Tipagem do Grupo Sanguneo

ABO e Rh

Profa. Dra. Mrcia Figueiredo

Antgeno

Toda substncia capaz de induzir a

resposta imune
Podem ser clulas, protenas, ...
Antgenos de grupos sanguneos

Quando um ANTGENO capaz de

estimular a produo de Anticorpos
Imunogenicidade
Quando o produto da resposta imune
(ANTICORPO) interage com o antgeno
Antigenicidade

Classificao dos anticorpos

Naturais

Anticorpo que se forma

sem a presena de
antgeno eritrocitrio

Bacterias presentes no
trato intestinal
Alimentos
Ambiente

Imunes

Anticorpo que se
forma por
estmulo de um
ANTGENO

Gestao
Transfuses
Transplantes

ANTICORPOS
Regulares

Irregulares
Quando a
ocorrncia do
anticorpo
NO
esperada

Quando a
ocorrncia do
anticorpo
esperada

Aloimunizao

Fenotipagem Eritrocitria
Identificam a presena ou no do antgeno
Fenotipagem primordial:
antgenos do sistema ABO
antgeno D (sistema Rh)

Fentipos ABO
Antgenos ABO:
expressos desde 5 ou 6 semana de vida intra-uterina,
embora ao nascer apresentem um menor nmero de
stios antignicos que os adultos
RN apresentam cerca de 1/3 dos stios antignicos totais
de A/B

Expresso ser mxima aos 2-4 anos de vida

No apresentam anticorpos ABO ao nascimento

(Molisson, 1992)

Tipagem ABO de recmnascido (RN)

Provvel O
Provvel A
Provvel B
Provvel AB

RhD definitivo

Rotina Laboratorial
Investigar:
Presena de antgenos eritrocitrios
Anticorpos clinicamente significantes

Rotina Laboratorial
Hemaglutinao:
Presena
-Teste positivo
Ausncia
-Teste negativo

Tcnicas de Imuno-hematologia
HEMAGLUTINAO
Pode ocorrer

Pode ocorrer

Forma natural,
espontnea, sem
necessitar de
artifcios, caso os
anticorpos sejam
naturais

Precisa de artifcios
quando os
anticorpos a serem
testados so IgG
Artifcios: incubao
37C, albumina, BFI,
enzimas, antiglobulina
humana (AGH), etc...

Tcnicas de Imuno-hematologia
As hemcias obtidas de cogulo podem ser
tipadas em at 5 dias

As amostras coletadas em EDTA ou Heparina

devem ser tipadas em at 48 horas

Tcnicas de Imuno-hematologia
Se demorar para execuo do teste de
tipagem
As hemcias de sangue coagulado e as
colhidas em EDTA ou Heparina devem ser
separadas do soro/plasma

Tcnicas de Imuno-hematologia
As hemcias de sangue coagulado e as
colhidas em EDTA ou Heparina devem ser
separadas do soro/plasma

Lavadas e ressuspendidas e estocadas a

2 - 8 C por no mximo 20 dias

Tcnicas de Imuno-hematologia
Lavagem das hemcias
Para realizar os TAD e PAI
necessrio lavar as hemcias
com salina, no mnimo por trs
vezes, antes de adicionar a
antiglobulina humana
A lavagem das hemcias tem
como objetivo retirar as
globulinas sricas livres no
meio, a lavagem inadequada
ocasiona neutralizao da AGH
resultando numa reao falsonegativa

Tcnicas de Imuno-hematologia
O sangue coletado em anticoagulante ACD, CPD
e CPDA-l pode ser tipado at a data de
expirao, se armazenado entre 2 e 8 C
O armazenamento prolongado de hemcias
antes da execuo do teste pode causar
deteriorao de antgenos e resultar em reaes
mais fracas

Testes imunohematolgicos
pr- transfusionais
Os testes imunhematolgicos pr-transfusionais, tem
por finalidade assegurar os melhores resultados
possveis de uma transfuso sangunea
Mxima segurana ao paciente e preveno de reaes
transfusionais hemolticas

Quais os testes imunohematolgicos

obrigatrios na rotina transfusional?

O servio de hemoterapia deve realizar os testes

imunohematolgicos pr-transfusionais, segundo os critrios
estabelecidos pelo Ministrio da Sade, sendo obrigatrios:
Tipagem ABO / Rh
Pesquisa de Anticorpos Irregulares (PAI)
Prova de compatibilidade
Reclassificao ABO/Rh do doador e receptor
fundamental o acompanhamento das publicaes do
Ministrio da Sade com as normas tcnicas que definem os
critrios para a atividade hemoterpica no Brasil

Classificao para os Sistemas ABO/Rh Por

que o sistema ABO considerado o mais
importante na medicina transfusional?
A importncia do sistema ABO na prtica transfusional
est relacionada gravidade das reaes transfusionais
hemolticas devido presena regular no plasma do
receptor de anticorpos "naturais" contra os antgenos A
eB
Os
anticorpos
"naturais"
causam
hemlise
predominantemente intravascular podendo levar o
receptor morte

Qual a importncia do
sistema Rh?
O sistema Rh o maior e mais complexo sistema de
grupos sanguneos
Representando um dos sistemas de maior interesse
clnico
Por seu envolvimento na doena hemoltica perinatal,
reaes transfusionais hemolticas e nas anemias
hemolticas auto-imunes
Os principais antgenos do Sistema Rh so: D, C/c, E/e.
Esses cinco antgenos so os que mais induzem a
produo dos anticorpos que esto relacionados com a
maioria dos problemas associados a aloimunizao por
transfuso e gestao

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Quais as provas realizadas para definir a

tipagem ABO?
A tipagem ABO definida atravs das provas direta e
reversa.
Na prova direta pesquisa-se os antgenos do sistema
ABO que esto presentes nas hemcias do indivduo
Enquanto que, na prova reversa procura-se determinar
os anticorpos do sistema ABO que esto presentes no
soro ou no plasma do indivduo

Tipagem ABO
Indivduos

A apresentam apenas antgenos A

B apresentam apenas antgenos B
AB
apresentam antgenos A e B
O no apresentam nenhum dos dois
antgenos

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Tipagem ABO
Antgeno na superfcie da hemcia

+
Anticorpos conhecidos
( Anti-A, Anti-B e Anti-AB)
Ac(s) correspondente (s) srico (s).

+
Uso de hemcias padro A1, A2 e B

Tipagem ABO
Sistema que envolve a existncia de anticorpos naturais e
regulares da classe IgM, frios, portanto aglutinantes, que no
necessitam de artifcios!

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Grupos

Tipagem direta

Tipagem reversa

Testar as hemcias com os

anti-soros:

Testar o plasma com as

hemcias:

Anti-A

Anti-B

Anti-A,B

A1

A
B
AB
O

Tipagem- aglutinao em tubo

POSITIVO

POSITIVO (fraco)

NEGATIVO

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Tipagem ABO/Rh em
microplaca
Pacientes 1 2
A

7 8 9 10 11 12

B
AB
HA1
HA2
HB
D
Ctle

Tipagem ABO/Rh em gel

A RhDpositivo
4+

neg

4+

4+

neg

neg

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Tipagem ABO/Rh em gel

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Reagentes para tipagem direta

Anti
A

Anti
B

Anti
AB

Anti
D

Ctle
Neg
Rh

Anti
CDE

Reagentes para tipagem reversa

Hem.
A1

Hem.
A2

Hem.
B

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Procedimentos para tipagem ABO/ RH

O procedimento de tipagem ABO/Rh determina o grupo

sanguneo ABO/Rh em doadores de sangue, gestantes,
recm-nascidos e pacientes

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Procedimentos para tipagem ABO/ RH

DESCRIO DA TCNICA:
1- Identificar um tubo com o nmero da amostra do paciente e
preparar uma suspenso de hemcias a 5% (19 gotas de salina + 1
gota do concentrado de hemcia)

2- Identificar 7 tubos com o nmero da amostra do paciente e as

seguintes identificaes:
Anti-A, Anti-B, Anti-AB, Anti-D, Controle(Ctrl), Reversa da
hemcia A (HA), Rervesa da hemcia B (HB)

3- Colocar uma gota dos anti-soros correspondentes Anti-AB, AntiA, Anti-B, Anti-Rh(D), Ctrl Rh em cada tubo

4- Adicionar uma gota da suspenso de hemcias do paciente aos

tubos com os anti-soros.

Procedimentos para tipagem ABO/ RH

DESCRIO DA TCNICA:
5- Nos tubos RA e RB, colocar duas gotas de soro/plasma em cada
e adicionar uma gota de suspenso do reagente de hemcias A1 e
B, respectivamente

6- Homogeneizar todos os tubos e centrifug-los por 15 segundos

de 3000 a 3400 rpm. Agitar levemente os tubos, realizando a leitura,
um a um, sobre um fundo branco ou aglutinoscpio. Ler e anotar a
intensidade da aglutinao (de 0 a 4+)

7- Comparar os resultados de aglutinao obtidos nas provas direta

e reversa e classific-los conforme tabela abaixo:

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Direta

Reversa

Anti-A

Anti-B

A2

Anti-AB A1

- +

Interpretao
Grupo sanguneo A

Direta= provvel A ( anti-soro A reconheceu as hemcias

que esto sendo tipadas)
Reversa = presena de anti-B ( anticorpo natural e regular
do paciente reconheceu as hemcias B)
No h discrepncia entre direta e reversa = indivduo do
grupo A tem de ter anti-B circulante

Direta

Reversa

Anti-A

Anti-B

A2

Anti-AB A1

+ + -

Interpretao
Grupo sanguneo B

Direta= provvel B ( anti-soro B reconheceu as hemcias

que esto sendo tipadas)
Reversa = presena de anti-A ( anticorpo natural e regular
do paciente reconheceu as hemcias A)
No h discrepncia entre direta e reversa = indivduo do
grupo B tem de ter anti-A circulante

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Direta

Reversa

Anti-A

Anti-B

A2

Anti-AB A1

Interpretao
Grupo
sanguneoAB

Direta= provvel AB ( anti-soro AB reconheceu as hemcias

que esto sendo tipadas)
Reversa = no detectou presena de nenhum anticorpo (o
paciente no possui anticorpo natural e regular)
No h discrepncia entre direta e reversa = indivduo do
grupo AB NO pode ter anticorpo natural e regular
circulante

Direta

Reversa

Anti-A

Anti-B

A2

Anti-AB A1

+ + +

Interpretao
Grupo sanguneo O

Direta= provvel O ( anti-soros A, B e AB no reconheceram

as hemcias que esto sendo tipadas)
Reversa = detectou presena de todos os anticorpos (o
paciente possui anticorpo natural e regular contra A e B)
No h discrepncia entre direta e reversa = indivduo do
grupo O possui anticorpo circulante contra Ag A e B

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Tipagem Rh

Sistema que envolve a existncia de

anticorpos imunes da classe IgG,, quentes,
portanto no aglutinantes, que necessitam
de artifcios!
tipagem feita mais rapidamente, pois a
biotecnologia disponibiliza anticorpos IgM
para facilitar a identificao do antgeno
na hemcia do paciente

Tipagem Rh
Determinao do Rh (D)
Anti-Rh (Anti-D)
Controle Rh
Os anticorpos monoclonais IgM presentes no reagente
causam aglutinao direta macroscpica das hemcias
portadoras do antgeno D e da grande maioria de suas
variantes (chamadas genericamente de D fraco ou Du).

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Tipagem Rh
Determinao do Rh (D)
Anti-Rh (Anti-D)
Controle Rh
O reagente Controle Rh possui formulao idntica do
reagente Anti-D exceto no que se refere presena do
anticorpo
O que possibilita a deteco de reaes falso-positivas
causadas
por
rouleaux,
aglutininas
frias
ou
autoanticorpos

Tipagem Rh
Determinao do Rh (D)
Anti-Rh (Anti-D)
Controle Rh
Negativo
Tcnica para excluso
do D fraco

Positivo

Rh positivo

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Tipagem Rh
Determinao do Rh (D)
Anti-Rh (Anti-D)
Controle Rh
Negativo
Tcnica para excluso
do D fraco

As formas mais fracas das

variantes D so detectadas
pelos
anticorpos
IgG
do
reagente, quando se leva o
teste at a fase de Antiglobulina
Humana (AGH)

Tipagem Rh
Determinao do Rh (D)
Anti-Rh (Anti-D)
Controle Rh

Negativo

Se o teste for negativo ou

duvidoso: Incubar os tubos em
Banho-Maria a 37 C por 15 a 30
minutos
Centrifugar* os tubos
Ressuspender delicadamente o
boto de hemcias e observar a
presena ou no de aglutinao.
Anotar o resultado

Tcnica para excluso

do D fraco
Caso

a
leitura
permanea
negativa, proceder a pesquisa
para D fraco

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Tipagem Rh
Tcnica para pesquisa das formas fracas do antgeno D
Lavar imediatamente as hemcias com resultado
negativo (ou duvidoso) por 3 vezes com soluo salina
0,9%
Remover completamente a soluo salina 0,9% aps
a ltima lavagem
A cada tubo adicionar 2 gotas do Soro Anti-IgG, misturar
bem e centrifugar os tubos
Ressuspender delicadamente o boto de hemcias e
observar a presena ou no de aglutinao
*Centrifugao sugerida: 15 segundos a 3.400 r.p.m

A interpretao do resultado para o antgeno D

Rh D positivo = presena de aglutinao

Rh D negativo= a ausncia de aglutinao no teste
indica a ausncia do antgeno correspondente

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Interpretao da tipagem RhD

Anti-D CTRL

Interpretao

Paciente 1

RhD positivo

Paciente 2

RhD negativo

Paciente 3

invlido

Paciente 4

invlido

Padro normal das reaes de tipagem

sangunea

O = significa negativo
*Qualquer reao diferente expressa neste quadro configura-se como discrepncia

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CAUSAS DE ERROS NAS

TIPAGENS ABO E RH
TROCA DOS TUBOS (23% das amostras
chegam ao HB sem identificao)
ERROS DE INTERPRETAO

Erros Tcnicos

Identificao incorreta
Uso incorreto de reagentes
Falha ao adicionar o reagente
Contaminao bacteriana de reagentes
Vidraria mal lavada
Equipamentos descalibrados
Super ou sub-centrifugao
Erro de interpretao e/ou transcrio de
resultados

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Dificuldades na tipagem sangunea

DIFICULDADES NAS TIPAGENS
ABO E Rh
O QUE FAZER???
obrigatria a concordncia entre as
duas fases da tipagem
Jamais concluir um grupo sanguneo
se houver discordncia entre fase
direta e reversa
O grupo sanguneo de RN ser
emitido SEMPRE como PROVVEL
GRUPO

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