EM REPRODUO EQINA: O QUE H DE NOVO
PARA O VETERINRIO DE CAMPO?
Introduo
A equideocultura Brasileira ocupa posi-
o de destaque internacional no s pelo
expressivo nmero de animais, sendo a se-
gunda maior populao de eqinos puros
de raa do mundo, como tambm pela exce-
lncia de seu plantel. Adicionalmente, a in-
dstria do cavalo uma importante rea
geradora de divisas e empregos no Brasil.
Nosso pas hoje tambm um pas de refe-
rncia no estudo e na utilizao de Biotc-
nicas aplicadas Reproduo Eqina, como
Inseminao Artificial e Transferncia de
Embries.
Contudo para se manter um pas compe-
titivo, se faz necessrio a incorporao de
novas biotecnologias para acelerar e facili-
tar o melhoramento gentico. Tcnicas de
reproduo assistida como: a inseminao
artificial, congelao de smen e embries,
transferncia de embries (T.E.), transfern-
cia de ocito (T.O), fertilizao in vitro
(F.I.V.), inseminao intracitoplasmtica
(I.C.I.S.) e transferncia de gametas intra-
falopiana (G.I.F.T.), tem despertado grande
interesse entre criadores e associaes de
criadores de cavalos. No Brasil existem Cen-
tros e Clnicas especializados em reprodu-
o de eqinos, que em conjunto com o De-
partamento de Reproduo Animal da Fa-
culdade de Medicina e Veterinria da Uni-
versidade Estadual Paulista (UNESP) de
Botucatu tem procurado desenvolver e di-
fundir estas biotcnicas ao sistema de pro-
duo eqino nacional.
Neste artigo, procuraremos abordar os
principais avanos ocorridos nos ltimos
anos no que se refere preservao de s- do smen), smen refrigerado (smen arma-
men e produo de embries em eqinos, zenado por um tempo de 24 a 48h a uma
enfatizando aspectos aplicveis rotina do
Veterinrio de campo e aos sistemas de cri-
ao de eqinos.
Principais avanos no
processamento e aplicao do
smen congelado e refrigerado em
eqinos
A inseminao artificial (I.A.), consiste
Prof. Dr. Marco Antnio Alvarenga
M.V. PhD em Reproduo Animal
Prof. Departamento de Reproduo Animal
FMVZ /UNESP - Botucatu, SP
malvarenga@fmvz.unesp.br
Dr. Mrcio Teoro do Carmo
M.V. PhD em Reproduo Animal
mtc.vet@uol.com.br
....................................................
em aps a obteno do smen, deposit-lo
no interior do trato genital (tero) da fmea
a ser inseminada. Esta tem sido utilizada
principalmente para aumentar o nmero de
produtos obtidos de um determinado gara-
nho. Um outro aspecto importante diz res-
peito a possibilidade de se transportar o s-
men, evitando desta forma todos os proble-
mas relacionados a extenso geogrfica de
nosso pas bem como aos riscos fsicos e
sanitrios do transporte de guas.
Dentre as tcnicas de I.A. temos a pos-
sibilidade da utilizao de smen fresco (con-
siste na I.A. imediatamente aps a colheita
congelao2. Aps anos de estudo em nos-
temperatura entre 50C e 150C) e smen con-
gelado (smen armazenado por tempo inde-
terminado a uma temperatura de 1960C).
Estudos sobre tcnicas adequadas para
preservao e armazenamento de smen so
de grande relevncia em Reproduo Ani-
mal, j que possibilitam maximizar o apro-
veitamento de animais de alto potencial
gentico, bem como, por permitir a preser-
vao por tempo indeterminado do patri-
mnio gentico de animais que possam vir
a falecer. A importao de smen possibili-
ta acelerar o ganho gentico atravs do uso
de smen congelado de garanhes de alto
padro alojados em outros pases. Alm do
aspecto melhorista a criopreservao de
smen a nica forma de minimizar perdas
econmicas advindas da morte de reprodu-
tores de alto valor.
Porm, existem fatores limitantes ao uso
rotineiro do smen congelado em criatrios
de eqinos, sendo que o principal fator, esta
relacionado a prpria espcie, onde, uma
grande parcela dos garanhes apresentam
caractersticas de smen ps-descongela-
mento inadequadas para o uso.
Um novo impulso no interesse pelo uso
do smen congelado e conseqentemente
nas pesquisas voltadas a solicitar os pro-
blemas relacionados fertilidade e as suas
aplicaes, foi observado logo aps a libe-
rao pelas associaes dos criadores de
cavalos da raa rabe e da associao ame-
ricana da raa Quarto de Milha quanto ao
uso destas biotcnicas. Hoje das 60 associ-
aes de cavalos registrados nos EUA, 54
permitem o uso do smen congelado, por
reconhecerem ser esta a melhor forma de
seguro quanto a perdas futuras. No Brasil
das dez maiores associaes de cavalos oito
permitem o uso do smen congelado.
O sucesso da criopreservao de esper-
matozides eqino altamente varivel en-
tre garanhes9. Em particular as raas naci-
onais, Mangalarga e Mangalarga Marcha-
dor, so menos resistentes ao processo de
so laboratrio no Brasil podemos afirmar
que um importante fator relacionado a bai-
xa fertilidade do smen congelado de alguns
garanhes est relacionado a presena do
glicerol nos meios de congelamento. Con-
firmando nossos achados um trabalho re-
cente realizado na Frana10 observou que
em concentraes acima de 3% o glicerol
provoca acentuado decrscimo da fertilida-
de do smen fresco de garanhes.
 Na maioria dos estudos realizados te-
mos constatado que os crioprotetores a
base de amidas (Dimethylformamida e Me-
thylformamida) proporcionaram resultados
superiores em relao ao glicerol no que se
refere a motilidade espermtica, integridade
celular e fertilidade em diferentes raas eqi-
nas1,5,8. Tendo sido mais expressiva a me-
lhora da qualidade do smen quando da con-
gelao de smen de garanhes Mangalar-
ga Marchador, Mangalarga Paulista e Lusi-
tanos os quais so sabidamente indivduos
que apresentam uma baixa resistncia ao
congelamento. No caso especfico dos ca-
valos da Raa Mangalarga Marchador, ob-
servamos ao congelar smen de 17 gara-
nhes que destes 14 apresentaram smen
de boas caractersticas quando do uso das
amidas como crioprotetores. Por outro lado
com o uso do Glicerol somente dois destes
mesmos garanhes apresentaram smen de
boa qualidade aps a congelao. Em um
outro experimento desenvolvido na Univer-
sidade do Colorado nos EUA foi observado
que a despeito de no ter sido observada
diferena na motilidade espermtica ps-
descongelamento quando o smen foi con-
gelado com DF ou GLI, os ndices de fertili-
dade foram significativamente superiores no
grupo de guas inseminadas com diluente
de congelamento contendo DF (47%, 14/30)
quando comparado com glicerol (14%, 5/34)
(Moffett et al., 2003). Baseado nestes da-
dos podemos concluir que o glicerol pode
reduzir a fertilidade mesmo quando a motili-
dade e viabilidade dos espermatozides so
preservadas aps o descongelamento.
Outra limitao ao uso em larga escala
do smen criopreservado de garanhes, diz
respeito ao nmero de doses possveis de
serem armazenadas por ejaculado; diferen-
te de touros onde em um nico ejaculado
possvel congelar-se entre 300 a 500 doses,
no caso de garanhes este nmero se res-
tringe entre quatro e seis doses por coleta,
ou seja, o uso de smen congelado atende a
uma pequena populao de guas rigoro-
samente selecionadas.
Com intuito de se multiplicar o nmero
de produtos obtidos por dose inseminante
tcnicas alternativas de inseminao como
inseminao na extremidade do corno uteri-
no tem sido utilizada. Esta tcnica tem per-
mitido o uso de uma baixa concentrao de
espermatozides por inseminao, onde ao
invs de utilizarmos oito palhetas de smen
congelado por inseminao so utilizadas
uma ou duas palhetas. Esta tcnica consis-
te na deposio do smen na juno tero- Cornoal; D) Papila local onde ser depositado o smen; E) Exposio da sonda sobre
tubrica (local mais prximo que consegui-
mos depositar o smen para fertilizar o vu-
lo, sem um procedimento cirrgico), permi-
tindo assim multiplicar em at 4 a 5 vezes o
nmero de potros nascidos com apenas
uma dose inseminante.
Pelas dificuldades encontradas em rela-
o ao uso em larga escala do smen con-
gelado, onde a variao da fertilidade asso-
ciada necessidade de realizao de um
controle folicular rgido para que as inse-
minaes sejam realizadas o mais prximo
possvel da ovulao, faz com que tcnica so de refrigerao. Obviamente, quanto mais
de refrigerao de smen venha sendo roti-
neiramente utilizada para o transporte de s-
men.
Vale ressaltar que a refrigerao para
transporte de smen no utilizada somen-
te para transpor o problema da distncia
geogrfica entre os haras mas tambm para
a preveno de doenas que possam se dis-
seminar com o trnsito de animais entre pro-
priedades. Outro aspecto importante diz res-
peito a poupar potros de poucos dias de
idade de se submeterem ao stress da mu-
dana de ambiente e de viagens prolonga-
das. Da mesma forma a refrigerao de s- do plasma seminal sempre benfica, con-
men acelera o melhoramento gentico, onde
associada Transferncia de Embries per-
mite que uma gua seja utilizada com dife-
rentes garanhes em uma mesma estao
de monta, independente da distncia entre
eles.
Contudo, algumas limitaes existem em
relao ao uso rotineiro do smen refrigera-
do. A principal limitao diz respeito ao tem-
po de preservao pois, para que se garan-
ta ndices de fertilidade prximos aos obti-
dos com o uso do smen fresco, o tempo de
Tcnica de Inseminao Histeroscpia: A) Cervix; B) Corpo do tero; C) Bifurcao
a Papila; F) Depsito do smen sobre a Papila.
refrigerao no deve ultrapassar a 24h. Di-
ferentes experimentos foram realizados ao
longo dos ltimos 10 anos e muito pouco se
evoluiu quanto a possibilidade de preser-
var a fertilidade das clulas espermticas de
eqinos por um perodo de tempo superior
a 24h. Certamente alguns reprodutores ex-
cepcionais, apresentam sua fertilidade pre-
servada por at 48h de armazenamento, pois
similar ao smen congelado existem gara-
nhes mais e menos resistentes ao proces-
tempo o smen eqino possa ser estocado
mantendo tambm a fertilidade, maior flexi-
bilidade teremos em coletar, enviar o smen
e sincronizar o tempo de viabilidade do o-
cito com o do smen. importante enfatizar
que a motilidade no sempre um bom indi-
cador da fertilidade no smen refrigerado e
que as inseminaes devem ser realizadas
em um perodo de tempo mximo de 24h an-
tes das ovulaes.
Trabalhos demonstram que para gara-
nhes com baixa resistncia a refrigerao a
centrifugao do smen, visando a retirada
tudo para cavalos que refrigeram bem a cen-
trifugao no traz nenhum benefcio.
importante enfatizar que para a obten-
o de bons ndices de fertilidade o smen
depois de processado (coletado e diludo
ao meio de manuteno do smen) deve ser
acondicionado em recipientes especialmen-
te desenvolvidos para este fim. Recipientes
estes que obedeam as curvas de refrigera-
o j determinadas como adequadas bem
como que sejam seguros mesmos quando
submetidos a temperaturas ambientais ele-
MARCO ANTNIO ALVARENGA / MRCIO TEORO DO CARMO
 tamento. Desta forma o Extrato de Pituitria

MARCO ANTNIO ALVARENGA / MRCIO T. CARMO

Eqina (EPE) e mais recentemente o FSH
eqino purificado so os preparados indi-
cados para induzir-se superovulao na f-
mea eqina. Os protocolos superovulatri-
os tm se mostrado eficientes em induzir
mltiplas ovulaes (cinco ovulae/gua),
contudo a recuperao embrionria tem se
mostrado baixa, com uma mdia de 30% em-
Sistemas de refrigerao e transporte de smen eqino. bries /ovulao7.
................................................................................................................................................................ Procurando entender os motivos da baixa
recuperao de embries5 avaliaram ovidu-
vadas. al em eqinos em 1986 e o Brasil e os EUA tos quanto presena e qualidade de ov-
A temperatura de refrigerao ideal a respondem por cerca de 70% dos embries citos obtidos em guas superovuladas. De-
de 50C, contudo para determinados gara- transferidos no mundo atualmente. Uma re- monstrando que durante a ovulao ocorre
nhes temperaturas prximas de 150C me- cente normativa da raa Quarto de Milha algum distrbio na captao dos ovcitos
lhor preserva a motilidade espermtica. que permite o aumento do nmero de em- para o oviduto em guas superovuladas. In-
importante destacar que o smen preserva- bries por doadora, certamente provocar teressante foi a observao de que no Gru-
do 150C no pode ser armazenado por um um aumento significativo destes nmeros po de guas superovuladas, que responde-
no Brasil. ram com um nmero menor de trs ovula-
perodo de tempo superior a 24 horas.
No Brasil existe uma grande variedade es a taxa de recuperao de ovcito no
Existe no mercado internacional um con-
de raas que utilizam a tcnica, as que mais oviduto foi similar obtida no grupo con-
tainer denominado Equitainer que propicia
utilizam atualmente so as raas Mangalar- trole.
uma queda adequada de temperatura at 50C
(aproximadamente 8 horas para atingir a tem- ga Marchador, Campolina, Quarto de Milha
peratura de 50C) permitindo manter o smen e Mangalarga Paulista. Sendo estimada uma
refrigerado por at 48h. No Brasil j existem mdia de 6.000 prenhezes por ano de TE.
sistemas eficientes para transporte de s- Existindo no Brasil cerca de 30 Centros de
men eqino, dentre eles o transporte a 150C TE em eqinos, parte deles prestador de
servios para terceiros e outra parte para
(Botu-Box, Max-Smen) e recentemente um

MARCO ANTNIO ALVARENGA / MRCIO T. CARMO

uso exclusivo em animais de um nico pro-
outro para transporte a 50C (Botutainer). O
prietrio. Nas raas Quarto de Milha e de
sistema Botutainer segue a mesma curva de
Hipismo as TEs so tradicionalmente reali-
queda de temperatura do Equitainer (siste-
zadas em Centrais em outras raas como
ma americano) e se mostrou to eficiente
Mangalarga as TEs so realizadas em sua
quanto a este na preservao da motilida-
maioria em estruturas montadas no prprio
de, bem como na proteo as variaes de Haras do criador.
temperatura externa. A transferncia de embries, assim como
Em nosso pas, tambm existem comer- qualquer outra biotecnologia reprodutiva,
cialmente quatro diluentes para diluio e apresenta aplicaes e limitaes. A princi-
transporte de smen eqino (Equimix, Max- pal limitao desta tcnica diz respeito a efi-
Smen, Botu-Smen e Botu-Turbo), meios cincia do programa. Em funo da dificul-
estes que podem ser utilizados tanto para dade em superovular guas a eficincia de
inseminao artificial de smen a fresco ou programas de TE nesta espcie muito bai-
refrigerado. O diluente Botu-Turbo com- xa, sendo necessrio dois a trs ciclos para
posto de estimulantes de motilidade que se obter uma gestao, conseqentemente
melhoraram a resistncia a refrigerao (50C) os custos para a produo de um potro pro-
de smen de garanhes que apresentem bai- veniente de TE so bastante elevados.
xa qualidade. altamente desejvel a adequao de um pro-
tocolo superovulatrio que permita a ob-
MARCO ANTNIO ALVARENGA / MRCIO T. CARMO

Avanos em biotecnologia aplicada teno de dois embries por ciclo e com isto
aos embries pelo menos garantir uma prenhez.
A incidncia de ovulaes mltiplas es-
Transferncia de embries pontneas em raas de linhagem europia,
notrio o crescimento nos ltimos tem maximizado a eficincia da transfern-
anos do interesse pelo uso da Transfern- cia de embries6.
cia de Embries (TE) pela indstria do cava- Uma grande dificuldade em se supero-
lo. Hoje quase a totalidade das associaes vular guas est relacionada a refratarieda-
de criadores de cavalo reconhecem os be- de da gua aos preparados hormonais base 1) Ovrio de uma gua superovulada com
nefcios da tcnica, permitindo o uso da TE. de FSH Suno disponveis comercialmente. cinco folculos.
No Brasil o mdico veterinrio Joo Junquei- Sendo necessrio o uso de FSH homlogo 2) Quatro embries recuperados de uma
ra Fleury iniciou a utilizao da TE comerci- para que tenhamos resposta ovariana ao tra- gua superovulada.
 Em funo destes achados estamos es-
tudando em experimentos mais recentes a
eficincia de baixas doses de EPE bem como
FSH eqino purificado, em induzirem duplas
e triplas ovulaes. Desta forma poderemos
ter um protocolo de baixo custo que possa
ser utilizado em todos ciclos do ano, por ser
menos agressivo e induza a um menor n-
mero de ovulaes com conseqente me-
lhoria na recuperao de embries.
Tambm existe uma maior dificuldade em
se criopreservar o embrio eqino, experi-
mentos recentes tm demonstrado uma sig-
nificativa melhora nos ndices de fertilidade
atravs da vitrificao de embries. Duran-
te a vitrificao, o embrio rapidamente
exposto a concentraes altas de crioprote-
tores antes de introduzi-lo no nitrognio l-
quido. A vitrificao definida como a soli-
dificao da soluo sem a cristalizao, com nhar uma gua. Visando contornar o pro-
a elevao extrema na viscosidade durante
a congelao.
Comparado com a congelao conven-
cional, a vitrificao reduz significativamen-
te o tempo de manipulao e os custos dos
equipamentos envolvidos no processo de
criopreservao por no ser necessrio de
mquinas que controlem a curva de conge-
lao.
Produo in-vitro de embries
A fertilizao in-vitro (FIV) permite a
produo in-vitro (em laboratrio) de em-
bries de fmeas que por motivos diversos
esto impossibilitadas de naturalmente pro-
duzirem embries. Contudo, sistemas em-
pregados em outras espcies para produ-
o de embries (maturar ocitos, capacitar
espermatozides e cultivar embries) in-
vitro no se adequam a espcie eqina.
Em outras espcies como bovinos, a
aplicao da FIV j resultou em centenas de
milhares produtos nascidos, sendo inclusi-
ve aplicada em nvel comercial em larga es-
cala, por outro lado, raros foram os produ-
tos gerados at o momento atravs da FIV
em eqinos. Por outro lado, em cavalos os
progressos envolvendo o estudo dos even-
tos precoces da fertilizao tm sido lentos
quando comparados a outras espcies de
animais domsticos. Os ndices de sucesso
de etapas individuais que envolvem a pro-
duo in-vitro de embries em eqinos ain-
da esto longe de permitirem a utilizao
destas tcnicas em protocolos de rotina,
como acontece em bovinos.
Os nicos potros nascidos aps proce-
dimentos in-vitro no cavalo so originados
da fertilizao de um ocito (vulo de gua
doadora) maturado in-vivo (dentro da pr-
pria gua), sendo posteriormente introduzi-
mais e saudveis. No Brasil um projeto fi-
nanciado pela FAPESP iniciado em 2006 visa
MARCO ANTNIO ALVARENGA / MRCIO T. CARMO
produzir clones eqinos, projeto este que
est sendo desenvolvido pela equipe lide-
rada pela professora Fernanda da Cruz Lan-
dim e Alvarenga da UNESP-Botucatu. 
Referncias Bibliogrficas
Ocito sendo fertilizado pela tcnica de 1 - ALVARENGA, M.A.; LEO, K.M.; PAPA, F.O.;
ICSI. LANDIM-ALVARENGA, F.C.; MEDEIROS,
............................................................................. A.S.L.; GOMES, G.M. Amides as an alternative
cryoprotectors for freezing stallion semen - A re-
do um nico espermatozide intracitoplas- view. Anim Reprod Scienci. Oct; 89(1-4):105-
mtico, tcnica esta denominada de ICSI. 13, 2005.
Esta tcnica tambm indicada para s- 2 - ALVARENGA, M.A.; LEO, K.M.; PAPA, F.O.,
men congelado de garanhes que possui LANDIM-ALVARENGA, F.C., MEDEIROS,
baixa motilidade e fertilidade e que conse- A.S.L.; GOMES, G.M. The use of alternative cryo-
qentemente tenha dificuldade de empre- protectors for freezing stallion semen. Proceedin-
gs, Havemeyer Foundation Workshop on Trans-
porting Gametes and Embryos, Massachusetts,
blema da FIV tem sido utilizado recentemen- USA, October, p.74-76. 2003.
te em maior escala em eqinos a Transfe-
3 - CARMO, M.T.; LOSINO, L.; AQUILAR, J.J.;
rncia de Ocitos (TO), que consiste na re-
ALVARENGA, M.A. Oocyte transport to the ovi-
tirada do ocito de uma gua de alto valor duct of superovulated mares. Animal Reproduc-
zootcnico, impossibilitada de produzir em- tion Science, n.94, 337-339, 2006.
bries, o qual ser transferido para o ovidu-
4 - CARMO, M.T.; PAPA, F.O.; MEDEIROS,
to de outra gua, a qual ser inseminada e A.S.L.; ARAUJO, G.H.M.; ALVARENGA, M.A. Im-
gestar o potro. Normalmente os ocitos provement of satallion semen post-thaw motility
so coletados de folculos pr-ovulatrios, with the association dimethyl formamide and me-
atravs de puno folicular guiada por ul- thyl formamide as cryoprotectors, Aniaml Re-
tra-som, desta forma a maturao do ocito production Science. n.89, p.286-288, 2005.
realizada in vivo. Quando os ocitos no 5 - CARMO, M.T.; LOSINO, L.; AQUILAR, J.J.;
esto totalmente maturos, estes so matu- ARAUJO, G.H.M.; ALVARENGA, M.A. Effect of
superovulatory treatment of mares with equine pi-
rados in vitro para depois serem transferi-
tuitary extract on oocyte transport to the ovi-
dos. Os ovcitos so posteriormente trans- cuct. Acta Scientiae Veterinariae n.33 (suple-
feridos via acesso cirrgico pelo flanco para ment 1), p.179, 2005.
o oviduto de uma receptora. A gua recep- 6 - CARMO, M.T.; TRINQUE, C.L.N.; LIMA,
tora inseminada do modo convencional M.M.; MEDEIROS, A.S.L.; ALVARENGA, M.A
(intra-uterino) antes e aps a TO. Estudo da incidncia de mltiplas ovulaes em guas
Entretanto mais uma vez a natureza impe da raa Brasileiro de Hipismo e suas implicaes em
uma limitao aplicao de uma bio- um programa de transferncia de embries. Revista
Brasileira de Reproduo Animal, Belo Hori-
tecnologia na espcie eqina, pois os oci- zonte, v.26, n.3, pg.252 -254, 2002.
to de guas maturados in vitro no apre-
sentam bons resultados, e ocitos de guas 7 - CARMO, M.T.; LANDIN-ALVARENGA, ME-
DEIROS, A.S.L.; ALVARENGA, M.A. In: Supero-
idosas (> 18 anos), as quais so as princi- vulatory response of mare treated twice daily with
pais candidatas a TO, apresentam um baixo equine pituitary extract utilizing constant and de-
ndice de fertilidade (aproximadamente 30%). cresiasing doses Annual meeting of Society for
Contudo esta a nica tcnica no momento Theriogenology, Proceedings, Colorado Springs,
vivel para obteno de produtos de guas CO, USA, 2003.
impossibilitadas de produzir embries. 8 - MEDEIROS, A.S.L.; GOMES, G.M.; CARMO,
Uma nova ferramenta tecnolgica que M.T.; PAPA, F.O.; ALVARENGA, M.A., 2002.
se torna cada vez mais real para a indstria Cryopreservation of stallion sperm using different
amides. Theriogenology n.58, 273-276.
eqina a clonagem animal. Clones de di-
versos garanhes que se tornaram infrteis 9 - VIDAMENT, M.; DUPERE, A.M.; JULIEN-
NE, P.; NOUE, P.; PALMER, E.E. Equine frozen
ou subfrteis ou mesmo que j vieram a bi-
semen freezability and fertility fiel results. Theri-
to ou foram castrados quando jovens, tm ogenology, v.48. p.907-917, 1997.
sido produzidos nos EUA e Europa. Dife-
10 - VIDAMENT, M.; VINCENT, P.; YVON J.M.,
rente do que ocorre em bovinos onde os
MARTIN, F.X. Glicerol in semen extender is limi-
produtos nascem com uma sria de compli- ting factor in the fertility in asine and equine spe-
caes imunolgicas, os cerca de 10 clones cies. Anim Reprod Scienci. Oct; 89 (1-4):105-
eqinos at o momento nascidos so nor- 13, 2005.