ello es la utilizacin de insulina recombinante
idntica a la humana. Antes, la insulina para el tratamiento de pacientes diabticos
insulinodependientes se haca con una insulina obtenida del pncreas del ganado
porcino y vacuno; sin embargo, dado que dicha hormona no es idntica a la humana,
se generaba en algunos pacientes el desarrollo de anticuerpos contra esta, que
finalmente les impeda seguir usndola como tratamiento. Gracias a las tcnicas de
ingeniera gentica y biologa molecular, actualmente se usa insulina recombinante
idntica a la humana, lo cual ha eliminado el rechazo inmunolgico de los pacientes y
optimizado su tratamiento [3, 5].
Diagnstico y seguimiento de enfermedades infecciosas: este diagnstico se ha basado
tradicionalmente en la deteccin del microorganismo en una muestra clnica a travs
del cultivo de esta y el consecuente crecimiento del microbio infectante. Dicha
metodologa de diagnstico requiere desde 24 horas hasta meses (como el caso del
cultivo de Mycobacterium tuberculosis), tiempo que, en muchas ocasiones, puede
significar un pronstico pobre para el paciente. La necesidad de hacer ms eficiente el
65
67
diagnstico microbiolgico de las infecciones se ha solucionado a travs del uso de

pruebas rpidas basadas en la deteccin de antgenos y anticuerpos y, en los ltimos
aos, por el empleo de tcnicas de biologa molecular que permiten detectar cidos
nucleicos del microorganismo infectante en muestras del paciente en tiempos
reducidos, y con una sensibilidad y especificidad comparable con los cultivos
tradicionales. De esta manera, se puede acelerar el diagnstico de pacientes,
proporcionando la posibilidad de un tratamiento oportuno; un ejemplo de ello, en el
campo humano, son las pruebas de diagnstico molecular de Mycobacterium
tuberculosis, las cuales reducen el tiempo de diagnstico microbiolgico de meses
(requerido a veces para el crecimiento en cultivo de esta bacteria) a das u horas. As
mismo, encontramos en el mercado pruebas moleculares para el diagnstico de
chlamydia trachomatis, neisseria gonorrhoeae y virus de la inmunodeficiencia
humana 1 (VIH-1) o para el control de la terapia en infecciones como las causadas por
el virus de la hepatitis C (VHC), citomegalovirus y bordetella pertusis, entre otros [5,
6]. En el campo veterinario tambin se ha visto un importante impacto de la deteccin
con tcnicas de biologa molecular de microorganismos causantes de infecciones,
como es el caso de brucella abortus, el cual causa abortos en el ganado, generando
importantes prdidas econmicas, y su deteccin temprana puede significar una
intervencin oportuna para evitar esas prdidas econmicas al ganadero [7].
Medicina forense: las ciencias forenses se han visto igualmente beneficiadas con el
avance de la biologa molecular. Actualmente, se usan mltiples tcnicas moleculares
para el esclarecimiento de asuntos legales alrededor del mundo. Se puede hablar
entonces de las llamadas pruebas de paternidad, que se han convertido en un evento
cotidiano en nuestro medio; estas son realizadas con protocolos moleculares que
permiten identificar con amplia precisin el posible progenitor de un individuo en
casos legales que requieren dicho esclarecimiento. Otro uso comn en el campo
forense es la deteccin y estudio del ADN del agresor en vctimas de diversos delitos
como los sexuales, lo que permite, en un gran nmero de casos, identificar con
certeza el victimario entre la lista de sospechosos [3].
Medicina veterinaria y zootecnia: las herramientas moleculares han generado grandes
avances en la medicina veterinaria y zootecnia, a travs de los cuales se ha podido no
solo mitigar la morbimortalidad en los animales, sino conocer a profundidad las
diversas especies, as como beneficiar y aumentar la productividad econmica a partir
de la crianza de animales. Ejemplos de ello son los diagnsticos oportunos de
patologas que afectan a los animales, como las enfermedades infecciosas (como se
mencion) [7], y la posibilidad de conocer inequvoca y tempranamente el sexo en
aquellas especies a travs de tcnicas moleculares, el cual es imposible identificar
anatmicamente por la ausencia de dimorfismo sexual de algunos animales, como es
el caso de las aves, principalmente las exticas [8, 9]. As mismo, la ingeniera
gentica ha abierto un campo de posibilidades de perfeccionamiento de las especies
con miras a una mayor produccin, como lo es el cruce gentico de ciertas especies
66
bovinas, la fertilizacin in vitro o la modificacin gentica de animales para que sean

ms resistentes a ciertas condiciones ambientales o patolgicas o para que produzcan
en mayor cantidad y calidad aquellos productos derivados, como la carne y la leche
[10, 11].
Odontologa: en el campo de la odontologa, al igual que en las otras reas biomdicas,
la biologa molecular ha impactado la prctica clnica y el entendimiento de las bases
celulares y moleculares del desarrollo dental y las estructuras maxilofaciales. Por
ejemplo, a travs de estas herramientas se pudo concluir que la mutacin del SOSI est
relacionada con la fibromatosis gingival hereditaria, o se sabe que una mutacin en el
gen que codifica para la sialofosfoprotena de la dentina genera dentinognesis
imperfecta tipo II [12]. La aplicacin de la biologa molecular es til para la
clasificacin de los tumores orales, para el diagnstico y el pronstico del cncer oral
o para el desarrollo de frmacos o mejoramiento de estos [13]. Adems, esta
disciplina tambin ha permitido el estudio de las biopelculas de microorganismos
que se forman sobre las estructuras bucales y su mutua interaccin [14].
Aunque los anteriores ejemplos solo cobijan una parte de la amplia aplicacin de la
biologa molecular, se hace evidente entonces la necesidad y obligatoriedad de que el
mdico general, el mdico veterinario y zootecnista, el odontlogo y todos aquellos
profesionales de las reas biomdicas, desde sus enfoques, posean conocimientos de los
principios bsicos de las tcnicas moleculares y dimensionen su aplicacin clnica y
prctica.
Extraccin de ADN
La extraccin de ADN es el mtodo por el cual se puede recuperar este material gentico de
muestras orgnicas. Dicha extraccin implica la obtencin del cido nucleico, su
purificacin y cuantificacin, pues es necesario garantizar que el material obtenido es de
suficiente calidad para desarrollar de manera ptima otras tcnicas para su estudio.
Dependiendo del tipo de muestra biolgica a partir del cual se vaya a extraer el ADN, los
protocolos pueden tener ligeras variaciones (por ejemplo, es diferente asilar ADN a partir de
una clula animal que de una clula vegetal o de una bacteria gramnegativa que de una
bacteria grampositiva, en funcin de sus estructuras como la pared celular). Segn lo
anterior, el aislamiento de ADN se puede resumir en los siguientes pasos:
Lisis celular: se usan sales y detergentes (comnmente el SDS) que destruyen
macromolculas por desnaturalizacin, llevando a la eliminacin de la membrana de
la clula, y luego la nuclear, para permitir la liberacin del material gentico [15, 16].
Purificacin del ADN: una vez lisados los ncleos y liberado el ADN, hay que separar este
material gentico de los materiales contaminantes, como sus protenas asociadas. Este
procedimiento se hace generalmente con fenol, o fenol/cloroformo y centrifugacin
de manera repetida; el fenol desnaturaliza las protenas y las precipita, lo que es
69
67
optimizado con la centrifugacin. Este procedimiento permite que se separe el ADN,

el cual queda en la fase acuosa de la solucin, mientras que las protenas quedan
como precipitado [15, 16].
Precipitacin del ADN: despus de la separacin del ADN y de las protenas, el primero es
recuperado de la fase acuosa y se hace un proceso de precipitacin con etanol fro
para su almacenaje y conservacin [15, 16].
Cuantificacin y control de calidad del ADN: para tener una idea de la cantidad y la
calidad del ADN extrado, se puede hacer una verificacin de este por medio de
espectrofotometra, hallando la densidad ptica (DO) de la muestra a 260 y 280
nanmetros (nm), lo que permitir, con la aplicacin de algunas frmulas, saber qu
concentracin se obtuvo de ADN y su nivel de pureza [17]. Las frmulas (relacin
260/280) y su interpretacin estn ubicadas en la prctica de ese tema (ver pgina 77).
Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)

Una vez obtenida una muestra de ADN, esta se puede analizar para hallar un fragmento
especfico deseado, por ejemplo, verificar si esa muestra de ADN contiene un gen mutado
que codifica para alguna protena causante de una enfermedad. Para lograr esto de una
manera ms ptima, se hace uso de la reaccin en cadena de la polimerasas (PCR por sus
siglas en ingls), la cual es una tcnica de biologa molecular que permite amplificar
muchas veces un fragmento deseado de ADN al hacer mltiple copias de este por medio de
la enzima DNA polimerasa a travs de la aplicacin de diversos ciclos trmicos que generan
la desnaturalizacin del ADN y su replicacin de manera exponencial y semiconservativa
ciclo tras ciclo. En la figura 1 se muestra un diagrama del principio de la PCR [5, 15, 17].
68
Secuencia
blanco
ADN Genmico
Desnaturalizacin:
calentamiento
breve para separar
las hebras
Ciclo 1
Produce
2
molculas
Alineacin:
enfrentamiento para
permitir que los
cebadores formen
puentes hidrgenos con
la secuencia blanco
Elongacin:
la ADN polimerasa
adiciona
nucletidos al
extremo 3 de cada
cebador
Ciclo 2
Produce
4
molculas
Ciclo 2
Produce 4
molculas; 2
molculas (en
los recuadros
blancos) se unen
a la secuencia
blanco
Figura 1. Imagen de reaccin de cadena de la polimerasa [18]. Texto traducido por la

autora
69
Electroforesis en gel de agarosa

Finalmente, luego de extraer el ADN y someterlo al proceso de PCR, es necesario evidenciar
si la muestra problema contiene el fragmento que buscamos, para lo cual hacemos uso de la
electroforesis en gel de agarosa. Esta tcnica permite separar los fragmentos de ADN por
tamaos al aplicar electricidad a este, lo que genera su desplazamiento o migracin a travs
del gel de agarosa dispuesto en una cmara de electroforesis. Gracias a la carga negativa del
ADN, este migrar del nodo al ctodo de la cmara a travs de los poros del gel; los
fragmentos de ADN ms pequeos tendrn ms facilidad de atravesar el gel, lo que les
71
permitir llegar en menor tiempo al otro lado de la cmara de electroforesis en comparacin
con fragmentos ms pesados. Esta diferencia entre la velocidad de migracin permite que
las porciones de ADN se separen y podamos comprobar si se encuentra en la muestra
problema el fragmento de ADN que buscamos, de un tamao ya conocido, al compararlo
con una escalera de ADN de diversos pesos (tamaos) llamada marcador de peso molecular.
Para visualizar el ADN sembrado en el gel y saber la distancia de recorrido, es necesario
usar fluorocromos intercalantes del DNA para excitarlos con luz UV y realizar la
visualizacin correspondiente [5, 15, 17].
En la figura 2 y 3 se muestran diversas fotografas de geles de agarosa luego de la
electroforesis de fragmentos de ADN posPCR (amplicones).
Figura 2. Ensayo efecto tres colorantes. * Corrido electrofortico luego de una PCR para
amplificacin de genes de Mycobacterium bovis: obsrvense los pozos de siembra de las
muestras y la migracin diferenciada de tres colorantes indicadores de corrido de peso
molecular diferenciado. [19]
70
Figura 3. PCR gen TAQM3 y TAQM4. * Corrido electrofortico luego de una PCR para
amplificacin de genes de Mycobacterium bovis: 1: marcador de peso molecular de 100pb;
2 y 3: controles positivos, banda de 122pb; 4-19: muestras; 20: control negativo.
Obsrvense las bandas fluorescentes de ADN con bromuro de etidio. [19]
Figura 4. Deteccin b-Actina, TLR2, TLR3 y TLR4.

Corrido electrofortico luego de una PCR para amplificacin del mRNA de b-Actina, TLR2,
TLR3 y TLR4. Obsrvense los pozos de siembra de las muestras y la migracin
diferenciada de los cuatro amplicones en tres muestras (clulas dendrticas plasmacitoides
de dos donantes sanos y clulas mononucleares totales). Los tres primeros pozos
corresponden a b-Actina, luego tres pozos de TLR2, luego el marcador de tamao
molecular, luego TLR3 que esta negativo y por ltimo tres pozos de TLR4. [20]
71
Figura 5. Electoforesis DNA genmico.

Corrido electrofortico luego de una PCR para amplificacin de genes de Mycobacterium
bovis: 1: marcador de peso molecular de 200pb; 2 y 3: control positivo; 19: control
negativo; 4-18: muestras. Obsrvese en los pozos de las muestras DNA genmico en los
pozos de siembra; este es muy pesado para migrar a travs del gel. [19]
Figura 6. PCR con Smear.

Corrido electrofortico luego de una PCR para amplificacin de genes de Mycobacterium
bovis: 1: marcador de peso molecular de 200pb; 2: control positivo; 20: control negativo; 319: muestras. Obsrvese en las muestras 4, 6, 8, 10 y 12, 14 y 16 el Smear que es un barrido
de ADN generado posiblemente por una alta concentracin de ADN o una inadecuada
extraccin. [19]
72
Figura 6. Deteccin TLR5, TLR10 y TLR9.

Corrido electrofortico luego de una PCR para amplificacin del mRNA de TLR5, TLR10 y
TLR9. Obsrvense los pozos de siembra de las muestras y la migracin diferenciada de los
dos amplicones en tres muestras (monocitos de tres donantes sanos). Los tres primeros
pozos corresponden a TLR5, seguido de tres pozos de TLR10 que estn negativos,
nuevamente el marcador de tamao molecular y, por ltimo, tres pozos de TLR9. [20]

Se llevarn a cabo dos sesiones prcticas.
Primera sesin
Extraccin de ADN por Salting Out y cuantificacin por espectrofotometra.
Recursos materiales (reactivos, equipos, muestras, animales)

Bloque trmico
Centrifuga
Micropipetas
Vortex
Espectrofotmetro
Agua destilada
Agua inyectable
Alcohol al 70%
Isopropanol puro
Solucin A
Solucin B
Solucin C
Tubos ependorff de 1,7 ml
73
Tubos ependorff de 0,5 ml

Puntas para micropipeta
Equipo de seguridad personal requerido: bata de laboratorio
Procedimiento
Extraccin de ADN
1. Tomar entre 100 a 300 l de sangre previamente homogenizada en un tubo de reaccin
limpio y estril de 1,5 ml debidamente rotulado, con el cdigo de la muestra.
Completar a 1500 l con solucin A y mezclar por inversin.
2. Se marcar un tubo como control negativo (-) y la fecha, al cual se le har todo el
procedimiento remplazando los l de sangre por H2O inyectable y se procede como
una muestra normal.
3. Centrifugar a 13.000 rpm durante 3 minutos. Descartar el sobrenadante.
4. Lavar suavemente el precipitado con solucin salina al 0,9% usando pipeta Pasteur
estril; cuidar de no remover el precipitado. Descartar suavemente el sobrenadante.
5. Agregar 150 l de solucin B (precalentada a 37 C hasta lograr que se disuelvan
completamente las sales) y agitar con vrtex a 3000 rpm hasta una disolucin parcial o
total del botn.
6. Agregar 50 l de solucin C y agitar con vrtex a 3000 rpm durante unos segundos.
7. Centrifugar a 13.000 rpm durante 3 minutos.
8. Transferir el sobrenadante a un tubo de reaccin limpio y estril de 1,5 ml debidamente
rotulado.
9. Agregar 200 l de isopropanol fro. Mezclar por inversin hasta detectar la malla de
ADN.
10. Centrifugar a 13.000 rpm durante 3 minutos.
11. Descartar el sobrenadante y hacer un lavado del precipitado con 100 l de etanol al
70%.
12. Agregar aproximadamente 200 l de agua inyectable (estril) (dependiendo de la
cantidad de ADN detectado cualitativamente).
13. Aplicar vrtex entre 10 y 15 segundos de 2500 a 3000 rpm hasta lograr que el botn se
desprenda y se homogenice el ADN (disuelto totalmente en la solucin).
14. Incubar a 93 C durante 3 minutos para lograr la completa homogenizacin.
15. Almacenar a -20 C en la nevera despus de la respectiva cuantificacin y dilucin.
Nota: cuando la sangre a disposicin tiene mucho tiempo de almacenamiento en la nevera o
llega en condiciones poco ptimas (sangre lisada, con cogulos, etc), se procede a:
Lavar dos veces con solucin A.
Lavar dos veces con solucin salina al 0,9%.
Precipitar con 300 l de isopropanol.
74
Cuantificacin del ADN por espectroscopia

Este mtodo es recomendable si la muestra es pura (contaminacin mnima con protenas,
fenol, agarosa u otros cidos nucleicos).
1.
Realizar una dilucin 1/100 de la muestra de DNA. El volumen final mnimo debe ser
1500 l.
2. Encender el espectrofotmetro: en el men principal aparecer el botn Medir ADN.
3. Determinar la longitud de onda: 260 nm para calcular la concentracin de ADN en la
muestra; densidad ptica (DO) = 1 corresponde aproximadamente a 50 g/ml para ADN
de doble cadena, 40g/ml para ADN de cadena sencilla y RNA, y 20g/ml para
oligonucletidos de cadena sencilla. 280 nm para protenas.
4. Colocar la cubeta de modo que la luz atraviese los lados transparentes de la celda.
5. Con el botn Autocero ajustar. Tener en cuenta que la cubeta debe tener el mismo
solvente que se utiliz para preparar la dilucin de la muestra de ADN.
6. Descartar el solvente. Lavar la cubeta dos veces con agua destilada y secar con un
pauelo nuevo desechable. La cubeta debe tomarse siempre por los lados opacos para
evitar que se resbale de las manos.
7. Llenar la cubeta con 1,5-2 ml de la muestra de inters.
8. Medir.
9. Escribir los resultados: relacin 260/280, concentracin de protenas y concentracin
de DNA.
10. Repetir desde el paso 6 al 8.
Nota: la relacin entre las lecturas a 260 nm y 280 nm (DO260/DO280) indica el grado de
pureza del cido nucleico. Las preparaciones puras de DNA y RNA deben tener valores de
1,8 y 2,0, respectivamente. Si hay contaminacin con protena o fenol, la relacin
DO260/DO280 ser significativamente menor a 1,8.
Realizar dilucin a 10 ng/L para la PCR en tubos de reaccin de 0,5 ml segn los clculos
hechos en el numeral anterior. Almacenar a -20 C.
Segunda sesin
PCR
y electroforesis.
Recursos materiales (reactivos, equipos, muestras, animales)

Kit QIAGEN Multiplex PCR
Primers de inters
Muestra de DNA humano
Tubos ependorff de 0,2 ml para PCR
Tubos ependorff de 0, 5 ml
Micropipetas
75
Puntas micropipetas
Minicentrfuga
Vrtex
Termociclador
Equipo de seguridad personal requerido: bata de laboratorio, guantes de ltex nuevos, tapabocas nuevo.
Procedimiento
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
Tomar las muestras de ADN (previamente cuantificadas).

Marcar los tubos de PCR segn el ensayo a realizar.
Usar los tubos de 0,5 ml para hacer las mezclas de PCR.
Tomar 1 L de agua del kit por cada reaccin a ejecutar y adicionarla al tubo de 0,5 ml.
Tomar 3 L de la mix del kit por cada reaccin y adicionarla al tubo de 0,5 L.
Tomar 1 L de los primers de inters por cada reaccin y adicionar al tubo de 0,5 ml.
Tomar la mezcla del tubo de 0,5 ml y adicionar 5 L a cada tubo de PCR.
Dar vrtex a las muestras de ADN y adicionar 1 L de muestra a cada tubo de PCR.
Programar el termociclador.
Poner las muestras y poner a funcionar el programa seleccionado o programado en el
termociclador.
11. La amplificacin puede tardar hasta tres horas. Una vez termine el programa en el
termociclador, las muestras pueden ser almacenadas a -20 C.
Electroforesis en gel de agarosa
1. Pesar la agarosa haciendo el clculo para que el gel quede al 1,5% de concentracin de
agarosa (los gramos a pesar dependen del tamao de la cama de electroforesis a usar).
2. Mezclar la agarosa con agua destilada en un Erlenmeyer y calentar en un microondas
hasta llegar al punto de ebullicin. Evitar que la agarosa se derrame al llegar al punto
de ebullicin.
3. Dejar enfriar la solucin hasta una temperatura aproximada a 30 C y adicionar 13 ul
de bromuro de etidio. Mezclar. Nota: Este procedimiento se debe realizar en una
cmara de extraccin de gases.
4. Servir el gel en la cama de electroforesis y adicionar los peines garantizando una buena
formacin de los pozos de siembra.
5. Dejar solidificar.
6. Hacer un mapa del gel a servir, indicando la ubicacin en cada pozo de las muestras de
productos de PCR, controles negativo y positivo, y el marcador de peso molecular.
7. Tomar 10 uL de marcador de peso molecular y mezclar con 3 uL de buffer de carga.
Servir cuidadosamente en el pozo del gel que corresponda.
8. Repetir el paso anterior para cada uno de los controles y muestras de productos de PCR
(amplicones).
76
9.
10.
11.
12.
13.
Una vez se termine de servir las muestras en el gel, tapar la cmara de electroforesis y
conectar a la fuente de poder.
Programar un corrido de 2 horas a 120 voltios.
Revisar constantemente el corrido de ADN.
Una vez terminado el corrido electrofortico, tomar el gel y visualizarlo en un
transiluminador de luz UV.
Analizar las bandas e interpretar los resultados.
Ejercicios de aplicacin
Ejercicio 1
Paciente masculino de 24 aos de edad, quien consulta a su mdico por dificultad para
respirar, tos productiva de 3 meses de evolucin, hemoptisis (esputos con sangre), prdida
de peso, fiebre intermitente y sudoracin nocturna. Luego del examen fsico, el mdico
sospecha que el paciente tiene tuberculosis pulmonar (causada por la bacteria
Mycobacterium tuberculosis). Para confirmar el diagnstico, se decide realizar una PCR a
partir de muestras de esputo del paciente para detectar ADN de la bacteria y confirmar la
infeccin sospechada. En la PCR se pretende amplificar un fragmento de ADN de 250 pb
correspondientes a un gen especfico de la especie M. tuberculosis. Luego de los
respectivos procedimientos de laboratorio, en la figura 7 se muestran los resultados del
corrido electrofortico.
Figura 7. Muestra de resultados del corrido electrofortico.
77
Segn los resultados, responda:

1.
2.
3.
4.
Funcion adecuadamente esta prueba molecular?

Por qu no hay banda en el control negativo?
Cul es el resultado de la PCR?
Cul es la conclusin diagnstica?
Ejercicio 2
En consulta, un odontlogo identifica en un paciente lesiones de la mucosa oral indicativas
de procesos malignos. Para confirmar su diagnstico, el odontlogo recurre al estudio de
biopsias de las lesiones por tcnicas histoqumicas y moleculares; dentro de las tcnicas
moleculares, se pretende detectar mutaciones del gen p53 que est implicado en actividades
antitumorales, ya que las mutaciones en este gen estn asociadas a procesos malignos
(cncer). Para detectar dichas mutaciones, se realiz una PCR para detectar el gen p53 y
luego se secuenci este para confirmar si estaba normal (secuencia esperada de nucletidos)
o mutado (alteracin en la secuencia de nucletidos).
1.
2.
Cmo esperara usted encontrar o visualizar el producto de esta PCR en caso de que
hubiese alguna mutacin en el gen? Habra alguna alteracin en el corrido
electrofortico del fragmento amplificado en comparacin con el control positivo?
Por qu fue necesario secuenciar el gen para confirmar si haba mutacin?
Ejercicio 3
En una institucin de proteccin de fauna silvestre han recuperado de cautiverio un ave
psitcida. Para el proceso de identificacin, recuperacin y reproduccin del ave, el
personal del centro necesita saber el sexo de este, sin embargo, no es posible hacerlo
fenotpicamente porque esta especie no presenta dimorfismo sexual. Para identificar el sexo
se toma muestra de ADN y se amplifica por PCR el gen CHD. Se sabe que los machos tienen
cromosomas ZZ (homocigticos) y las hembras cromosomas ZW (heterocigticos),
caractersticas que generan diferencias en los fragmentos amplificados del gen CHD pues se
conoce que el fragmento derivado del cromosoma W siempre es ms grande que el Z. As,
en los machos se obtiene una sola banda de ADN amplificado luego de una PCR y en las
hembras dos bandas de diferente tamao (correspondientes a los fragmentos derivados de Z
y W, respectivamente). En la figura 2 se ilustra el resultado de la PCR.
78
Figura 2. Resultado de la PCR

1.
2.
Cul es el sexo del ave?

Funcion adecuadamente esta PCR? Por qu?
Bibliografa
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Kawase T, Matsuo K, Kashiwase K, Inoko H, Saji H, Ogawa S et al. HLA mismatch

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[23] Lpez-Durn M, Campo-Trapero J, Cano-Snchez J, Dez-Prez R, BasconesMartnez A. Aplicacin de las tcnicas de biologa molecular en oncologa oral. Av.
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[27] Lodish H. Biologa celular y molecular. 5 ed. Nueva York: Editorial
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Orac; 2007. Disponible en: http://scienceblogs.com/insolence/2007/06/26/theautism-omnibus-the-difference-betwee/
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Mycobacterium bovis en ganado y en humanos en focos de tuberculosis animal en
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de Antioquia; 2010.
[30] Hernndez JC. Deteccin de TLR en clulas dendrticas plasmacitoides humanas.
Medelln: Universidad de Antioquia; 2011.
80
Anexo 1. Normas de ingreso para la prctica de laboratorio de

biologa molecular o similares
Mantener niveles de asepsia y normas de bioseguridad con altos estndares es una prioridad
en las ciencias de la salud para aquellos espacios donde se trabaja con objetivos docentes,
con piezas humanas, placas con tejidos o cultivos celulares, por ello se ha elaborado un
manual particular para hacer uso de este en las presentes prcticas. Lo anterior cobija las
prcticas docentes, por esto se hace necesario su conocimiento y divulgacin, previo al
inicio del curso.
Ingreso al laboratorio
1. Los estudiantes deben esperar al profesor fuera del laboratorio.
2. Una vez el profesor ingrese al laboratorio, debe esperar 10 minutos a que ingresen todos
los estudiantes, tiempo a partir del cual se cerrar la puerta y se impedir el ingreso a los
estudiantes.
3. Al iniciar la prctica el estudiante deber aportar el material que le sea solicitado
dependiente de cada prctica.
4. Los estudiantes que no lleven el material requerido para el laboratorio no podrn estar en
la prctica.
Medidas de seguridad
1.
Los estudiantes debern usar batas blancas, largas y limpias para entrar al laboratorio
(estndar para la Universidad Cooperativa de Colombia).
2. Los estudiantes debern usar gafas de proteccin y guantes de ltex en el desempeo
de la prctica cuando esta lo requiera.
3. Los estudiantes no podrn comer, beber, masticar chicle, fumar y, en general, llevar
objetos a la boca dentro del laboratorio, al igual que no deben usar telfonos celulares.
4. El aseo del laboratorio es de primordial importancia, por lo que los estudiantes debern
cooperar con el mantenimiento de la limpieza de sus mesones de trabajo y del material
que as lo requiera. Debern limpiar con solucin desinfectante el rea de trabajo antes
de empezar y despus de terminar la prctica.
5. La basura debe colocarse en los recipientes correspondientes, no deber ser guardada
en los cajones o vertederos. As mismo, no debern tirarse residuos o desperdicios a los
lavabos.
6. Los estudiantes son responsables de que las llaves del agua y del gas de sus mesas de
trabajo queden debidamente cerradas al finalizar la prctica.
7. Los estudiantes debern abstenerse de colocar sobre las mesas de trabajo cualquier
material que no sea requerido para la realizacin de la prctica. Todos los objetos
personales debern ser guardados en las reas asignadas.
8. En caso de cualquier accidente o contaminacin accidental, el estudiante deber
notificar de inmediato al profesor.
9. Los estudiantes no podrn permanecer dentro del laboratorio despus de que el
profesor haya salido.
10. Los estudiantes deben lavarse las manos con agua y jabn al finalizar cada prctica (o
antes de salir del laboratorio).
81
Anexo 2. Presentacin de informes

Los informes de las prcticas se entregarn a la semana siguiente de haberse realizado y
seguirn el siguiente protocolo:
Portada
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Nombre de la universidad
Facultad
Materia
Grupo
Ttulo de la prctica
Nombre del estudiante
Fecha
Introduccin
1. Fundamentos tericos
Materiales y mtodos experimentales

1. Materiales utilizados
2. Descripcin breve de las tcnicas o mtodos experimentales utilizados
Resultados
1. Descripcin de los resultados obtenidos
2. Tablas
3. Figuras
4. Grficas
5. Anlisis de los datos
Cuestionarios
Estos deben ser suministrados por el profesor.
Discusin
1. Anlisis de los resultados obtenidos
2. Observaciones
3. Conclusiones
4. Recomendaciones
Bibliografa
1. Libros
2. Artculos
3. Sitios de Internet
82
ANEXO 3. Planificacin acadmica

Grupos de trabajo
1. Los estudiantes debern crear grupos de trabajo el primer da del curso y estos sern
mantenidos por el resto del semestre.
2. En cada prctica se dotar a cada grupo del material de trabajo que utilizar,
responsabilizndose de su integridad para entregarlo al finalizar la prctica. El material o
equipo que sea destruido o perdido ser restituido por el grupo responsable.
Obligaciones preprctica
1. Los estudiantes debern presentarse al laboratorio adecuadamente preparados, con los
materiales o las revisiones bibliogrficas referentes a la prctica.
2. El estudiante debe leer con detenimiento la tcnica a seguir y, en caso de existir dudas,
consultar con el profesor antes de iniciar la prctica.
3. Se har en algunos casos un examen previo sobre la prctica a realizar.
Desarrollo de la prctica
1. Los estudiantes deben mantener el orden dentro de los laboratorios.
2. Al inicio de cada prctica se designar un estudiante como responsable de seguridad
para verificar que se cumplan las normas de este reglamento.
3. Los estudiantes y profesores deben planear su trabajo de manera que la prctica se
complete puntualmente, y puedan salir del laboratorio 10 minutos antes de la prxima
clase o prctica, previendo el tiempo que utilizarn para recoger, ordenar el material y
limpiar su mesa.
4. No se permite el desarrollo de actividades diferentes a la prctica durante la estancia en
el laboratorio, lo cual incluye estudiar otras materias o realizar trabajos.
5. No se permite visitas personales por parte de los estudiantes.
Obligaciones posprctica
1. Los estudiantes deben enjuagar el equipo utilizado y disponer de los residuos generados
de la manera adecuada.
2. Los estudiantes debern colocar el material utilizado en la zona designada para la
recoleccin de equipo.
3. Los estudiantes debern verificar que las llaves de agua y gas de su mesa de trabajo
estn completamente cerradas.
Informes sobre prcticas de laboratorio

1. El informe de la prctica deber ser entregado en la siguiente semana de su realizacin.
2. El informe deber ser entregado antes del inicio de la siguiente prctica al profesor. El
profesor anotar en el formato correspondiente la constancia de recepcin del informe.
83
Es responsabilidad del estudiante verificar que se diligencie ese formato. Por ningn
motivo se recibirn informes extemporneos.
3. El informe de prcticas se considera un trabajo original generado por cada estudiante o
grupo de trabajo. El contenido de la prctica deber ser redactado ntegramente por el
estudiante, y cuando se utilicen citas textuales, debe de indicarse la fuente. La copia de
material sin acreditar al autor se considera plagio, el cual ser reportado a las autoridades
acadmicas de la facultad.
Sanciones
1. El incumplimiento de estas normas ser sancionado por el profesor, y dentro de los
marcos que contempla el reglamento acadmico.
2. Se emitir un reporte a las directivas acadmicas de la facultad.
3. Si los incumplimientos persisten se expondr el caso ante el Consejo de Facultad.
4. En caso de encontrarse copias o reproducciones en el contenido de los informes de las
prcticas, se anularn ambas copias y se le enviar el informe de la falta disciplinaria a
las directivas acadmicas correspondientes.
Bioseguridad en los laboratorios

Pasos a seguir despus del accidente
1. Exposicin percutnea: lave inmediatamente el rea expuesta con agua y jabn
germicida; si la herida est sangrando, apritela o estimule el sangrado, siempre que el
rea corporal lo tolere. Despus, aplique solucin desinfectante despus de concluido el
lavado.
2. Exposicin en mucosas: lave profusamente el rea con agua o solucin salina.
3. Exposicin en piel no intacta: lave el rea profusamente con solucin salina y aplique
solucin antisptica.
4. Exposicin en piel intacta: lave simplemente el rea con agua y jabn profusamente.
Evaluacin del accidente

1. Reportar accidente: todos los estudiantes y el personal que labore en el laboratorio deben
conocer la importancia de informar inmediatamente una exposicin ocupacional y tener
garantas de la confidencialidad y el respeto con el cual ser tratado.
2. El reporte se debe hacer dentro de las primeras 24-72 horas de presentado el accidente.
84
Tabla 1.
Convenciones para alertas de accidentalidad en el laboratorio
Smbolo
Leyenda
Las superficies pueden calentarse durante su uso.
Esta es capaz de generar corrientes letales. Utilice las mismas precauciones
que con cualquier dispositivo elctrico. No opere sin la cubierta en su lugar. No
opere en humedad o ambientes hmedos en los cuales esta pueda causar dao
en los componentes elctricos internos, no opere con cables conectores con
alambres sueltos.
Radiacin ultravioleta que puede ser perjudicial para la piel y los ojos, no se
exponga a esta radiacin sin proteccin ocular o de piel.
Nota.
Etiqueta de un producto qumico

El etiquetado reglamentario de las sustancias y los preparados peligrosos es un medio
sencillo para informarle y alertarle sobre los peligros relacionados con su utilizacin.
Cuando los productos son transvasados, la etiqueta deber ser sistemticamente
reproducida.
1. En las etiquetas habr, entre otras cosas, uno o varios smbolos de peligro, as como un
nmero restringido de indicaciones sobre los riesgos y sobre las medidas de prevencin
a adoptar.
2. La etiqueta le informa inmediatamente sobre el producto y le permite evitar confusiones
y errores a la hora de utilizarlo.
3. La etiqueta es imprescindible en caso de accidente, le dar las indicaciones necesarias
sobre el comportamiento a seguir en caso de accidente.
Figura 1. Etiquetas de indicaciones para prevenir accidentes en el laboratorio.

85
Convenciones
1: identificacin del producto (nombre qumico de la sustancia o nombre comercial del
preparado).
2: composicin (para los preparados, relacin de sustancias peligrosas presentes segn
concentracin y toxicidad).
3: responsable de la comercializacin (nombre, direccin y telfono).
4: identificacin de peligros.
5: descripcin del riesgo (frases R*).
6: medidas preventivas (frases S*).
Pictograma de productos qumicos

Tabla 3.
Etiquetas para riesgos de incendio o explosin
Smbolo
Significado
F Fcilmente
inflamable
F+
Extremadamente
inflamable
O Comburente
E Explosivo
Descripcin de los riegos
Medidas preventivas
Productos de fcil
inflamacin por la accin de
una fuente de energa
(llama, chispa) a temperatura
ambiente.
Productos que pueden
Prohibido fumar.
inflamarse fcilmente por la
Almacenar los productos en un
accin de una fuente de
lugar bien ventilado.
energa (llama, chispa)
Guardar los productos
incluso por debajo de los 0.
inflamables .
(Smbolo F) bien separados de
los productos comburentes (O).
No utilizar cerca de una fuente
favorecer o activar la
de calor.
combustin.
No llevar ropas sintticas.
explotar por la accin del
calor, de un choque o de un
rozamiento
86
Prohibido fumar.
Evitar el exceso de calor y
proteger contra los rayos
solares.
No ponerlos cerca de fuentes
de calor, lmparas, radiadores,
etc.
Tabla 4.
Etiquetas para riesgos de alteracin de la salud
Smbolo
Significado
R Radioactivo
T Txico
T+ Muy Txico
X n Nocivo
X I Irritante
C Corrosivo
Medidas preventivas
Cancergenos o problemas de
esterilidad.
Productos peligrosos en caso de
penetracin en el organismo por la
nariz, la boca o a travs de la piel.
Productos que pueden alterar el
conjunto del organismo o lesionar
nicamente, ciertos rganos:
pulmones, hgado, corazn,
nervios.
Pueden causar profundas
alteraciones en el organismo,
incluso la muerte. Dependiendo
del grado de toxicidad que
presentan, estos productos son
calificados de Txicos y de Muy
txicos o de Nocivos.
Ciertos de estos productos son
definidos como cancergenos, ya
que pueden provocar cncer.
Otros son definidos como
mutgenos, ya que pueden
implicar mutaciones genticas que
pueden provocar tumores.
Prohibido fumar
Utilizar equipos de proteccin
individual (EPI) para evitar
cualquier contacto.
Trabajar en locales bien
ventilados.
Buena higiene: lavarse las
manos, no comer durante la
utilizacin de los productos.
Conservar los productos en el
envase de origen.
Tras el uso, lavarse bien la
cara y las manos.
Productos que pueden provocar
la destruccin de tejidos vivos. Verter siempre el producto en
el agua y no al contrario.
Queman la piel y las mucosas,
pueden producir lesiones

graves que pueden provocar
cicatrices.

Tabla 5.
Etiquetas para riesgos del medio ambiente
Smbolo
Significado
Medidas preventivas
N Peligro para el
medio ambiente
Se trata de sustancias contaminantes y

txicas para la fauna, para el aire, la
capa de ozono.
Tratar el producto y sus

desechos (separe, recicle,
elimine), segn la
legislacin.

87
Almacenamiento de sustancias teratgenas, mutagnicas y cancergenas

Son aquellas sustancias que, con base en las monografas de la Agencia Internacional del
Cncer (IARC), estn catalogadas como:
1. Carcingenos para los humanos o razonablemente sospechoso como cancergenos a los
humanos.
2. Teratgenos o mutagnicas para los humanos.
3. Almacenar las sustancias carcingenas, mutagnicas y teratgenas separadas de otras
sustancias.
4. Identificar en un croquis o un plano de laboratorio la localizacin de estas sustancias.
5. Limitar la cantidad almacenada de estas sustancias a lo estrictamente necesario para una
semana de trabajo.
6. Mantenga un inventario de las sustancias carcingenas en el laboratorio.
7. Mantenga al personal femenino en estado de gestacin totalmente aislado de las reas
donde se utilicen estas sustancias.
Normas de seguridad en la utilizacin de equipos

1. Los equipos y aparatos nunca deben colocarse en zonas de paso, en particular en los
pasillos del laboratorio.
2. Todos los aparatos con toma elctrica debern cumplir las normativas de seguridad
correspondientes. Nunca deben utilizarse en zonas mal aisladas y expuestas a la
humedad.
3. Las fuentes de calor (calentadores, termobloques, etc.), sobre todo si se alcanzan
temperaturas elevadas, debern estar debidamente sealizadas para evitar quemaduras
accidentales.
4. Todos los procedimientos de utilizacin de aparatos deberan contar obligatoriamente
con apartados relativos a su utilizacin segura.
Es necesario aclarar que para cada equipo existen ciertas normas segn su empleo o
funcin en el laboratorio, como es el caso de neveras, congeladores, incubadoras,
termocicladores, baos serolgicos, centrfugas, etc.
88
Ronald Jos Villa-Mesa

Universidad Cooperativa de Colombia
Sede Barrancabermeja

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Clasificar los componentes celulares, sus funciones y patologas asociadas.

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Captulo Evaluacin de un medicamento anticancergeno

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Ingeniera biolgica y estudiante de maestra en Microbiologa y Bioanlisis. Profesora instructora de la

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Antibitico: 10.000 und/ml penicilina; 10.000 g/ml de streptomicina

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Adicionar 1 ml de sangre perifrica.

Segunda sesin: reconocimiento de mitosis e ndice mittico

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Figura 1. Correcto barrido de la placa con extendidos cromosmicos. Laboratorio de

Ncleos totales= Ncleos activos + Ncleos inactivos + Mitosis= 500

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Figura 1. Extendidos cromosmicos de linfocitos T humanos. Aumento 10x. Tomada en el

Figura 2. Extendidos cromosmicos de linfocitos T humanos. Aumento 40x. Tomada en el

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ndice mittico (IM)

Figura 3. ndice mittico (IM) de los diferentes tratamientos. Elaboracin propia.

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Gil-Loyzaga, PE. Cultivo de Clulas Animales y Humanas. Aplicaciones en

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Captulo Genealoga sangunea

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Los patrones heredables sanguneos en las familias constituyen una herramienta

Palabras clave: alelo, dominancia, codominancia, recesividad.

Ingeniero biomdico, especialista y magster en Biotecnologa y doctor en Ciencias Biomdicas de la

Guas de prctica Manual de prcticas de laboratorio en biogentica

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que determina el aglutingeno A.

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secuencia de aminocidos de esta protena, identificndose ms de 45 variantes antignicas

Guas de prctica Manual de prcticas de laboratorio en biogentica

Gemelos (igual en mujeres)

Nota. McGoldrick y Gerson [8]

Descripcin de la actividad a realizar

Equipo de seguridad personal requerido

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Figura 1. rbol genealgico. Elaboracin propia.

Figura 2. rbol genealgico. Elaboracin propia

Guas de prctica Manual de prcticas de laboratorio en biogentica

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