Manual de Aulas Praticas em Anlises Ambientais - EXCELENTE MANUAL (MICROBIOLOGIA E ANALITICA EXPERIMENTAL) PDF

UNIVERSIDADE JOS DO ROSRIO VELLANO
MANUAL DE AULAS PRTICAS EM

ANLISES AMBIENTAIS
Prof. Guilherme Arajo Lacerda

Bilogo CRBIO 44480/04-D - FUNEDI/UEMG
Mestre em Biotecnologia - UNINCOR
Doutor em Agronomia/Fisiologia Vegetal - UFLA
Divinpolis - MG
2009
L131m
2009
Lacerda, Guilherme Arajo

Manual de aulas prticas em anlises ambientais / Guilherme Arajo Lacerda. Divinpolis : UNIFENAS, Faculdade de Biomedicina, 2009.
58 f.: il.; color.
1. Anlises ambientais. 2. guas. 3. Prticas. 4. Amostragem. I. Lacerda, Guilherme Arajo. II. Universidade
Jos do Rosrio Vellano, Faculdade de Biomedicina. III.
Ttulo.
CDU: 543.3

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MANUAL SIMPLIFICADO SOBRE OS PROCEDIMENTOS DE COLETA DE

GUA SUPERFICIAL E DE CONSUMO DOMSTICO
1. INTRODUO
O objetivo deste manual contribuir para facilitar o entendimento dos
procedimentos de coleta das amostras de gua superficial e de consumo
domstico que sero executadas na disciplina Anlise Ambiental.
A metodologia de coleta e preservao das amostras de gua est
descrita no Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater
(1995), publicado pela American Public Health Association. Acrescentamos
alguns cuidados simples que auxiliam e facilitam o trabalho no campo.
2. MATERIAL
Caixa de isopor (~21 litros);
Bolsas trmicas com gel (aproximadamente 5 em cada caixa de
isopor) (fig. 2);
Tubos para centrfuga (calcular 2 tubos para cada ponto de
coleta)
(fig. 3);
Unidades filtrantes de polipropileno (calcular 5 filtros para cada
ponto de coleta (fig. 3);
Seringas descartveis sem agulha (fig. 3);
Bandeja de isopor para acondicionar os tubos (fig. 4);
HNO3 (1:1);
Conta gotas;
Garrafo com gua deionizada;
Canetas para retroprojetor para identificar as amostras;
Fita isolante colorida para identificar os tubos para anlise dos
ctions e dos nions (2 cores diferentes, pode ser vermelha e
amarela);
Luvas de borracha;
Botas de borracha;
FACULDADE DE BIOMEDICINA - UNIFENAS - DIVINPOLIS

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Embarcao quando em grandes ambientes lnticos ou lticos.

3. MTODOS
3.1 GUA DE CONSUMO DOMSTICO
Figura 1: Fases para o procedimento de coleta de amostra hdrica de

residncias (Brasil, 2006)
1. Lavar as mos com gua e sabo;

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2. Limpar a torneira do usurio com um pedao de algodo embebido em

lcool;
3. Abrir a torneira e deixar escorrer a gua durante 1 ou 2 minutos;
4. Fechar e flambar a torneira;
5. Abrir novamente a torneira e deixar escorrer por mais 2 ou 3 minutos;
6. Coletar a amostra de gua;
7. Encher com pelo menos de seu volume;
8. Tampar o frasco, identific-lo, anotando endereo, a hora e a data da
coleta, o estado do tempo, o nome do coletor, etc;
9. Marcar o frasco com o nmero da amostra, correspondente ao ponto de
coleta;
10. Preencher a ficha de identificao da amostra de gua;
11. Colocar o frasco da amostra na caixa de isopor com gelo;
12. Lacrar, identificar e enviar a caixa para o laboratrio.
3.1.1 OBSERVAES IMPORTANTES

A. O tempo de coleta e a realizao do exame no deve exceder 24 horas;
B. Alm de residncias as amostras podem ser coletadas em hospitais,
escolas, torneiras pblicas, etc, o procedimento o mesmo acima;
C. Segundo a Cetesb antes da coleta, a torneira pode ser flambada, se
necessrio. Entretanto, esse procedimento no muito aconselhvel,
pois alm de provocar danos s torneiras, comprovou-se no ter efeito
letal sobre as bactrias;
D. Atualmente o processo de flambagem opcional. A Cetesb e o Standard
Methods recomendam utilizar soluo de hipoclorito de sdio a 100
mg/L e utilizando esse procedimento deve-se remover completamente o
hipoclorito, antes da coleta.
3.2 GUA SUPERFICIAL

A coleta de gua deve ser no mesmo local da coleta do sedimento de
corrente.
Em cada ponto coleta-se 2 amostras em tubos separados para anlise
dos ctions por ICP/OES e dos nions por cromatografia de ons.

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Deve-se sempre ambientalizar (lavar com a gua do rio) a seringa e os

tubos antes de iniciar a filtragem da gua.
3.2.1 Para anlise no ICP/OES

1. Encher a seringa sem o filtro. Anexar o filtro na ponta da seringa (observar
detalhe na Fig. 5) e filtrar a gua para o tubo de centrfuga. Repetir essa ao
at o volume de 50 mL. (Figs. 5 e 6);
2. Se a gua estiver poluda, principalmente com esgoto domstico ou com
muito material em suspenso, o filtro pode entupir. Nesse caso deve-se usar
outro (s) filtro (s). Deve-se ter o cuidado de realizar esse procedimento
afastado do rosto porque quando o filtro entope, pode ocorrer espirrar a
amostra na boca e nos olhos;
3. Adicionar 10 gotas de HNO3 para manter o pH<2 e fechar o tubo;
4. Escreva na tampa e no corpo do tubo o nmero da amostra e passe uma fita
colorida (vermelha) ao redor da tampa para identificar os ctions (Figs. 7 e 8);
5. Colocar o tubo na bandeja dentro da caixa de isopor com as bolsas trmicas.
(Fig. 9);
6. Fazer um branco (gua deionizada + HNO3) para cada 20 amostras;
7. A seringa e o(s) filtro(s) deve(m) ser descartado(s).
3.2.2 Para anlise no cromatgrafo de ons

1. Repetir os procedimentos 1 e 2;
2. Escreva na tampa e no corpo do tubo o nmero da amostra e passe uma fita
colorida (amarela) na tampa para identificar os nions. (Figs. 7 e 10);
3. NO acidificar a amostra;
4. Coloc-lo na bandeja dentro da caixa de isopor com as bolsas trmicas (Fig.
9);
5. A seringa e o(s) filtro(s) deve(m) ser descartado(s);
6. As amostras devem permanecer, obrigatoriamente, refrigeradas at o
momento da anlise.
3. OBSERVAES IMPORTANTES

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A. necessrio deixar as bolsas trmicas de gel no congelador da

geladeira do hotel todas as noites, ao chegar do campo, para que fiquem
congeladas para utilizao na manh seguinte;
B. Deve-se sempre usar luvas de borracha para evitar contato da pele com
a gua do rio que estiver poludo (Fig. 5);
C. Para facilitar o manuseio e o deslocamento das amostras da rea do
campo para o laboratrio, as mesmas devem ser acondicionadas, no
refrigerador do hotel, na vertical, dentro de sacos plsticos;
D. No transporte das amostras do campo at o laboratrio imprescindvel
que as bolsas trmicas estejam congeladas para a manuteno da
refrigerao at o momento de anlise.
Figura 2: Bolsas trmicas com gel (Cunha e Machado, 2003).

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Figura 3: Material para coleta de gua em cada ponto: 2 tubos para centrfuga,
unidades filtrantes e seringa descartvel sem agulha (Cunha e Machado,
2003).
Figura 4: Amostras de gua acondicionadas na bandeja de isopor (Cunha e

Machado, 2003).

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Figura 5: Coleta da amostra de gua (observar a posio do filtro entre a

seringa e o tubo) Crrego Fazenda Velha Projeto APA SUL RMBH (Cunha e
Machado, 2003).

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Figura 6: Coleta de amostra de gua no Crrego Fazenda Velha Projeto APA

SUL RMBH (Cunha e Machado, 2003).
Figura 7: Nmero da amostra registrado na tampa e no corpo do tubo (Cunha e

Machado, 2003).
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Figura 8: Fita isolante vermelha ao redor da tampa para facilitar a identificao

da amostra para anlise dos ctions (Cunha e Machado, 2003).
Figura 9: Amostras acondicionadas na bandeja dentro da caixa de isopor com

as bolsas trmicas (Cunha e Machado, 2003).
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Figura 10: Fita isolante amarela ao redor da tampa para facilitar a identificao
da amostra para anlise dos nions (Cunha e Machado, 2003).
Referncias Bibliogrficas
BRASIL. Fundao Nacional de Sade. Manual prtico de anlise de gua. 2

ed. rev. - Braslia: Fundao Nacional de Sade, 2006. 146 p.
CUNHA,
F.G.
da;
MACHADO,
G.J.
Manual
simplificado
sobre
os
procedimentos de coleta de gua superficial e de consumo domstico. CPRM:

Servio Geolgico do Brasil/DIGEOQ, 2003. 10p.
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Prtica 1. BIOENSAIOS DE TOXIDADE AGUDA COM SEMENTES DE

ALFACE (Lactuca sativa L.)
1. INTRODUO
As substncias txicas podem afetar o desenvolvimento normal das
plantas, principalmente nas suas etapas iniciais como germinao e
desenvolvimento de razes. Ao observar e medir o comprimento de razes
jovens e comparar estas medidas com um controle pode determinar a presena
de compostos qumicos txicos no ambiente. O ensaio pode ser aplicado na
avaliao de toxicidade de guas superficiais (lagos e rios) guas potveis,
residurias, lixiviados de solo, sedimentos e outras amostras slidas.
2. OBJETIVO
Determinar se a amostra hdrica exerce atividade txica sobre a
germinao de sementes de alface em relao aos grupos controle.
3. MATERIAL
Placas de Petri de vidro de 100 x 15 mm
Discos de papel filtro Whatman N0 3 (90 cm dimetro)
Sementes de alface ou outra semente pequena
Proveta de 100 mL
Pipetas
Palitos ou pinas
Rgua ou paqumetro
Frascos para as diluies
Amostra a ser testada
3.1 Reagentes e solues

Soluo de Zinco 0,001%
gua Dura ou Mineral sem gs
4. MTODOS
4.1 Preparo das diluies
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Para realizar a curva de dose resposta, se recomenda preparar um

mnimo de 4 a 5 diluies da amostra a ser analisada, de maneira tal a obter
valores intermedirios de toxicidade entre 100 a 0%. Para as amostras
ambientais se recomenda o uso do fator de diluio de 0,3 a 0,5. O uso do fator
0,3 permite avaliar a toxicidade em intervalos entre 100 a 1% e 0,5% entre 100,
30, 10, 3 e 1%. Ao aplicar o fator 0,5 necessrio utilizar maior nmero de
diluies para abranger o mesmo intervalo de concentraes (100; 50; 25;
12,5; 6,3 e 1,5%), entretanto se obtm maior preciso dos resultados. Para
fazer as diluies se utiliza gua dura ou mineral. O controle negativo
realizado com gua dura ou mineral (com a gua de diluio empregada).
Com a finalidade de testar a sensibilidade da semente utilizada,
simultaneamente ao teste da toxicidade da amostra, deve ser realizado um
controle positivo, utilizando zinco (Zn) como txico referncia.
Para o caso de amostras desconhecidas (por exemplo: ambientais),
antes de realizar o experimento, recomenda-se fazer um teste preliminar
utilizando doses em escala logartmicas (100, 10, 1, 0,1 e 0,01%) que permitam
estabelecer intervalo conveniente para obter valores de efeito entre 100, 50 e
0% necessrios para calcular o CE50 ou CI50.
4.2 Bioensaio de toxicidade
1) Colocar em cada placa de Petri um papel de filtro. Etiquetar cada placa
com a diluio e amostra correspondente, autor e data de incio e termino
do experimento.
2) Saturar o papel de filtro com 4 mL das amostras a serem estudadas,
evitando bolhas de ar, com a pina ou palito colocar cada semente no
lugar.
3) Cada placa deve conter 20 sementes, que sero repeties. Fechar as
placas, passar filme plstico para no ocorrer perda de umidade.
4) Cobrir com papel escuro e incubar por 120 h ou 5 dias a temperatura de 22
0
C.
5) Terminado o tempo de exposio, medir cuidadosamente o comprimento

da raiz de cada uma das plntulas correspondente a cada concentrao e
controles positivo e negativo.
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6) Quantificar o nmero de sementes que no germinaram e porcentagem de

variao do crescimento da raiz.
7) Colocar em um grfico dose-resposta, onde na ordenada coloca-se a
porcentagem de inibio e na abscissa a concentrao.
8) Calcular a concentrao que produz 50% de inibio CE/CI50 para cada
"end point".
5. FRMULAS
Germinao relativa da semente (%) = Nmero de sementes germinadas na concentrao x 100
Nmero de sementes germinadas no controle
Alongamento relativo da radcula (%) = Mdia do alongamento da radcula na concentrao x 100
Mdia do alongamento da radcula no controle
ndice de germinao (GI) = (% Germinao da semente) x (% Alongamento da radcula)
100%
5. RESULTADOS
5.1 Bioensaio com as sementes
Semente
CP
CN
[1]
[2]
[3]
[4]
[5]
(comprimento da radcula)
01
02
03
04
05
06
07
08
09
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
Comprimento total
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Comprimento mdio
N0 germinadas
Germinao
relativa
da
semente (%)
Alongamento relativo da
radcula (%)
ndice de germinao (GI)
6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
ARAJO, A.S.F.; MONTEIRO, R.T.R. Plant Bioassays to Assess Toxicity of
Textile Sludge Compost. Scientia Agricola, Piracicaba, v.62, n.3, p.286-290,
May/June, 2005.
DUTKA, B. Short-term root elongation toxicity bioassay. Methods for

toxicological analysis of waters, wastewaters and sediments. National water
research institute (NWRI), Environment Canada. 1989
GREENE, J.C. et al. Protocols for short term toxicity screening of hazardous
waste sites. U.S. EPA 600/3-88/029. Corvallis. OR. 1988.
WANG, W. Root elongation method for toxicity testing of organic and inorganic
pollutants. Environmental Toxicology & Chemistry, v.6, p.409-414, 1987.
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Prtica 2. DEMANDA QUMICA DE OXIGNIO - DQO
1. INTRODUO
Define-se Demanda Qumica de Oxignio (DQO) como sendo a
quantidade de oxignio necessria para oxidar quimicamente o material
orgnico e inorgnico contidos na amostra. O parmetro DQO proporciona uma
caracterizao do potencial de biodegradabilidade do material orgnico
presente em guas residurias, sendo sua determinao importante para
facilitar a escolha do processo de tratamento dessas guas. Alm disso, a
anlise de DQO tem sido utilizada no monitoramento e controle da carga
orgnica de guas residurias.
Os mtodos de determinao da DQO podem ser subdivididos em dois
grandes grupos: o mtodo do refluxo aberto e os mtodos do refluxo fechado.
O mtodo de refluxo aberto pode ser utilizado para uma grande diversidade de
guas residurias. Os mtodos de refluxo fechado so mais econmicos no
uso de sais metlicos reagentes, mas requerem homogeneizao das
amostras contendo slidos para que sejam obtidos resultados reprodutveis.
2. OBJETIVO
Determinar a DQO no meio aqutico e estabelecer uma correlao entre
a quantidade de matria orgnica presente no meio.
3. MATERIAL
2 Erlenmeyers 250 mL;
1 Placa aquecedora;
1 Suporte para Pipeta graduada de 25 mL com registro;
2 Abraadeiras;
1 Conta gotas;
1 Proveta graduada de 10 mL;
1 Proveta graduada de 100 mL;
2 Pipetas graduadas de 10 mL;
4-5 Prolas de vidro.
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3.1.1. Solues e reagentes

a) gua destilada;
b) Soluo de padro de permanganato de potssio KMnO4 0,0125 N;
c) Soluo de cido sulfrico H2SO4 (1:3);
d) Soluo de oxalato de sdio Na2C2O4 0,0125 N;
4. MTODOS
1) Soluo teste - adicione 100 mL da amostra + 10 mL da soluo de
H2SO4 + 10 mL da soluo de KMnO4;
2) Soluo branco -
adicione 100 mL de gua destilada + 10 mL da
soluo de H2SO4 + 10 mL da soluo de KMnO4;

3) Acrescentar as prolas de vidro e deixar em digesto durante 30 min.;
Se o KMnO4 descorar (clarear completamente), adicione mais 10 mL de
KMnO4;
4) Adicione 10 mL de oxalato de sdio e titule com KMnO4 at atingir uma
colorao rsea permanente;
5. FRMULA
PPM = Oxignio Consumido (K1 N1) (K2 N2) X 100

_________________________________________________________________________________________
Volume da amostra
Onde:
K1 - KMnO4 volume total gasto na amostra;
K2 - KMnO4 volume total gasto no branco;
N1 - Na2C2O4 volume total gasto na amostra;
N2 - Na2C2O4 volume total gasto no branco.
MATOS, A. T. Apostila de prticas de laboratrio. Disciplina Poluio
Ambiental. Departamento de Engenharia Agrcola e Ambiental. Universidade
Federal de Viosa, Viosa, Agosto de 2003
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Prtica 3. OXIGNIO DISSOLVIDO NO MEIO AQUTICO
1. INTRODUO
O oxignio indispensvel a praticamente todas as formas de vida,
mesmo na gua. A concentrao de oxignio dissolvido em um meio aqutico
varivel crucial que determina, em grande medida, o desenvolvimento de
organismos neste meio. Em sistemas biolgicos para tratamento de efluentes,
a medio e, muitas vezes o controle, da concentrao de oxignio dissolvido
fundamental para garantir o desenvolvimento dos micro-organismos adequados
e assim o funcionamento do sistema de tratamento de efluentes.
2. OBJETIVO
Determinar a concentrao de oxignio dissolvido no meio aqutico e
relacion-lo aos organismos que podem ou no se desenvolver nessas
condies.
3. MATERIAL
balo volumtrico de 250mL,
pipeta graduada de 10mL;
bureta;
erlenmeyer 250mL;
NaCl O,1 mol/L;
H2SO4 concentrado;
Sulfato de mangans MnSO4 325g/L;
Iodeto-Azida alcalino (500g NaOH + 150g KI + gua at 1L + 10g NaN3
em 40mL de H20);
Amido 2% (2g de amido e 0,2g cido saliclico gua at 100mL),
Tiossulfato
de
sdio
Na2S2O3
0,025M
(Dissolva
6,205g
de
Na2S2O3.5H2O em gua destilada. Adicione 1,5mL de NaOH 6N ou 0,4g

de NaOH slido dilua a 1L);
Iodeto de Potssio KI03 0,025M,
cido Sulfrico H2SO4 6N;
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4. MTODOS
4.1 Influncia da Temperatura
1. Encha at a marca um balo de 250mL com a amostra a temperatura
ambiente (mea a temperatura), adicione 1mL de MnS04 e 1mL de
reagente azida de sdio. Ao transferir os regentes coloque a ponta da
pipeta na superfcie da amostra;
2. Feche o frasco e misture lentamente por inverses sucessivas. Quando o
precipitado se formar (aproximadamente metade do volume do frasco),
adicione 1mL de cido sulfrico cone; Tampe novamente o frasco e misture
por agitaes sucessivas.
- Se necessria faa uma correo para o volume correspondente a

200mL da amostra devido a perdas por deslocamento com reagentes, ao usar
volume dos reagentes de 2mL (1mL sulfato mangans e 1mL de azida) e
frasco de 300mL use o seguinte volume da amostra para titulao
200x300/(300-2) = 201mL.
- Titule com tiossulfato 0,025M at colorao palha (cuidado para

colorao no ficar transparente), adicione ento algumas gotas de amido e
continue a titulao at o primeiro desaparecimento da cor azul.
- Calcule o teor de oxignio dissolvido em PPM, de acordo com a

seguinte proporo: 1 mL Na2S2O3 = 1 PPM O2 Dissolvido;
- Repita todo o procedimento anterior para uma amostra a 4C.
4.2. Influncia da salinidade

- Repita o procedimento 3.1 para uma amostra contendo NaCl 0,1 mol/L
a temperatura ambiente;
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2009
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the
Examination ofWater and Wastewater. Washington, 1998.
BOEHNKE, D. N.; DELUMYEA, R. D. Laboratory Experiments in Environmental

Chemistry. New Jersey : P. Hall, 2000.
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Prtica 4. DETERMINAO DA DUREZA TOTAL DA GUA
1. INTRODUO
A dureza total calculada como sendo a soma das concentraes ons
clcio e magnsio na gua, expressos como carbonato de clcio. A dureza de
uma gua pode ser temporria ou permanente. A dureza temporria, tambm
chamada de dureza de carbonatos, causada pela presena de carbonatos de
clcio e magnsio. Esse tipo de dureza resiste ao dos sabes e provoca
incrustaes. denominada temporria porque os bicarbonatos, pela ao do
calor, se decompem em gs carbnico, gua e carbonatos insolveis que se
precipitam. A dureza permanente, tambm chamada de dureza de no
carbonatos, devida a presena de sulfatos, cloretos e nitratos de clcio e
magnsio, resiste tambm a ao de sabes, mas no produz incrustaes por
serem seus sais muito solveis na gua. No se decompe pela ao do calor.
A portaria n 518/2004 do Ministrio da Sade estabelece para dureza o teor
de 500 mg/L em termos de CaCO3 como o valor mximo permitido para gua
potvel.
2. OBJETIVO
Dosar a dureza total, clcio e magnsio nas guas superficiais afim de
se evitar o acmulo de minerais nas tubulaes.
3. MATERIAL
Erlenmeyer 250 mL
Pipeta volumtrica 50 mL
Proveta 100 mL
Suporte universal
Funil
Bureta 25 mL
Bqueres
3.1 Reagentes e solues:
EDTA 0,01 M
Soluo tampo pH 10 (67,5 g NH4Cl e 570 mL NH4OH diludos para 1
litro);
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Indicador Eriocrome Black T

Soluo inibidora de Na2S a 5% (usando Na2S 9H2O)
4. MTODOS
1) Transferir 25 mL da amostra p/ Erlenmeyer e completar para 50 mL com
gua destilada;
2) Adicione 1 mL do soluo tampo;
3) Adicione 1 mL da soluo inibidora (Na2S) e 1 a 2 gotas do indicador
(Eriocrome Black T) e agite;
4) Titule lentamente com soluo EDTA at o matiz vermelho desaparecer
e surgir a cor azul.
5. FRMULA
n mols CaCO3 = n mols EDTA

Dureza total em mg/L CaCO3 = mL EDTA x 1000 x Fc
mL da amostra
Notas:
1. A ausncia de um ponto de viragem definido, geralmente, indica a
necessidade de adio de um inibidor ou que o indicador est
deteriorado;
2. No leve mais de 5 minutos para a titulao, medido aps a adio
da soluo tampo;
3. Caso a dureza da gua seja muito baixa, use amostra maior, at 250
mL adicionando proporcionalmente maior quantidade de soluo
tampo, do inibidor e do indicador;
4. Se precisar usar o inibidor adicionar 20 gotas (sulfeto de sdio);
5. Fc = fator de correo do EDTA quando houver e for diferente de 1.
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ANLISES AMBIENTAIS
2009
Prtica 5. DETERMINAO DA DUREZA CLCIO E DA DUREZA

MAGNSIO
1. INTRODUO
A dureza da gua definida em termos da concentrao dos ctions
clcio e magnsio - geralmente acompanhados dos nions carbonato,
bicarbonato, cloreto e/ou sulfeto. A gua que chega at nossas casas, ou s
indstrias e at a gua captada diretamente de uma nascente uma soluo
de vrios minerais que se dissolvem na gua pela sua passagem pelo solo e
encanamentos. Esses minerais, quase que em sua totalidade sais, no
comprometem o uso domstico da gua, mas, em algumas situaes,
normalmente quando ricas em sais de clcio e magnsio, podem formar alguns
sais insolveis desses ctions e provocar incrustaes e entupimentos das
tubulaes. Alm disso, a formao desses sais dificulta ou at impede a
formao de espumas, dificultando a ao de detergentes e sabes. Nestes
casos temos a chamada gua dura. A gua dura um no risco de sade, mas
um incmodo por causa do acmulo mineral em dispositivos eltricos e
tubulaes - principalmente em indstrias onde a gua utilizada para o
resfriamento de caldeiras.
2. OBJETIVO
Dosar a dureza clcio e magnsio nas guas superficiais afim de se
evitar o acmulo de minerais nas tubulaes.
3. MATERIAL
Erlenmeyer 250 mL
Pipeta volumtrica 50 mL
Proveta 100 mL
Suporte universal
Funil
Bureta 25 mL
Bqueres
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EDTA 0,01 M
Indicador murexida slido (0,2 g murexida e 100 g NaCl modos
conjuntamente e peneirados em 40-50 meshes)
NaOH 1 N
4. MTODOS
1) Pipete 50 mL da amostra de gua no Erlenmeyer, adicione 2 mL de
hidrxido de sdio 1N afim de se elevar o pH de 12 a 13;
2) Agite o conjunto, junte 0,1 a 0,2 g da mistura de indicador de murexida
(a soluo ficar rsea);
3) Titule lentamente com soluo EDTA 0,01 M at o surgimento de um
leve tom prpuro. Anote o volume de EDTA gasto.
4) Certifique-se de que o ponto estequiomtrico foi atingido, usando 1 a 2
gotas de EDTA 0,01 M em excesso;
5) Calcule a dureza devida ao on clcio, em mg/L, expressa em termos de
CaCO3;
6) Calcule a dureza devida ao magnsio pela diferena entre a dureza total.
5. FRMULA
Dureza clcio em mg/L = mL EDTA x 1000 x Fc

mL da amostra
A dureza magnsio dada pela expresso:

Dureza magnsio = dureza total (Prtica 4) dureza clcio
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Prtica 6. DETERMINAO DE ACIDEZ TOTAL EM GUAS
1. INTRODUO
O gs carbnico livre existente em guas superficiais normalmente est
em concentrao menor do que 10 mg/L, enquanto que em guas
subterrneas pode existir em maior concentrao. O gs carbnico contido na
gua pode contribuir significativamente para a corroso das estruturas
metlicas e de materiais base de cimento (tubos de fibro-cimento) de um
sistema de abastecimento de gua e por esta razo o seu teor deve ser
conhecido e controlado. Sabe-se no entanto que a acidez residual obtida
poder ser orgnica, ou de sais minerais de metais pesados, ou acidez mineral,
dependendo da existncia da acidez carbnica e do pH final.
2. OBJETIVO
Dosar a acidez nas guas superficiais devida ao CO2, cidos minerais e
sais hidrolisados.
3. MATERIAL
Erlenmeyer 250 mL
Pipeta volumtrica 50 e 100 mL
Proveta 100 mL
Suporte universal
Funil
Bureta 25 mL
Bquer 400 mL
Chapa aquecedora
Vidro de relgio
Cronmetro
Hidrxido de sdio NaOH 0,02 N
Soluo alcolica de fenolftalena
26

ANLISES AMBIENTAIS
2009
4. MTODOS
4.1 Determinao da acidez total das guas
1) Pipete 100 mL da amostra, transfira para Erlenmeyer de 250 mL e
adicione 3 gotas de fenolftalena, como indicador;
2) Titule pelo NaOH 0,02 N, at o surgimento da primeira colorao rosa
persistente;
3) Anote o volume de NaOH 0,02 N gasto e calcule a acidez como segue:
PPM de acidez (em termos de CaCO3) = volume de NaOH 0,02 N x 10.
4.2 Determinao da acidez carbnica das guas
1) Determine a acidez total conforme item 4.1;
2) Pipete 100 mL da amostra, transfira-os para Erlenmeyer de 250 mL e
submeta-os a fervura em chapa eltrica por, exatamente, 3 minutos;
3) Aps isto, retire o Erlenmeyer da chapa, cubra com o vidro de relgio e
deixe esfriar (NO AGITE);
4) Aps resfriado (temperatura ambiente), adicione 3 gotas de fenolftalena;
4a) Caso a amostra se colore de rosa ou vermelho, considere a anlise
concluda, e toda a acidez anteriormente existente na gua era acidez
carbnica;
4b) Se a amostra permanecer incolor, titule-a com NaOH 0,02 N at
colorao rsea. Neste caso, calcule a acidez carbnica como se segue:
PPM acidez carbnica (em termos de CaCO3) = (volume de NaOH 0,02
N gasto na determinao da acidez total volume de NaOH 0,02 N
gasto no subitem 4b) x 10
27

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2009
Prtica 7. DETERMINAO DE ALCALINIDADE TOTAL EM GUAS
1. INTRODUO
A alcalinidade total de uma gua dada pelo somatrio das diferentes
formas de alcalinidade existentes, ou seja, a concentrao de hidrxidos,
carbonatos e bicarbonatos, expressa em termos de Carbonato de Clcio. Podese dizer que a alcalinidade mede a capacidade da gua em neutralizar os
cidos. A medida da alcalinidade de fundamental importncia durante o
processo de tratamento de gua, pois, em funo do seu teor que se
estabelece a dosagem dos produtos qumicos utilizados.
Normalmente as guas superficiais possuem alcalinidade natural em
concentrao suficiente para reagir com o sulfato de alumnio nos processos de
tratamento. Quando a alcalinidade muito baixa ou inexistente h a
necessidade de se provocar uma alcalinidade artificial com aplicao de
substncias alcalinas tal como cal hidratada ou Barrilha (carbonato de sdio)
para que o objetivo seja alcanado.
Quando a alcalinidade muito elevada, procede-se ao contrrio,
acidificando-se a gua at que se obtenha um teor de alcalinidade suficiente
para reagir com o sulfato de alumnio ou outro produto utilizado no tratamento
da gua.
2. OBJETIVO
Dosar a alcalinidade nas guas superficiais visando capacidade da gua
em neutralizar os cidos e seu tratamento aos ndices adequados.
3. MATERIAL
Pipeta volumtrica de 50 mL;
Frasco Erlenmeyer de 250 mL;
Bureta de 50 mL;
Fenolftalena;
Indicador metilorange;
Mistura Indicadora de Verde de Bromocresol/Vermelho de Metila;
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2009
Soluo de cido Sulfrico 0,02 N;

Soluo de Tiossulfato de Sdio 0,1 N.
4. PROCEDIMENTOS
1) Tomar 50 mL da amostra e colocar no Erlenmeyer;
2) Adicionar
gotas
da
soluo
indicadora
de
verde
de
bromocresol/vermelho de metila;
3) Titular com a Soluo de cido Sulfrico 0,02 N at a mudana da cor
azul-esverdeada para rseo;
4) Anotar o volume total de H2SO4 gasto (V) em mL.
5. FRMULA
Alcalinidade total em mg/L de CaCO3 = V x 20
Notas:
1. Usar 0,05 mL (1 gota) da soluo de Tiossulfato de Sdio 0,1 N, caso a
amostra apresente cloro residual livre;
2. Utilizar esta tcnica na ausncia de alcalinidade fenolftaleina;
3. Caso haja alcalinidade Fenolftaleina, adicionar, antes da mistura
indicadora de verde de bromocresol/ vermelho de metila 3 gotas de
Fenolftaleina e titule com H2SO4 0,02N at desaparecer a cor rsea formada.
Em seguida continuar no passo b da tcnica;
4. A alcalinidade Fenolftalena s poder ocorrer se o pH da amostra for
maior que 8,2;
5. Na impossibilidade de conseguir a mistura indicadora de verde de
bromocresol/vermelho de metila, usar o indicador de metilorange. Nesse caso o
ponto de viragem no passo 3 da tcnica ser de amarelo para alaranjado;
6.
ponto
de
viragem
quando
se
usa
indicador
verde
de
bromocresol/vermelho de metila mais ntido do que quando se usa

metilorange;
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ANLISES AMBIENTAIS
2009
7. A frmula acima para ser utilizada quando se usa uma amostra de 50 mL.
Quando for usado 100 mL de amostra, o volume (V) passar a ser multiplicado
por 10;
8. Fc Fator de correo da soluo titulante.
30

ANLISES AMBIENTAIS
2009
ANLISE DO SOLO Coleta de Amostras
1. INTRODUO
De uma forma geral, a anlise de solo formada por uma corrente:
Coleta de Amostras Anlises Laboratoriais Interpretao dos Resultados.
Portanto, as responsabilidades pela qualidade das amostras so geralmente do
proprietrio, cabendo ao laboratrio analis-las sem questionar como foram
coletadas do solo.
2. OBJETIVO
Coletar uma pequena quantidade de terra que represente toda uma rea
a ser amostrada.
3. MATERIAL
Amostras de diferentes tipos de solo
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ANLISES AMBIENTAIS
2009
3.1 Ferramentas para coleta
Figura 11. Diferentes ferramentas utilizadas para coleta de amostras de solo.

Sugerem-se as mais comuns nas propriedades rurais: f p reta; g enxado;
h balde; i saco plstico.
O instrumento a ser utilizado para a retirada da amostra dever
satisfazer as seguintes condies:
Ser capaz de tomar pequenos, suficientes e iguais volumes de solo de
cada local de amostragem para compor a amostra composta que ser
enviada ao laboratrio.
Ser fcil de limpar.
Ser adaptado a diferentes tipos de solo.
Ser resistente e durvel.
Ser de fcil uso e possibilite uma coleta rpida das amostras.
Qualquer que seja o equipamento utilizado na amostragem deve-se
tomar o cuidado de retirar da superfcie do solo as plantas e restos vegetais.
4. PROCEDIMENTO DE COLETA
1) possvel tambm a mostrar adequadamente o solo com um enxado
ou p reta. Os cuidados e nmero de amostras so os mesmos
descritos para as outras ferramentas;
32

ANLISES AMBIENTAIS
2009
2) Aps a limpeza superficial do terreno, faa um buraco em forma de

cunha na profundidade de 0-20 cm, deixando uma parede vertical.
3) Corte, com o enxado, ou com a p reta, uma fatia de cima at embaixo
e transfira para o balde ou saco plstico.
Figura 12. Coleta-se uma amostra de 2-3 cm de solo, a pelo menos 20 cm de

profundidade.
Figura 13. Elimina-se as fatias laterais e amostra-se somente o miolo da fatia.

COMISSO DE FERTILIDADE DO SOLO DO ESTADO DE MINAS GERAIS.
Recomendaes para o uso de corretivos e fertilizantes em Minas Gerais; 4
aproximao. Lavras, 1989. 176p
EMBRAPA. Manual de mtodos de anlises de solo. Rio de Janeiro,
CNPS,1979.
33

ANLISES AMBIENTAIS
2009
Prtica 8. DETERMINAO DO pH E DOS METAIS TROCVEIS DO SOLO
1. INTRODUO
A disponibilidade de micronutrientes no solo afetada por fatores, entre
eles pH, teor de matria orgnica (MO), quantidade e tipo de argila e de xidos
e hidrxidos de Fe e Al, CTC, potencial redox do solo, temperatura e umidade,
alm da atividade microbiana. Segundo Shuman (1998), a formao de
complexos metlicos com compostos orgnicos, principalmente cidos hmicos
e flvicos, diminui a disponibilidade e toxidez de metais pesados para as
plantas e reduz sua mobilidade no solo. A capacidade de reteno de metais
do solo dinmica e pode ser alterada pelo manejo. Os principais fatores
responsveis pelo aumento da capacidade de reteno do solo so: o
incremento da matria orgnica com adubao orgnica, adubao verde,
cobertura morta e o aumento de pH (Nachtigall et al. 2009).
2. OBJETIVO
Determinar o pH, alumnio, magnsio e clcio trocveis de amostras de
solo.
3. MATERIAL
Pipeta de 2 mL;
Frasco Erlenmeyer de 250 mL;
Bureta de 50 mL;
Bquer 250 mL;
Peagmetro;
EDTA 0,025mol/L;
Erio-T 0,5%;
Tampo pH=10;
NaOH 0,025 N;
Azul de bromotimol 0,1%;
KOH 10%;
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2009
KCl 1mol/L;
Trietanolamina 10%;
Murexida;
4. PROCEDIMENTOS
4.1 Determinao do pH em gua e em HCl
1) Transfira 10 mL de solo seco ao ar para bquer e adicione 25 mL de
gua destilada;
2) Transfira 10 mL de solo seco ao ar para outro bquer e adicione 25
mL de KCI 1M;
3) Agite durante 1 minuto e deixe em repouso por 10 minutos, aps
esse tempo agite novamente;
4) Faa a leitura do pH, mergulhando o eletrodo no sobrenadante e sem
agitao;
5) Interprete os resultados de acordo com a tabela abaixo:
Tabela 1. Tipo de acidez do solo relacionada s condies.

pH
H2O > KCl
H2O < KCl
Condio
Tipo de Acidez
+3
absorvidos
Potencial
+3
livres
Ativa*
H e Al
H2O = KCl
H2O = KCl
H e Al
H2O < KCl
H2O > KCl
Altos teores de Al2O3 Fe2O3
Solos argilosos e interperizados
(*) A acidez ativa (pH em gua) no fornece a indicao da concentrao total dos cidos no
solo, mas fornece uma estimativa da concentrao de H+ na soluo do solo;
4.2 Determinao do alumnio trocvel

1) Transfira 10g de solo seco ao ar para bquer e adicione 100 mL de
KCI 1 M, agite durante 5 minutos e deixe em repouso por 12h ou
filtre. Esse filtrado ser utilizado para determinao do alumnio,
clcio e magnsio;
2) Do extrato obtido pipete 25 mL para erlenmeyer, adicione 3 gotas de
azul de bromotimol e titule com NaOH 0,025 N, at viragem para
azul;
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ANLISES AMBIENTAIS
2009
Calcule teor de alumnio trocvel pela expresso:

meq de Al+3 / 100 g de solo = V . f
onde:
V = volume (mL) do NaOH 0,025 N consumido;
f = fator de correo da soluo de NaOH;
4.3 Determinao do clcio e magnsio trocveis

1) Pipete 25 mL do extrato obtido com KCl 1M na determinao do
alumnio, transfira para erlenrneyer e adicione 2 mL de tampo pH=
10 e 2 mL de trietanolamina 50%;
2) Adicione 0,05 g de Erio-T e titule com EDTA 0,025 M at viragem
para violeta, anote o volume (mL) consumido V2.
3) Pipete outra alquota de 25 mL do extrato com KCl 1M e transfira
para erlenrneyer, adicione 2 mL de trietanolamina 50% e 2mL KOH
10%;
4) Adicione 0,05 g de murexida e titule com EDTA 0,025 M at viragem
para violeta, anote o volume (mL) consumido V1.
Calcule os teores de Clcio e Magnsio pelas expresses:
meq Ca+2 / 100 g solo = V1 . f
meq Mg+2 / 100 g solo = (V2 V1) . f
NACHTIGALL, G.R.; NOGUEIROL, R.C.; ALLEONI, L.R.F. Extrao seqencial
de Mn e Zn em solos em funo do pH e adio de cama-de-frango. Revista
Brasileira de Engenharia Agrcola e Ambiental, v.13, n.3, p.240249, 2009.
SHUMAN, L. M. Effect of organic waste amendments on cadmium and lead in

soil fractions of two soils. Communications in Soil Science and Plant
Analysis, v.29, p.2939-2952, 1998.
36

ANLISES AMBIENTAIS
2009
Prtica 9. BIOACUMULAO DO CIDO BENZICO
1. INTRODUO
O cido benzico (C6H5COOH) um composto aromtico utilizado como
germicida na preservao de alimentos, na sntese de corantes e como
coadjuvante farmacolgico, tendo ao anti-fngica. A Bioacumulao um
processo
que
ocorre
quando
poluentes
se
acumulam
em
elevadas
concentraes nos organismos, independente do nvel trfico. O processo pode

ocorrer de forma direta, efetuada diretamente a partir do meio ambiente, ou
indireta, quando ocorre por meio de alimentao. A exposio de um ser vivo
aqutico a uma gua contaminada por metais pesados pode provocar a
absoro pelo organismo, entrando assim nos seus tecidos, e posteriormente,
ao servir de alimento a seres de um nvel trfico mais elevado, contaminar
esse outro organismo, fazendo com que o contaminante suba na cadeia
alimentar. A contaminao da cadeia alimentar provoca um aumento da
concentrao do contaminante a cada nvel trfico, designando-se o processo
por bioampliao.
2. OBJETIVO
Determinar o coeficiente de partio do cido benzico entre fase
aquosa e fase orgnica.
3. MATERIAL
Erlenmeyer de 250 mL;
Bureta de 50 mL;
Bquer 100 mL;
Funil de separao de 100 mL;
Bico de Bunsen;
Tela de alumnio;
Balana de preciso;
Colher de pesagem;
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ANLISES AMBIENTAIS
2009
Hexano;
NaOH 0,1 N;
cido benzico;
Fenolftaelina 0,1%.
4. PROCEDIMENTOS
1) Transfira 25 mL de gua e 25 mL de hexano para funil de separao;
2) Pese 1,2 g de cido benzico e transfira para o funil, agitando por 8 minutos,
tomando cuidado para NO AQUECER OS LQUIDOS COM O CALOR DAS
MOS;
3) Deixar o funil em repouso at formar as duas camadas;
4) Transferir a camada inferior para um bquer, desprezando a camada de
interface entre a fase aquosa e a orgnica;
5) Deixar a fase orgnica no funil;
6) Pipete uma alquota de 5 mL da fase aquosa para erlenmeyer;
7) Adicione ao erlenmeyer 25 mL de gua e uma gota de fenolftalena, aquea
at a ebulio e titule com soluo de NaOH 0,1 N at viragem para rosa,
anote o volume consumido;
8) Volte ao funil de separao e pipete uma alquota de 3 mL da fase orgnica
para um erlenmeyer;
9) Adicione ao erlenmeyer 25 mL de gua e uma gota de fenolftalena, aquea
at a ebulio e titule com soluo de NaOH 0,1 N at viragem para rosa,
anote o volume consumido;
10) Calcule as concentraes (moI/L) do cido benzico nas fases aquosa
(Maq) e orgnica (Morg) de acordo com as expresses:
Meq = M/PM
Logo M = Meq . PM
Se Meq = V . Fc . V
Ento tem-se:
Mfase = V . N . Fc . PM
Onde:
Meq = miliequivalente
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2009
M = molaridade
V = volume do NaOH
N = normalidade do NaOH
Fc = Fator de correo do NaOH
PM = Peso molecular do cido benzico
Nota:
- Para calcular as concentraes em mol/L deve-se considerar o V (volume
gasto na titulao) em mL por 1000 mL; Ex.: Se foram gastos 2,2 mL na
titulao o V = 2,2/1000 = 0,0022
11) Calcule o coeficiente de partio do cido benzico pela expresso:
K = Maq/Morg
onde:
Maq= molaridade na fase aquosa
Morg= molaridade na fase orgnica.
VIEIRA, C.A.; SILVA, N.P.; MARTINS, D.F.C. Determinao do coeficiente de
partio do cido benzico em diferentes solventes orgnicos. In.: 46
CONGRESSO BRASILEIRO DE QUMICA - Salvador-BA - 25 a 29 de
setembro de 2006.
39

ANLISES AMBIENTAIS
2009
Prtica 10. REMOO DE COMPOSTOS ORGNICOS VOLTEIS PELO

CARVO ATIVO
1. INTRODUO
Compostos orgnicos volteis constituem uma classe de poluentes do ar
que so predominantemente emitidos na atmosfera pela frota veicular
(combusto de combustveis fsseis e perdas evaporativas) e por processos
industriais, mas que tambm podem ser gerados naturalmente por processos
metablicos
de
certos
tipos
de
vegetais
(DERWENT,
1995
apud
ALBUQUERQUE e TOMAZ, 2003). Os COV tem sido alvos de estudo devido

aos impactos ambientais negativos que provocam quando presentes na
atmosfera, os quais incluem prejuzos aos seres humanos, animais e plantas.
Quando emitidos, os COV participam de reaes fotoqumicas, entre elas a de
formao do oznio troposfrico (SEINFELD e PANDIS, 1998; ATKINSON,
2000), poluente que o principal responsvel pelos eventos de ultrapassagem
de padres de qualidade do ar no estado de So Paulo (CETESB, 2006).
2. OBJETIVO
Determinar a taxa de adsoro do cido actico pelo carvo ativo
temperatura ambiente.
3. MATERIAL
01 Pipeta graduada 10 mL;
01 Proveta 50 mL;
01 Pra para pipeta;
10 Erlenmeyers 250 mL;
10 Tampas (rolhas ou similar) para erlenmeyers;
01 Bureta 25 mL;
01 Basto de vidro;
01 Balana de preciso;
01 Esptula;
01 Papel de pesagem;
01 Suporte universal;
40

ANLISES AMBIENTAIS
2009
02 Garras para suporte;

01 Funil;
05 Papeis filtro ou chumaos de algodo;
CH3COOH 0,4 N;
NaOH O,1 N;
Fenolftalena 0,1 %;
Carvo ativo em p.
4. PROCEDIMENTOS
1) Em cada um dos cinco erlenmeyers com tampa, e rotulados de 1 a 5,
contendo 5 g de carvo ativo, colocar com auxlio de urna bureta,
soluo de CH3COOH 0,4 N e gua de acordo com a tabela:
Erlenmeyer
V (mL) CH3COOH 0,4 N
25
15
7,5
V (mL) de gua destilada
25
35
42,5
46
48
2) Agitar cada amostra por 5 minutos, tendo cuidado de mant-Ias na

mesma temperatura, segurando o erlenmeyer na parte superior;
3) Filtrar as solues e coletar os filtrados em erlenmeyers rotulados;
4) Pipetar 20 mL de cada filtrado para outro erlenmeyer, adicionar 2 gotas
de fenolftalena e titular com NaOH 0,1 N, anotar volume gasto;
CALCULAR:
I - A molaridade do CH3COOH nas solues preparadas pela diluio com
gua
(Concentrao inicial) Mi = 0,4 . VCH3COOH /50
II - A molaridade do CH3COOH nas solues aps a adsoro em carvo
(Concentrao final) Mf = 0,1 . Vgasto de NaOH/20
III - A quantidade adsorvida em cada soluo:
41

ANLISES AMBIENTAIS
2009
Mads = Mi - Mf
IV - A taxa de adsoro para cada soluo:
% adsoro = 100. Mads / Mi
V - Trace um grfico de % adsoro versus Mi
ATKINSON, R. Atmospheric chemistry of VOCs and NOx. Atmospheric
Environment, v. 34, p. 2063-2101, 2000.
ALBURQUERQUE, E. L; TOMAZ, E. Concentrao indoor e outdoor de COV

selecionados em atmosfera urbana. In: CONGRESSO INTERAMERICANO DE
QUALIDADE DO AR, 2003, Canoas. Anais...Canoas, 2003. CDROM
CETESB, Relatrio da qualidade do ar no estado de So Paulo 2005. So

Paulo: CETESB, 2006, 140 p.
SEINFELD, J. H.; PANDIS, S. N. Atmpospheric chemistry and physics:

from air pollution to climate change, John Wiley and Sons, Inc. USA, 1998,
998 p.
42

ANLISES AMBIENTAIS
2009
Prtica 11. MTODO VISUAL SIERP
1. INTRODUO
O ndice de qualidade do ar (IQA) um indicador padronizado do nvel
de poluio do ar numa determinada zona, e resulta de uma mdia aritmtica
calculada para cada indicador, de acordo com os resultados de vrias estaes
da rede de medio da zona (DGA, 2001). Mede sobretudo a concentrao de
oznio e partculas ao nvel do solo, podendo contudo incluir medies de
SO2,e NO2 (IA, 2009). Os parmetros dos ndices variam de acordo com a
agncia ou entidade que os define, podendo haver vrias diferenas. A
converso de dados analticos e cientficos num ndice de fcil compreenso
permite que a populao em geral tenha um acesso mais fcil e compreensvel
da informao. Usualmente disponibilizada em tempo real a evoluo do IQA,
especialmente no caso de grandes aglomerados urbanos ou industriais
(QUALAR, 2009).
2. OBJETIVO
Avaliar
diferentes
amostras
de
sedimentos
atmosfricos
que
representem reas (bairros) da cidade.
3. MATERIAL
Garrafa Peti 2 L;
Bacia com volume de ~2 L;
Papel filtro;
Bomba Vcuo;
4. PROCEDIMENTOS
1) Colocar 2 L de gua da torneira na bacia e deixar em contato com o ar
na rea (bairro) a ser amostrada por 24 horas;
2) Coletar a gua e transportar ao laboratrio para anlise;
3) Filtrar com o auxlio de uma bomba vcuo e papel filtro afim de se
obter todos os sedimentos e partculas presentes na amostra;
43

ANLISES AMBIENTAIS
2009
4) Montar um painel com a utilizao de mapas e os resultados dos demais

grupos.
NOTAS:
- Esta prtica no visa confeco de um relatrio, mas sim a montagem
de um painel a partir dos resultados;
DGA, ndice de Qualidade do Ar, Direco Geral do Ambiente, Novembro,
Portugal, 2001.
IA, Instituto do Ambiente - Qualidade do Ar - Previso do ndice da Qualidade

do Ar. <www2.dao.ua.pt.> Acesso em 16 de Junho de 2009.
QUALAR, <http://www.qualar.org/INDEX.PHP?page=1&subpage=3> Acesso

em 16 de Junho de 2009.
44

ANLISES AMBIENTAIS
2009
Prtica 12. COLIFORMES EM AMOSTRAS HDRICAS
1. INTRODUO
Coliformes tratam-se de bactrias formadas por grupos de diferentes
gneros que incluem os Klebsiella, Escherichia, Serratia, Erwenia e
Enterobactria. As bactrias do grupo Coliforme habitam o intestino de animais
mamferos, como o homem, e so largamente utilizadas na avaliao da
qualidade das guas, servindo de parmetro microbiolgico bsico s leis de
consumo criadas pelos governos e empresas fornecedoras que se utilizam
desse nmero para garantir a qualidade da gua para o consumo humano.
Nesse caso, a presena de um nmero alto de Coliformes na gua significa um
nvel elevado de poluio e risco sade pela presena de organismos
patognicos. H os Coliformes Totais, que so grupos de bactrias gramnegativas, que podem ou no necessitar de Oxignio - Aerbicas ou
Anaerbicas, que no formam esporos, e so associadas decomposio de
matria orgnica em geral. H tambm os Coliformes Fecais, tambm
chamados de Coliformes Termotolerantes, pois toleram temperaturas acima de
40C e reproduzem-se nessa temperatura em menos de 24 horas. Este grupo
associado s fezes de animais de sangue quente. Pelo estudo da concentrao
dos Coliformes nas guas pode-se estabelecer um parmetro indicador da
existncia de possveis microorganismos patognicos que so responsveis
pela transmisso de doenas pelo uso ou ingesto da gua, tais como a febre
tifide, febre paratifide, disenteria bacilar e clera.
2. OBJETIVO
Determinar o nmero mais provvel (NMP) de coliformes totais,
coliformes termotolerantes e Escherichia coli.
3. MATERIAL
9 Tubos de ensaio 9 mL para os meios;
3 Tubos de ensaio 9 mL para as diluies;
Ponteiras de 1 mL;
Pipeta automtica de 1 mL;
45

ANLISES AMBIENTAIS
2009
Tubos de Duhran;
Ala de platina;
Banho-maria a 44,5 0,2 C;
Fonte de luz ultravioleta (UV).
Caldo Lactosado;
Meio EC-MUG;
Caldo verde brilhante bile a 2%;
Soluo salina.
4. PROCEDIMENTOS
1) Homogenizar as amostras de gua por inverso e, com o auxlio de uma
pipeta estril, inocular 10 mL das amostras em 90 mL de soluo salina
em uma srie de 3 tubos (fazer triplicata);
2) Em seguida fazer as diluies seriadas decimais em soluo salina: 1
mL em 9 mL nas diluies 10-1 (1:10); 10-2 (1:100) e 10-3 (1:1000);
3) Inocular 10 mL das amostras (diluies) em meio contendo caldo
lactosado de concentrao dupla;
4) Transferir 1,0 mL para tubos contendo caldo lactosado em concentrao
simples e inocular em 3 tubos (triplicata);
5) Homogeneizar os tubos e incubar a 35-37 C por 48 horas;
6) Aps este perodo observar a turvao e a presena de gs no interior
do tubo de Duhran presente no meio ANOTAR OS RESULTADOS;
7) Dos tubos considerados positivos, turvos e com bolhas de gs no interior
do tubo de Duhran, TRANSFERIR uma alada para caldo verde
brilhante bile a 2%;
8) Incubar os tubos a 35-37 C por 48 horas; OBS.: O teste confirmativo
para coliformes totais ser considerado positivo para os tubos que
apresentarem formao de gs (CO2);
9) A partir dos tubos positivos de caldo verde brilhante bile a 2%, transferir
uma alada para tubos contendo meio EC-MUG, para a confirmao da
presena de coliformes termotolerantes e E. coli;
46

ANLISES AMBIENTAIS
2009
10) Incubados os tubos em banho-maria a 44,5 0,2 C durante 24 horas.

OBS.: Os tubos seram considerados positivos, para coliformes
termotolerantes, quando apresentarem a presena de bolhas (CO2)
no interior do tubo de Duhran;
11) Determinar a presena de E. coli pela exposio dos tubos luz
ultravioleta (UV 600nm) sendo considerados positivos aqueles que
emitirem fluorescncia.
CALCULAR:
Os resultados sero expressos como NMP (nmero mais provvel) de

bactrias do grupo coliforme e/ou coliformes termotolerantes e/ou E. coli por
100 mL de amostra (CLESCERI et al., 2005).
NOTAS:
- Se a gua da amostra a ser coletada conter cloro, inativ-lo previamente
com Tiossulfato de sdio 0,1 N;
- Caso seja necessrio, em aula prtica, acondicionar as culturas aps os
perdos 24 ou 48 horas em geladeira;
CLESCERI, L.S.; GREENBERG, A.E.; A.D., EATON. Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater. 21st Ed. Washington: AMERICAN
PUBLIC HEALTH ASSOCIATION, 2005. 1600p.
47

ANLISES AMBIENTAIS
2009
ANEXO 1
COMO USAR O PAQUMETRO
Paqumetro Universal
o instrumento de medir mais utilizado na prtica cientficas. So
construdos de ao inoxidvel temperado e sua escala graduada em
milmetros e polegadas (inch = 1" = polegada = 25,4 mm). O cursor provido
de uma graduao especial, chamadas de Vernier ou Nnio, que indica o valor
da dimenso tomada.
Figura 1. Estruturas bsicas de um paqumetro.
Antes de usar, e aps o uso, deve-se limpar bem o paqumetro para

eliminar a sujeira e o p depositado no instrumento, especialmente nas
superfcies de medio e nas superfcies de contato da rgua com o cursor.
Nunca deve-se forar o paqumetro ao coloc-lo ou retir-lo da pea. Ao medir,
usa-se uma presso apropriada e constante, fazendo a leitura sem retirar o
instrumento da pea (abre-se o paqumetro antes de retir-lo) sempre que
possvel.
Cuidado com choques, como por exemplo, de peas sobre o instrumento
ou queda do mesmo no cho.
Nunca deve-se utilizar os bicos de medio como compasso, riscador,
chave inglesa ou martelo.
Recomenda-se guardar o instrumento no seu estojo e coloc-lo em lugar
seco e sem influncia direta de calor ou sol.
48

ANLISES AMBIENTAIS
2009
Uma caracterstica de um instrumento de medio a sensibilidade, que

a menor medida que ele pode efetuar. O paqumetro utilizado para fazer
medies com rapidez, em peas cujo grau de preciso aproximado at 0,02
mm ou 1/128" (polegadas).
Para calcular a aproximao, ou seja, a sensibilidade do paqumetro (em
milmetros ou polegadas), divide-se o menor valor da escala fixa (rgua) pelo
nmero de divises da escala mvel (Vernier ou Nnio).
No sistema mtrico, a escala fixa dividida em intervalos de 1 mm e
existe Vernier com 10, 20 e 50 divises. Tem-se, portanto, paqumetros com as
seguintes sensibilidades:
Vernier com 10 divises: S = 1 / 10 - S = 0,1mm
N sistema ingls de polegadas fracionrias, a menor frao 1/16" e o
Vernier tem 8 divises:
S = (1/16")/8 - S=(1/16")*(1/8) - S=1/128"
Figura 2. Exemplo de leitura de um paqumetro.
A diferena, entre as divises da escala e do Vernier, de 0,1 que

conseguida pela diviso de 9mm em 10 partes iguais. Ao fazer coincidir o trao
n 1 do Vernier com o n 1 da escala, teremos deslocado 0,1 no cursor,
fazendo coincidir os traos n 2, teremos deslocado 0,2 e assim
sucessivamente.
Veja exemplo abaixo:
49

ANLISES AMBIENTAIS
2009
Figura 3. Outro exemplo de leitura de um paqumetro.
Na escala, temos 3mm e frao de milmetro. Essa frao determinada

pelo trao do Vernier (5) que coincide, com o trao da escala, assim teremos
3,5mm.
50

ANLISES AMBIENTAIS
2009
ANEXO 2
ROTEIRO PARA RELATRIO DE AULAS PRTICAS
Observaes gerais:
- o tempo verbal deve ser padronizado num texto. Uma vez passado, sempre
passado...
- tente usar a terceira pessoa e evitar no nosso experimento, meus
resultados pipetamos etc.... preferir no experimento realizado ..... , os
resultados obtidos ....
- defina os itens do seu relatrio com clareza. Agrupe assuntos semelhantes e
separe assuntos no relacionados. Use subitens para organizar melhor os
assuntos;
- sempre procure numerar os itens para facilitar o acompanhamento da
hierarquia dos itens (se a hierarquia for importante, evite marcadores);
- use termos tcnicos;
- respeite a grafia corretas de nomes cientficos;
- padronize a formatao: tamanhos e tipos de letras, tanto no texto quanto nos
ttulos; procure usar pargrafos alinhados pelas duas margens (esquerda e
direita); mantenha sempre a mesma quantidade de espaos entre pargrafos e
ttulos, etc;
- no enfeite demais seu relatrio. Ele um texto tcnico e deve ter aspecto
profissional. bom ter uma capa com: Nome da Instituio, nome da disciplina,
nome do professor, ttulo da prtica (ou prticas), integrantes do grupo e turma,
cidade/estado e data.
1. Introduo
Um ou dois pargrafos rpidos para contextualizar o assunto de que
tratou a prtica e do qual tratar o relatrio. No propriamente um resumo
mas uma introduo ao assunto. Apenas informaes relevantes ao trabalho
devem ser apresentadas!
2. Objetivo
Descrio do objetivo da prtica. Pode haver mais de um objetivo, um
mais geral e outro(s) especficos(s).
Normalmente os objetivos so apresentados como aes obter,
extrair, observar, analisar, caracterizar etc
Exemplo:
Objetivo geral: Apresentar diferentes tcnicas de extrao de DNA.
Objetivo especfico: Extrair DNA genmico de Escherichia coli.
3. Material e Mtodos
Descrio do material ( material mesmo e no materiais) e dos
procedimentos (que so os mtodos) utilizados na aula.
Pode estar subdividido em itens como: Material, Reagentes e
solues, Material, Equipamentos, etc. Ou seja, o material pode estar
descrito num subitem independente ou pode estar includo na descrio do
procedimento.
51

ANLISES AMBIENTAIS
2009
Exemplo:
Ressuspender o pelete em 50 mL de tampo TE (Tris 10mM, EDTA
1mM, pH=8,0) utilizando pipeta automtica Gilson modelo P200
A composio do tampo TE e o modelo de pipeta utilizado poderiam
ser descritos num item anterior descrio do procedimento.
O tempo verbal utilizado no material e mtodos pode ser o passado (o
que foi feito) ou o infinitivo (ressuspender, pipetar, adicionar, etc). A
descrio deve ser sempre no impessoal (ex.: Foi adiconado ou adicionouse ao invs de Eu adicionei ou Adicionamos)
4. Resultados e Discusso
Podem estar agrupados em um nico item ou no. Em itens separados,
os resultados so primeiro descritos e depois, no item de Discusso, so
analisados.
A apresentao dos resultados uma das partes mais difceis do
relatrio pois voc deve descrever os resultados obtidos sem incluir
necessariamente a interpretao desses resultados. Normalmente os
resultados so apresentados em figuras, esquemas, tabelas, grficos etc que
apresentam legendas prprias (Por exemplo, Figura 1: Representao
esquemtica do resultado do fracionamento de DNA genmico de bactria E.
coli em gel de agarose 1%. (1) grupo 1; (2) grupo 2 etc etc (a numerao
corresponde aos slots do gel que devem estar marcados no esquema).
A descrio do que est na figura deve ser apresentada de forma
descritiva no texto, por exemplo: Os DNAs genmicos de E. coli cepa tal e tal
foram obtidos pela tcnica xyz. Cada grupo realizou seu prprio procedimento
segundo as orientaes descritas em material e mtodos ( l que a descrio
do procedimento deve ficar). Os resultados do fracionamento do DNA
genmico de E. coli esto apresentados na figura 1 e mostraram (ou mostram)
a presena de DNA em todas as amostras analisadas. Trs bandas foram
facilmente visualizadas, uma mais prxima aos slots e outras duas prximas
uma da outra no final do gel, numa regio onde tambm foi observado uma
espcie de rastro difuso de material.
Voc deve considerar que a pessoa que est lendo o relatrio no
conhece o assunto, no fez o procedimento e no tem a menor idia do que
est sendo apresentado nos resultados. O segredo ser o mais direto e
sinttico possvel, sem omitir nenhum tido de informao que ajude a
compreenso dos resultados (QUE CORRESPONDEM A PARTE MAIS
IMPORTANTE DO RELATRIO).
Nos trabalhos cientficos, a discusso dos resultados feita
comparando-se os resultados encontrados com outros j obtidos anteriormente
por outros trabalhos. O objetivo da discusso dos resultados mostrar se estes
foram os esperados ou no, se atenderam ao objetivo inicial do trabalho ou
no, se trouxeram novas informaes ao que j se conhecia ou no, se so
suficientes para definir o assunto de que tratam ou se h necessidade de
trabalhos complementares e quais so eles.
Num relatrio de aula prtica, a discusso deve ser relacionada aos
problemas encontrados durante a realizao da prtica e aos seus possveis
reflexos nos resultados, assim como providncias para minimizar esses
problemas.
52

ANLISES AMBIENTAIS
2009
5. Concluso
A concluso do relatrio diz respeito diretamente ao seu objetivo. Em
suma este item deve dizer se o objetivo foi alcanado ou no.
6. Bibliografia
Citar toda a bibliografia consultada; H norma para citao bibliogrfica
que pode ser obtida nos artigos cientficos e livros.
53

ANLISES AMBIENTAIS
2009
ANEXO 3
TABELA DE PARMETROS DA QUALIDADE DA GUA
Padro para corpo dgua
Padro de lanamento
Classes
Parmetro
Unidade
Temperatura
<40
Dureza Total
mg/L
500
Acidez
mg/L
<10
6a9
6a9
6a9
6a9
6,5 a 8,5
5(3)
10(3)
60(4)
pH
DBO
mg/L
DQO
mg/L
OD
mg/L
Coliformes Totais
Coliformes Fecais
<90
6
Org/100 mL
1.000
5.000
20.000
Org/100 mL
200
1.000
4.000
Classificao das guas doces:

Classe 1 Abastecimento domstico aps tratamento simplificado; proteo
das comunidades aquticas; recreao de contato primrio (natao, esqui
aqutico e mergulho); irrigao de hortalias que so consumidas cruas e de
frutas que se desenvolvem rentes ao solo, sem ser ingeridas cruas e sem
remoo de pelcula; e criao natural e/ou intensiva (aquicultura) de espcies
destinadas alimentao humana.
Classe 2 Abastecimento domstico, aps tratamento convencional; proteo
das comunidades aquticas; recreao de contato primrio, natao, esqui
aqutico e mergulho; irrigao de hortalias e plantas frutferas; e criao
natural e/ou intensiva (aquicultura) de espcies destinadas alimentao
humana.
Classe 3 Abastecimento domstico, aps tratamento convencional; irrigao
de culturas arbreas, cerealferas e forrageiras; e dessedentao de animais.
Classe 4 Navegao comercial; harmonia paisagstica; e usos menos
exigentes.
54

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2009
ANEXO 4
TABELA PARA AVALIAO DA DUREZA DA GUA
Tabela: Classificao de guas naturais, de acordo com a concentrao total
de sais de clcio e de magnsio, expressa como carbonato de clcio CaCO3
(mg L-1).
Classificao
guas moles
-1
Concentrao como CaCO3 (mg L )

< 50
guas moderadamente moles
50 a 100
guas levemente duras
100 a 150
guas moderadamente duras
150 a 250
guas duras
250 a 350
guas muito duras
> 350
Fonte: ROCHA, J.C.; ROSA, A.H.; CARDOSO, A.A. Introduo a Qumica Ambiental. 2 Ed.
Porto Alegre: Bookman, 2009. p.82
55

ANLISES AMBIENTAIS
2009
ANEXO 5
TABELA PARA AVALIAO DA ALCALINIDADE DA GUA
Tabela: A alcalinidade total de uma gua expressa em mg/L de CaCO3
(miligramas por litro de carbonato de clcio). A Tabela abaixo mostra a relao
da alcalinidade com a capacidade tampo (UFRRJ, 2009).
Classificao
Baixa capacidade tampo
Boa capacidade tampo
Alcalinidade
<10 ppm
20 a 200 ppm
Fonte: UFRRJ. Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro. Liminologia: Alcalinidade.

Disponvel em: < http://www.ufrrj.br/institutos/it/de/acidentes/alc.htm> Acesso em 30 de abril de
2009.
56

ANLISES AMBIENTAIS
2009
ANEXO 6
TABELA DO NMERO MAIS PROVVEL (NMP)
Tabela: ndice NMP e limite de confiana para vrias combinaes de
resultados positivos quando so usados trs tubos com as seguintes diluies,
10-1, 10-2 e 10-3.
Combinao de tubos
NMP por grama
limite de 95%
positivos
ou mL
0-0-0
<3
0-1-0
<1
17
1-0-0
<1
21
1-0-1
27
1-1-0
28
1-2-0
11
35
2-0-0
38
2-0-1
14
48
2-1-0
15
50
2-1-1
20
60
2-2-0
21
62
3-0-0
23
130
3-0-1
39
10
180
3-1-0
43
10
210
3-1-1
75
20
280
3-2-0
93
30
380
3-2-1
150
50
500
3-2-2
210
80
640
3-3-0
240
90
1400
3-3-1
460
100
2400
3-3-2
1100
300
4800
3-3-3
> 1100
Inferior
Superior
Referncia: APHA, Compendium of Methods of the Microbiological Examination

of Foods. 1992, p. 112.
57

ANLISES AMBIENTAIS
2009
ANEXO 7
TABELAS PARA ANLISE DO SOLO
CLCIO E MAGNSIO TROCVEIS (Ca2+ e Mg2+)

Nas determinaes de clcio e de magnsio sempre houve consenso com relao

unidade.
3
Eram expressos em meq/100 cm ou meq/100 g.
Pelo SI as unidades a serem utilizadas so:
3
cmolc/dm - utilizada em todos os Estados, exceto SP.
3
mmolc/dm - utilizada em SP.
3
3
O cmolc/dm e o antigo meq/100 cm tm a mesma grandeza, no sendo, portanto,
necessrio qualquer transformao.
3
O mmolc/dm , entretanto, a grandeza dez (10) vezes maior do que ambas.
Assim:
3
3
3
1 meq/100 cm = 1 cmolc/dm = 10 mmolc/dm
Tabela 1. ndices normalmente utilizados para classificar os teores de clcio e de magnsio

Unidades
Baixo
2+
Ca
cmolc/dm
mmolc/dm
Mdio
2+
2+
Alto
2+
2+
Mg
Ca
2+
Mg
Ca
Mg
<2
<0,4
2a4
0,4 a 0,8
>4
>0,8
<20
<4
20 a 40
4,0 a 8,0
>40
>8,0
Fonte: TOM JR (1997).
ALUMNIO TROCVEL (Al3+)

Da mesma forma que o clcio e o magnsio, os teores de alumnio passaram a ser

expressos no SI.
Tabela 2. Classificao para os teores de Al
Unidades
cmolc/dm
mmolc/dm
3+
trocvel
Baixo
Mdio
Alto
<0,5
0,5 a 1,5
>1,5
<5,0
5,0 a 15,0
>15,0
Fonte: TOM JR (1997).

3+
Interpretar apenas o teor de Al nem sempre suficiente para caracterizar toxidez para
3+
as plantas, pois esta depende tambm da proporo que o Al ocupa na CTC efetiva;
Para avaliar corretamente a toxidez por alumnio deve-se calcular tambm a saturao
por Al (m).
3
m = (Al + x 100)/t
Fonte: TOM JR.; J.B. Manual para interpretao de analises de solo. Guaba, Agropecuria,
1997, 247p.
58

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Prof. Guilherme Arajo Lacerda

Lacerda, Guilherme Arajo

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MANUAL SIMPLIFICADO SOBRE OS PROCEDIMENTOS DE COLETA DE

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Embarcao quando em grandes ambientes lnticos ou lticos.

Figura 1: Fases para o procedimento de coleta de amostra hdrica de

1. Lavar as mos com gua e sabo;

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2. Limpar a torneira do usurio com um pedao de algodo embebido em

3.1.1 OBSERVAES IMPORTANTES

3.2 GUA SUPERFICIAL

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Deve-se sempre ambientalizar (lavar com a gua do rio) a seringa e os

3.2.1 Para anlise no ICP/OES

3.2.2 Para anlise no cromatgrafo de ons

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A. necessrio deixar as bolsas trmicas de gel no congelador da

Figura 2: Bolsas trmicas com gel (Cunha e Machado, 2003).

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Figura 4: Amostras de gua acondicionadas na bandeja de isopor (Cunha e

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Figura 5: Coleta da amostra de gua (observar a posio do filtro entre a

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Figura 6: Coleta de amostra de gua no Crrego Fazenda Velha Projeto APA

Figura 7: Nmero da amostra registrado na tampa e no corpo do tubo (Cunha e

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Figura 8: Fita isolante vermelha ao redor da tampa para facilitar a identificao

Figura 9: Amostras acondicionadas na bandeja dentro da caixa de isopor com

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BRASIL. Fundao Nacional de Sade. Manual prtico de anlise de gua. 2

procedimentos de coleta de gua superficial e de consumo domstico. CPRM:

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Prtica 1. BIOENSAIOS DE TOXIDADE AGUDA COM SEMENTES DE

Placas de Petri de vidro de 100 x 15 mm

Discos de papel filtro Whatman N0 3 (90 cm dimetro)

Sementes de alface ou outra semente pequena

Frascos para as diluies

Amostra a ser testada

3.1 Reagentes e solues

Soluo de Zinco 0,001%

gua Dura ou Mineral sem gs

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Para realizar a curva de dose resposta, se recomenda preparar um

5) Terminado o tempo de exposio, medir cuidadosamente o comprimento

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6) Quantificar o nmero de sementes que no germinaram e porcentagem de

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