Actividad antiestafiloccicas de antifolatos Dihydrophthalazine, una

familia de nuevos frmacos antibacterianos [1]

1,
Catherine Clark, Lois M. Ednie 1 Gengrong Lin, un Kathy Smith, uno Klaudia Kosowska-Shick, un
Pamela McGhee, un Bonifacio Dewasse, 1 Linda PlayaEl, 1 Patrick Caspers, 2 Brangre de Gaucher, 2
Gurkan Mert, un Stuart Shapiro , 2 y Peter C. Appelbaum 1 *
1
Departamento de Patologa, Centro Mdico Hershey, Hershey, Pennsylvania 17033, y
Basilea Pharmaceutica International AG, Basilea, Suiza 2

Recibido el 08 de diciembre 2008/Returned para la modificacin de 19 de enero 2009/Accepted 22 de enero 2009

Para un panel de 153 aislamientos clnicos de Staphylococcus aureus (incluyendo 13 vancomicina-intermedio o intermedio-
heterognea a la vancomicina y 4 cepas resistentes a la vancomicina), el MIC y MIC 50 s 90 s de tres nuevos antifolatos
dihydrophthalazine y BAL0030543 y BAL0030544 y BAL0030545, fueron 0,03 y 0,25 | J L g / ml, respectivamente, para las cepas
susceptibles a la meticilina y 0.03 y <0.25 | J .g / ml, respectivamente, por cepas resistentes a meticilina.Para un panel de 160
estafilococos coagulasa-negativos (incluyendo 5 vancomicina-intermedia y heterogneas de cepas intermedias a la vancomicina y el
linezolid 7 cepas no sensibles), el MIC 50 y MIC s 90 s fueron <0,03 y 0,06 <| J .g / ml, respectivamente, para susceptibles a la
meticilina y cepas 0,06 y 0,5 | J .g / ml, respectivamente, para cepas resistentes a meticilina.La vancomicina fue activa frente al
93,0% de los 313 examinados estafilococos, linezolid fue activo contra todos los S. cepas de S. aureus y el 95,6% de las cepas de
estafilococos coagulasa-negativos, mientras que los pases de ingresos medios elevados de clindamicina, minociclina, trimetoprim,
rifampicina, y para algunas cepas se han observado.A las 4 x CIM, las dihydrophthalazines fueron bactericida frente a 11 de 12
cepas de estafilococos estudiados.El pro pasaje prolongada serie de algunas cepas de estafilococos, en presencia de concentraciones
de subinhibitorias
BAL0030543, BAL0030544 y BAL0030545 clones producidos para los que mostraron alta dihydrophthalazines
Pases de ingreso mediano (> 128 n g / ml), aunque las tasas de desarrollo de la resistencia endgena eran mucho ms bajos de la
dihidro-drophthalazines que para trimetoprim.Un solo paso chapados de estafilococos ingenuo sobre medios que contienen
antifolatos dihydrophthalazine indica una considerable variabilidad entre las cepas con respecto a las subpoblaciones preexistentes
no susceptibles de antifolatos dihydrophthalazine.

La prevalencia de la tuberculosis resistentes a la meticilina (2, 18) y la aparicin de Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (SARM) como
una causa importante de la piel adquirida en la comunidad y las infecciones de estructura de la piel (28) son motivo de preocupacin para la
comunidad mdica.Las infecciones causadas por estafilococos coagulasa negativos (ECN), una vez considerada rara, se estn convirtiendo en cada
vez ms frecuente, sobre todo en pacientes portadores de dispositivos mdicos y personas inmunocomprometidas, y estas infecciones estn asociadas
con una significativa morbilidad y mortalidad (40).La adhesin de Staphylococcus epidermidis a las clulas endoteliales se mejora a las temperaturas
que du rante una fiebre moderada (27), y la internalizacin de ECoN por las clulas husped (1, 7, 27) contribuye probablemente al fracaso
antibitico y persistencia infeccin en algunos pacientes.Glicopptidos, es pecialmente a la vancomicina, son el estndar actual de cuidado para el
tratamiento emprico de las sospechas de resistente a la meticilina lococcal Staphy-infecciones, pero los estafilococos con susceptibilidad reducida, la
tolerancia o resistencia a la vancomicina han aparecido en el mbito clnico (2, 15, 19, 33), y su frecuencia es casi seguro subregistro debido a
problemas con la identificacin y la confusin sobre los puntos de interrupcin (2, 39).
La propagacin de la tuberculosis resistentes a los mandatos de estafilococos en el desarrollo de nuevas modalidades teraputicas. De las drogas
lococcal antistaphy-comercializadas durante la ltima dcada, slo linezolid tiene una biodisponibilidad oral teraputicamente til, sin embargo, este
buey azolidinone se ha asociado con toxicidad grave (sobre todo durante el uso prolongado), no es bactericida a estafilococos, y puede apoyar el
surgimiento de la resistencia endgena durante el tratamiento a largo plazo (4, 16, 24, 26, 32, 34). La mayora de los estafilococos, en particular los
ajustes aislados fuera de cuidado de la salud, siguen siendo susceptibles a trimetoprim-sulfametoxazol (38), aunque sin duda esto va a cambiar como
sulfamethoxazole-trimethoprim se usa con mayor frecuencia para tratar las infecciones por SARM. Por lo tanto, sigue siendo una necesidad urgente
de nuevos compuestos con actividad por va oral disponibles contra las drogas resistentes a la meticilina y los perfiles de seguridad compatibles con el
tratamiento a largo plazo.
Dihidrofolato reductasa (DHFR) es una enzima esencial en la mayora de las bacterias patgenas, y el xito clnico de trimetoprim ha demostrado
que la DHFR es un objetivo importante quimioteraputico (41). BAL0030543, BAL0030544, y BAL0030545 (fig. 1) son nuevos derivados de 2,4-
dihydrophthalazine diaminopyrimi-cene con actividades potentes contra patgenos gram-positivos, en incluyendo los estafilococos.El presente
estudio trat de determinar (i) los pases de ingreso mediano, los de BAL0030543 BAL0030544 y BAL0030545 y comparadores COM para 313
estafilococos, (ii) las actividades bacteriostticas o bactericidas de los antifolatos dihydrophthalazine y comparadores contra una docena de
seleccionar cepas de estafilococos, (iii) la proclividad de los dihydrophthalazines y comparadores para seleccionar algunos de resistencia endgena
entre los 10 estafilococos con resistotypes diversas, y (iv) la frecuencia de resistencia preexistente a los dihydrophthalazines en poblaciones vrgenes
de estafilococos.
 Material y Mtodos
Bacterias El panel de tensin completo (313 cepas) compuesto por 127 MRSA, de 26 aos susceptibles a la meticilina S. meticilina (MSSA), 135 resistentes a la
meticilina (ECN MRCoNS), y 25 susceptibles a la meticilina CONS (MSCoNS) y las cepas incluidas 2 Michigan, resistente a la vancomicina S. aureus (VRSA), 1 de
Nueva York VRSA, 1 Pennsylvania (Hershey) VRSA, 10 vancomicina intermedia S. aureus (VISA), 3 heterognea VISA (hVISA), 4 intermedias a vancomicina CONS
(VICoNS), 1 heterogneos intermedios vancomicina CONS (hVICoNS), y 7 a linezolid (LZD no susceptibles NS) cepas ECoN.Todas las cepas de estafilococos VRSA y
vancomicina entre mediato no aislado en el Centro Mdico Hershey se obtuvieron de la Red de Resistencia a los antimicrobianos de Staphylococcus aureus a travs de la
agencia de Eurofins Medinet, Inc. (Chantilly, VA). La mayora de las cepas estudiadas fueron aisladas de los pacientes durante los ltimos 8 aos.
Cepas VISA y VICoNS se identificaron utilizando las tiras de Etest (AB Biodisk, Solna, Suecia), mientras que las cepas hVISA y hVICoNS fueron identificados por el
mtodo de Etest macro (9), y los resultados fueron confirmados por anlisis de la poblacin. Cuando sea necesario, las especies de CoNS se identificaron utilizando API
Staph galeras [bio-Mrieux (Suisse) SA, Ginebra, Suiza].
Los agentes antimicrobianos y las pruebas de MIC. BAL0030543, BAL0030544, y BAL0030545, productos de Basilea Pharmaceutica International AG (Basilea,
Suiza), se prepararon por el mtodo de Guerry et al. (P. Guerry, Jolidon S., R. Masciadri, Stalder H. y R. Luego, el 30 de mayo de 1996, Suiza solicitud de patente
internacional WO 96/16046); otros agentes antimicrobianos (clindamicina, lin-ezolid, minociclina, rifampicina, trimetoprim, y vancomicina) se obtuvieron de fuentes
comerciales. Con la excepcin de la vancomicina, todos los compar dores se utilizan como monoterapias orales o como un componente oral de la terapia de combinacin
para el tratamiento de infecciones atribuidas a estafilococos resistentes a meticilina-ylococci (22, 30).
CIMs de dilucin en agar se determinaron utilizando agar Mueller-Hinton (MHA; producto Oxoid no. CM0337), de acuerdo con las directrices del CLSI (12). S. aureus
ATCC 29213 y Enterococcus faecalis ATCC 29212 se incluye con cada serie de determinaciones de la CIM, CIM para cepas de la prueba se registraron slo si pases de
ingresos medios para las cepas de control de calidad se encontraron dentro de rangos aceptables (13).CIM de vancomicina fueron ledos despus de un total de 24 h de
incubacin (13).
Tiempo de matar a los estudios. Matar el tiempo-perfiles se obtuvieron seis S. cepas de S. aureus (dos
MSSA y cuatro cepas de SARM) y seis CONS (dos y cuatro MSCoNS
MRCoNS) (ver Tabla 2), con concentraciones farmacolgicas de 1 x , x 2 , y 4 X MIC. Tubos de vidrio que contienen 5 ml de caldo Mueller-Hinton (MHB, producto
Oxoid no.CM0405) con inculos final de 5 x 10 5 al 05 x 10 6 UFC / ml se incubaron a 35 C en un bao de agua con agitacin.Las clulas viables se cuantific en 0, 3,
6,12, y 24 h en placas propagacin 0,1-ml alcuotas de 10-diluciones (en PPG) de cada tubo sobre agar de soja tripticasa-5% (vol / vol) de sangre de oveja defbrinated
(BBL) y en cubating las placas durante 24 a 48 h en el aire ambiente a 35 C.
Una concentracin dada de los antimicrobianos (expresado como un mltiplo de la MIC) se consider bactericida si se reduce el tamao del inculo por> 3 log w UFC /
ml en 24 horas o bacteriosttico si el tamao del inculo se redujo por <3 UFC log w / ml durante el mismo perodo.Con el umbral de sensibilidad y de inculos
empleados, no hay problemas en la delimitacin del 99,9% matanza se han encontrado. Los problemas de arrastre de los antibiticos fueron abordadas por la dilucin,
como se describi previamente (31). Debido a la resistencia innata por algunas cepas a los antibiticos en particular, matar el tiempo-no se obtuvieron los perfiles de siete
cepas con trimetoprim, cinco cepas con clinda Mycin, y una cepa de cada uno con linezolid, rifampicina y vancomicina.
Multipassage estudios de resistencia de seleccin. Cinco S. aureus (MRSA tres, una VISA, un VRSA, y dos Tmp r) de las cepas de S. y cinco epidermidis (tres
resistente a la meticilina, vancomicina un intermedio, un LZD NS, y cuatro Tmp r) de las cepas fueron sometidas a pases seriados en presencia de concentraciones
subinhibitorias de antibiticos.Inculos inicial (~ 1 x 10 6 UFC / ml) se prepararon mediante la suspensin de crecimiento a partir de un da para otro placa MHA (BBL)
en PPG (Oxoid).Tubos de vidrio que contienen 1 ml de libre de antibiticos y antibiticos complementa-MHB fueron ino traducirse y se incuba a 35 C durante 24 h, las
concentraciones de antibiticos en los tubos oscil entre 4 log 2 pasos anteriores al 3 de registro de 2 pasos por debajo de la CIM de cada frmaco para cada cepa. Los
cultivos se pasaron todos los das durante un mximo de 50 das mediante el uso de 10 - ul inculos de los tubos con las concentraciones ms cercanas a la CMI (de 1 a 2
diluciones por debajo de la MIC), que tena la turbidez igual que los antibiticos sin control.Las alcuotas de INOC Ulum se congelaron a - 70 C en la leche descremada
de doble potencia.Despus de 50 pasajes o cuando el MIC para una cepa estabilizado en> g 128 U / ml durante cuatro pasajes sucesivos, la transferencia de serie en la
presencia de concentraciones de antibitico subinhibitorias se interrumpi y cepas seleccionadas fueron sometidos a 10 pasajes en medio libre de antibiticos.
Para conirm que los aislamientos resistentes obtenidos al final de la serie de pases derivado de las cepas parentales, las cepas de los padres y los clones obtenidos
despus de la aprobacin INAL fueron examinados por electroforesis en gel de pulsado ield con un CHEF-DR III aparato (Bio-Rad, Hercules, CA ) como se ha descrito
anteriormente (25).
Los genes DHFR cromosmicas y el plsmido de cepas parentales y de los clones emergentes durante el paso de serie para que cualquiera de los derivados
dihydrophthalazine tena PRM fueron elevados ampliied y secuenciados como se ha descrito previamente viously (10, 14).Genes DHFR de los clones para que los pases
de ingreso mediano de antifolatos signiicantly cambiado durante el paso posterior en medio libre de antibiticos fueron secuenciados tambin.
Un solo paso estudios de resistencia de seleccin. Las clulas bacterianas se rasparon de placas durante la noche, se lav una vez con PPG (Oxoid), y se resuspendieron
en MHB a una concentracin final de 10 al 10 10 11 UFC / ml.Una alcuota (50 p i) de la suspensin bacteriana se extendi sobre MHA (Oxoid) que contena los mismos
antibiticos usados para la seleccin multipassage resistencia a dos, cuatro y ocho veces la MIC de dilucin en agar. Las placas se incubaron aerbicamente a 35 C
durante 48 h.Colonias seleccionadas al azar que crecen en los antibiticos que contienen los medios de comunicacin se sometern a una segunda dilucin en agar.
Resistencia en un solo paso estudios se defini por una CIM> 4 veces mayor que la de la cepa progenitora. La frecuencia de la resistencia en cada MIC para cada par cepa-
antibitico se calcul como el nmero de colonias resistentes al inculo (37).

RESULTADOS Y DISCUSIN

El dihydrophthalazine antifolatos BAL0030543, BAL0030544, y BAL0030545 se identificaron en Basilea Pharmaceutica International AG como
nuevos inhibidores de la DHFR con muy anima envejecimiento en actividades antibacteriana in vitro (36).El presente estudio se centr en las
propiedades de la antiestafiloccicos dihydroph-thalazines hacia un panel que comprende predominantemente aislados clnicos recientes, como la
vancomicina y la resistencia intermedia-tante y las cepas LZD NS, as como una gran cantidad de cepas resistentes a meticilina.
CIM de BAL0030543 y BAL0030544 y BAL0030545 y
comparadores se resumen en la Tabla 1. Entre 153 S. cepas de Staphylococcus (incluyendo 10 VISA, hVISA 3, y 4 cepas VRSA), MIC 90 s de los
derivados dihydrophthalazine eran 0,25 y 0,125 a 0,25 g / ml para MSSA y MRSA, respectivamente, y 0,03 a 0,06 y 0,5 ug / ml para Tmp s, y las
cepas Tmp r, respectivamente, relativamente.Entre 160 cepas CONS (incluidos 4 cepas VICoNS
y 1 cepa hVICoNS), MIC 90 s fueron 0,03 a 0,06 y 0,5 ug / ml para MSCoNS y MRCoNS, respectivamente, y 0,03 a
0,06 ug / ml y de 0,5 a 1 ug / ml, respectivamente, para s Tmp y cepas Tmp R, respectivamente.MIC 90 s de trimetoprim para la S. aureus y los
paneles de ECoN fueron> 128 U g / ml.La vancomicina es activa frente a todos los estafilococos 313 encuestados, excepto las 22 cepas (7,0%) para
los que CIMs de este glicopptido se sabe que son

comprometido. Linezolid fue activo contra todos los S. cepas de Staphylococcus y 153 (95,6%) de 160 cepas ECoN examinado.Todas las cepas
MSCoNS eran susceptibles a la clindamicina, y todos los estafilococos resistentes a meticilina susceptibles fueron susceptibles a la minociclina y
rifampicina (Tabla 1).
Pases de ingreso mediano de caldo macrodilucin para las 12 cepas de estafilococos examinados por matar el tiempo, los estudios se presentan en
la Tabla 2, y los perfiles de matar el tiempo-se resumen en la Tabla 3. Los espectros bactericida de BAL0030543, BAL0030544, y BAL0030545
menos 2 X de la MIC 4X abarcaba 9 a 11 (75,0 a 91,7%) de los encuestados
cepas, mientras que en 1 X MIC fueron los dihydrophthalazines bacteria ricidal hacia slo el 3 al 6 (25,0 a 50,0%) de las cepas.En 4 X
MIC, los derivados dihydrophthalazine demostrado ser bactericida contra 11 de 12 cepas de estafilococos; en este mltiplo del
MIC, BAL0030543 fue bacteriosttica slo contra la cepa CN197 [A (log 10 UFC / ml) = -2,7] y BAL0030544 y bacteriosttico BAL0030545 eran
slo hacia cepa CN057 [A (log 10 UFC / ml) = -2.0 y - 1.7, respectivamente] .De los antibiticos comercializados han sido evaluados, trimetoprima y
vancomicina tenan matar el tiempo-los perfiles de volver monte la las de los antifolatos dihydrophthalazine, aunque debido a la resistencia intrnseca
a la trimetoprima (Tabla 1), un perfil de tiempo de matar por esta droga se obtuvo slo dos cepas contras y tres S. cepas de S. aureus.En MIC 4X,
matar a los tipos de S. aureus durante las primeras 6 h por lo general corresponde al siguiente orden: BAL0030544, BAL0030545> trimetoprima>
BAL0030543> vancomicina (donde la coma indica que las drogas tienen similares ndices de mortalidad).En MIC 4X, matar a las tasas de ECN
durante las primeras 6 h por lo general corresponde al siguiente orden: vancomicina>
BAL0030543, BAL030544, BAL0030545. A las 4 de MIC X, la rifampicina es bactericida hacia la 5 (SA145, CN051, CN057, CN074 y CN197) de
11 cepas, mientras que la clindamicina, linezolid, tetraciclina y Mino eran bacteriosttico hacia todas las cepas.Si bien los datos de MIC y el tiempo
de matar, de los comparadores en general, de acuerdo con los valores publicados (3, 8, 23), el 6-h tasa de muerte de trimetoprim obtenidos en el
presente estudio fue algo mayor que el reportado por Hackbarth et al.21

Representante de los perfiles de resistencia de desarrollo para

antifolatos dihydrophthalazine y comparadores frente a S. aureus ATCC 29213 se presentan en la figura. 2, y los resultados de pasos en serie de
seleccionado S. aureus y S. cepas epidermidis en presencia de concentraciones de antibitico subinhibitorias se muestran en la Tabla 4.
Transferencia prolongada serie en presencia de concentraciones subin inhibitoria de BAL0030543, BAL0030544, o BAL0030545 revel variabilidad
tensin considerable en el desarrollo de la resistencia endgena hacia dihydrophthala-zine antifolatos y comparadores.En menores de 50 pases en
serie, dos de las cinco S. aureus y tres de las cinco S. epidermidis cepas, incluidas las cepas para las cuales los PRM iniciales de BAL0030543,
BAL0030544 y BAL0030545 fueron <1 ug / ml, los niveles de desarrollo de resistencia hacia los tres dihydrophthalazines equivalentes a las CIM de>
64 g U / ml.Las tasas de desarrollo de la resistencia EndoG gena hacia BAL0030543, BAL0030544 y BAL0030545 variado con la cepa, siendo ms
bajo para el CN197
y la ms alta para el SA145, VRS1 y CN225.CIMs de la novela antifolatos tendan a aumentar suavemente, con la percepcin ex notable de aquellos
para CN345, para que un salto dramtico (8 a> 128 U g / ml) en el MIC de BAL0030544 ocurri entre los pasajes 29 y 30.Los resultados sugieren
que, al menos para un subconjunto de estafilococos, BAL0030545 pueden tener menos tendencia a promover el desarrollo de resistencia endgena
que cualquiera
BAL0030543 o BAL0030544.
Tres S. cepas de Staphylococcus pases en la presencia de tri-methoprim dio lugar a los clones para que CIMs de este frmaco eran> 128 ug / ml
por menos de 20 transferencias, debido a mutaciones Phe98Tyr (ATCC 29213 y SA505) o Leu40Tyr (ATCC 43300) en DHFR cromosmico genes,
ninguna de estas mutaciones tenido un impacto en la susceptibilidad de las cepas a la dihydrophthala-zines.El MIC trimetoprim de 64 ug / ml para
lograr un clon de S. epidermidis cepa CN197 de 50 transferencias en serie puede estar relacionada con una mutacin en el cromosoma Gly43Arg gen
DHFR (Basilea Pharmaceutica International AG, datos en archivo).
Por nueve cepas pases en la presencia de rifampicina, CIMs de este frmaco se elev a> 128 ug / ml por menos de 12 transferencias, consistente
 con los informes que la rifampicina soporta tasas relativamente
rpidas de la aparicin de resistencia endgena (5).Resultados mixtos se ob obtenido para linezolid y la clindamicina: despus de 50 pasajes en la
presencia de linezolid, CIM de la oxazolidinona oscil entre el 16 ug / ml (para 4 de 10 cepas) a 128 ug / ml (para 2 de 10 cepas), mientras que
Despus de <50 pasajes en la presencia de clindamicina, pases de ingreso mediano de la lincosamida vari de 2 a 4 ug / ml (3 de 6 cepas) de 32 a>
128 g U / ml (para el 3 de 6 cepas).Despus de 50 pases seriados en la presencia del antibitico correspondiente, ninguna de las cepas desarrollado
resistencia hacia minociclina o vancomicina de acuerdo con puntos de interrupcin CLSI (13).
PRM alta (> 128 ug / ml) de BAL0030543, BAL0030544, y BAL0030545 para clones de cepas VRS1 y CN057 persisti despus de 10 pasajes en
la ausencia de antibitico, el MIC gotas de> 2 log 2 pasos para los clones de CN051 y CN225 en las drogas medio libre producido, y los resultados
mixtos se obtuvieron para los clones de SA145 y CN345 (Tablas 5 y 6).Un Ison comparabilidad de secuencias DHFR de aminocidos
correspondientes a los genes DHFR cromosmicas y el plsmido estructurales y las regiones dentro de los 100 nucletidos aguas arriba (que abarca la
regin promotora) y 100 nucletidos aguas abajo de los genes DHFR estructurales de las seis cepas (SA145, VRS1, CN051, CN057 , CN225, CN345
y) para los que uno o ms de los dihydroph-thalazine antifolatos muestran un incremento notable en el micrfono durante el paso en serie en la
presencia de concentraciones concentrar subinhibitorias de estos frmacos revelado, en la mayora de los casos, no hay cambios en la secuencia.As,
las variaciones de MIC puede ser atribuible a elementos reg regulatorios que afectan a la expresin de DHFR estafilococos y / o la absorcin o flujo
de salida de los frmacos (6, 17).
Despus de menores de 50 pases en serie en la presencia de concentraciones subinhibitorias de BAL0030543, BAL0030544 o BAL0030545,
sustituciones de aminocidos Leu28Ser y / o Ile31Met en la isoenzima S1 Plas-mediados de los transmitidas por [codificada por DFR (A)] se
detectaron en los clones de S. cepas de Staphylococcus SA145 y VRS1 que dihydroph-thalazines tenan CIM elevadas.Despus de <50 pases
seriados en la presencia de dihydrophthalazines, sustituciones de aminocidos Thr46Asn, Phe98Tyr, y se observaron consistentemente Lys160Glu en
los DHFRs cromosmicamente codificadas de los clones de S. epidermidis cepa CN051, mientras que las sustituciones de aminocidos Leu20Ile,
Phe98Tyr y His149Arg ocurrido sistemticamente en dihydroph-thalazine-no susceptibles de clones de S. epidermidis cepa CN057.Adems, una
mutacin Leu24Ile se detect en la DHFR cromo Somal de un clon de S. epidermidis cepa CN051 para que BAL0030543 tena un MIC de 64 ug /
ml (Tabla 6). Isoleucilo, iso leucil, y residuos de asparaginilo ocurren en las posiciones 20, 24 y 46, respectivamente, en el plsmido codificada [DFR
(G)] DHFR isozima S3 (35), que no es inhibida por la dihydrophthalazines (11).
 Un solo paso las frecuencias de resistencia para BAL0030543 y BAL0030544 y BAL0030545 y comparadores fueron obtenidos para las 10 cepas
parentales utilizadas en estudios de seleccin de multipassage (Tabla 7). La frecuencia de la resistencia a la dihydrophthalazine un tifolates, expresado
como el nmero de colonias resistentes por INOC Ulum, vari de 4,6 x 10 ~ 5 a 3,0 x 10 ~ 8 a 2X MIC a 3,2 x 10 ~ 6 a <3,4 X KT 11 a 8X MIC de
BAL0030543, 8,0 x 10 ~ 5 para
4.5 X 10 ~ 9
a 2X MIC a 1,6 x 10 ~ 5
a <4,0 X 11
KT en el MIC 8X de BAL0030544, y 1,7 x 10 ~ 4
a <4,0 X 11
KT en el MIC 2X a
4.6 5 11
X 10 ~ a <3,3 X KT en el MIC 8X de BAL0030545.Estos resultados apuntan hacia una considerable variabilidad entre las cepas
con respecto a las subpoblaciones preexistentes no susceptibles a la dihidro-drophthalazines. Un solo paso las frecuencias de resistencia de 10 ~ 10 a 10
~ u de linezolid y vancomicina se produjo en todas las cepas estudiadas, tanto en MIC y MIC 2X 8X, lo que indica que las subpoblaciones
preexistentes no susceptibles a estos antibiticos eran menores que los no susceptible a la dihydrophthalazine un tifolates de .
En MIC 2X, la presin ms dbil de seleccin aplicado en el anlisis de un solo paso, las frecuencias de resistencia a clindamy-cin, linezolid, la
minociclina y la vancomicina tendan a ser ms bajos que los de antifolatos dihydrophthalazine.Las frecuencias ms altas re resistencia para
BAL0030543, los BAL0030544, y
BAL0030545 se encontraron resultados para VRS1, CN051, CN057 y, mientras que las frecuencias ms bajas de resistencia se encontraron resultados
para SA505 y ATCC 43300. Del mismo modo, por menores de 50 pases seriados, pases de ingresos medios muy altos de los dihydrophthalazines
para VRS1, CN051, CN057 y sali, mientras que los pases de ingresos medios mucho ms bajos para el SA505
y ATCC 43300 fueron obtenidos. A las 8 X MIC, el ms fuerte
presin de seleccin aplicada en los anlisis de un solo paso, dihidro-

drophthalazine frecuencias de resistencia antifolatos agrupadas en valores ms bajos de S. Staphylococcus aureus (10 -9 a 10 -11) que para S.
epidermidis (10 -5 a 10 -10).
Los resultados de este estudio sugieren un posible papel de dihidro-drophthalazine antifolatos en el tratamiento de las infecciones por estafilococos,
incluidas las causadas por la meticilina y vancomicina-mycin resistentes cepas y cepas LZD NS.El dihydrophthala-zines eran bactericida en
concentraciones bajas, y la aplicacin de la mayordoma cin buen antibitico (29) debe mantener sus actividades antiestafiloccicos y retrasar la
aparicin y el des sin de la resistencia a estos compuestos.Los pases de ingreso mediano de BAL0030543, BAL0030544 y BAL0030545 fueron
<0,5 ug / ml para el 98,7% de la S. cepas de Staphylococcus encuestados, mientras que los pases de ingreso mediano de los tres compuestos fueron
<1 ug / ml para 98,1% de las cepas ECoN encuestados.Estos nuevos compuestos inhibe no slo DHFRs cromosmicamente codificadas de tipo
salvaje y mutante de S. aureus [d / r (B) J y S. epidermidis [d / r (C) j, sino tambin los Plas-mediados transmitidas DHFR S1 isoenzimas codificadas
por D / R (A), que es altamente resistente a trimetoprim.A diferencia de trimetoprim, el di-hydrophthalazines eran activas contra estafilococos
albergar una mutacin DHFR Phe98Tyr cromosmico (11). Con su biodisponibilidad oral y buenas propiedades farmacolgicas favorables / tox
icological (20), dihydrophthalazine antifolatos
BAL0030543, BAL0030544, y son potencialmente BAL0030545
terapias atractivos para las infecciones resistentes a mltiples frmacos staphylococoal, incluidos aquellos para los que se garantiza a largo plazo (> 2
semanas) la terapia.

AGRADECIMIENTOS

Este estudio fue apoyado por una beca de Basilea Pharmaceutica International AG en el Centro Mdico Hershey, Pennsylvania State University.

[1] Publicado por delante de la impresin, el 2 de febrero de 2009.