I.

INTRODUCCIN

Este presente trabajo se realiz el 5 de setiembre hasta el 21 de diciembre que

comprende las actividades y metodologa realizada, en el Laboratorio de
Anlisis de Suelos, Aguas y Foliares, de la UNSM-T, Optimizacin y
Determinacin de Nitrgeno, en Muestras de alfalfa tropical, por Metodologa
Micro Kjendhal en el Laboratorio de Anlisis de Suelos, Aguas y Foliares, de la
Facultad de Ciencias Agrarias de la UNSM-T.
El mtodo Kjeldahl o digestin de Kjeldahl, en qumica analtica, es un proceso
de anlisis qumico para determinar el contenido en nitrgeno de una sustancia
qumica y se engloba en la categora de medios por digestin hmeda. Se usa
comnmente para estimar el contenido de protenas de los alimentos. Fue
desarrollado por el dans Johan Kjeldahl en 1883.
El presente informe, procura contrastar la teora con la realidad regional,
determinando la cantidad de nitrgeno que hay en la alfalfa tropical, muestra
sacada del fundo Miraflores, que puede diferir de otros lugares, en el cual la
teora hace mencin, englobado esta una parte de la problemtica, ya que la
determinacin de elementos esenciales, que constituye la alfalfa.
El contenido total de protenas en los alimentos est conformado por una
mezcla compleja de protenas. Estas existen en una combinacin con
carbohidratos o lpidos, que puede ser fsica o qumica. Actualmente todos los
mtodos para determinar el contenido proteico total de los alimentos son de
naturaleza emprica. Un mtodo absoluto es el aislamiento y pesado directo de
la protena, pero dicho mtodo se utiliza slo a veces en investigaciones
bioqumicas debido a que es dificultoso y poco prctico

II.

OBJETIVOS
II.1.

Objetivo General:

Optimizacin y Determinacin de Nitrgeno, en Muestras de Man

forrajero (Arachis pintoi), por Metodologa Micro Kjendhal en el

Laboratorio de Anlisis de Suelos, Aguas y Foliares, de la Facultad de

Ciencias Agrarias de la UNSM-T.
II.2.

Objetivos especficos:
Evaluacin de procedimientos por el mtodo de micro Kjendhal
Utilizar los instrumentos necesarios para la determinacin de
nitrgeno en alfalfa
Obtencin de los resultados de la muestra a trabajar

III.

REVISIN BIBLIOGRFICA.
3.1. DETERMINACIN DE NITROGENO
VILSOLF CONSULTING (2012), Menciona que, el nitrgeno es un elemento
esencial para el crecimiento de las plantas. Pocas veces se encuentra presente
en cantidades suficientes en el suelo, para satisfacer las necesidades de los
cultivos, por lo cual debe ser adicionado como fertilizante. Su alto costo y
condicin contaminante potencial, hacen indispensable el establecimiento de
medidas de control tanto en el suelo como en la planta y en aguas.
El nitrgeno existe en el suelo, simultneamente en formas inorgnicas, cuyas
transformaciones

reversibles

se

llevan

cabo

continuamente.

Estas

transformaciones se realizan mediante procesos microbiolgicos y qumicos.

La mineralizacin es un proceso microbiolgico de conversin de N-orgnico a
amoni, en cual participan hongos, bacterias y actinomicetos y se optimiza con
niveles cercanos al 60 o70% de la capacidad de retencin y humedad del suelo,
con pH de 6 a 8 y con temperaturas altas con lmites de 65C. Inmovilizacin es
el proceso opuesto a la mineralizacin, debido a que involucra la asimilacin
microbiolgica de formas inorgnicas hacia formas orgnicas.

Por lo tanto, como ambos procesos ocurren simultneamente en el suelo, solo

es resultado neto se puede observar.
La nitrificacin es la oxidacin microbiolgica de NH 4

a NO3, y de cuya

transformacin son responsables las bacterias de los gneros: Nitrosomonas y

Nitrobacter, principalmente.
3.2. MEDODOLOGA MICRO KJENDHAL
Yeshajahu y Meloan (1987), menciona que en 1883 el investigador dans Johann

Kjeldahl desarroll el mtodo ms usado en la actualidad para el anlisis de

protenas (mtodo Kjeldahl) mediante la determinacin del nitrgeno orgnico.
En esta tcnica se digieren las protenas y otros componentes orgnicos de los
alimentos en una mezcla con cido sulfrico en presencia de catalizadores. El
nitrgeno orgnico total se convierte mediante esta digestin en sulfato de
amonio.

La mezcla digerida se neutraliza con una base y se destila

posteriormente. El destilado se recoge en una solucin de cido brico. Los

aniones del borato as formado se titulan con HCl (o H2SO4) estandarizado para
determinar el nitrgeno contenido en la muestra.
El mtodo Kjeldahl ha sufrido varias modificaciones. Originalmente se utiliz
permanganato de potasio para llevar a cabo el proceso de oxidacin (digestin),
sin embargo, los resultados no fueron satisfactorios, de manera que este
reactivo se descart. En 1885 Wilforth encontr que se poda acelerar la
digestin utilizando cido sulfrico y aadiendo un catalizador. Gunning en 1889
propuso aadir sulfato de potasio que eleva el punto de ebullicin del cido
sulfrico utilizado en la digestin para disminuir el tiempo de la reaccin.
REACCIONES LLEVADAS A CABO EN EL MTODO DE KJELDAHL
DIGESTIN
catalizadores

(1)
protena

-NH2

calor

mH2SO4

CO2

(NH4)2

SO4

SO2

NEUTRALIZACIN Y DESTILACIN
(2)

(NH2)SO4

NaOH

(3) NH3 + H3BO3 (cido brico)

2NH3

Na2SO4+

2H2O

NH4 + H2BO3- (in borato)

TITULACIN
El anin borato (proporcional a la cantidad de nitrgeno) es titulado con HCl (o H2SO4)
estandarizado:
(4) H2BO3- + H+

H3BO3

MATERIAL

J.P SELECTA suministra los equipos necesarios para la realizacin del procedimiento
por el mtodo Kjeldahl.
-bureta electrnica Digitrate-Pro 50 resolucin 0.01 ml.
Cdigo 0182026

-balanza analtica de precisin FA-2204B resolucin 0,1mg.

Cdigo 5830039

Unidad de digestin (Bloc Digest) para 6, 12 y 20 plazas

. Cdigos 4000629, 4000630, 4000631

-1 Unidad Scrubber.
Cdigo 4001611
-1 Bomba de circulacin de agua.
Cdigo

4001612

-Aparato destilador Kjeldahl (Pro Nitro M, S o A).

Cdigos 4002627, 4002851, 4002430

A. REACTIVOS

Reactivos preparados:
Es aconsejable la utilizacin de reactivos ya preparados, especialmente
el HCl (o H2SO4) de valoracin. Cualquier error en su preparacin
puede afectar directamente al resultado de la determinacin.
Utilizar los siguientes, o sus equivalentes en otras marcas:

cido Brico (en polvo) 99.5%

Indicador mixto 4.8 ( 5) RV PANREAC 283303

(Rojo metilo + Verde de Bromocresol)

PANREAC 141015

Indicador mixto 4.4 RV PANREAC 282430

(Rojo metilo + Azul de Metileno)

HCl 0.1N SV PANREAC 171023

HCl 0.25N SV PANREAC 182318

H2SO4 0.1N SV PANREAC 181061

H2SO4 0.2N SV PANREAC 182011

Sodio Hidrxido 40% RE PANREAC 171220

(Para determinacin de N)

Acetanilida 99% (Patrn para validacin) PANREAC 151005

Amonio sulfato (Patrn para validacin) PANREAC 131140

Catalizador Kjeldahl 6.25% Cu tabl. 8g PANREAC 174428

Preparacin de la solucin fijadora de amonaco

a. .- Con indicador Mixto 4.8 ( 5)
Preparar la solucin de la siguiente frmula para 1 litro de solucin
fijadora:

Pesar 10g de cido Brico (en polvo) PANREAC 141015

Disolverlo en 1 litro de agua destilada.

Aadir 15ml de Indicador mixto 5. PANREAC 283303

b. .- Con indicador mixto 4.4

Preparar la solucin de la siguiente frmula para 1 litro de solucin
fijadora:

Pesar 10g de cido Brico (en polvo) PANREAC 141015

Disolverlo en 1 litro de agua destilada.

Aadir 10ml de Indicador mixto 4.4. PANREAC 282430

B. PROCEDIMIENTO
Reparacin de la muestra:
1. Triturar, homogeneizar y mezclar la muestra.

2. Pesar entre 1 y 2 gramos de muestra.

3. En muestras con contenidos de nitrgeno muy pequeo, tomar la muestra
suficiente para que contenga como mnimo 5 mg de nitrgeno.
3.2.1. DIGESTIN
Aadir entre 10 y 15 ml (tubo macro) de H2SO4 96-98% y 1 tableta (8 gm)
de catalizador. (Para el tubo micro, el mximo de H2SO4 es 5ml)
Montar un sistema para la extraccin de humos o scrubber con Na2CO3.
Realizar la digestin en tres pasos:
1. En funcin del contenido de agua de la muestra, empezar la digestin
evaporando agua a 150C entre 15 y 30 minutos.
2. Realizar un segundo paso entre 270 y 300C entre 15 o 30 minutos para
reducir la produccin de humos blancos.
3. Continuar la digestin a 400C entre 60 y 90 minutos.

Algunos ejemplos:
Queso o carne:
Paso1: 150C / 30

Paso 2 : 270C / 30

Paso 3: 400C / 90

Paso 2 : 300C / 15

Paso 3: 400C / 60

Cereales:
Paso1: 150C / 15

Control Visual: El resultado es un lquido transparente ntido con coloracin

azul claro, verde o amarillo dependiendo del catalizador utilizado. No deben
quedar restos negros adheridos a la pared de tubo.
Nota: Durante la digestin debe controlarse la produccin de espuma en las
muestras. Si esta es excesiva, debe alargarse el paso n 1.
3.2.2. DILUCIN
Sacar los tubos muestra del bloque digestor y dejar enfriar a T ambiente.
(Puede forzarse

sumergiendo los tubos, cautelosamente, en un poco de

agua).
Aadir unos 25ml de agua destilada en cada tubo.

 Aadir el agua despacio y moviendo el tubo sin dejar solidificar la

muestra. Si es necesario

calentar ligeramente el tubo (por ej.

introducindolo en el bloque digestor todava caliente)

Dejar enfriar de nuevo hasta T ambiente.
Para evitar prdidas de nitrgeno y reacciones violentas no introducir el
tubo todava caliente

al destilador.

3.2.3. DESTILACIN
Situar un Erlenmeyer de 250ml a la salida del refrigerante con 50ml de
cido Brico y unas

gotas de indicador.

Programar una dosificacin de 50 a 75 ml de NaOH.

Introducir el tubo con la muestra en el destilador.
Destilar hasta recoger 250ml en el Erlenmeyer (50ml Brico + 200ml de
destilado).
Control Visual: Una vez se ha aadido el NaOH, la muestra debe tomar una
coloracin azulada, de no ser as, aadir ms NaOH.
VALORACIN Y CLCULO
Valorar el destilado con HCl H2SO4 hasta el cambio de color. (punto
final: pH 4.65)
Moles de HCl = Moles de NH3 = Moles de N en la muestra
Moles de H2SO4= 2Moles de NH3 = 2Moles de N en la muestra
Realizar el clculo:
mg N = N x V x 14

Donde:
N = Normalidad del cido de valoracin
V = Volumen de cido consumido
14 = Peso atmico del nitrgeno.

 Para pasar a contenido de protenas corregir por el factor adecuado

segn la naturaleza de la

muestra. (6.25 por defecto)

Peridicamente realizar un ensayo en blanco y restarlo del resultado.

% Protenas = P2/P0 x 100 x F
Donde:
P2: Nitrgeno (mg).
P0: Peso de la muestra (mg).
F: Factor protenico.
(6.25 por defecto)
Factor proteico de algunos alimentos:
Almendras 5,18
Nueces 5,30
Nueces - cacahuetes 5,41
Gelatina 5,55
Soja 5,71
Cebada, avena, centeno 5.83
Trigo, harina entera 5,83
Harinas (no entera) 5,70
Arroz 5,95
Maz 6,25
Todos los otros alimentos 6,25
Salvado 6,31
Leche y lcteos 6,38
VERIFICACIN DE LA RECUPERACIN CON AMONIO SULFATO
Esta verificacin es ampliamente utilizada para certificar el funcionamiento
del destilador.
Se trata de preparar una muestra cuyo contenido de nitrgeno es conocido.
Esta se destila, se valora con HCl 0.25N y se calcula el Nitrgeno detectado.
El porcentaje de nitrgeno detectado sobre el de la muestra se denomina
recuperacin de Nitrgeno.

Preparar la muestra:
Contenido de nitrgeno de una muestra de Amonio sulfato:
Formula: (NH4)2 SO4
Peso molecular: 132.14
Factor: 14 * 2 / 132.14 = 0.212
mg de Nitrgeno = 0.212 * mg de Amonio sulfato
Pesar unos 100mg de amonio sulfato. El peso exacto ser P0
La cantidad exacta de Nitrgeno es:
P1 (mg) = P0 x 0,212
Destilar aadiendo 25ml de NaOH
Una vez destilado y valorado obtenemos el nitrgeno (mg) detectado: P2
P2 = N x V x 14
Donde:
N = Normalidad del cido de valoracin (HCl 0.25)
V = Volumen de cido consumido
14 = Peso atmico del nitrgeno.
Calculamos la recuperacin:
R (%) = P2 / P1 *100
La recuperacin aceptable es entre 99.5 y 100.5 %.
Si se utiliza HCl de normalidad diferente preparar muestras:
Normalidad Muestra de Amonio sulfato.
0,05

20 ... 40 mg

0,1

40 ... 90 mg

0,25

100 200 mg

0,5

200400 mg

VERIFICACIN DE LA RECUPERACIN CON ACETANILIDA

Yeshajahu

Meloan

(1987),

menciona

que

esta

verificacin

es

ampliamente utilizada para certificar el funcionamiento del proceso completo

del anlisis del nitrgeno Kjeldahl que incluye las etapas de digestin,
destilacin y valoracin.
Se trata de preparar una muestra cuyo contenido de nitrgeno es conocido.
Esta se digiere, se destila, se valora y se calcula el Nitrgeno detectado.El
porcentaje de nitrgeno detectado sobre el de la muestra se denomina
recuperacin de Nitrgeno. Para realizar sta verificacin se utiliza la
Acetanilida.

Preparar la muestra:
Contenido de nitrgeno de una muestra de Acetanilida:
Frmula: C8H9NO
Peso molecular: 135.17
Factor: 14 / 135.17 = 0.1035
mg de Nitrgeno = 0.1035 * mg de Acetanilida
Pesar alrededor de 250mg de acetanilida. El peso exacto ser P0
La cantidad exacta de Nitrgeno es:
P1 (mg) = P0 x 0,1035
Digestin de la muestra:
Colocar la acetanilida en un tubo, aadir 10ml de cido sulfrico 98% y
una tableta de

catalizador Kjeldahl.

Digerir a 400C durante 1h. (El resultado debe ser un lquido transparente
con coloracin

azul.)

Dejar enfriar y aadir 25ml de agua destilada en cada tubo. Tomar

precauciones para evitar
cido sulfrico es violenta.

salpicaduras. La reaccin del agua sobre el

Destilar:
Destilar aadiendo 75ml de NaOH. Utilizar HCI 0.25N para la valoracin.
Una vez destilado y valorado, obtenemos el nitrgeno (mg) detectado: P2
Donde:
N = Normalidad del cido de valoracin (HCl 0.25).
V = Volumen de cido consumido.
14 = Peso atmico del nitrgeno.
P2 = N x V x 14
Calculamos la recuperacin:
R (%) = P2 / P1 *100
La recuperacin aceptable es entre 99.5 y 100.5 %.
3.3. MAN FORRAJERO (Ariachis pintoi)
CIAT (1991) El Man Forrajero es una leguminosa herbcea, perenne, de
crecimiento rastrero y estolonfero. Tiene una altura entre 20 y 40 cm, posee
raz pivotante que crece hasta 30 cm de profundidad. Las hojas son alternas,
compuestas, con cuatro fololos aovados, de color verde claro a oscuro. El
pice de los fololos es mucronado, con estpulas envainadoras, ad heridas
al pecolo y bifurcadas en forma de hoz, pubescentes, que cubren las yemas
en los nudos.
3.3.1. Produccin de forraje
En la altillanura esta leguminosa ha alcanzado producciones hasta de
I .4 Tn/ha de materia seca por ao, mientras que en el piedemonte
llanero produce entre 3.8 y 5.5 Tn/ha.
La sequa prolongada afecta severamente su produccin de forraje;
sin embargo, con las primeras lluvias reinicia su crecimiento en forma
vigorosa y la mayora de la semilla presente en el suelo germina.
3.3.2. Fijacin de nitrgeno
Una de las caractersticas importantes de las leguminosas es su capacidad
de fijacin de nitrgeno atmosfrico, lo que permite un ahorro en la utilizacin
de fertilizantes nitrogenados. El Arachis pintoi no es la excepcin y es capaz
de establecer relaciones simbiticas con los rizobios nativos aunque se ha
cuantificado que en suelos pobres tipo ultisol la leguminosa responde a la
inoculacin con la cepa Rhizobium CIAT 310.
3.3.3. VENTAJAS DEL USO DEL Arachis pintoi EN SISTEMAS GANADEROS

A. Persistencia
Pezo y Ibrahim (1999) mencionan que una de las caractersticas que han
promovido la aceptacin del man forrajero por los productores es su alta
persistencia. Resumieron los atributos que favorecen la persistencia de
Arachis pintoi manejado bajo pastoreo en:
a) Hbito de crecimiento rastrero que previene defoliaciones completas
incluso cuando se maneja con altas cargas animales.
b) Longevidad superior a la mostrada por la mayora de las leguminosas
tropicales herbceas.
c) Produccin profusa de flores a lo largo del ao.
d) Naturaleza geocrpica (subterrnea) de sus semillas lo que permite
formar bancos de semilla en el suelo.
e) Presencia de elevadas cantidades de estolones con capacidad de
enraizamiento que favorecen su capacidad invasora por medios
vegetativos.

B. Impacto de la edad fisiolgica sobre la calidad nutricional

En comparacin con las gramneas, el Ariachis pintoi es menos
afectado en su calidad nutricional conforme aumenta la edad
fisiolgica de la planta. Estudios en pastos demuestran las drsticas
reducciones en los contenidos de protena cruda, carbohidratos
solubles y aumentos en los contenidos de pared celular afectando
en forma drstica el contenido energtico del pasto.

C. Mejora en respuesta animal

La inclusin del Arachis pintoi en la dietas del ganado ha favorecido la
respuesta animal tanto en crecimiento como en produccin de leche. El
man se ha ofrecido en sistemas de banco de protena,
acarreo

en

corte

asocio con gramneas. Investigaciones en crianza de

reemplazos de lechera utilizando bancos de protena de man forrajero

CIAT 18744 (acceso

5h) de 34 das de recuperacin y pastoreo de

estrella africana con altas cargas animales (3,3 y 4,2 UA/ha) demostraron
la capacidad de reducir el suministro de alimentos balanceados durante
la etapa de desarrollo. Estudios adicionales con el suministro de Arachis
pintoi CIAT 18744 en monocultivo permiti reducir en un 50 % el
suministro de alimentos balanceados durante la fase pos destete (de 85 a
160 kg PV), estimndose una asignacin de 30 m2 por
peso vivo. Avellaneda et al.

cada 100 kg

IV.

ACTIVIDADES DESARROLLADAS
El desarrollo de las actividades, se ejecutaron en el Laboratorio de
Anlisis de Suelos, Aguas y Foliares; Optimizacin y Determinacin de
Nitrgeno, en Muestras de alfalfa, por Metodologa Micro Kjendhal en el
Laboratorio de Anlisis de Suelos, Aguas y Foliares, de la Facultad de
Ciencias Agrarias de la UNSM-T.
El procedimiento se ejecut previo adiestramiento en la utilizacin de
materiales, reactivos y equipos de anlisis de muestras, para la
determinacin de nitrgeno, conducidas por el Jefe del Lab. El Ing.
Carlos Verde Gribau

4.1. RECOLECCIN Y PROCESAMIENTO DE MUESTRA DE ALFALFA

Para la recoleccin de muestra de man forrajero (ariachis pintoi) , se provio

de los pastos forrajeros ,dado que la provincia de San Martn, posee una
diversidad y gamas de tipos de forrajes , de la cual de estos forrajes se
trabaj con pasto alfalfa Fundo Miraflores, de la Universidad Nacional de
San Martn - Tarapoto, puesto que el pasto alfalfa es neto del fundo,
presentan caractersticas similares a cualquier muestra general, ya que es
importante conocer los diferentes tipos de pastos y tambin su potencial de
nitrgeno, por lo que se asume, cierta similitud a investigaciones con el
mismo propsito. (Imagen 1 y 2)

Imagen 1

Imagen 2

Figuras: Imagen 1). Muestra del pasto man forrajero Fundo Miraflores de la UNSM-T, con forrajes
Imagen 2) Muestra de man forrajero, de la cual se llev 2 kg, para la ejecucin del tra

4.1.1. Procesamiento de la alfalfa tropical

Se utiliza la muestra de 2 kg de man forrajero, la cual se lleva a la estufa a
60C por 48 horas.
Posteriormente a las 48 horas, se quita impurezas y se procede a pulverizar la
muestra para la destilacin, y se coloc la muestra pulverizada en un frasco
rotulado, para su posterior utilizacin.
Materiales utilizados para el procesamiento del estircol de Cuyaza.
Estufa
Mortero y mazo
Muestra de alfalfa tropical 2 kg
Cernidora

 Envace de 250 g rotulado

Balanza analtica

4.2. PROCEDIMIENTOS PARA LA DIGESTIN

se pesa 2 g de muestra de alfalfa en un baln o tubo de digestin y
se agrega aproximadamente 1.00 g de mezcla catalizadora y se
aade 5 ml de acido sulfrico (3 ml para tejido vegetal).
Se colocan las muestras a digerir en el bloque de digestin y se
somete a calentamiento de 100 200C por 15 minutos
inicialmente.
Con los mismos procedimientos se preparan uno o dos blancos.
4.3. PROCEDIMIENTOS PARA LA DESTILACIN
Se diluye con cuidado el digerido, usando agua destilada y
removiendo con agitacin en rotacin hasta alcanzar un volumen
aproximado de 30 ml.
Aparte, se colocan en un matraz 20 ml del acido brico 2% con
indicador para recibir en el destilado; se colocan este matraz a la
salida del refrigerante.
Se colocan la muestra en el Sistema de destilacin
Se inicia el arrastre de vapor y al mismo tiempo se agrega sobre la
muestra el hidrxido de sodio hasta que un ligero exceso haga
cambiar la solucin a calor grosella intense
Se destila por el tiempo necesario hasta que se duplique el volumen
del matraz colector y se retira la muestra.

4.4. PROCEDIMIENTO PARA LA TTULACIN

El destilado se titula con H2SO4, 0.05 N estandarizado hasta lograr el
retorno del color inicial de la solucin de cido brico.
Se anota los gastos para las muestras.

Clculos: g % N = ((MP B1) x N x PE x 100) /mg de muestra

Dnde:

MP = gasto de la muestra
B1 = gasto del blanco
N = normalidad cido sulfrico
PE = peso equivalente N 14

MUESTRA

man forrajero A
man forrajero B

0,500
0,250

H2SO4 ml
4 ml
3 ml

CATALIZADOR
1ml
1 ml

GASTO

%N

11,46
5,85

3,17
3,26

%PROTEIN
A
19,85
20,39

% N = normalidad del acido x meq-q N x gasto

Wg
% protena /NA = %N X 6,25

V.

x 100

%N = 0,1 x 0,014 x 30,31 x 100

0,25

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
V.1.

CONCLUSIONES

El desarrollo que la practica resulto muy favorable, ya que nos permiti

determinar el porcentaje de protenas y el porcentaje de nitrgeno de la
man forrajero.
La conclusin es tambin la importancia que hay que conocer como
fututos agrnomos el manejo y metodologa a tratar de una muestra
para ver su rendimiento cuando queremos hacer un trabajo de
investigacin.

V.2. RECOMENDACIONES
-

Tener ms cuidado al momento de ultizar los materiales del

laboratorio ya que puede ser muy dificultoso por que son sensibles.
La recomendacin es tener ms compromiso al trabajar con una
muestra ya que su seguimiento es muy importante para poder
evaluar su forma y color.

VI.

Todos los materiales a usar hay que dejar bien limpio despus de la
practica en su respectivo sitio

BIBLIOGRAFA
-

CIAT (Centro Internacional de Agricultura Tropical). 1991. Programa

de Pastos Tropicales, Informes Anuales 1984-1991. Cali,
Colombia.
- Pezo, D. e Ibrahim, M. 1999. Asocio de Arachis pintoi con
gramneas: una opcin para el uso sostenible de la tierra en
sistemas ganaderos. Nutricin Animal Tropical 5 (1):3-30.
Ranganna, S. 1977. Manual of Analysis of Fruit and Vegetable
Products. Ed. McGraw-Hill Publishing Co. Ltd. New Delhi.
VILSOLF CONSULTING (2012), consultora investigacin anlisis
Yeshajahu P. y Meloan C.E. 1987. Food Analysis. Theory and Practice.
2. Ed. AVI U.S.A. pp 753-758.

ANEXOS