1

AKTIVITAS HAMBATAN GABUNGAN EKSTRAK

KUNYIT (Curcuma domestica Va), TEMU LAWAK
(Curcuma xanthorrhiza Roxb), DAN LEMPUYANG
(Zingiber zerumbet) TERHADAP PROLIFERASI SEL
KANKER USUS BESAR HCT (ATCC-CCL 116)

NUR IMAN ZEBUA

DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2011

ABSTRAK
NUR IMAN ZEBUA. Aktivitas Hambatan Gabungan Ekstrak Kunyit (Curcuma
domestica Va), Temu Lawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb), dan Lempuyang
(Zingiber zerumbet) terhadap Proliferasi Sel Kanker Usus Besar HCT (ATCCCCL 116). Dibimbing oleh LATIFAH K. DARUSMAN dan WULAN TRI
WAHYUNI.
Kurkuminoid dan flavonoid dapat menghambat pertumbuhan sel kanker.
Kedua senyawa tersebut terdapat pada rimpang kunyit dan temu lawak, sedangkan
pada rimpang lempuyang hanya terdapat senyawa flavonoid. Penelitian ini
bertujuan mengetahui potensi gabungan ekstrak rimpang kunyit, temu lawak, dan
lempuyang sebagai penghambat pertumbuhan sel kanker usus besar HCT (ATCCCCL 116). Ketiga rimpang diekstraksi dengan metode Huda dan etanol 96%. Uji
toksisitas ekstrak terhadap Artemia salina menunjukkan nilai konsentrasi
mematikan 50% (LC50) ekstrak etanol 96% lebih rendah dibandingkan dengan
ekstrak metode Huda. Nilai LC50 ekstrak kunyit, temu lawak, dan lempuyang
berturut-turut 93.2; 9.1, dan 21.2 ppm.
Ketiga ekstrak rimpang kemudian diformulasi berdasarkan nilai LC50
menjadi 10 formula dan diuji toksisitasnya terhadap A. salina. Formula F7, F8,
dan F9 memiliki persen mortalitas tertinggi, yaitu berturut-turut 94, 94, dan 97%.
Pada konsentrasi 50 ppm, formula F7 dan F9 telah mencapai persen inhibisi
sebesar 54.39 dan 77.32% terhadap proliferasi sel kanker usus besar HCT,
sedangkan persen inhibisi formula F8 sebesar 51.13% pada konsentrasi 100 ppm.
Pemeriksaan F9 dengan kromatografi lapis tipis menunjukkan bahwa F9
mengandung kurkumin dan bisdemetoksikurkumin.

ABSTRACT
NUR IMAN ZEBUA. Inhibitory activity of Curcuma domestica Va, Curcuma
xanthorrhiza Roxb, and Zingiber zerumbet mixed extract in proliferation of colon
cancer cells HCT (ATCC-CCL 116). Supervised by LATIFAH K. DARUSMAN
and WULAN TRI WAHYUNI.
Curcuminoid and flavonoid can inhibit cancer cells growth. Both
compounds are contained in Curcuma domestica Va and Curcuma xanthorrhiza
while Zingiber zerumbet only contains flavonoid. The objective of this study was
to determine the potency of C. domestica Va, C. xanthorrhiza Roxb, and Z.
zerumbet mixed extract as inhibitor of colon cancer cells HCT (ATCC-CCL 116).
The rhizomes were extracted using Huda and 96% ethanol methods. The toxicity
test of extracts against Artemia salina showed that 50% lethal concentration
(LC50) of 96% ethanol extract was lower than Hudas method extract. The LC50
values of C. domestica Va, C. xanthorrhiza Roxb, and Z. zerumbet extract were
93.2; 9.1, and 21.2 ppm, respectively.
Ten formula were formulated from 3 extracts based on LC50 values and
further tested for their toxicities against A. salina. F7, F8, and F9 formulas gave
highest mortality percentage, 94, 94, and 97%, respectively. At 50 ppm, F7 and
F9 formulas at 50 ppm had achieved inhibition percentage of 54.39 and 77.32%
against colon cancer cell HCT proliferation, whereas inhibition percentage of F8
formula was 51.13% at 100 ppm. Thin layer chromatography analysis of F9
showed curcumin and bisdemetoxicurcumin spots.

AKTIVITAS HAMBATAN GABUNGAN EKSTRAK

KUNYIT (Curcuma domestica Va), TEMULAWAK
(Curcuma xanthorrhiza Roxb), DAN LEMPUYANG
(Zingiber zerumbet) TERHADAP PROLIFERASI SEL
KANKER USUS BESAR HCT (ATCC-CCL 116)

NUR IMAN ZEBUA

Skripsi
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Sains pada
Departemen Kimia

DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2011

Judul Skripsi : Aktivitas Hambatan Gabungan Ekstrak Kunyit (Curcuma

domestica Va), Temu Lawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb), dan
Lempuyang (Zingiber zerumbet) terhadap Proliferasi Sel Kanker
Usus Besar HCT (ATCC-CCL 116)
Nama
: Nur Iman Zebua
Nim
: G44086039

Menyetujui:
Pembimbing I,

Pembimbing II,

Prof. Dr. Ir. Latifah K Darusman, M.S.

NIP 19530824 197603 2 001

Wulan Tri Wahyuni, S.Si, M.Si.

Mengetahui:
Ketua Departemen,

Prof. Dr. Ir. Tun Tedja Irawadi, MS.

NIP 19501227 197603 2 002

Tanggal Lulus :

PRAKATA
Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas segala
karunia-Nya sehingga karya tulis ini berhasil diselesaikan. Penelitian ini bertema
tanaman herbal sebagai antikanker dengan judul Aktivitas Hambatan Gabungan
Ekstrak Kunyit (Curcuma domestica Va), Temu Lawak (Curcuma xanthorrhiza
Roxb), dan Lempuyang (Zingiber zerumbet) terhadap Proliferasi Sel Kanker Usus
Besar HCT (ATCC-CCL 116) .
Terima kasih penulis ucapkan kepada Ibu Prof. Dr. Ir. Latifah K. Darusman,
MS dan Ibu Wulan Tri Wahyuni, MSi selaku pembimbing, Pusat Studi
Laboratorium Analitik, Pusat Studi Biofarmaka dan Pusat Studi Satwa Primata
beserta staf yang telah memberi saran dan bantuan dalam penyelesaian karya tulis
ini. Ungkapan terima kasih juga disampaikan kepada ayah, ibu, kakak dan adikku,
paman, tante serta seluruh keluarga dan Ricky, Ratu, mba Lia, Catur, Hasha, Rina,
Paul, dan Pingky atas segala doa dan kasih sayangnya.
Semoga karya ilmiah ini bermanfaat.

Bogor, 24 Februari 2011

Nur Iman Zebua

RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Tetesua tanggal 19 Januari 1987 dari ayah Mesachi
Zebua dan ibu Alira Daeli. Penulis merupakan putri keempat dari enam
bersaudara.
Tahun 2005 penulis lulus dari SMUN 1 Gunungsitoli Nias dan pada tahun
yang sama lulus seleksi masuk IPB melalui jalur Undangan Seleksi Masuk IPB
(USMI). Penulis memilih Program Diploma Analisis Kimia dan lulus tahun 2008.
Pada tahun yang sama, penulis lulus seleksi masuk IPB melalui jalur Ekstensi dan
memilih Program Studi Kimia, Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam.
Selama mengikuti perkuliahan penulis menjadi bagian dari Persekutuan
Mahasiswa Kristen IPB dan menjadi Tim Pemerhati Anak tahun ajaran
2005/20062007/2008. Tahun 2008, bulan Maret sampai Mei, penulis melakukan
praktik lapangan di PT Indofood Sukses Makmur Cibitung dan menjadi asisten
Kimia Bahan Alam dan Pengenalan Bahan Alat di Kampus Diploma IPB.

DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR TABEL ........................................................................................... ......vi
DAFTAR GAMBAR ...................................................................................... ......vi
DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................... ......vi
PENDAHULUAN .......................................................................................... .......1
TINJAUAN PUSTAKA
Kunyit . ................................................................................................ .......1
Temu Lawak ............................................................................................... .......2
Lempuyang ................................................................................................. .......3
Metabolit Sekunder ..................................................................................... .......3
Kromatografi Lapis Tipis ............................................................................ .......4
Uji Antikanker ............................................................................................ .......4
Uji Letalitas Larva Udang .......................................................................... .......4
BAHAN DAN METODE
Alat dan Bahan ............................................................................................ .......5
Lingkup Kerja.............................................................................................. .......5
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air dan Kadar Abu ........................................................................... .......7
Ekstraksi ...................................................................................................... .......7
Uji Fitokimia ............................................................................................... .......8
Uji Letalitas Larva Udang ........................................................................... .......8
Sitotoksisitas Ekstrak Etanol terhadap Sel Kanker Usus Besar HCT ......... .......9
Penentuan Awal Sidik Jari Formula Terbaik (F9).....10
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan ...................................................................................................... .....11
Saran ........................................................................................................... .....11
DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................... .....11
LAMPIRAN ..................................................................................................... .....14

DAFTAR TABEL
1
2
3
4

Halaman
Komponen rimpang temu lawak ................................................................ ......3
Hasil uji kadar air dan abu .......................................................................... ......7
Hasil uji fitokimia etanol 96% dan ekstrak metode Huda et al. (2003) ...... ......8
Fraksi-fraksi hasil pemisahan ekstrak F9 .................................................... ....11

DAFTAR GAMBAR
Halaman
1 Rimpang kunyit .......................................................................................... ......1
2 Rimpang temu lawak................................................................................... ......2
3 Rimpang lempuyang ................................................................................... ......3
4 Struktur kurkuminoid .................................................................................. ......3
5 Rendemen ekstraksi .................................................................................... ......8
6 Nilai LC50 berbagai ekstrak ........................................................................ ......9
7 Persen kematian A. salina ........................................................................... ......9
8 Penentuan LC50 berdasarkan persen kematian A. salina oleh ekstrak F8 ... ......9
9 Pengaruh konsentrasi ekstrak terhadap persen penghambatan proliferasi sel..10
10 Pola KLT ekstrak F9 ................................................................................... .....11

DAFTAR LAMPIRAN
1
2
3
4
5

Halaman
Bagan alir penentuan rimpang kunyit, temu lawak dan lempuyang ........... ....15
Rimpang yang telah dikeringkan pada suhu 60 oC ................ .........................16
Larva udang A. salina pada ekstrak etanol 96% dan metode ekstraksi Huda et
al. (2003) ..................................................................................................... .....16
Uji F dan uji t .............................................................................................. .....16
Foto pengujian sel kanker usus besar HCT ......................................................17

PENDAHULUAN
Kanker atau karsinoma merupakan
penyakit yang disebabkan oleh rusaknya
mekanisme pengaturan dasar perilaku sel,
khususnya mekanisme pertumbuhan dan
perubahan sel yang diatur oleh gen. Sel-sel
jaringan tubuh baru tumbuh abnormal akibat
mutasi genetis sel, menginvasi jaringan
sekitar, dan metastasis (menyebar) ke tapak
yang jauh (Winarto et al. 2007). Menurut
Pratiwi (2004), kanker merupakan penyebab
kematian terbesar kedua setelah gangguan
kardiovaskular.
Penyebab utama kanker tidak diketahui,
tetapi faktor genetik diduga kuat sebagai
pencetus utama. Bahan tertentu juga diyakini
dapat menyebabkan timbulnya kanker. Empat
puluh persen pria menderita kanker karena
tembakau. Para peneliti kanker menyimpulkan
7090% kanker pada manusia disebabkan
oleh faktor lingkungan, seperti makanan,
konsumsi alkohol, polusi udara, air, bahan
kimia di tempat kerja, radiasi dan sinar
ultraviolet (Djajanegara & Prio 2009).
Berbagai usaha telah dilakukan untuk
menanggulangi penyakit ini: pembedahan,
radioterapi, kemoterapi, dan sekarang
berkembang
imunoterapi.
Pembedahan
merupakan pengangkatan kanker melalui
operasi. Radioterapi menggunakan radiasi dari
mesin pemercepat linear yang akan mengalirkan energi radiasi tinggi ke area kanker, tetapi
berefek juga pada jaringan normal yang
dilewati. Metodenya mirip dengan pemberian
sinar-X, namun waktunya lebih lama (Waluyo
2008). Kemoterapi merupakan pengobatan
sistemik dengan obat sitostatik yang merusak
DNA/RNA dan pada akhirnya menimbulkan
apoptosis, sedangkan imunoterapi ditujukan
membunuh sel-sel kanker sehingga tidak
dapat berkembang dan membahayakan hidup
(Djajanegara & Prio 2009).
Pengobatan-pengobatan tersebut belum
dapat mengatasi penyakit kanker secara
memuaskan (Sukardiman et al. 2004). Salah
satu masalahnya adalah kondisi ekonomi
sebagian besar masyarakat belum memadai
(Djajanegara & Prio 2009). Menurut WHO,
hanya sepertiga penderita kanker dapat
disembuhkan, terutama yang memiliki
perkembangan kanker relatif dini. Karena
mahalnya biaya pengobatan, cara lain yang
dipilih sebagian penderita penyakit kanker
adalah kembali ke bahan alam dengan
memanfaatkan tanaman obat.
Bahan alam tumbuhan yang digunakan
sebagai obat maupun bahan obat dipercaya

aman bagi tubuh dan penggunaannya telah

didukung oleh data ilmiah penelitian
(Sulistyoningrum 2008). Tanaman obat yang
berpotensi sebagai antikanker antara lain
bloodroot (Sanguinaria canadensis) yang
mengandung alkaloid (Sukardiman et al.
2004), lumut hati dari spesies Marchantia
polymorpha L yang mengandung alkaloid dan
flavonoid (Nurhayati et al. 2006), sambiloto
yang mengandung lakton, kunyit (Curcuma
domestica Va) dan temu lawak (Curcuma
xanthorrhiza Roxb) yang mengandung
kurkuminoid, serta lempuyang (Zingiber
zerumbet) (Jasril 2006) yang mengandung
flavonoid. Pada penelitian ini, potensi
gabungan ekstrak rimpang kunyit, temu lawak
dan lempuyang diuji sebagai antikanker.
Ekstrak yang akan diuji potensi antikanker
diperoleh
dengan
metode
ekstraksi
menggunakan etanol 96% dan metode Huda et
al. (2003). Potensi antikanker diuji dengan
metode uji letalitas larva udang (BSLT)
menggunakan Artemia salina Leach dan
metode 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazolium bromida (MTT) menggunakan sel
kanker usus besar HCT (ATCC-CCL 116).

TINJAUAN PUSTAKA
Kunyit
Kunyit (Gambar 1) merupakan tanaman
rempah dan obat asli Asia, khususnya Asia
Tenggara. Saat ini kunyit sudah tersebar
hingga ke Australia dan Afrika. Kunyit
banyak digunakan untuk memberikan warna
kuning pada masakan, khususnya di daerah
Asia Selatan. Kunyit berdasarkan klasifikasi
botaninya termasuk ke dalam
Divisi
: Spermatophyta
Subdivisi
: Angiospermae
Kelas
: Monocotyledoneae
Ordo
: Zingiberales
Famili
: Zungiberaceae
Genus
: Curcuma
Spesies
: Curcuma domestica Va

Gambar 1 Rimpang kunyit.

Tumbuhan kunyit mengandung banyak

bahan kimia yang bermanfaat sebagai obat,
yaitu minyak atsiri, pati, zat pahit, resin,
selulosa, dan beberapa mineral. Kandungan
minyak atsiri kunyit sekitar 35%. Komponen
zat warna atau pigmen kunyit terutama adalah
kurkumin (2.56%). Di samping itu, kunyit
juga mengandung zat warna mono dan
bisdemetoksikurkumin (Sidik et al. 1995)
Tanaman ini berasa pahit, antidiare,
antipiretik, dapat merangsang kelenjar, dan
antidiabetes. Kunyit berkhasiat mencegah
beberapa penyakit antara lain mencegah
pembekuan darah dan amandel. Aktivitas
antioksidan dan penangkap-radikal kurkumin
terdokumentasi baik dan mengindikasikan
hubungan dengan penghambatan proses
karsinogenesis kanker. Aktivitas antiradang,
yaitu sebagai inhibitor asam sikloksigenase,
juga memiliki kaitan dengan aktivitasnya
sebagai antikanker, terutama kanker usus
besar.
Kurkumin
juga
aktif
dalam
menghambat proses karsinogenesis pada tahap
inisiasi dan promosi atau progresi. Kurkumin
juga memacu proses apotosis, yaitu suatu
proses alami kematian sel dalam rangka
mempertahankan integritas
sel
secara
keseluruhan (Meiyanto 1999).
Penelitian lain menunjukkan kemampuan
kurkumin menghambat proliferasi sel dan
menginduksi perubahan siklus sel pada calon
lini sel adenokarsinoma tanpa bergantung
pada jalur prostaglandin. Kurkumin juga
mampu menghambat pertumbuhan sel kanker
payudara manusia tanpa bergantung pada
ekspresi reseptor estrogen (Sidik et al. 1995).
Semua kemampuan kurkumin ini membuat
kunyit berpotensi tinggi sebagai obat herbal
antikanker. Karena itu, perlu pemahaman
bagaimana mendapatkan kandungan kurkumin
yang maksimal pada setiap pengolahan kunyit
agar efek antikanker yang dirasakan pasien
kanker semakin efektif.
Temu Lawak
Temu lawak (C. xanthorrhiza Roxb)
merupakan salah satu jenis tanaman obat dari
famili Zingiberaceae yang potensial untuk
dikembangkan, dan merupakan salah satu dari
9 jenis tanaman unggulan Ditjen POM. Temu
lawak merupakan tanaman khas Indonesia
(Niumsakel et al. 2007) yang sudah tersebar
di
beberapa
daerah
Indo-Malaysia.
Kandungan kurkumin di dalam temu lawak
berkisar 1.62.2% (Rukmana 1995). Tanaman
ini antara lain dipergunakan oleh masyarakat
maupun produsen obat tradisional dan

kosmetika dalam menjaga dan meningkatkan

kesehatan atau mengobati penyakit. Rimpang
temu lawak banyak digunakan sebagai bahan
baku hepatoprotektor untuk memperbaiki
fungsi hati dan menurunkan kadar SGPT dan
SGOT (Hadipoentyanti & Syahid 2007).
Selain sebagai bahan baku industri seperti
minuman dan pewarna alami, manfaat lain
temu lawak adalah dapat meningkatkan sistem
imunitas tubuh, antibakteri, antidiabetes,
antihepatotoksik, antiradang, antioksidan,
antitumor,
diuretika,
depresan,
dan
hipolipodemik (Purnomowati & Yoganingrum
1997; Raharjo & Rostiana 2003).
Temu lawak (Gambar 2) berdasarkan
klasifikasi botaninya termasuk ke dalam
Divisi
: Spermatophyta
Subdivisi : Angiospermae
Kelas
: Monocotyledone
Bangsa
: Zingiberales
Suku
: Zingiberceae
Genus
: Curcuma
Spesies
: Curcuma xanthoriza Roxb

Gambar 2 Rimpang temu lawak.

Komponen yang terkandung dalam temu
lawak dapat digolongkan menjadi 2
kelompok, yaitu minyak atsiri dan golongan
kurkuminoid. Sidik et al. (1995) menunjukkan
bahwa kurkuminoid rimpang temu lawak
berkhasiat menetralkan racun, menghilangkan
rasa nyeri sendi, menurunkan kadar kolesterol
darah, mencegah pembentukan lemak dalam
sel hati, dan antioksidan. Secara kimia,
kurkuminoid temu lawak merupakan turunan
diferuloilmetana, yakni senyawa dimetoksi
diferuloilmetana (kurkumin) dan monodesmetoksidiferuloilmetana
(desmetoksikurkumin). Kandungan kurkuminoid dalam
rimpang temu lawak kering berkisar 3.16%,
dengan kadar kurkumin sekitar 5871% dan
desmetoksikurkumin 2942% (Sidik et al.
1995)
Produk temu lawak pada umumnya
disimpan dalam bentuk simplisia agar dapat
bertahan lebih lama. Temu lawak segar
memiliki kadar air sekitar 8085%. Proses
pengeringan akan membantu mengurangi
kadar air yang dapat menurunkan mutu
temulawak. Akan tetapi, kondisi pengeringan

juga dapat memengaruhi komponen lain

dalam rimpang (Zahro et al. 2009).
Bagian yang berkhasiat dari temu lawak
adalah rimpangnya yang mengandung
berbagai komponen kimia, di antaranya zat
kuning kurkumin, protein, pati, dan minyak
atsiri (Tabel 1). Pati merupakan salah satu
komponen terbesar temu lawak. Minyak
atsirinya mengandung senyawa felandren,
kamfer, borneol, sineal, dan xantorizol.
Kandungan
xantorizol
dan
kurkumin
menyebabkan temu lawak sangat berkhasiat
(Taryono & Sardina 1987). Xantorizol
merupakan komponen khas minyak atsiri yang
diisolasi dari famili Zingiberaceae dan
Astericeae seperti rimpang temu lawak, dan
termasuk kelompok seskuiterpena tipe
bisabolena (Aguilar et al. 2001).
Tabel 1 Komponen rimpang temu lawak
Komponen Senyawa
Pati
Lemak
Minyak Atsiri
Kurkumin
Protein
Serat Kasar

Kadar (%)
27.62
5.38
10.96
1.93
6.44
6.89

Sumber: Suwiah (1991)

Lempuyang
Lempuyang gajah (Gambar 3) sejak lama
digunakan sebagai obat tradisional, terutama
akar atau rizomanya, untuk mengobati sakit
perut, sakit kepala, dan mengurangi rasa
pegal. Rimpang ini diketahui mengandung
alkaloid, saponin, flavonoid, dan polifenol, di
samping
minyak
atsiri,
dan
telah
dimanfaatkan sebagai antiradang, antitukak,
antioksidan, dan antimikrob (Somchit &
Syukriyah 2003).

Lempuyang
berdasarkan
klasifikasi
botaninya termasuk ke dalam
Divisi
: Spermatophyta
Subdivisi
: Angiospermae
Kelas
: Monocotyledonae
Bangsa
: Zingiberales
Suku
: Zingiberceae
Genus
: Zingiber
Spesies
: Zingiber zerumbet
Rizoma lempuyang gajah memiliki
kandungan metabolit sekunder seperti
alkaloid, saponin, flavonoid, polifenol, dan
terpenoid yang kaya dalam kandungan minyak
atsiri. Minyak atsiri adalah komponen minyak
yang mudah menguap dan diperoleh dari
tanaman dengan cara penyulingan uap
(Kikuzaki & Nakatani 1993). Minyak atsiri
dapat dihasilkan dari setiap bagian tanaman
seperti daun, bunga, buah, biji, batang, kulit,
dan akar.
Metabolit Sekunder
Kurkuminoid
Kurkuminoid (Gambar 4) adalah salah
satu golongan senyawa fenolik, gabungan dari
desmetoksikurkumin
dan
kurkumin.
Kurkuminoid secara luas digunakan sebagai
zat pewarna makanan, antioksidan alami,
bumbu, rempah-rempah, dan berguna dalam
bidang pengobatan (Zahro et al. 2009).

9'

9
HO

3
R1

3'

1
2

7'

2'
5'

4'
O

6'

R2

O
H

Komponen
R1
Kurkumin
OMe
Demetoksikurkumin
H
Bisdemetoksikurkumin H
Gambar 3 Rimpang lempuyang.

OH

8'

10

R2
OMe
OMe
H

Gambar 4 Struktur kurkuminoid (Cikrici et

al. (2003).
Kurkumin (diferuloilmetana) mempunyai
rumus molekul C21H20O6 dengan bobot
molekul 368.37. Bentuk fisik kurkumin adalah
bubuk kuning jingga dengan titik leleh 138 C,
tidak larut di dalam air dan eter, tetapi larut di
dalam alkohol dan asam asetat glasial. Di
dalam basa akan berwarna merah kecokelatan

dan di dalam asam berwarna kuning cerah.

Perubahan warna akibat perubahan pH
lingkungan ini, dapat terjadi karena
tautomerisasi molekul. Sifat kurkuminoid lain
yang penting adalah sensitivitas terhadap
cahaya. Bila kurkumin terkena cahaya, akan
terjadi dekomposisi struktur berupa siklisasi
kurkumin atau terjadi degradasi (Sidik et al.
1995). Kurkuminoid beraroma khas, tidak
toksik. Kurkumin tidak larut dalam air, tetapi
larut dalam etanol atau dimetil sulfoksida
(DMSO) (Huda et al. 2003).
Pertengahan tahun 2009, tim riset hasil
kolaborasi beberapa universitas dan badan
riset di Korea Selatan membuktikan secara in
vitro dengan analisis surface plasmon
resonance (SPR) maupun in vivo dengan
analisis APN-spesific antibody competition
bahwa salah satu senyawa aktif dalam kunyit
mampu menahan laju pertumbuhan kanker.
Kurkumin memiliki potensi dalam pengobatan
kanker. Kurkumin mampu menghambat
perkembangan payudara dengan menghambat
aktivasi reseptor estrogen (ER) oleh estrogen
dan juga mampu menghambat perkembangan
sel kanker usus besar (Meiyanto 1999).
Flavonoid
Flavonoid adalah senyawa polifenol yang
banyak terdapat pada sayuran dan buahbuahan. Flavonoid telah menunjukkan
perannya sebagai antioksidan, antimutagenik,
antineoplastik, dan vasodilatator. Flavonoid
juga memengaruhi tahapan metabolisme sel
kanker, misalnya dengan menghambat
penggabungan timidin, uridin, dan leusin ke
sel kanker sehingga menghambat sintesis
DNA sel kanker (Manggau et al. 2007).
Peranan flavonoid sebagai antikanker
diperkuat oleh eksperimen lain yang
menggunakan hidrokarbon aromatik polisiklik
(PAH)
sebagai
penginduksi
kanker.
Mekanisme penghambatan didapati berkaitan
dengan penghambatan stimulasi metabolik
yang diinduksi oleh PAH dan memengaruhi
aktivitas beberapa sel promotor (Lamb 2005).
Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Kromatografi lapis tipis merupakan salah
satu jenis kromatografi adsorpsi. Metode ini
sederhana, cepat dalam pemisahan, dan
sensitif. Kecepatan pemisahannya tinggi dan
mudah untuk memperoleh kembali senyawasenyawa yang terpisahkan (Khopkar 1990).
Adsorben dilapiskan pada lempeng kaca
yang bertindak sebagai penyangga fase diam.
Fase gerak akan merayap sepanjang fase diam

dan terbentuk kromatogram. Sifat adsorben

yang kompak menyebabkan kecepatan
pemisahan lebih besar. Kromatografi lapis
tipis dapat mencapai kepekaan pada skala
mikrogram (Suradikusumah 1989). Uji KLT
sering digunakan dalam pengujian sel kanker,
untuk pencirian senyawa yang mempunyai
aktivitas penghambatan tertinggi (Sajuthi
2001).
Uji Antikanker
Antikanker adalah bahan yang memiliki
sifat
sitotoksik
(dapat
menghambat
pertumbuhan sel kanker) dan sitosidal (dapat
mematikan sel kanker) (Setiani 2009).
Beberapa metabolit sekunder memiliki
aktivitas antikanker. Oleh karena itu, akhirakhir ini banyak dikembangkan penelitian
untuk mencari senyawa metabolit sekunder
yang memiliki bioaktivitas antikanker untuk
dikembangkan dalam kemoterapi untuk
pengobatan kanker.
National Cancer Institute (NCI) Amerika
Serikat menentukan prosedur untuk menapis
potensi antikanker suatu senyawa: preparasi,
pra-penapisan, penapisan, pemantauan, uji
sekunder, dan uji klinis. Tahap preparasi
berupa pengumpulan tanaman dan ekstraksi.
Pra-penapisan dilakukan dengan uji in vitro
atau in vivo sederhana untuk mengidentifikasi
ekstrak
yang
berpotensi
antikanker.
Metodenya antara lain uji kematian A. salina,
uji hambatan tumor pada lempeng kentang
dan, uji hambatan pada pertumbuhan kuncup
Lemna Minor Assay. Ekstrak yang aktif
kemudian ditapis melawan sel yang lebih
banyak secara in vivo. Terhadap ekstrak yang
berhasil di tapis akan dilakukan tahap
pemantauan, yaitu difraksionasi untuk
memperoleh senyawa aktif yang murni.
Uji Letalitas Larva Udang (BSLT)
Uji toksisitas merupakan uji pendahuluan
untuk mengamati aktivitas farmakologi suatu
senyawa. Prinsip uji toksisitas adalah bahwa
komponen bioaktif selalu bersifat toksik jika
diberikan dengan dosis tinggi dan menjadi
obat pada dosis rendah. Larva udang memiliki
kulit yang tipis dan peka terhadap
lingkungannya sehingga banyak digunakan
dalam uji toksisitas. Zat atau senyawa asing
yang ada di lingkungan akan terserap ke
dalam tubuh secara difusi dan langsung
memengaruhi kehidupannya. Larva udang
yang sensitif ini akan mati apabila zat atau

senyawa asing tersebut bersifat toksik

(Hamburger & Hostettmann 1991).
Hasil uji toksisitas ini dapat diketahui dari
jumlah kematian larva udang karena pengaruh
ekstrak atau senyawa bahan alam tumbuhan
tertentu dengan dosis yang telah ditentukan,
selama 24 jam. Data dianalisis dengan
komputer, menggunakan analisis probit untuk
menentukan nilai konsentrasi mematikan 50%
(LC50). Bila konsentrasi ekstrak yang diuji
kurang dari 1000 g/ml, maka dianggap
menunjukkan aktivitas hayati (Sukardiman et
al. 2004).
Salah satu metode uji bahan sitotoksik
adalah uji toksisitas terhadap larva udang A.
salina Leach (brine shrimp lethality test).
Metode BSLT sering digunakan untuk prapenapisan senyawa aktif antikanker di dalam
ekstrak tanaman karena murah, cepat, mudah
(tidak perlu kondisi aseptik), dan dapat
dipercaya (Meyer 1982). Hasil uji ini juga
berkorelasi positif dengan potensi sebagai
antikanker (Anderson 1991).

BAHAN DAN METODE

Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan adalah oven,
eksikator, neraca analitik, peralatan kaca,
lampu UV, pelat KLT, penguap putar, dan
pengering beku. Bahan-bahan yang digunakan
adalah sampel kunyit, temu lawak, dan
lempuyang segar dari kebun Biofarmaka
Bogor, etanol, Tween-80, MTT, larva udang
A. salina, sel kanker usus besar HCT (ATCCCCL 116), serum janin sapi (FBS) 10%,
penisilin, streptomisin, dan medium Eagle
termodifikasi Dulbecco (D-MEM).
Lingkup Kerja
Rimpang kunyit, temu lawak, dan
lempuyang dicuci bersih dan dirajang kecilkecil. Kemudian dikeringkan dengan oven dan
ditentukan kadar airnya. Rimpang kering lalu
dimaserasi, ekstrak yang diperoleh dibuat
dalam beberapa konsentrasi dan diuji dengan
metode BSLT. Konsentrasi ekstrak masingmasing rimpang dengan aktivitas terbaik
dikombinasikan dengan nisbah tertentu dan
diuji kembali dengan metode BSLT.
Kombinasi terbaik difraksionasi dengan KLT
dan diujikan pada sel kanker (Lampiran 1).

Preparasi Rimpang
Rimpang segar dicuci dengan air bersih,
ditiriskan, dan dirajang kecil-kecil. Sampel
yang telah dirajang ditimbang seberat 7 kg,
lalu dikeringkan dengan oven pada suhu 60 C
selama 5 hari (Huda et al. 2003).
Penetapan Kadar Air
Cawan porselen dikeringkan pada suhu
105 C. Setelah didinginkan dalam eksikator,
cawan ditimbang. Sebanyak 3 g sampel
rimpang (dicatat sampai 4 desimal),
dimasukkan dalam cawan dan dikeringkan
pada suhu 105 C hingga bobotnya konstan
(Depkes RI 1979). Penetapan kadar air
dilakukan sebanyak 3 kali ulangan.
Penetapan Kadar Abu
Cawan porselen dikeringkan selama 30
menit, didinginkan dalam eksikator, kemudian
ditimbang. Kira-kira 2 g sampel rimpang
dimasukkan ke dalam cawan, lalu cawan dan
isinya dipanaskan dengan nyala Bunsen/hot
plate sampai tidak berasap lagi. Cawan
dimasukkan ke dalam tanur listrik dengan
suhu 600 C sampai sampel rimpang menjadi
abu. Setelah didinginkan dalam eksikator,
ditimbang. Pekerjaan dilakukan triplo (Depkes
RI 1979).
Ekstraksi Rimpang dengan Etanol 96%
Sebanyak 60 g serbuk kering rimpang
dimasukkan ke dalam maserator, lalu
ditambahkan 300 mL etanol 96%, dan
direndam selama 24 jam sambil sesekali
diaduk.
Maserat
dipisahkan
dengan
penyaringan dan proses ini diulangi 2 kali
dengan jenis dan jumlah pelarut yang sama.
Semua maserat dikumpulkan dan dipekatkan
dengan penguap putar (Supriadi 2008).
Ekstraksi Rimpang Mengacu pada Metode
Huda et al. 2003
Sampel rimpang kering diekstraksi dengan
etanol 95%. Sebanyak 60 g serbuk di dalam
maserator ditambahkan 300 mL etanol selama
45 menit dengan 3 kali ekstraksi sampai
larutan tidak berwarna. Ekstrak kemudian
dipekatkan dengan penguap putar pada suhu
50 C hingga kering. Setelah itu, dihilangkan
kandungan lemaknya dengan petroleum eter.
Ekstrak yang tidak larut dalam petroleum eter
dilarutkan kembali dalam etanol 95% dan
dikeringkan.

Uji Fitokimia (Harborne 1987)

Uji Flavonoid. Sebanyak 0.1 g sampel
ditambah 10 mL air panas lalu dipanaskan
selama 5 menit dan disaring. Sebanyak 5 mL
filtrat ditambahkan sedikit serbuk Mg, 1 mL
HCl pekat, dan 1 mL amil alkohol kemudian
dikocok. Adanya flavonoid ditunjukkan
dengan terbentuknya warna merah/jingga/
kuning pada lapisan amil alkohol.
Uji Alkaloid. Sebanyak 0.1 g sampel
diekstraksi dengan 5 mL CHCl3 dan 4 tetes
NH4OH pekat lalu dikocok. Setelah itu,
ditambahkan 5 mL H2SO4 4N dan dikocok
hingga terbentuk 2 lapisan. Lapisan asam
(tidak berwarna) dipipet ke dalam lempeng
tetes lalu ditambahkan reagen Mayer, Wagner,
dan Dragendorf pada masing-masing lubang.
Kandungan alkaloid ditunjukkan dengan
endapan putih pada reagen Mayer, cokelat
pada reagen Wagner, dan jingga pada reagen
Dragendorf.
Uji Saponin. Sebanyak 0.1 g sampel
diekstraksi dengan metanol. Pelarut diuapkan
sampai kering, lalu residu diekstraksi dengan
dietil eter 3 kali, fraksi yang larut dalam dietil
eter dipisahkan. Sebanyak 5 mL akuades
ditambahkan ke dalam residu yang tidak larut
dalam dietil eter dan dikocok. Adanya saponin
ditunjukkan dengan terbentuknya busa dengan
tinggi 23 cm.
Uji
Triterpenoid
dan
Steroid
(Lieberman-Buchard). Fraksi larut-eter
dalam uji saponin ditambahkan anhidrida
asetat dan H2SO4 pekat (reagen Lieberman
Buchard) kemudian dikocok. Warna hijau
kebiruan menunjukkan adanya kandungan
steroid/triterpenoid.
Uji Tanin. Sebanyak 0.1 g sampel
dimasukkan ke dalam tabung reaksi,
ditambahkan 10 mL air panas, dan dikocok
sampai dingin. Sebanyak 6 tetes filtrat dipipet
ke dalam lempeng tetes lalu ditambahkan
beberapa tetes FeCl3 1%. Warna kuning
kehijauan menunjukkan kandungan tanin.

untuk uji BSLT setelah berumur 48 jam

(Nurhayati et al. 2006).
Uji Toksisitas Ekstrak dengan Metode
BSLT. Ekstrak rimpang diambil 1 g, masingmasing dilarutkan dengan pelarut di dalam
labu takar 5 mL. Dibuat pengenceran pada
konsentrasi tertentu dan untuk kontrol
dilakukan tanpa penambahan
sampel.
Pengujian dilakukan dengan memasukkan 10
ekor larva A. salina berumur 48 jam ke dalam
sumur (multiwell) yang telah berisi air laut
kemudian ditambahkan larutan ekstrak dengan
total volume sumur 2 mL. Setelah 24 jam,
jumlah larva yang mati dihitung dengan
bantuan kaca pembesar (Khurniasari 2004).
Parameter yang digunakan adalah jumlah
larva yang mati 50% dari total larva uji.
Kemudian dihitung nilai LC50 dengan
memasukkan angka probit (50% kematian
larva uji). Efek toksisitas dianalisis dari
pengamatan dengan persen kematian:

Dengan mengetahui kematian larva A.

salina, kemudian dicari angka probit melalui
tabel dan dibuat persamaan garis
y = a+bx
dengan y = log konsentrasi dan
x = angka probit
Dari persamaan tersebut, selanjutnya LC50
dihitung dengan memasukan nilai probit (50%
kematian). Apabila pada kontrol ada larva
yang mati, maka persen kematian ditentukan
dengan rumus Abbot:

Keterangan:
T
= jumlah larva uji yang mati
K
= jumlah larva kontrol yang mati
10 = jumlah larva uji.
Konsentrasi
ekstrak
masing-masing
rimpang
dengan
aktivitas
terbaik
dikombinasikan dengan nisbah tertentu.
Gabungan ekstrak ini diuji kembali dengan
metode BSLT.

Uji Toksisitas dengan Metode BSLT

Penetasan Telur Artemia salina. Telur A.
salina direndam di dalam air tawar selama
1530 menit, kemudian direndam dalam 30
mL air laut. Suhu penetasan adalah 2530

C. Telur akan menetas setelah 24 jam dan

larvanya disebut nauplius. Larva ini siap

Analisis dengan KLT

Pelat KLT ditandai dengan pensil, batas
bawahnya kira-kira 1cm dari ujung bawah
sebagai tempat penotolan sampel dan batas
atas kira-kira 1cm dari ujung atas untuk
menandai pelarut. Sementara itu, disiapkan
bejana pengembang berisi campuran pelarut

optimum. Seluruh sampel kemudian ditotolkan dalam satu pelat KLT dan dielusi dalam
bejana pengembang hingga pelarut merambat
sampai batas atas yang telah ditandai. Pelat
lalu diangkat, dikeringkan, dan noda diamati
di bawah lampu UV pada panjang gelombang
254 nm (Huda et al. 2003).

Tabel 2 Hasil uji kadar air dan abu

Sampel
Kunyit
Temu lawak
Lempuyang

Kadar air
(%)
5.57
6.63
9.64

Kadar abu
(%)
8.05
5.09
4.53

Uji Bioaktivitas Antikanker terhadap Sel

Kanker Usus Besar HCT (ATCC-CCL 116)
Sel ditumbuhkan dengan konsentrasi 2 000
sel dalam 100 L media. Media yang
digunakan DMEM, FBS, penisilin, dan
streptomisin. Ekstrak dilarutkan terlebih
dahulu dengan etanol 96%. Stok dengan
konsentrasi ekstrak 10 000 ppm (nisbah etanol
dan media pertumbuhan 1:10) selanjutnya
diencerkan bertingkat dengan konsentrasi
1000, 750, 500, 250, 100, dan 50 ppm.
Ekstrak ditambahkan setelah sel mencapai
konfluen 50% (24 jam). Uji MTT dilakukan
pada hari ke-3, dengan menambahkan MTT (5
mg/mL) sebanyak 10 L per sumur, lalu
diinkubasi 4 jam pada suhu 37 C. Sel hidup
akan bereaksi dengan MTT membentuk kristal
formazan yang dilarutkan dalam HCl 0.1 N
dalam isopropanol yang berwarna biru.
Pembacaan nilai absorbans dilakukan pada
panjang gelombang 595 nm.

Analisis kadar air dapat dilakukan dengan

berbagai metode sesuai jenis bahannya. Pada
umumnya, digunakan cara gravimetri dengan
mengeringkan bahan dalam oven 105110 C.
Hasil uji kadar abu yang dilakukan pada
suhu 600 C juga ditunjukkan pada Tabel 2.
Kadar abu ketiga rimpang tersebut masih
memenuhi standar MMI (Sirait et al. 1979),
yaitu tidak lebih dari 9%. Demikian pula
kadar abu temu lawak dan lempuyang
menurut standar MMI, yaitu berturut-turut 3
7% dan di bawah 4.9% (Prawirosujanto et al.
1979) masih terpenuhi.
Analisis kadar abu dilakukan untuk
mengetahui kandungan mineral yang terdapat
di dalam rimpang. Penentuan kandungan
mineral pada tumbuhan dapat dilakukan
dengan 2 cara, yaitu pengabuan kering dan
pengabuan basah. Pemilihan cara tersebut
bergantung pada sifat zat organik, mineral
yang akan dianalisis, serta sensitivitas cara
yang digunakan (Apriyantono et al. 1989).

HASIL DAN PEMBAHASAN

Ekstraksi

Kadar Air dan Kadar Abu

Proses ekstraksi dilakukan dengan metode

maserasi menggunakan etanol 96% dan
metode ekstraksi Huda et al. (2003) dengan
etanol 95%. Metode maserasi digunakan
karena relatif tidak berpengaruh terhadap
kestabilan zat-zat yang tidak tahan panas.
Namun, waktu ekstraksinya relatif lama.
Metode ekstraksi etanol 96% dilakukan
selama 324 jam, sedangkan metode ekstraksi
Huda et al. (2003) hanya 345 menit. Ekstrak
yang diperoleh kemudian diekstraksi dengan
petroleum
eter
untuk
menghilangkan
kandungan lemaknya. Rendemen hasil
ekstraksi untuk ketiga rimpang yang diujikan
disajikan pada Gambar 5.

Pengeringan rimpang pada suhu 60 C

selama 5 hari memperlihatkan perubahan
rimpang menjadi berwarna kuning jingga dan
mudah rapuh (Lampiran 2). Hal ini
menandakan berkurangnya kadar air rimpang.
Pengeringan rimpang merupakan salah
satu faktor yang berpengaruh terhadap
senyawa aktif yang terdapat dalam rimpang.
Berdasarkan penelitian sebelumnya tentang
pengaruh suhu dan lama pengeringan rimpang
selama 1, 3, dan 5 hari, diketahui bahwa pada
hari ke-5 kondisi rimpang lebih baik karena
kadar airnya lebih kecil (Huda et al. 2003).
Setelah pengeringan, diperoleh kadar air
rata-rata rimpang kunyit, temu lawak, dan
lempuyang kurang dari 10% (Tabel 2),
memenuhi standar yang diberikan dalam
Materia
Medika
Indonesia
(1995).
Mikroorganisme dapat tumbuh pada rimpang
dengan kadar air yang tinggi, dan
dipersyaratkan kadar air bahan baku obat alam
menurut MMI (1995) maksimum 10%.

uji flavonoid dengan terbentuknya warna

kuning pada lapisan amil alkohol. Sementara
uji saponin, tanin, dan steroid negatif.
Metabolit sekunder merupakan golongan
senyawa yang lazim diujikan secara fitokimia
(Harborne 1987; Suradikusumah 1989).
Alkaloid dan flavonoid merupakan senyawa
metabolit sekunder yang bersifat polar.
Gambar 5 Rendemen ekstraksi.
Huda et al. (2003)
dengan etanol 96%.

Metode
Maserasi

Rendemen lebih tinggi diperoleh pada

ekstraksi dengan pelarut etanol 96%. Jadi,
waktu ekstraksi selama 24 jam menghasilkan
rendemen ekstrak yang lebih besar ketimbang
metode Huda et al. (2003). Semakin lama
waktu ekstraksi, waktu kontak antara sampel
dan pelarut semakin lama sehingga jumlah
senyawa yang terekstraksi semakin banyak
(Srijanto et al. 2004). Penghilangan lemak
dalam ekstrak dengan petroleum eter pada
metode Huda et al. (2003) juga menyebabkan
kandungan senyawa semipolar dan nonpolar
dalam ekstrak terlarut dalam petroleum eter
sehingga menurunkan rendemen ekstrak.
Uji Fitokimia
Penapisan fitokimia pada ekstrak etanol
96% dan ekstrak metode Huda et al.
(2003) dilakukan untuk mengetahui golongan
metabolit sekunder yang terkandung. Uji
fitokimia meliputi uji kualitatif alkaloid,
flavonoid, tanin, steroid, dan saponin. Hasil
pengujian fitokimia pada kunyit, temu lawak
dan lempuyang disajikan pada Tabel 3.
Tabel 3

Uji
Fitokimia
Saponin
Steroid
Alkaloid
Tanin
Flavonoid

Hasil uji fitokimia ekstrak etanol

96% dan ekstrak metode Huda et
al. (2003)
Metode
Huda et al. (2003)
K
T
L
+
+
+
+
+
+

Uji Letalitas Larva Udang

Uji BSLT dilakukan dengan menggunakan
larva udang A. salina. Uji ini digunakan untuk
menentukan potensi bioaktif senyawa bahan
alam dan untuk menentukan tingkat letalitas
senyawa kimia yang terkandung dalam
tumbuhan obat (Sukardiman et al. 2004).
Larva udang yang digunakan adalah yang
berumur 48 jam, karena mempunyai daya
resistensi paling rendah terhadap kondisi
lingkungannya. Senyawa metabolit sekunder
toksik akan menyebabkan kematian larva
udang melalui 2 proses, inhalasi (pernafasan)
dan difusi. Pada proses inhalasi, toksikan
masuk ke tubuh melalui saluran pernafasan:
nasofaring, trakea, bronkus, serta lasinia paruparu yang terdiri dari bronkiol pernafasan,
saluran alveolar, dan alveoli. Proses difusi
adalah penyerapan toksikan dalam jumlah
banyak melalui kulit A. salina yang tipis.
Lewat kedua proses tersebut, toksikan secara
sistemik menyebar ke jaringan lain dan
memberikan efek letal (Lu 1995; Sukardiman
et al. 2004). Pengujian didahului penetasan
telur larva selama 48 jam, lalu ekstrak
diberikan secara tunggal dalam air laut yang
berisi larva udang. Kematian larva diamati
setelah 24 jam pada setiap ekstrak. Hasil uji
(Lampiran 3) menunjukkan bahwa ekstrak
etanol 96% mempunyai LC50 lebih baik (lebih
kecil) jika dibandingkan dengan ekstrak hasil
metode Huda et al. (2003), (Gambar 6).

Ekstrak
Etanol 96%
K
T
L
+
+
+
+
+
+

K = kunyit; T = temu lawak; L = lempuyang

Seluruh ekstrak menunjukkan hasil positif

pada uji alkaloid, yaitu terbentuk endapan
putih dengan reagen Mayer, cokelat dengan
reagen Wagner, dan jingga dengan reagen
Dragendorf. Hasil positif juga diperoleh pada

Gambar 6

Nilai LC50 berbagai ekstrak.

metode Huda et al. (2003),
maserasi dengan etanol
96%.

Pengujian ekstrak tunggal bertujuan

mengetahui toksisitas senyawa aktif dalam
masing-masing rimpang terhadap hewan uji A.
salina. Selanjutnya berdasarkan nilai LC50
yang didapat, masing-masing ekstrak etanol
96% sampel rimpang digabung dengan nisbah
tertentu dan diujikan kembali terhadap A.
salina. Gabungan ekstrak etanol 96% membentuk F7, F8, dan F9 ditunjukkan lebih aktif,
sebagaimana terlihat dari persen kematiannya
(Gambar 7). Nilai persen kematian larva
udang yang diakibatkan oleh F7, F8 dan F9
selanjutnya diuji t dan uji F. Hasilnya tidak
berbeda nyata pada selang kepercayaan 95%,
maka ketiga ekstrak ini diuji kemampuan
hambatnya terhadap proliferasi sel kanker
usus besar HCT (Lampiran 4).
Ketiga gabungan ekstrak etanol yang
memberikan persen kematian tertinggi diuji
kembali
untuk
menentukan
LC50nya.
Diperoleh LC50 ekstrak F8 lebih rendah
(Gambar 8), yaitu 92.47 ppm. Hal ini berarti
mortalitas hewan uji mencapai 50% saat
konsentrasi ekstrak senyawa mencapai 92.47
ppm. Sementara nilai LC50 F1 dan F9 berturutturut ialah 106.64 dan 107.87 ppm.

Gambar 7 Persen kematian A. salina. F1 (L

21 ppm); F2 (T 10 ppm); F3 (K
100 ppm); F4 (L 21 ppm:T 10
ppm); F5 (L 21 ppm:K 100 ppm);
F6 (T 10 ppm:K 100 ppm); F7 (L
42 ppm:T 10 ppm:K 100 ppm);
F8 (L 21 ppm:T 20 ppm:K 100
ppm); F9 (L 21 ppm:T 10 ppm:K
200 ppm) dan F10 (L 21 ppm:T
10 ppm:K 100 ppm).
L: lempuyang; T: temu lawak; K:
kunyit.
Menurut Meyer (1982) dan Anderson
(1991) suatu ekstrak dikatakan toksik dalam
BSLT jika dapat menyebabkan kematian 50%
hewan uji pada konsentrasi kurang dari 1000
ppm. Berdasarkan pernyataan di atas, ekstrak
F7, F8, dan F9 ketiganya toksik.

Gambar 8

Penentuan LC50 berdasarkan

persen kematian A. salina oleh
ekstrak F8.

Sitotoksisitas Ekstrak Etanol terhadap Sel

Kanker Usus Besar HCT
Sel HCT (ATCC-CCL 116) merupakan
kanker yang tumbuh pada usus besar atau
rektum. Sel ini ditumbuhkan pada konsentrasi
2000 sel dalam 100 L media. Media sel yang
digunakan ialah D-MEM yang mengandung
FBS 10% sebagai faktor pertumbuhan sel dan
penisilin 100 U/mL-streptomisin 100 g/mL
sebagai antibakteri Gram positif dan negatif.
Sifat toksik ekstrak F7, F8, dan F9 dapat
ditentukan dari kemampuan ekstrak menghambat dan membunuh sel kanker usus besar
HCT yang dikenal dengan persentase inhibisi.
Jumlah sel yang masih hidup dapat ditentukan
dengan menggunakan reagen MTT.
Sel hidup memiliki enzim suksinat
dehidrogenase yang diproduksi dalam
mitokondria. Enzim ini akan mereduksi MTT
yang merupakan garam tetrazolium berwarna
kuning membentuk kristal formazan yang
berwarna biru. Warna biru formazan akan
diserap oleh sel mati dan dapat diamati
dengan spektrofotometer pada panjang
gelombang 595 nm. Dengan cara ini, jumlah
sel hidup dapat dihitung. Absorbans formazan
sebanding dengan tingkat kehidupan sel dalam
media kultur (Setiani 2009).
Konsentrasi yang digunakan pada
pengujian ini ialah 50, 100, 250, 500, 750, dan
1000 ppm (Gambar 9). Hasil pengujian
menunjukkan bahwa ekstrak berpotensi
menghambat pertumbuhan dan mengakibatkan kematian sel kanker pada konsentrasi 50
ppm. Ekstrak F7 hambatannya 54.39% dan F9
77.32%, sementara ekstrak F8 hambatannya
masih di bawah 50%, namun telah
mengakibatkan morfologi sel abnormal
(Lampiran 5).

(9.8:0.2) dan kloroform:metanol:asam format,

(9.6:0.4:0.07)
menghasilkan
pemisahan
terbaik dengan jumlah noda yang banyak.
Lempeng KLT yang digunakan dilapisi fase
diam silika gel, dan fase gerak yang
digunakan terdiri dari campuran 2 pelarut,
yaitu CHCl3:EtOH (9.8:0.2). Gambar 10
menunjukkan pola kromatogram hasil KLT
pada ekstrak F9.
Gambar 9

Bisdemetoksikurkumin

Pengaruh konsentrasi ekstrak

terhadap persen penghambatan
proliferasi sel.

Kemampuan sampel ekstrak menghambat

pertumbuhan sel kanker diduga akibat adanya
senyawa flavonoid dan kurkumin. Gugus -OH
pada flavonoid akan berikatan dengan protein
integral membran sel dan menyebabkan
terhentinya transpor aktif Na+-K+. Hal ini
menyebabkan pemasukan ion Na+ yang tidak
terkendali ke dalam sel dan pecahnya
membran sel (Scheuer 1994) yang pada
akhirnya menyebabkan kematian sel.
Kurkumin di dalam sampel ekstrak berpotensi menahan laju pertumbuhan kanker.
Hal ini diperkuat dengan hasil riset pada
pertengahan tahun 2009 oleh kolaborasi
beberapa universitas dan badan riset di Korea
Selatan, yang membuktikan secara in vitro
dengan analisis SPR maupun in vivo dengan
analisis APN-spesific antibody competition,
bahwa senyawa kurkumin memiliki aktivitas
kemopreventif. Demikian pula hasil penelitian
Meiyanto (1999) membuktikan bahwa
kurkumin dapat menghambat perkembangan
sel kanker usus besar dengan menghambat
pembentukan prostaglandin (PG) melalui
penghambatan aktivitas sikloksigenase (COX)
dan lipoksigenase (LOX) sehingga mencegah
proliferasi dan memacu apoptosis serta
menurunkan produk metabolit LOX pada
mukosa usus besar yang dapat memacu
penyebaran sel kanker.
Penentuan Awal Sidik Jari Formula
Terbaik (F9)
Penentuan awal sidik jari ekstrak
dilakukan dengan KLT menggunakan
campuran ekstrak terbaik berdasarkan nilai
LC50 yang rendah. Tujuannya memantau
komponen-komponen
dalam
ekstrak.
Fraksionasi dilakukan dengan menggunakan
eluen metanol, kloroform, etanol, asam
format, dan heksana. Eluen kloroform:etanol

Kurkumin

Standar
F9

Gambar 10 Pola KLT ekstrak F9 dengan fase

gerak CHCl3:EtOH (9.8:0.2) dan
CHCl3:MeOH:HCOOH (9.6:0.4:
0.07).
Tabel 4 Fraksi hasil pemisahan ekstrak F9
Nama senyawa

Nilai Rf
Standar
Sampel
Bisdemetoksikurkumin
0.91
0.88
Kurkumin
0.23
0.26
Noda hasil KLT diidentifikasi sebagai
senyawa bisdemetoksikurkumin (1) dan
kurkumin (2). Asumsi ini diperkuat dengan
nilai Rf yang dihasilkan mendekati nilai Rf
standar. Nilai Rf kurkumin dan bisdesmetoksikurkumin berturut-turut adalah 0.23 dan 0.91.

SIMPULAN DAN SARAN

Simpulan
Rimpang kunyit, temu lawak, dan
lempuyang berturut-turut mempunyai kadar
air dan abu sebesar 5.57, 6.63, 9.64% dan
8.05, 5.09, dan 4.53%, keduanya memenuhi
standar MMI. Uji fitokimia menunjukkan
kandungan metabolit sekunder alkaloid dan

10

flavonoid. Ekstraksi dengan etanol 96%

menghasilkan rendemen yang lebih tinggi
dibandingkan dengan metode Huda et al.
(2003), yaitu 9.07% (kunyit), 8.38% (temu
lawak), dan 5.58% (lempuyang). Ketiga
ekstrak juga memiliki nilai LC50 lebih kecil.
Gabungan ekstrak membentuk formula F7, F8
dan F9 memiliki aktivitas hambatan terhadap
proliferasi sel kanker usus besar HCT. Ketiga
formula difraksionasi dengan KLT menggunakan eluen terbaik, yaitu kloroform:etanol
(9.8:0.2) dan kloroform:metanol:asam-asetat
(9.6:0.4:0.07). Berdasarkan noda-noda yang
dihasilkan, diidentifikasi adanya senyawa
bisdemetoksikurkumin dan kurkumin.
Saran
Diperlukan penelitian lanjutan mengenai
mekanisme kerja formula dalam menghambat
pertumbuhan sel kanker usus besar dan
penyelidikan
potensi
formula
dalam
menghambat pertumbuhan sel kanker lainnya.

DAFTAR PUSTAKA
Aguilar MI, Guillermo D, Maria LV. 2001.
New
bioactive
derivatives
of
xanthorrhizol. J Mex Chem Soc 45:56-59.
Anderson JE. 1991. A blind comparison of
simple bench-top biossays and human
tumour cell cytotoxicities as antitumor
prescreens. Phytochem J Anal 2: 42-47.
Apriyantono A, Fardiaz D, Puspitasari N,
Budiyanto S. 1989. Petunjuk Laboratorium Analisa Pangan. Bogor: IPB Pr.
Ardianti Y. 2003. Daya antibakteri rimpang
kunyit putih (Curcuma mangga Val et
Zyp)
[skripsi].
Bogor:
Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Institut Pertanian Bogor.
Cikrikci S, Erkan M, Hasibe Y. 2008.
Biological activity of curcuminoids
isolated from Curcuma longa. J Econ
Entomol 2:19-24.
[Depkes RI] Departemen Kesehatan Republik
Indonesia. 1979. Farmakope Indoensia.
Ed ke-3. Jakarta: Depkes RI.
Djajanegara I, Wahadi P. 2009. Pemakaian sel
Hela dalam uji sitotoksisitas fraksi

kloroform dan etanol ekstrak daun Annona

squamosa. Jakarta: Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas
Indonesia.
Hadipoentyanti E, Syahid FS. 2007. Respon
temu lawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb)
hasil rimpang kultur jaringan generasi
kedua terhadap pemupukan. Bogor: Balai
Penelitian Tanaman Obat dan Aromatik.
Hamburger M, Hostettmann K. 1991.
Bioactivity in plant: The link between
phytochemistry
and
medicine.
Phytochemistry 12:3864-3847.
Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia.
Padmawinata K, Soediro I, penerjemah
Bandung: Institut Teknologi Bandung.
Terjemahan dari: Phytochemical Methods.
Huda MDK, Cahyono B, Limantara L. 2003.
Pengaruh proses pengeringan terhadap
kandungan kurkuminoid dalam rimpang
temulawak (Curcuma xanthorriza Roxb).
Semarang: Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan
Alam,
Universitas
Diponegoro.
Jasril. 2006. Aktivitas sitotoksik ekstrak
rizoma tumbuhan spesies Zingiberaceae.
Di dalam: Arifin B, Wukirsari T, Wahyuni
WT, Gunawan S, editor. Prosiding
Seminar Nasional Himpunan Kimia
Indonesia; Bogor, 12 Sept 2006. Bogor:
Departemen Kimia Himpunan Kimia
Indonesia Cabang Jawa Barat & Banten.
hlm 66-69.
Juniarti, Osmeli D, Yuhernita. 2009.
Kandungan senyawa kimia, uji toksisitas
(brine shrimp lethality test) dan antioksidan (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) dari
ekstrak daun saga (Abrus precatorius L.).
Jakarta: Fakultas Kedokteran, Universitas
YARSI.
Khopkar SM. 2003. Konsep Dasar Kimia
Analitik. Saptorahardjo A, penerjemah.
Jakarta: UI Pr. Terjemahan dari: Basic
Concepts of Analytical Chemistry.
Khurniasari DW. 2004. Potensi antikanker
senyawa bioaktif ekstrak kloroform dan
metanol makroalga Sargassum duplicatum
J. Agardh [skripsi]. Yogyakarta: Fakultas
Biologi, Universitas Gajah Mada.

11

Kikuzaki H, Nakatani B. 1993. Antioxidant

effect of some ginger constituent. J Food
Sci 58:1407-1410.

Prawirosujanto S et al. 1995. Materia Medika

Indonesia Jilid I. Jakarta: Departemen
Kesehatan Republik Indonesia.

Lamb A. 2005. Errata for Antimicrobial

activity of flavonoids. J Antimicrob
Agents 26:343-356.

Purnomowati S, Yoganingrum A. 1997. Temu

lawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb).
Jakarta: Pusat Dokumentasi dan Informasi
Ilmiah, LIPI.

Manggau M, Alam G, Mufidah, Bahar A,

Wahyudin E. 2007. Selektivitas penghambatan COX1-2 dan antioksidan ekstrak
herba cepukan (Physalis angulata Linn.).
Makasar: Fakultas Farmasi, Universitas
Hasanuddin.
Meiyanto E. 1999. Kurkumin sebagai obat
kanker: Menelusuri mekanisme aksinya.
Yogyakarta: Universitas Gajah Mada.
Meyer BN et al. 1982. Brine Shrimp : A
convenient general biaoassay for active
plant constituents. Planta Med 45:31-34.
Musfiroh I, Wiwiek I, Muchtaridi, Yudhi S.
2009. Analisis proksimat dan penetapan
kadar -karoten dalam selai lembaran
terung Belanda dengan metode spektrometri sinar tampak. Bandung: Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Universitas Padjajaran.
Najib A. 2009. Terapi herbal untuk tumor/
kanker [skripsi]. Makasar: Fakultas
Farmasi, Universitas Muhammadiyah.
Niumsakel S, Hirunsaree A, Wattanapitayakul
S, Junsuwanith N, Prapanupun K. 2007.
An antioxidative and cytotoxic substance
extracted from Curcuma comosa Roxb.
journal of that traditional and alternative
medicine, 5(1).
Nurhayati APD, Nurlita A, Rachmat F. 2006.
Uji toksisitas ekstrak Euchema alvarezil
terhadap Artemia salina sebagai studi
pendahuluan potensi antikanker. Surabaya:
Fakultas
Matematika
dan
Ilmu
Pengetahuan Alam, Institut Teknologi
Sepuluh November.
Pratiwi NF. 2004. Uji praskrining aktivitas
antikanker ekstrak eter dan ekstrak
metanol Marchantia ef. planiloba Steph.
dengan metode uji kematian larva udang
dan profil densitometri ekstrak aktif.
Surabaya: Fakultas Farmasi, Universitas
Airlangga.

Radji M, Sumiati A, Indani N. 2004. Uji

mutagenesis dan antikanker ekstrak aseton
dan n-heksana dari kulit batang sesoot
(Garcinia picrorrhiza Mig). Jakarta:
Fakultas Farmasi, Universitas Indonesia.
Rahardjo M, Rostiana O. 2005. Budidaya
Tanaman Temulawak. Bogor: Balai
Penelitian dan Pengembangan Obat dan
Aromatika.
Rukmana R. 1995. Temulawak: Tanaman
Rempah dan Obat. Yogyakarta: Kanisius.
Sajuthi D. 2001. Ekstraksi, Fraksinasi,
Karakterisasi, dan Uji Hayati InVitro
Senyawa Biokatif Daun Dewa (Gynura
pseudochina (Linn). DC.) sebagai
Antikanker, Tahap II. Bogor: Pusat Studi
Satwa Primata.
Setiani RFC. 2009. Sitotoksisitas fraksi aktif
biji mahoni (Swietenia mahagoni) pada sel
kanker payudara T47D [skripsi]. Bogor:
Fakultas
Matematika
dan
Ilmu
Pengetahuan Alam, Institut Pertanian
Bogor.
Scheuer JS. 1994. Produk Alami Lautan.
Cetakan pertama. Semarang: IKIP
Semarang Pr.
Sidik, Mulyono MW, Ahmad M. 1995. Temu
lawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb).
Jakarta: Phyto Medika.
Sirait M et al. 1979. Materia Medika
Indonesia Jilid III. Jakarta : Departemen
Kesehatan Republik Indonesia.
Somchit M, Syukriyah H. 2003. Antiinflammatory property of ethanol and
water extracts of Zingiber zerumbet Smith.
J Nat Prod 63:676-679 [terhubung
berkala]. http://www.Indianpharmacology.
net. [19 Nov 2010].
Srijanto B, Rosidah I, Rismana R, Syabirin G,
Aan, Mahreni. 2004. Pengaruh waktu,
suhu, dan perbandingan bahan baku

12

pelarut pada ekstraksi kurkumin dari

temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb).
Di dalam: Prosiding Seminar Nasional
Rekayasa Kimia dan Proses, 2004.
Jakarta: Pusat Pengkajian dan Penerapan
Teknologi Farmasi dan Medika BPPT
Jakarta. hlm 1-5.
Sukardiman, Rahman A, Pratiwi FN. 2004.
Uji praskrining aktivitas antikanker
ekstrak
eter dan ekstrak metanol
Marchantia cf. planiloba Steph. dengan
metode uji kematian larva udang dan profil
densitometri ekstrak aktif. Surabaya:
Fakultas Farmasi, Universitas Airlangga.

Winarto WP et al. 2007. Pengobatan Herbal

untuk
Kanker
Payudara.
Jakarta:
Gramedia.
Zahro L, Cahyono B, Hastuti BR. 2009. Profil
tampilan fisik dan kandungan kurkuminoid
dari simplisia temu lawak (Curcuma
xanthorrhiza Roxb) pada beberapa metode
pengeringan. Sains & Mat 7:24-32.

Sulistyoningrum H. 2008. Efek gastroprotektor temulawak (Curcuma xanthorrhiza

Roxb) terhadap kerusakan histologis
lambung mencit akibat pemberian aspirin
[skripsi].
Surakarta:
Universitas
Muhammadiyah Surakarta.
Supriadi D. 2008. Optimisasi ekstraksi
kurkuminoid temu lawak (Curcuma
xanthorrhiza Roxb) [skripsi]. Bogor:
Fakultas
Matematika
dan
Ilmu
Pengetahuan Alam, Institut Pertanian
Bogor.
Suradikusumah E. 1989. Kimia Tumbuhan.
Bogor: IPB.
Suryanto D, Kelana TB, Munir E, Nani N.
2006. Uji brine shrimp dan pengaruh
ekstrak metanol daun tumbuhan pradep
(Psychothri stipulacea Wall) (famili:
Rubiaceae) terhadap mikroba. Media
Farmasi 14:85-92.
Suwiah A. 1991. Pengaruh perlakuan bahan
dan jenis pelarut yang digunakan pada
pembuatan temu lawak instan terhadap
rendemen dan mutunya [skripsi]. Bogor:
Fakultas Teknologi Pertanian, Institut
Pertanian Bogor.
Taryono, EMR, Sardina A. 1987. Plasma
Nutfah Tanaman Temu-temuan. Edisi
Khusus Balitro. hlm 47-56.
Waluyo A. 2008. Bagaimana Terapi Radiasi
(Radiotherapy)
Diberikan?
George
Washington University.
Winarno FG. 1997. Kimia Pangan dan Gizi.
Jakarta: Gramedia.

13

LAMPIRAN

14

Lampiran 1 Bagan alir penentuan rimpang kunyit, temu lawak, dan lempuyang
Rimpang segar (kunyit, temu lawak dan lempuyang)
Dikupas
Dicuci bersih dan dirajang kecil-kecil
Dikeringkan (60 C, 5 hari)
Penetapan kadar air
Maserasi (metode Huda et al. (2003) dan etanol 96%)
Filtrat
Pemekatan
Ekstrak kasar
Uji fitokimia
Uji aktivitas pada A. salina
Ekstrak kasar teraktif
Pengombinasian ekstrak yang terbaik
Uji aktivitas pada A. salina
KLT
Uji bioaktivitas antikanker terhadap sel kanker usus besar HCT

15

Lampiran 2 Rimpang yang telah dikeringkan pada suhu 60 C

Kunyit

Temu lawak

Lempuyang

Lampiran 3 Larva udang A. salina pada ekstrak etanol 96% dan metode ekstraksi Huda et al.
(2003)
LC50 ppm
Sampel

Metode ekstraksi
Huda et al. (2003)
453.9
64.1
76.2

Kunyit
Temu lawak
Lempuyang

Ekstrak etanol 96%

99.9
9.4
21.1

Lampiran 4 Uji F dan uji t

Ekstrak
F7
F8
F9

Rata-rata
9.7
9.7
10

Standar deviasi
0.58
0.58
0

F7 dan F9
Uji F hitung =
=
= 0 (F hitung< F tabel)
Ho diterima ; tidak berbeda nyata

Uji t hitung =

Uji t hitung =

=
= 2,68 (t hitung < t tabel)
Ho diterima ; tidak berbeda nyata

16

 Spool =

)
(

Spool = 0,1682
Keterangan: F tabel = 39,00 dan t tabel = 2,920
Lampiran 5 Foto pengujian sel kanker usus besar HCT

Keterangan:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.

Sel HCT 116 sebelum pemberian ekstrak

Sel HCT 116 setelah pemberian ekstrak F7 50 ppm
Sel HCT 116 setelah pemberian ekstrak F7 1000 ppm
Sel HCT 116 setelah pemberian ekstrak F8 50 ppm
Sel HCT 116 setelah pemberian ekstrak F8 1000 ppm
Sel HCT 116 setelah pemberian ekstrak F9 50 ppm
Sel HCT 116 setelah pemberian ekstrak F9 1000 ppm
Sel HCT 116 setelah pemberian pelarut ekstrak 50 ppm
Sel HCT 116 setelah pemberian pelarut ekstrak 1000 ppm

17