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UNIDAD IZTAPALAPA
DIVISIN DE CIENCIAS BIOLGICAS Y DE LA SALUD
DOCTORADO EN CIENCIAS BIOLGICAS
TESIS
QUE PARA OBTENER EL GRADO DE
DOCTOR EN CIENCIAS BIOGICAS
PRESENTA
COMIT TUTORIAL
DIRECTORA: Dra. Concepcin Gutirrez Ruiz
ASESORA:
ASESORA:
MXICO, D.F.
16 de marzo de 2006
ii
El da 16 de marzo de 2006.
Jurado:
iii
iv
AGRADECIMIENTOS
Las Dras. Patricia Olivares y Leticia Bucio Ortiz del Lab. de Fisiologa Celular
de la Divisin de CBS de la UAMI, asesoraron el montaje de las tcnicas para la
determinacin de protenas, metalotionenas y lipoperoxidacin, y facilitaron el
acceso al laboratorio y al equipo para el anlisis de muestras.
Este proyecto fue un trabajo de equipo, que cont con la valiosa colaboracin de
la M. en C. Irma Wong Chang, del Lab. Contaminacin Marina, ICMyL, UNAM.
Ella ha participado a lo largo de muchos aos en este proyecto con inters y
motivacin. Su responsabilidad y compromiso nos ha permitido avanzar en
nuestra preparacin y crecer juntas tanto como individuos y como profesionales,
razn por la cual le estoy muy agradecida.
vi
vii
DEDICATORIAS
Dedico esta tesis a mis queridos hijos, Aide e Israel, quienes han enriquecido mi
vida con su presencia y su visin del mundo.
viii
CONTENIDO
NDICE DE FIGURAS .......................................................................................
xiii
xv
RESUMEN ........................................................................................................
xviii
ABSTRACT ......................................................................................................
xxi
1.
2.
INTRODUCCIN .......................................................................................
13
17
18
19
20
21
23
25
26
27
28
30
2.5.2.1
31
A. Metalotionenas .....................................................................
33
B. Lipoperoxidacin ................................................................
33
2.5.2.2
34
36
38
40
41
42
ix
3.
RESULTADOS ..........................................................................................
44
45
47
49
51
51
52
54
55
55
58
63
3.3.5
65
65
A. Morfometra ...........................................................................
65
66
69
71
75
75
78
81
82
85
86
86
88
92
97
103
103
4.
131
132
134
139
142
158
149
151
5.
6.
xi
7.
188
xii
NDICE DE FIGURAS
Figura. 1. Ubicacin de la laguna de Mandinga, Ver.
Figura. 2. Esquema del sistema de mantenimiento en el laboratorio para los organismos.
Figura. 3. Monitoreo diario de parmetros fisicoqumicos en el sistema de mantenimiento.
Figura. 4. Escalamiento del cultivo de Tetraselmis suecica hasta la fase exponencial y
conservacin de las clulas para alimentar al ostin.
Figura. 5. Modelo conceptual de la evaluacin de los efectos de Cr y Cd en C. virginica.
Figura 6. Dispositivos experimentales de la fase aguda.
Figura. 7. Cmaras individuales utilizadas para la evaluacin de efecto subletal de la
exposicin a Cr y a Cd en C. virginica.
Figura. 8. Ajuste de la salinidad en el perodo de mantenimiento previo a los bioensayos.
Figura. 9. Morfometra de los ostiones en las fases de mantenimiento previas a la pruebas
letales de Cd, Cr, las bioqumicas (BQ) y fisiolgicas (FIS). Se grafican promedios,
error estndar (EE) y desviacin estndar (DE).
Figura. 10. Mortalidad en los ostiones expuestos a Cr a las 96 y 168 h.
Figura. 11. Concentracin promedio de Cr en tejido y factor de bioconcentracin (FBC) en
los ostiones expuestos a concentraciones letales.
Figura. 12. Peso total promedio de los organismos en el bioensayo agudo con Cr. Se
grafica promedio.
Figura. 13. Mortalidad en los ostiones con exposicin al Cd determinada en diferentes
perodos.
Figura. 14. Concentracin letal media (CL50) y concentracin letal corporal media
(CLC50) obtenidas en diferentes perodos para C. virginica expuesta a Cd (
intervalo de confianza).
Figura. 15. Concentracin corporal de Cd y factor de bioconcentracin (FBC) en los
ostiones sometidos a concentraciones letales del metal.
Figura. 16. Cd acumulado en el tejido de los ostiones muertos a las 72 h y en
sobrevivientes a las 168 h del bioensayo con concentraciones letales.
Figura. 17. Peso total, hmedo y seco (g) de los organismos al final de la exposicin al Cd
(promedio DE).
xiii
xiv
NDICE DE TABLAS
Tabla 1. Concentraciones en agua, sedimento y ostin en lagunas costeras del Estado de
Veracruz.
Tabla 2. Lmites mximos permitidos para el cromo y el cadmio.
Tabla 3. Calendarizacin de la evaluacin de respuestas fisiolgicas.
Tabla 4. Concentraciones promedio de Cr y Cd en agua (mg/L) y ostin (g/gPS) de la
laguna de Mandinga.
Tabla 5. Parmetros fisicoqumicos registrados en la laguna de Mandinga durante las
colectas del ostin C. virginica.
Tabla 6. Cantidad promedio de clulas de T. suecica proporcionadas como alimento a cada
ostin diariamente (clulas/mL).
xv
xvi
xvii
RESUMEN
El objetivo de esta investigacin fue determinar el efecto de Cr y Cd en ostin
Crassostrea virginica (Gmelin) procedente de poblaciones nativas de la Laguna de
Mandinga, Veracruz, Mxico. Se realizaron bioensayos agudos y subletales,
semiestticos, con organismos sometidos a un perodo de mantenimiento previo,
en un sistema de circulacin cerrada con purificacin. Fueron alimentados con
Tetraselmis suecica (Kylin). Las condiciones fijas de ensayo (22 y 25 C), fueron
controladas junto con el pH, el oxgeno disuelto y el amonio total, adems de la
morfometra. Los metales se midieron por espectrofotometra de absorcin atmica.
Se obtuvo la concentracin letal media, con base en los niveles en el agua y en el
tejido. En la exposicin subletal se determinaron a nivel bioqumico dos
biomarcadores: metalotionenas y lipoperoxidacin. A nivel fisiolgico: consumo de
oxgeno, excrecin nitrogenada, consumo de alimento y produccin de heces, con
los cuales se generaron las integraciones simples: relacin O:N, tasa de filtracin,
asimilacin y eficiencia de asimilacin, adems de las integraciones complejas:
metabolismo basal y campo de crecimiento.
Las concentraciones letales medias (CL50-168h = 11.09 mgCr/L y CL50-72h = 24.87
mgCd/L), as como la concentracin letal corporal de Cd (CLC50-72h = 502.25
gCd/gPS), mostraron un ajuste aceptable al modelo Probit log X, sin embargo la
de concentracin letal corporal de Cr (CLC50-168h = 475.85 gCr/gPS), mostr mal
ajuste. La especie actu como un acumulador neto de Cd, pero no de Cr. La
resistencia de la especie fue similar a la registrada en estudios realizados en
latitudes ms altas.
xviii
xix
mostr dos tasas, una alta que fue ms frecuente en los controles y una tasa baja.
En organismos expuestos a Cr, las tasas de filtracin no evidenciaron la influencia
del metal y la ingestin de alimento fue igual o superior a los controles, pero hubo
prdida calrica en heces fecales. Al igual que los controles, los expuestos a Cr, se
encontraron en zona de tolerancia metablica, en los das 5, 10 y 15 pero
mostraron mayor consumo de energa para mantener metabolismo basal en
exposicin a 0.080 mgCr/L. El consumo energtico en expuestos a 0.180 mgCr/L
fue similar al de controles, pero estos animales ingirieron ms alimento, tuvieron
prdida calrica en heces, mayor consumo de oxgeno y excrecin nitrogenada el
da 10, lo que coincidi con un menor aprovechamiento del alimento y con prdida
en peso. El FBC no tuvo correlacin con los parmetros fisiolgicos. Los ostiones
expuestos a Cd no mostraron tasas altas de filtracin y presentaron menor
asimilacin, y eficiencia de asimilacin. El campo de crecimiento indic que los
organismos expuestos a 0.095 mgCd/L se encontraban en racin de mantenimiento
y los expuestos a 0.170 mgCd/L, en zona de resistencia. El Cd gener un fuerte
consumo de energa para mantener la metabolismo basal. El FBC fue proporcional
al gasto por respiracin, excrecin nitrogenada y heces, mientras que la ingestin
fue inversamente proporcional, al igual que el campo de crecimiento.
Los efectos observados, implican que, aunque C. virginica no es un acumulador
neto de Cr, puede incorporarlo en grandes cantidades y generar un esfuerzo
metablico para mantener la homeostasis. Por otro lado, los niveles de Cd
presentes en Mandinga, podran representar un peligro para C. virginica, y la salud
humana. Las temperaturas elevadas de las lagunas costeras mexicanas
xx
ABSTRACT
The objective of the present research was to find out the effect of Cr and Cd in the
oyster Crassostrea virginica (Gmelin), from native populations of the Mandinga
Lagoon, Veracruz, Mexico. Acute and sublethal semistatic bioassays were
performed with organisms previously kept on a maintenance period in a closed
circulating system with filtration, they were fed with Tetraselmis suecica (Kylin).
Fixed conditions of the assay (22 %o and 25 C) were controlled together with pH,
dissolved oxygen and total ammonia, besides the morphometry. Metals
concentrations were measured by atomic absorption espectrophotometer. Mean
lethal concentrations were obtained with levels in water and in tissue. In the
sublethal exposure, were assessed two
xxi
accumulator, but not in the case of Cr. The species resistance was similar to studies
performed in higher latitudes.
Biochemical analysis indicated that metalothionein was induced in oysters with 6 h
of exposition to Cr. Oysters exposed to Cd showed differences in time with the .
highest induction in digestive gland of oysters exposed to 0.110 mg Cd/L, where
810.1 g/g, was registered and the values were directly proportional to the
bioconcentration factor (BCF). The Cr exposed organisms did not exceed 299.2
g/g; the induction was associated to a lower BCF. Abductor muscle did not show
relevant relationships for both metals. Lipoperoxidation increased after 6 hours in
Cd exposed organisms until 213 nmol MDA/mg and 263 nmol MDA/mg, almost
twice the control value, 133.5 nmol MDA/mg. In Cr exposition, differences were
evident at 72 hours with 272 nmol MDA/mg and 157 nmol MDA/mg, in average.
Metalothionein increased after 6 h and lipoperoxidation after 72 h in Cr exposure,
lipoperoxidation increase after 6 h in Cd exposure permits to suppose that
metalothionein could be induced before.
Condition in control organisms was good until the end of the twenty days bioassay
in the physiological evaluation, with weight increase. The O:N ratio indicated
metabolic stress as a consequence of exposure, in the highest concentrations of
both metals, with minimum values in the third day with Cd exposition and in fifth day
with Cr exposition. Those values were associated to own animal protein
consumption, meanwhile in the lowest concentrations, values associated to
carbohydrates consumption were observed in day 14 in Cd exposition and in day 19
in Cr exposition. Filtration presented two rates in organisms, a high rate, more
xxii
frequent in controls and a low filtration rate. In organisms exposed to Cr, filtration
rates did not evidence the metal effect, and the food ingestion was equal or superior
to the controls, but there were caloric losses in faeces. The controls and those
oysters exposed to Cr were in the tolerance metabolic zone, in days 5, 10 and 15,
but these presented more energy consumption to maintain basal rate in exposition
to 0.080 mgCr/L. Energetic consumption in those exposed to 0.180 mgCr/L was
similar to controls, but food ingestion, caloric loss by faeces, oxygen consumption,
and nitrogen excretion were higher in those animals in day 10, which coincides with
a lower food utilization and this, with the weight loss. The BCF was not correlated to
the physiological parameters. Oysters exposed to Cd did not show high filtration
rates and presented lower assimilation and assimilation efficiency. Scope for growth
indicated that the organisms exposed to 0.095 mg Cd/L were in maintenance ration,
and those exposed to 0.170 mgCd/L in the resistance zone. Cd generated a strong
energetic consumption to maintain basal rate. BCF was proportional to oxygen
consumption, nitrogen excretion and feces waste, meanwhile the ingestion, the
same as the scope for growth were inverse proportional.
The observed effects imply that even if C. virginica is not a net Cr accumulator, it
can incorporate important quantities, and generate a metabolic effort to maintain
homeostasis. In the other hand, actual Cd levels in Mandinga could represent a
danger to C. virginica and human health. The elevated temperatures in Mexican
coastal lagoons represent a risk, because environmental variations can generate
metabolic stress, as well as increase the bioavailability of metals.
xxiii
Introduccin
1. INTRODUCCIN
Introduccin
Introduccin
3+
promueve la accin de la
insulina, por lo que existe cierta regulacin. Cantidades excesivas se excretan por
orina, excrecin biliar, cabello, uas, leche y sudor en el hombre (Albert, 1997), en
otros organismos, como cangrejos, se excreta por branquias y en bivalvos como
ostiones y almejas, (C. virginica y M. edulis, L.) por manto y glndula digestiva
(Espina y Vanegas, 1996b). El Cr se introduce a los organismos a travs de las
vas digestiva, cutnea y respiratoria, y puede entrar en diferentes estados de
oxidacin; con valencia 6+ como trixido de cromo, cromato o dicromato; con
valencia 3+ como xido crmico e in crmico; con valencia 2+ como in cromoro; e
incluso con valencia 0 como cromo metlico. De estos, el Cr6+ es fuertemente
oxidante y corrosivo por lo que es ms txico que las formas restantes (Albert,
1997).
Se considera que el cromo tiene menor toxicidad que el cadmio, y no causa dao
en cantidades traza (Goyer, 1991), sin embargo, la forma Cr6+, es muy soluble y
penetra a las clulas ms fcilmente, que el Cr3+, que es insoluble. El Cr es
afectado por el potencial redox en la columna de agua, de manera que su toxicidad
3
Introduccin
en
procesos
de
galvanoplasta,
electroplateado,
aleaciones,
Introduccin
Introduccin
Introduccin
nativas de C.
Introduccin
Introduccin
Introduccin
10
Introduccin
6+
corrosivo (Albert, 1997) es asociado tambin con estrs oxidativo. El efecto del Cd
en la lipoperoxidacin se relaciona con la interaccin con los grupos sulfihidrilo de
las protenas, aunque los mecanismos no son del todo conocidos (Souza et al.,
1996).
Recientemente, se ha considerado, que las concentraciones de los metales
acumuladas dentro de los organismos, constituyen mejores indicadores del impacto
biolgico potencial que las concentraciones en el ambiente, debido a que la
biodisponibilidad del metal es tomada en cuenta automticamente (Borgmann,
2000). La fraccin biodisponible de los metales constituye el mayor peligro para la
biota (Soto-Jimenez et al., 2001). Wood et al. (1997), indican que ste tipo de
acercamiento puede ser til para predecir la toxicidad de los metales inducida
desde el agua hacia los organismos bentnicos. Aunque existen otras vas de
entrada de ambos metales hacia los organismos, en el caso de los filtradores, la
principal es el agua, ya que estos viven en contacto con ella (Neff, 2002; Rebouas
et al., 2005).
En la especie seleccionada para este estudio, Crassostrea virginica, los estudios
realizados en Mxico, han abordado aspectos relativos a su biologa y su cultivo
para la explotacin comercial, (Camacho et al., 1980; Walne, 1984; SEPESCA,
1988). No obstante, los estudios sobre el efecto de los xenobiticos ambientales
son limitados. En el mismo taxa de otras zonas geogrficas, se ha determinado la
11
Introduccin
Introduccin
comparadas con otras lagunas costeras del Golfo de Mxico (Villanueva y Botello,
1998). Esta laguna se encuentra bien comunicada y accesible, de manera que
constituye un sitio conveniente para la extraccin de los organismos de esta
especie.
1.1 ANTECEDENTES.
en
el
estado
de
Veracruz
fue
de
33,737
Ton
en
2004
(http://veracruz.com).
En las lagunas costeras de Veracruz (tabla 1), los niveles de Cr y Cd se han
reportado por debajo de los lmites establecidos para aguas residuales que vierten
a cuerpos acuticos con actividad pesquera o a estuarios, segn la actual
legislacin mexicana (tabla 2). Sin embargo, en el caso del Cd, los lmites para la
proteccin de la vida acutica han sido rebasados en el agua de lagunas como
Tamiahua y Tampamachoco (Rosas et al, 1989; Rosas et al, 1983). A su vez, los
lmites del Cr, han sido rebasados en las lagunas de Pueblo Viejo y el Canal del
Chijol (Robledo, 1987; vila Prez y Zarazua-Ortega, 1993). En otras lagunas,
como el Llano, la Mancha y Salada, ambos metales se encuentran en
13
Introduccin
Referencia
CROMO
Agua (mg/L)
Sedimento
(g/gPS)
Pueblo
Robledo, 1987
Viejo
Contreras, 1996
Canal del
Avila-Prez y Zarazua-
Chijol
Ortega, 1993
Tamiahua
CADMIO
Ostin
Agua
Sedimento
Ostin
(g/gPS)
(mg/L)
(g/gPS)
(g/gPS)
51.0 2*
65.41(90.77 )
42 (90)*
0.04 (0.05)
Contreras, 1996
3.08 (6.59)
20*
0.54 (0.93)
0.03*
54.64 (101.2)
0.001
9.55
0.16 (1.01)
3.36 (4.98)
Tampama-
choco
Contreras, 1996
35.45 (50.6)
0.89
Sonteco-
Gonzlez-Fierro et al.,1994
74.1(150.6)
6.23
34.25 (58.95)
4.57(5.74)
36.24
4.58
49.75 (75.65)
1.60 (2.0)
49.75
5.13
0.001*
0.098
2.06*
3.16 (4.12)
1.43 (2.7)
2.48*
1.44 (2.07)
1.1(1.15)*
1.35
1.11*
1.35 (2.08)
6.4 (10.4)*
1.47
1.34*
mapan
El Llano
Botello, 1994
<0.13
Botello, 1994
<0.13
Botello, 1994
<0.13
Botello, 1994
Villanueva y Botello, 1998
Alvarado
El Ostin
29.68 (45.11)
<0.025
<0.025
<0.025
2.2 (3.06)
0.002
0.015
1.54
29.69
0.004
2.20
7.43
2.24
45.74 (64.57)
3.8 (4.19)
1.22 (2.07)
1.15 (2.24)
21.92
3.32
1.09
3.13
1.55
159.73
140.70
N.D.
0.27
N.D.
N.D.
N.D. No Detectable; Concentracin promedio (Concentracin mxima); * concentraciones por arriba de los lmites mximos
permisibles establecidos en diversas normas; gps, gramos de peso seco.
14
Introduccin
Uso asociado
NOM-001-
Cromo
Cadmio
(mg/L)
(mg/L)
Pesquera
1.0
0.2
Estuarios
0.5
0.2
0.01
0.0002
0.5 g/g
17 g/g
costera y estuarios
NOM-031-SSA1-
1993
FDA, 1993
* no existen.
15
Introduccin
16
Introduccin
1.2 OBJETIVOS.
OBJETIVO GENERAL
OBJETIVOS PARTICULARES
17
Introduccin
1.3 HIPTESIS.
18
Mtodos
2. MATERIALES Y METODOS.
19
Mtodos
20
Mtodos
21
Mtodos
22
Mtodos
23
Mtodos
24
Mtodos
Envases de 20 mL para
congelar las muestras.
25
Mtodos
El anlisis se bas en el siguiente modelo (Fig. 5). Se llev a cabo la evaluacin del
efecto letal de ambos metales determinando la concentracin letal media, y la
concentracin letal corporal media para asociar el efecto respecto a la
concentracin de exposicin y al metal incorporado en el organismo. Los resultados
de esta fase sirvieron como base para seleccionar las concentraciones de prueba a
las cuales fueron sometidos los animales posteriormente. Durante la evaluacin
subletal se obtuvieron las respuestas de los biomarcadores a nivel bioqumico
26
Mtodos
Letales
Sobrevivencia
Subletales
Metalotionenas
Respuestas
Bioqumicas
Lipoperoxidacin
Integraciones simples
Respuestas
Fisiolgicas
Integraciones complejas
Acumulacin
27
Mtodos
organismos,
seleccionados
al
azar,
se
trasladaron
los
acuarios
Los ostiones no fueron alimentados durante esta fase. Se llevaron a cabo dos
bioensayos semiestticos de 168 h, en los meses de septiembre y diciembre de
1997, utilizando en cada uno 80 organismos morfomtricamente homogneos (74.9
mm de longitud, 42.13 g de peso total) con un ndice de condicin de 101.7 g/mL,
considerado adecuado, el cual fue calculado de acuerdo a Walne (1984):
IC = P X 1000 / V
IC = ndice de Condicin, P = Media del peso de masa viva (gPH), V = Media del volumen
intervalvas del lote de organismos en experimentacin (mL).
28
Mtodos
29
Mtodos
30
Mtodos
Las concentraciones elegidas para llevar a cabo las pruebas del efecto subletal, se
establecieron con base en las CL1, calculadas para 96 h, a partir de las CL50
obtenidas en la fase letal, as como en pruebas previas realizadas en la misma
especie con otros metales (Conners y Ringwood, 1997). Adicionalmente, se
consider la concentracin del medio externo en el cual fueron colectados los
organismos y los niveles aceptables en agua que vierte a cuerpos acuticos segn
la legislacin mexicana. As mismo se consideraron los niveles externos en los que
la bioacumulacin en tejido se estima aceptables para el consumo humano de
acuerdo con la NOM-031-SSA1-1993 y la FDA (1993).
31
Mtodos
32
Mtodos
A. Metalotionenas.
B. Lipoperoxidacin.
33
Mtodos
34
Mtodos
Los ostiones fueron expuestos a dos concentraciones de Cd: 95 g/L y 170 g/L, y
dos de Cr: 80 g/L y 180 g/L. Se utilizaron doce cmaras individuales por
concentracin y doce cmaras control con organismos no expuestos a los metales.
Adems se colocaron seis cmaras sin organismos en las cuales se efectuaron
todos los registros de manera semejante a las cmaras con organismos y se
determin la depositacin de clulas. A diferencia de las fases anteriores, los
organismos fueron alimentados durante el perodo experimental, siguiendo el
patrn establecido de 1 a 15 X 106 clulas por organismo por da, efectundose los
ajustes pertinentes para garantizar la densidad adecuada de clulas por organismo,
en los dispositivos de ensayo. Se emplearon 60 organismos para esta prueba.
35
Mtodos
A. Respuestas aisladas.
1
A
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
A
R
C
R
C
A
R
36
Mtodos
37
Mtodos
B. Integraciones simples.
Tasa de filtracin.
A partir del consumo de alimento, se calcul esta tasa, con la frmula indicada por
Griffiths y Griffiths (1987):
TF = V / [N X t] * loge C0 / Ct
TF = Tasa de filtracin (L/h); t = tiempo (h); V = volumen en suspensin (L), N = nmero de
organismos, C0 y Ct = Concentracin de partculas inicial y al tiempo t (cel/L).
Los valores esperados de las tasas alta y baja de filtracin se calcularon, travs de
las ecuaciones alomtricas de Powell et al. (1992):
2
TB = -7.44 x 10
+ [1.33 x 10
*L ] + [1.80 x 10
5
*L ]
*L ]
38
Mtodos
Metabolismo basal.
Esta se determin como el requerimiento energtico del organismo sin actividad,
interpretado como la ordenada al origen de la relacin entre el consumo de oxgeno
y la tasa de filtracin promedio (Griffiths y Griffiths, 1987), expresados ambos en cal
/ h. El punto donde no hay filtracin pero se consume oxgeno corresponde a la
39
Mtodos
metabolismo basal. Esta tasa se obtuvo para los das 5, 10 y 15 de los bioensayos
expresada en valores calricos (cal / h) (Griffiths y Griffiths, 1987).
C. Integraciones complejas.
Campo de crecimiento.
A travs de la ecuacin del campo de crecimiento, en la cual se integran las
diferentes respuestas fisiolgicas evaluadas, se determin el balance energtico de
los organismos (Widdows, 1993):
P=I-(R+H+U)
P = Produccin o energa disponible para crecimiento (cal/d/gPS), I = Ingestin de alimento, R =
Respiracin o consumo de oxgeno, H = Produccin de heces, U = Excrecin nitrogenada.
40
Mtodos
41
Mtodos
Metrologa con 4.0 0.12 mgCr/L, en la cual se ley 4.02 mgCr/L y con 1.45
mgCd/L 0.059, donde se ley 1.40 mgCd/L. No se requiri horno de grafito para
las lecturas.
42
Mtodos
43
3. RESULTADOS
44
Cadmio
Agua (mg/L)
Ostin (g/gPS)
Agua (mg/L)
Ostin (g/gPS)
0.111
ND
0.068
ND
Septiembre 1997
ND
ND
0.083
ND
Noviembre 1997
0.029
ND
ND
ND
Julio 1998
0.099
ND
ND
ND
Septiembre 1998
ND
1.2
0.082
2.3
Promedio general
0.080
Mayo 1997
0.078
45
cercano a neutro, 7.32, (tabla 5). Los valores de oxgeno disuelto y pH registrados
en Mandinga indican valores tpicos de una laguna costera.
Fase
pH
Oct. 1996
7.67
OD
(mg/L)
5.84
May. 1997
6.63
5.42
29.2
26.5
Sept. 1997
ND
ND
13.0
28.0
ND
Nov. 1997
7.82
7.22
19.1
22.1
10
Jul. 1998
ND
ND
ND
ND
ND
Sept. 1998
7.51
4.61
9.4
29.4
20
OD, Oxgeno disuelto; Sal, Salinidad; Temp., Temperatura; Turb, turbidez; ND, No determinado.
46
clulas/L
durante
los
perodos
de
mantenimiento.
Las
pruebas
Fase experimental
15,964
No se alimentaron
20,074
No se alimentaron
Pruebas bioqumicas Cr y Cd
13,356
10,312
Pruebas fisiolgicas Cr y Cd
26,120
9,769
47
valor de pH fluctu entre 7.92 y 8.41, los niveles promedio de oxgeno disuelto se
encontraron entre 4.78 a 5.47 mg/L, la temperatura del sistema se mantuvo entre
23 C y 25 C. En el caso de la turbidez, los valores fueron bajos en general,
alrededor de 1.0 UT, aunque no hubo registro en todos los casos. Algunos picos se
asociaron a la colocacin de los organismos en el sistema, el cual deba ser
limpiado a las 48 h de la introduccin de los ostiones, ya que estos tienden a
excretar. Sin embargo, posteriormente los niveles se mantuvieron bajos (< 1.0 UT).
Mayo 1997
Fase
Salinidad
Temperatura
Turbidez
disuelto(mg/L)
()
(C)
(UT)
8.41 0.09
5.10 0.60
28.5 1.6
23.5 1.3
2.9 2.4
pH
Oxgeno
alimentacin
Sept. 1997
8.40 0.13
8.07 1.20
16.4 4.4
23.1 1.3
ND
Nov. 1997
8.08 0.33
5.47 0.86
20.2 0.9
23.3 1.3
3.5 3.8
Julio 1998
Prueba Bioqumicas 1
7.60 0.23
4.75 0.32
23.0 0.7
24.9 1.0
2.3 1.8
Julio 1998
Prueba Bioqumicas 2
7.92 0.38
4.89 0.28
23.3 0.6
24.5 0.8
1.0 1.6
Sept. 1998
Pruebas Fisiolgicas
8.29 0.36
4.78 0.17
18.4 4.7
24.3 0.6
2.8 0.9
ND, No se determin.
48
35
(%o)
Salinidad
30
25
20
15
10
5
(dias)
0
1
1
0.45
2
0.31
10
11
12
13
14
15
16
17
3
0.65
18
19
20
21 22
4
0.33
5
0.12
23
24
25
26
27 28
29
Incremento diario
(%o)
Fases: 1. Montaje del sistema con pruebas de alimentacin, 2. Bioensayo agudo con cadmio, 3.
Bioensayo agudo con cromo, 4. Pruebas fisiolgicas, 5. Pruebas bioqumicas.
3.2.2 Morfometra.
49
Ancho (mm)
Alto (mm)
Bioensayo con Cd
69.6 8.8
46.2 5.9
25.5 4.0
47.84 10.36
Bioensayo con Cr
71.3 8.8
42.2 5.1
24.0 4.6
44.95 12.95
Bioensayo Bioqumico
68.0 8.8 *
40.4 4.9
23.5 4.3
43.62 9.79 *
Bioensayo Fisiolgico
70.2 6.1
46.3 6.3
26.4 4.2
53.41 11.56 **
Ancho (mm)
85
95
75
85
65
ANCHO
LONGITUD
Longitud (mm)
105
75
55
45
65
DEDE
55
35
75%
EE
25%
Mediana
Median
Casos
45
Cd
Cr
Cd
Cr
BQ
FASE
BQ
FIS
Extremos
25
Cd
Outliers
Cd
FIS
Alto (mm)
Cr
Cr
BQ
FASE
BQ
FIS
FIS
44
90
38
80
70
PESO TOTAL
ALTO
32
26
20
60
50
40
30
14
20
10
Cd
Cd
Cd
Cr
Cr
BQ
FASE
BQ
FIS
FIS
Cd
Cr
Cr
BQ
FASE
BQ
FIS
FIS
50
Los valores promedio del pH, fluctuaron entre 8.15 y 8.35 (tabla 9). Los valores de
los parmetros fisicoqumicos restantes no se consideraron semejantes entre las
fases experimentales (P < 0.05, por la prueba de Kruskal-Wallis). Hubo algunas
variaciones en el oxgeno disuelto, las cuales se presentaron principalmente en
dispositivos con organismos expuestos a los metales. Tambin llegaron a
presentarse variaciones en la salinidad y la temperatura observadas en la fase de
evaluacin de efectos letales. Sin embargo, estas no presentaron correlacin con
mortalidad, ni con la concentracin de los metales en los organismos. Estas
conclusiones derivaron de un anlisis detallado del comportamiento de los
parmetros fisicoqumicos, descrito puntualmente en el Anexo 7.5 para todas las
fases experimentales.
Derivado del mismo anlisis, se lleg a la conclusin de que en la fase de
evaluacin de efectos subletales, tampoco hubo relacin de los parmetros con la
mortalidad que lleg a presentarse en las pruebas fisiolgicas, ni con la
concentracin del metal en el agua o en el tejido de los animales. Se lleg a
observar interaccin temperatura-salinidad en las pruebas para evaluacin de
respuestas bioqumicas; la cual fue minimizada al eliminar de los datos anmalos
y las respuestas de los organismos, as como los ejemplares que se encontraban
en estos dispositivos experimentales.
51
pH
8.34 0.21
8.37 0.05
8.35 0.21
8.25 0.21
8.15 0.27
Oxgeno disuelto
(mg/L)
3.89 1.16
4.85 0.24
4.83 0.26
4.72 0.21
3.95 0.83
Salinidad
()
22.50 0.53
21.35 0.49
23.4 0.54
23.1 0.23
21.72 1.34
Temperatura (C)
24.28 0.71
24.65 0.95
24.50 0.43
24.70 0.58
24.66 0.47
52
53
respecto a otras fases experimentales (P < 0.01), pero los lotes fueron similares (P
> 0.09). Las variaciones en los pesos hmedos y secos, estuvieron relacionadas
con el efecto de los metales, por lo que se discutirn ms adelante con los
resultados de efectos fisiolgicos.
Los organismos sometidos a todas las pruebas tuvieron las clases de talla ms
recomendables para bioensayos de acuerdo con Powell et al. (1992), con longitud
cercana a los 70 mm, si bien los organismos sometidos en la primera prueba
subletal para evaluar efectos bioqumicos tuvieron una longitud menor (66 mm)
que la de los ostiones de las pruebas para evaluar efectos letales (71 mm).
54
50-168h),
50
considerando la
Tabla 11. Concentracin letal (CL50-168h) y concentracin letal corporal (CLC50168h) medias de la exposicin al Cr, obtenidas para el modelo Probit Log X.
Concentracin de Cr
En agua
En tejido
CL 50-168h
11.09 mg/L
5.28
148.9
0.86
0.58
Coeficiente de correlacin
0.93
0.76
19.7
11.3
Intervalo de Confianza
Coeficiente de determinacin r
2
(0.05,3)
obtenido y esperado
55
80
60
40
20
(mgCr/L)
0
0
10
96 h
15
20
25
30
168 h
Los controles presentaron 2.51 gCr/gPS en tejido y el metal en agua estuvo por
debajo del lmite de deteccin del aparato (0.002 mgCr/L). Los organismos
incorporaron en el tejido cantidades de Cr proporcionales a la concentracin del
metal en agua. Sin embargo, el factor de bioconcentracin (FBC) fue mayor en los
ostiones que se encontraban en concentraciones bajas; los expuestos a 3.53
mgCr/L incorporaron 289.35 138.90 gCr/gPS y tuvieron un FBC de 75 37,
mientras que en ostiones expuestos a 35.19 mg/L, el FBC fue 36 12 dada una
incorporacin de 1244.38 412.43 gCr/gPS. El valor mnimo de FBC de 23 14,
se determin en especimenes expuestos a 21.48 mg/L, los cuales incorporaron
537.15 340.21 gCr/gPS (Fig. 11).
Los organismos se sometieron a experimentacin en condiciones adecuadas,
con un IC = 101.7 g/mL. Este ndice disminuy en todos los organismos como
resultado de la ausencia de alimentacin, y fue en promedio de 49.58 g/mL (
21.43) al final del bioensayo. Este valor slo representa un 49 % de IC inicial y
fue semejante entre organismos control y los expuestos a Cr (P > 0.05, ANOVA).
56
Del mismo modo, el peso total de los organismos al final del experimento fue
similar entre los lotes, 45.20 13.43g (tabla 12).
Acumulacin (gCr/gPS)
1400
1200
1000
800
600
400
200
0
10
3.5
2
8.2
21.4
3
4
Cr en tejido
25.1
5
FBC
FBC
80
70
60
50
40
30
20
10
0
35.1
6 (mg/L)
Solo el peso hmedo final de los organismos expuestos a 8.26 mgCr/L fue menor
que el de los controles. Adems, el peso sec tambin mostr ser menor en
ostiones expuestos a 8.26 mgCr/L y 21.48 mgCr/L al final del experimento. El peso
seco esperado para los ostiones de la longitud seleccionada fue calculado en 1.83
g. Despus del bioensayo la prdida en peso seco represent el 75% tanto en el
grupo control, como en los expuestos.
El peso total, registrado tambin al inicio de la prueba, fue comparado con los
57
40
*
*
30
20
10
0
0
3.52
8.26
21.47
25.2
Concentracin de exposicin (mgCr/L)
Peso inicial (g)
35.19
Figura. 12. Peso total promedio de los organismos en el bioensayo agudo con
Cr. Se grafica promedio.
50-72h)
corporal media CLC 50-72h fue de 502.25 g/gPS. Estos valores tuvieron un ajuste al
modelo probit X significativo en ambos casos (P < 0.05), con coeficientes de
variacin inferiores a 15%, incluso el obtenido con base en las concentraciones en
el tejido fue menor (7%). Por otro lado, el ajuste obtenido con la concentracin en
agua tuvo un coeficiente de correlacin mayor (r = 0.97) que el derivado de la
58
En agua
En tejido
CL 50-72h
24. 87 mg/L
9.54
118.20
0.94
0.65
Coeficiente de correlacin
0.97
0.81
12.06
7.38
Intervalo de confianza
Coeficiente de determinacin r
2
(0.05,3)
120
obtenido y esperado
100
80
60
40
20
0
0
-20
10
15
20
25
30
35
72 h
96 h
120 h
144 h
168 h
No obstante, fueron calculados otros valores de CL50 y CLC50 para las 96 h y 120 h
con fines comparativos, (tabla 14). Las CL50 y CLC50 de estos plazos y las de 72 h,
fueron graficadas encontrndose un comportamiento casi lineal con los valores
59
CL 50-120h
CLC 50-96h
CLC 50-120h
11.23 mg/L
9.68 mg/L
386.27 g/g
278.10 g/g
1.97
2.65
43.32
270.03
0.99
0.95
0.99
0.36 *
Coeficiente de correlacin
0.99
0.97
0.99
0.60
4.4
6.8
2.59
30.57 *
CL 50
Intervalo de confianza
Coeficiente de determinacin r
2
(0.05,3)
obtenido y esperado
* No significativo.
CL 50 (mgCd/L)
40
35
30
25
20
15
10
5
0
700
600
500
400
300
200
100
0
1 72 h
96
2 h
1203h
721h
962 h
1203h
60
FBC
Acumulacin ( gCd/
70
60
50
40
30
20
10
0
500
400
300
200
100
0
10
5.7
2
13.1
3
Cd en tejido
18.9
4
30.5
5 (mg/L)
FBC
61
5.75
13.05
18.85
30.05
(mgCd/L)
Cd en sobreviviventes ( g/g)
El ndice de condicin (IC) en los ostiones control de este bioensayo, mostr una
disminucin desde 101.7 g/mL hasta 48.1 g/mL como resultado de la ausencia de
alimento. Este ndice no fue determinado en los organismos expuestos al Cd, debido
a que los sobrevivientes mostraron una alteracin en el cierre de valvas, el cual se
hizo lento e incompleto, de manera que al ser extrados del acuario, los
sobrevivientes no se cerraban completamente y su lquido intervalvas se perdi.
Los pesos obtenidos al final del ensayo (peso total hmedo y seco) fueron
significativamente inferiores en los organismos expuestos (Fig. 17). El peso seco
esperado para ostiones de la talla utilizada es de 1.71 g. Despus del bioensayo, el
peso seco de los organismos control fue de 1.11 g ( 0.46), y en promedio fue 0.84
g ( 0.25) en organismos expuestos. En los organismos control, represent 30%
menos del valor calculado, mientras que en los ostiones expuestos, la prdida fue
del 50%.
62
10
50
40
30
20
0.5
10
0
30.5
10 7.75
2 13.1
3 18.9
4
5
(mgCd/L)
Figura. 17. Peso total, hmedo y seco (g) de los organismos al final de la
exposicin al Cd (promedio DE).
50
50,
como
63
variacin. Los ostiones que murieron a las 72 horas acumularon ms Cd que los
sobrevivientes en dos concentraciones de exposicin, adems se observ una
importante prdida de peso en todas las concentraciones. En contraste, en
organismos expuestos al Cr, la acumulacin del metal en los ostiones que murieron
durante el bioensayo y los sobrevivientes fue similar y la prdida de peso de los
organismos expuestos no fue siempre significativa respecto a los controles. Las
diferencias ms claras se apreciaron al comparar los pesos totales al inicio y al final
del bioensayo, ya que los ostiones expuestos a las concentraciones ms altas de
Cd mostraron diferencias significativas con los valores iniciales. Otro aspecto que
corrobora la mayor toxicidad de este metal, es que la mxima acumulacin fue
cercana a 700 gCd/gPS, mientras que en el caso del Cr se alcanzaron niveles de
1200 g/gPS. El FBC fue mayor en las concentraciones ms bajas en ambos
metales, pero los valores de FBC fueron menores en el caso del Cd, ya que tuvo
valores mnimos de 15 en la mxima concentracin de exposicin, mientras que en
el caso del Cr, el mnimo fue 24 (Fig. 18).
Cadmio
100
80
60
40
20
0
Cromo
FBC
5.7
(mgCd/L)
FBC Cd
3.53
10
(mgCr/L)
11
FBC Cr
64
A. Morfometra.
Tabla 15. Relacin peso seco/peso hmedo (gPS/gPH) en los tejidos de los
ejemplares expuestos durante cinco dias a niveles subletales de Cr y Cd.
Branquia
Glndula
Msculo
Control
0.15
0.16
0.16
0.088 mgCr/L
0.13
0.20
0.17
0.144 mgCr/L
0.14
0.21
0.17
0.110 mgCd/L
0.14
0.22
0.20
0.211 mgCd/L
0.14
0.20
0.17
(%)
88
86
84
82
80
78
76
74
T Control
CD1
0.110 mgCd/L
CD2
0.211 mgCd/L
CR1
0.088 mgCr/L
Branquia
Glndula
Msculo
CR2
0.144 mgCr/L
65
B. Determinacin de metalotionenas.
Branquia
Msculo abductor
140
(micro g /g)
(micro g/g)
180
100
60
20
-20
D1
D3
CONTROL
D5
160
140
120
100
80
60
40
20
0
Glndula digestiva
(micro g/g)
220
D1
D3
CONTROL
D5
800
700
600
500
400
300
200
100
0
-100
D1
D3
CONTROL
D5
DE
EE
Promedio
Figura. 20. Metalotionenas (g/g de tejido hmedo) en los tres tejidos de los
organismos del grupo control, evaluados los das 1, 3 y 5 del bioensayo. Se
sealan valores promedio, error estndar (EE) y desviacin estndar (DE).
66
amplias
67
Control
0.088 mgCr/L
0.144 mgCr/L
0.110 mgCd/L
0.211 mgCd/L
Branquia D1
8.5
93.8
66.8
16.0
11.2
( 6.0)
( 79.8)
( 68.8)
( 15.2)
( 0.9)
D3
72.6
96.9
78.1
85.9 **
275.0 **
( 77.8)
( 122.5)
( 138.3)
( 63.4)
( 452.4)
D5
69.3
63.3
127.5
116.8 **
98.7 **
( 29.6)
( 43.9)
( 90.6)
( 37.2)
( 77.0)
Msculo D1
34.5
38.8
57.7
92.2 *
182.5 *
abductor
( 21.3)
( 55.4)
( 90.9)
( 16.6)
( 16.5)
D3
46.9
26.8
73.4
53.9 **
36.5 **
( 38.1)
( 14.6)
( 67.3)
( 43.7)
( 37.6)
D5
109.1
59.6
268.7
138.4 **
80.5 **
( 59.9)
( 32.5)
( 463.53)
( 128.3)
( 24.4)
Glndula D1
33.0
59.3
76.4
251.0 *
172.0 *
digestiva
( 37.2)
( 175.5)
( 90.11)
( 69.3)
( 73.54)
D3
435.6
299.2
266.2
491.0
810.1 **
( 377.1)
( 263.5)
( 46.0)
( 860.3)
( 470.4)
D5
126.4
159.5
75.4
158.6
178.4
( 57.9)
( 74.8)
( 80.0)
( 94.8)
( 124.2)
* Valores superiores en los organismos expuestos a Cr respecto a los controles; ** Valores
superiores a los registrados el primer da en exposicin a Cd (P < 0.05, Kruskal-Wallis).
( g/g)
Branquia
Msculo abductor
d2
d2
d2
D1 D3 D5
0.211 mgCd/L.
C
d1
d1
D1 D3 D5
0.110 mgCd/L
d1
C
r2
r2
r2
C
D1 D3 D5
0.144 mgCr/L
r1
r1
D1 D3 D5
0.088 mgCr/L
C
r1
C
D1 D3 D5
Control
C
900
800
700
600
500
400
300
200
100
0
Glndula digestiva
68
C. Estrs oxidativo.
*
69
Controles
0.144 mgCr/L
0.088 mgCr/L
400
220
280
240
200
160
120
80
D1
180
D3
D5
D1
D3
D5
160
140
0.211 mgCd/L
0.110 mgCd/L
120
80
D1
D3
D5
360
400
350
300
(nmol/mg proteina)
100
DE
EE
Promedio
(nmol/mg proteina)
(nmol/mg protena)
200
320
(nmol/ng proteina)
(nmol/mg proteina)
360
220
200
180
160
140
120
100
80
60
40
240
180
120
60
0
300
250
200
150
100
50
0
D1
D3
D5
D1
D3
D5
70
71
( g / gPS)
60
50
40
30
20
10
0
Control
0.088
(mgCr/L)
0.144
(mgCr/L)
musculo
Control
branquia
0.11
(mgCd/L)
0.211
(mgCd/L)
glandula
72
Control
0.021
343.2
122.1
563.7
0.088
298.6
111.5
151.0
0.144
125.2
51.2
181.9
Control
0.052
65.3
0
34.9
0.110
314.0
30.7
362.2
0.211
225.2
51.2
230.8
Cr Agua
Cr Ostin
FBC
Branquia
Cr
Cr
MT
Agua Ostin
0.71
0.99
0.64
-0.92
MT
0.84
-0.99
Msculo
Cr
Cr
Agua Ostin
0.72
-0.89
MT
0.94
0.73
-0.98
Glndula
Cr
Cr
Agua Ostin
0.92
-0.85
LIPO
-0.75
-0.58
LIPO
0.99
74
75
* Mortalidad de un individuo del lote de 12; , suspensin del bioensayo en esa concentracin.
Las caractersticas de los organismos obtenidas al final de los bioensayos (tabla 21),
hicieron evidente que los organismos expuestos a Cr (los cuales llegaron a los
veinte das de exposicin), presentaron pesos menores respecto a los organismos
del grupo control (P < 0.02, ANOVA). En los ostiones expuestos a 0.180 mgCr/L el
peso total de fue 47.63 9.33 g y represent el 80% del peso total de los controles,
59.17 11.70 g. El peso hmedo fue 4.80 1.13 g y represent el 71% respecto a
los controles 6.75 1.67 g. El peso seco fue 0.81 0.28 g, correspondiente al 59%
del grupo control (1.38 0.47 g). La exposicin de 10 y 14 das al Cd no modific el
peso de los ostiones respecto al grupo testigo (P > 0.05).
76
Longitud
(mm)
70.0 7.0
Ancho
Alto
Peso total
Peso Hmedo
Peso seco
(mm)
(mm)
(g)
(g)
(g)
47.9 5.6 28.4 5.0 59.17 11.70
6.75 1.67 1.378 1.467
0.080 mgCr/L
68.9 6.0
0.180 mgCr/L
70.4 6.3
0.095 mgCd/L
67.0 4.8
6.21 1.68
1.276 0.613
0.170 mgCd/L
68.8 6.9
5.54 1.31
1.231 0.438
56.54 9.91
5.93 1.42
1.029 0.405*
77
Mantenimiento
Control
1.38 0.47
0.080 mgCr/L
1.03 0.40 *
a
0.180 mgCr/L
0.81 0.28 *
0.095 mgCd/L
1.28 0.61
0.170 mgCd/L
1.23 0.44 *
ndice de Condicin
(g/mL)
131.8
Al inicio
1.66
114.0
20 das
1.58
101.7
20 das
1.68
96.1
20 das
1.46
106.4
14 das
1.66
115.4
10 das
C. Consumo de oxgeno.
78
tuvo un promedio de 0.24 mg/h por cmara. Este valor fue restado del consumo de
oxgeno de cada animal.
El oxgeno que fue consumido por cada organismo control en una hora, fue similar
en los doce especmenes que conformaron el lote (P > 0.05, Kruskal-Wallis). En
este lote se present un consumo mayor el da 5 del experimento de 0.70 0.40
mg/h/gPS (P < 0.05, Kruskal-Wallis), mientras que los das restantes fue en
promedio de 0.26 0.18 mg/h/gPS.
La respiracin mostr valores uniformes en los organismos expuestos a Cr, a lo
largo de los das evaluados, estos consumieron en promedio 0.52 0.37 mg/h/gPS
y 0.45 0.40 mg/h/gPS, en exposicin a 0.080 mgCr/L y 0.180 mgCr/L,
respectivamente. La respiracin de los organismos expuestos a Cr fue
prcticamente idntica los das 10, 14 y 19 en las dos concentraciones de prueba
(Fig. 24).
Los ostiones expuestos al Cd mostraron variaciones en el consumo de oxgeno a lo
largo del bioensayo (P < 0.05). El da 5, los organismos expuestos a 0.170 mgCd/L
tuvieron un mayor consumo (0.88 0.77 mg / h / gPS) que el resto de los
organismos, incluyendo los controles (P < 0.03). En la concentracin 0.095
mgCd/L, el da 14 los ostiones presentaron el mayor consumo de oxgeno promedio
registrado en el bioensayo que fue de 1.41 1.16 mg / h / gPS (P < 0.01). Los
ostiones expuestos a esta concentracin, en contraste, haban mostrado un
consumo bajo el da 3 (0.16 0.03 mg / h / gPS). En los ostiones expuestos al Cd
el consumo de oxgeno fue heterogneo dentro de cada lote, de hecho, las
desviaciones estndar manifestaron la presencia de casos extremos en los lotes
con organismos expuestos a ambos metales a partir del da 10 (tabla 23).
79
1.6
(mg / h / gPS)
* (0.095 mgCd/L)
1.4
1.2
* (0.170 mgCd/L)
1
0.8
0.6
0.4
0.2
* (0.095 mgCd/L)
0
0
10
12
14
16
18
20
Da de ensayo
Control
Control
Cr1
Cr2
Cd1
0.80 mgCr/L
0.180 mgCr/L
0.95 mgCd/L
* Diferencias significativas respecto a los dems lotes.
Cd2
0.170 mgCd/L
Control
0.080 mgCr/L
0.180 mgCr/L
0.095 mgCd/L
0.170 mgCd/L
D3
0.64 0.44
0.37 0.18
0.16 0.03 *
0.34 0.34
D5
0.70 0.40
0.55 0.51
0.46 0.30
0.48 0.54
0.88 0.77 *
D10
0.21 0.13
0.65 0.36
0.66 0.64
0.47 0.63
0.44 0.43
D14
0.22 0.26
0.42 0.35
0.42 0.52
1.41 1.16 *
D19
0.34 0.14
0.34 0.21
0.35 0.37
80
D. Excrecin nitrogenada.
* (0.180 mgCr/L)
0.1
0.05
0
3
Control
Control
5
0.080 mgCr/L
10
0.180 mgCr/L
14
0.095 mgCd/L
19
Da de ensayo
0.170 mgCr/L
0.80 mgCr/L
0.180 mgCr/L
0.95 mgCd/L
0.170 mgCd/L
* Diferencias significativas respecto a los dems lotes.
81
Control
0.080 mgCr/L
0.180 mgCr/L
0.095 mgCd/L
0.170 mgCd/L
D3
0.045 0.041
0.083 0.063
0.077 0.068
0.098 0.080
0.195 0.250
D5
0.054 0.037
0.070 0.050
0.098 0.16
0.059 0.057
0.083 0.122
D10
0.017 0.026
0.061 0.083
0.141 0.088 *
0.075 0.053
0.059 0.084
D14
0.046 0.035
0.047 0.086
0.023 0.027
0.012 0.015
D19
0.010 0.010
0.003 0.003
0.019 0.009
E. Consumo de alimento.
82
Depositacin
(cel/mL)
[cel/mL]
20000
18000
16000
14000
12000
10000
8000
6000
4000
2000
0
14000
12000
10000
8000
6000
4000
2000
0
1 3 5 7 9 11 13 15 17
Da de ensayo
15000
10000
y = 3890.7x - 3225.3
R2 = 0.6962
5000
0
1
1
9 11 13 15 17
2
3
4
Da de ensayo
Da de ensayo
83
Control
0.080 mgCr/L
0.180 mgCr/L
0.095 mgCd/L
0.170 mgCd/L
D6
58 32
71 44
72 27
30 39
34 24
D7
151 95 *
121 99
150 12
36 25
56 64
D8
98 73
73 76
74 52
63 17
118 124
D11
79 49
149 69
110 43
95 74
D12
82 58
151 144
145 203
144 91
D15
52 51
52 63
48 57
D16
31 40
59 53
40 16
D17
44 30
43 47
103 53 **
* Diferencias significativas en el tiempo; ** Mayor consumo que el grupo control ese da (P < 0.05,
ANOVA).
84
(gPS)
0.14
0.12
0.1
0.08
0.06
0.04
0.02
0
0
10
15
20
25
Da de ensayo
Control
Control
CR1
0.80 mgCr/L
CR2
0.180 mgCr/L
CD1
0.95 mgCd/L
CD2
0.170 mgCd/L.
85
Control
0.112 0.022
0.080 mgCr/L
0.089 0.023 *
4a5
0.110 0.017
0.105 0.022
6 a 10
0.058 0.029 *
0.045 0.026
11 a 14
15 a 20
0.015 0.016
0.112 0.025
0.042 0.024
* Diferencias significativas, los controles con valores mayores que los expuestos (P < 0.01, ANOVA);
1
No diferente respecto al control (P > 0.05).
A. RELACIN O:N.
86
Control
D3
0.095 mgCd/L
0.170 mgCd/L
14.6 19.0
11.2 20.2
17.1 22.4
2.3 2.4
D5
15.3 9.3
2.2 2.1
50.3 60.7
67.7 96.6
83.2 79.3 *
D10
27.6 23.4
16.3 15.0
0.7 0.2 *
8.4 9.6
12.7 16.8
D14
8.0 6.8
14.5 16.1
42.4 21.7
227.7 168.3 **
D19
63.4 62.8
223.5 166.0
20.4 26.1
* Diferencias significativas respecto a otros das evaluados; **, Diferencias respecto al control ese
da (P < 0.05, Kruskal-Wallis).
O:N
250
200
150
100
50
0
0
10
15
20
-50
Control
0.080 mgCr/L
0.180 mgCr/L
0.095 mgCd/L
0.170 mgCd/L
B. Tasa de filtracin.
La tasa de filtracin fue determinada los das 6, 7, 8, 11, 12, 15, 16 y 17 (tabla 28).
Los ostiones control presentaron variaciones entre los individuos que conformaron
el grupo (P < 0.01) asociables a la presencia de casos extremos. Si bien hubo
algunos casos extremos en la tasa de filtracin de organismos expuestos a los
metales, no se presentaron diferencias significativas dentro de los lotes.
88
Control*
0.080 mgCr/L
0.180 mgCr/L
0.095 mgCd/L
0.170 mgCd/L
2.06
1.37
0.46
0.69
0.24
0.76
0.75
0.68
0.36
0.35
0.78
0.51
0.86
0.91
0.59
11
1.10
0.55
0.74
0.45
12
0.54
1.12
0.59
0.90
15
2.57
2.04
1.14
16
0.68
1.37
0.96
17
1.55
1.07
0.31
Promedio DE
1.21 1.47
1.07 1.44
0.82 0.94
0.68 1.09 **
0.44 0.41 **
Mnimo
0.04
0.03
0.01
0.07
0.06
Mximo
5.66
5.87
5.57
5.98
1.70
* Diferencias significativas entre los individuos que conformaron el lote; **, Diferencias significativas
respecto al control (P < 0.01, Kruskal-Wallis).
89
valores mayores a 4.00 L/h pudieron considerarse altas y los menores a 2.00 L/h,
tasas bajas (Fig. 29).
Control
Control
80.0
gCr/L
0.080
mCr/L
0.180gCr/L
mgCr/L
180.0
0.095
mgCd/L
95.0
gCd/L
Frecuencia
18
16
14
12
10
8
6
4
2
0
0.5
1.5
2.5
3.5
4.5
5.5
El valor promedio de las tasas altas en organismos control fue 5.27 L/h y
representaron el 13% de los datos. En los ostiones expuestos a 0.080 mgCr/L y
0.180 mgCr/L, fueron de 5.51 L/h y 5.01 L/h, representando el 9% y el 4% de los
datos, respectivamente. Solo un organismo expuesto a 0.095 mgCd/L present una
tasa elevada de 5.98 L/h. No hubo tasas altas en ostiones expuestos a 0.170
mgCd/L. Las tasas altas de filtracin no presentaron diferencias, entre los ostiones
control y los expuestos a los metales (P > 0.05, Kruskal-Wallis). Su escaso nmero
no permiti obtener una tendencia respecto al tiempo.
Las tasas de filtracin bajas representaron el 92.5% de todas las tasas medidas
(tabla 29). Los organismos de cada lote tuvieron tasas bajas semejantes (P > 0.05,
ANOVA), no se observaron diferencias entre los controles y los expuestos a los
metales. Adems, a pesar de que se obtuvieron valores que aparentemente
90
Control
0.080 mgCr/L
0.180 mgCr/L
0.095 mgCd/L
0.170 mgCd/L
0.80
0.84
0.95
0.69
0.24
0.76
0.75
0.68
0.36
0.35
0.78
0.50
0.86
0.91
0.59
11
0.53
0.55
0.74
0.45
12
0.54
0.64
0.59
0.25
15
0.41
0.38
0.51
16
0.68
0.25
0.54
17
0.56
0.59
0.31
Promedio
0.64 0.45
0.60 0.44
0.64 0.50
0.50 0.44
0.44 0.41
Las tasas de filtracin altas y bajas esperadas para organismos de la misma talla,
fueron de 7.56 L/h y 1.72 L/h, respectivamente. En todos los casos, ambos valores
fueron estadsticamente mayores a los obtenidos (P < 0.01, t de student) (Fig. 30).
(L/h)
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
Tasa baja
obtenida
Control
0.080 mgCr/L
Tasa baja
esperada
0.180 mgCr/L
Tasa alta
obtenida
0.095 mgCd/L
Tasa alta
esperada
0.170 mgCd/L
91
(cal/d)
700
600
500
400
300
200
100
0
D66
D7
7
Control
8D8
CR1
0.080 mgCr/L
D11
D12
11
12
Da de exposicin
CR2
0.180 mgCr/L
D15
15
CD1
0.095 mgCd/L
D16
16
D17
17
CD2
0.170 mgCd/L.
92
Control
0.080 mgCr/L
0.180 mgCr/L
0.095 mgCd/L
0.170 mgCd/L
17.6 6.4
19.5 15.8
21.6 6.2
17.1 4.0
20.4 4.6
14.6 5.5
16.4 4.5
6.5 3.2
8.7 4.9
7
8
14.6 4.1
14.6 7.3
a, b
14.2 4.0
7.3 4.6
11
11.2 3.0
22.8 8.1
12
8.4 2.0
16.1 3.8
15
9.8 3.2
22.1 9.6
16
1.3 0.9
3.0 4.1
17
1.5 0.8
3.8 2.3
21.7 6.1
8.56 6.2
a
a
a
14.6 3.8
13.8 5.5
14.5 3.2
a
a
14.1 5.4
11.6 3.3
2.9 2.3
5.11 2.5
a
b
93
Como se observa en la Fig. 32, los valores calricos de las heces producidas por
ostiones expuestos al Cr, tuvieron un comportamiento diferente al registro
gravimtrico. La produccin de heces expresada en unidades energticas fue
significativamente mayor que los controles, los das 11, 12, 15 y 17. Por otro lado,
solo el da 8, el valor calrico de las heces de ostiones control fue mayor. Esto
implica que, si bien la produccin gravimtrica de heces fue similar ambos grupos,
con una tendencia a disminuir, la prdida calrica por heces puede interpretarse
como una asimilacin incompleta del alimento en animales expuestos a este metal.
100
25
80
20
60
15
40
10
20
6
D6
7D7 8D8 11
15 D16
16 D17
17
D11 12
D12 D15
Da de ensayo
Control
Cr1
Cr2
8 11 12 15 16 17
Da de ensayo
Control
CR1
CR2
94
Produccin de heces(cal/d)
25
Controls
Control
95
ugCd
l-1
0.095
mgCd/L
170
ugCd
l-1
0.170
mgCd/L
20
15
10
5
0
6
11
12
Da de exposicin
95
Wallis) fue menor que el grupo control los das 6 y 7 del ensayo. Adems se
apreci un incremento durante el perodo evaluado, que fue significativo en los
ostiones expuestos a 0.170 mgCd/L (P < 0.05, Kruskal-Wallis) (tabla 31).
Control
0.080 mgCr/L
0.180 mgCr/L
0.095 mgCd/L
0.170 mgCd/L**
236.5 190.6
217.3 229.2
271.0 201.0
104.3 140.4 *
26.6 90.9 *
469.9 416.9
377.6 394.2 *
190.5 389.0 *
47.02 101.4 *
176.6 244.9 *
250.8 313.9
227.6 301.2
287.2 233.2
107.8 163.5
432.3 483.0
11
222.7 217.1
324.4 364.5
181.4 265.3
125.2 250.9
12
251.7 240.0
337.0 483.8
473.1 745.5
372.0 388.5
15
187.1 187.1
133.3 133.3
167.0 230.2
16
152.6 146.2
105.3 200.7
121.8 139.3
17
165.2 153.3
196.5 189.3
369.6 270.5
* Diferencias estadsticas, mayor asimilacin en ostiones control ese da (P < 0.05 por KruskalWallis); ** Diferencias estadsticas entre los das evaluados.
96
Control
0.080 mgCr/L
0.180 mgCr/L
0.095 mgCd/L **
0.170 mgCd/L **
78
69
69
50 *
19 *
81
72
30
25 *
75 *
63
65
81
34
98
11
78
54
46
33
12
81
61
73
62
15
71
47
46
16
69
53
62
17
74
89
99
D. Metabolismo basal.
97
Los das 10 y 15, los ostiones expuestos a 0.080 mgCr/L, tuvieron un gasto
metablico por encima de los controles en un 73% y un 25%, respectivamente.
El metabolismo basal de los organismos expuestos a 0.180 mgCr/L, siempre fue
inferior a la de los controles, representando entre 77% al 94% de la energa
gastada por estos.
En los organismos expuestos a Cd, el metabolismo basal indic que los ostiones
expuestos a este metal, gastaron de un 17% a un 57% ms de energa que el
grupo control para mantenerse vivos el da 5, si bien en el da 10 el gasto fue
inferior al control.
Los valores de gasto energtico en el mantenimiento del metabolismo basal,
tuvieron la fuerte influencia de casos extremos de tasas altas de filtracin.
3
2.5
2
(cal/h)
2.26
2.74
(cal/h)
3.55
3.5
2.11
3
1.82
1.58
1.5
1.49
1.68
2.5
1.34
2
0.91
2.64
2.26
1.58
1.5
1.34
1
0.5
0.5
0
5
Control
Control
10
15
Da de ensayo
0.080
CR1 mgCr/L 0.180
CR2 mgCr/L
5
DaDa
5 de ensayo
Control
Control
10
Da 10
Figura. 34. Tasa metablica basal (cal/h) obtenida a travs de la relacin del
consumo de oxgeno y la tasa de filtracin de C. virginica expuesta a Cr y Cd.
Se grafican valores promedio.
98
control
fue
similar.
El
metal
acumulado
gener
concentraciones
Control
0.080 mgCr/L
0.180 mgCr/L
Oyster (gCr/g)
2.1 0.8
2.7 0.52
11.6 2.50 *
22.4 1.81 *
FBC
140.0 30.0
128.8 34.2
132.8 27.3
116.2 27.9
99
Control
0.095 mgCd/L
0.170 mgCd/L
Ostin (gCd/g)
3.9 0.8
2.8 1.2
59.5 28.6
71.7 26.1 *
FBC
280.0 50.0
107.8 42.4
1088.5 1269.7
478.5 632.9
* Diferencias estadsticas entre controles y expuestos (P < 0.05, ANOVA); FBC, Factor de
Bioconcentracin.
La relacin de los niveles de los metales en tejido obtenidas al trmino del ensayo
y las respuestas metablicas, indicaron lo siguiente.
En los ostiones expuestos a Cr, solo la ingestin y la asimilacin del alimento
tuvieron relacin directa con los niveles del metal en el agua (r > 0.57, P < 0.05), al
igual que la tasa de filtracin (r = 0.62, P < 0.05). Por otro lado, los valores altos de
ingestin y asimilacin, se asociaron a los FBC ms bajos (r = - 0.57, P < 0.05).
Los niveles de Cr acumulados en tejido no se relacionaron con otras respuestas
metablicas y el FBC tampoco. Si bien la influencia del Cr no fue evidente en todas
las respuestas, algunos aspectos indicaron que hubo dao asociable a la
exposicin, como la prdida de peso.
Por otro lado, la asimilacin mostr una correlacin directa con la tasa de filtracin,
tanto en controles como en expuestos a Cr (r > 0.51, P < 0.05), a pesar de que,
como se mencion anteriormente, la tasa de filtracin no mostr el efecto de la
100
16
Control
Control Tasa
(L/h) alta (L/h)
Control
Control Tasa
(L/h) baja (L/h)
Cr1
Tasa
alta (L/h)
0.080
mgCr/L
(L/h)
Cr1
Tasa
baja (L/h)
(L/h)
0.080
mgCr/L
14
12
Control, r = 0.56
2
500
1000
1500
2000
2500
Asimilacin (cal/d)
En el caso de los ostiones expuestos al Cd, el FBC tuvo una relacin significativa
(P < 0.05), solo con la tasa de filtracin y la asimilacin del alimento. La tasa de
filtracin promedio (incluyendo las tasas baja y alta) disminuy conforme el FBC se
increment (r = -0.72). Un comportamiento semejante se obtuvo con la asimilacin
del alimento, r = -0.56 (Fig. 36). Tambin se observ que la asimilacin se
101
1000
800
Asimilaci
n lineal
(cal/d)
600
filtracin (mL/h)
FRTasa
(ml hde
- 1)
Assimilation
d - 1)
Asimilacin(cal
(cal/d)
Lineal (FR (ml h - 1))
Lineal (Assimilation (cal d - 1))
400
y = -85.81x + 241.75
200
0
-200
1000
2000
3000
4000
-400
y = -287.43x + 454.34
Factor de Bioconcentracin
-600
3
2.5
2
1.5
1
0.5
y = 6E-09x + 0.82
0
0.00E+00 5.00E+07 1.00E+08 1.50E+08 2.00E+08
Consumo de clulas al da
102
A. Campo de crecimiento.
Heces
Excrecin
Nitrogenada
Campo de
crecimiento
72.1 33.5 **
14.5 7.6
8.2 6.1
140.6 193.4
0.080
207.1 218.3
65.8 43.9
21.9 10.7 *
1.4 0.4
118.9 239.4
0.180
367.8 249.5
73.0 30.8
30.5 17.2 *
7.1 13.7
259.1 235.5
0.095
84.7 81.5 *
57.8 53.2
17.9 11.5
5.5 7.9
5.8 112.6
0.170
77.2 210.2 *
89.5 79.8
22.5 23.6
9.0 15.2
-42.5 130.1 *
175.0 170.8
31.8 13.5
10.5 7.9
4.8 2.5
130.5 176.7
0.080
298.1 349.4
73.9 32.5 *
23.7 8.4 *
12.1 13.8 *
194.4 369.3
Cr
0.180
260.0 336.0
74.5 62.4 *
21.9 12.7 *
16.5 12.2 *
157.4 367.9
Cd
47.4 53.9
12.4 6.2
10.5 9.4
57.2 206.8
220.6 319.6
26.6 16.2
8.8 6.8
9.9 6.1
115.6 159.0
0.080
140.4 223.5
57.1 33.0
23.8 11.1 *
8.6 11.9
43.3 218.2
0.180
252.6 310.7
57.8 47.9
20.6 8.7 *
6.9 5.3
129.3 299.4
Cd
15
Respiracin
224.0 189.6
Cr
10
Ingestin
Control
Control
Cr
*, Diferencias significativas entre el control y los expuestos a los metales; ** Mayor respiracin ese
da respecto a los dems (P < 0.05, Kruskal-Wallis).
La ingestin de alimento fue similar entre los organismos que conformaron los
lotes control y los expuestos a Cr (P > 0.14, Kruskal-Wallis). Sin embargo, los
103
b) Respiracin (cal/d)
a) Ingestin (cal/d)
400
10
5
Da 5
Cd2
0.170 mgCd/L
Cd1
0.095 mgCd/L
0.180 mgCr/L
Cr2
0.080 mgCr/L
Cr1
Control
Control
Da 15
Da 5
Cd2
15
0.170 mgCd/L
20
Cd1
25
18
16
14
12
10
8
6
4
2
0
0.095 mgCd/L
Cr2
0.180 mgCr/L
30
Da 15
Cr1
35
Cd2
0.170 mgCd/L
Da 15
Da 5
0.080 mgCr/L
0.170 mgCd/L
Cd2
0.095 mgCd/L
Cd1
0.180 mgCr/L
Cr2
0.080 mgCr/L
Cr1
Control
Control
Da 5
0.095 mgCd/L
Cd1
Control
150
100
50
0
Control
200
**
0.180 mgCr/L
Cr2
250
**
0.080 mgCr/L
Cr1
300
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Control
Control
350
104
expuestos a 0.080 mgCr/L y a 0.170 mgCd/L (P < 0.03). En los organismos del
grupo control la energa canalizada a la respiracin se redujo durante el transcurso
de las pruebas, siento este mayor el da 5, respecto a los das 10 y 15 (P < 0.01).
El da 5 no se demostraron diferencias entre la respiracin de los controles y
expuestos a los metales. Sin embargo en el da 10, los ostiones expuestos a Cr
canalizaron mayor energa a la respiracin (P < 0.01), respecto a los controles. En
el da 15 no se comprobaron diferencias estadsticas entre el grupo control y los
expuestos a los metales, a pesar de los elevados valores en los expuestos a Cr.
La prdida energtica a travs de las heces en los controles fue menor en cada
perodo evaluado (14.50, 10.52 y 8.86 cal/d a los 5, 10 y 15 das del bioensayo, P
= 0.02), lo que podra implicar un mejor aprovechamiento del alimento ingerido
durante el transcurso de las pruebas. En contraste, los organismos expuestos a Cr
tuvieron una prdida similar en las tres evaluaciones, y en todas ellas la prdida
fue significativamente mayor a los controles (P < 0.01). Este comportamiento no se
present en el caso del Cd en los que la prdida energtica por produccin de
heces fue similar al grupo control en todos los tiempos de evaluacin.
La prdida por excrecin nitrogenada fue similar en las tres evaluaciones, con
excepcin de los ostiones expuestos a 0.080mgCr/L, que presentaron diferencias
entre los das evaluados (P < 0.01) siendo ms elevada la prdida energtica por
excrecin nitrogenada el da 10. Los ostiones expuestos a 0.180 mgCr/L tuvieron,
tambin el da 10, una prdida mayor que los controles, solo que en esta
concentracin de exposicin, los cambios en el tiempo no fueron significativos. La
dispersin de los datos gener un fuerte sesgo en la interpretacin y no se
demostraron diferencias en organismos expuestos al Cd.
105
(cal/d/gPS)
250
200
150
100
50
0
-50
-100
Da 5
Control
Da 10
0.080 mgCr/L
0.180 mgCr/L
Da 15
0.095 mgCd/L
0.170 mgCd/L
Fig. 39. Balance energtico en el ostin C. virginica obtenido para los das 5,
10 y 15. Se presentan promedios.
106
107
Cd
0.080
0.180
mgCr/L
mgCr/L
Control
0.095
0.170
mgCr/L
mgCr/L
Ingestin
-0.12
-0.29
0.57
-0.19
-0.90*
0.37
Respiracin
-0.12
0.56
-0.59
0.22
0.89*
0.39
Heces
-0.33
0.36
0.38
-0.33
0.93*
-0.44
Excrecin nitrogenada
-0.58
0.51
-0.31
0.01
0.80*
0.63
Campo de Crecimiento
-0.34
-0.19
0.4
-0.08
-0.96*
0.38
* Significativas.
108
Discusin
4. DISCUSIN
109
Discusin
Discusin
dentro del intervalo registrado por otros autores en varias localidades de la costa
del Atlntico en Estados Unidos, cuyos valores fluctan entre 0.12 gCr/gPS y 4.9
gCr/gPS, como indica Roesijadi (1996a). Datos recientes sin embargo indican que
el Cr acumulado en ostin de la laguna de Mandinga se ha incrementado a niveles
tan altos como los mencionados en el Canal de Chijol, ya que se han registrado
hasta 21.06 gCr/gPS en organismos extrados entre 1998 y 1999 (GuzmnAmaya, 2004).
En el caso del Cd, los ostiones de la laguna de Mandinga tuvieron un promedio de
2.3 gCd/gPS, con un mximo de 4.2 gCd/gPS. Estos valores estuvieron dentro
del intervalo de las concentraciones registradas en estudios anteriores en el sitio de
estudio, de 1.5 gCd/gPS y 3.1 gCd/gPS (Rosas et al., 1983; Villanueva y Botello,
1998, respectivamente). Asimismo, el contenido de Cd en los ostiones colectados
fue similar al registrado en la especie, en las lagunas de Sontecomapan y la
Mancha (Gonzlez-Fierro et. al., 1994; Botello, 1994). Sin embargo, la norma
mexicana (NOM-031-SSA1-1993, emitida por la Secretara de Salud, 1994), indica
valores lmite de 0.5 gCd/g PH, lo cual implicara que todas las muestras
analizadas tuvieron altos contenidos de Cd, particularmente las colectadas en
septiembre de 1998, lo que las hace inadecuadas para consumo humano. Estudios
recientes indican que los niveles de Cd en el ostin de la laguna de Mandinga no
han aumentado, ya que entre 1998 y 1999 se han registrado en promedio 2.9
gCd/gPS (Guzmn-Amaya, 2004).
111
Discusin
Los organismos utilizados para las fases experimentales tuvieron una longitud
promedio entre 66.2 y 71.95 mm. Los ostiones que conformaron los lotes fueron
semejantes, al entrar a cada uno de los ensayos. Al final, los organismos ms
pesados (54.67 g), se asociaron a la prueba fisiolgica. Lo cual es lgico si se
considera que esa fue la prueba ms larga y la nica en la cual fueron alimentados
112
Discusin
longitud-peso
seco
(Powell
et
al.,
1992),
proveen
informacin
Discusin
mantenimiento adecuado, en
114
CL50-168
Discusin
otros moluscos como M. edulis (L.) y C. gigas (Thunberg), cuya CL50-96 h es de 4.5
mgCr/L en ambas especies (Pawlisz et al., 1997).
Se obtuvo en C. virginica una CLC50-168h de 475.8 gCr/gPS. Contrario a lo
esperado, el FBC no fue menor en las concentraciones de exposicin al Cr ms
elevadas, lo cual se puede relacionar con el comportamiento de acumulacin de
un metal esencial como el Cr. As, si bien la mortalidad se asoci con el Cr
incorporado en el tejido, la concentracin corporal no se increment de manera
proporcional a la del agua, presentndose una aparente regulacin limitada del
metal entre 8.2 y 21.4 mgCr/L, partir de la cual se increment nuevamente el Cr
corporal; de tal manera, el FBC no se asoci visiblemente con la mortalidad y la
CLC50 del Cr no mostr claramente su utilidad. Al respecto Borgmann (2000)
seala que la determinacin de efectos basada en el balance corporal del metal,
tiene ciertas limitaciones en el caso de metales esenciales, como es el caso del
Cr, lo cual se corrobora con nuestros resultados.
No obstante, la elevada capacidad de bioacumulacin del Cr registrada en C.
virginica, sugiere que la especie puede fungir como biomonitor de la presencia de
altos niveles del metal en el medio lagunar estuarino. Los niveles mximos
corporales registrados (1244 g/gPS) se consideran similares a los acumulados
en otras especies, como M. edulis (de 400 a 1000 gCr/gPS) expuesta a la
emisin de agua contaminada con descargas de industrias de tenera (Walsh y
OHalloran, 1998). Diferentes especies de moluscos han sido consideradas como
buenos biomonitores de acumulacin del metal, como M. californianus (Mollusca;
115
Discusin
116
Discusin
117
Discusin
Discusin
119
Discusin
4.2.4.1 Respuestas
bioqumicas.
Metalotionenas
estrs
oxidativo.
120
Discusin
121
Discusin
122
Discusin
123
Discusin
Discusin
Discusin
Discusin
127
Discusin
A. Consumo de oxgeno.
128
Discusin
Discusin
del
metal;
niveles
mayores
(0.3
mgCd/L)
redujeron
130
Discusin
B. Excrecin nitrogenada.
131
Discusin
embargo, en esta etapa del bioensayo (da 10), el sustrato energtico utilizado por
los organismos denot un catabolismo estricto de protenas (O:N = 0.7), lo cual
sugiere una condicin de estrs severo y la utilizacin de protena corporal con
fines energticos y en consecuencia explica en aumento en la excrecin
amoniacal observado. Es bien conocido que el Cr ocasiona daos renales en
mamferos y el exceso genera necrosis en los tmulos proximales, alterando a la
vez, la excrecin de los productos nitrogenados (EPA, 1998: Hewitt et al., 1991).
Sin embargo, en C. virginica y M. edulis el exceso de Cr puede excretarse por
manto y glndula digestiva (Espina y Vanegas, 1996 b), posiblemente reduciendo
las alteraciones renales. La tasa de produccin amoniacal se ha relacionado con
la disponibilidad del alimento, en funcin tanto de la composicin qumica de la
dieta, como de la cantidad del alimento ingerido. As, la relacin directa entre la
tasa de excrecin nitrogenada y la cantidad de alimento ingerido ha sido reportada
en bivalvos.
C. Relacin O:N.
132
Discusin
Discusin
fines
energticos
de
la
protena
corporal
de
los
organismos.
clulas. No obstante,
134
Discusin
Discusin
Discusin
Discusin
Discusin
de
las
partculas
suspendidas
(Mac
Donald
et
al.,
1998),
pseudomona,
Isochrysis
galbana
(Parke)
T.
suecica
139
Discusin
contenido energtico de 2,048 cal/g en T. suecica, fue casi la mitad de los valores
indicados. Sin embargo, el contenido calrico de T. suecica (3.91 X 106
cal/clula) es mayor al suministrado a M. edulis alimentada con T. suecica (50,000
clulas/h), para el cual represent 0.94 X 106 cal/clula (datos recalculados;
Bayne, 1973), y que fue considerada energticamente adecuada para los
organismos.
Los valores de consumo de clulas transformados a cal, representan el alimento
ingerido por un individuo en un da. La ingestin no mostr el efecto de los
metales, si bien pudo apreciarse una disminucin en la ingestin del grupo control
a lo largo del perodo de prueba.
En C. virginica, la asimilacin del alimento durante el transcurso de las pruebas,
fue similar en el grupo control (236.5 cal/d) y en los expuestos al Cr (244.1 cal/d
promedio), y al Cd (177.5 cal/d), excepto los das 6 y 7. En los ostiones expuestos
al Cr la asimilacin fue significativamente inferior a los controles el da 7 (377.6 y
190.5 cal/d) y los expuestos a Cd mostraron una asimilacin inferior en ambos
das, que fluctu entre 26.6 cal/d y 176.6 cal/d. A partir del sptimo da, la
exposicin a los metales no modific la asimilacin del alimento ingerido, no
obstante la disminucin de los valores observados, particularmente en los ostiones
expuestos al Cd, debido a la elevada dispersin de los datos.
La eficiencia de asimilacin del alimento ingerido, representa la fraccin de los
elementos asimilados que se incorporan en el tejido biolgico (Widdows y Donkin,
1991). La eficiencia de asimilacin determinada en los ejemplares de C. virginica
del grupo control alimentados con T. suecica (74%), se consider adecuada y
semejante a la obtenida en diversas investigaciones con C. virginica y otras
140
Discusin
141
Discusin
En los ostiones expuestos a los metales la tasa de produccin de heces fue menor
que en los organismos del grupo control. No obstante el aumento en el contenido
energtico de las heces (das 11 a 17), sugiere una menor asimilacin y
aprovechamiento de los componentes orgnicos de la dieta, lo cual explica a su
vez la reduccin en el peso de los organismos, al trmino de la exposicin al metal.
En los ostiones expuestos al Cd la produccin de heces fue irregular, y solo fue
significativamente mayor que el grupo control el da 12 de exposicin, no
reflejando, contrario a lo esperado, la reduccin significativa observada en la
eficiencia de asimilacin. En los organismos expuestos al Cd, la disminucin en la
eficiencia de asimilacin del alimento, podra relacionarse con el deterioro de la
actividad digestiva derivado de la destruccin de la glndula digestiva. Se ha
corroborado la atrofia de la glndula digestiva como consecuencia de la exposicin
a valores elevados de Cd corporal por Kim et al. (1999). Cabe recordar que fue la
glndula digestiva rgano con mayores alteraciones en la induccin de
metalotionenas y que present dao oxidativo desde las 6 h de exposicin al
metal.
F. Metabolismo basal.
142
Discusin
143
Discusin
inferior al del grupo control, en este caso, el primer organismo muerto se detect
hasta el da 16 del bioensayo. En el grupo expuesto a 0.095 mgCd/L, los
organismos muertos se detectaron al da 8 y 13 del bioensayo (uno en cada da) y
en este grupo el metabolismo basal fue mayor que el del grupo control el da 5
(2.64 cal/h). De manera similar, en los ostiones expuestos a 0.170 mgCd/L la
mortalidad se observ el da 5 y el 9 del bioensayo (uno cada da) y en este grupo
el metabolismo basal fue elevado los da 6 y 10 del bioensayo (3.55 y 3.48 cal/h).
De esta manera, el incremento en el metabolismo basal previo a la mortalidad de
los organismos sugiere el aumento en el gasto energtico de mantenimiento de
las funciones vitales del organismo producto de la accin txica del metal, mayor
por efecto del Cd. No obstante, se desconoce la razn por la cual los ostiones
expuestos a la concentracin mayor de Cr, contrario a lo esperado, no mostraron
un fuerte gasto energtico en el metabolismo basal. Si bien, tambin se demostr
la disminucin significativa en el peso de estos organismos al trmino del
bioensayo.
144
Discusin
Discusin
10
15
Control
63
20
18
32
4
6
74
83
0.080
mgCr/L
25
32
31
41
57
65
11
17
0.180
mgCr/L
20
29
23
60
79
51
8
0.095
7
Respiracion
mgCd/L
21
38
46
6
Heces
68
10
0.170
Campo de crecimiento
mgCd/L
negativo
Excrecin N
146
Discusin
147
Discusin
148
Discusin
en las
149
Discusin
Discusin
151
Discusin
Discusin
Discusin
154
Discusin
14
C:
51
Cr (Wang y
155
Discusin
los
protocolos
sobre
proteccin
ambiental
deberan
incluir
las
Discusin
Discusin
Discusin
tener relevancia econmica, ya que indica si la especie puede ser explotada como
un recurso en condiciones que garanticen la obtencin de un producto de calidad.
La presente investigacin constituye una propuesta nueva de evaluacin de riesgo
para la especie, que recaba la informacin a partir de la evaluacin integral de
biomarcadores mltiples y describe los mecanismos de accin txica en funcin
de la bioacumulacin, estableciendo a la vez la relevancia de la integracin y la
relacin de las respuestas biolgicas evaluadas considerando diferentes niveles
de organizacin biolgica.
Es necesario efectuar estudios a diferentes niveles de organizacin biolgica en
funcin de las concentraciones del medio y la acumulacin corporal. Esta
investigacin aporta elementos que proporcionan informacin slida para la
proteccin de C. virginica y es recomendable que en otras especies de los
ecosistemas acuticos mexicanos se consideren, para la propuesta de una
normatividad ambiental tendiente a la regulacin de emisiones en niveles seguros
para los ambientes del pas.
159
Conclusiones
5. CONCLUSIONES.
160
Conclusiones
evidentes desde antes de las 96 h. Los efectos del Cr estuvieron diferidos, pero
tambin fueron letales.
La CLC50-168 h de Cr de 560.98 g/gPS, indic una acumulacin de este metal, que
alcanz hasta 1,200 gCr/gPS. La acumulacin de Cr tejido no se relacion de
una manera clara a la mortalidad, pero las altas concentraciones en tejido y la
prdida de peso apuntaron a un esfuerzo metablico relacionado con el control de
las concentraciones en el interior del animal. La CLC50-168 h y el FBC sealan que
C. virginica no es un acumulador neto de Cr.
En contraste, la CLC50-72 h del Cd de 502.25 g/gPS del Cd y el FBC permitieron
considerar
al
ostin
C.
virginica
como
acumulador
neto
de
Cd.
Las
161
Conclusiones
162
Conclusiones
Conclusiones
Conclusiones
ejercido para el
Conclusiones
Conclusiones
en el consumo y
asimilacin del alimento. Estos animales no contaban con energa disponible para
crecimiento. Los ostiones expuestos a 0.170 mgCd/L, ya se encontraban en
condiciones de resistencia metablica, con una ingestin mnima del alimento
desde el da 5, y la energa gastada ya no poda ser compensada.
La relacin de las respuestas fisiolgicas y metablicas con la acumulacin de los
metales indicaron que el FBC en la exposicin a Cr se mantuvo bajo, a expensas
de un incremento en la ingestin y mayor asimilacin del mismo, siendo la
asimilacin proporcional a la tasa de filtracin, a pesar de que estos parmetros no
mostraron diferencias estadsticas con los controles. El FBC de Cr no se asoci a
ninguno de los parmetros del campo de crecimiento.
El FBC tuvo relacin directa con el Cd acumulado en el tejido del ostin, a la vez
con la disminucin en la tasa de filtracin y la asimilacin de alimento, parmetros
que estuvieron directamente relacionados entre si. Si bien no hubo diferencias en
el peso de los organismos respecto a los controles, los ostiones expuestos a 0.170
mgCd/L tuvieron un peso menor al esperado y este peso fue proporcional al
consumo de clulas. El FBC de Cd tuvo valores altos asociados a un mayor gasto
respiratorio, excrecin nitrogenada y prdida calrica por heces, mientras que
tambin se asoci a la menor ingestin y finalmente al menor campo de
crecimiento.
La mayor y ms rpida toxicidad del Cd, respecto al Cr en C. virginica implica que
la especie tiene una capacidad de regulacin de los niveles internos de Cr, a
expensas de un gasto energtico considerable y que los efectos derivados de la
167
Conclusiones
168
Conclusiones
individual
se
manifiestan
posteriormente,
pero
permiten
evidenciar
169
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184
Referencias
185
Anexos
7. ANEXOS
187
Anexos
Para desarrollar adecuadamente los bioensayos fue necesario realizar pruebas del
sistema de mantenimiento de los organismos en condiciones de laboratorio, de su
alimentacin, y tambin se estableci el perodo adecuado durante el cual, los ostiones
deban permanecer en el sistema antes de la experimentacin. Estas pruebas
permitiran que los organismos se mantuvieran en condiciones ptimas, y que el
perodo fuera suficientemente largo para que ya no presentaran estrs derivado de la
colecta.
Se prob el sistema de alimentacin con Spirulina spp. y Tetraselmis suecica (Kylin),
bajo las mismas condiciones que se utilizaron en las fases experimentales (salinidad 22
, 25 C y aireacin, constante).
Los organismos colectados en octubre de 1996 fueron colocados en un acuario de 200
L (Fig. A.1) y se alimentaron con Spirulina spp. Se observ durante el perodo ms
largo posible su sobrevivencia, y adaptacin al laboratorio para determinar el tiempo
adecuado de mantenimiento previo a los bioensayos.
Los colectados en mayo de 1997 fueron colocados en el sistema definitivo de 600 L y
se realizaron las pruebas de alimentacin con Tetraselmis suecica. En este caso se
escal el cultivo en el mes de marzo de 1997 y simultneamente se probaron las
tcnicas para el conteo de clulas. Se utiliz espectrofometra de luz elaborando la
curva patrn con clulas vivas y congeladas, y tambin hemocitmetro con clulas
188
Anexos
congeladas. Los conteos fueron realizados por tres personas, con tres rplicas,
utilizando diferentes mtodos para colocar la muestras en el hemocitmetro. Los
organismos fueron alimentados por una hora, durante la cual se suspenda la aireacin,
reanudndola posteriormente.
Los resultados de esta pruebas fueron los siguientes. En la primera colecta, 50 ostiones
se colocaron en el sistema de 200 L, el cual result
mantenimiento de los organismos, ya que contaba con un filtro biolgico que requera
atencin. Sin embargo, gracias a esta fase, se dise el sistema de mantenimiento de
600 L. Esta primera prueba dur 60 das.
Anexos
estableci una nueva meseta con el 74% de sobrevivientes hasta los 50 das.
nicamente el 44% de los organismos lleg al final del perodo de prueba (Fig. A.2).
Esta prueba permiti establecer que un perodo de mantenimiento de entre 10 y 28 das
era adecuado antes de someter a los organismos a la experimentacin.
Sobreviviencia (%)
120
100
80
60
40
20
61
57
53
49
45
41
37
33
29
25
21
17
13
0
d
En las pruebas de conteo de clulas, el anlisis de varianza indic que hubo diferencias
significativas entre los conteos llevados a cabo por diferentes mtodos (F = 4.32, P <
0.01), independientemente de la persona que realizara el conteo
pruebas de conteo de clulas permitieron definir que el mtodo ms adecuado era por
hemocitmetro, colocando 0.2 mL de la muestra directamente en este y posteriormente
el cubreobjeto. Se elimin el anlisis por espectrofotmeto de luz, ya que este requera
de conteos por hemocitmetro para la elaboracin de curva patrn en cada ocasin y
no era conveniente fijar de las muestras porque esto modificaba el volumen final y por
190
Anexos
350
*
I2P
I2E
300
250
200
150
100
50
0
X1
X2
I2
F3
I3
X, I, F, persona que realiz el conteo; 1, 2, 3, rplica analizada; P, E, conteo colocando la muestra con
capilar y por encima del cubreobjetos; * Diferencias significativas
Las pruebas de alimentacin permitieron comprobar que un intervalo de una hora, era
suficiente para incorporar el nmero de clulas necesario para el mantenimiento de los
ostiones. Este perodo aseguraba la obtencin de heces bien conformadas y no de
pseudoheces, las cuales son difciles de colectar, y podran dificultar, y a la vez
enmascarar, los resultados relacionados con las respuestas fisiolgicas. Se observ
que, con una concentracin mayor de 25,000 cel/L, los organismos producan
pseudoheces, identificables por el color verdoso y la escasa consistencia. Se concluy
que la concentracin recomendada por Castrejn et al. (1994), de 10,000 cel/L, era
adecuada para los organismos.
191
Anexos
Lavado de material.
Manejo de desechos.
El agua utilizada en los ensayos fue desechada de la siguiente manera. En las pruebas
de letalidad, en las cuales se utilizaron las concentraciones ms altas de metales, se
.
utiliz sulfato ferroso amoniacal (Fe(NH4)2(SO4)2 6H2O, para reducir al cromo de Cr+6 a
Cr+3 (Metcalf y Eddy, 1991; Pawlisz et al., 1997) y para precipitar el cadmio (Kemmer y
McCallion, 1989), se utiliz bicarbonato de sodio (NaHCO3). En ambos se aplic una
proporcin de 1 g por cada 10 L de agua. Se decant el sobrenadante a drenaje con
dilucin y el precipitado se dispuso a travs del Manejo de Desechos Txicos de la
UAMI. En las pruebas de subletalidad, el agua residual fue desechada por el drenaje
previa dilucin 1:5 por lo menos, ya que las concentraciones utilizadas se encuentran
en el lmite, o son inferiores, a las permitidas en la legislacin para desechos de tipo
192
Anexos
Anexos
60
(mg/L)
50
40
30
20
10
0
0
10
20
30
40
50
60
Esperado
Cr
Cd
Concentracin en agua
Por otro lado, adems de la precipitacin del Cd, la salinidad del agua gener una
interferencia de matriz, dando lugar a lecturas negativas en controles. En el Mtodo
para determinacin de substancias qumicas en ambientes marinos y estuarinos
EPA/600/R-97-072 SEP 97 (Creed y Martin, 1997), indican que la absorbancia
194
Anexos
Cromo (mg/L)
Cadmio (mg/L)
0.00
0.00
0.05 0.04
5.00
3.52 0.82
5.75 0.06
10.00
8.26 3.06
13.05 3.41
20.00
21.48 2.28
18.85 3.86
30.00
23.69 9.89*
30.50 13.60
40.00
25.2 1.09
26.75 11.22*
50.00
35.2 1.70
16.13 6.00*
Anexos
Anexos
(mg/L)
(mg/L)
0.25
0.25
0.2
0.2
0.15
0.15
0.1
0.1
0.05
0
0
0.1
0.2
esperado
Prueba I
Prueba II
Prom.
0.05
(mg/L
)
0.3
(mg/L
0
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
esperado
Prueba I
Prueba II
Prom.
Cadmio
Cromo
Figura. A.5. Metales en el agua (mg/L) de los acuarios de los dos bioensayos
para pruebas bioqumicas.
Promedio (mg/L)
Control
0.000
0.019
0.022
0.021 0.02
Cr1
0.100
0.097
0.078
0.088 0.012
Cr2
0.200
0.166
0.122
0.144 0.028
Control
0.000
0.046
0.057
0.052 0.005
Cd1
0.100
0.106
0.114
0.110 0.028
Cd2
0.200
0.191
0.232
0.211 0.053
(mg/L)
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
Control
esperado
Concentracin 1
(mgCd/L)
Concentracin 2
(mgCr/L)
197
Anexos
La precipitacin de los metales fue mnima (Fig. A.7). El Anlisis Exploratorio indic que
las
determinaciones
fueron
confiables. Algunas
lecturas de Cd
presentaron
(mg/L)
(mg/L)
0.25
0.25
0.2
0.2
0.15
0.15
0.1
0.1
0.05
0.05
0.05
Cr inicial
0.1
0.15
Cr final
0.2
0.25
(mg/L)
esperado
0.05
Cd inicial
0.1
0.15
Cd final
0.2
0.25
(mg/L)
esperado
Inicial (mg/L)
Final (mg/L)
Promedio (mg/L)
Control
0.000
0.018 0.018
0.019 0.006
0.018 0.006
Cr1
0.100
0.092 0.035
0.068 0.026
0.080 0.031
Cr2
0.200
0.207 0.036
0.156 0.042
0.180 0.039
Control
0.000
0.040 0.020
0.008 0.019
0.024 0.019
Cd1
0.100
0.089 0.056
0.117 0.043
0.095 0.050
Cd2
0.200
0.171 0.066
0.136 0.042
0.170 0.054
198
Anexos
Fase de mantenimiento.
La mayor parte de los datos de parmetros fisicoqumicos registrados durante las fases
de mantenimiento, fueron normales y aditivos (tabla A.4), sin
embargo, en pocas
PH
Oxgeno disuelto
Salinidad
Ts
g.l.
ts
g.l.
ts
g.l.
Montaje del sistema de alimentacin
21
22 -4.79* 27
-4.93*
-5.15*
Bioensayo letal para Cadmio
14
1.69
3 -4.60* 24
-4.35*
Bioensayo letal para Cromo
20
20 -5.23* 20
-2.53*
-5.23*
Bioensayo subletal, pruebas Fisiolgicas
17
17 -5.70* 17
-3.34*
-2.75*
Bioensayo subletal, pruebas Bioqumicas
23
23 -4.36* 23
-4.36*
-6.86*
Evaluacin de la normalidad (Kolmogorov-Smirnov)
Fase
PH
Oxgeno disuelto
Temperatura
ts
-6.4*
-8.19*
-4.69*
-6.29*
-3.86*
Salinidad
Dmax
N
Dmax
n Dmax
Montaje del sistema de alimentacin
0.168
22
0.174
23 0.086
Bioensayo letal para Cadmio
15
0.245
4 0.188
0.420*
Bioensayo letal para Cromo
0.163
21
0.158
21 0.178
Bioensayo subletal, pruebas Fisiolgicas
0.301
18
0.144
18 0.172
Bioensayo subletal, pruebas Bioqumicas
0.141
24
0.203
24 0.180
Evaluacin de homocedasticidad (Bartlett)
n
28
25
21
18
24
g.l.
26
28
20
17
23
Temperatura
Dmax
0.177
0.226
0.171
0.261
0.208
n
27
29
21
18
24
PH
Oxgeno disuelto
Salinidad
Temperatura
Turbidez
2obtenida
171.68*
115.58*
255.00*
213.46*
135.20*
2(0.05, 4)
11.14
11.14
11.14
11.14
9.44
Salinidad
Temperatura
Turbidez
Oxgeno disuelto
Fs
0.117
-0.001
-0.016
-0.005
0.03
* No se ajusta a la hiptesis; Dmax, Desviacin Mxima; g.l., grados del libertad; n, Nmero de datos
Anexos
ts por fase
Previo a la prueba letal para
Cadmio
Previo a la prueba letal para Cromo
Previo a la prueba subletal
fisiolgica
Previo a la prueba subletal
bioqumica
Peso total
-7.56*
112
147
-5.94*
-14.1*
-3.24*
-3.03*
-5.72*
-5.33*
-4.59*
-4.71*
132
-8.00*
-4.64*
-5.25*
-7.41*
Longitud
Ancho
Alto
Peso total
Ancho
Alto
Peso total
23.51*
10.99*
2.05
11.29*
Alto
Peso total
Ancho
Fs
0.0727
-0.0430
-0.0007
-0.0770
* No se ajusta a la hiptesis; Dmax, Desviacin Mxima; g.l., grados del libertad; n, Nmero de datos.
El parmetro menos controlado, desde el punto de vista de la seleccin fue el alto, por
este motivo solo este present normalidad y similitud entre las varianzas de esta
caracterstica en todas las fases. Lgicamente se requiri de un anlisis no paramtrico
de la morfometra.
Fase letal.
200
Anexos
Ts
PH
Oxgeno disuelto
Salinidad
Temperatura
-13.41*
-13.86*
-14.08*
-7.76*
-8.45*
-6.33*
-10.56*
-11.73*
PH
Oxgeno disuelto
Salinidad
Temperatura
0.2033*
0.2857*
0.3266*
0.1838*
0.1926*
0.6077*
0.2859*
0.5178*
Oxgeno disuelto
Salinidad
Temperatura
Turbidez
1.2770
0.9186
0.9946
8.9347
25.636*
3.6685
1.3960
1.5358
25.600*
Oxgeno disuelto
Salinidad
Fs para Cadmio
-0.0005
0.0029
0.00048
Fs para Cromo
-0.0001
-0.00641
0.00625
* No se ajusta a la hiptesis; g.l., grados del libertad; n, Nmero de datos
Temperatura
Turbidez
-0.01887
-0.00171
-0.9999
-
201
Anexos
Tabla A.7. AED de los datos morfomtricos obtenidos al final de la fase letal.
Evaluacin de la independencia (Test de ciclos)
Longitud
Ts
Ancho
Alto
Peso total
-4.31*
-5.51*
-6.11*
-1.30
-3.71*
-5.21*
-1.30i y 2.81*f
-1.90
Evaluacin de la normalidad (Kolmogorov-Smirnov)
Longitud
Ancho
Alto
Peso total
0.068
0.093
0.074
0.102
0.104i y 0.131f
0.088
0.159
0.098
Evaluacin de homocedasticidad (Bartlett)
Peso hmedo
Peso seco
-4.01*
-3.41*
-3.71*
-5.51*
Peso hmedo
Peso seco
0.114
0.125
0.126
0.111
Longitud
Ancho
Alto
Peso total
Peso hmedo
Peso seco
4.128
9.001
4.009
7.393
7.953
9.135
4.001
2.732
6.704
4.470i y 8.799f
7.733
4.599
Peso hmedo
Peso seco
Ancho
Alto
Peso total
Fs para Cadmio
-0.220
0.535
-0.312
0.962
0.023
Fs para Cromo
4.036*
-0.014 -0.0115 0.186i y 0.671f
-0.007
* No se ajusta a la hiptesis; g.l., grados del libertad; n, Nmero de datos; i, inicial; f, final.
0.007
-0.004
Ts
Cadmio
Cromo
-5.113*
-4.99*
Evaluacin de la normalidad (Kolmogorov-Smirnov)
-7.358*
-6.44*
Desviacin mxima
Agua (n=31)
Ostin (n=32)
Cadmio
Cromo
0.165
0.195
Evaluacin de homocedasticidad (Bartlett)
0.157
0.139
Cadmio
Cromo
18.19*
5.94
2.86
4.033
Cromo
Fs para agua
-0.998
Fs para ostin
-1.0
* No se ajusta a la hiptesis; g.l., grados del libertad; n, Nmero de datos.
-0.999
-1.0
heterocedsticos
por
algunas
fluctuaciones.
Los
datos
fueron
independientes para los controles, por lo que se usaron pruebas paramtricas para el
202
Anexos
Ts
t
2
P
D max
P
Fs
Bioensayo I
-2.35* en Cd1
2.23
14.90*
<0.01
0.15
0.15
-0.000002
Bioensayo II
-2.72* en Cr1 -2.36* en Cr2
2.18
14.88*
<0.01
0.15
0.10
-0.0001
* No se ajusta a la hiptesis.
El oxgeno disuelto, tuvo datos aditivos y normales durante los bioensayos. Los datos
de concentracin de oxgeno disuelto en los acuarios con organismos no expuestos
fueron independientes; aunque se present dependencia en acuarios con organismos
expuestos a Cd1 y Cr1 en el primer ensayo y a cromo en el segundo. Se present
heterocedasticidad en los acuarios con organismos expuestos a cromo (tabla A.10).
Tabla A.10. AED de los datos de oxgeno disuelto en las pruebas bioqumicas.
Prueba
Independencia
Test de ciclos
Homocedasticidad
Prueba de Bartlett
Normalidad
Kolmogorov-Smirnov
Aditividad Tuckey
ts
t
2
P
D max
P
Fs
Bioensayo I
-2.35* en Cd1 -2.35* en Cr1
2.23
42.80*
<0.01
0.14
0.20
-0.0001
Bioensayo II
-2.72* en Cr1 -2.36* en Cr2
2.18
10.54*
0.03
0.10
0.20
-0.0001
* No se ajusta a la hiptesis.
203
Anexos
ts
t
2
P
D max
P
Fs
Bioensayo 1
-2.35* en T y Cd 3.91* en Cr
2.23
1.57
0.91
0.24*
<0.01
-0.0119
Bioensayo 2
-3.39* en Cd -3.07* en Cr
2.16
9.57*
0.05
0.28*
<0.01
0.00007
* No se ajusta a la hiptesis.
ts
t
2
P
D max
P
Fs
Bioensayo I
-2.34* en Cd1
2.23
31.23*
<0.01
0.17
0.10
-0.0002
Bioensayo II
-2.72* en Cr2
2.16
31.69*
<0.01
0.14
0.15
-0.0054
* No se ajusta a la hiptesis.
El anlisis exploratorio del amonio total, indic que las poblaciones de datos fueron
normales, homocedsticas, aditivas e independientes, con una excepcin en Cr1 del
segundo bioensayo, que se consider de poca importancia, se aplicaron pruebas
paramtricas (tabla A.13).
Los datos morfomtricos no fueron independientes. Esto era de esperarse dado que se
seleccionaron los organismos ms homogneos posibles (tabla A.14). Sin embargo, los
datos fueron normales, homocedsticos y aditivos, de un comportamiento muy regular.
No se determin peso seco ms que en muestras puntuales, debido a que los
organismos fueron separados en secciones para realizar los anlisis bioqumicos, sin
embargo, se obtuvo el peso seco de los tejidos procedentes de los organismos en los
204
Anexos
ts
t
2
P
D max
P
Fs
Bioensayo I
ts<2.57
2.57
8.14
0.09
0.0326
Bioensayo II
-2.36* en Cr1
2.31
7.47
0.11
0.0326
-0.002
0.002
* No se ajusta a la hiptesis.
Aditividad Tuckey
ts
t=2.00
2
P
Dmax
P
Fs
T
-3.1*
Bioensayo I
Cd1 Cd2
Cr1 Cr2
T
-0.9 -3.7* -3.1* -5.5* -5.4*
Bioensayo II
Cd1 Cd2 Cr1 Cr2
-3.0* -2.5* -4.9* -3.6*
Long
0.44
0.93
Ancho
2.17
0.54
Alto
11.40
<0.01
PT
0.23
0.97
PH
0.81
0.85
0.088
>0.20
-1.0
0.092
0.20
-1.0
0.095
<0.15
-1.0
0.047
>0.20
-1.0
0.067*
>0.20
-0.974
* No se ajusta a la hiptesis; Long, Longitud; PT, Peso Total; PH, Peso Hmedo.
205
Anexos
Independencia
ts
Test de ciclos
t
Homocedasticidad
2
Prueba de Bartlett
P
Normalidad
Dmax 0.29
>0.20
KolmogorovP
Smirnov
Aditividad Tuckey
Fs
Bioensayo I
Cd1
Cd2
Cr1
-2.66 -2.66 -1.33
2.77
2.77
2.77
3.13
0.53
0.19
>0.20
0.24
>0.20
0.36
<0.15
Cr2
-1.33
2.77
T
0
2.77
0.30
>0.20
0.28
>0.20
Bioensayo II
Cd1 Cd2
Cr1
-1.33 -1.33
0
2.77 2.77 2.77
9.47* por Cr alto
0.05
0.17
>0.20
0.27
>0.20
0.35
<0.15
Cr2
-2.14
3.18
0.27
>0.20
-1.0
* No se ajusta a la hiptesis.
Msculo abductor
Prueba
Independencia
Test de ciclos
Homocedasticidad
Prueba de Bartlett
Normalidad
KolmogorovSmirnov
Aditividad Tuckey
T
-2.66
2.77
ts
t
2
p
D max 0.28
>0.20
p
Bioensayo I
Cd1
Cd2
Cr1
0
-1.33 -2.66
2.77
2.77
2.77
16.12* por Cd1
<0.01
0.39
<0.10
Fs
0.14
>0.20
0.28
>0.20
Cr2
-1.33
2.77
T
1.07
2.77
0.15
>0.20
0.22
>0.20
Bioensayo II
Cd1 Cd2
Cr1
0
-2.66
0
2.77 2.77 2.77
2.04
0.73
0.16
>0.20
0.21
>0.20
0.14
>0.20
Cr2
0.53
3.18
0.22
>0.20
-1.0
* No se ajusta a la hiptesis.
Glndula digestiva
Prueba
Independencia
Test de ciclos
Homocedasticidad
Prueba de Bartlett
Normalidad
KolmogorovSmirnov
Aditividad Tuckey
T
-2.66
2.77
ts
t
2
p
D max 0.14
>0.20
p
Fs
Bioensayo I
Cd1
Cd2
Cr1
-2.66 -1.33 -2.66
2.77
2.77
2.77
3.71
0.44
0.21
>0.20
0.22
>0.20
0.23
>0.23
Cr2
0
2.77
T
-2.66
2.77
0.16
>0.20
0.28
>0.20
Bioensayo II
Cd1 Cd2
Cr1
-2.66 -1.33 -2.66
2.77 2.77 2.77
26.9* por Cd1
<0.01
0.32
<0.20
0.27
>0.20
0.30
>0.20
Cr2
0
2.77
0.18
>0.20
-1.0
* No se ajusta a la hiptesis.
Bioensayo I
Bioensayo II
T
Cd1 Cd2 Cr1
Cr2
T
Cd1 Cd2
Cr1
Cr2
-2.76 -1.10 -1.10 -0.55 -2.76 -2.39 -1.09 -2.39 -4.35 -3.05
2.26* 2.26 2.26 2.26 2.26* 2.14* 2.14 2.14* 2.14* 2.14*
61.46
0.01*
0.18
>0.20
0.15
>0.20
0.16
>0.20
0.27
<0.20
0.23
>0.20
0.26
>0.20
0.23
>0.20
-1.0
* No se ajusta a la hiptesis.
206
Anexos
Ts
N
Oxgeno disuelto
Salinidad
-24.35*
-25.84*
-39.41*
1012
1016
705
Evaluacin de la normalidad (Kolmogorov-Smirnov)
pH
Oxgeno disuelto
Salinidad
Temperatura
-40.69*
896
Temperatura
Desviacin mxima
0.069*
0.093*
0.174*
Evaluacin de homocedasticidad (Bartlett)
pH
Oxgeno disuelto
Salinidad
Temperatura
2obtenida (5 g.l.)
85.06*
40.22*
129.72*
32.35*
0.252*
Oxgeno disuelto
Salinidad
Fs
-0.00006
0.003
-0.0001
*No se ajusta a la hiptesis; g.l., grados del libertad; n, Nmero de datos
Temperatura
-0.0551
Anexos
dia 3 y el dia 10. Sin embargo, solo los valores de las cmaras sin organismos fueron
independientes (ts = 1.54, del test de ciclos por encima y debajo de la mediana). Las
poblaciones tuvieron heterogeneidad de varianzas, nicamente los valores de cmaras
con organismos expuestos a Cd2 fueron homocedsticos (tabla A.18). A pesar la
aditividad y la normalidad de los datos, que se present en todas las condiciones
experimentales, se consider adecuado aplicar estadstica no paramtrica.
Ts
T
D max
P
2obt
P
3
-8.60*
2.01
0.22*
< 0.01
49.18*
< 0.01
Fs
* No se ajusta a la hiptesis.
Cd2
-4.10*
2.04
0.11
>0.2
0.05
0.97
208
Anexos
-1.45
60
Ts
n
Desviacin
mxima
(p>0.2)
0.099
2obtenida
1.26
Inicial
Ancho
Alto
Peso total
Longitud Ancho
Alto
Final
Peso total
Peso hmedo
Peso seco
-3.94*
60
-4.56*
60
0.054
0.085
2.11
5.88
-1.0
-1.0
-0.52 -1.76
-2.87*
-2.69* -1.76 -1.45 -3.32*
60
60
42
60
60
60
60
Evaluacin de la normalidad (Kolmogorov-Smirnov)
0.0678 0.087
0.135
0.088 0.09 0.06
0.109
2
3
1.55
(5 g.l.)
ts
N
Desviacin mxima
P
2obtenida (2 g.l.)
Cd final
Cd Ostin
Cr inicial
-5.76*
-4.52*
-6.88*
-7.57*
36
18
24
36
Evaluacin de la normalidad (Kolmogorov-Smirnov)
0.214
0.157
0.189
0.175
<0.1
>0.2
>0.2
>0.2
Evaluacin de homocedasticidad (Bartlett)
12.62
2.67
23.43
27.15
Cr final
Cr Ostin
-5.95*
36
-69.37*
24
0.191
<0.15
0.195
>0.2
24.40
11.23
Anexos
Ts
T
5
-6.60*
2
D max
P
0.101
<0.15
2obt
P
3.49
0.48
Fs
* No se ajusta a la hiptesis.
Cd2
-3.61*
2.09
0.200
>0.2
1.04
0.99
Ts
T
5
-6.12*
2
D max
P
0.211*
<0.05
2obt
P
8.92
0.06
Fs
* No se ajusta a la hiptesis.
Los
datos
de
excrecin
Cd2
-2.53*
2.08
0.260
<0.1
2.87
0.09
nitrogenada
fueron
aditivos,
pero
no
presentaron
210
Anexos
Ts
T
5
-1.18
2.18
D max
P
0.25
<0.2
2obt
P
5.05
0.28
Cd1
-3.33*
2.09
Cd2
-1.22
2.12
0.21
>0.2
0.25
>0.2
2.69
0.26
5.04
0.28
Fs
* No se ajusta a la hiptesis.
Los conteos iniciales de clulas en las cmaras sin organismos fueron independientes
al inicio, pero dejaron de serlo al aumentar proporcionalmente el nmero de clulas en
las cmaras, las cuales no fueron consumidas y como resultado hubo un incremento
neto de clulas en cada cmara. La depositacin sin embargo, fue constante por lo cual
fue independiente. Los datos fueron normales, homocedsticos y aditivos entre las
diferentes cmaras colocadas. Por estos motivos se aplic estadstica paramtrica. La
falta de homogeneidad de varianzas en los diferentes das en que se evalu la
depositacin, tambin pudo asociarse al creciente nmero de clulas dentro de las
cmaras (tabla A.24).
Tabla A.24. AED de las clulas colocadas como alimento en cmaras sin
organismos en las pruebas fisiolgicas.
Evaluacin de la independencia (Test de ciclos)
Conteo inicial
ts
n
Dmx (p>0.2)
2obtenida
(5 y 3 g.l.)
Da 3
Depositacin
Da 1
Da 2
Da 4
Da 1
Da 3
Da 4
0.39
6
-0.77
1.54
-0.77
-0.77
-3.09*
-3.09*
6
6
6
6
6
6
Evaluacin de la normalidad (Kolmogorov-Smirnov)
0.16
0.098
Evaluacin de homocedasticidad (Bartlett)
Entre cmaras
Entre das
Entre cmaras
-1.93
6
3.78
11.56*
0.58
<0.01
Evaluacin de aditividad (Tuckey)
Fs
-3.75
* No se ajusta a la hiptesis; n Nmero de datos
P
Da 2
4.07
0.54
Entre das
10.13*
0.02
-0.32
211
Anexos
16
7
-4.12*
34
17
8
-4.94*
34
0.11
>0.20
0.26*
<0.01
1.69
60.4*
ts
n
D max (p>0.2)
2obtenida (4 g.l.)
16
7
-1.89
34
17
8
-4.73*
34
0.12
0.14
4.34
2.14
212
Anexos
T
-12.5*
1.97
Cd2
-9.16*
1.98
SO
-1.45
2.05
ts
t
Da
D max
P > 0.05
2
9
3
7
4
12
Da
2
obt
2
5
3
5
4
5
17
20
18
18
19
28*
<0.01
20
82*
<0.01
17
12*
0.01
18
1
19
25*
0.01
20
11*
0.01
5
10
6
7
15
2
16
6
0.257
El radio O:N, indic que los das 3 y 5 los datos fueron independientes, y que los das
10, 14 y 19, manifestaron ya tendencias definidas. As mismo, los organismos
expuestos a cadmio mostraron un comportamiento independiente. Es decir, las
tendencias presentes fueron ms obvias en los organismos expuestos a cromo y en los
controles. El radio O:N en los organismos control tuvo un comportamiento normal, igual
en Cd1, pero los valores en otras concentraciones, as como en varios de los das
evaluados (3 y 14), tuvieron comportamientos no normales. Esto, aunado a la falta de
homocedasticidad, orient hacia un anlisis no paramtrico. Por otro lado, a diferencia
de todos los datos analizados previamente, el comportamiento fue no aditivo (Fs = 2.15). Se asume que el comportamiento es resultado de la exposicin a los metales y
quiz la influencia de algn parmetro con control pobre, todo lo cual se analiz en la
seccin correspondiente, no hubo interaccin posible entre los organismos, dado que
estaban en cmaras individuales, (tabla A.28).
213
Anexos
ts
t
3
-0.90
2.08
5
-0.49
2.20
Dmax
P
0.34*
<0.01
0.34
<0.10.
2obt
P
7.99*
0.05
2.95
0.40
Fs
* No se ajusta a la hiptesis.
Cd2
-1.36
2.16
0.37*
>0.05
20.29*
<0.01
2obtenida (4 g.l.)
* No se ajusta a la hiptesis.
Cd2
0.19
>0.20
6.13*
Las tasas altas de filtracin, ya separadas de las tasas previamente descritas, fueron
independientes, homocedsticas, aditivas y normales (tabla A.30).
Las tasas bajas de filtracin conformaron poblaciones de datos aditivas, los organismos
expuestos a cadmio tuvieron datos independientes, las poblaciones fueron normales,
excepto en los organismos expuestos a Cd1, y nicamente los controles fueron
homocedsticos. A pesar de los casos en que no se cumplieron las hiptesis, se
consider que los datos podan ser analizados por pruebas paramtricas, apoyndose
en el comportamiento de los controles (tabla A.31).
214
Anexos
Cd2
ND
Fs
* No se ajusta a la hiptesis.
Cd2
-0.33
2.07
0.197
(>0.20)
6.13*
ts
t
T
-4.03*
2.00
D max
P
0.076
>0.20
2obt
P
12.65
0.08
Fs
* No se ajusta a la hiptesis.
Cd2
-2.23*
2.03
0.19
<0.15
3.92
0.14
215
Anexos
Cr1
-0.95
2.36
0.231
>0.20
Cr2
-1.24
2.2
0.243
>0.20
6.68*
0.03
3.97
0.14
Cd1
Cd2
T
-1.56 -2.35* -1.91
2.22
2.6
2.22
0.327 0.273 0.181
<0.15 >0.20 >0.20
-1.0
0.68
0.41
Cr1
-1.93
2.57
0.219
>0.20
Cr2
-1.91
2.36
0.134
>0.20
Cd1
-2.43
2.44
0.203
>0.20
T
Cr1
-0.53 -1.11
3.18
2.26
0.313 0.201
>0.20 >0.20
-1.001
Cr2
-2.66
2.77
0.229
>0.20
Ts, estadstico del Test de ciclos; D Estadstico de la prueba de Kolmogorov-Smirnov; Fs, estadstico de la prueba de Tuckey; 2obt
estadstico de la prueba de Bartlett.
Fase letal.
En esta fase (tabla A.34) indicaron lo siguiente: el pH tuvo valores promedio de, 8.35,
con fluctuaciones mximas alrededor de 0.5 y 0.6. Estos valores se consideraron
adecuados para el ostin. El registro mnimo de oxgeno disuelto promedio fue 3.01
mg/L en el bioensayo con Cd. La salinidad, en promedio de 21.9 , tuvo pocas
fluctuaciones, alrededor de 0.8 a 1.2 . La temperatura promedio fue 24.4 C, pero
se presentaron desviaciones alrededor de 1.1 C y 1.6 C. El amonio total fue inferior a
0.1 mg/L promedio. La turbidez, fue generalmente menor a 1 UT.
216
Anexos
8.37 0.05
4.80 0.32
21.4 0.5
24.6 0.9
0.08 0.07
Cd
8.34 0.21
3.97 1.07
22.5 0.5
24.3 0.7
0.06 0.04
Temperatura
32
30
(C)
28
26
24
Min-Max
Min-Max
25 % - 75 %
25%-75%
22
0 1 2 3 4 5 6 7
Mediana
Median
value
DIAS
Anexos
Turbidez
Oxgeno Disuelto
16
9.5
14
8.0
12
10
(UT)
(mg/L)
6.5
5.0
8
6
4
3.5
2.0
0
DIA
Min-Max
Min-Max
25%-75%
25 % - 75 %
Median
value
Mediana
2
0
-2
0
DIA
Si bien el amonio total, se mantuvo por debajo de 0.1 mg/L, en las cmaras control, los
valores se incrementaron en cmaras con organismos expuestos a los metales, a pesar
de los recambios diarios de agua, haca el final de ambos bioensayos llegando a
superar los 0.1 mg/L, particularmente en el agua de los organismos expuestos a 25.2
mgCr/L (Fig. A.10). A pesar de ello, los incrementos se consideraron dentro de los
lmites aceptables.
218
Anexos
Bioensayo letal con Cd
(mg/L)
0.14
0.4
0.35
0.3
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0.12
0.10
0.08
0.06
0.04
0.02
168h
0h
30.5 mg/L
18.9 mg/L
13.1 mg/L
5.7 mg/L
0.00
0 mg/L
35.2 mg/L
0h
25.2 mg/L
21.5 mg/L
8.3 mg/L
3.5 mg/L
0 mg/L
168 h
Figura. A.10. Concentracin del amonio total (mg N-AT/L) en agua a las 0, 96 y 168
h de exposicin al Cr y Cd en la fase letal.
Los valores de pH, oxgeno disuelto y amonio total de las dos pruebas realizadas se
presentan en la tabla A.35.
219
Anexos
Oxgeno
disuelto (mg/L)
Ensayo.I
Max
Ensayo.II
Max
Promedio
Control
8.31 0.10
4.75 0.015
0.13 0.01
0.22
0.14 0.01
0.088 mgCr/L
8.18 0.26
4.78 0.29
0.11 0.01
0.17
0.12 0.01
0.144 mgCr/L
8.23 0.22
4.78 0.30
0.07 0.01
0.15
0.10 0.01
0.110 mgCd/L
8.40 0.13
4.76 0.12
0.18 0.01
0.14
0.13 0.01
0.212 mgCd/L
8.37 0.22
4.81 0.18
0.10 0.06
0.16
0.11 0.01
Promedio
8.30 0.21
4.77 0.23
0.12 0.02
0.13 0.01
0.12 0.01
El pH, fue homogneo. Los valores se consideraron iguales entre los dos bioensayos (P
= 0.15 por t de student). La concentracin promedio de oxgeno disuelto fue 4.77 mg/L,
considerando ambos bioensayos. Los valores mnimos fueron 4.16 mg/L y 4.12 mg/L,
en el primer y el segundo ensayo, respectivamente. Los valores de los acuarios con
ostiones control y expuestos fueron iguales, en ambos bioensayos. Las rplicas de los
dispositivos experimentales fueron semejantes (P > 0.05).
La concentracin de amonio total fue semejante en ambas pruebas, pero con
frecuencia rebas el valor de 0.1 mg/L. Los valores se mantuvieron altos a pesar de
haber llevado a cabo cada 24 h los recambios de la cuarta parte del volumen del agua
de los acuarios. Los valores mximos llegaron a 0.29 mg/L, lo que implica que pudieron
llegar a rebasarse 20 g/L de amoniaco en acuarios con organismos expuestos a Cd
durante el primer bioensayo y en controles en el segundo. Las desviaciones estndar
demostraron poca variacin. Las concentraciones fueron similares en acuarios con
organismos control y expuestos, no variaron en el tiempo y fueron iguales entre las
rplicas (P > 0.05).
La turbidez tuvo valores muy bajos en ambos ensayos, casi siempre de cero.
220
Anexos
Control
23.1 0.4
24.5 0.4
25.1 0.3
0.088 mgCr/L
23.4 0.5
25.4 1.5*
24.6 0.4
0.144 mgCr/L
23.3 0.3
24.6 0.9*
25.2 1.3***
0.110 mgCd/L
23.2 0.3
24.8 0.4*
24.7 0.8*
0.212 mgCd/L
23.1 0.4
24.2 0.4
24.7 0.7*
* Diferencias entre das evaluados; ** Diferencias entre controles y expuestos; *** diferencias entre
rplicas (P < 0.04 por ANOVA).
Durante el primer bioensayo, las rplicas, as como los valores de acuarios con
organismos control y expuestos fueron semejantes, sin embargo, la salinidad tuvo un
incremento el tercer da, con una posterior recuperacin. En el segundo bioensayo, se
apreciaron diferencias en los acuarios con organismos control (P < 0.01 por ANOVA)
(Fig. A.11).
Los datos de salinidad indicaron ausencia de independencia (previamente examinada
en el Anexo 7.3 de anlisis exploratorio de datos), lo cual manifiesta alguna influencia
externa sobre este parmetro, posiblemente atribuible al comportamiento de la
temperatura.
221
Anexos
Segundo bioensayo.
Primer bioensayo.
24.8
25.5
24.4
25
24.0
24.5
23.6
24
23.2
(%o)
23.5
23
22.5
22.8
22.4
D4
D5
Control
CR1
CR2
0.088 mgCr/L
0.144 mgCr/L
CD1
CD2
0.110 mgCd/L
0.144 mgCr/L
D3
0.088 mgCr/L
D2
0.210 mgCd/L
D1
0.110 mgCd/L
21.5
Control
22.0
22
DE
EE
Promedio
0.211 mgCd/L
222
Anexos
Segundo bioensayo.
Primer bioensayo.
(C)
(C)
27
27
26
26
25
25
24
24
23
23
22
22
(Da)
(Da)
21
D1
21
D1
T
Control
CD1
0.110 mgCd/L
D2
D3
CR1
0.088 mgCr/L
CD2
0.211 mgCd/L
D4
D5
CR2
0.144 mgCr/L
Control
0.110 mgCd/L
0.211 mgCd/L
26.8
27.5
26.4
27.0
26.0
26.5
25.6
26.0
25.2
25.5
24.8
(C)
25.0
24.4
Control
0.210 mgCd/L
0.144 mgCr/L
0.110 mgCd/L
0.088 mgCr/L
0.144 mgCr/L
23.5
0.088 mgCr/L
23.6
24.0
0.210 mgCd/L
24.0
24.5
0.110 mgCd/L
(C)
D2
D3
D4
D5
T
CR1
CR2
CD1 0.088 mgCr/LCD2 0.144 mgCr/L
Control
28
DE
EE
Promedio
223
Anexos
Tabla A.37. Temperaturas (C) de las pruebas bioqumicas, una vez eliminados los
datos de los acuarios con valores anmalos (promedio DE).
Control
0.088 mgCr/L
0.144 mgCr/L
0.110 mgCd/L
0.212 mgCd/L
Bioensayo I
24.6 0.4
24.4 0.3
24.3 0.4
24.8 0.4
24.2 0.4
Min
23.9
24.2
23.9
23.9
23.9
Max
25.1
24.7
24.5
25.2
24.7
Bioensayo II
25.1 0.3
24.6 0.4
24.6 0.8
24.5 0.7
24.8 0.6
Min
24.3
23.8
23.1
23.1
23.7
Max
25.4
25.2
25.8
25.7
26.2
General
24.9 0.4
24.5 0.4
24.4 0.6
24.7 0.5
24.6 0.5
224
Anexos
225
Anexos
Anexos
227
Anexos
concluyndose que los dispositivos eran suficientes y con informacin confiable para
interpretar las respuestas a nivel bioqumico.
Durante los bioensayos de efectos subletales para la evaluacin de respuestas
fisiolgicas, se detectaron variaciones en la salinidad, as como bajas concentraciones
de oxgeno disuelto en algunas cmaras. No pudo descartarse la posibilidad de que
hubiera un efecto sinergtico entre la salinidad y otros parmetros, ya que tambin se
observaron valores elevados de amonio total. Estos cambios se presentaron los
primeros das del bioensayo nicamente, pero debieron considerarse en la evaluacin
de los efectos fisiolgicos, a pesar de que, posteriormente, se encontraron dentro de un
intervalo aceptable.
228
Anexos
229