Journal of the Mexican Chemical Society

ISSN: 1870-249X
editor.jmcs@gmail.com
Sociedad Qumica de Mxico
Mxico

Hernndez Santoyo, Alejandra; Garca Hernndez, Enrique; Rodrguez Romero, Adela

Celulosomas: sistemas multienzimticos
Journal of the Mexican Chemical Society, vol. 43, nm. 3-4, mayo-agosto, 1999, pp. 137-142
Sociedad Qumica de Mxico
Distrito Federal, Mxico

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Revista de la Sociedad Qumica de Mxico, Vol. 43, Nms. 3, 4 (1999) 137-142

Revisin

Celulosomas: sistemas multienzimticos

Alejandra Hernndez-Santoyo,* Enrique Garca-Hernndez y Adela Rodrguez-Romero
Departamento de Bioqumica, Instituto de Qumica, Universidad Nacional Autnoma de Mxico,
Circuito Exterior, Ciudad Universitaria, Coyoacn 04510. Mxico, D.F.
Tel. 52(5) 622 45 68. Fax 52(5) 616 22 17. E-mail: hersan@servidor.unam.mx.
Dedicada a la memoria de la Dra. Lydia Rodrguez-Hahn

Resumen. Los celulosomas son complejos multienzimticos que actan sinrgicamente para catalizar la hidrlisis de la celulosa. Estos
estn formados esencialmente por varios tipos de celulasas que estn
soportadas en una unidad de estructuracin. Los celulosomas se encuentran unidos entre s formando policelulosomas, que se observan
como protuberancias en la superficie celular de bacterias celulolticas. Una combinacin de tcnicas genticas, bioqumicas, cristalogrficas y microscpicas han permitido profundizar en el conocimiento
de la celulosa y sus mecanismos de hidrlisis. En este trabajo se presenta una revisin actualizada de los avances en el estudio de estos
complejos.

Abstract. Cellulosomes are multienzymatic complexes whose components interact in a cooperative way (synergically) to hydrolyze cellulose. They are essentially composed of several types of cellulases
assembled on a scaffolding subunit. The cellulosomes are organized
in polycellulosomal organelles, which form protuberances on the surface of cellulolytic bacteria. A combination of genetic, biochemical,
crystallographic and microscopic techniques have helped to obtain
more insight into the structure of cellulose and of its hydrolysis
mechanism. In this work we present an actualized review of the study
of these complexes.

Introduccin

acuerdo a la homologa en la secuencia de los aminocidos en

su dominio cataltico. De este grupo de enzimas se han determinado las estructuras tridimensionales de 15 familias, las
cuales coinciden con 5 diferentes tipos de plegamientos: barril
()8 , el motivo jellyroll (cadena polipeptdica envolviendo a un barril ), barril () distorsionado, barril y barril
(/)6 [7-9]. Por otra parte, tambin han sido clasificadas de
acuerdo al dominio que une a la celulosa (DUC), agrupndolas
en 10 familias [10]. La funcin principal del DUC es la de
ayudar al dominio cataltico a unirse al sustrato, aunque algunos DUC tambin rompen las interacciones no covalentes
entre las cadenas de la celulosa [11, 12].
Desde hace varias dcadas se sabe que ciertas bacterias y
hongos producen diferentes tipos de celulasas que requieren
para hidrolizar a la celulosa [9, 13-15]. Originalmente se pensaba que sus sistemas celulolticos estaban formados por varios tipos de celulasas libres que actuaban sinrgicamente
sobre el sustrato insoluble. Posteriormente se descubri en la
bacteria termfila anaerobia Clostridium thermocellum, un
complejo multienzimtico al que se llam celulosoma [16]. La
existencia de este tipo de complejos ha sido demostrada en
otras especies del gnero Clostridium [17-19] y ms recientemente en otras bacterias y hongos evolutivamente ms distantes [9, 7, 20]. Sin embargo, cabe sealar que muchos de los
sistemas celulolticos, particularmente en microorganismos
aerobios, estn constituidos por enzimas libres.

La celulosa es el polmero ms abundante en la biosfera, est

formada por residuos de glucosa unidos por enlaces -1,4 y es
el constituyente principal de la pared celular de las plantas.
Esta puede estar presente en un estado relativamente puro o en
asociacin con otros compuestos como la hemicelulosa y las
ligninas. Tambin se encuentra como constituyente de las
algas y tunicados y es sintetizada por algunas bacterias como
Acetobacter xylinum y por hongos [1].
El hecho de que la celulosa es el polmero ms abundante
en la naturaleza, confiere una gran importancia ecolgica,
industrial y econmica a su despolimerizacin, por lo que es
necesario conocer los requerimientos estructurales y mecansticos para la hidrlisis de sus enlaces glucosdicos. Aunque la
unidad repetitiva de este biopolmero es un disacrido (celobiosa), la celulosa est organizada en un complicado estado
paracristalino y debido a esta complejidad estructural, un solo
tipo de enzimas no puede hidrolizarla eficazmente, por lo que
se requiere de diferentes celulasas trabajando cooperativamente o sinrgicamente [2-4].
Las celulasas son glicosil hidrolasas o glicohidrolasas, las
cuales hidrolizan oligosacridos y polisacridos de glucosa
unidos por enlaces -1,4 [5, 6]. Estas enzimas estn constituidas por dominios que son estructural y funcionalmente diferentes. Las celulasas han sido clasificadas en familias de

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Alejandra Hernndez-Santoyo et al.

Celulosoma

Componentes del celulosoma

Los celulosomas son complejos multienzimticos cuyos componentes actan de manera sinrgica para hidrolizar a la celulosa [21]. Inicialmente dicho complejo fue descrito como un
factor antignicamente activo que se une a la celulosa y que se
localiza en la superficie de la clula [22]. Los celulosomas
funcionan como estructuras exocelulares especializadas, que
catalizan la hidrlisis de celulosa y hemicelulosa. En general,
tres tipos de enzimas forman los sistemas celulolticos: (1)
endocelulasas (endoglucanasa o 1,4--D-glucan 4-glucanohidrolasa; E.C. 3.2.1.4), (2) exocelulasas (celulosa 1,4--D-celobiosidasa o 1,4--D-glucan celobiohidrolasa; E.C. 3.2.1.91)
y (3) -D-glucosidasas (-D-glucosido glucohidrolasa; E.C.
3.2.1.21.) [3, 4, 23].
La heterogeneidad fsica de los sustratos y la complejidad de los sistemas celulolticos hacen que su estudio no sea
simple. Esto hace necesario que se realicen una serie de ensayos que permitan identificar cada tipo de celulasa involucrada en un complejo. Un solo ensayo no podra proporcionar una imagen completa de la naturaleza de una enzima,
por lo que se recomienda el uso de varios ensayos para caracterizar el sistema y actualmente se han establecido varios
mtodos de medicin e identificacin de celulasas (Tabla 1)
[2, 23-27].

Enzimas
Endo-1,4--glucanasas
Las endo-1,4--glucanasas rompen los enlaces glicosdicos internos de la celulosa en forma aleatoria, lo que provoca una
rpida disminucin en la longitud de la cadena de los -glucanos con un incremento lento de los grupos reductores [28].
Las endoglucanasas son clasificadas en familias de acuerdo a
sus propiedades hidrofbicas [29] y su dominio cataltico [11].
Sus sustratos incluyen a la carboximetilcelulosa y a la celulosa
amorfa tratada con H3 PO4 o lcali. La celulosa cristalina, as
como las fibras de algodn o el avicel no son atacados de
manera efectiva por esta enzima. El porcentaje de hidrlisis de
celooligosacridos de cadenas largas es alta y se incrementa
con el grado de polimerizacin, siendo la celobiosa el principal producto de la reaccin [23].
Exo-1,4--glucanasas
Las exo-1,4--glucanasas, tambin llamadas celobiohidrolasas, actan cortando la celobiosa del extremo no reductor de
la cadena y en algunas ocasiones liberan pequeas cantidades
de glucosa. El porcentaje de hidrlisis de la celobiosa y de
celooligosacridos de cadenas largas se incrementa con el
grado de polimerizacin de las mismas [9, 23, 30].

Tabla 1. Mtodos de medicin de la actividad celuloltica [23].

Enzima

Sustrato

Ensayo

Celulasas totales

Algodn

Estimacin de celulosa en el residuo

Liberacin de azcares reductores
Disminucin del peso
Disminucin en la tensin
Liberacin de azcares reductores

Papel filtro
Hidrocelulosa
Avicel

Celobiohidrolasas
(exocelobiohidrolasa,
exocelulasa,
Avicelasa)

Endo-1,4--glucanasa
(CM-celulasa,
endoglucanasa y
endocelulasa)

Avicel
Hidrocelulosa
Celulosa morfa
Celooligosacridos

Liberacin de azcares reductores

Carboximetilcelulosa (CM)
Hidroxietilcelulosa
Celooligosacridos
Algodn

Liberacin de azcares reductores

Disminucin en viscosidad
Incremento en el poder reductor o anlisis por HPLC
Crecimiento en alcali
Liberacin de azcares reductores
Disminucin en la turbidez

Celulosa amorfa

-glucosidasa

orto-o-para-nitrofenil--D-glucosidos
Salicina
Esculina
Celobiosa
Celooligosacridos

Incremento en el poder reductor o anlisis por HPLC

Liberacin de orto-o-para-nitrofenol
Liberacin de glucosa

Incremento en el poder reductor.

Celulosomas: sistemas multienzimticos

-glucosidasas
Las -glucosidasas no son propiamente celulasas. No obstante, son componentes muy importantes de los sistemas
celulolticos, ya que completan la hidrlisis de cadenas
pequeas celooligosacridos y de celobiosa, liberados por
otras enzimas, hasta glucosa. Los sistemas celulolticos con
niveles bajos de -glucosidasa tienen una baja actividad,
debido a la inhibicin de las endoglucanasas y las celobiohidrolasas por la celobiosa. Estas enzimas hidrolizan nicamente celooligosacridos a una razn decreciente con el grado de polimerizacin y no son especficas para enlaces -1,4
[23, 30].

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Tabla 2. Subunidades celulosomales de Clostridium thermocellum.

Quitinasa A

Xilanasa Y [71]

Xilanasa A [63]

Endoglucanasa F [72]

Endoglucanasa B [64]

Xilanasa B [63]

Xilanasa Z [65]

Endoglucanasa E [73]

Exoglucanasa CBDIV [66]

Endoglucanasa G [74]

Liquenasa B o laminarasa 1 [67]

Celulasa K

Celulasa S [68]

Endoglucanasa D [75]

Celulasa J [69]

Endoglucanasa A [64]

Xilanasas
Adems de las enzimas ya mencionadas, tambin se ha detectado la presencia de actividad xilanoltica en polipptidos del
celulosoma de C. thermocellum [30, 31].

Endoglucanasa H [70]

Xilanasa C [76]

Protenas que unen celulosa

El celulosoma se ha descrito como uno de los sistemas enzimticos ms complejos. Este est constituido por mltiples cadenas polipeptdicas cuyo nmero vara de un organismo a otro e
incluso difiere entre cepas [16, 31]. El nmero exacto de
polipptidos no se conoce porque algunos de ellos producen
mltiples bandas en geles de electroforesis, dependiendo de la
asociacin con otros polipptidos y a su contenido de carbohidratos o materiales no proteicos. Recientemente, con el
uso de tcnicas de biologa molecular y mediante la expresin
y purificacin de celulasas celulosomales recombinantes, se ha
logrado el estudio de las enzimas nativas en forma ms controlada [43-47]. Adems, han sido usadas tcnicas menos destructivas para la disociacin de los componentes celulosomales lo
que ha permitido el aislamiento y estudio de las enzimas nativas [48-50]. De esta manera, en C. thermocellum se han encontrado diferentes genes que codifican para diversas enzimas
celulolticas, reportndose 18 diferentes enzimas celulosomales
de 10 familias diferentes de glicohidrolasas (Tabla 2).
Las enzimas celulosomales son muy parecidas a las celulasas libres. Ambas contienen dominios catalticos similares;
la principal diferencia estriba en que las celulasas celulosomales tienen un dominio de anclaje, el cual ayuda a la integracin de la enzima dentro del complejo celulosmico, mientras que las celulasas libres no lo tienen [51] (Fig.1A). En bacterias, el dominio de anclaje consta de 70 residuos que se caracterizan por tener una regin de 22 residuos conservados
[52]. Por otra parte, en enzimas presentes en un hongo ha sido
descrito un dominio de anclaje que comprende una sequencia
conservada de 40 aminocidos [53]. Estas secuencias conservadas tienen un motivo que une al calcio. En el caso de las celulasas que no forman parte de los celulosomas, en lugar del
dominio de anclaje, tienen un DUC [8].
Las enzimas celulosomales tambin pueden presentar un
DUC. Los diferentes dominios que componen al complejo,
estn conectados por pptidos de enlace. Estos segmentos son
frecuentemente, aunque no siempre, ricos en residuos de prolina y treonina y/o serina y estn generalmente glicosilados. Las
subunidades que forman el complejo celulosmico estn orga-

Un componente mayoritario del celulosoma de C. thermocellum es un polipptido que no presenta actividad enzimtica
y al que se le ha denominado S1 o SL (posteriormente fue renombrado como CipA), cuya masa molecular oscila entre
185 y 250 kDa. Estos polipptidos pueden actuar como factores que unen celulosa y/o como estructuras que soportan
las subunidades enzimticamente activas del celulosoma [16,
31-35].
Componentes no proteicos del celulosoma
Los carbohidratos constituyen del 6 al 12% del peso de la masa celulosomal. Los azcares identificados en el celulosoma
de C. thermocellum JW20 y YM4 son: xilosa, manosa, galactosa, glucosa y N-acetilglucosamina. Adems, se han detectado disacridos, Zinc y Calcio, este ltimo con un papel probablemente estructural [30, 36-38].
Sinergia entre celulasas
La interaccin sinrgica entre celulasas se ha estudiado en
diversos sistemas celulolticos de bacterias y hongos [3,4].
El concepto de sinergia en la hidrlisis enzimtica de la
celulosa fue introducido por Reese et al. en 1950 [39]. En
1954, Gilligan y Reese [40] dan una evidencia experimental
del fenmeno utilizando mezclas de celulasas de hongos y
cuantificando los azcares reductores, producto de la hidrlisis de la celulosa. A partir de entonces se han realizado numerosos estudios incluyendo la interaccin sinrgica entre
endo y exo celulasas homlogas, es decir, producidas por el
mismo organismo. Tambin se ha estudiado la sinergia cruzada entre endo y exo enzimas de diferentes especies de hongos aerobios y la sinergia entre especies de diferente origen
filogentico, como es entre enzimas de bacterias y hongos
[3, 4, 41, 42].

Estructura del celulosoma

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Fig. 1. Representacin esquemtica de la organizacin de un celulosoma. (A) La plataforma de estructuracin tiene dos tipos de componentes: el dominio que une a la celulosa (DUC) y mltiples dominios
de cohesina (numerados), los que estn unidos entre s por pptidos
de enlace. Las subunidades catalticas se encuentran unidas a un
dominio de anclaje por medio de pptidos de enlace. Algunas subunidades catalticas pueden contener tambin DUC. (B) Representacin esquemtica del modo de accin de un policelulosoma, donde se
muestra la superficie celular con las protubozimas y el cambio conformacional que sufren al unirse a la celulosa.

nizadas por su interaccin con una subunidad estructural especializada (scaffolding). A la fecha, se ha descrito esta estructura para cuatro especies del gnero Clostridium. Este tipo de
subunidades estructurales son polipptidos muy largos y cada
una de ellas contiene un DUC, uno o ms segmentos hidroflicos conservados de funcin desconocida y copias mltiples de
dominios de cohesina, que son responsables de la unin de las
subunidades catalticas dentro del complejo celulosomal [8,
21]. La estructura de los celulosomas es muy estable, flexible y
la interaccin con el sustrato parece implicar un cambio conformacional. Para romper el celulosoma se requieren temperaturas muy elevadas, sin embargo, las enzimas en forma individual, son fciles de desnaturalizar bajo estas condiciones.

Mecanismo de accin del celulosoma

Los primeros modelos para explicar el mecanismo de accin
de los celulosomas se basaron principalmente en observaciones hechas con microscopa electrnica y una combinacin de
tcnicas bioqumicas, inmunoqumicas y ultraestructurales
[48, 54-56]. Estos modelos fueron apoyados posteriormente
por investigaciones usando biologa molecular [43, 57].

Alejandra Hernndez-Santoyo et al.

El celulosoma de C. thermocellum ha sido el ms estudiado a la fecha. Este comprende numerosas subunidades, que
estn agrupadas en un organelo policelulosomal parecido a
una protuberancia, al cual se le conoce como protubozima.
Estas protuberancias se localizan en la superficie de diferentes
microorganismos [8, 21, 58]. Recientemente, utilizando tcnicas de microscopa electrnica de transmisin y de barrido, se
ha estudiado exhaustivamente la superficie celular de C. thermocellum [8, 54, 59, 60], pudiendo conocerse el ciclo de vida
de la bacteria y su interaccin con la celulosa. En la figura 1B
se muestra un esquema de las protubozimas en sus formas
inactiva y activa, cuando forma una conexin con la misma.
Los celulosomas estn cubriendo la parte exterior de la protuberancia inactiva, formando as los policelulosomas. Estas
protuberancias o protubozimas, al ponerse en contacto con la
celulosa sufren un cambio conformacional, formando una conexin con la misma. El proceso es posteriormente facilitado
por celulasas no celulosomales y al igual que las clulas maduras, los celulosomas son liberados en la matriz extracelular
donde ellos continan su actividad celuloltica [8, 21].
Estudios recientes indican que los celulosomas se encuentran en un gran nmero de microorganismos, pudiendo concluir que estos sistemas se presentan frecuentemente en la naturaleza (Tabla 3).

Tabla 3. Celulosomas identificados en diferentes microorganismos.

Organismo

Referencias

Acetivibrio cellulolyticus
Bacteroides celulosolvens
Butyrivibrio fibrisolvens
Clostridium cellulolyticum

[7, 9, 30, 58]

[7, 30, 58]
[77-81]
[7, 9, 82-84]

Clostridium cellulovorans
Clostridium josui
Clostridium papyrosolvens
Clostridium stercorarium
Clostridium thermocellum
Caldocellulosiruptor saccharolyticus

[9, 17, 30, 85, 86]

[7, 9, 87]
[7, 9, 87]
[9, 88]
[9, 21, 13, 30, 42, 71, 89, 90]
[91, 92, 93]

Fibrobacter succinogenes
Neocallimastix frontalis
Neocallimastix patriciarum
Piromyces orpinomyces
Prevotella ruminicola
Pseudomonas fluorescens
Ruminococcus albus
Ruminococcus flavefaciens
Streptomyces lividans

[94-98]
[99, 100]
[53, 101, 102]
[53, 103]
[9, 104, 105 ]
[9, 93, 106, 107]
[30, 58, 93, 108, 109]
[110-112]
[9, 113, 114]

Thermomonospora fusca.
Trichoderma reesei
Vibrio sp

[9, 115]
[9, 93]
[9, 116]

Celulosomas: sistemas multienzimticos

Por otra parte, se han observado sistemas enzimticos que

actan de manera sinrgica, pero que no son tan complejos
como los celulosomas. Tal es el caso del sistema enzimtico
para la hidrlisis del almidn, en donde la -amilasa, la amilasa, la -glucosidasa, una exo--1,4 glucanasa y la pululanasa actan de manera sinrgica [9, 61]. Asimismo, se han
detectado sistemas enzimticos para la hidrlisis de quitina y
agar [9, 62].

Conclusiones
La presencia de varios sistemas celulolticos ha sido detectada
en diferentes microorganismos. El descubrimiento del celulosoma como un complejo multienzimtico abri el camino al
estudio del mecanismo de hidrlisis de la celulosa. En este
campo se han logrado grandes avances gracias a la informacin obtenida por tcnicas tales como la microscopa electrnica, biologa molecular y difraccin de rayos X. Sin embargo, an quedan muchas preguntas por contestar para entender
la relacin precisa entre la estructura cristalina de la celulosa y
la hidrlisis de la misma.

Agradecimientos
Agradecemos a la DGEP por el apoyo con el proyecto 201343
y al proyecto UNAM-Cray SC-010699.

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