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MED 261L Bioqumica Mdica

2016-2017

Versin Original: Martha C. Ypez


1era Edicin (2008): Martha C. Ypez, Manuel E. Baldeon.
2da Edicin (2010): Martha C, Ypez, Sara Cifuentes.
3ra Edicin (2011), 4ta Edicin (2013), 5ta Edicin (2015): Martha C. Ypez
6ta Edicin (2016): Martha C. Ypez
7ma Edicin (2017): Martha C. Yepez

Ypez, Martha

MED 261L Bioqumica Mdica


2016-2017

Ypez, Martha

Universidad San Francisco de Quito


Colegio de Ciencias de la Salud
Misin de la USFQ
La USFQ forma, educa, investiga y sirve a la comunidad dentro de la filosofa de las Artes Liberales,
integrando a todos los sectores de la sociedad.
Visin de la USFQ
La USFQ ser una universidad modelo de educacin en Artes Liberales, emprendimiento,
desarrollo cientfico, tecnolgico y cultural para Amrica latina, reconocida por la calidad y
liderazgo de sus graduados.
Las Artes Liberales
Una filosofa educativa en la que todas las disciplinas del saber tienen igual importancia y que
busca formar individuos libres, conscientes de su entorno, emprendedores, seguros de s mismos,
creativos y sin condicionamientos.
Misin del Colegio
El Colegio de Ciencias de la Salud tiene como misin preparar a profesionales en las diferentes
ramas de la salud con una educacin formal en las Humanidades y Artes Liberales asociada a la
excelencia en formacin acadmica en Medicina, Veterinaria, Optometra y Odontologa, con el
objeto de entregar a la sociedad profesionales completos, ntegros y dotados de pensamiento
crtico, moldeados por un grupo selecto de profesores de cuarto nivel y superior calidad y calidez
humanas.
BIOQUMICA MDICA LABORATORIO (MED 0261L)
Semestre: 201620 Segundo Semestre 2016-2017
Docente: Martha Ypez, B.S., MSc.
Aula: HDLV-Laboratorio de Docencia
Horario:
Lunes Grupo 1 (3522)
14h30 15h50;
Martes Grupo 2 (3523)
14h00 15h20;
Mircoles Grupo 3 (3524)
14h30 15h50;
Jueves Grupo 4 (3525)
14h00 15h20;
Lunes Grupo 5 (4168)
13h00 - 14h20;
Miercoles Grupo 6 (4169)
13h00 - 14h20;
Martes Grupo 7 (4170)
15h30 - 16h50;
Jueves Grupo 8 (4171)
15h30 - 16h50
Crditos: MED261L 1
Requisitos: QUI 122; QUI 215 o MED 0123; MED 0217
Horas de oficina: previa con profesor. Oficina: HDLV 155 (Hospital de los Valles)
Correo Electrnico: myepez@usfq.edu.ec

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INTRODUCCIN: Indicaciones generales


La clase de Bioqumica Mdica, explica los procesos bioqumicos del metabolismo de
los nutrientes a nivel celular y sistmico en el ser humano. Explicando detalladamente
la clasificacin, estructura, funcin, sntesis y degradacin de macro y micromolculas
como grasa, carbohidratos, protenas, minerales, vitaminas y agua.
El curso de Bioqumica Medica laboratorio, contiene una parte de prctica
experimental donde se aborda la temtica presentada en la clase terica, se introduce
al alumno en el trabajo del Laboratorio como una ayuda diagnstica, teraputica,
como tambin de pronstico o ayuda predictiva en pacientes determinados.
La clase se desarrolla en un ambiente cordial, de respeto a la individualidad de cada
persona, manteniendo un apropiado nivel de comunicacin entre alumnos y entre
alumno y docente.

OBJETIVOS GLOBALES DEL CURSO


Promover la obtencin de los elementos que favorezcan la comprensin de los
mecanismos en situaciones de salud y en los procesos patolgicos.
Facilitar la adquisicin de destrezas y habilidades en los procesos de investigacin y
desarrollo.
Introducir al alumno en el trabajo de Laboratorio como una ayuda diagnstica.

OBJETIVOS ESPECIFICOS DEL CURSO


De conocimiento
1. Obtener los conocimientos bsicos para comprender los mecanismos bioqumicos
en los procesos de salud y enfermedad.
De Destrezas
1. Estimular a los estudiantes a investigar con profundidad los temas a tratar.
De Actitudes
1 Evaluar la formacin de estudiantes con capacidad de autoformacin promoviendo
la pasin por aprender.
2 Desarrollar habilidades de comunicacin, pensamiento crtico, y de resolucin de
problemas.

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RESULTADOS DE APRENDIZAJE DE LA CARRERA A LOS QUE CONSTRIBUYE EL CURSO


Anlisis y Diagnstico: Realizar el anlisis y diagnstico para brindar una atencin
centrada en el paciente, de calidad y de calidez, para la promocin de su salud,
prevencin de enfermedades y/o complicaciones de los eventos sanitarios
emergentes y relevantes a lo largo de los ciclos de vida del ser humano, con un
enfoque familiar y comunitario.
Aplicacin de ciencias bsicas de la carrera: Aplicar en diferentes escenarios de
atencin, la integracin del conocimiento mejor fundamentado y del conocimiento
en continuo desarrollo de las ciencias biomdicas, clnicas y psicosociales para la
resolucin de problemas y cuidado de la salud del paciente, su familia y
comunidad.
Utilizacin de Herramientas especializadas: Desarrollar las destrezas y habilidades
para manejar recursos fsicos, financieros, equipo mdico, electrnicos e
informticos como herramientas e instrumentos para el anlisis, diagnstico,
formulacin de propuestas, monitoreo y evaluacin y comunicacin efectiva que
respondan al desarrollo de la prctica profesional.
RESULTADOS DE APRENDIZAJE ESPECFICOS DEL CURSO
Nro

Resultado de Aprendizaje

Nivel

Explicar el funcionamiento de equipos y reactivos para


determinaciones bioqumicas mediante su utilizacin en las
diferentes prcticas de laboratorio.

Inicial

Relacionar los mecanismos bioqumicos de los procesos de salud


con la enfermedad, aplicando las tcnicas bioqumicas de
diagnstico en diferentes escenarios.

Medio

Demostrar destrezas en la prctica de la Bioqumica Mdica


examinando el manejo de los equipos, los protocolos de
diagnstico y el proceso de generacin de informes cientficos.

Medio

Desarrollar habilidades de investigacin examinando los


diferentes usos de las tcnicas estudiadas.

Medio

Maximizar el autoaprendizaje mediante la resolucin de


problemas planteados con anticipacin a cada uno de los
laboratorios.

Medio

Demostrar un trabajo grupal responsable construyendo actitudes


positivas que mejoren el desempeo del equipo de trabajo.

Medio

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INTRODUCCION
En medicina los descubrimientos en las ciencias bsicas como fisiologa, inmunologa,
microbiologa, bioqumica permiten ahora una mejor comprensin de los procesos
fisiolgicos y tambin de los patolgicos. Estos importantes avances nos permiten
prevenir enfermedades y tratarlas de manera racional en caso de ocurrencia. Por tanto,
los estudiantes en las ciencias mdicas deben saber que para comprender los fenmenos
patolgicos y del funcionamiento normal de los organismos vivos, se requiere de un
conocimiento profundo de las ciencias bsicas.
La bioqumica la ciencia que estudia las molculas en los organismos vivos y sus
reacciones qumicas- est en el centro de desarrollo de las ciencias bsicas. As, podemos
indicar que la bioqumica est encargada de describir y explicar en trminos moleculares
todos los procesos biolgicos de los organismos vivos. Los nuevos avances en el campo
mdico se fundamentan en la mejor comprensin de los procesos bioqumicos del
organismo.
Los pases en vas de desarrollo se encuentran experimentando cambios en el perfil
epidemiolgico de las enfermedades ms prevalentes. Hace menos de dos dcadas la
incidencia y prevalencia de enfermedades por infecciones y desnutricin constituan los
problemas de salud ms frecuentes en nuestro pas. Sin embargo, en los ltimos aos,
adems de los problemas infecciosos y de desnutricin nuestros pases estn
experimentando una alta incidencia de enfermedades asociadas con el exceso de peso.
As, las principales causas de morbilidad y mortalidad en el Ecuador y el mundo estn
asociadas con problemas de malnutricin. Como ejemplo podemos indicar que los
problemas cardiovasculares, la diabetes tipo 2, el cncer, las infecciones son primeras
causas de enfermedad y de muerte. Es importante anotar por tanto que la malnutricin
por dficit (desnutricin) as como por exceso (obesidad) son causa de las patologas ms
comunes. Los estudiantes de las ciencias mdicas deben estudiar e investigar sobre estos
problemas de salud a nivel comunitario, clnico individual, y bsico celular y molecular.
La clase MED261, Bioqumica Medica, estudia los procesos bioqumicos del metabolismo
de los nutrientes del ser humano a nivel celular y sistmico. Con este propsito se estudia
la clasificacin, estructura, funcin, sntesis, degradacin, de las molculas de grasa,
carbohidratos, protenas, minerales, vitaminas y agua. Adems se estudian los
mecanismos de control de estos fenmenos bioqumicos (bioqumica de las hormonas,
neurotransmisores). Otros aspectos de la bioqumica como biologa molecular, biologa
celular y transduccin de seales se estudian en la clase BTC340, Biologa Molecular.
Uno de los objetivos ms importantes de esta clase es ser ejemplo de la actividad
acadmica rigurosa. La clase est diseada para estimular a los estudiantes a investigar los
temas que se vern en clase con mayor profundidad. Con el trabajo en la clase los
estudiantes desarrollaran habilidades de comunicacin, pensamiento crtico, y de

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resolucin de problemas. Esta clase pretende adems ayudar a los estudiantes a distinguir
entre educacin y entrenamiento, y dar valor a ambos. El xito del curso se medir en la
motivacin y en la formacin de estudiantes crticos, con capacidad de auto formacin en
los que siempre exista la pasin por aprender.
En concordancia con los aspectos referidos anteriormente, este curso procura que el
estudiante obtenga los elementos bsicos para favorecer la comprensin de los
mecanismos ntimos de procesos patolgicos y situaciones de salud, centrando la
educacin en el estudiante, facilitando la adquisicin de habilidades y destrezas de
aprendizaje.
METODOLOGA
Las actividades de la clase de laboratorio MED261L son obligatorias y estn diseadas para
desarrollar en los estudiantes hbitos que les faciliten su auto formacin. Estas actividades
incluyen:
1
Clase de laboratorio, en la que se expondrn y discutirn los conceptos bsicos
tratados en las clases tericas de Bioqumica MED261. El estudiante debe llegar a la
Prctica leyendo anticipadamente los temas a tratarse durante clase.
2
Prcticas de laboratorio, en las que experimentalmente se abordarn los temas
presentados en las clases tericas. Estas prcticas permiten a los estudiantes utilizar el
mtodo cientfico en la realizacin de los procesos de experimentacin, en la obtencin de
resultados y en la discusin e interpretacin de los mismos. Por otro lado las prcticas de
laboratorio introducirn al estudiante en el trabajo del laboratorio clnico como ayuda
diagnstica.
3
Resolucin de cuestionarios guas y consultas relacionados con las clases
magistrales y las prcticas de laboratorio. En lo posible se discutir la literatura ms
reciente sobre el tema a tratarse (reporte de investigaciones originales o artculos de
revisin). En la clase MED261L se seguir estrictamente el Cdigo de Honor de la USFQ.
Por lo tanto, los estudiantes debern honrar dicho Cdigo durante las clases, prcticas de
laboratorio, deberes y exmenes. La asistencia es obligatoria, en caso de falta se deber
justificar en forma escrita. La falta no justificada se registrara como inasistencia que
penalizara la nota semanal (evaluacin, informe) y por tanto la nota final.
4
La evaluacin constituye parte del aprendizaje, por tanto ser uno de los pilares
fundamentales durante cada clase, la evaluacin ser constante tanto formal como
informal, caracterizndose esta ltima por un apoyo constante con retroalimentacin
continua entre los alumnos y el docente.
En las clases MED261 y MED261L se seguir estrictamente el Cdigo de Honor de la USFQ.
Por lo tanto, los estudiantes debern honrar dicho Cdigo en las clases, deberes,
laboratorios y exmenes. La asistencia es obligatoria, en caso de falta se deber justificar
en forma escrita. La falta no justificada se penalizar quitando puntos al examen final.

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TEXTO REQUERIDO
Manual de Laboratorio. Bioqumica Mdica. 2016-2017. Versin 2.
BIBLIOGRAFA PRINCIPAL:

Stryer, L. Bioqumica con Aplicaciones Clnicas. 7ma ed. W. Freeman and Company,
2012; Text Book of Biochemistry with clinical correlations 5th edition by Thomas M.
Devlin, 2002 ISBN: 0-471-41136-1 (www.wiley.com/devlin); Medical Biochemistry
Course (http://web.indstate.edu/thcme/mwking/home.html)
Nelson, David et al. Lehninger. Principios de Bioqumica. 6ta ed. Freeman and
Company, 2013. ISBN: 978-84-282-1603-6
Murray RK, et al. Harper. Bioqumica Ilustrada 28va ed., Murray RK, et al., Manual
Moderno, 2010. ISBN: 9781615023097

BIBLIOGRAFA COMPLEMENTARIA:

Cursos CRASH. Lo esencial del Metabolismo. 4ta ed, 2013. ISBN: 978-84-9022-416-8
Ypez, R. Bonilla, A. Cuadernos Didcticos de Bioqumica. SECIAN 2013-2014

Adems se cuenta con el recurso electrnico:


King, Michael W. (ND) The Medical Biochemestry Page. Disponible en Internet
desde: http://themedicalbiochemistrypage.org/

El Cdigo de Honor
El "CODIGO DE HONOR" como miembro de la USFQ, compromete a cada uno de los
docentes y estudiantes a cumplirlo de manera estricta, cualquier infraccin al mismo
por parte de un miembro de la comunidad ser sancionada por la autoridad
correspondiente, los estudiantes tendrn derecho a que se analice y defienda su caso
en la Corte de Honor.
El Cdigo de Honor
Yo como miembro de la USFQ me comprometo a:
1. Conducirme de tal manera que no debilite en ninguna forma las oportunidades de
realizacin personal y profesional de otras personas dentro de la Comunidad
Universitaria. Entre otras acciones, evitar la calumnia, la mentira, la codicia, la
envidia, y promover la bondad, el reconocimiento, la felicidad, la amistad, la
solidaridad y la verdad.
2. Ser honesto: no copiar, plagiar, mentir, ni robar en ninguna forma. Firmar todo
trabajo acadmico como constancia de cumplimiento del Cdigo de Honor, de que

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no he recibido ayuda ni he copiado de fuentes no permitidas. Mantener en reserva


pruebas, exmenes y toda informacin confidencial, sin divulgarla.
3. Respetar a todos los miembros de la comunidad universitaria y cuidar todo el
campus, su infraestructura y equipamiento.
4. No difamar
5. Denunciar al Decanato de Estudiantes toda accin de irrespeto al Cdigo de Honor
por parte de cualquier miembro. Cooperar con la Corte de Honor para aclarar
cualquier investigacin y violacin de este Cdigo.
Cualquier infraccin a este cdigo por parte de un miembro de la comunidad USFQ
ser sancionada por la autoridad correspondiente. Los estudiantes tendrn derecho a
que se analice y defienda su caso en la Corte de Honor.
CONTENIDO DEL CURSO
El curso est dividido en Prcticas con los siguientes temas a tratarse:
PRACTICA 1:
Introduccin al Mtodo Cientfico,
Diagnstico por el Laboratorio,
Tcnicas de laboratorio
GRUPOS 1, 2, 3, 4: 16 - 19 ENERO
GRUPOS 5, 6, 7, 8: 23 - 26 ENERO
PRACTICA 4:
Determinacin de Glucosa. Cintica
enzimtica

PRACTICA 2:
Obtencin y manejo de muestras
biolgicas

GRUPOS 1, 2, 3, 4: 06 09 MARZO
GRUPOS 5, 6, 7, 8: 13 16 MARZO
PRACTICA 7:
Determinacin Transaminasas
SGOT / SGPT

GRUPOS 1, 2, 3, 4: 20 23 MARZO
GRUPOS 5, 6, 7, 8: 27 30 MARZO
EVALUACIONES FINALES :
Prctica FINAL

GRUPOS 1, 2, 3, 4: 03 06 ABRIL
GRUPOS 5, 6, 7, 8: 17 20 ABRIL
EVALUACIONES FINALES :
Terica FINAL

GRUPOS TODOS: 24 - 27 ABRIL

SABADO 06 MAY0

GRUPOS 1, 2, 3, 4: 24 - 27 ABRIL
GRUPOS 5, 6, 7, 8: 17 20 ABRIL

GRUPOS 1, 2, 3, 4: 30 ENE 02 FEB


GRUPOS 5, 6, 7, 8: 06 09 FEBRERO
PRACTICA 5:
Determinacin de Lpidos

PRACTICA 3:
Determinacin de Hemoglobina,
manejo de medidas de tendencia
central y de desviacin
GRUPOS 1, 2, 3, 4: 12 - 16 FEBRERO
GRUPOS 5, 6, 7, 8: 20 - 23 FEBRERO
PRACTICA 6:
Determinacin de Protenas /
Albumina / PCR

Fechas de exmenes y pruebas parciales de las prcticas de laboratorio


Previo a cada Prctica de laboratorio se evaluara a travs de la plataforma D2L, sobre el
tema a tratarse en la prctica y/o sobre la consulta enviada como deber en la prctica
anterior en caso de que lo hubiera. La evaluacin final se realizar la ltima semana de
clase e incluye la materia comprendida durante el semestre.
Importante: Los estudiantes debern tomar en cuenta en su esquema de estudio regular
que las fechas de pruebas y exmenes no pueden cambiarse.

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PRECAUCIONES EN EL LABORATORIO
Los anlisis de laboratorio son una ayuda indispensable en la prctica clnica. El
conocimiento sobre recoleccin de muestras, su anlisis e interpretacin de resultados
permitirn a los estudiantes apreciar los beneficios y limitaciones de los datos del
laboratorio. Enfatizamos que el laboratorio es una ayuda diagnostica que debe analizarse
en el contexto de la sintomatologa clnica.
En general el trabajo en el laboratorio no representa riesgos para la salud de las personas,
siempre y cuando se siguen las normas de trabajo para evitar accidentes. Existen
condiciones individuales como embarazo, enfermedades pulmonares, enfermedades
hepticas crnicas, estados de inmunosupresin, que pueden hacernos vulnerables
cuando trabajamos en el laboratorio y debemos tomarlas en cuenta antes de iniciar
nuestro trabajo. Si algn estudiante sospechara que tiene riesgo de trabajar en el
laboratorio debe informar inmediatamente de su condicin a la persona responsable del
laboratorio. Debido a que en el trabajo de laboratorio se utilizan sustancias qumicas y
agentes infecciosos, es necesario conocer cmo manejarlos. El contacto de piel y mucosas
con reactivos de laboratorio y con fluidos orgnicos debe en general ser evitada. Muchos
compuestos son voltiles, aumentando as la posibilidad de exposicin. Para utilizar en la
mejor forma las prcticas de laboratorio en el aprendizaje de los temas de la clase de
Bioqumica y disminuir al mximo los posibles riesgos se han establecido
recomendaciones y normas de trabajo que se detallan a continuacin.

NORMAS GENERALES PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO DE BIOQUIMICA


1. Concurrir al laboratorio conociendo la gua de trabajo prctico pertinente y sus
fundamentos tericos. Observar si se presentan recomendaciones particulares para
considerar durante el desarrollo del trabajo prctico.
2. Utilizar mandil.
3. Utilizar guantes de ltex cada vez que se utilicen fluidos orgnicos (muestras de
sangre, suero u orina). Al finalizar la prctica, higienizarse con agua y jabn e
hipoclorito al 0.1%, desechar los guantes y lavarse las manos.
4. No utilizar pipetas con la boca para medir sustancias en el laboratorio.
5. No colocar sus pertenencias (ropa, libros, etc.) sobre las mesas de trabajo.
6. Mantener el lugar de trabajo limpio, ordenado y seco.
7. Seguir estrictamente las indicaciones del docente y de la gua de trabajo prctico al
realizar el trabajo.
8. Trabajar con calma en su sitio, evitando movimientos bruscos.
9. Comunicar al docente cualquier anomala o accidente que surja durante la prctica.
10. No retirar de la mesa los frascos de reactivos sin previa autorizacin.
11. Mantener los envases de reactivos tapados. Esta precaucin es fundamental para
sustancias inflamables, giroscpicas y carbonatables.
12. Utilizar una pipeta para cada reactivo y para cada muestra, as evitamos
contaminaciones.

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13. Durante el trabajo de laboratorio evitar llevarse las manos a la boca y/o a los ojos.
14. Al terminar la prctica, desechar el material utilizado segn indique el docente.
15. Cuando se utilicen solventes inflamables verificar que no haya mecheros encendidos.
16. Identificar las salidas de la clase y del edificio. En caso de evacuacin salir caminando,
sin correr y seguir estrictamente las indicaciones de la persona responsable del
laboratorio.
17. Ubicar los extinguidores de fuego y aprender a utilizarlos.
18. Ubicar las duchas para lavarse los ojos y mucosas y saber cmo utilizarlos.
19. No consumir alimentos de ningn tipo durante la prctica de laboratorio.

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INFORME MODELO

UNIVERSIDAD SAN FRANCISCO DE QUITO


Laboratorio de Bioqumica Mdica
Nombre del Estudiante:
Fecha de Entrega del Informe:
Los Informes, Deberes y Consultas se recibirn nicamente en la pgina de D2L
correspondiente a la clase de Bioqumica Medica Laboratorio, en la cual se indica la hora
y fecha de entrega, se calificaran sobre 100 (10 puntos), se dar una segunda
oportunidad de entrega como fecha mxima sobre 80 (8puntos) tomando en cuenta los
siguientes criterios:
1. TEMA: Ttulo de la prctica
2. OBJETIVOS (10 puntos): Indicar los objetivos propios que el estudiante que se
obtendrn con la realizacin de la prctica.
3. INTRODUCCION (20 puntos): Describir en forma breve el tema tratado en la
prctica, debe incluirse referencias bibliogrficas actualizadas.
4. RESULTADOS (20 puntos): Los resultados obtenidos en la prctica deben ser
reportados en tablas, incluyendo los clculos ye informacin estadstica y grficos
en caso de ser solicitado.
5. DISCUSIN (40 puntos): La discusin comprende el anlisis de los resultados
obtenidos en la prctica, relacionndolo con los valores de referencia, debe
respaldarse con bibliografa actualizada; valores de referencia 10 puntos.
6. BIBLIOGRAFA (10 puntos): La bibliografa utilizada debe de preferencia ser de
libros, libros electrnicos, artculos cientficos sujetos a edicin especializada. El
presente manual de la materia de Bioqumica Medica Laboratorio no debe ser
considerado como parte de la bibliografa
7. El documento del informe debe tener una extensin no mayor a cuatro pginas (no
manuscritas).
CONSULTAS (100 puntos). Se entrega cada semana en carpeta correspondiente, se tomara
en cuenta bibliografa reciente de investigaciones originales o artculos de revisin.

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PRCTICA No 1
1. Mtodo cientfico
Objetivos
Que el alumno pueda:
1. Realizar informes tericos basados en el Mtodo Cientfico
2. Realizar informes de laboratorio basados en el Mtodo Cientfico.
A que se llama mtodo cientfico? Cul es su estructura? Cmo y en qu circunstancias los
cientficos se valen de l? Son algunos de los interrogantes que desde la perspectiva
epistemolgica del positivismo lgico iremos respondiendo. Cabe plantearnos
primeramente, una distincin que consideramos bsica, a fin de evitar equvocos cuando
utilicemos la palabra mtodo. Esta palabra proviene de las palabras griegas met que
significa hacia y od cuyo significado es camino. Por lo tanto, podramos decir que el
mtodo es el camino que nos conduce hacia un fin. Sin embargo, el riesgo de una
traduccin literal como la indicada puede darnos una idea errnea de lo que es un mtodo
general y en especial de la ciencia, confundiendo un procedimiento general (que en
nuestro caso es el mtodo cientfico) con los procedimiento particulares que se suelen
seguir para resolver una situacin concreta.
Ejemplo: Imagina que te encuentres en una ciudad, en un determinado lugar, y que
quieres llegar a otro punto de ella, una cierta calle, y un determinado nmero de esa calle.
Un amigo te dice lo que has de hacer exactamente, por ejemplo, tomar el autobs nmero
tal en una determinada parada, bajar en tal sitio, andar tantas calles en tal direccin, etc.
Este es indudablemente un procedimiento concreto para un caso concreto, que slo vale
para ese caso. En cambio un procedimiento general sera el siguiente: adquiere un plano
de una ciudad, localiza en el plano el lugar donde te encuentras y el lugar donde quieres
llegar y traza el itinerario.
Con este ejemplo esperamos que se entienda que para explicar cientficamente un estado
de cosas del mundo fsico no hay un mtodo distinto, sino diferentes aplicaciones de un
mismo instrumento de razonamiento, el mtodo cientfico. As la cultura no puede
comprenderse sin hacer referencia al mtodo cientfico. La ciencia no es un sector de la
civilizacin que pueda separarse del resto de ella, sino un esfuerzo creativo con su propio
sistema de valores que, poco a poco ha llegado a formar parte de los valores generales en
la sociedad moderna.
El objetivo de la ciencia es hacer teoras. Las teoras cientficas explican los hechos y
predicen con alto grado de probabilidad la ocurrencia de hechos similares. La secuencia
del mtodo cientfico es observar, plantear problemas, hacer hiptesis, experimentar y
formular teoras. Cada uno de los procesos del mtodo cientfico tomado aisladamente,
forma parte de la actuacin cotidiana de todos los seres humanos, pero en su conjunto,

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utilizados sistemticamente, constituyen la ms poderosa herramienta que ha diseado la


humanidad para conocer y predecir a la naturaleza. A continuacin se resumen los
distintos procesos del mtodo cientfico.
Observacin
El mtodo cientfico se inicia con la observacin. Lo que no puede observarse, directa o
indirectamente por medio de instrumentos o de modificaciones de la conducta, no puede
ser investigado por la ciencia. La observacin debe ser repetida en forma independiente
por diversos observadores. Las observaciones nicas que no se repiten no pueden ser
objeto de estudio cientfico. La habilidad para observar los fenmenos se incrementa con
el estudio y ejercicio constantes.
Plantear problemas
Una consecuencia de la observacin repetida de un fenmeno (infeccin respiratoria en
Hong Kong) es el planteamiento del problema (inicio de epidemia), es decir, una vez hecha
la observacin, se hacen preguntas al respecto, cmo es que los hechos ocurren de este
modo? Qu determina el tiempo y el desarrollo? Plantear un problema es hacer
preguntas, pero deben ser buenas preguntas. Para que los problemas tengan valor
cientfico estos deben ser significativos y potencialmente tener respuestas comprobables
por tcnicas apropiadas. En la relacin mdico paciente diariamente se utiliza el mtodo
cientfico. Frente a un sntoma (observacin) se buscan hechos causales (planteamiento
del problema).
Hacer hiptesis
Una vez que el problema est debidamente planteado, el cientfico procede al tercer
tiempo del mtodo, la formulacin de hiptesis. Con la hiptesis el investigador plantea
posibles explicaciones a los problemas observados (La epidemia del SARS se inici en Hong
Kong por la transferencia del virus por medio de la va respiratoria). Un problema puede
tener varias explicaciones o hiptesis pero slo una es la verdadera. Esto se puede
comprobar con el cuarto paso del mtodo cientfico.
Experimentacin
El objetivo de la experimentacin es validar la hiptesis planteada. En general los
experimentos conducen a soluciones parciales. Esto lleva a que el trabajo experimental
pueda prolongarse por mucho tiempo, siendo este paso el ms arduo en el trabajo de
investigacin. Si bien cada experimento es nico, siempre el conocimiento y la experiencia
previos ayudan tcnicamente para decidir la forma en que una hiptesis puede
comprobarse experimentalmente.
Formular teoras
Cuando una hiptesis se sostiene con pruebas convincentes obtenidas en el laboratorio,
se puede proponer en base a estos resultados una teora que explique dicha hiptesis. La
teora es una afirmacin con lmites ms amplios que los experimentos en que se basa y
que expresa la probabilidad de que la hiptesis sea cierta y pueda aplicarse a

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observaciones similares. Por ejemplo, en relacin a la epidemia en Asia por SARS, la


investigacin sobre la epidemiologa y clnica de la enfermedad permiti que se pueda
identificar personas infectadas con el virus en otras latitudes como Canad, Brasil y otras
partes del mundo. Los experimentos y observaciones clnicas en Asia sirven entonces para
formular teoras de transmisin y presentacin clnica en general. Desde ese punto de
vista, una teora permite hacer predicciones, estas predicciones cientficas tienen siempre
un soporte experimental muy fuerte y aun cuando no afirman que un hecho ocurrir con
certidumbre, si plantean que existe una gran probabilidad de ocurrir. No obstante, otras
teoras han probado su validez universal convirtindose en leyes naturales que orientan la
investigacin cientfica.

2. Diagnostico por el laboratorio


Objetivos
Al trmino de la Prctica, el alumno estar en la capacidad de:
1. Identificar la utilidad del laboratorio clnico en la ayuda diagnostica y
pronostica individual y poblacional
2. Familiarizarse con los procedimientos de solicitud de exmenes en el
laboratorio clnico
De manera general, el laboratorio corresponde a un departamento intra o extra
hospitalario y/o universitario, que pertenece al campo de servicios auxiliares de
diagnstico, uniendo por medio de procedimientos experimentales a las ciencias bsicas
con las ciencias clnicas.
Como resultado de este proceso, el laboratorio ayuda a:
Confirmar una impresin diagnostica clnica
Descartar un diagnostico
Establecer un diagnostico
Controlar un tratamiento (como gua de teraputica)
Realizar exploracin selectiva o deteccin de una enfermedad individual o en la
poblacin.
El propsito por tanto, se relaciona con la atencin primaria, procesamiento biolgico, de
investigacin y de docencia, validacin y produccin de informacin.
La capacidad del laboratorio para satisfacer las necesidades del clnico se mide en funcin
de la calidad, que exige una mxima contribucin en lo que respecta al beneficio del
paciente y a la ayuda del mdico tratante, lo que debe llevarse a cabo con eficiencia y
eficacia. Aunque la exactitud y la precisin son requisitos previos a toda practica de
laboratorio, la prontitud en el informe de resultados es esencial.

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La obtencin de un resultado confiable se basa en los principios bsicos del laboratorio


clnico, que debe asegurar una recoleccin, manejo y procesamiento apropiado de las
muestras previo al anlisis, con una ptima manipulacin del equipo, uso de reactivos de
pureza especfica y control ambiental.
Existen tres fases de trabajo en el laboratorio:
a) Fase pre-instrumental: En la que se realiza la recepcin y clasificacin de las
solicitudes de examen, clasificacin de especmenes biolgicos, preparacin de
reactivos y material de trabajo.
El clnico comienza con la peticin de pruebas en un registro que debe contener
los datos demogrficos del paciente: nombre, sexo, edad, fecha de solicitud. Segn
el tipo de prueba que se solicita la recoleccin de muestras debe realizarse
etiquetando las mismas con los datos demogrficos del paciente. La vigilancia y la
transcripcin exactas de la solicitud de pruebas en el laboratorio deben ser
componentes indispensables del programa de control de calidad, para que los
resultados obtenidos sean precisos y oportunos. De acuerdo con la IUPAC (Unin
Internacional de Qumica Pura y Aplicada) y la IFCC (Federacin Internacional de
Qumica Clnica), los resultados de un examen de laboratorio deben contener la
siguiente informacin:
Nombre y apellido del paciente
Nombre del componente investigado: ej. Glucosa
Resultado (valor numrico) con su unidad de expresin. ej. 80 mg/dl
Rango de referencia del mtodo empleado: ej. 70-110 mg/dl
b) Fase instrumental: En la que se emplea determinada metodologa para la ejecucin
de una prueba, la que se debe incluir el fundamento qumico, los lineamientos
acerca del procedimiento, los datos tcnicos y los rangos de referencia.
De manera general los mtodos pueden ser cualitativos y cuantitativos. Los
mtodos cualitativos son aquellos que se describen mediante un producto, una
propiedad del compuesto investigado, sin generar un dato numrico absoluto, por
ejemplo, la investigacin de la presencia de glucosa en una muestra por
visualizacin del cambio de color en el producto final.
Los mtodos cuantitativos identifican numricamente un compuesto en una
mezcla de elementos como es el suero o el plasma, son mtodos exactos. Los
mtodos cuantitativos pueden ser de tres tipos:
Mtodos colorimtricos: Sn aquellos que miden la concentracin de un
compuesto, tomando como base la intensidad de color que desarrolla
Mtodos enzimticos: miden la concentracin de una sustancia, utilizando cambios
oxido reductivos en reacciones catalizadas por enzimas y coenzimas especficas,
como ejemplo el mtodo de la hexocinasa para determinacin de glucosa, mtodo
de uricasa para la determinacin de cido rico, etc.

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Mtodos volumtricos: en el cual concurren los dos anteriores. Se fundamentan en


el volumen total que se emplea en la determinacin, pudiendo ser macromtodo
(volumen total 2 ml), semimicromtodo (1-2 ml de volumen total), micromtodo
(0,1-1, ml como volumen total) y ultramicromtodo (volumen total 0,1 ml).

c) Fase post-instrumental: Los datos obtenidos en la Fase Instrumental son


procesados, traducindose en informacin legible que es enviado como resultado
al mdico o entidad solicitante o formaran parte de una base de datos para
archivo, estadstica o investigacin clnica.
La Sociedad Americana de Control de Calidad define la calidad como el conjunto de
tcnicas operativas y actividades necesarias para cumplir con los requisitos de calidad,
concierne al monitoreo diario de los procedimientos realizados en el laboratorio.
Para la realizacin de las diferentes pruebas solicitadas por el mdico clnico o el
especialista, existen diversos fluidos corporales que pueden ser utilizados como los son:
sangre total (venosa o arterial), suero o plasma, lquido cfalo raqudeo, orina, heces.
El correcto manejo de los datos y variables permite comprender mejor el significado de los
mismos, para lo que se utiliza las medidas estadsticas de tendencia central de la
distribucin y las medidas de dispersin.

3. Tcnicas de Laboratorio
Objetivos
Que el alumno pueda:
1. Identificar la presencia de soluciones en los sistemas biolgicos.
2. Relacionar soluciones qumicas con lquidos orgnicos.
3. Aprender la correcta utilizacin de micro pipetas
3.1.

Soluciones

Una solucin es una mezcla homognea de por lo menos dos componentes, una fase
dispersa que es el soluto y otra fase dispersante que es el solvente. Las soluciones ms
utilizadas en bioqumica son las que tienen agua como disolvente.
Las disoluciones constituyen las mezclas de dos o ms compuestos diferentes, con un
aspecto homogneo, en las disoluciones se debe distinguir el soluto, que es el
componente que se encuentra en menor proporcin, y el disolvente, que se encuentra en
mayor cantidad.

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Segn la concentracin de las soluciones podemos decir que estas pueden ser
hipotnicas, isotnicas, e hipertnicas. Tambin podemos clasificar las soluciones en
porcentuales, molares, normales, molales, osmolares, e isotnicas.
Las soluciones isotnicas son las que ejercen la misma presin osmtica, es decir que
contienen la misma concentracin de partculas osmticamente activas. Por ejemplo, el
plasma sanguneo tiene una presin osmtica aproximada de 0.3 osmolar. Una solucin es
hipertnica con respecto a otra solucin cuando sta contiene una concentracin de
partculas ms alta. Por otro lado una solucin es hipotnica con respecto a otra cuando
sta contiene un nmero de partculas menor. El trmino isotnica en medicina es
sinnimo de isosmtico y solo se emplean en relacin a lquidos fisiolgicos.
Considere que el ClNa se disocia en solucin acuosa en los iones Na+ y Cl- por lo que la
concentracin inica se duplica. Adems tome en cuenta que la presin osmtica normal
del plasma es de 290-310 mosm/L. del plasma es de 290-310 mosm/L.
Soluciones porcentuales: en stas soluciones se indica la cantidad de soluto disuelto en
100 partes de solvente. En este tipo de soluciones debe especificarse si la relacin es P*/P,
P/V o V*/V. Las soluciones porcentuales ms utilizadas son P/V.
*P = peso; V = volumen
Soluciones molares: son las que llevan disuelto en la unidad de volumen 1 litro (L) y a la
temperatura de referencia (20 C) 1 mol del soluto. Un mol es igual al peso atmico o
molecular en gramos. Expresado de otro modo equivale a la concentracin de 1 mol o
mltiplo o fraccin por litro de solucin.
Soluciones normales: son las que llevan disuelto en la unidad de volumen 1 L y a la
temperatura de referencia 1 eq del soluto. Un equivalente se obtiene dividiendo el peso
molecular por el nmero de valencias neutralizadas. Las soluciones normales son las ms
usadas en la tcnica analtica.
Soluciones molales: indican el nmero de moles en 1000 gr. de solvente.
Soluciones osmolares: una solucin osmolar es aquella que contiene un mol del soluto en
gramos en un litro de solucin. La presin osmtica depende del nmero de partculas no
de su carga, ni de su masa, la misma fuerza osmtica es ejercida por una sustancia grande,
como una protena, una molcula de glucosa o algn in de sodio o de cloruro. La presin
osmtica es proporcional a la molaridad (para sustancias no disociables) del soluto.
3.2. Normas para la utilizacin de micro pipetas (*)
Las micropipetas constituyen instrumentos indispensables para el trabajo dentro del
laboratorio de Bioqumica Medica, estn diseadas para medir volmenes en el rango de
los microlitros (l). Para su utilizacin se requieren de puntas desechables, minimizando el
riesgo de contaminacin.

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Las partes de la micropipeta son:

A. Botn pulsador
B. Botn expulsador de
puntas
C. Rueda de graduacin
de volumen
D. Cono de la pipeta
E. Palanca expulsadora
de puntas
F. Punta descartable
(adicional)

Fig. 1. Esquema micropipeta

Color punta
Blancas
Amarillas
Azules

Rango de volumen en l
0,5 10
10 100
100 -1000

Tabla 1. Relacin entre color de punta y volumen a medir

Fig. 2. Procedimiento de utilizacin de micropipeta

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El manejo de las micropipetas se realiza siguiendo las siguientes instrucciones:


1. Ajustar el volumen deseado girando la rueda de graduacin de volumen, para un
volumen mayor se gira en la direccin de las manecillas de reloj y si desea un
volumen menor en contra de la direccin de las manecillas de reloj.
2. Colocar la punta (plstica correspondiente) sin tocarla con las manos, presionando
sobre el dispensador.
3. Presionar el botn pulsador hasta el primer tope
4. Sumergir la punta de la micropipeta en la solucin (reactivo o muestra), subir el
botn pulsador lentamente para absorber la sustancia liquida, con cuidado de no
generar burbujas
5. Colocar toda la solucin en el recipiente correspondiente hasta el segundo tope
del botn pulsador, la forma correcta de dispensar el lquido es de forma vertical
6. Volver el botn pulsador a la posicin inicial
7. Expulsar la punta en el recipiente adecuado utilizando el botn expulsador de
puntas
Precauciones a tomar en cuenta para el correcto cuidado de las micropipetas
1. No ajustar el
2. volumen fuera (superior o inferior) del rango de las micropipetas
3. Las soluciones no deben entrar en contacto con el cono de la micropipeta
4. No regule volumen mientras la micropipeta se encuentra con soluciones en la
punta
5. No colocar la micropipeta de forma horizontal si la punta contiene soluciones
(*) Tomado de Manual de Biologa Molecular. USFQ

NOTA: Para la Practica N1, NO se requiere presentar informe, revisar el DEBER y/o
CONSULTA correspondiente a esta prctica en D2L

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PRCTICA No 2
OBTENCION Y MANEJO DE MUESTRAS BIOLOGICAS:
OBJETIVOS
Al trmino de la prctica, una vez cumplidas las experiencias de enseanza-aprendizaje, el
estudiante estar en la capacidad de:
Obtener por puncin venosa una muestra de sangre
Manipular de manera adecuada la muestra sangunea, para anlisis y conservacin
Establecer diferencias bsicas entre sangre total, plasma y suero
La sangre es un tejido que circula dentro de los vasos sanguneos, se encuentra formada
por elementos figurados y por el plasma, sus principales funciones estn relacionadas con
la respiracin, la nutricin, la excrecin, el mantenimiento acido-base, la regulacin de la
temperatura adicionalmente constituye un mecanismo de defensa del organismo y de
transporte de metabolitos.
Las condiciones metablicas de cada individuo varan de acuerdo a las condiciones
fisiolgicas y los estados patolgicos, entre los que se mencionan el estado de actividad y
reposo, la dieta, el estado anmico, la edad, entre otros.
Las determinaciones sanguneas pueden ser de rutina o de emergencia, para las primeras
se requiere que el individuo se encuentre en condiciones basales, es decir, en un periodo
de ayuno de 10 a 12 horas, con reposo fsico y mental, condiciones que no ocurren en
caso de requerir un resultado de emergencia.
Recoleccin de muestras
Sangre: La sangre constituye el lquido corporal ms frecuentemente utilizado con
finalidades analticas. Los procedimientos generales para su obtencin son:
1. puncin arterial
2. puncin cutnea y,
3. puncin venosa
La tcnica utilizada para la obtencin de muestras de sangre es fundamental para
mantener su integridad. Las sangres arterial y venosa se diferencian en algunos aspectos,
que deben ser tomados en cuenta. La sangre arterial, oxigenada por el pulmn y
bombeada por el corazn hacia todos los rganos y tejidos tiene una composicin
prcticamente uniforme en todo el organismo. Por el contrario, la sangre venosa vara
segn la actividad metablica del rgano o tejido perfundido, por lo que el punto en
donde se extrae la muestra puede influir en su composicin. La sangre venosa tiene
menos oxigeno que la arterial, tambin se diferencia por su pH, su concentracin de
dixido de carbono y su hematocrito. En ocasiones tambin se encuentran variaciones en

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los niveles de glucosa, cido lctico, cloro y amonio. La sangre cutnea, es una sangre
procedente de arteriolas, vnulas y capilares y, por lo tanto es en parte venosa y en parte
arterial, tambin contiene lquidos intersticial e intracelular.
La sangre arterial se utiliza para medir la tensin de oxgeno y de dixido de carbono y
para medir el pH, siendo la determinacin de gases en la sangre crticas para valorar
problemas de oxigenacin presente en algunas patologas.
La puncin cutnea constituye el mtodo de eleccin en pacientes peditricos,
especialmente lactante., siendo tambin til en adultos con obesidad extrema,
quemaduras graves o tendencia trombtica.
La sangre venosa, tiene relativa facilidad para su obtencin, constituyendo el principal
mtodo de obtencin sangunea en los laboratorios clnicos, otra ventaja es que la
mayora de las sustancias analizadas se encuentran presente en forma soluble o dispersa
de forma homognea.
Los lugares de obtencin de sangre venosa son: vena ceflica, vena mediana radial, vena
baslica, vena mediana cubital, vena mediana del antebrazo, dorso de la mano o del pie
(nios).
La venopuncin se realiza directamente con tubos de ensayo al vaco (vacountainer),
siendo la extraccin de sangre venosa econmica y eficaz, se dispone de tubos de diversos
tamaos (2, 5, 7, 10 y 15 ml). Las agujas desechables eliminan el riesgo de contaminacin
y transmisin de diversas patologas, es por ello que la persona que realiza la extraccin
debe practicarla utilizando las mayores medidas de seguridad. Los tapones de caucho
tienen un cdigo de colores que permite distinguir si el tubo tiene determinado
anticoagulante (heparina, oxalato, citrato) o si es un tubo simple.
Tcnica de puncin venosa
1. Verificar los datos en los recipientes si coinciden con los de la solicitud.
2. Identificar al paciente en concordancia con los datos registrados en la solicitud de
exmenes.
3. Si se solicita una muestra en ayunas debe comprobarse que efectivamente el
paciente no haya ingerido alimentos.
4. Informar al paciente el procedimiento al cual va a ser sometido, eliminando su posible
tensin.
5. El paciente debe estar colocado de forma adecuada para tener un acceso fcil y
cmodo a la fosa ante cubital.
6. Preparar el material, incluidos los tubos para recoleccin de muestras que deben
estar rotulados, el torniquete, objetos de limpieza de la piel, agujas, capsulas.
7. Solicitar al paciente que cierre el puo para que las venas resulten palpables.
8. Se selecciona la vena para la puncin, se prefieren las venas de la fosa ante cubital, en
particular la cubital interna y la ceflica. tambin pueden utilizarse las venas de la

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mueca, el tobillo y la mano. Si existiera un catter intravenoso en un brazo, se


utilizar el otro (as se evita variacin de resultados por los fluidos del suero).
9. Se limpia la zona de la venopuncin con una torunda de algodn embebida en
solucin de alcohol o yodo. Se comienza en el punto de la puncin y se contina
hacia fuera siguiendo un movimiento espiral, se deja que la zona se seque sin
contaminar con ningn objeto no esterilizado previamente.
10. Se aplica el torniquete varios centmetros por encima de la zona de puncin, sin dejar
el torniquete colocado por ms de 1 minuto.
11. Se fija firmemente la vena con la ayuda de los dedos pulgar y medio, o ndice y pulgar.
12. Se realiza la venopuncin: a) se penetra a travs de la piel con la aguja formando un
ngulo de 15 a 45 grados con el brazo y con el bisel hacia arriba, b) Se introduce la
aguja con suavidad pero con la suficiente rapidez para reducir las molestias al
paciente c) En cuanto la aguja haya penetrado en la vena, se dirigir el tubo al vaco
hacia delante con el dispositivo de sujecin (capsula) sostenindolo firmemente. Una
vez que el tubo se haya llenado, se lo retira cogindolo por su extremo y tirando
suavemente de l.
13. Cuando la sangre comience a fluir se suelta el torniquete.
14. Una vez que se haya obtenido toda la muestra se indica al paciente que relaje el puo.
15. Se coloca suavemente sobre el punto de puncin una torunda de algodn estril,
seco; se extrae la aguja y se ejerce presin sobre la zona.
16. Se coloca una tira de esparadrapo para detener la hemorragia.
17. Los tubos con anticoagulante se mezclan inmediatamente.
18. Se comprobara el estado del paciente, por ejemplo si ha sufrido mareo o si la
hemorragia ha cedido.
19. Se elimina el material contaminado en el recipiente destinado para el propsito:
agujas, jeringas, algodones, etc.
Procesamiento de las muestras
Se define como procesamiento de las muestras al periodo comprendido entre su
recoleccin y su anlisis real, lo que comprende de tres fases: precentrifugacin,
centrifugacin y poscentrifugacin.
La fase de precentrifugacin depende del tipo de muestra, debe realizarse dentro de la
primera hora de recoleccin, con excepcin de la determinacin de gases sanguneos y
amoniaco, que requieren de sangre completa. Generalmente para las determinaciones
bioqumicas se requiere de suero y ocasionalmente de plasma. El suero es la muestra de
eleccin ya que resulta fcil de obtener y procesar, no existe interferencia con
anticoagulantes.
Lo ideal es centrifugar la muestra tan pronto se ha completado la formacin del coagulo,
una vez centrifugado se procede a la separacin del suero en otro tubo estril y
debidamente rotulado con el cual se realizaran las determinaciones, en caso de no realizar
las determinaciones en un tiempo considerablemente corto, es necesario refrigerarlas o

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congelarlas ya que se produce contaminacin como crecimiento bacteriano y la actividad


enzimtica puede alterar drsticamente el valor de los componentes sanguneos.
Es preciso establecer criterios para el rechazo de las muestras, entre los que se pueden
anotar una identificacin incompleta de la muestra, un insuficiente volumen en la
recogida, utilizacin de tubos inapropiados para la realizacin del examen, hemlisis,
transporte inadecuado e interferencias.
Orina: Al recoger una muestra de orina para su estudio, debe darse al paciente las
indicaciones necesarias para hacerlo, la muestra de orina debe ser recogida en un
recipiente limpio, estril y examinarse dentro de las dos primeras horas de evacuacin. Si
el anlisis se retrasa la muestra puede ser refrigerada para su mejor conservacin. Para el
estudio qumico y microscpico basta una muestra recogida por miccin, es mejor una
muestra concentrada por ello se solicita la primera orina de la maana, para evitar
contaminacin con secreciones vaginales o uretrales se sugiere desechar el primer chorro,
recoger la segunda porcin y desechar el final.
ASEPSIA: Termino que proviene del griego a = sin; sepsis = putrefaccin, constituye la
esterilizacin de instrumentos y materiales por medio de calor para volverlos aspticos.
ANTISEPSIA: Es el conjunto de procedimientos y prcticas destinadas a destruir o impedir
la proliferacin de agentes patgenos, en especial se da por la accin de agentes qumicos
encargados de la desinfeccin.
Materiales y Mtodos
Agujas Vacountainer
Tubos Vacuntainer tapa roja y tapa lila
Algodn (torundas)
Alcohol
Torniquete
Gradilla
Marcador de tubos

NOTA: Para la Practica N2, NO se requiere presentar informe. Revisar el DEBER y/o
CONSULTA correspondiente a esta prctica en D2L.

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PRCTICA No 3
DETERMINACION DE HEMOGLOBINA
OBJETIVOS
Al trmino de la prctica, una vez cumplidas las experiencias de enseanza-aprendizaje, el
estudiante estar en la capacidad de:
Conocer la importancia de la hemoglobina en el transporte de oxgeno, y su
papel como una protena especializada
Relacionar el conocimiento terico sobre la hemoglobina con su determinacin
en el laboratorio y su uso en la prctica clnica.
Interpretar los valores de referencia de la hemoglobina
La principal funcin de los glbulos rojos (GR) de la sangre es la entrega de oxgeno a los
tejidos y la eliminacin de CO2 e H+ productos del metabolismo tisular. Los GR estn
formados por una membrana que contiene una solucin de hemoglobina (Hb). Para los
hombres el nmero normal de GR est entre 4.6-6.2 millones/mm de sangre y para la
mujeres de 4.2-5.4 millones/mm. En cuanto a las concentraciones de Hb, el valor normal
en hombres es 14-18 g/dL y de 12-16 g/dL para las mujeres. Los valores normales de
hematocrito (el volumen de los GR en plasma) son de 42 a 52% para hombres y de 37 a
47% para mujeres. La deficiencia en el tamao o en el nmero de GR o en la
concentracin de Hb se conoce como anemia. Esta condicin limita el intercambio de O 2 y
CO2 de los tejidos. Existen muchas causas de anemia pero la ms comn es la anemia por
deficiencia de hierro.
La hemoglobina es una hemoprotena formada por cuatro cadenas polipeptdicas [ (2):
(2)] que se encuentra en los glbulos rojos y cuya funcin es unirse al O 2 en los pulmones
y transportarlo a todo el organismo para que pueda ser usado en las vas metablicas
aerbicas. Cada cadena o de la Hb tiene un grupo prosttico hemo que se aloja en
una hendidura hidrofbica de la protena. Cada residuo hemo contiene un tomo de
hierro central coordinadamente unido y que normalmente est en su estado ferroso de
oxidacin, Fe2+. El O2 transportado en la Hb se une directamente al Fe2+ del hemo.
El hemo es sintetizado en la mayora de las clulas del organismo, sin embargo, los sitios
ms importantes para su formacin son los glbulos rojos y el hgado. En las clulas
eritrociticas todo el hemo que se sintetiza se incorpora a la Hb y su formacin solamente
ocurre una vez que las clulas se han diferenciados en glbulos rojos. En los reticulocitos,
glbulos rojos inmaduros, el hemo estimula la sntesis proteica. La sntesis del grupo
prosttico hemo de la hemoglobina se inicia en la mitocondria con la condensacin de una
glicina y la succinil-CoA por medio de la enzima sintasa del cido--levulnico (ALA sintasa)
para formar cido--levulnico, que se transporta al citoplasma en donde la enzima sintasa
de porfobilingeno forma dos molculas de ALA para formar el compuesto pirrlico cclico
porfobilingeno. Subsecuentemente 4 molculas de porfobilingeno se condensan para
formar un intermediario lineal llamado hidroximetilbilano que dar lugar a la formacin

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de uroporfiringeno III. El uroporfiringeno III es entonces descarboxilado dando lugar al


coproporfirinogeno III que es transportado al interior de la mitocondria en donde es
posteriormente transformado secuencialmente a protoporfirinogeno IX, protoporfirina IX
y hemoglobina. Esta ltima reaccin incluye la incorporacin de Fe por la enzima
ferroquetalasa.
Existen varios tipos de subunidades peptdicas (, , , ) que dan origen a varios tipos de
Hbs funcionales. Las diferencias en la secuencia de aminocidos de estas subunidades
confieren diferentes capacidades para el transporte de O 2 por la Hb. La estructura
cuaternaria de la Hb refleja las interacciones alostricas importantes entre las
subunidades de la Hb. La configuracin terciaria de baja afinidad, Hb desoxigenada se
denomina T (Taut). Al contrario, la estructura cuaternaria de alta afinidad, Hb oxigenada
se denomina R (Relaxed). La curva de unin del O 2 a la Hb es sigmoide, tpica de una
protena alostrica en la que el substrato (O 2) es un efector homotrpico positivo. La
forma alostrica de asociacin del O 2 a la Hb permite un eficiente transporte y
subsecuente liberacin de O2 desde los pulmones hacia los tejidos perifricos
metablicamente activos. Adems de esta funcin importante, la Hb transporta CO 2 desde
los tejidos perifricos hacia los pulmones. Los grupos amino terminales de la forma T de la
Hb pueden reaccionar con el CO2 y as, aproximadamente el 15% del CO 2 generado en los
tejidos es transportado a los pulmones unido covalentemente a los N-terminales en forma
de carbamato. En los pulmones, la presin alta de O 2 hace que la Hb adquiera la
conformacin R y con esto la reaccin reversa del carbamato para la eliminacin de CO 2
por medio de la expiracin. El CO 2 de los tejidos tambin es transportado a los pulmones
como gas disuelto y como bicarbonato que se forma espontneamente y por accin de la
enzima Anhidrasa Carbnica que convierte al CO 2 y al H2O en cido carbnico. El cido
carbnico se ioniza espontneamente en hidrgeno y en bicarbonato.
El 2,3-difosfoglicerato (2,3-DPG) que se deriva del 1,3 difosfoglicerato de la gliclisis, es un
efector alostrico de las propiedades de la Hb para unirse al O 2. En ausencia de 2,3-BPG la
Hb puede unirse ms fcilmente al O 2. La Hb fetal se une al 2,3-BPG con menos avidez que
la Hb del adulto (HbA) por lo que durante la vida fetal la Hb del feto se une al oxigeno con
mayor afinidad que la Hb de la madre. Facilitando la transferencia de O 2 desde la HbA de
la madre a la HbF del feto.
Una vez que los glbulos rojos (GR) han cumplido su ciclo normal de vida,
aproximadamente 120 das, estos son fagocitados por clulas del sistema retculo
endotelial (macrfagos). La Hb y el hemo de los GR entonces deben ser metabolizados, la
globina (porcin proteica) es reciclada o convertida en amino cidos que pueden ser
reutilizados o catabolizados, el hierro debe conservarse para la sntesis de nuevo hemo, y
el anillo de porfirina debe ser solubilizado para que pueda excretarse.
La enzima oxigenasa del hemo rompe la molcula produciendo el tetrapirrol lineal
biliverdina, Fe3+, y CO. La biliverdina es reducida entonces a bilirrubina (indirecta) que es
transportada hacia el hgado unida a la albmina. En el hgado la bilirrubina indirecta es
conjugada con dos equivalentes de cido glucornico para producir el derivado

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diglucornido de bilirrubina (directa) que es soluble en agua y puede ser excretado en la


bilis. Cualquier circunstancia que incremente los niveles de bilirrubina en la sangre
(hiperbilirrubinemia) produce ictericia (coloracin amarillenta de la piel). La destruccin
anormal GR como en la malaria o daos en los hepatocitos llevan al incremento de
bilirrubina. En el intestino, la bilirrubina excretada es metabolizada a urobilingeno,
urobilina, y estercobilina que dan la coloracin a las heces.
Fundamento
La concentracin de hemoglobina se determina utilizando una muestra de sangre total,
con anticoagulante EDTA. En la prctica se utiliza el Mtodo de la cianmetahemoglobina
(HiCN).
El mtodo est basado en la determinacin de cianmetahemoglobina o cianuro de
hemoglobina. Los derivados de la hemoglobina de la muestra son liberados de los
eritrocitos y son oxidados por el ferricianuro de potasio, formando as metahemoglobina.
Esta reacciona con el cianuro de potasio formando cianmetahemoglobina estable, cuya
absorbancia a 540 nm es directamente proporcional a la concentracin de hemoglobina
en la muestra.
Materiales y Mtodos
Tubos de ensayo
Pipeta automtica (20 l)
Pipeta 5 ml
Kit para determinacin de hemoglobina.
Espectrofotmetro
Material para extraccin de sangre (jeringas con agujas, algodn con alcohol, torniquete)
Tubos para recoleccin de sangre con EDTA.
Procedimiento
Pipetear en los tubos
Blanco
Problema
Sangre
------20l
Reactivo
5 ml
5 ml
Enjuagar la micropipeta varias veces con el reactivo de trabajo, mezclar bien y leer la
absorbancia despus de 5 min frente al blanco de reactivo.
Clculos
Concentracin de hemoglobina (Hb) = Factor x Absorbancia de la muestra
Resultados
Reportar los datos obtenidos en la clase, separndolos de acuerdo a gnero.
Calcular la media, la desviacin estndar y el coeficiente de variacin de las muestras de la
clase (hombres y mujeres)
Discusin
Discuta los datos obtenidos en la clase, comparndolos con valores de referencia.
Consultar los valores de referencia para recin nacidos, nios, adolescentes, adultos y
ancianos.
NOTA: Revisar la CONSULTA correspondiente a esta prctica en D2L

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PRCTICA No 4
DETERMINACION DE GLUCOSA SERICA. Cintica enzimtica.
OBJETIVOS
Al trmino de la prctica, una vez cumplidas las experiencias de enseanza-aprendizaje, el
estudiante estar en la capacidad de:
a) Relacionar el conocimiento terico sobre el metabolismo de carbohidratos con la
determinacin de glucosa en sangre en el laboratorio y su uso en la prctica clnica.
b) Verificar la concentracin de glucosa sangunea en condiciones de salud y en
procesos patolgicos.
c) Explicar el efecto de la concentracin de sustrato sobre la velocidad de la reaccin
enzimtica.
d) Conocer aspectos bsicos de la colorimetra.
El organismo utiliza los hidratos de carbono y las grasas como las fuentes ms importantes
de energa para mantener funciones bsicas como funcionamiento del cerebro,
temperatura corporal, respiracin, circulacin de la sangre, y aquella que nos permite
realizar el trabajo fsico de movernos. Alimentos ricos en carbohidratos son el trigo, arroz,
maz, frjol, arveja, garbanzo, papas, yuca, pltano, frutas. Un grupo importante de
carbohidratos en la dieta, los llamados polisacridos fibrosos que no tienen valor nutritivo
porque los seres humanos no podemos digerirlos, proporcionan la fibra diettica de las
comidas.
El metabolismo de los carbohidratos se inicia con la digestin intestinal de almidones y
glucgeno para convertirlos en azcares simples como mono y disacridos y que puedan
ser absorbidos por las clulas epiteliales del intestino delgado. Las enzimas encargadas de
la degradacin de los carbohidratos son la amilasa lingual, -amilasa, sucrasa, lactasa y
tetralasa. Luego de su absorcin, los azcares simples son entonces llevados por el
sistema portal del intestino al hgado en donde son almacenados en forma de glucgeno,
convertidos a cidos grasos o a aminocidos, o si no, son oxidados en las vas catablicas
celulares.
La oxidacin celular de la glucosa se denomina gluclisis, esta es la va ms importante de
degradacin. En condiciones aerbicas la glucosa es oxidada a piruvato mientras que en
condiciones anaerobias a lactato. En la primera etapa de la gluclisis aerbica se requiere
2 equivalentes de ATP para activar el proceso y un mol de glucosa se convierte en dos
moles de triosa fosfato. En una segunda etapa, los dos moles de triosa fosfato se
convierten en dos moles de piruvato con la generacin de cuatro moles de ATP y dos
NADH. As:
- Glucosa + 2 ADP + 2 NAD+ + 2 Pi -----> 2 Piruvato + 2 ATP + 2 NADH+ 2 H+

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Cada NADH ser subsecuentemente utilizado para la sntesis de ms ATP (3 moles) por
medio del fenmeno de fosforilacin oxidativa. Por otro lado, la oxidacin completa de
dos moles de piruvato en el ciclo de Krebs produce 22 moles de ATP. En resumen la
oxidacin completa de un mol de glucosa a CO 2 y H2O produce 36 a 38 moles de ATP.
En la va glucoltica existen tres reacciones irreversibles catalizadas por las enzimas
hexocinasa, fosfofructocinasa y la piruvatocinasa. El paso limitante de esta va es la
reaccin de la fosfofructocinasa. El control de esta enzima est dado por la presencia de
un intermediario que no es parte de la gluclisis o de la gluconeogenesis, la fructosa 2,6bisfosfato. La fructosa 2,6-bisfosfato activa la fosfofructocinasa facilitando la degradacin
de la glucosa a piruvato.
La otra va importante en el metabolismo de la glucosa es la va de la Pentosa fosfato. En
esta va se utilizan los seis carbonos de la glucosa para generar azucares de 5 carbonos
(ribosa) y equivalentes reductores como NADH+, NADPH+, FADH+. Las funciones ms
importantes de esta va son: 1. generar equivalentes reductores como NADPH+ para las
reacciones reductoras de biosntesis como la sntesis de cidos grasos. 2. proveer a la
clula de ribosa-5-fosfato para la sntesis de nucletidos y cidos nucleicos.
El mantenimiento de niveles constantes de la glucosa (5 mM) en la sangre es de capital
importancia para el normal funcionamiento orgnico. La elevacin o disminucin de la
concentracin de glucosa en la sangre causan alteraciones fisiolgicas que pueden llevar a
la prdida de la conciencia y eventualmente a la muerte. Tejidos como el nervioso y
sanguneo utilizan glucosa como primera fuente de energa. La habilidad del organismo
para utilizar la glucosa puede analizarse midiendo su concentracin en la sangre u orina.
Existen varias formas de medir los niveles de glucosa en la sangre. La muestra puede
obtenerse por puncin capilar, extraccin de sangre venosa o arterial. Los mtodos de
medicin de glucosa son tambin variados, estos pueden ser con cintas reactivas que
cambian de color de acuerdo con la concentracin del azcar. Existen tambin medidores
electrnicos que determinan la concentracin en sangre total (para uso en el hogar-diabticos). En el laboratorio, comnmente se utiliza un mtodo enzimtico colorimtrico
para medir glucosa en suero o plasma.
En clnica, se indica la medicin de las concentraciones de glucosa en pacientes con
diabetes mellitus, pacientes con glucosa alterada luego del ayuno (mayor de 110mg/dl),
pacientes con sndrome de resistencia a la insulina y/o intolerancia a los carbohidratos
(incremento excesivo de la glucosa sangunea despus de su consumo o del consumo de
alimentos ricos en glucosa), en pacientes con problemas de hipoglucemia, y en pacientes
con estados catablicos y de desnutricin. Se podra tambin indicar la determinacin de
glucosa en pacientes con tuberculosis, infecciones crnicas o recurrentes, alcoholismo,
enfermedad arterial coronaria, o alteraciones de la piel como infecciones de la piel,
lceras y gangrena sin causa aparente, pacientes en coma, epilepsia, confusin, ganancia

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o prdida de peso anormales y en pacientes con medicacin que podra afectar el


metabolismo de glucosa (e.g. uso de corticoides). Muchas de estas condiciones pueden
deberse a niveles constantemente altos o bajos en los niveles de glucosa.
Dependiendo del estado fisiolgico de los individuos, los niveles de glucosa sangunea
varan y por tanto deben conocerse para hacer una buena interpretacin de los datos del
laboratorio.
Antes de proceder con la metodologa para medir glucosa srica es pertinente revisar
algunas nociones bsicas de espectrofotometra.
VALORES DE REFERENCIA:
Prueba de glucosa sangunea en ayunas: esta prueba se la realiza despus de
que el paciente haya ayunado por ocho horas (sin comer o beber lquidos
excepto agua). El valor normal de glucosa sangunea despus del ayuno deber
ser entre 70-110 mg/dl.
Prueba de glucosa aleatoria tomada en cualquier momento: el rango
normal de glucosa est entre aproximadamente 70 y 126 mg/dl.
Prueba de tolerancia a la glucosa: en esta prueba la concentracin de glucosa
despus de dos horas de ingerir una solucin de agua con azcar debe ser
menor de 140 mg/dl, y cualquier medicin dentro de estas dos horas debe ser
menor a 200 mg/dl.
Hiptesis
La velocidad de una reaccin enzimtica es proporcional a la concentracin del sustrato;
cuando la concentracin del sustrato es muy alta, la enzima se satura y alcanza su
velocidad mxima. La enzima que sirve de modelo en esta prctica es la glucosa oxidasa
acoplada a la peroxidasa.
FUNDAMENTO
La glucosa sangunea se oxida por accin de la glucosa oxidasa (GOD), formando
acidoglucornico y perxido de hidrogeno. Por accin de la peroxidasa (POD), el H2O2
produce la oxidacin del fenol con la 4 aminofenazona (4,AF) y la consiguiente formacin
de una sustancia coloreada o cromgeno de color rojo cereza que exhibe una absorcin a
una longitud de onda de 540-546 nm
La reaccin se expresa:
Glucosa O2 + H2O

GOD

2H2O2 4-aminofenazona + fenol

cido glucornico + H2O2

POD

quinoneimina + 4H2O

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Materiales y Mtodos
Gradilla con tubos de ensayo
Pipetas automticas de 100 y 1000 ul
Espectrofotmetro
Kit de Glucosa
Material para extraccin de sangre (tubos al vaco, algodn con alcohol, torniquete)
Para la determinacin de glucosa preparar los siguientes tubos.

Standard reactivo
Muestra (Prueba)
Reactivo

BLANCO
--1000 l

STANDARD
10 l
-1000 l

PRUEBA
-10 l
1000 l

Agitar cada tubo e incubar 15 min. y leer en el espectrofotmetro a 540-546 nm de


longitud de onda.
Resultados:
[Prueba de Glucosa] mg/dl = Ap x Cs / As
Prueba de Glucosa mg/dl = F x Ap
Ap: Absorbancia del problema/muestra
Cs: Concentracin Standard
As: Absorbancia Standard
F: factor obtenido por curva de calibracin o casa comercial en caso de ser provisto
Calcular los resultados y reportarlos.
Discusin
1. Redactar conclusiones y discusin que se deriven de los datos obtenidos por el grupo
de trabajo, de acuerdo a los valores de referencia; analizar si los resultados obtenidos
estn de acuerdo con la hiptesis planteada.
2. Consultar los valores de referencia en ayunas para recin nacidos, nios, adolescentes,
adultos y ancianos.
NOTA: Revisar la CONSULTA correspondiente a esta prctica en D2L

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PRCTICA No 5
Determinacin de lpidos y lipoprotenas plasmticas
Objetivos
Al trmino de la prctica, una vez cumplidas las experiencias de enseanza-aprendizaje, el
estudiante estar en la capacidad de:
1. Recordar la importancia y la clasificacin de los lpidos presentes en el organismo
2. Describir los principios analticos para la determinacin del colesterol total, colesterol HDL
y LDL, apolipoprotenas y triglicridos plasmticos.
3. Calcular la concentracin de VLDL y LDL a partir de las concentraciones de colesterol total,
HDL y triglicridos.
4. Describir las diferentes fuentes de colesterol, su funcin y la dinmica del colesterol
plasmtico.
5. Describir la composicin y la funcin de las lipoprotenas.
La grasa de los alimentos es una fuente importante de energa. La grasa en la dieta puede
venir tanto de productos animales como de los vegetales. Los lpidos o grasas pueden ser
consumidos en la dieta y tambin ser sintetizados por el organismo. En el hombre, los
lpidos comprenden un grupo variado de sustancias, as tenemos: los cidos grasos,
triglicridos, fosfolpidos, esfingolpidos y el colesterol. Los lpidos tienen un papel
fisiolgico importante para el buen funcionamiento de todas y cada una de las clulas del
organismo. As, el tejido adiposo bajo la piel sirve como reserva energtica y ayuda a
mantener la temperatura corporal. Los lpidos forman parte de la membrana de todas las
clulas y llevan mensajes al interior de las mismas para su normal funcionamiento.
Adems, un alto porcentaje del tejido nervioso est constituido por lpidos y algunas
hormonas entre ellas las hormonas sexuales, estrgenos y testosterona, se derivan del
colesterol. Otros, lpidos como las prostaglandinas y leucotrienos son mediadores del
proceso inflamatorio en la respuesta inmune contra infecciones. La grasa en las comidas
ayuda al transporte y almacenamiento de las vitaminas liposolubles A, D, E, y K.
Finalmente, los lpidos dan la sensacin de llenura despus de comer y mejoran el sabor
de los alimentos.
Los lpidos de la dieta son insolubles en el medio acuoso intestinal por lo que para su
absorcin estos deben ser emulsificados (solubilizados) por las sales biliares hepticas.
Una vez que los lpidos han sido emulsificados, estos pueden ser substrato de las lipasas
pancreticas (lipasa, fosfolipasa A 2) que convierten los triglicridos de la dieta en cidos
grasos libres y en mono y diacilgliceroles para que puedan ser absorbidos por las clulas
epiteliales del intestino delgado. En el interior de las clulas epiteliales, se re-sintetizan los
triglicridos a partir de los cidos grasos libres y de los acilgliceroles y son empacados en
los llamados quilomicrones que son un tipo de lipoprotena para su transporte a otros

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tejidos para su almacenamiento u oxidacin. Una lipoprotena es una estructura esfrica


formada de una parte central lipdica (triglicrido, colesterol) rodeada por una capa de
protenas que permite el transporte de todos los lpidos en el medio acuoso del plasma. La
fraccin proteica de las lipoprotenas se conoce como apolipoprotena. Se han aislado y
caracterizado seis clases principales de apoprotenas A, B, C, D, E y (a). Adems de las
principales clases de lipoprotenas existe la lipoprotena (a) Lp(a), la cual tiene una
composicin lipdica muy similar a la LDL, contiene apoB y una glicoprotena llamada
apo(a). La apo(a) es polimrfica (de longitud y secuencia) y tiene una gran homologa con
el plasmingeno. Esta homologa es importante porque en la actualidad se asocia a la
Lp(a) con el bloqueo de la activacin del plasmingeno y la consiguiente lisis de los
cogulos de fibrina, as como con la estimulacin de la proliferacin de clulas musculares
lisas, procesos que pueden dar origen a lesiones aterosclerticas.
Los triglicridos endgenos, sintetizados en el hgado, son empacados en las lipoprotenas
de muy baja densidad (VLDL) para ser transportados a las clulas extra hepticas. Por otro
lado las lipoprotenas de baja densidad (LDL) transportan colesterol desde el hgado a los
diferentes tejidos y las lipoprotenas de alta densidad (HDL) transportan colesterol desde
las clulas extra hepticas al hgado.
La oxidacin y subsecuente generacin de energa a partir de los cidos grasos se realiza
en la mitocondria de las clulas mediante el fenmeno de -oxidacin. Se llama oxidacin porque este fenmeno ocurre mediante la remocin secuencial de unidades de
dos-carbonos de la posicin del cido graso que est siendo degradado. Existen cuatro
pasos en la -oxidacin, una oxidacin dependiente de FAD, una hidratacin, una
oxidacin dependiente de NAD, y una reaccin de tilisis que incluye a la coenzima A
(CoA). Cada ciclo de -oxidacin produce un mol de NADH, un mol de FADH 2 y un mol de
Acetil-CoA. La Acetil-CoA es completamente oxidada en el ciclo de Krebs a CO2 con la
generacin concomitante de tres moles de NADH, un mol de FADH 2, y un mol de ATP. El
NADH y FADH2 generados en la -oxidacin entran subsecuentemente en la va
respiratoria para la sntesis de ATP. El resultado de la oxidacin completa de un mol del
cido oleico de 18 carbones es 146 moles de ATP. El paso limitante en la -oxidacin de
los cidos grasos es la disponibilidad de la enzima lipoacilcarnitina.
En relacin a la sntesis de cidos grasos, a diferencia de su degradacin, sta ocurre en el
citoplasma celular utilizando como co-factor al NADHP. La sntesis de cidos grasos se
inicia a partir de la Acetil-CoA citoplasmtica. Esta ltima proviene del metabolismo
intramitocondrial de la -oxidacin y de la actividad de la enzima piruvato
deshidrogenasa. Cuando la necesidad de energa de la clula disminuye y no hay
necesidad de generar energa por medio de la -oxidacin o la oxidacin de los
carbohidratos, las unidades de Acetil-CoA entonces pueden ser almacenadas en forma de
lpidos (cidos grasos) para su eventual utilizacin. Las unidades de Acetil-CoA
mitocondriales son entonces transportadas al citoplasma en forma de citrato. En el
citoplasma el citrato es convertido a Acetil-CoA. Durante la sntesis de cidos grasos la
Acetil-CoA est temporalmente unida al complejo enzimtico de sntesis como malonil-

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CoA. La sntesis de malonil-CoA a partir de Acetil-CoA est catalizada por la AcetilCoAcarboxilasa que es el sitio ms importante de regulacin en la sntesis de cidos
grasos. La sntesis de cidos grasos a partir de la Acetil-CoA y la malonil-CoA se lleva a
cabo por la enzima sintasa de cidos grasos (SAG). La sintasa de cidos grasos es un
dmero de subunidades idnticas con mltiples actividades enzimticas. La sntesis de
cidos grasos tambin requiere de cuatro actividades enzimticas que estn dadas por la
-cetoacil-protena portadora de acilos sintasa (CSasa); la -cetoacil-protena portadora
de acilos reductasa, la 3-OH-acil- protena portadora de acilos deshidratasa y la enoilCoAreductasa. El principal cido graso sintetizado por la SAG es el palmitato. Luego de su
sntesis el palmitato es separado de la enzima y puede posteriormente ser elongado y/o
desaturado para dar origen a otras molculas de cidos grasos.
El consumo exagerado de grasa especialmente de tipo saturada de origen animal o
insaturada del tipo omega-6 es un factor de riesgo para la salud, en particular para el
desarrollo de enfermedades vasculares como la arteriosclerosis y enfermedades crnicas
degenerativas como la artritis reumatoide. La elevacin crnica de los niveles de
triglicridos y colesterol a nivel sanguneo eventualmente lleva al desarrollo de una
inflamacin crnica a nivel del endotelio vascular que termina con la formacin de las
denominadas placas ateromatosas.
Los dos lpidos en sangre con un mximo inters en el diagnstico clnico son el colesterol
y los triglicridos, ambos se transportan en las lipoprotenas. Estudios epidemiolgicos
han establecido que mientras mayor sea la concentracin del HDL colesterol, menor ser
el riesgo de enfermedad cardiaca coronaria. Por otro lado, cifras elevadas de LDL
colesterol y/o cidos grasos in-saturados omega-6 son atergenas.
VALORES DE REFERENCIA:
La prueba de laboratorio ms informativa es la que mide el perfil lipdico sanguneo
completo que incluye: colesterol total, HDL, LDL, y triglicridos. El Programa Nacional de
Educacin sobre el Colesterol del Instituto Nacional de corazn, sangre y pulmn (NCEP)
recomienda los siguientes valores de lpidos en sangre para personas mayores de 20 aos:
Colesterol Total:
Deseable
Lmite alto
Alto

< 200 mg/dl


200-239 mg/dl
>240 mg/dl

Lipoprotenas de baja densidad (LDL):


Deseable
< 130 mg/dl
Limite alto
130-159 mg/dl
Alto
160 mg/dl
Si el paciente ya tiene una enfermedad cardiovascular, se recomienda un valor de LDL
menor a 100 mg/dl.

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Lipoprotenas de alta densidad (HDL):


En general, un valor de HDL inferior a 35 mg/dl es bajo mientras que un valor de 60 mg/dl
es muy bueno y puede anular otros factores de riesgo (valores normales de HDL para
hombres 44-45 mg/dl y para mujeres 55 mg/dl).
El radio entre HDL/LDL puede utilizarse como valor predictivo de enfermedad cardiaca, se
considera que este radio debe ser aproximadamente 0.34 0.11.
Triglicridos:
Se considera que un valor normal de triglicrido est entre 90-150 mg/dl.

Los siguientes son factores que influyen en la determinacin de los niveles de colesterol o
lipoprotenas y que deben ser tomados en cuenta cuando se analicen los datos de
laboratorio:
-Durante el periodo menstrual el LDL puede ser ms bajo y el HDL ms alto
-Las pldoras anticonceptivas pueden incrementar el LDL y disminuir el HDL
-Los niveles totales de colesterol pueden incrementarse durante el embarazo y
permanecer elevados hasta por veinte semanas despus del parto
-La terapia de reemplazo de estrgenos puede disminuir el colesterol total y el LDL e
incrementar el HDL
Fundamento de las determinaciones
La evaluacin de los pacientes en los que se sospecha alguna alteracin en los lpidos
plasmticos puede incluir la medicin de colesterol total, triglicridos, y de una o ms
lipoprotenas. Adems la cuantificacin de Lp(a), apoA1 y ApoB, o la actividad de la
lipoprotena lipasa u otras enzimas, est siendo valorada para incluirla como
procedimiento clnico de rutina.

Determinacin de Colesterol total: el colesterol es igual a la suma del colesterol


contenido en las tres lipoprotenas que lo transportan
Colesterol total = colesterol VLDL colesterol HDL colesterol LDL
El colesterol existe en el organismo en dos fracciones, una en estado libre y la otra
esterificado, por lo cual para su determinacin se utiliza una serie de reacciones
enzimticas donde en una primera fase, los esteres se hidrolizan dejando libre el grupo 3OH del colesterol. En la segunda reaccin, este grupo se oxida y se obtiene como un
producto, el perxido de hidrgeno, el cual por efecto de la peroxidasa, transfiere uno de
sus oxgenos a un aceptor cromgeno. La absorbancia del cromgeno (4-benzoquinonamonoimino-fenazona) se determina a 546 nm y es proporcional a la concentracin de
colesterol. La reaccin global es la siguiente:

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Colesterol esterasa
Esteres de colesterol

Colesterol cidos grasos

Colesterol oxidasa
Colesterol O2

4-colestenona + H2O2

Peroxidasa
2 H2O2 + 4-aminoantipirina+ fenol

quinoneimina + 4 H2O

Determinacin de Triglicridos (TG): El mtodo utilizado se basa en la hidrlisis de los TG


por una lipasa y la determinacin del glicerol liberado en la reaccin. Para ello, el glicerol
es fosforilado por la glicerol cinasa formando glicerol 1-fosfato, el cual se oxida por la
glicerol fosfato oxidasa a dihidroxiacetona fosfato generando en la reaccin perxido de
hidrgeno. La peroxidasa cataliza la transferencia de oxgeno del perxido a un aceptor
que es un cromgeno, como la 4-aminoantipirina (4-AAP) y el 3,5-dicloro-2hidroxibencensulfonato (DHBS) que se colorean al oxidarse. La absorbancia a 520 nm es
proporcional a la concentracin de TG. La reaccin completa se expresa:
lipasa
Triglicridos

glicerol + cidos grasos

glicerolcinasa
Glicerol + ATP

glicerol-3-fosfato + ADP

glicerofosfato oxidasa
Glicerol-3-fosfato + O2
dihidroxiacetona-P+ H2O2

peroxidasa
H2O2 + 4-AAP + DHBS

cromgeno oxidado + H2O

Determinacin de colesterol HDL: Por regla general, el anlisis de las lipoprotenas del
plasma requiere primero, la separacin de todas las clases de lipoprotenas y segundo, la
medicin de la lipoprotena o del componente lipoprotico de inters. Para la
determinacin de HDL, la medicin es relativamente simple si se precipitan todas las
lipoprotenas que contienen ApoB [VLDL, IDL, LDL y Lp(a)] con un poli anin como los
glucosaminoglicanos con carga negativa (heparina, dextrano o fosfotungsteno) y un catin

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bivalente (Mn o Mg). Las lipoprotenas precipitadas pueden ahora separarse del colesterol
HDL que queda en solucin. El colesterol HDL puede ahora medirse utilizando el mtodo
descrito anteriormente para el colesterol total (ver descripcin anterior). La relacin
colesterol total/colesterol HDL se considera como otro indicador de riesgo coronario.
Normalmente esta relacin es menor a 5. Mientras ms baja sea la relacin colesterol
total/colesterol HDL, menor ser el riesgo para las personas.
Determinacin de colesterol VLDL: En general, la concentracin de TG en el plasma
sanguneo proporciona un parmetro excelente para calcular la concentracin de las
VLDL. Es importante que el paciente est en condiciones de ayuno. As, el clculo se
realiza de la siguiente forma:
VLDL = TG/5
Esta frmula no es apropiada para muestras con una concentracin de TG mayores a 400
mg/dl.
Determinacin de colesterol LDL: Aproximadamente las dos terceras partes del colesterol
plasmtico total son transportadas en las LDL, de tal manera que la concentracin de este
lpido proporciona una medida bastante precisa del nivel de LDL en la mayora de las
personas. Por ello es posible estimar con bastante exactitud, en casi todos los casos, la
concentracin de LDL sobre la base del conocimiento de la concentracin de VLDL
(estimada por los TG) y la del colesterol total. No obstante, para estimar con mayor
exactitud la concentracin de LDL debe cuantificarse la concentracin de HDL, lo cual es
relativamente simple. Las LDL se calculan de la siguiente manera:
Colesterol LDL = Colesterol total (Colesterol HDL + Colesterol VLDL)
El colesterol LDL puede tambin determinarse mediante otras tcnicas de laboratorio.
Quilomicrones: Cuando existen quilomicrones pueden ser detectados si se deja el tubo de
ensayo que contiene el plasma sanguneo en el refrigerador durante una noche. Los
quilomicrones de mayor tamao, pero no las VLDL, se ubicarn en la superficie del tubo
formando una capa cremosa que se detecta visualmente. La presencia de quilomicrones
en el plasma en ayunas se considera anormal.
Determinacin de Lp(a): La Lp(a) se determina por mtodos inmunoqumicos y su
concentracin constituye un factor independiente del riesgo coronario.
Determinacin de apoA y apoB: La tcnica ms usada en la determinacin de estas apo
protenas es el inmunoanlisis ligado a enzimas (ELISA) y de fluorescencia. La
determinacin de apoprotenas, es un dato complementario en la cuantificacin de otros
componentes lipoproticos.

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Materiales y Mtodos
Gradillas con tubos de ensayo
Pipetas automticas de 100 y 1000 ul.
Kits comerciales para determinar colesterol y HDL colesterol y TG
Espectrofotmetro
Bao Mara (37C)
Centrfuga
Material para extraccin de sangre (tubos al vaco, algodn con alcohol, torniquete)
NOTA: Obtener suero de un voluntario. El plasma o suero postprandial contiene
quilomicrones, lo que puede aumentar marcadamente la concentracin plasmtica de TG,
por ello idealmente la muestra se toma despus de 12 horas de ayuno.
Para determinar los Colesterol Total (CH) preparar la siguiente serie de tubos:
COLESTEROL
BLANCO
STANDARD
Prueba CH
Standard colesterol
-10 l
-Muestra
--10 l
Reactivo colesterol
1000 l
1000 l
1000 l
Mezclar e incubar 10 minutos a 37C
Leer la absorbancia (A) en el espectrofotmetro a 540 nm; calibrar el cero con el blanco
de reactivo.
Para determinar los HDL-Colesterol preparar la siguiente serie de tubos:
HDL COLESTEROL
BLANCO
STANDARD
PRUEBA
Standard HDL colesterol
-10 l
-Muestra suero
--10 l
Reactivo ENZIMA (ENZ)
750 l
750 l
750 l
Mezclar e incubar 5 minutos EXACTOS a 37C
Reactivo SUSTRATO (SUB)
250 l
250 l
250 l
Mezclar e incubar 5 minutos a 37C
Leer la absorbancia (A) en el espectrofotmetro a 578 nm; calibrar el cero con el blanco
de reactivo.
Para determinar los Triglicridos (TG) preparar la siguiente serie de tubos:
BLANCO
STANDARD
PRUEBA
Standard triglicridos
-10 l
Muestra (TG)
--10 l
Reactivo trigliceridos
1000 l
1000 l
1000 l
Mezclar e incubar 10 minutos a 37C
Leer la absorbancia (A) en el espectrofotmetro a 540 nm; calibrar el cero con el blanco
de reactivo.

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Resultados
1. Calcular la concentracin de colesterol
Colesterol = F x Ap
Colesterol = Ap x Cs / As
2. Calcular la concentracin de HDL colesterol
Colesterol = F x Ap
Colesterol = Ap x Cs / As
3. Calcular la concentracin de TG:
Triglicridos = F x Ap
Triglicridos = Ap x Cs / As

F: factor obtenido por curva de calibracin o casa comercial en caso de ser provisto
Ap: Absorbancia de la prueba/muestra
Cs: Concentracin Standard
As: Absorbancia Standard
1. Calcular los resultados y reportar (colesterol total, HDL, LDL, VLDL, triglicridos)
2. Compare los resultados con los valores normales
Discusin
1. Redactar conclusiones y discusin que se deriven de los datos obtenidos por el grupo
de trabajo, de acuerdo a los valores de referencia.
2. Consultar los valores de referencia en ayunas para recin nacidos, nios, adolescentes,
adultos y ancianos.
NOTA: Revisar la CONSULTA correspondiente a esta prctica en D2L

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PRCTICA No 6
Determinacin de Protenas totales / Albmina:
Objetivos
Al trmino de la prctica, una vez cumplidas las experiencias de enseanza-aprendizaje, el
estudiante estar en la capacidad de:
1. Identificar el papel de las protenas y de la albmina en el organismo
2. Reconocer la utilidad clnica que tiene la determinacin de protenas y albmina en
suero
3. Describir los mecanismos involucrados en la digestin y absorcin de protenas
4. Interpretar y discutir un trabajo cientfico del metabolismo de aminocidos o
protenas
El objetivo fundamental de la oxidacin de carbohidratos y grasas es producir energa.
Debemos ahora indicar que el metabolismo del otro macro nutriente de la dieta humana,
las protenas, es necesario para reemplazar las protenas degradadas en los tejidos y para
proveer sustancias nitrogenadas para la sntesis de protenas.
Las protenas constituyen la mayor porcin de solutos en el plasma. Las protenas del
suero se dividen en dos fracciones Albmina y Globulina. La albmina representa el ms
abundante constituyente de las protenas, mientras que las globulinas son un grupo
heterogneo de componentes como las inmunoglobulinas, complemento, enzimas,
factores de coagulacin, hormonas y protenas de transporte especficas.
La determinacin de las protenas totales es til en la deteccin de hiperproteinemia
debido a la hemoconcentracin como en las deshidrataciones y varias condiciones de
hiperglobulinemia con mieloma mltiple, marcoglobulinemia de Wadenstrom, infecciones
y ciertas enfermedades hepticas y otro estado patolgico asociado con un incremento de
uno o ms de las muchas protenas encontradas en suero. Los ensayos de protenas
totales son tiles tambin en la deteccin de hipoproteinemia observada en la mal
nutricin, enfermedades renales asociadas con prdida de protenas, edema,
hemorragias, procesos malignos y otras condiciones.
La cuantificacin de albmina, proporciona mayor informacin del estado nutricional, de
la capacidad sintetizadora del hgado o de nefropata por perdida de protenas. Permite
adems interpretar niveles elevados o disminuidos de calcio y magnesio, ya que la
albmina fija alrededor de la mitad de cada uno de estos iones.
Los clculos de diferencia entre la protena total y albmina dan el valor de globulinas,
compuesta por varias fracciones que individualmente pueden elevarse en trastornos
graves.
La electroforesis de protenas, separa las globulinas de la albmina y fija las principales
protenas del suero en patrones que pueden ser altamente especficos para algunas

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enfermedades. Esta prueba puede constituir un instrumento til para vigilar a pacientes
durante periodos prolongados, en casos de alteraciones marcadas en los niveles de
protenas determinadas, como en el mieloma, el sndrome nefrtico, la cirrosis o en casos
de quemadura corporal extensa.
La protena ms abundante en el plasma es la albmina, que habitualmente constituye
2/3 de las protenas totales del plasma, por esta razn la disminucin del nivel de
albmina causada por un deterioro en la sntesis o perdidas (ascitis, nefropata o
enteropata con prdida de protenas) da como resultado un grave desequilibrio de la
presin osmtica intravascular. Esta prdida se manifiesta clnicamente por el desarrollo
de edema perifrico. La ausencia congnita de albmina (analbuminemia) no conduce a
estos problemas, posiblemente a causa de mecanismos compensadores que se mantienen
de por vida y controlan las presiones hidrostticas. La albmina tambin sirve como
depsito mvil de aminocidos desde el hgado, desde donde es sintetizada a otros
tejidos, en donde se desdobla intracelularmente en aminocidos libres para su
incorporacin a otras protenas. Una tercera funcin atribuida a la albmina es como
transporte general o protena vehiculizadora. Muchas sustancia orgnicas e inorgnicas
susceptibles de ser ligadas (p. ej. tiroxina, bilirrubina, penicilina, cortisol, estrgeno, cidos
grasos libres, cumarina, calcio, magnesio, hem) forman complejos con diferentes regiones
de la molcula de albmina en forma covalente (p. ej. Delta-bilirrubina) o disociables.
Estas interacciones de fijacin con muy diferentes sustancias susceptibles de ser ligadas
son posibles debido a una amplia variedad de lugares de fijacin sobre la molcula de
albmina, que consta de 585 aminocidos dispuestos en nueve asas que se mantienen
juntas mediante enlaces disulfuro entre restos de cisterna. La secuencia primaria de
albmina contiene tres regiones principales con tres asas peptdicas.
PROCEDIMIENTO DE PROTEINAS TOTALES (Reaccin de Biuret)
UNDAMENTO
El procedimiento de protenas totales es una modificacin de la reaccin de Biuret
descrito originalmente por Kingsley. Un color violeta resulta cuando los iones cpricos en
medio alcalino se unen con los electrones no saturados de los tomos de nitrgeno y
oxgeno de los enlaces de todas las protenas. La cantidad de color producido es
proporcional a la concentracin de protenas y es medida espectrofotomtricamente a
550 nm.
PROCEDIMIENTO
PROTEINAS
BLANCO
STANDARD
PRUEBA
Standard reactivo
-20 ul
Muestra
--20 ul
Reactivo
1000 ul
1000 ul
1000 ul
Dejar en reposo por 5 min. a temperatura ambiente (15-30C).
Ajuste el espectrofotmetro a cero de absorbancia a 546-550 nm. Usando blanco de
reactivo. Lea y registre los valores de la absorbancia del estndar y prueba.

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VALORES DE REFERENCIA
6.4-8.3 g/dl
Resultados:
[Prueba Protena] g/dl = Ap x Cs / As
Prueba Protena g/dl = F x Ap
Ap: Absorbancia del problema/muestra
Cs: Concentracin Standard
As: Absorbancia Standard
F: factor obtenido por curva de calibracin o casa comercial en caso de ser provisto
LIMITACIONES
La reaccin de Biuret no es suficientemente sensible para permitir la determinacin de
protenas en fluidos con baja concentracin, tales como orina y lquido cerebro espinal.
En algunos casos, una disminucin de una fraccin de las protenas totales est
acompaada por el incremento de otras fracciones. Por consiguiente, la determinacin de
las protenas totales no refleja por s sola la naturaleza o la extensin de la anormalidad
existente. En tales casos, la determinacin de ALBUMINA / GLOBULINA (A/G) es sugerido
para llevar a cabo la diferenciacin. Despus de determinar las PROTEINAS TOTALES y
ALBUMINA la relacin A/G puede ser calculado como sigue:
Albmina (g/dl)
------------------------------------------------------------Protenas totales (g/dl) -- ALBUMINA (g/dl)

= A/G

VALORES DE REFERENCIA
RAZON A/G 1.1 - 2.5
PROCEDIMIENTO DE ALBUMINA METODO BCG (Bromo Cresol Verde)
FUNDAMENTO
Este procedimiento est basado en las propiedades de albmina srica de copularse con
colorantes, en este caso con el BCG. La absorbancia de BCG a 546 nm incrementa al unirse
con la albmina y es proporcional a la concentracin de albmina presente en el suero.
PROCEDIMIENTO
ALBUMINA
BLANCO
STANDARD
PRUEBA
Standard reactivo
-10 l
Muestra
--10 l
Reactivo
1000 l
1000 l
1000 l
Dejar en reposo por 5 min. a temperatura ambiente (15-30C).
Ajuste el espectrofotmetro a cero de absorbancia a 546 nm. Usando blanco de reactivo.
Lea y registre los valores de la absorbancia del estndar y prueba.

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VALORES DE REFERENCIA
3.5 a 5.5 g/dl
Resultados:
[Prueba Albumina] g/dl = Ap x Cs / As
Prueba Albumina g/dl = F x Ap
Ap: Absorbancia del problema/muestra
Cs: Concentracin Standard
As: Absorbancia Standard
F: factor obtenido por curva de calibracin o casa comercial en caso de ser provisto
LIMITACIONES
Los calibradores y controles usados en esta tcnica debern contener albmina humana
ya que las propiedades de unin a colorantes varan entre las diferentes especies
animales.
Resultados:
1. Calcular los valores de Protenas totales, Albumina y Globulina en base a las formulas
indicadas.
2. Calcular la media, la desviacin estndar y el coeficiente de variacin de las muestras
procesadas por los diferentes grupos.
Discusin
1. Redactar conclusiones y discusin que se deriven de los datos obtenidos por el grupo
de trabajo, de acuerdo a los valores de referencia.
2. Qu conclusin puede sacar en base al coeficiente de variacin obtenido?
3. Calcular la razn A/G de las muestras procesadas, e indique la importancia de este
dato.
4. Consultar los valores de referencia de PROTEINAS, ALBUMINA, GLOBULINA en ayunas
para recin nacidos, nios, adolescentes, adultos y ancianos.
NOTA: Revisar la CONSULTA correspondiente a esta prctica en D2L

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PRCTICA No 7
Determinacin de transaminasas sricas (GPT y GOT)
Objetivos
Al trmino de la prctica, una vez cumplidas las experiencias de enseanza-aprendizaje, el
estudiante estar en la capacidad de:
1. Describir las reacciones de transaminacin e identificar los sustratos, enzimas y
productos de la actividad de las transaminasas.
2. Identificar el papel de la transaminasa glutmico pirvica (GPT) en el metabolismo
de los compuestos nitrogenados.
3. Identificar el papel de la transaminasa glutmico oxalactica (GOT) en el
metabolismo de los compuestos nitrogenados.
4. Reconocer la utilidad clnica que tiene la determinacin de la actividad de la GPT y
de la GOT en el suero.
Las protenas constituyen la mayor parte de la materia estructural del organismo despus
del agua, son macronutrientes presentes en prcticamente todos los alimentos que
integran la dieta de los seres humanos, sus unidades estructurales llamadas aminocidos
son 22 en total. Los aminocidos que pueden ser no esenciales aquellos que pueden ser
formados en el organismo, mientras que aquellos que deben ingresar en la dieta y que no
los podemos sintetizar se denominan esenciales. Las protenas en cuya estructura existe
abundancia de aminocidos esenciales tienen un valor nutritivo mayor que aquellas en
donde la presencia de aminocidos esenciales es mnima. En general, las protenas
animales como la leche, carne, huevos, tienen un alto valor nutritivo. Las protenas de los
vegetales no contienen cantidades altas de aminocidos esenciales y por tanto su valor
nutritivo es menor.
Una caracterstica esencial de los aminocidos es que estos son compuestos nitrogenados.
Los seres humanos dependemos de otros organismos para convertir el nitrgeno
atmosfrico en formas que puedan ser utilizadas por el organismo (aminocidos,
protenas, amonaco de las bacterias intestinales). En el organismo existen dos enzimas
muy importantes la glutamato deshidrogenasa y la glutamina sintasa que catalizan la
conversin (incorporacin) de amonaco en los aminocidos glutamato y glutamina,
respectivamente. Los grupos amina y amida de estos dos aminocidos pueden ser
transferidos a otros esqueletos de carbonos mediante reacciones de transaminacin y
transamidacin. Existen aminotransferasas para todos los aminocidos excepto para
treonina y lisina. El glutamato y el -cetoglutarato son los principales donadores o
aceptores en reacciones de transaminacin. Las aminotransferasas del suero,
aminotransferasa-glutamato-oxalacetato (SGOT; llamada tambin aminotransferasa de
aspartato AST) y aminotransferasas-glutamato-piruvato (SGPT; llamada tambin
transaminasa de alanina, ALT) se utilizan como marcadores clnicos de dao tisular. El
hgado es el rgano ms importante del metabolismo del nitrgeno.

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Las reacciones de transaminacin son las reacciones ms importantes que llevan a la


eliminacin del nitrgeno de los aminocidos del organismo. Por medio de esta reaccin
el nitrgeno liberado de los amino cidos que no estn formando protenas es llevado a
un grupo pequeo de compuestos los mismos que pueden ser desaminados por oxidacin
produciendo amonaco o sus grupos aminos y luego son convertidos en urea en el ciclo de
la urea para ser eliminados en la orina. La transaminacin consiste en la remocin de un
grupo -amino a partir de un -aminocido donador al carbn ceto de un -cetocido
aceptor. Debido a la participacin del -cetoglutarato en varias transaminaciones, el
glutamato es un intermediario importante en la eliminacin del nitrgeno as como
tambin en las vas anablicas de asimilacin de nitrgeno. El glutamato que se forma en
la eliminacin del nitrgeno puede ser desaminado por oxidacin por la glutamato
deshidrogenasa, formando amonaco, o puede ser convertido a glutamina por la sintasa
de glutamina y ser transportado a las clulas de los tbulos renales. All la glutamina es
desaminada secuencialmente por la glutaminasa y la glutamato deshidrogenasa del rin.
El amoniaco es eliminado en forma de NH4+ en la orina en donde ayuda al mantenimiento
del pH urinario (valores normales entre 4 a 8). El amoniaco es txico para el organismo, la
concentracin normal de este compuesto est entre 20-40 mM. Un incremento de
amoniaco a 400 mM llevara al desarrollo de alcalosis y neurotoxicidad.
Se ha indicado que la glutaminasa renal es la responsable de convertir el exceso de
glutamina proveniente del hgado a amonaco urinario. No obstante, debemos indicar que
hasta el 80% del nitrgeno que se elimina sale en forma de urea (formada principalmente
en el hgado). En el ciclo de la urea, la arginina de la dieta o de la degradacin de las
protenas, es dividida por la enzima citoslicaarginasa dando lugar a la formacin de urea
y ornitina. En reacciones subsecuentes, una nueva molcula de urea se formara a partir de
la ornitina, regenerando arginina y perpetuando el ciclo. La nica funcin del ciclo de la
urea es la eliminacin del exceso de nitrgeno. Este ciclo por tanto estar activo cuando la
ingesta de protenas sea alta o durante el catabolismo de protenas endgenas (e.g.
ayuno). La ausencia de enzimas del ciclo de la urea no es compatible con la vida. Se han
descrito deficiencias de algunas de estas enzimas (alteraciones del ciclo de la urea) cuyo
denominador comn es la hiperamonemia que se caracteriza por ataxia, convulsiones,
letargia, anorexia, coma y hasta la muerte, si no es tratada prontamente. En general el
tratamiento de las alteraciones del ciclo de la urea consiste en la disminucin de la
protena de la dieta, eliminacin del exceso de amonaco y el reemplazo de las enzimas
defectuosas del ciclo de la urea.
FUNDAMENTO
El elevado nmero de aminocidos y la variedad de sus esqueletos carbonados aumentan
considerablemente las dificultades para hacer un estudio sistemtico del metabolismo de
todos los aminocidos. Sin embargo, es posible describir una serie de reacciones generales
del metabolismo de los aminocidos como son las reacciones de transaminacin,
desaminacin y descarboxilacin.

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Para la oxidacin del esqueleto carbonado de los aminocidos, primero se pierde el grupo
amino (desaminacin). El grupo amino es entonces transferido a un -cetocido por la
accin de una aminotransferasa especifica (transaminasa). El grupo amino del aminocido
que se ha formado en la primera reaccin, generalmente el glutamato, se pierde en un
proceso llamado desaminacin oxidativa por la glutamato deshidrogenasa en el cual se
vuelve a recuperar el cetocido con produccin de NADPH y liberacin de amonio.
Aminotransferasa (AST)
Aminocido + -cetoglutarato
L-glutamato + oxalacetato (L-aspartato)
MDH
Oxalacetato + NADH + H

L-malato + NAD+

La descarboxilacin produce compuestos aminados que tienen importantes propiedades


fisiolgicas como la histamina (por la accin de la histidina decarboxilasa) la beta-alanina
(por la aspartatodescarboxilasa).
Entre los estudios realizados con las transaminasas han merecido especial atencin los
llevados a cabo con las transaminasas glutmico pirvica (GPT) y glutmico oxalactica
(GOT). Estas enzimas se encuentran en todos los tejidos y se relacionan principalmente
con los procesos de escape de enzimas del miocardio o del hgado cuando ocurre un
dao en estos tejidos. Dichas enzimas de escape llegan al torrente circulatorio por lo cual
sus niveles sricos estn sensiblemente aumentados cuando hay dao tisular. Los niveles
sricos aumentados de la GPT se relacionan con trastornos hepatocelulares, sobre todo en
la hepatitis infecciosa aguda y otras formas de necrosis hepticas.
En esta prctica se determina la cantidad de piruvato, uno de los productos de la accin
de la GOT o GPT sobre el sustrato alanina/-cetoglutarato.
La cantidad de piruvato formado presente en el suero problema se identifica mediante la
reaccin del piruvato con la 2,4-dinitrofenil hidracina para formar la hidrazona
correspondiente. Este compuesto produce, con el hidrxido de sodio, una coloracin caf
que es proporcional a la cantidad de piruvato formado, ste es a su vez un ndice de la
actividad de la enzima.
AST
-oxoglutarato + L-alanina

L-glutamato + piruvato

LDH
Piruvato + NADH +

H+

L-lactato + NAD+

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Materiales y Mtodos
Gradillas con tubos de ensayo
Pipetas de 100 y 1000 ul.
Kits comerciales para determinar GPT / GOT
Espectrofotmetro UV Bao Mara de 37C y termmetro
Centrifuga
Material para extraccin de sangre (tubos al vaco, algodn con alcohol, torniquete).
Para la determinacin de GPT / GOT preparar los siguientes tubos.
Tubo
Sol. reactivo GPT o GOT(ml)
suero
Blanco
1 ml (1000 l)
------Problema
1 ml (1000 l)
100 l
Mezclar y activar el cronometro. Leer la absorbancia despus de exactamente 1 y 2
minutos, anotar la absorbancia 1 y 2
Ajuste el espectrofotmetro a cero de absorbancia a 340 nm. Usando como blanco agua
destilada.
VALORES DE REFERENCIA
GPT: Hombres = hasta 37 U/l Mujeres = hasta 31 Ul
GOT: Hombres = hasta 42 U/l Mujeres = hasta 32 Ul
Resultados
Valores de la actividad enzimtica de:
U/l de GPT a 25 C= A/min. x (F)
U/l de GOT a 25 C= A/min. x (F)
1. Calcular los valores de GPT y GOT en base a las formulas indicadas.
2. Calcular la media, la desviacin estndar y el coeficiente de variacin de las
muestras procesada en el curso
Discusin
1. Redactar conclusiones y discusin que se deriven de los datos obtenidos por el
grupo de trabajo, de acuerdo a los valores de referencia.
2. Qu conclusin puede sacar en base al coeficiente de variacin obtenido?
3. Consultar los valores de referencia de PROTEINAS, ALBUMINA, GLOBULINA, A/G en
ayunas para recin nacidos, nios, adolescentes, adultos y ancianos.
NOTA: Revisar la CONSULTA correspondiente a esta prctica en D2L

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Bibliografa

Yepez, R. Bonilla, A. Cuadernos Didcticos de Bioqumica. SECIAN. 2013-2014.


Cursos CRASH. Lo esencial del Metabolismo. 4ta ed, 2013. ISBN: 978-84-9022-416-8
Murray RK, et al. Harper. Bioqumica Ilustrada. 28va ed., Manual Moderno, 2010.
ISBN: 9781615023097
Text Book of Biochemistry with clinical correlations 5th edition by Thomas M.
Devlin, 2002.
Henry, JB. Clinical Diagnosis and management by laboratory methods. 24th ed.
W.B. Saunders Company, 2009.
Manual de Prcticas de laboratorio. Programa de Actividades Experimentales y
Seminarios. UCE. 2012.