Departamento de Ciencias de la Vida

Carrera de Ingeniera de Biotecnologa

Cultivo de Tejidos
Nombre: Boada Anah
Fecha : 01 de Agosto del 2016
Beneficios de las plantas Haploides
Produccin de plantas haploides
Si consideramos haploide al individuo que posee un solo juego de cromosomas de la especie, no estaramos
incluyendo en esta clasificacin a aquellos individuos derivados de especies poliploides, cuya constitucin
gentica es igual a la de los gametos normales de dicha especie. Por ejemplo, un autopoliploide AAAA (2n = 4x)
dara lugar a individuos haploides AA (n = 2x), que por tener dos juegos cromosmicos (AA) no podran ser
incluidos en la definicin. Por lo tanto, una solucin sera denominar como haploides a los individuos originados
a partir de especies diploides, que posean un solo juego de cromosomas (n = x), llamando polihaploides a
aquellos individuos con una composicin cromosmica igual que la gamtica normal de la especie, que tengan
dos o ms juegos cromosmicos (n > x). Otra posibilidad sera considerar el trmino haploide en un sentido ms
amplio, comprendiendo en ste a todos los individuos que posean una constitucin cromosmica igual a la de los
gametos normales de la especie (n = 2n/2). Llamaramos de esta manera monoploides y polihaploides a los
individuos provenientes de plantas diploides (2n= 2x) y poliploides (2n> 2x) respectivamente (Todt et al. 2006)
Cultivo de ovarios: puede ser eficaz para obtener haploides a partir de cruzamientos Interespecficos.
Obtencin de Haploides
Las plantas haploides aparecen en muy baja frecuencia en la naturaleza, siendo necesaria la posterior ocurrencia
de duplicacin cromosmica para la obtencin de semillas. Por ello, la produccin artificial de haploides resulta
siempre ms efectiva (Chen et al. 2004).
Origen de los haploides Ginognesis: desarrollo de un gameto femenino no fecundado. Se logra por:
Castracin y aislamiento de las flores. Plantas a partir de micrsporas es necesario quebrar el mecanismo
responsable de la asimetra en la primera mitosis del polen.
A partir de alguna clula haploide del saco embrionario distinta del gameto femenino sinrgidas o antpodas)
(Chen et al. 2004).
Mtodos ms utilizados para la obtencin de plantas haploides:
Entre los mtodos disponibles actualmente para la obtencin de doble haploides, los ms utilizados son la
hibridacin interespecfica e intergenrica y la andrognesis.
Cultivo de Anteras: Consiste en el cultivo de anteras inmaduras en un medio de induccin, donde las
micrsporas competentes originarn callos, que sern luego transferidos a un medio apropiado para la
regeneracin de plantas.
Cultivo in vitro de anteras y granos de polen
Las clulas gametofticas, mediante cultivo in vitro pueden inducirse a abandonar su curso ontognico normal
para seguir una va esporoftica que conduzca a la formacin de esporofitos haploides. Las tcnicas

convencionales para la produccin de plantas homocigticas (lneas puras) son muy laboriosas y poco eficientes,
pues se requiere de varias generaciones de retrocruces para obtenerlas.
La utilizacin de tcnicas alternativas como el cultivo in vitro de anteras, de polen o de microsporas han
permitido aumentar la eficiencia en la produccin de haploides para los programas de mejoramiento (Endress,
1994).
Mediante el mtodo de cultivo in vitro de anteras, las microsporas que se encuentran dentro de las anteras
inmaduras inducen a la formacin de callo, desde el cual subsecuentemente se estarn regenerando las plantas.
Una ventaja importante de este sistema es que el callo derivado de las microsporas es haploide. Sin embargo, la
desventaja de ste es que slo una pequea proporcin de la gran cantidad de anteras produce callo. Debido a lo
anterior, esta tcnica est limitada a aquellas especies que son capaces de regenerar grandes cantidades de
plantas haploides.
Los primeros logros en el cultivo in vitro de anteras de arroz fueron la base para el desarrollo de sistemas
genticos en la mayora de especies de cereales (Chih-ching et al, 1975, Chen, 1978; Chaleff and Stolarz, 1981).
Posteriormente han realizado trabajos, tanto en el cultivo de anteras de arroz (Chaleff and Stolarz, 1981, Finnie
et al, 1989); como en el cultivo de microsporas y granos de polen de arroz (Rueb, et al, 1994; Ogawa, et. al
1994-1995; Nakamura, et. al, 1995; Mandal and Gupta, 1995). El potencial que posee el cultivo de anteras surge
de la constitucin gentica de las clulas de polen.
Aplicaciones
La mejor respuesta en cultivo de anteras se produce cuando el polen se encuentra en la etapa comprendida entre
la microspora tarda y el polen temprano (etapas muy tempranas de la evolucin de los granos de polen).
Se aplica en maz, arroz, cebada, trigo, papa y tabaco. El cultivo de anteras produce homocigosidad donde cada
individuo habr fijado su genotipo y no sufrir segregacin adicional. Las anteras pueden quitarse o removerse
aspticamente de la flor esterilizada para ser puestas en un medio de cultivo adecuado. Una proporcin de polen
dentro de estas anteras, particularmente de aquellas de las especies Solanceas, crecen a travs de una serie de
fases de desarrollo, dando como resultado plantas haploides. Este fenmeno se lo ha designado como
andrognesis. Las condiciones de cultivo y manipulacin requerida producen embriones a partir de anteras en
cultivos que son bien establecidos para cada planta.
Cultivo in vitro de frutos inmaduros
El cultivo de embriones consiste en el aislamiento y crecimiento in vitro, en condiciones estriles de un embrin
inmaduro; con el fin de obtener una planta viable.
Se ha usado para diferentes propsitos como:
Estudiar requerimientos nutricionales de embriones en desarrollo.
Rescatar embriones hbridos provenientes de cruzamientos interespecficos.
Producir monoploides.
Superar la latencia de semillas.
Inducir embriognesis somtica.
El desarrollo de embriones vegetales se caracteriza por dos tipos de cultivo:
Cultivo de embriones inmaduros: Se originan de semillas no acabadas de madurar con el objeto de impedir el
aborto embrionario y de esta manera obtener una planta viable. Cabe destacar que este tipo de cultivo es
extremadamente difcil porque se necesita ardua diseccin y un medio nutritivo complejo.
Cultivo de embriones maduros: se utiliza para eliminar la inhibicin de germinacin de las semillas, se utiliza
un medio simple con agar, azcar y minerales. En el cultivo de embriones no se encuentran generalmente
problemas de desinfeccin. Las semillas maduras se encuentran desinfectadas en su exterior, a partir de ellas se
obtienen los embriones abriendo l cubierta seminal. Si las semillas an estn inmaduras, el fruto an cerrado
permanece estril y al abrirlo se obtienen lo vulos sin infectar. Los embriones aislados in vitro muestran una
germinacin precoz. Los factores que afectan el xito del cultivo de embriones son:
1. Genotipo

2.
3.
4.
5.
6.

Estado de desarrollo del embrin en el momento de aislamiento.

Condiciones de crecimiento de la planta madre.
Composicin del medio de cultivo.
Oxgeno
Luz y temperatura.

Aplicaciones
Entre las aplicaciones podemos citar las siguientes:

Eliminar la inhibicin absoluta de germinacin de semilla.

Acortar el ciclo de mejora, por ejemplo en manzana, rosa, orqudea.
Produccin de haploides.
Prevencin del aborto embrionario en frutales.
Propagacin vegetativa.

Cultivo de vulos: En ciertos cruzamientos interespecficos, el cultivo de un vulo completo ha sido ms

efectivo para el rescate de embriones que el cultivo del embrin aislado, debido a que el cultivo del vulo intacto
puede ayudar a la absorcin de nutrimentos por el embrin.
El cultivo de vulos se ha usado para rescatar embriones derivados de cruzamientos, obteniendo hbridos
en especies de algodn del viejo y del nuevo mundo, adems se us en el cultivo de vulos para rescatar
embriones de Carica papaya.
El cultivo de vulos tambin ha sido tiles para rescatar hbridos intergenricos de Lolium perenne y
para rescatar embriones abortados en uvas sin semillas.
Los factores que afectan el cultivo de vulos son: la placenta, osmolaridad y los reguladores de
crecimiento.
Identificacin de Haploides:
Morfologa:
Las plantas haploides son, en general, ms pequeas que las diploides, tanto en sus partes vegetativas como
florales. Esto se debe principalmente a la disminucin en el tamao de sus clulas. Es lgico pensar que el
fenotipo ms pequeo de las plantas puede ser una primera aproximacin en la bsqueda de haploides. Si esta
disminucin de tamao fuera notable en las semillas, sera muy fcil realizar una seleccin mecnica, aunque
sucede en pocas especies.
Poliembriona: La presencia de poliembriona facilita la deteccin de embriones haploides; no obstante ello,
debe realizarse el control citolgico correspondiente.
El porcentaje de embriones gemelos observados vara con la especie y el genotipo.
Genes marcadores: Con este fin puede utilizarse cualquier par de alelos cuyos fenotipos dominante y recesivo
sean fcilmente distinguibles. En la prctica, conviene utilizar marcadores que posean manifestaciones
fenotpicas claras en semilla o en plntula y de esta manera hacer una seleccin ms econmica en tiempo y
esfuerzo. Para identificar haploides en una variedad que se supone homocigota, se realizan cruzamientos con
otra variedad que sea homocigota para el alelo alternativo. La mayor parte de la descendencia ser heterocigoto
(diploide), con fenotipo dominante. Los individuos que aparezcan con el fenotipo recesivo seran haploides,
obtenidos por partenognesis o andrognesis, segn sea el fenotipo recesivo materno o paterno, respectivamente
(Chen et al. 2004).
Importancia de los haploides y aplicaciones en el mejoramiento vegetalLos mtodos tradicionales para el
mejoramiento vegetal han sido practicados por cientos de aos. Actualmente se ha llegado a una etapa en donde
estos mtodos son insuficientes para hacer frente a las demandas mundiales de produccin. A pesar de que cada
ao se liberan al mercado numerosas variedades, no persisten demasiado. Los objetivos de mejoramiento a largo
plazo no podrn ser alcanzados a menos que se genere mucha variabilidad gentica que pueda ser utilizada con

estos fines y que existan mtodos que acorten el tiempo necesario para la obtencin de variedades (Chen et al.
2004).
El advenimiento de las tcnicas biotecnolgicas y los avances en biologa molecular han permitido el desarrollo
de nuevas herramientas de gran utilidad en el mejoramiento vegetal. Entre stas, la produccin de haploides y
doble haploides es una herramienta interesante ya que permite acortar el tiempo requerido para la obtencin de
nuevas variedades, siendo un buen complemento para los programas de mejoramiento tradicionales. En algunos
casos, las poblaciones haploides o doble haploides (DH) carecen de genotipos heterocigotas y sirven para
encontrar genotipos raros, especialmente en el caso de caracteres recesivos, ya que stos no quedan
enmascarados por los alelos dominantes. Estas poblaciones presentan mayor variacin gentica aditiva y
ausencia de varianza gentica debida a la dominancia, si se las compara con poblaciones segregantes. Es decir
que se eliminan las complejidades del estado heterocigoto y se facilita enormemente el anlisis gentico. De esta
manera pueden distinguirse las mutaciones recesivas de forma inmediata, haciendo que el proceso de seleccin
sobre una poblacin de haploides resulte ms eficiente (Chen et al. 2004).
La produccin de haploides es una alternativa biotecnolgica de gran importancia y ha resultado exitosa en
varios cultivos, entre ellos cebada, arroz y trigo.
Un sistema de produccin de DH debe cumplir con tres requisitos bsicos para su utilizacin en programas de
mejoramiento:
- Debe producir lneas DH eficientemente a partir de todos los genotipos.
- Los DH obtenidos deben ser normales y estables.
Bibliografa:
1. Todt H, Guthausen G, Burk W, Schmalbein D, Kamlowski A (2006) Benefits and applications of
production of haploid plants in Nevada. Food Chemistry 96: 436440. doi:
10.1016/j.foodchem.2005.04.032.
2. Chen RS, Stallworth PE, Greenbaum SG, Kleinberg RL (2004) Origin and Identification of haploid
Gynogenesis. Journal of Magnetic Resonance, Series A. 110: 7781. doi: 10.1006/jmra.1994.1184.
3. Marcone MF, Wang SN, Albabish W, Nie SP, Somnarain D, Hil A (2013) Culture in vitro anther culture
and somaclonal variation Food Research International 51: 729747. doi: 10.1016/j.foodres.2012.12.046.
4. Greener J, Peemoeller H, Choi C, Holly R, Reardon EJ, Hansson CM, et al. (2000). Process of
somaclonal variation in haploid Journal of the American Ceramic Society 83: 623627. doi:
10.1111/j.1151-2916.2000.tb01242.x