09-05-2016

Infees do Trato Respiratrio

Diagnstico Laboratorial

Aula Prtica
PROTOCOLO 5

Microbiologia Clnica 2015/2016

M Cu Lamas

Infees do Trato Respiratrio

Altas (laringite, epiglotite, faringite, amigdalite, otite, .).
Baixas (bronquite, bronquiolite, pneumonia, infec. pleurais).

Incidncia, morbilidade e mortalidade elevadas

Os agentes responsveis por estas infees (ITR inferior) variam
de acordo com a causa da doena.

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Microrganismos causadores de pneumonia

Pneumonia
Comunidade

Pneumonia
Nosocomial

Pneumonia
Imunocomprometidos

Streptococcus pneumoniae

Enterobactereaceae

Streptococcus pneumoniae

(E.coli, K. pneumoniae)

Haemophylus influenzae

Pseudomonas aeruginosa

Pneumocystis carinii

Mycoplasma pneumoniae

Acinetobacter spp.

Mycobacterium tuberculosis

Legionella pneumophila

Legionella pneumophila

Mycob. Avium complex

Cocos Gram-positivos

Cryptococcus neoformans

Staphylococcus aureus

(S.aureus, Strep. pneumoniae)

Streptococcus pyogenes

Fungos

Aspergillus spp.

(Candida spp. Aspergilus)

Klebsiella pneumoniae

Vrus Sincicial Respiratrio

Parainfluenza A

Candida spp.

Chlamydia pneumoniae

Nocardia; Rhodococcus equi

Vrus Influenza A

Citomegalovrus

Diagnstico Laboratorial
Produtos a estudar
Exames
Microbiolgicos

Expectorao
(Aceitvel)

Expectorao induzida
(Aceitvel)

Aspirado + Lavado
Brocoalveolares
(Bons)

Bipsia pulmonar
(Excelente)

Gram
(exame microscpico)

Exame
Cultural
Pesquisa
Mycobacterium
Exame
Micolgico
Pesquisa
Pneumocystis carinii

Lavado

Pesquisa
Legionella
Pesquisa
Anaerbios

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Exame Bacteriolgico
de
Secrees Respiratrias
(Expetorao)

Produto biolgico: Amostra de obteno fcil e rpida.

Procedimento tcnico utilizado para determinar o
agente etiolgico de uma infeo respiratria
(ex: pneumonia bacteriana)

Exame bacteriolgico de expectorao

Interpretao
dos
resultados

DIFCIL

Contaminao da amostra
com flora comensal da orofaringe
Portadora de:
Haemophylus influenza, Streptococcus pneumoniae,
Enterobacteriaceae, Pseudomonas, Staphylococcus aureus,
anarobios estritos, entre outros.

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Exame bacteriolgico de
expetorao:
colheita

1.
2.
3.
4.

SE TIVER(RETIRAR PROTESE)
GARGAREJAR C/ SOLUO SALINA
TOSSIR PROFUNDAMENTE
EXPETORAR ESPONTANEAMENTE

1. Transporte imediato (at 1 a 2 h )

2 10 ml

2. Conservao at exame cultural: 4C

AMOSTRA

Casos especiais: colheita por aspirao ou

(broncofibroscopia). PROCEDIMENTOS INVASIVOS

lavagem

broncoalveolar

Caso clnico (exerccio prtico)

No dia 03/03/11 deu entrada no Servio de Urgncia do Hospital

de Todos os Santos, um indivduo do sexo feminino, com 77
anos. Apresentava uma temperatura axilar de 39,0C, tosse
produtiva com expetorao mucopurulenta.
O raio-X torcico revelou mancha suspeita esquerda,
sugestiva de pneumonia.
O resultado do hemograma revelou uma leucocitose com
neutrofilia acentuada. No servio de microbiologia foram
recebidas duas amostras de sangue para hemocultura e uma
amostra de secrees brnquicas para exame bacteriolgico.

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Procedimento Tcnico - material e reagentes

Executar este procedimento sempre na cmara de fluxo laminar
Meio de gelose de sangue
Placas de Petri
Meio de Gelose de Chocolate
Soro fisiolgico estril
Meio de Gelose de MacConkey
Lminas de vidro
Meio HTM
Ansas de 1 e 10 microlitros
Meio Blood Agar Base
Zaragatoas
Pina
Corantes de Gram
Microscpio + leo de imerso
Bico de Bunsen
Galeria de identificao Api NH
Reagentes de revelao Zym B e James (galeria Api)
Discos de Fatores de Crescimento X, V e XV
Denstometro ou padro/escala 0,5, 2 e 4 MacFarland
Pipetas Pasteur
Parafina liquida (para tapar microtubos da galeria Api)
Reagente Indol Spot

Procedimento Tcnico

1.

Na
camara
de fluxo
laminar

Com auxilio de uma ansa transferir a amostra de

expetorao para uma placa de Petri esteril.

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Infeces do Tracto Respiratrio Diagnstico Laboratorial

Procedimento Tcnico

2.

Com uma pipeta Pasteur estril, adicionar 3 gotas de soro fisiolgico

estril num dos bordos da placa. Com ansa esteril selecionar um
pouco de amostra da parte mais purulenta e homogeneizar at obter
uma amostra mais fluida.

Exame directo

3.

VISUALIZAR AO MICROSCPIO

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3. Exame direto
Avaliao da qualidade do produto (grau de contaminao com saliva)

Com objetiva de 10x

Polimorfonucleares (100X)
Clulas epiteliais de descamao(100X)

Com objetiva de 100x

(1000X):
observar
caractersticas
tintoriais
e
associao
dos
microrganismos presentes
Apontar resultados, quantificando em ++++:

escassos +, alguns++, muitos+++, inmeros ++++

Infeces do Tracto Respiratrio Diagnstico Laboratorial

3. Exame directo
Avaliao da qualidade do produto (grau de contaminao com saliva)

Cocobacilos Gram - pleomrficos

Polimorfonucleares

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3. Exame direto
Avaliao da qualidade do produto (grau de contaminao com saliva)

Critrio
Todos os produtos que apresentem:
< 10 clulas epiteliais

+ > 25 polimorfonucleares (100x)

Proceder ao exame cultural

4. Exame Cultural
Faz-se em meios enriquecidos com sangue, capazes de promover o
crescimento dos agentes patognicos pulmonares mais exigentes (HI e
PN)*, e em meios seletivos para bacilos Gram negativo.

HI Haemophylus influenza e PN Streptococcus pneumoniae

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4. Exame Cultural

Proceder a uma sementeira semi-quantitativa com ansa

calibrada de 10 l e esgotar no 1quadrante. Com ansa
de 1 l efetuar esgotamento em mais trs quadrantes
seguidos.

4. Exame Cultural
Incubar os meios a 35-37C/ 18 a 24 horas.
Colocar meios enriquecidos em atmosfera de 5-10% CO2.

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5. Interpretao e leitura das sementeiras

Observe e efetue a semi-quantificao do crescimento,
atendendo a:
Presena de crescimento bacteriano s no 1. quadrante

flora escassa
Presena de crescimento bacteriano no 1., 2., 3.
quadrantes
flora moderada
Presena de crescimento bacteriano nos quatro
quadrantes
flora abundante

5. Interpretao e leitura das sementeiras

Flora abundante com predomnio de colnias acinzentadas, pequenas,
redondas, convexas ou achatadas, translcidas com a zona central mais
opaca e com cheiro caracterstico a ninho de ratos, sugestivas de
Haemophylus

Repique microrganismo em predomnio para gelose de chocolate e efetue

um Gram das colnias suspeitas (cocobacilos Gram (-) ?)

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6. Testes de Identificao (Cocobacilos Gram -)

Demonstrao da exigncia dos factores de crescimento X e/ou V.
1. Numa ampola de soro fisiolgico estril,
preparar uma suspenso bacteriana com uma
turvao de 0,5% na escala de MacFarland.
2. Com uma zaragatoa, proceder
inoculao de uma placa de meio Blood Agar
Base
em
trs
planos
diferentes,
mergulhando-a na suspenso previamente
preparada.
3. Colocar superfcie do meio,
formando um tringulo perfeito, os
discos de X, V e XV. Incubar a 37C em
atmosfera de 5-10% CO2.
Meio Blood Agar Base meio de cultura nutritivo
para crescimento de microrganismos. (Constituido
por: extrato de carne, peptona, NaCl e Agar)

6. Testes de Identificao (Cocobacilos Gram -)

Aps 24horas, interprete e registe os resultados obtidos,

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Infeces do Tracto Respiratrio Diagnstico Laboratorial

6. Testes de Identificao (Cocobacilos Gram -)

Testes Bioqumicos (Galeria Api NH)
Com o auxilio da bula fornecida, execute uma galeria Api NH.
Incube por duas horas a 37C e proceda sua leitura e interpretao.

6. Testes de Identificao (Cocobacilos Gram -)

Determinao do Bitipo
Tendo

em

conta

comportamento da bactria
face s provas do Indol, ODC
e Ureia, caracterize o Bitipo

do

microrganismo

em

estudo. Recorra bula do

Api

NH

para

interpretar

resultados.

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7. ANTIBIOGRAMA
1. Numa ampola de soro fisiolgico estril, preparar uma

suspenso bacteriana com uma turvao de 0,5% na

escala de MacFarland.
2. Com uma zaragatoa, proceder inoculao de uma placa
de meio HTM em trs planos diferentes, mergulhando-a
na suspenso previamente preparada.
3. Colocar superfcie do meio, os discos de antibitico
espaados 2mm. Incubar a 37C em atmosfera de 5-10%
CO2.

Meio HTM - meio especificamente preparado para testar a suscetibilidade do

Haemophilus influenzae
(Constituido por: Muller Hinton Agar, extrato de levedura, Hematina e NAD)

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8. Apresentao de resultados
Registe todos os resultados obtidos no seu dirio de
laboratrio, atendendo aos seguintes tpicos:
Gram da amostra
(escassos +, alguns++, muitos+++, inmeros ++++).
Resultado da cultura bacteriana (semi-quantificao).
Gram das colnias suspeitas.
Testes de Identificao: resultados.
Antibiograma

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