PRACTICA No-1

OBTENCION DE AGLUTININAS

OBJETIVO: Obtener un suero inmune mediante la inoculacin de conejos de un antgeno

celular (eritrocitos) y comprobar su poder aglutinante ponindolo en contacto con su antgeno
homologo.
Introduccin Los principios de la prueba de antiglobulia son los siguientes: como los
anticuerpos y el complemento de origen humano (globulinas) se inyectan en un conejo, este
produce en respuesta antiglobulinas humanas. Las molculas de antiglobulina actan como un
puente, que une a los anticuerpos incompletos a los glbulos rojos. Existen dos variantes de
esta prueba. Cuando la antiglobulina humana se emplea para detectar anticuerpos unidos a
eritrocitos in vivo se le llama prueba de antiglobulina directa o coombs directa.
Fundamento: Los eritrocitos procedentes de una especie son magnficos antgenos cuando se
inyectan a animales de otras especies taxonmicamente alejadas. Los anticuerpos que se
obtienen son contra los determinantes antignicos presentes en la membrana del eritrocito. En
el presente ejercicio se van a preparar eritrocitos humanos para su utilizacin inmediata en la
inmunizacin de conejos, para obtener hemoglobina anti eritrocito.

MATERIAL DE LABORATORIO:
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MATERIAL POR EQUIPO:

Solucin salina isotnica.

1 jeringa de 5 ml. Estril.
2 jeringas para insulina.
1 pipeta semiautomatica
de 1000 Ul
1 pipeta semiautomatica
de 50 Ul

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Puntillas para pipetas

1 aplicador de madera.
Centrifuga.
Tubo EDTA

Rastrillo
Cloro
Detergente lquido
Guantes desechables
Torundas con alcohol
Recipiente para desechos
Obtener una muestra de
sangre con anticoagulante
por puncin venosa de una
persona de tipo sanguneo
A y B Rh positivo.
Un conejo blanco de ojos
rojos con peso mayor a 2.5
Kg.
Solucin de yodo o Azul
cicatrizante.

METODOLOGA 1
Preparacin de suspensin de eritrocitos A B
1.- Limpiar la mesa de trabajo con solucin de cloro.
2.-Posteriormente efectuar 3 lavados a los eritrocitos con solucin salina estril centrifugando
a 2,000 r.p.m. durante 3 minutos despus de cada lavado.
3.-Descartar cuidadosamente el sobrenadante, desecharlo.
4.-Tomar con unas pipetas estril 1ml. De paquete celular y realizar suspensin al 10%, que es
como se va a inocular a los conejos. (nota: dosis 1ml por kg de peso del animal).

METODOLOGA 2
Inoculacin al conejo
1.-para llevar acabo la inmunizacin de los conejos se utiliza exclusivamente la va
endovenosa; la venta marginal externas de las orejas es la ms adecuada para realizar las
inyecciones. Inocular 10 veces:
Las inyecciones se harn en los das:
1,
17.

2,

3,

4,

6,

8,

10,

13,

15,

7.-Al trmino de la serie de inyecciones se deja descansar al animal durante una semana y se
procede a hacer la sangra de prueba, para esto se toman 2ml de sangre por puncin de la
vena marginal de la oreja, se coloc en un tubo rojo, se deja coagular y posterior centrifugar a
2500 r.p.m durante 3 min, se separa el suero y se investiga la presencia de anticuerpos
ponindolo en contacto con los eritrocitos inoculados en una placa de porcelana excavada
para observar la aglutinacin.
9.-Para lograr lo anterior, se limpia perfectamente la oreja
dilata la vena frotndola suavemente con un algodn.

con alcohol, posteriormente se

10.- el suero obtenido se guarda en un tubo, para la realizacin de posteriores prcticas.

SANGRADO (TOMA DE MUESTRA SANGUNEA).

El sangrado se efecta antes y despus del protocolo de inmunizacin en cada uno de los
animales.
El sangrado previo es indispensable para contar con el testigo negativo.
Al suero obtenido despus de la inmunizacin, generalmente despus de 4 a 7 das de la ltima
inoculacin, se le determinar el ttulo de anticuerpos, si ste es alto, los conejos se sangrarn
en blanco por puncin cardaca.
SANGRADO DE OREJA DEL CONEJO.

Mtodo:
Introducir al conejo en el cepo.
Localizar la arteria central de la oreja y limpiar con una torunda con alcohol.
Sangrar al conejo con una jeringa de 5 mL con aguja de 20 x 25 mm.
Obtener la cantidad necesaria de sangre, retirar la aguja y presionar el sitio de la puncin con
un algodn.

Fig. 5 Sujecin correcta de un conejo.

Fig. 6 Sujeccin alterna de un

conejo.

INMUNIZACIN VA INTRAVENOSA.

Mtodo:
Colocar al conejo en el cepo.
Localizar las venas marginales de la oreja del animal.
Sujetar bien la oreja con los dedos medio y anular.
Limpiar la zona de inmunizacin con alcohol al 70%.
Proceder a inyectar al animal. Si se va a llevar a cabo una serie de
inmunizaciones, es recomendable comenzar en el extremo de la oreja ms
alejado de la cabeza y se procede a inyectar hacia la base de la oreja.
INMUNIZACIN VA SUBCUTNEA.

Mtodo:
Elegir la zona de inoculacin, cortar el pelo del animal con tijeras y limpiar con
una torunda.
Levantar ligeramente la piel del conejo e introducir la aguja lateralmente,
aproximadamente una tercera parte de sta, y depositar el antgeno. No debe
formarse ppula en el sitio de la inoculacin.
INMUNIZACIN VA INTRADRMICA.

Mtodo:
Rasurar el lomo del animal con un rastrillo
Posteriormente limpiar la zona con un trapo hmedo
Introducir la aguja de 22 x 32 mm en la dermis del animal con el bisel hacia
arriba. Una vez dentro de la piel, girar 180 o y depositar el inculo. En el sitio de
la inoculacin se debe observar la formacin de una ppula.
INMUNIZACIN VA INTRAMUSCULAR.

Mtodo:
Desinfectar la parte externa del muslo del animal.
Fijar con los dedos la zona seleccionada para la inyeccin.

Introducir la aguja de la jeringa con un movimiento firme hasta su insercin en

la masa muscular.
Depositar el inculo lentamente y retirar la jeringa en forma rpida.
Presionar con una torunda el sitio de la inyeccin.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS.
1.
2.
3.
4.

Campbell, D.H.; Garvey, J.S.; Cremer, N.E.; Sussdorf, D.H. 1970. METHODS IN
IMMUNOLOGY. 2. ed. W. A. Benjamin. Editor.
Hudson, L.; Hay, F.C. PRACTICAL IMMUNOLOGY. Editorial Blackwell Scientific
Publications.
Williams, C; Curtis, A.; Chase, M.W. 1967. METHODS IN IMMUNOLOGY AND
IMMUNOCHEMISTRY. Editorial Academic Press.
Kabat, E.A.; Mayer, M.M. 1968. INMUNOQUMICA EXPERIMENTAL. 1. ed.
Editorial La Prensa Mdica Mexicana.