O TESTE DE TETRAZLIO EM

SEMENTES DE SOJA
Jos B. Frana Neto, Francisco Carlos Krzyzanowski,
Nilton Pereira da Costa

EMBRAPA-CNPSo. Documentos, 116.

ISSN: 0101-5494

comit de publicaes
CLARA BEATRIZ HOFFMANN-CAMPO
IVANIA APARECIDA LIBERATTI
FLVIO MOSCARDI
JOS DE BARROS FRANA NETO
LO PIRES FERREIRA
NORMAN NEUMAIER
ODILON FERREIRA SARAIVA

ilustrao
DANILO ESTEVO

capa
Sementes de soja com diferentes tipos de leses causadas por percevejos
(Foto: J. B. Frana Neto)

impresso
2000 exemplares
Maio/1998

FRANA NETO, J.B.; KRZYZANOWSKI, F.C.; COSTA, N.P. da. O teste de

tetrazlio em sementes de soja. Londrina : EMBRAPA-CNPSo, 1998.
72p. (EMBRAPA-CNPSo. Documentos, 116).
1. Soja - Semente - Teste de tetrazlio. I. EMBRAPA. Centro Nacional de
Pesquisa de Soja (Londrina, PR). II. Ttulo. III. Srie.
CDD 631.521
Embrapa 1998
Conforme Lei 5.988 de 14.12.73

APRESENTAO

A avaliao da qualidade fisiolgica da sementes de soja tem

sido um grande desafio para os tecnologistas de sementes, devido
influncia dos vrios fatores que podem afetar a sua qualidade, nas
diversas fases da sua produo. O teste de tetrazlio, por proporcionar
o exame detalhado das estruturas essenciais da semente, tem
contribudo para identificar esses fatores, apontando o mais importante,
responsvel pela reduo dessa qualidade.
A Embrapa, atravs do Centro Nacional de Pesquisa de Soja,
tem contribudo para o aperfeioamento da metodologia do teste de
tetrazlio. Os trabalhos de pesquisas desenvolvidos pela Equipe de
Sementes tm como principal objetivo suprir a indstria e os programas
de pesquisa em sementes com um teste eficaz que fornea informaes
confiveis na avaliao da qualidade de semente.
A presente publicao editada com a finalidade de compartilhar
a utilizao desses conhecimentos com toda a comunidade de
profissionais de sementes.

PAULO ROBERTO GALERANI

Chefe Adjunto de Pesquisa e Desenvolvimento
Embrapa Soja

SUMRIO

1.

INTRODUO ................................................................................... 7

2.

HISTRICO ....................................................................................... 9

3.

PRINCPIOS DO TESTE ..................................................................... 12

4.

MATERIAL NECESSRIO .................................................................. 13

5.

INTERPRETAO ............................................................................ 16

5.1. Diagnstico das Causas da Deteriorao da Semente de Soja ................ 22

5.2. Identificao dos Nveis de Viabilidade .................................................. 25
CLASSE 1 (mais alto vigor) .................................................................... 35
CLASSE 2 (alto vigor) ............................................................................. 36
CLASSE 3 (vigor mdio) ......................................................................... 39
CLASSE 4 (vigor baixo) .......................................................................... 44
CLASSE 5 (vigor muito baixo) ............................................................... 49
CLASSE 6 (no vivel) ............................................................................ 50
CLASSE 7 (no vivel) ............................................................................ 51
CLASSE 8 (semente morta) ..................................................................... 54
5.3. Utilizao da Ficha e Interpretao do Resultados ................................. 56
5.3.1. Interpretao dos Resultados ........................................................ 58
6.

PRECISO DOS RESULTADOS .......................................................... 60

7.

VANTAGENS E LIMITAES DO TESTE DE TETRAZLIO PARA SOJA .. 61

8.

QUANDO APLICAR O TESTE DE TETRAZLIO .................................... 62

9.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ....................................................... 63

APNDICE ............................................................................................. 68

O TESTE DE TETRAZLIO EM
SEMENTES DE SOJA
Jose B. Frana Neto1
Francisco Carlos Krzyzanowski1
Nilton Pereira da Costa1

INTRODUO

A produo e a utilizao de sementes de alta qualidade so fatores

bsicos da maior importncia para o sucesso da cultura da soja [Glycine max
(L.) Merrill]. Para que tais requisitos sejam alcanados, o sistema de controle de
qualidade na indstria de sementes deve ser gil, verstil e confivel, fornecendo
resultados precisos e de maneira rpida. Algumas determinaes, como pureza
fsica e varietal, grau de umidade e ndice de danos mecnicos podem ser
realizadas em apenas alguns minutos, suprindo, parcialmente, tais exigncias.
A demora na obteno dos resultados de germinao resulta numa sria
limitao ao processo de tomada de decises na indstria de sementes. Alm
da demora em sua execuo, este teste, na sua forma de avaliao tradicional,
no fornece informaes quanto ao vigor, no permite de maneira precisa a
identificao dos fatores que afetam a qualidade das sementes, e seus resultados
so freqentemente mascarados pela ocorrncia de danos de embebio (Frana
Neto et al, 1997) e pela presena de fungos como Phomopsis spp. e Fusarium
semitectum (Henning & Frana Neto, 1980; Frana Neto & West, 1989a,
1989b). Tais limitaes podem resultar em srios prejuzos aos produtores de
sementes por afetar negativamente a tomada de decises relativas colheita,
ao processamento, armazenagem e comercializao.
1

Engenheiro Agrnomo, Ph.D., Pesquisador da Embrapa Soja; Caixa Postal 231; 86001970 Londrina, PR; endereo eletrnico: franca@cnpso.embrapa.br

.8.

Dentre os diversos mtodos de controle de qualidade adotados pela

indstria de sementes no Brasil, o teste de tetrazlio tem se destacado,
principalmente para a soja, devido sua rapidez, preciso e tambm pelo grande
nmero de informaes fornecidas pelo mesmo. O teste, alm de avaliar a
viabilidade e o vigor dos lotes de sementes, fornece o diagnstico das possveis
causas responsveis pela reduo de sua qualidade: danos mecnicos,
deteriorao por umidade e danos de percevejo, que so os problemas que
mais comumente afetam a qualidade fisiolgica da semente de soja. Porm,
alm desses, os danos de secagem, de estresse hdrico e de geada podem tambm
ser facilmente visualizados pelo teste. Alis, o fornecimento desse diagnstico
tem sido o grande responsvel pelo elevado ndice de adoo do teste em nosso
Pas, pois, alm de apontar os problemas de reduo de qualidade das sementes,
o teste, quando aplicado nas diversas etapas do sistema de produo, pode
identificar os pontos de origem desses problemas, permitindo que aes
corretivas sejam adotadas, resultando na produo de sementes de alta qualidade.
No caso da soja, graas publicao das primeiras verses do presente
manual (Frana Neto et al., 1985; Frana Neto et al., 1988) e tambm devido
aos diversos treinamentos oferecidos pelos profissionais da Embrapa Soja e de
outras instituies, temos a certeza de que o teste executado em todos os
laboratrios de anlise de sementes brasileiros que trabalham com tal espcie.
Em conseqncia, hoje, pode-se dizer que o Brasil o lider mundial de utilizao
do teste de tetrazlio a nvel de rotina. Alguns nmeros podem ilustrar a
significncia de tal liderana: para a semeadura dos 12,5 milhes de hectares
previstos para a safra 1997/98, foram necessrias cerca de um milho de
toneladas de sementes de soja, ou seja, aproximadamente 20 milhes de sacas
de 50 kg, o que representa ao redor de 100.000 lotes. Caso 80% desses lotes,
em mdia, forem analisados pelo menos duas vezes pelo teste de tetrazlio,
durante o processo de controle de qualidade, isto resulta em cerca de 160.000
anlises realizadas em 1997, apenas com soja.
A utilizao do teste de tetrazlio em nosso Pas repercurte no apenas
com relao aos aspectos quantitativos, conforme ilustram os nmeros
apresentados acima, mas, principalmente, quanto aos qualitativos, pois quando
realizado em conjunto com outros testes, tem propiciado a comercialiao dos
lotes que efetivamente apresentem bons padres de qualidade. Isto tem resultado

.9.

num sistema de controle de qualidade de alta confiabilidade, assegurando

maiores lucros aos produtores de sementes, atravs da produo de sementes
de alta qualidade a menor custo. Segundo informaes que constantemente
recebemos de diversos produtores de sementes, isto tem resultado em ndices
prximos de zero de reposio de sementes e de ressemeadura.

HISTRICO

O sucesso do desenvolvimento do teste de tetrazlio resultado da

conquista de vrias etapas na histria da pesquisa em sementes e da obteno
de novos conhecimentos sobre a vida da semente. (Moore, 1985, p. 2). Revises
mais detalhadas sobre o histrico do teste de tetrazlio foram publicadas por
Cottrell (1948), Delouche et al. (1962), Gadd (1950), Isely (1952), Lakon
(1953), Lindenbein (1965) e Moore (1962a, 1966, 1969, 1976). Uma sntese
dos principais fatos que contriburam para o seu desenvolvimento apresentada
a seguir.
O desenvolvimento de testes rpidos, visando a determinao da
qualidade fisiolgica das sementes, tem sido um dos principais objetivos dos
tecnologistas de semente h vrios anos, principalmente a partir do final do
sculo passado, quando o sistema de produo de semente comeou a ser
organizado em diversos pases da Europa.
Diversos testes, baseados na observao da colorao, do aspecto, do
peso volumtrico e da velocidade de embebio das sementes foram inicialmente
utilizados, visando a rpida avaliao da viabilidade das mesmas, porm sem
nenhuma preciso. No incio da dcada de 1920, a determinao da atividade
de certas enzimas, como a peroxidase, catalase, oxidase, redutase e fenolase,
recebeu ateno especial, porm a falta de sucesso de tais testes deveu-se ao
fato de que a atividade destas enzimas no era realizada em sementes
individualizadas. Nessa mesma poca, diversos corantes, como o ndigo
carmine, azul de metileno, vermelho neutro, cido slfurico e verde malaquita

. 10 .

foram testados e a falta de preciso resultou no insucesso da adoo de tais

mtodos.
Conforme relatado por Moore (1969), as primeiras tentativas que
apresentaram sucesso na avaliao da viabilidade das sementes com bio-corantes
foram realizadas por Turina, na Iugoslvia, em 1922, e por Neljubow, na Rssia,
em 1925. Turina trabalhou com a reduo de sais de telrio e de selnio nas
clulas das sementes e Neljubow relatou algum sucesso com a utilizao de
ndigo carmine.
No incio dos anos 30, Hasegawa do Japo, trabalhando com sementes
arbreas, aperfeioou a aplicao de sais de telrio e de selnio para a colorao
de embries de sementes. A grande maioria de seus trabalhos foi publicada em
lngua japonesa, tornando os seus avanos inacessveis comunidade cientfica.
Alguns de seus estudos foram amplamente divulgados aps a publicao de
alguns de seus resultados em ingls (Hasegawa, 1935) e em alemo, aps uma
reunio da ISTA (Associao Internacional de Anlise de Sementes) na Europa.
Durante esta viagem, Hasegawa revelou alguns detalhes de sua metodologia
de anlise ao cientista alemo F.E. Eidmann, que, por sua vez, aprimorou o
mtodo do selnio (Moore, 1969).
O grego, Georg Lakon, trabalhando em Hohenhein, Alemanha, desde o
incio da dcada de 20, vinha dedicando-se com grande interesse por trabalhos
na rea de fisiologia de sementes. Ele aperfeioou o mtodo do selnio,
desenvolvido por Hasegawa e Eidmann, culminando com o desenvolvimento
do mtodo topogrfico do selnio para a determinao da viabilidade de
sementes (Lakon, 1940). Quando tomou conhecimento dos efeitos txicos do
selnio aos analistas de sementes, Lakon procurou por um sal similar, porm
no txico, que poderia ser utilizado com a mesma finalidade. Segundo Cottrell
(1948) e Isely (1952), aps a indicao por Khn e Jerchel (1941) de que
diversos compostos de tetrazlio poderiam se reduzir em tecidos vivos, Lakon
testou vrios desses sais e concluiu que o 2,3,5-trifenil cloreto de tetrazlio era
o mais apropriado para o teste topogrfico. Lakon desenvolveu a metodologia
para sementes de vrias espcies de cereais e para milho.
Conforme relatado por Moore (1976), a divulgao da existncia e dos
mritos do teste de tetrazlio ocorreu pela primeira vez nos Estados Unidos em
1945, mediante investigaes realizadas pelo Exrcito Americano, aps a II

. 11 .

Guerra Mundial, sobre atividades de pesquisa na Alemanha. O primeiro trabalho

realizado com o teste nos Estados Unidos foi publicado por Porter et al. (1947),
da Universidade Estadual de Iowa. Outros estudos pioneiros, realizados nesse
mesmo pas, conforme relatado por Moore (1976), foram publicados por
Flemion e Poole, do Instituto Boyce Thompson de Nova Iorque, por Goodsell,
da compania de sementes de milho Pioneer, de Johnston, Iowa, e por Bennett,
da Universidade Estadual de Iowa.
Avanos significativos sobre o teste ocorreram nos anos 50. Vrios
pesquisadores de diversas universidades Americanas alcanaram resultados
bsicos importantes. Dentre eles, destacaram-se Isely, Bass, Smith e Throneberry,
da Universidade Estadual de Iowa, e Parker, da Universidade de Idaho.
Na dcada de 60, progressos significativos relativos aplicao prtica
do teste formam obtidos por Delouche, Still, Raspet e Leinhard, da Universidade
Estadual do Mississippi, que publicaram o primeiro manual sobre o teste, que
abordava a metodologia para um grande nmero de espcies (Delouche et al.,
1962). Jensen, Pierpoint, Hayes e Grabe, do Laboratrio de Sementes da
Universidade Estadual do Oregon e Copeland, Bruce e Midyette, da Virginia,
tambm contriburam com melhorias ao teste.
Em 1970, outro marco importante foi atingido. A utilizao do teste foi
aceita pela AOSA (Associao Oficial dos Analistas de Sementes), atravs da
publicao do Manual do Teste de Tetrazlio (Grabe, 1970). Em 1983, a AOSA
publicou o Manual de Testes de Vigor (AOSA, 1983), que abordava a
metodologia do teste para soja, algodo, milho e trigo.
Reconhecimento especial deve ser dado ao Dr. Robert P. Moore do
Laboratrio de Sementes da Universidade Estadual da Carolina do Norte. Entre
1943 e 1987 ele publicou 230 trabalhos sobre o teste e editou o Manual do
Teste de Tetrazlio (Moore, 1985), publicado pela ISTA. Tal publicao contem
detalhes sobre a metodologia do teste para mais de 650 espcies.
O teste de tetrazlio foi tambm adotado com sucesso em diversos pases.
No Brasil, o teste foi introduzido por diversos profissionais da rea de Sementes,
que receberam treinamentos na Universidade Estadual do Mississippi. Atravs
do Convnio AGIPLAN/Ministrio da Agricultura com tal Universidade, foram
traduzidos pelo Prof. Flvio Rocha, da Universidade Federal de Pelotas, dois

. 12 .

manuais sobre o teste: O Teste de Tetrazlio para Viabilidade da Semente

(Delouche et al., 1976) e Manual do Teste de Tetrazlio em Sementes (Grabe,
1976).
O teste foi aprimorado para a soja pelos pesquisadores do Centro Nacional
de Pesquisa de Soja, da Embrapa, que publicaram, em 1981, o primeiro manual
especfico para a soja (Frana Neto, 1981), que foi o embrio para o manual
seguinte, Metodologia do Teste de Tetrazlio em Sementes de Soja (Frana
Neto et al., 1985). O referido manual foi atualizado e colocado em uma forma
mais didtica, sendo lanado alguns anos aps (Frana Neto et al., 1988). Tais
manuais continham a classificao de vigor da semente de soja em diferentes
classes de viabilidade. Hoje, o teste rotineiramente utilizado em todos os
laboratrios de anlise de sementes que trabalham com soja no Brasil.

PRINCPIOS DO TESTE

O teste de tetrazlio baseia-se na atividade das enzimas desidrogenases

(AOSA, 1983; Bulat, 1961; Copeland et al, 1959; Moore, 1973; Smith, 1952;
Smith e Throneberry, 1951) as quais catalizam as reaes respiratrias nas
mitocndrias, durante a gliclise e o ciclo de Krebs. Estas enzimas,
particularmente a desidrogenase do cido mlico, reduzem o sal de tetrazlio
(2,3,5-trifenil cloreto de tetrazlio ou TCT) nos tecidos vivos. Quando a semente
de soja imersa na soluo incolor de TCT, esta difundida atravs dos tecidos,
ocorrendo nas clulas vivas a reao de reduo que resulta na formao de
um composto vermelho, estvel e no-difusvel, conhecido por trifenilformazan:
Sal de tetrazlio + H+
Iincolor
Idifusvel

desidrogenases

Trifenilformazan
Ivermelho
Ino difusvel

Quando o TCT reduzido, formando o trifenilformazan, isto indica que

h atividade respiratria nas mitocndrias, significando que h viabilidade

. 13 .

celular e do tecido. Portanto, a colorao resultante da reao uma indicao

positiva da viabilidade atravs da deteco da respirao a nvel celular. Tecidos
no viveis no reagem e conseqentemente no so coloridos.
Sendo o tecido vigoroso, haver a formao de um vermelho carmin
claro; se o tecido est em deteriorao, um vermelho mais intenso ser formado,
em virtude da maior intensidade de difuso da soluo de TCT pelas membranas
celulares comprometidas de tais tecidos; se o mesmo no vivel, a reduo
do sal no ocorrer, e o tecido morto contrastar como branco (no colorido)
com o tecido colorido vivel. A observao de tais diferenas de cor, juntamente
com o conhecimento de diversas caractersticas das sementes, permitem a
determinao da presena, da localizao e da natureza dos distbios que podem
ocorrer nos tecidos embrionrios (Moore, 1973).

MATERIAL NECESSRIO

Para a realizao deste teste necessrio o seguinte:

a) reagente:
I sal de tetrazlio: 2,3,5-trifenil cloreto de tetrazlio, normalmente
comercializado em frascos com 10 g;
b) vidraria:
I placas de Petri;
I frasco de vidro (becker) ou copos de plstico (para cafezinho), volume 50
ml;
I frasco de vidro, cor mbar, para armazenar a soluo de tetrazlio, que
fotossensvel e se reduz com a luz.

Importante: no utilizar frascos metlicos, para evitar reduo da soluo

de tetrazlio em trifenilformazan, quando em contato com certos metais,
conforme relatado por Bulat (1961).

. 14 .

c) lmina de barbear;
d) estufa ou germinador, com temperatura de 35oC a 40oC;
e) lupa de seis aumentos (6X) com iluminao fluorescente, de preferncia
circular;
f) refrigerador para armazenagem das amostras;
g) papel de germinao.

Preparo da soluo
Recomenda-se utilizar soluo na concentrao de 0,075%, pois a mesma
permite uma colorao adequada das sementes, permitindo a visualizao com
maior preciso de danos mecnicos recentes, causados por abraso, que
normalmente no seriam detectados com o uso de solues mais concentradas
(0,5 a 1,0%), conforme sugerido na literatura internacional (AOSA, 1983;
Delouche et al, 1962; Grabe, 1970; Moore, 1985). Alm disso, a utilizao de
soluo nessa concentrao mais econmica: com um vidro de 10 g de TCT
pode-se testar a viabilidade de at 200 lotes de semente, utilizando a soluo a
0,075%. Caso a soluo utilizada tivesse a concentrao de 1,0%, apenas 15
amostras poderiam ser avaliadas com 10 g do sal.
Prepara-se, inicialmente, a soluo estoque a 1,0%, misturando 10,0 g
do sal de tetrazlio em 1,0 litro de gua destilada. Esta soluo deve ser
armazenada em frasco de vidro de cor mbar, em local escuro e fresco, de
preferncia na geladeira.
Quando necessrio, prepara-se a soluo de trabalho a 0,075%, que
tambm deve ser armazenada com os mesmos cuidados da soluo estoque:
1,0 litro de soluo a 0,075% = 75 ml soluo estoque (1,0%) + 925 ml
de H2O.
A gua utilizada no preparo da soluo de trabalho pode ser destilada ou
da rede de abastecimento, desde que apresente o pH entre 6 e 7, e no seja
salobra.

. 15 .

Preparo das Sementes

L Amostragem
A amostra de trabalho deve ser representativa do lote e coletada conforme
prescrito pelas Regras para Anlise de Sementes (RAS; Brasil, 1992).
L Nmero de Sementes
Para o teste de germinao (em areia ou rolo de papel) as RAS recomendam a utilizao de 400 sementes por amostra, (8 sub-amostras com 50 sementes
cada). Para o teste de tetrazlio sugerida a utilizao de 100 sementes (2 subamostras com 50 sementes cada), conforme sugerido pela AOSA (1983), Moore
(1973), Frana Neto (1981) e Frana Neto et al. (1985; 1988).
A necessidade de um menor nmero de sementes para o teste de tetrazlio
devida s condies homogneas a que so submetidas todas as sementes
durante o seu preparo, o que, normalmente, no ocorre durante a execuo do
teste padro de germinao. Os resultados desse ltimo teste podem ser afetados
por diversos fatores: gradientes de umidade e temperatura comumente
encontrados nos germinadores; diferenas do pH e da textura do papel; variao
na quantidade de gua adicionada ao substrato; e a presena de fungos, como
Phomopsis spp. e Fusarium semitectum nas sementes testadas.
L Pr-condicionamento
As sementes devem ser embaladas em papel de germinao umedecido
e mantidas nestas condies por um perodo de 16 horas, na temperatura de
25C. Para evitar a perda de umidade, as embalagens devem permanecer em
cmara mida, ou seja, em saco plstico, em germinador ou em dessecador
com gua em lugar de slica-gel.
Os tegumentos de sementes escuras de soja normalmente no permitem
a difuso da soluo de tetrazlio. Portanto, os mesmos devem ser removidos
das sementes antes do processo de colorao.
Caso haja a necessidade de maior rapidez, pode-se utilizar a metodologia
alternativa, sugerida por Costa et al. (1998), realizando-se o pr-condicionamento por 6 horas a uma temperatura de 41C, o que representa um ganho de
10 horas no preparo das sementes, sem que haja perda de preciso dos resultados.

. 16 .

L Colorao
Aps o pr-condicionamento, as sementes so colocadas em frascos
bequer ou copinhos de plstico, sendo totalmente submersas na soluo de
tetrazlio (0,075%). As sementes devem permanecer assim a uma temperatura
de 35C a 40C por aproximadamente 150 a 180 minutos. Esta temperatura
pode ser obtida utilizando-se uma estufa ou um germinador.
bom ressaltar que esta operao deve ser realizada no escuro, uma vez
que a soluo de tetrazlio sensvel luz (Lakon, 1949).
L Lavagem da Amostra
Alcanada a colorao ideal, as sementes so retiradas do ambiente a
35C - 40oC e so, em seguida, lavadas com gua comum e devem ser mantidas
submersas em gua at o momento a avaliao. Caso as amostras no sejam
avaliadas de imediato, devem ser mantidas em refrigerador, por at 12 horas.

INTERPRETAO

Apesar de no utilizar equipamentos e reagentes caros, o teste requer

que o analista de sementes seja bem treinado nas tcnicas do teste. bsico o
conhecimento das estruturas anatmicas da semente pelo analista. Experincia,
imaginao e julgamento crtico so tambm necessrios para que o analista
possa visualizar os tipos de anormalidades de plntulas que so revelados pelo
teste de tetrazlio. A preciso do teste depende do conhecimento de todas as
tcnicas e procedimentos envolvidos.
Conforme mencionado por Moore (1985), h trs objetivos bsicos na
avaliao das sementes: a) determinar o potencial de germinao de um lote de
sementes sob as condies mais ideais possveis; b) categorizar as sementes em
diferentes classes de viabilidade; e c) diagnosticar as possveis causas que resultam
na perda de viabilidade das sementes. Os dois primeiros objetivos podem ser
alcanados pela interpretao de quatro caractersticas bsicas: condio e cor

. 17 .

dos tecidos aps a colorao, pela localizao e pelo tamanho das leses. A
habilidade do analista de sementes em reconhecer os sintomas tpicos dos
diferentes tipos de danos que podem ocorrer nas sementes imperativo para a
obteno do diagnstico correto das causas de perda de viabilidade.
Para que a interpretao se torne menos cansativa, sugere-se que seja
efetuada sob lupa de seis aumentos (6 X), com iluminao fluorescente. As
sementes devem ser avaliadas uma a uma, seccionando-as longitudinalmente
atravs do centro do eixo embrionrio (Fig. 1), com o auxlio de uma lmina
de barbear. Caso o corte no seja bem centralizado, a avaliao da condio do
eixo embrionrio deve ser realizada na metade que contenha a maior parte do
eixo, expondo-se o seu cilindro central, aps cortes adicionais.
Aps o seccionamento da semente, as suas metades so separadas, sendo
o tegumento removido para que a superfcie externa dos cotildones venha a
ser exposta. O analista deve observar as superfcies externa e interna dos
cotildones, procurando por todos os tipos de danos.

FIG. 1. Ilustrao do local de corte da semente de soja, atravs da parte central do eixo
embrionrio e do hilo.

. 18 .

Cuidados especiais devem ser tomados durante a avaliao do eixo

radcula-hipoctilo, que composto por dois tipos de tecidos: o crtex e o
cilindro central (Fig. 2). O cilindro central a estrutura mais crtica do eixo
radcula-hipoctilo. Como uma regra geral, caso um dano venha a ocorrer nesse
eixo, mas no suficientemente profundo para danificar o cilindro central, a
semente pode ento ser considerada vivel. Entretanto, se o dano atingir o
cilindro central, a semente ser considerada no vivel (Fig. 3).
Alm do cilindro central, outra regio crtica na semente de soja, que
dever ser observada com muita ateno, a regio vascular (Fig. 3 e 4).
Atravs dessa regio passam os vasos que conectam o eixo embrionrio aos
cotildones, sendo, portanto, de suma importncia para o transporte de materiais
de reserva dos cotildones plntula em desenvolvimento, nas fases iniciais
de germinao e emergncia. Caso tal regio venha a ser afetada por algum
tipo de dano, o vigor e/ou a viabilidade da semente podero ser comprometidos.
Outro fator que deve ser observado a diferenciao de cores dos tecidos:
I vermelho carmim: tecido vivo e vigoroso
I vermelho carmim forte: tecido em deteriorao
I branco leitoso: tecido morto
De acordo com Moore (1985), tecidos vigorosos tendem a colorir
gradualmente e uniformemente e, quando embebidos, apresentam-se trgidos
(Figs. 5 e 6). A ocorrncia de vermelho intenso caracterstica de tecidos em
deteriorao, que permitem uma maior difuso da soluo de tetrazlio atravs
de suas membranas celulares j comprometidas. Quando expostos ao ar, tais
tecidos perdero a turgidez mais rapidamente que os tecidos vigorosos. O
branco identifica tecidos mortos, que no apresentam a atividade enzimtica
necessria para a produo do trifenilformazan. Tecidos mortos normalmente
so flcidos e apresentam a colorao branco-opaca, mas podem ser amarelados,
cinzentos ou esverdeados, principalmente quando sofreram danos causados
por percevejos. Em algumas raras situaes, tecidos mortos podem apresentar
manchas avermelhadas, causadas por atividades de certos fungos ou bactrias.
Entretanto, tais tecidos so facilmente diferenciados de tecidos viveis, por
serem extremamente flcidos e friveis.

. 19 .

FIG. 2. Corte longitudinal de uma semente de soja, mostrando suas estruturas

embrionrias.

FIG. 3. Corte longitudinal de duas sementes de soja, mostrando a ocorrncia de danos

no eixo radcula-hipoctilo.

. 20 .

FIGURA 4

Eliminar contorno

FIG. 4. Detalhe da regio vascular e da plmula de semente de soja vigorosa. Note a

regio meristemtica e a diferenciao do crtex e cilindro central do hipoctilo.
(Foto: J. B. Frana Neto).

Deve-se enfatizar que aps o seccionamento das sementes, as superfcies

internas dos cotildones so normalmente descoloridas (brancas), devido
falta de difuso da soluo de tetrazlio s suas camadas mais profundas (Fig.
6). Moore (1985) caracteriza os tecidos viveis, que no coloriram, como
normalmente trgidos, brilhantes, apresentando tonalidades branco-rosadas ou
branco-amareladas.
A posio e a extenso dos danos que ocorrem nas sementes so
caractersticas de importncia crucial para a correta avaliao das mesmas e
devem ser consideradas em combinao. Por exemplo, uma pequena leso

. 21 .

FIGURA 5

Eliminar contorno

FIG. 5. Padro de colorao pelo tetrazlio de semente de soja altamente vigorosa. (Foto:
J. B. Frana Neto).

FIGURA 6

Eliminar contorno

FIG. 6. Padro de colorao pelo tetrazlio da face interna de semente de soja altamente
vigorosa. (Foto: J. B. Frana Neto).

. 22 .

causada por percevejo, que danifica o hipoctilo, atingindo o cilindro central,

resultar em conseqncias mais srias que uma leso de grande extenso,
localizada na metade inferior de um cotildone, longe do eixo embrionrio e
da regio vascular.

5.1. Diagnstico das Causas da Deteriorao da

Semente de Soja
Vrios fatores afetam a qualidade da semente de soja. Os principais,
conforme descrito por Moore (1960, 1962a, 1973) e por Frana Neto (1984)
so danos mecnicos, deteriorao por umidade, danos causados por percevejos,
danos por seca e altas temperaturas, danos de secagem e danos de geada. Cada
tipo de dano est associado com leses caractersticas, que so descritas
resumidamente a seguir.
L Danos mecnicos (Figs. 7 a 12) resultam de impactos fsicos durante as
operaes de colheita, trilha, secagem, beneficiamento, transporte e semeadura
das sementes de soja. H trs tipos de danos mecnicos que so facilmente
identificados pelo teste de tetrazlio: rachaduras, amassamentos e abrases. O
ltimo identificado pela presena de leses de colorao vermelho escura,
caso tenham ocorrido recentemente, ou por leses brancas com tecidos flcidos,
se no recentes. Um analista inexperiente pode confundir o pit (Fig. 2) com
leses de danos mecnicos. O pit uma depresso na superfcie externa dos
cotildones, composto por um grupo de clulas especializadas, em oposio
direta ao antipit do tegumento, que uma camada de clulas na superfcie
ventral do tegumento (Yaklich et al., 1984, 1986).
L Deteriorao por umidade (Figs. 12 a 19), conforme descrita por Moore
(1973), Frana Neto (1984) e por Pereira e Andrews (1976), resulta da exposio
das sementes de soja a ciclos alternados de condies ambientais midas e
secas na fase final de maturao, antes da colheita. Tais danos apresentam uma
maior magnitude, caso ocorram em ambientes quentes, tpicos de regies
tropicais e sub-tropicais. Sementes com deteriorao por umidade apresentam
rugas caractersticas nos cotildones, na regio oposta ao hilo, ou sobre o eixo
embrionrio. Aps a colorao, essas sementes revelaro a presena de leses

. 23 .

de colorao vermelho intensa ou branca sobre os tecidos embrionrios

adjacentes a tais rugas. Freqentemente, tais leses esto associadas com a
infeco por certos fungos. As leses podem ser profundas e caso o cilindro
central esteja danificado, ou se mais de 50% dos tecidos de reserva dos
cotildones estiverem deteriorados, a semente considerada no vivel. A
deteriorao por umidade apresenta uma caracterstica muito tpica, que a
simetria das leses em ambos os cotildones da semente (Figs. 13 e 14).
L Danos de percevejo (Figs. 20 a 22) podem afetar seriamente a qualidade
da semente de soja. Dentre as diversas espcies desse inseto, o percevejo verde
Nezara viridula (L.) tem ocorrncia generalizada na maioria das regies
produtoras de soja (Turnipseed e Kogan, 1976). Outras espcies, como
Piezodorus guildini (Westwood) e Euschistus heros (Fabricius), podem tambm
causar srios danos s sementes. Ao se alimentar das sementes de soja, o
percevejo as inocula com a levedura Nematospora coryli Peglion (Sinclair,
1982), que ir, ento, colonizar os tecidos das sementes, deteriorando-os, o
que resulta em severas redues de vigor e de viabilidade (Bowling, 1980;
Villas Bas et al., 1982). Essa infeco forma leses circulares caractersticas,
muitas vezes enrugadas e profundas. Os tecidos lesionados so mortos e flcidos,
apresentando a colorao tpica esbranquiada, s vezes esverdeada, amarelada
ou acinzentada. Um anel de colorao vermelho intenso separa, na maioria dos
casos, os tecidos mortos dos vigorosos (Fig. 22). Leses mltiplas podem
ocorrer numa nica semente e caso haja sobreposio das mesmas, o sintoma
circular tpico no ser distinguvel. Com freqncia, uma pequena perfurao
causada pelo inseto pode ser observada no centro das leses circulares. Puncturas
profundas podem ocorrer, resultando na inoculao dos tecidos centrais das
sementes pelo fungo N. coryli. Tais leses nem sempre podem ser observadas
na superfcie externa das sementes.
L Danos por seca e altas temperaturas (Fig. 23) podem ser observados em
sementes de algumas cultivares de soja, quando altas temperaturas (acima de
30C), associadas com perodos de baixa disponibilidade hdrica (seca), ocorrem
durante a fase de enchimento de gros. Os sintomas so variveis: a leso
tpica pode ser caracterizada pela presena de uma covinha nos cotildones at
o completo enrugamento das sementes. Algumas sementes produzidas sob tais
condies de estresse podem tornar-se impermeveis gua. Sementes com

. 24 .

sintomas superficiais desse tipo de dano (covinhas), aps a colorao, podem

apresentar leses vermelho escuras ou brancas que podem ser confundidas
com deteriorao por umidade. A constatao dessas covinhas nas sementes
secas pelos analistas evitar que interpretaes errneas desse tipo venham a
ocorrer. Sementes enrugadas, aps a colorao, podem ser deformadas e
apresentam manchas vermelho escuras e esbranquiadas espalhadas sobre os
cotildones, com maior concentrao das mesmas na regio prxima ao eixo
embrionrio (Fig. 23). Os tecidos mortos so flcidos e friveis. Sementes
severamente enrugadas normalmente no germinam em funo da desintegrao
dos tecidos do eixo embrionrio e das regies superiores dos cotildones.
L Danos de secagem excessiva so conseqncia da secagem das sementes a
graus de umidade abaixo de 10,0%. So caracterizados pela constatao de
elevados ndices de sementes de soja com trincas transversais nos cotildones,
sempre na mesma posio (Fig. 24). Quando a semente de soja secada
excessivamente, ela est sujeita a quebrar preferncialmente nessa posio,
quando exposta a um impacto mecnico.
L Danos por geada em sementes de soja so mais comuns em regies de
clima temperado. A expresso desse tipo de dano depende do estdio de
desenvolvimento das sementes, da temperatura e do perodo de exposio das
mesmas s condies de baixa temperatura (Moore, 1973). Sementes imaturas
geralmente morrem e permanecem verdes com exposio a geadas. Por outro
lado, sementes secas e maduras resitem bem a esse tipo de estresse. Os tecidos
danificados so identificados no teste de tetrazlio pela colorao de eixos
embrionrios num vermelho mais intenso e pela presena de um precipitado
vermelho que se acumula nos tegumentos e na soluo de tetrazlio. Tecidos
danificados por geadas podem apresentar uma colorao vermelha com tons
esverdeados ou marrons (Osorio, 1987).
Todas as leses acima menciodadas podem ser intensificadas durante o
armazenamento. Tal intensificao depender das condies de temperatura e de
umidade relativa do ar no armazm. Danos mecnicos, principalmente os de abraso,
e deteriorao por umidade so os tipos de dano que mais comumente progridem
em termos de deteriorao no armazm, podendo resultar em severas redues
de germinao e de vigor, principalmente nos meses finais do armazenamento.

. 25 .

Mais de um desses tipos de danos podem ocorrer em uma nica semente

(Fig. 12). Outros tipos de danos podem tambm ocorrer devido ao
envelhecimento da semente ou ocorrncia de condies imprprias durante o
armazenamento. Condies quentes e midas durante o armazenamento
resultaro em severa deteriorao. No teste de tetrazlio, os sintomas iniciais
de deteriorao por armazenamento inadequado podem ser confundidos com
sinais de deteriorao por umidade. Neste caso, o diagnstico mais preciso da
causa da deteriorao pode ser obtido com a execuo de um teste de patologia
de sementes, por exemplo o teste de papel de filtro (blotter test). A constatao
de altos ndices de fungos de armazenagem, como o Aspergillus flavus ou o
Penicillium spp., caracteriza problemas de armazenamento; elevada infeco
por fungos de campo, como Phomopsis spp., Fusarium spp., ou Cercospora
kikuchii, caracteriza a deteriorao no campo.
A caracterizao dos fatores que afetam a qualidade da semente de soja
pode parecer complexa no incio. Porm, com um bom treinamento e
experincia, o analista de sementes poder reconhecer e diferenciar com
facilidade tais sintomas.

5.2. Identificao dos Nveis de Viabilidade

O teste de tetrazlio baseia-se na anlise da condio de cada semente
individualmente. Cada semente classificada como vivel ou no vivel e os
tipos de danos so anotados. Moore e Smith (1956), citados por Copeland et
al., (1959) e Moore (1961, 1962b, 1967) definiram um sistema de classificao
para sementes de milho e de soja, onde cada semente era qualificada nas classes
de 1 a 5, caso viveis, e de 6 a 8, se no viveis. A presena, a localizao e o
tipo do dano, alm das condies fsicas das estruturas embrionrias, so
utilizadas nesse sistema de classificao. Tal metodologia foi modificada e
descrita em detalhes para sementes de soja por Frana Neto et al. (1985, 1988).
A seguir, apresentada uma classificao de vigor em sementes de soja.
Os aspectos apresentados nas ilustraes so, na experincia dos autores,
considerados os mais comuns. Cada diagrama representa uma semente que foi
seccionada longitudinalmente. A superfcie externa da semente ilustrada
esquerda e a interna direita.

. 26 .

FIGURA 7

Eliminar contorno

FIG. 7. Sementes de soja com leses tpicas de danos mecnicos. Esquerda: semente
com dano latente (por abraso). Direita: dano imediato (semente trincada). (Foto:
J. B. Frana Neto).

FIGURA 8

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FIG. 8. Dano mecnico crtico no eixo radcula-hipoctilo, atingindo o cilindro central.

(Foto: J. B. Frana Neto).

. 27 .

FIGURA 9

Eliminar contorno

FIG. 9. Dano mecnico por abraso sobre o eixo radcula-hipoctilo, atingindo o cilindro
central. (Foto: J. B. Frana Neto).

FIGURA 10

Eliminar contorno

FIG. 10. Dano mecnico afetando totalmente os tecidos meristemticos da regio da

plmula. (Foto: J. B. Frana Neto).

. 28 .

FIGURA 11

Eliminar contorno

FIG. 11. Pequeno dano mecnico afetando regio vital do cilindro central e da regio
meristemtica da plmula. (Foto: J. B. Frana Neto).

FIGURA 12

Eliminar contorno

FIG. 12. Semente de soja com leses tpicas de dano mecnico na radcula e cotildone e
de deteriorao por umidade superficial no crtex do hipoctilo. (Foto: J. B.
Frana Neto).

. 29 .

FIGURA 13

Eliminar contorno

FIG. 13. Semente de soja com leso tpica de deteriorao por umidade. Note a simetria
das leses e os sintomas no eixo embrionrio. (Foto: J. B. Frana Neto).

FIGURA 14

Eliminar contorno

FIG. 14. Semente de soja com leso tpica de deteriorao por umidade. Note a simetria
das leses nos cotildones. (Foto: J. B. Frana Neto).

. 30 .

FIGURA 15

Eliminar contorno

FIG. 15. Sementes de soja com trs nveis de deteriorao por umidade. (Foto: J. B.
Frana Neto).

FIGURA 16

Eliminar contorno

FIG. 16. Semente de soja com leso superficial de deteriorao por umidade no crtex
do hipoctilo. (Foto: J. B. Frana Neto).

. 31 .

FIGURA 17

Eliminar contorno

FIG. 17. Leses intensas de deteriorao por umidade no campo em sementes de soja.
(Foto: J. B. Frana Neto).

FIGURA 18

Eliminar contorno

FIG. 18. Sementes de soja com plmulas coloridas em funo de deteriorao intensa
no campo. (Foto: J. B. Frana Neto).

. 32 .

FIGURA 19

Eliminar contorno

FIG. 19. Sementes de soja classificadas na Classe 8, em funo de intensa deteriorao

por umidade. (Foto: J. B. Frana Neto).

FIGURA 20

Eliminar contorno

FIG. 20. Sementes de soja com leses tpicas de danos de percevejo sobre os cotildones.
(Foto: J. B. Frana Neto).

. 33 .

FIGURA 21

Eliminar contorno

FIG. 21. Sementes de soja com leses resultantes de danos por percevejo nos cotildones
e no eixo embrionrio. (Foto: J. B. Frana Neto).

FIGURA 22

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FIG. 22. Leso tpica de dano de percevejo no cotildone. Note a forma circular da leso
e o anel de tecido em deteriorao (vermelho intenso) ao redor do tecido morto.
(Foto: J. B. Frana Neto).

. 34 .

FIGURA 23

Eliminar contorno

FIG. 23. Sementes de soja com leses causadas pela ocorrncia de altas temperaturas e
deficincia hdrica durante a fase de enchimento de gros. Topo: sementes secas;
abaixo: sementes coloridas. (Foto: J. B. Frana Neto).

FIGURA 24

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FIG. 24. Sementes de soja com dano caracterstico de secagem excessiva: lotes com tal
problema apresentam altos ndices de sementes com trincas na mesma posio
transversal dos cotildones. (Foto: J. B. Frana Neto).

. 35 .

CLASSE 1 (mais alto vigor)

1-A
Eliminar contorno

1a. Colorao uniforme e superficial, indicando penetrao lenta do sal de tetrazlio;

parte interna (entre os cotildones) no apresentando colorao, salvo nos bordos;
todos os tecidos com aspectos normal e firme.

1-B
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1b. Quase igual anterior, exceto a ocorrncia de faixas ou estrias mais intensamente
coloridas, uma a duas por cotildone devido deteriorao por umidade, as quais
so superficiais (um a dois dcimos de milmetro de profundidade).

1-C
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1c. Semente com aspecto de mosaico devido a um processo lento de embebio (Fig.
25); os tecidos se apresentam firmes e na face interna dos cotildones geralmente
aparece uma cavidade central de colorao amarelada, indicando insuficiente
absoro de gua. Pode ocorrer em sementes semi-permeveis. Tais sintomas podem
tambm estar relacionados a uma embebio inadequada durante o prcondicionamento, ou devido ao uso de sementes com grau de umidade muito baixo.

. 36 .

FIGURA 25

Eliminar contorno

FIG. 25. Semente de soja com aspecto de mosaico devido a um processo inadequado de
embebio. (Foto: F.C. Krzyzanowski).

CLASSE 2 (alto vigor)

2-A
Eliminar contorno

2a. Pequenas estrias localizadas nos cotildones na regio oposta ao eixo embrionrio,
as quais so originadas por presso do tegumento sobre os cotildones causado por
sucessivas hidrataes (expanso) e desidrataes (contrao) de ambos em
propores diferentes. Isto resulta em enrugamento do tegumento e leso nos
cotiltones, onde a respirao e a atividade enzimtica so mais intensas, ocasionando
a evidenciao da cor vermelho carmin forte. As estrias no devem ser superior a
0,5 mm de profundidade; a parte interna dos cotildones apresenta-se como em 1a.
Danos nos cotildones so geralmente simtricos.

. 37 .

2-B
Eliminar contorno

2b. Pequenas estrias devidas ao mesmo motivo referido em 2a., mas localizadas sobre o
eixo embrionrio. Tais leses devem mostrar-se apenas superficialmente, no
apresentando qualquer alterao interna, como em 1a. Danos nos cotildones so
geralmente simtricos.

2-C
Eliminar contorno

2c. rea de colorao mais intensa, no maior do que da ilustrao, provavelmente

devido juno de pequenas estrias (2a), formando uma faixa contnua. A parte
interna dos cotildones apresenta-se como em 1a. Danos nos cotildones so
geralmente simtricos.

2-D
Eliminar contorno

2d. rea de tecido sem colorao (branco leitoso) portanto, morto, no maior do que a
da ilustrao. A parte interna dos cotildones como em 1a. Todas as leses referidas
de 2a e 2d, em geral, se apresentam simetricamente nos dois cotildones, sendo esta
uma caracterstica utilizada para diferenciar dano devido ao enrugamento do
tegumento (deteriorao por umidade) de outros tipos de dano.

. 38 .

2-E
Eliminar contorno

2e. Pequenos danos mecnicos sobre a superfcie externa dos cotildones e com uma
profundidade mxima de 0,5 mm. A superfcie interna dos cotildones apresenta-se
como em 1a.

2-F
Eliminar contorno

2f.

Dano(s) devido(s) picada de percevejo, com uma rea total no maior do que a
mostrada na ilustrao e profundidade mxima de 0,5 mm. A localizao deve ser
afastada da regio vascular (isto , abaixo de uma linha imaginria, passando
transversalmente pela metade do cotildone). A regio afetada apresenta-se mais
ou menos necrosada (tecido morto, colorao esbranquiada, de aspecto
pulverulento, s vezes com o sinal da punctura bem visvel, outras vezes no).
Superfcie interna dos cotildones como em 1a.

2-G
Eliminar contorno

2g. Dano idntico ao anterior mas com a regio da(s) punctura(s) sem necrose. O aspecto
enrugado, de colorao vermelho carmim forte, sem partes esbranquiadas. Este
tipo de leso caracterstico de picada que provavelmente ocorre em um estdio mais
avanado da maturao, quando a semente j est em fase adiantada de desidratao.

. 39 .

2-H
Eliminar contorno

2h. Mais do que duas estrias por cotildone (no profunda, como em 1b). Superfcie
interna dos cotildones como em 1a.

2-I
Eliminar contorno

2i.

Colorao da superfcie externa dos cotildones como em 1a. A superfcie interna

dos cotildones apresenta-se tambm com colorao uniforme devido penetrao
da soluo de tetrazlio atravs de um rompimento no tegumento.

CLASSE 3 (vigor mdio)

3-A
Eliminar contorno

3a. Estrias de colorao vermelho carmin forte localizadas nos cotildones, na regio
oposta ao eixo embrionrio, com uma rea total no maior do que mostrada na
ilustrao. A superfcie interna dos cotildones pode apresentar pequenas reas
mais escuras, correspondentes s estrias externas e com uma espessura mxima de
0,5 mm.

. 40 .

3-B
Eliminar contorno

3b. Dano quase idntico ao anterior, mas com as estrias podendo apresentar algumas
reas de colorao branco-leitosa, indicando tecidos mortos. Superfcie interna dos
cotildones como em 3a.

3-C
Eliminar contorno

3c. reas de colorao mais intensa, no maiores que as mostradas na ilustrao,

provavelmente devido juno de estrias formando uma faixa contnua. A superfcie
interna dos cotildones pode apresentar, correspondentemente, uma faixa mais
escura com espessura mxima de 0,5 mm.

3-D
Eliminar contorno

3d. Dano quase idntico ao anterior, mas a faixa pode ser de tecido de colorao
branco-leitosa (tecido morto) numa rea no maior do que a da ilustrao. Superfcie
interna com uma faixa de tecido morto numa espessura mxima de 0,5 mm.

. 41 .

3-E
Eliminar contorno

3e. rea de colorao vermelho intensa na superfcie externa de ambos os cotildones

no maior do que a da ilustrao e com profundidade mxima de 0,5 mm (dano
mecnico). Superfcie interna como em 1a.

3-F
Eliminar contorno

3f.

Estrias localizadas na superfcie do eixo embrionrio no se aprofundando alm do

crtex, ou seja, sem afetar o cilindro central.

3-G
Eliminar contorno

3g. Extremidade da radcula mostrando colorao branco-leitosa, indicando tecido

morto, sem no entanto afetar o cilindro central.

. 42 .

3-H
Eliminar contorno

3h. Pequenas fraturas localizadas no eixo embrionrio no afetando, porm, o cilindro

central.

3-I
Eliminar contorno

3i.

Picada(s) de percevejo, com a parte central necrosada (tecido morto, ou seja,

colorao branco-leitosa, com aspecto pulverulento) ou no, com rea total no
maior do que a mostrada na ilustrao. A rea lesionada no deve ter profundidade
superior a 0,5 mm e deve estar localizada na regio abaixo de uma linha imaginria
passando transversalmente pela metade do cotildone (regio no vascular).
Superfcie interna dos cotildones como em 1a.

3-J
Eliminar contorno

3j.

Picada(s) de percevejo, com rea total no maior do que a mostrada na ilustrao,

sem reas necrosadas (mortas), localizada(s) abaixo de uma linha imaginria
passando transversalmente pela metade do cotildone. Picada(s) afetando a superfcie
interna de um dos cotildones que se mostra enrugado com pequenas pontuaes
vermelhas (reas contnuas de colorao vermelho carmin forte ou reas necrosadas).
Um dos cotildones com colorao superficial como em 2i.

. 43 .

3-K
Eliminar contorno

3k. Picada(s) de percevejo, com rea total no maior do que a representada na ilustrao,
localizada acima de uma linha imaginria passando transversalmente pela metade
do cotildone. A regio lesionada no deve ser superior a 0,5 mm de profundidade
e localizada de tal maneira a no afetar a regio acima da linha imaginria (regio
vascular).

3-L
Eliminar contorno

3l.

Fratura dos cotildones na regio oposta ao ponto de ligao do eixo embrionrio

numa extenso mxima como a mostrada na ilustrao. A superfcie interna dos
cotildones pode se apresentar como em 1a ou 2i.

3-M
Eliminar contorno

3m. Extremidade da radcula fraturada, porm, sem afetar o cilindro central. A

superfcie interna dos cotildones pode se apresentar como em 1a ou 2i.

. 44 .

3-N
Eliminar contorno

3n. Dano(s) de origem mecnica com ou sem tecido morto, com profundidade mxima
de 0,5 mm ou sem afetar a regio vascular. A superfcie interna dos cotildones
como em 1a ou 2a.

3-O
Eliminar contorno

3o. Dano(s) de origem mecnica localizado(s) abaixo da regio vascular, afetando a

superfcie interna dos mesmos como mostrado na ilustrao.

CLASSE 4 (vigor baixo)

4-A
Eliminar contorno

4a. rea de colorao vermelho carmin forte em ambos os cotildones, cobrindo menos
do que a metade dos mesmos. A superfcie interna tambm apresenta rea de
colorao vermelho carmin forte. A regio vascular, porm, no deve estar afetada.

. 45 .

4-B
Eliminar contorno

4b. Dano quase idntico ao anterior, apresentando, porm, tecidos mortos (colorao
branco-leitosa).

4-C
Eliminar contorno

4c. rea de colorao vermelho carmin forte no centro dos cotildones (externa e
internamente), afetando parte da regio vascular. No entanto, prximo ao ponto de
ligao, os vasos devem estar funcionais, permitindo o transporte das reservas dos
cotildones para o eixo embrionrio.

4-D
Eliminar contorno

4d. Estrias localizadas sobre o eixo embrionrio afetando inclusive o cilindro central,
porm, numa extenso menor do que a metade de sua espessura.

. 46 .

4-E
Eliminar contorno

4e. rea de colorao vermelho carmin forte no eixo embrionrio mas com as estrutura
do cilindro central e do crtex ainda perfeitamente definidas.

4-F
Eliminar contorno

4f.

rea de tecido morto numa extenso menor do que a metade da rea total dos
cotildones.

4-G
Eliminar contorno

4g. Fratura de um ou ambos os cotildones na regio prxima ao ponto de ligao, mas

deixando a regio vascular em grande parte intacta.

. 47 .

4-H
Eliminar contorno

4h. Dano(s) de origem mecnica na regio vascular dos cotildones afetando a face
interna e parte da regio vascular. Os vasos, porm, devem permanecer funcionais
prximos ao ponto de ligao dos cotildones com o eixo embrionrio.

4-I
Eliminar contorno

4i.

Fraturas sobre o eixo embrionrio, afetando o crtex e o cilindro central, porm,

numa extenso menor do que a metade de sua espessura.

4-J
Eliminar contorno

4j.

Dano(s) devido(s) a picada de percevejo com rea necrosada (tecido morto), atingindo
a parte interna dos cotildones mas localizado(s) abaixo da regio vascular.

. 48 .

4-K
Eliminar contorno

4k. Dano(s) devido(s) a picada de percevejo localizado(s) em apenas um cotildone,

tornando-o praticamente no funcional e afetando apenas levemente o segundo
cotildone na face iterna, e o qual se mantm quase integral.

4-L
Eliminar contorno

4l.

Dano(s) devido(s) a picada de percevejo localizado(s) em um dos cotildones,

bloqueando completamente a regio vascular, tornando-o no funcional. A plntula
depender, para o seu estabelecimento, das reservas de apenas um cotildone.

4-M
Eliminar contorno

4m. Fratura de mais da metade de um dos cotildones.

. 49 .

4-N
Eliminar contorno

4n. Fratura de um dos cotildones deixando, porm, intacto o eixo embrionrio (inclusive
a plmula).

Eliminar contorno

4-O

4o. Fratura de ambos os cotildones, porm, numa extenso inferior metade dos
mesmos.

CLASSE 5 (vigor muito baixo)

As classes de vigor 5 e 6 (esta ltima no vivel) so as de interpretao
mais problemtica. Quando a amostra analisada comporta uma elevada porcentagem
de sementes nessas classes, os resultados variam e discrepncias so esperadas.

5-A
Eliminar contorno

5a. Sementes com ambos os cotildones mostrando um aspecto de mosaico, com reas
de um colorido vermelho carmin forte entremeadas de reas mais claras e at mortas.
Os tecidos afetados atingem uma profundidade superior a 1 mm, mas inferior metade
da espessura dos cotildones. A superfcie interna dos cotildones apresenta-se tambm
com algumas reas de colorido mais intenso. O eixo embrionrio apresenta-se bem
definido com as estrutura do crtex e do cilindro central bem vsveis.

. 50 .

5-B
Eliminar contorno

5b. Dano(s) de origem mecnica, afetando totalmente a regio vascular prxima ao

ponto de ligao de um dos cotildones e lesionando, parcial e internamente, a rea
correspondente do segundo cotildone.

5-C
Eliminar contorno
5c. Cotildones fraturados de tal forma que difcil saber se a parte remanescente
maior ou menor do que a metade do total da semente.

5-D
Eliminar contorno

5d. Dano(s) devido(s) picada de percevejo, afetando a regio do ponto de ligao

como em 5b.

CLASSE 6 (no vivel)

Os danos dessa classe so semelhantes aos da classe 5 (vide ilustraes),
porm, com maior extenso das reas afetadas, o que torna a semente invivel.

. 51 .

CLASSE 7 (no vivel)

7-A
Eliminar contorno

7a. Sementes com ambos os cotildones mostrando um aspecto de mosaico com reas
de um colorido vermelho carmin forte entremeadas de outras mais claras e mortas.
Os tecidos afetados atingem a metade (ou mais) da espessura dos cotildones,
bloqueando completamente a regio vascular.

7-B
Eliminar contorno

7b. Eixo embrionrio apresentando uma colorao vermelho carmin forte, distribuda
por toda a sua extenso.

7-C
Eliminar contorno

7c. Colorao vermelho carmin forte no ponto de ligao de ambos os cotildones,

atingindo a regio vascular. Colorao branco-leitosa (indicativo de tecidos mortos)
tambm pode ocorrer.

. 52 .

7-D
Eliminar contorno

7d. Tecidos mortos de colorao branco-leitosa numa extenso superior metade da

superfcie total da semente.

7-E
Eliminar contorno

7e. Estrias de colorao vermelho carmin forte sobre o eixo embrionrio, atingindo
uma profundidade superior metade da espessura do cilindro central.

7-F
Eliminar contorno

7f.

Extremidade da radcula apresentando colorao branco-leitosa (tecido morto)

atingindo no s o crtex, mas tambm o cilindro central.

. 53 .

7-G
Eliminar contorno

7g. Fratura da extremidade da radcula, afetando no s o crtex, mas tambm o cilindro

central.

7-H
Eliminar contorno

7h. Fratura dos cotildones com a parte remanescente sendo inferior metade da
superfcie total da semente.

7-I
Eliminar contorno

7i.

Fratura do eixo embrionrio, secionando o cilindro central.

7-J
Eliminar contorno

7j.

Dano(s) de origem mecnica, afetando a regio vascular de ambos os cotildones,

prximo(s) ao ponto de ligao.

. 54 .

7-K
Eliminar contorno

7k. Dano(s) devido a picada de percevejo, afetando a regio vascular de ambos os

cotildones, prximo(s) ao ponto de ligao.

7-L
Eliminar contorno

7l.

Plmula de colorao vermelho carmin forte (deteriorada).

CLASSE 8 (semente morta)

Semente totalmente morta (branca, s vezes com tonalidade rsea),
apresentando tecidos flcidos.
L Sementes Duras: a constatao de sementes duras na amostra pode requerer
procedimentos especiais. Quando uma amostra apresentar um baixo ndice de
sementes duras, ou seja de 2% a 5%, as mesmas podem ser consideradas como
viveis e vigorosas, podendo ser anotadas na Classe 1. Porm, caso o ndice de
sementes impermeveis seja superior a tais valores, as mesmas devem ser
escarificadas com lixa zero, sendo novamente pr-condicionadas e coloridas,
realizando-se a seguir a leitura das mesmas.
L Anormalidades embrionrias: alguns tipos de embries anormais podem
ser constatados no teste de tetrazlio (Figs. 26 e 27). comum a constatao
da presena de trs ou mais cotildones, cotildones deformados ou dobrados
e o posicionamento do eixo embrionrio em local inadequado. A maoiria dessas

. 55 .

FIGURA 26

Eliminar contorno

FIG. 26. Anormalidade de formao embrionria em sementes de soja, detectada no teste

de tetrazlio. (Foto: J.B. Frana Neto).

FIGURA 27

Eliminar contorno

FIG. 27. Semente de soja com anormalidade embrionria. Note o posicionamento anormal
do eixo embrionrio. (Foto: J.B. Frana Neto).

. 56 .

sementes no produziro plntulas normais, conforme a exemplificada na Fig.

27. Entretanto, sementes com a anormalidade ilustrada na Fig. 26 podem resultar
em plntulas normais, desde que no apresentem danos srios em seus
componentes vitais.

5.3. Utilizao da Ficha e Interpretao do

Resultados
sugerida a utilizao de uma ficha para a avaliao do teste de
tetrazlio, (ver apndice). Aps a avaliao de cada semente, deve-se registrar
nessa ficha o nvel de viabilidade e a identificao do(s) tipo(s) de dano(s) que
possa(m) ter determinado o referido nvel. Sugere-se utilizar a seguinte
simbologia:
/
/
/
/
/
/
/
/

: sem dano
: dano mecnico (DM)
: dano causado por percevejo (DP)
: dano causado por umidade (DU)
: DM + DP
: DM + DU
: DU + DP
: DU + DM + DP

Observao Importante: comum a ocorrncia de sementes

classificadas nos nveis de 6 a 8 (no viveis) com dois ou mais tipos de danos
(Fig. 12). Quando isso ocorrer e apenas um tipo de dano for responsvel pela
perda de viabilidade, tal dano deve ser marcado na ficha com um trao mais
forte. Por exemplo: uma semente apresenta um dano mecnico que fraturou
totalmente o eixo embrionrio, suficiente para causar a perda de viabilidade;
esta mesma semente apresenta tambm uma deteriorao por umidade nos
cotildones, longe das zonas vitais, dano este no suficiente para que a semente
seja classificada como no vivel (Fig. 28). Ao anotar esta semente na ficha
como Classe 7 (no vivel), deve-se marcar a simbologia de dano mecnico
com maior intensidade que o smbolo de deteriorao por umidade. Isto deve
ser realizado sempre que situaes semelhantes ocorrerem, marcando-se os

. 57 .

FIG. 28. Esquema de semente de soja com deteriorao por umidade nos cotildones e
com dano mecnico que fraturou o eixo embrionrio.

danos que efetivamente forem responsveis pela perda de viabilidade com maior
intensidade na ficha e os danos mais superficiais, no suficientes para resultar
em perda de viabilidade, em intensidade normal, conforme ilustram as fichas
no Apndice.
Aps a avaliao de todas as sementes (2 X 50), determina-se a
porcentagem das classificadas em cada nvel de viabilidade, calculando o
potencial de germinao (somatrio dos valores classificados nos nveis 1 a 5)
e o vigor (somatrio dos nveis 1 a 3), conforme ilustrados nas fichas preenchidas
(ver Apndice).
No rodap da ficha anotam-se os resultados das duas sub-amostras,
calculando-se as mdias do vigor e da viabilidade. Calculam-se tambm os
porcentuais de todos os tipos de danos (mecnico, deteriorao por umidade e
de percevejo) anotados para os nveis (1-8) e (6-8). Para o nvel (1-8), calculase, em cada sub-amostra, o nmero de sementes que apresentaram sinais de
danos mecnicos, por exemplo; multiplica-se o total por 2, para obter-se o
valor porcentual. Faz-se o mesmo para a segunda sub-amostra, calculando-se a
seguir a mdia desses dois valores. O mesmo procedimento deve ser seguido
para os outros tipos de danos.

. 58 .

Para o nvel (6-8), faz-se o mesmo, porm, no caso de sementes que

apresentem mais de um tipo de dano, deve-se computar apenas aqueles danos
que efetivamente contriburam para a perda de viabilidade, ou seja, que foram
marcados com maior intensidade. Veja as fichas contidas no Apndice para
maiores esclarescimentos.

Necessidade de Reanlise: a amostra dever ser reanalisada quando

ocorrer uma variao igual ou superior a 10% entre os resultados de viabilidade
obtidos para as duas sub-amostras.

5.3.1. Interpretao dos Resultados

O nvel de vigor pode ser interpretado atravs da seguinte classificao:
I
I
I
I
I

vigor muito alto: igual ou superior a 85%

vigor alto: entre 84% e 75%
vigor mdio: entre 74% e 60%
vigor baixo: entre 59% e 50%
vigor muito baixo: igual ou inferior a 49%

Os valores obtidos para viabilidade devem receber a mesma interpretao

dos alcanados no teste de germinao.
As porcentagens de danos mecnicos, deteriorao por umidade e danos
de percevejo nos nveis 6 a 8, indicam a porcentagem de perda de viabilidade
ocasionada pelos referidos danos, sendo consideradas com relao qualidade
de semente como:
I sem restrio: inferior a 6%
I problema srio: entre 7% a 10%
I problema muito srio: superior a 10%
Se um problema srio ou muito srio diagnosticado pelo analista de
sementes atravs do teste de tetrazlio, por exemplo, um alto nvel de ocorrncia
de danos mecnicos, ou danos de percevejos, uma ao corretiva pode ser
adotada, para melhorar a qualidade das sementes produzidas. O produtor de
sementes pode ser orientado, por exemplo, a ajustar o sistema de trilha da sua
mquina colhedora, ou a melhorar o sistema de controle de percevejos.

. 59 .

Exemplos de resultados obtidos pelo teste de tetrazlio esto ilustrados

na Tabela 1. O lote n 1 apresenta altos ndices de vigor e de viabilidade, no
apresentando problemas srios relativos a nenhum dos tipos de danos. O lote
n 2 tem viabilidade de 82%, sendo o vigor (65%) classificado como mdio,
devido principalmente a problemas srios (10%) com danos mecnicos. O lote
n 3 tem 75% de viabilidade e vigor muito baixo (49%), devido a problemas
srios de danos de percevejo (9,0%) e muito srios (12,0%) de deteriorao
por umidade. As fichas utilizadas para anotar os resultados dos lotes 1 a 3
constam do Apndice.
Um exemplo da praticidade da utilizao dos resultados do teste de
tetrazlio ilustrado por Costa et al. (1987). Altos nveis de danos mecnicos
foram constatados em sementes de soja produzidas no Estado do Paran. Aps
a constatao do problema, os produtores foram instrudos em como melhorar
a regulagem do sistema de trilha da mquina colhedora. Em dois anos, os
nveis de danos mecnicos em sementes de soja foram drasticamente reduzidos
a nveis inferiores a 6%.

TABELA 1. Resultados do teste de tetrazlio obtidos em trs lotes de

sementes de soja.
Parmetro
Viabilidade
1
Vigor
Danos Mecnicos
Deteriorao por Umidade
Danos de Percevejo
1

Lote n 1

Lote n 2

Lote n 3

93
86
2
2
2
4
2
1

82
65
10
5
4

75
49
5
12
9

Nvel de vigor: muito alto: 85%; alto: 75 a 84%; mdio: 60 a 74%; baixo: 50
a 59%; muito baixo: 49%.
Porcentagem de perda de viabilidade causada pelo respectivo tipo de dano.

. 60 .

PRECISO DOS RESULTADOS

Um bom nvel de preciso e confiabilidade do teste de tetrazlio foi

demonstrado por Frana Neto et al. (1986). Vrias amostras de sementes de
soja foram enviadas a 41 laboratrios de sementes, com instrues especficas
para a execuo dos seguintes testes: a) germinao padro, de acordo com as
RAS (Brasil, 1976); b) envelhecimento acelerado atravs do mtodo de
gerbox; c) teste de tetrazlio, conforme descrito por Frana Neto et al. (1985);
e d) emergncia em areia. Aps o teste padro de germinao, o teste de tetrazlio
foi classificado como o mais preciso, superando os outros dois testes avaliados.
Em condies normais, os resultados de viabilidade obtidos nos testes
de germinao e tetrazlio devem ser semelhantes, permitindo diferenas de
at 5% entre os mesmo. Entretanto, discrepncias maiores entre os resultados
podem ocorrer, sendo explicadas por uma das seguintes razes: a) diferenas
de amostragem; b) tcnicas imprprias no teste de germinao; c) tcnicas
imprprias no teste de tetrazlio; d) presena de sementes duras nas amostras;
e) uso de lotes de sementes com vigor mdio ou baixo; f) presena de sementes
com elevados ndices de danos mecnicos ou por danos causados por percevejo;
g) sementes infectadas por fungos, tais como Phomopsis spp., Fusarium
semitectum, ou Colletotrichum truncatum.
Lakon, conforme citado por Gadd (1950, p. 253), mencionou que sua
longa experincia em comparar os resultados do teste de tetrazlio com os de
germinao padro demonstrou que quando havia diferenas entre os resultados,
o problema estava sempre ligado ao teste de germinao.

. 61 .

VANTAGENS E LIMITAES DO TESTE DE

TETRAZLIO PARA SOJA

7.1. Vantagens
a) o teste no afetado por diversas condies que podem afetar o teste padro
de germinao
b) foca ateno s condies fsicas e fisiolgicas do embrio de cada semente
individualizada;
c) permite rpida avaliao da viabilidade e do vigor (8 horas para a soja);
d) permite a identificao de diferentes nveis de viabilidade
e) fornece o diagnstico da causa da queda da viabilidade das sementes;
f) o equipamento necessrio simples e barato; e
g) um analista experiente pode ter um rendimento de quatro a cinco amostras
(2 x 50 sementes) por hora de trabalho.

7.2. Limitaes
a) requer treinamento especial sobre a estrutura embrionria da semente e sobre
tcnicas de interpretao;
b) relativamente tedioso, uma vez que as sementes so avaliadas uma a uma,
requerendo, desta forma, experincia e pacincia;
c) embora seja um teste relativamente rpido, ele consome um maior nmero
de homem-hora que o teste de germinao padro;
d) no mostra a eficcia de tratamentos qumicos, nem as injrias que estes
possam causar; e
e) requer do analista capacidade de deciso pelas caractersticas do teste.
Mason et al. (1982) reportou que o teste de tetrazlio no foi eficaz na
deteco de danos mecnicos recentes. Tal limitao pode ser facilmente
superada com a utilizao de uma soluo de tetrazlio de menor concentrao,
ou seja, 0,075%, conforme sugerida no presente manual.

. 62 .

QUANDO APLICAR O TESTE DE TETRAZLIO

O teste pode ser aplicado em todas as etapas do sistema de produo de

sementes, visando aprimorar o controle de qualidade, ou seja, na colheita, na
recepo, antes e aps o beneficiamento e a secagem, durante o armazenamento
e antes da semeadura.
Ele tem sido utilizado com sucesso mesmo antes da colheita: cerca de
um ou dois dias antes da colheita, faz-se uma amostragem de plantas de um
determinado campo de produo, trilhando-se as sementes manualmente.
Atravs da avaliao dessas sementes pelo teste de tetrazlio, pode-se verificar
os nveis de vigor, viabilidade e da ocorrncia de danos de percevejo e de
deteriorao por umidade. Dependendo dos resultados obtidos, poder ser
decidido com segurana se o referido campo apresenta qualidade para ser colhido
como semente ou como gro. Isto pode resultar em economias significativas
aos produtores de sementes, no que se refere a evitar despesas desnecessrias
de transporte, secagem, beneficiamento, embalagem e armazenamento de lotes
de sementes de baixa qualidade.

OBSERVAO FINAL
As informaes contidas no presente manual esto ilustradas no vdeo
DIACOM: diagnstico completo da qualidade da semente de soja. 1.
Metodologia do teste de tetrazlio (DIACOM, 1994), que est disponvel no
Setor de Publicaes da Embrapa Soja.

. 63 .

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