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Microbiologia.Modificado
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Tema 1: Introduccin
Definicin:
Parte de la biologa que estudia seres que no se pueden ver a simple vista
(>0,1mm).
Existen dos tipos de microrganismos:
Con estructura celular: procariotas y eucariotas.
Sin estructura celular: virus, priones y viroides.
Todos los no celulares son parsitos obligados. Ningn microrganismo tiene tejidos
aun pudiendo ser unicelulares o pluricelulares.
Para poder estudiar los microrganismos fue necesaria la invencin del microscopio. El
primer microscopio lo diseo Leeuwenhoek en el siglo XVII, observa muchas cosas la
mas importante los animlculos (protozoos y bacterias).
Posteriormente Hooke desarrollo el microscopio compuesto, con dos lentes. En el siglo
XIX se solucionaran los problemas que causaban las dos lentes: aberraciones
cromticas y esfricas; esto lo logro un fsico, Abbe. La primera fabricacin en serie de
microscopios la llevo a cabo Zeiss.
Durante esos dos siglos se estudiaron muchas cosas distintas. La primera fue la
generacin espontanea, las primeras pruebas contra esa teora fueron los
experimentos de Spallazam. Lleno frascos con agua, la hirvi y los cerro de
hermticamente. Probo as que, si el cristal no se rompa ni se abran los frascos, el
agua no presentaba ningn microrganismo. Los defensores de la generacin
espontanea decan que no creca nada porque eliminaba el oxigeno, necesario para el
crecimiento de microrganismos. Acabaron con ello definitivamente Pasteur y Tyndel.
Pasteur diseo un matraz con cuello de cisne e hirvi el contenido, en el matraz no
creca nada a pesar de estar abierto al exterior y por tanto tener oxigeno. Tyndel
descubri que las esporas de resistencia podan sobrevivir al hervido. As que hirvi el
liquido varias veces para limpiarlo mas.
Pasteur estudio las fermentaciones descubriendo no solo la implicacin de los
microrganismos en ellas sino tambin la vida anaerobia. Uno de los discpulos de
Pasteur, Buchner describi el metabolismo anaerobio.
Otro avance importante de la microbiologa fue el descubrimiento de la relacin entre
los microorganismos y las enfermedades infecciosas. Nombres importantes en este
campo fueron Fracastarins, escribi el primer tratado de epidemiologa; Hunter,
demostr la infecciosidad de algunas enfermedades; y Lister, discpulo de Pasteur que
propuso la esterilizacin del material quirrgico.
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Pero el nombre por excelencia fue Koch que estudiaba el ntrax causando por
Bacillus
anthracx.
Vio que si se infectaba sangre de una animal enfermo en uno sano, el sano
enfermaba. Consigui aislar los microrganismos y cultivarlos en un laboratorio, luego
los inyectaba en un animal sano probando as que este era el microrganismos que
causaba la enfermedad.
Postulados de Koch:
Al principio se hacan cultivos en medio liquido pero no era til as que se usaron
rodajas de patatas, pan y otros medios naturales. Aqu si se podan ver colonias pero
eran opacas y demasiado hmedas. Se busc un gel til, para encontrarlo se probaron
muchos solidifcates hasta llagar al agar Agar. El grupo de Koch desarrollo tambin las
placas de Petri y las asas de siembra.
El descubrimiento de los virus se realiza durante el anlisis de desarrollo de bacterias.
Para limpiar medios se crearon filtros con un tamao de poro tan pequeo que las
bacterias no lo atravesaban. Se descubri que a pesar de filtrar el suero haba
enfermedades que se desarrollaban igualmente. Estos agentes patgenos se llamaron
VIRUS filtradores. Pero el primero en describir un virus fue Lwaff en 1957.
En el siglo XVIII Jenner prob que algunas enfermedades se podan evitar con
prevencin. Estudio la viruela, inyecto sangre de una vaca infectada en un humano,
que qued protegido de la viruela. De ah la palabra vacuna de vaca.
Pasteur fue mas haya y descubri que los cultivos viejos de bacterias perdan la
capacidad virulenta pero inmunizaban. Trabaj con el clera, pero lo prob tambin
con la rabia y el ntrax.
A finales del siglo XIX se descubren las propiedades de los agentes biogeoqumicos por
Winogradsky y Beijerink. Descubrieron las bacterias auttrofas, pero tambin las que
tienen preferencias por ciertos sustratos: S, P, N
Clasificacin:
Antes de Darwin, los microrganismos se incluan en los reinos animal o vegetal segn
sus caractersticas.
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En 1866 Haeckel incluyo a los microrganismos dentro del reino Protistas. Sin embargo
este reino inclua cosas demasiado diferentes as que se especifico un poco ms y se
crearon los Protistas superiores (eucariotas) y Protistas inferiores (procariotas). En
1974 Murray quiso que se considerasen reinos diferentes a estas dos divisiones, pero
no llego a ocurrir. Ms adelante y ya con estudios moleculares Woese creo los tres
Dominios: Bacterya, Eucarya y Archea.
Diferencias entre procariotas y eucariotas:
Procariotas
ADN circular
No pared nuclear
No nuclolo
No orgnulos verdaderos
Ribosomas 70S (50S+30S)
Eucariotas
ADN lineal
Pared nuclear
Nuclolo
Orgnulos verdaderos
Ribosomas 80S (60S+ 40S)
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P r = AN
Tipos de tincin:
Tincin simple:
solo usa un colorante. Se usa para ver la morfologa de bacterias.
Normalmente se usan colorantes catinicos. Dentro de las tinciones simples hay
algunas especiales: Negativas: se usa un colorante anionico que no entra en las clulas
sino que tie el medio. No necesita fijacin. Flagelo: es la nica forma de ver flagelos
con microscopio ptico. Utiliza como mordiente cido tnico y un colorante catinico.
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Tincin diferencial:
es la ms usada en microbiologa. Utiliza dos colorantes distintos y
entre ambos un agente decolorante, normalmente alcohol. GRAM: divide las bacterias
en GRAM + y que se diferencian por la estructura de su pared celular. Esta
diferenciacin tiene valor taxonmico. El colorante primario es cristal violeta en una
disolucin de lugol para integrar el colorante. Al aplicar el decolorante las GRAM
pierden el color, y al aadir el colorante secundario, sefranina, se tien de rojo.
Ziehl-Neelsen: es especfico para micobacterias, porque tienen importancia clnica as
que es til detectarlas. Este tipo de bacteria tiene una pared con muchos lpidos por lo
que es difcil de teir. Usa fucsina como colorante primario con calor para asegurarse
de que penetre en las micobacterias. Luego se lava con un decolorante cido alcohol.
Por ultimo se usa azul de metileno para teir el reto de bacterias.
Estudio GRAM
Estudio de Ziehl-Neelsen
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Tema 3: Procariotas
Son la parte ms pequea de la vida con todos los componentes necesarios para vivir.
Se miden en m con un micrmetro ocular. Existen varios tipos de morfologa:
Bacilos
: 0.5-1 m x 2-5 m.
Cocoides
: 0.7-1.3 m.
Espiral
:
- Vibrio: 0.5-1 m x 2-5
- Espirilo: 40 m
- Espiroquetas:
Las bacterias mas pequeas son los micoplasmos estn en el lmite de deteccin del
microscopio ptico 0.1-0.3 m. Los tamaos grandes son difciles de mantener porque
la relacin superficie/volumen disminuye mucho.
Existen morfologas raras por ejemplo las bacterias pedunculadas, cuyo pednculo
forma parte del citoplasma. Tambin bacterias filamentosas y miceliales.
Es posible que tras la divisin, las clulas hijas se queden unidas aunque sean
independientes. Las bacterias en espiral no se unen. Pero los bacilos y los cocos si que
lo hacen, formando estructuras distintas:
Bacilos:
- Diplobacilos: dos bacilos unidos.
- Estreptobacilos: los bacilos forman una cadena.
Cocos:
-
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Ribosomas procariotas:
son ribosomas 70S son un 60% ARN y un 40% protenas. Las
subunidades estn separadas en el citoplasma y su unin esta regulada por iones de
magnesio. Subunidad pequea: ARN 16S y 21 protenas. Subunidad mayor: ARN 55 y
23S y 34 protenas. Solo una de estas protenas esta presente en ambas subunidades,
tiene relacin con su asociacin.
Los orgnulos de procariotas no son verdaderos orgnulos porque tienen una
membrana simple, por ejemplo:
Vesculas de Chlorobium
: o clorosomas. En bacterias fotosintticas verdes. Realizan la
funcin de los cloroplastos.
Vacuolas de gas
: son orgnulos de flotacin. Presentan una membrana de protenas,
rgida, para poder soportar la presin del gas. Pueden ser, muy grandes hasta visibles
al microscopio ptico. Forma cilndrica con un extremo cnico.
Carboxisomas:
cuerpos polidricos de bacterias auttrofas. Fijan CO para usarlo como
sustrato. Contienen, por tanto, carboxilasa para fijar ese carbono.
Adems de estos orgnulos, en el citoplasma tambin nos podemos encontrar
inclusiones de distintas sustancias:
Inclusiones de materiales de reserva:
Nos encontramos dos tipos de sustancias:
Polmeros de glucosa (almidn y glucanos) y poli--hidroxibutinato, exclusivo de
procariotas. Habitualmente solo tienen un tipo de sustancia de reserva. Cuando las
clulas crecen casi no hay reservas pues necesita esas sustancias constantemente, las
reservas se forman durante el reposo cuando la clula esta ms inactiva.
Grnulos Metacromticos:
o de volutina. Aparecen de color rojo cuando se tien con
Azul de Metilo. Son polmeros lineales de fosfato de alto peso molecular.
Normalmente aparecen tras la fase de crecimiento. Se usan como fuente de ATP.
Inclusiones de azufre intracelulares
: principalmente en bacterias rojas y en el gnero
Beggiatoa
. Ocurre cuando en el medio hay sulfuro y normalmente en bacterias que lo
utilizan como sustrato para el metabolismo
Magnetosomas:
cristales intracelulares de magnetita, rodeados por una membrana
de: protenas, fosfolpidos y glicoprotenas. El nmero y disposicin es un carcter
taxonmico. Se usan para detectar corrientes electromagnticas.
rea nuclear:
cromosoma bacteriano condensado. No presenta membrana. En 1963 el
grupo de Cairms extrajo el ADN de
Escherichia coli
. Es una doble hlice circular con
unos 5x10pares de bases. No hay protenas asociadas para la carga del ADN, est
regulado por poliamidas.
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membrana.
Algunas Archea no tienen una bicapa sino, una monocapa lipdica.
La membrana plasmtica es un rgano vital si falta la clula se muere.
Funciones:
Difusin facilitada.
Permeabilidad selectiva
Translocacin de grupos.
Transporte activo.
Produccin energtica.
Biosntesis de distintos componentes celulares.
Permeabilidad selectiva:
Limita la entrada de sustancias al interior de la clula. Puede tener lugar de tres modos
principales:
-
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Produccin de energa:
Tiene lugar en la parte de la membrana donde estn todas las protenas encargadas de
la cadena de transporte electrnico. En este sentido actan del mismo modo que las
membranas mitocondriales.
Biosntesis de componentes celulares:
La membrana presenta protenas que tienen funcin sintetizadora. Se cree que
pueden tener funcin en la replicacin del ADN y en la sntesis proteica porque se ha
visto un alto nmero de poliribosomas asociados a protenas de la membrana
plasmtica.
Puede presentar sistemas de membrana: mesosomas, es decir, invaginaciones de
membrana con funcin de replicacin; membranas fotosintticas, respiratorias, etc.
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Adems este rgano presenta protenas mot (motoras) que hacen girar el
flagelo, y protenas fli (conmutadoras) que activan o inhiben el movimiento.
GRAM
GRAM +
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Tactismo:
Qumotaxis y Fototaxis, seran ejemplos de tactismo pero podran ser positivos o
negativos, es decir, pueden favorecer el movimiento de una bacteria hacia el estmulo
o escapar de l.
Movilidad deslizante:
Tambin ll amado gliving es un tipo de movimiento que no necesita flagelos, solo se
da sobre superficies gelatinosas. Es muy lenta y la presentan en bacterias fibrosas y
cianobacterias.
En espiroquetas los filamentos axiales se comprimen y luego se liberan bruscamente.
Efecto muelle.
Pili:
Solo se encuentra en GRAM , son ms cortos que flagelos y son rgidos. Estn
formados por protenas, pilinas, y no tienen estructuras de anclaje. Hay dos tipos:
Pili tipo i: antes conocidos como fimbrias. Muchos, anchos y con funcin de
adherencia.
Pili tipo f: son menos abundantes, ms estrechos y largos. Codifican en
plsmidos conjuntivos. Llevan a cobo la conjugacin. Son receptores para
bacterias.
Esporas:
Funcin de resistencia o de diseminacin. Hay dos tipos:
Actinomicetos: tipo de bacterias similares a los hongos, la espora son
diseminativas, no de resistencia. Varias por bacterias.
Endosporas: estructuras de resistencia no diseminaticas. Solo una bacteria. Es
criptobiotica.
Las endosporas se dan tanto en GRAM como +. Son muy resistentes al calor y la
desecacin. Pueden estar en este estado muchsimo tiempo.
La razn de esporulacin puede ser la concentracin de sustancias las condiciones
adversas, la superpoblacin. Adems tiene que estar en un momento concreto del
ciclo celular, tras la duplicacin, siendo este punto la etapa 0 del proceso de
esporulacin.
Etapa 1:
condensacin de los dos cromosomas hijos para formar un filamento axial.
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Etapa 2:
formacin del septo de la espora, mediada por la protena Fits Z. La divisin
ser desigual, la parte pequea dar lugar a la espora y la grande al esporangio.
Tambin comienza el proceso de invaginacin.
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Tema 6: Virus
Son parsitos obligados que se reproducen dentro de las clulas y aprovechan sus
estructuras para su propio desarrollo. Son patgenos peligrosos porque presentan una
gran capacidad de mutacin y por tanto son difciles de tratar.
El primer medio de proteccin contra una enfermedad fue contra un virus, aunque en
aquel momento no se saba que lo era, la Viruela por Jenner. Primera vacunacin.
Ivanowsky y Bergerink descubrieron el primer virus, causante del mosaico del tabaco.
Pero fue Stanley quien describi su estructura: protenas y cidos nucleicos (ADN
ARN).
Las protenas forman una cpside que rodea al cido nucleico, que puede ser
unicatenario o bicatenario. Esta cpside proporciona su especificidad al virus. Adems
la cpside puede estar rodeada por membrana plasmtica, esta membrana no la
construye el virus, sino que procede de la clula en la que fue formado, se denominan
virus envueltos. La membrana est cubierta de glicoprotenas fabricadas por el virus y
que median la unin virus-husped.
Adems de cidos nucleicos dentro de la capsula de algunos virus puede haber:
polimerasas, neurominidasas o lisozimas.
Estructura de la cpside:
Icosadrica
Bacilariforme o filamentosa
Pleomorfica o compleja
Infeccin por virus:
Adsorcin al husped
Penetracin: normalmente perdiendo la cpside, descpsidacin.
Formacin de estructuras: replicacin, transcripcin y traduccin; formacin de
la cpside.
Ensamblaje de nuevos virus.
Liberacin de los nuevos virus o Infeccin latente o Infeccin crnica o
Transformacin en una clula maligna.
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Infeccin latente
Infeccin crnica
Replicaccin:
ADN bicatenario:
ADN se replica para formar los nucleotidos de los hijos. Adems ese
ADN se transcribe para sintetizar las proteinas de la cpside. Formandose nuevos virus
en el ncleo de la clula husped.
ADN monocatenario:
pimero el ADN se duplica para formar una hebra bicatenaria.
Esta se replica y forma los nuclotido de los hijos. Adems de la traduccin para formar
las protnas de la cpside.
Los Hepadnoviroides:
tienen ADN bicatenario y adems presentan
reversotranscriptasa. As el ADN se transcribe a ARN que en el citoplasma se
retrotranscribe en ADN. Este ADN citoplasmatico es el que se usa para formar nuevos
virus.
ARN monocatenario positivo:
se sintetiza la cadena complementaria al replicarse el
ARN + va a los nuevos virus y el ARN se usa para la sintesis de proteinas
ARN monocatenario negativo:
en este caso es el ARN el que se combierte en el
nucleotido del virus. Mientras que el ARN + se traduce a proteinas.
ARN monocatenario con reversotranscriptasa:
el aRN se retrotranscribe a ADN este se
replica y forma ADN bicatenario. EL ciclo continua del mismo modo que el de un virus
de ADN bicatenario.
ARN bicatenerio:
er replica y forma el genoma virico. Adems de eso se traduce y
forma las proteinas de la cpside.
Liberacin:
Puede ser por lsis celular o sin destruccion celular, un proceso similar a la penetacin
pero a la inversa.
Se clasifican por el tipo de clula a las que parasiten:
Vegetales: Algas, hongos y plantas vasculares.
Animales
Bacterias. Bacteriofagos y cianobacterias.
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En las plantas la mayor parte sern virus de ARN monocatenario. Agunos pueden
atacar a plantas y animales. Para las algas, hongos, levaduras y protozoos hay ARN
mono y bicatenario solo virus de AND bicatenario.
El genoma bacteriano destruye el ADN del hospedador y pone a su servicio la
maquinaria replicariva de la clula parasitada.
Por sus caracteristicas tienen que ser criados en clulas vivas, no en medios sinteticos.
Eso era un problema en su inicio, se obserban animales o plantas. Tambin se usaban
huevos de gallina fecundados que se dejaba crecer cinco das, se arrancaba un pedazo
de cscara y se inyectaba el virus, y se dejaba crecer incubando los huevos a 36C para
mutiplicar el virus. Era un mtodo que ahorraba espacio.
Con el desarrollo de las tecnicas de manipulacinde tejido se podan obtener clulas
de tejidos concretos y mantenerla en crecimiento en medios especiales, se les llamaba
cultivos primarios. Se vio que haba veces en que por sus caractersticas las cluals
podan durar mas tiempo, se llamaron cepas celulares, en algunos casos mutaba y se
volvian tumorales. Asi se consiquieron las lineas clulares de cultivo continuo, que es el
metodo ms comn para mantener virus.
Efecto citoptico (ECP):
es el efectoconcreto de un virus sobre la clula. Sierve como
criterio preliminar de clasificacin.
Una vez tenemos el virus la morfologa podemos conocerla por la microscopia
elctrnica.
Tenemos partculas mas pequeas:
Virusoides
: cidos nucleicos aislado de ARN o ADN, que son satelites de otros virus, se
encapasidan en otros virus, y se potencia la enfermedad que cause el virus. No pueden
replicarse por si mismos, precisan entrar con el virus.
Viroides:
Son de ARN monocatenario desnudo, sin protenas asociadas, de entre 250 y
400 nucleotidos. Forman estructuras tpicas, con bucles y asas, y cuando la forman
pueden considerarse como dobles cadenas aunque no lo sean. Esto le da resistencia ,
sobre todo en ataque enzimaticos. Estudiando sus secuencias se vio que sus secuancias
eran parecidas a las de intrones. Suelen causar enfermedades en las plantas.
Prin:
proteinas infectivas asociadas a encefalomielitis que se transmiten a humanos
por parte de animales. En 1982 Prusiner descubrio el agente que causaba la
enfermedad, se provocaba por acumulacin de priones alternos a proteinas que se
situabana en el cereboro. La diferencia bsica es el tipo de helices que forman, en la
protena normal el 3% es helice , en la alterada (prin) el 43%. Da lugar a la muerte
neuronal.
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Nitrogeno:
Las bacterias pueden utilizar una gran variedad de fuentes: inorgnica (NH,
amoniaco; y N atmosferico) y tabin fuentes orgnicas (lsis de protenas, peptidos
pequeos y bases nitrobenadas)
En un medio de cultivo se dan criofilizados, como medio. Se piensa que es as porque
los damos hidrlizados, las bases pueden utilizarlo todo, si las damos libres no son
asequibles.
En ambientes acuticoas hay poco N y las bacterias necesitan menos cantidad.
Asimilacin de nitrogeno:
Primer paso: asimilacin de amoniaco. Pasa directamente a forma orgnica,
aminacin directa del cido -cetoglutarico a - cetoglutarato. Por la
glutarato deshidrogenasa con gasto de NADH. A su vez puede aadir un
segunado amoiaco para dar lugar a glutamina, por la glutamina sintetasa con
gasto de ATP. Son los primeros compuestos que se forman al asimilarse el NH.
Segundo paso: El glutamato se une a oxalcetato para dar -cetoglutarato,
por la transaminasa. La Gluamina ms el cido - cetoglutarico da lugar a dos
molculas de glutamato por la Glutamato sintetasa con gasto de NADH.
Otra fuente inorgnica son los nitratos, que son reducidos a amoniaco para saguir ese
proceso. La reduccin de nitrato a amoniaco no se conoce muy bien, son una serie de
pasos cn varios intermediarios.
Tercer paso: el nitrogeno atmosfrico tambin puede ser usado como fuente.
+
Para incorporarlo se reduce a NH
, y una vez ah lo integramos . El proceso
est catalizado por la nitrogenasa que tiene dos componentes: el primero es
una proteina con Fe y Mo, el segundo solo contiene Fe. Para que pueda ejercer
su funcin nacesita poder reductor y ATP. Pueden variar entre unos grupos y
otros. No se han detectado intermediarios.
Azufre
:
Los amino cidos que contienen azufre se pueden utilizar como fuente de este
nutriente, pero la mayora de los organismos usan el in sulfato como fuente
inorgnica. La utilizacin ocurre por un proceso conocido como reduccin asimiladora
del sulfato, para distinguirla del proceso que usan las bacterias que respiran con
sulfato como receptor de electrones.
Sintesis de sulfato activo (PAPS= fosfato de fosfoadenosina). Se necesitan dos
molculas de ATP.
Reduccin del sulfato activo a sulfito. Se forma poder reductor como NADPH.
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Oligoelementos:
Cobalto: se usa para la sintesis de vitamina B
Zinc: estabilizador de proteinas.
Molibdeno: forma parte de algunas enzimas con funcin de oxidacin-reduccin.
Manganeso: es un cofactor de enzimas.
Factores de crecimiento:
Sustancias necesarias para el crecimiento especifico que no pueden ser sintetizadas
por los microorganismos. Un ejemplo seran vitaminas, amino cidos, purinas y
pirimidinas.
Un microorganismo que no necesita factores de crecimiento es un Prototrofo. Si no
puede sintetizar por si mismo los factores de crecimiento es un Auxotrofo.
Vitaminas:
algunos microorganismos requieren complejos vitaminicos muy
elavorados, como Estreptococos, otros en cambio no necesitan vitaminas,
bacterias entericas. La mayora de las vitaminas actuan como cofactores de
enzimas.
Amino cidos:
pueden suministrarse como amino cidos libres o en peptidos
pequeos.
Bases puricas y pirimidinicas:
Adems de lo odbio actuan como coenzimas. Se
pueden apartar como cidos nucleicos o libre.
Algunas bacterias necesitan
factores sanguineos
como anillos porfirinicos. Por
este motivo hay que cultivarlos en sangre
Haemophilus
.
Incluso la
N-acetilglucosamina
para
Bifidobacterium
. En el aparato digestivo de
lactantes.
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Latencia:
la velocidad de crecimiento durante esta fase es cero, sera mientras
la clula se prepara para dividirse. Ser ms larga si las clulas estan daadas o
si viven en un medio pobre en nutrientes.
Induccin enzimatica: si cambia la fuente de C o N, se puede volver a
entrar en fase de latencia hasta que se formen las enzimas necesarias para
catalizar esta nueva fuente. De la inducci enzimatica derica el crecimiento
diausico, en caso de que en un medio existan dos fuentes de nutrientes una
ms facil de explotar que la otra, cuando se termina la primera hay un tiempo
de latencia antes de poder explotar la segunda, pues se necesitan enzimas
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Fase exponencial:
el crecimiento es continuo, su velocidad depende de las
condiciones, si un organismo est en condiciones ptimas puede crecer ms
lento que otro que este en peores condiciones pero cuyo crecimiento sea ms
rpido; por ejemplo los procariotas se dividen mucho mas deprisa que los
eucariotas. En laboratorio cultivamos en medios cerrados con nutrientes finitos
con lo que el crecimiento no es indefinido.
Fase estacionaria:
ocurre cuando el crecimiento finaliza, la velocidad de
crecimiento se hace cero, esto puede ocurrir por dos motivos principales o
enpiezan a escasear los nutrientes o se acummulan productos de desecho
txicos. Estas bacterias estn activas pero no en divisin. Si ocurre por
agotamiento de nutrientes no hay aumento ni de masa clular ni de nmero de
clulas, pero si se da por acumulacin de sustancias txicas la masa clular
aumentara durante un tiempo mientras que el nmero de clulas permanecer
estable.
Fase de muerte:
la velocidad de crecimiento se vuelve negativa. Puede ocurrir
lsis clular co lo que el nmero de clulas y la masa disminuyen al mismo
tiempo; por muerte sin lsis con lo que el nmero de clulas viables disminuye
pero no la masa celular. Esto nos permite determinar el efecto de un
antibiotico en una poblacin bacteriana:
- Bacteriosttico: inhibe el crecimento pero no mata a las clulas.
- Bacterizida: provoca la muerte pero no la lsis.
- Bacterrialitico: produce la muerte clular por lsis.
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Toma de datos
:
Medida del nmero de clulas:
Exiten mtodos que nos permiten contar el nmero de clulas totales o el nmero de
clulas viables, incluso hay mtodos que nos permiten contabiizar ambas cosas.
N de clulas totales: recuento al microscopio, usando una cuadricula de
tamao y volumen conocidos; y contador electrnico de partculas, segn el
tamao del surco podemos ser ms o menos discriminativos segn el tamao
pero no podemos estar seguros de que todo lo contado sean clulas.
N de clulas viables: recuento en placa, por diluciones seriadas; filtracin de
membrana, cuyo tamao de poro va de los 0,22 a los0,45 m; NMP (nmero
ms probable), estimacin por medio de tablas estadisticas.
N de clulas totales y viables: tien los nucleotidos para saber que clulas se
estn dividiendo y cuales no. Citometria de flujo (rodamina 123 las clulas
viables se forman cadenas dobles un color , se forman cadenas simples otro
color) Microscopio de fluorescencia, emite luz de diferentes longuitudes de
onda segn halla replicacin o no la halla.
Medida la masa celular:
Exiten mtodos que nos permiten medir la masa celular de forma directa o indirecta,
en decir con clulas vivas o con cluas muertas.
Mtodos directos: peso en seco o peso en humedo. Adems podemos medir el
contenido de lipopolisacridos, cido muramico o nitrogeno de la clula, en
clulas vivas medimos el ATP.
Mtodos indirectos: turbidimetro, medimos la turbidez de la suspensin sin
daar las clulas.
DO = 2 logT siendoDOladensidadpticayT latransmutancia
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de los microorganismos.
Agente microbicida o germicida
:
aquellos agentes antimicrobianos que causan la
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Los rayos gamma pueden ser utilizados tambin para la esterilizacin de alimentos,
aunque existen restricciones en su uso por el posible efecto de la radiacin sobre las
propiedades del alimento.
Filtracin:
Es el mtodo alternativo a la esterilizacin por calor cuando se trata de esterilizar
lquidos termosensibles o gases. Se utilizan filtros con tamao de poro demasiado
pequeo para que pasen los microorganismos, pero suficientemente grandes para
permitir el paso del lquido. Estos filtros retienen las bacterias, pero dejan atravesar los
virus. Los filtros de profundidad estn formados por material fibroso o granular de
distinta naturaleza que forma un entramado que retiene gran parte de las bacterias.
Suelen utilizarse como pre-filtros para eliminar las partculas de gran tamao que
colmataran los filtros esterilizantes. El tipo de filtro ms comn utilizado en la
esterilizacin de lquidos es el filtro de membrana. Existen distintos tipos de filtros de
membrana que se componen de polmeros que permiten el control del tamao medio
del poro ( entre0,45 y 0,22 m). stos ltimos son los que garantizan la eliminacin de
todas las bacterias, ya que las bacterias ms pequeas conocidas miden alrededor de
0,3 m.
Un tipo de filtros especficos denominados filtros de aire particulado de alta eficiencia
(HEPA
) se utilizan en las cabinas de flujo laminar y de seguridad biolgica. Estos filtros
son unos filtros de profundidad que permiten eliminar el 99,9% de las partculas de 0,3
m presentes en el aire. En las cabinas de flujo laminar el aire es forzado a travs de un
filtro HEPA proyectndose una vez estril en forma de cortina vertical en la ventana de
la cabina.
Control por agentes qumicos:
Son utilizados en la desinfeccin, no destruye las esporas y por lo tanto no son
esterilizantes. Existen sin embargo algunos como el xido de etileno o el
glutaraldehido que s eliminan esporas y por lo tanto deben clasificarse dentro de los
agentes esterilizantes. Los tipos ms comunes de agentes qumicos son:
Fenoles: Antiguamente se usaban para la desinfeccin pero en realidad
esterilizan. Es muy daino para el cuerpo humano.
Alcoholes: Son desinfectantes. El ms usado en laboratorio es el Etanol.
CHCHCH
Halogenos: Se utilizan para desinfectar lquidos y superficies. Los ms comunes
son el Cl (cloro) y el I (iodo).
Aldehdos: Tienen accin desinfectante. El ms usado es el formol o
formaldehdo.
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Microinsercin y microdeleccin:
Retromutacin
Mutagnesis dirigida:
Mutagnesis qumica:
- Analogos de base: sustancias que se cambian por una base pero que no
lo son.
- Agentes intercelulares:
- Sustancias que reaccionan con el ADN
Mutagnesis fsicas
Recombinacin (HGT):
*HGT: Transferencia Horizontal de Genes.
Es la mayor fuente de mutacin en microorganismos.
Transformacin:
importacin de ADN de un microorganismos a otro. Si a informacin
proviene de un virus se denomina transinfeccin.
En GRAM + el ADN entra directamente en la clula, mientras que en GRAM entre
dentro de vesiculas denominadas transfosomas. No todas las clulas son competentes
de forma natural, es decir hay clulas que no pueden llevar a cabo la transfomacin
por si solas.
Transduccin:
transferencia de ADN de una clula a otra a traves de un fago.
Normalmente estos virus formados no son infectivos y necesitan ayuda de otro para
entrar en la clula, a este otro virus lo llamamos Helper y es un virus funcional. Hay dos
tipos de transduccin:
Tansduccin generalizada: se empaqueta cualquier regin del ADN del
hospedador en el virin. Normalmente estos virus formados no son infectivos y
necesitan ayuda de otro para entrar en la clula, a este otro virus lo llamamos
Helper y es un virus
funcional.
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Conjugacin:
transferencia gentica que involucra contacto clula a clula.
*Plamido F: molcula de ADN circular. Contiene genes que regulan la replicacin.
Contiene elementos transponibles que permiten la integracin en el cromosoma del
redeceptor.
Tipos de plasmidos:
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