MANUAL DE OPERACIN DEL CROMATGRAFO DE GASES SHIMADZU GC-14B

Versin 1.0

Editado por:

Ing. Andres Bedoya Garcia

Ing. Manuel Echeverry Lopez

Fecha de edicin

08/03/2013

Universidad del valle

Escuela de ingeniera qumica

Laboratorio de investigacin y docencia

Realizado bajo la supervisin de:

Jefe de laboratorio

Gloria Lasso de Fernndez

 INTRODUCCIN

A pesar de que la ingeniera qumica es una profesin direccionada a la produccin

industrial, una de sus ramas es la investigacin la cual se desarrolla en el laboratorio.
Entre las prcticas que se realizan en un laboratorio, una de las ms usuales es la
caracterizacin de una mezcla. La caracterizacin consiste en encontrar las
propiedades fisicoqumicas por medio de diferentes mtodos y tambien encontrar la
composicin qumica.

Hoy en dan, una de las tcnicas ms usadas para caracterizar mezclas es la

cromatografa de gases (gas-liquido) ya que es verstil, exacta y universal. El inters de
este manual es explicar conceptos bsicos y la operacin del cromatgrafo de gases de
la escuela de ingeniera qumica, no se profundizara en la teora ya que la idea es que
los estudiantes se familiaricen con la tcnica, experimenten y aprendan criterios. Se
enfatizara en la prctica y uso, dems criterios como platos tericos de una columna,
coeficientes de distribucin, factores de capacidad, entre otros no son de inters de
este manual.

1
 CONTENIDO

1. Que es y cmo naci la cromatografa de gases 4

2. Principios bsicos de la cromatografa de gases 5

2.1. Conceptos bsicos. 5

2.2. Medio de separacin. 7

2.3. Separacin de compuestos 9

3. Partes y componentes de la CG. 12

4. Pasos para realizar una cromatografia de gases. 26

4.1. Preanlisis y pretratamiento de la muestra. 26

4.2. Establecimiento de parmetros externos. 27

4.3. Establecimientos de parmetros de separacin. 28

4.4. Anlisis de resultados 32

4.4.1. Cualificacin 32
4.4.2. Cuantificacin 34

5. Operacin del cromatgrafo de gases shimadzu. 42

5.1. Parmetros y partes. 42

5.1.1. Partes 43
5.1.2. Instalacin columna 44

5.2. Encendido del cromatgrafo. 47

5.3. Inicio de operacin. 49

5.3.1. Encendido de Resistencias, Detector, y Gases. 49
5.3.2. Programacin de rampas. 52

2
 5.3.3. Inicio de un ensayo. 54
5.3.4. Manejo del software peaksimple. 54
5.3.5. Observando los resultados de la corrida experimental en tiempo real. 68

5.4. Visualizacin de los resultados finales de la corrida experimental. 69

5.4.1. Utilizacin de la integracin Manual para algunas ocasiones. 71

5.5. Tips prcticos. 74

5.6. Mantenimiento 74

6. Anexos. 76

3
1. Que es y cmo naci la cromatografa de gases

La cromatografa de gases (Gas-lquido) es una tcnica analtica que se usa para

separar compuestos para posteriormente cualificarlos y cuantificarlos. Se realiza
mediante la vaporizacin de una muestra que luego se pasa por una columna que
separa los compuestos.

La cromatografa de gases fue inventado por A.J.P. Martin y R.L.M. Synge, quienes
propusieron que la fase lquida mvil utilizada en la cromatografa lquida podra ser
reemplazada por un gas adecuado. La base de esta recomendacin fue debido a que la
difusividad de los gases en los solutos es mucho ms alta que la de los lquidos,
generando que el equilibrio en un proceso cromatogrfico fuese mucho ms rpido y
por lo tanto, las columnas mucho ms eficientes, con tiempos de separacin mucho
ms cortos. As, el concepto de cromatografa de gases fue concebido hace ms de
cincuenta aos.

La primera separacin en cromatografa de gases publicada fue la de una serie de

cidos grasos, una microbureta serva como detector, tiempo despus la bureta se
automatiz para proporcionar una respuesta ms eficaz. El cromatgrafo de gases fue
tambin uno de los primeros instrumentos que se acoplaron a un ordenador que
controlaba el anlisis, procesando los datos e informando resultados.

Una forma ms sofisticada de un cromatgrafo de gases fue construido por James y

Martin 1955. El instrumento era un dispositivo algo voluminoso con una columna recta
con una camisa de vapor. Inicialmente, el detector se encontraba en la base de la
columna y consista en el dispositivo de valoracin automtica; la separacin se
presenta como un cromatograma en forma de una serie de pasos, la altura de cada
paso es proporcional a la masa de soluto diluida. El aparato fue utilizado con xito para
separar algunos cidos grasos, pero el dispositivo se limitaba solo a detectar material
inico. Esto motivo a Martin para desarrollar un detector ms verstil.

4
2. Principios bsicos de la cromatografa de gases

2.1. Conceptos bsicos.

En el laboratorio, la cromatografa de gases es una operacin unitaria a pequea escala

la cual tiene como funcin la separacin de compuestos voltiles; este proceso
involucra fenmenos fisicoqumicos tales como, adsorcin, desorcin, evaporacin y
absorcin. El hecho que la cromatografa de gases (CG) se limite solo a compuestos
voltiles se relaciona directamente con la estabilidad trmica de las sustancias, ejemplo:
un triglicrido no se evapora sino que se degrada trmicamente, entonces este
compuesto no se podra analizar directamente por cromatografa de gases. La
cromatografa de gases se limita de forma general a compuestos con peso molecular
menor a 1000 uma y con temperaturas de ebullicin menores a 400C.

Esta tcnica analtica cualitativa y cuantitativa, sirve para analizar mezclas con un
amplio nmero de compuestos, lo cual dificulta el anlisis de la dinmica de tantos
compuestos que estn sometidos a tan diversos fenmenos de transporte. Debido a
esto, la estandarizacin de un proceso de separacin por CG se inclina ms al ensayo y
error; en la mayora de casos tomando solo las propiedades de las sustancias puras
tales como punto de ebullicin, peso molecular y polaridad.

Como se mencion anteriormente, La separacin de compuestos en CG se lleva cabo

mediante el aporte de diversos fenmenos fisicoqumicos entre los cuales se destacan:

Adsorcin: los compuestos en fase lquida y gaseosa tienden a ser adsorbidos por
algunos solidos dependiendo de su afinidad, un ejemplo es el agua en el aire que se
adsorbe en slica gel, pero el hexano vaporizador no es adsorbido por la slica, esta
propiedad es la base de la cromatografa de gases. En la Figura 1 se muestra la

5
presentacin cotidiana de la silica gel en bolsitas, son puestas en lugares donde no se
desea que la humedad en el aire afecte el medio.

Figura 1. Bolsas de slica gel, presentacin comercial.

Desorcin: Cuando cierto solido con un soluto adsorbido alcanza una temperatura
limite, el soluto empieza a ser expulsado. A este fenmeno se le llama desorcin.
Ejemplo: Cuando la slica gel se satura, se lleva a una temperatura de 150C para
expulsar el agua en gran proporcin. La desorcin tambin puede darse al ser puesto el
slido a presiones bajas o ser puesto en contacto con solventes o fluidos a gran
velocidad. La afinidad de un compuesto con un slido es clave en el tiempo de
desorcin.

Si dos compuestos (A y B) se ponen en contacto con un slido, el A es de afinidad alta

con el slido y el B de afinidad media. Al ser lavado el slido con un fluido inerte a gran
velocidad el compuesto B ser expulsado primero que el compuesto A, este fenmeno
se le llama ELUCIN. Este es el principio fundamental de la CG; lo dems consiste en
realizar modificaciones para cambiar los tiempos de elucin.

Absorcin: Las sustancias tienden a ser capturadas por un gas o un lquido al ser
puestas en contacto.

Evaporacin: los compuestos cambian de estado de lquido a vapor, aumentando la

desorcin de estos mismos en el slido y la capacidad de ser fcilmente arrastrados por
un fluido a gran velocidad.

6
El solvente o fluido inerte que arrastra y colabora en la desorcin se le llama fase mvil,
gas de arrastre, gas de acarreo entre otros. Generalmente es un gas inerte aunque en
algunos casos puede ser un lquido. Al solido se le llama fase estacionaria.
Aglomerando estos fenmenos se estructura la CG. Un esquema general se muestra en
la figura 2.

Nota: en algunos casos la fase mvil tambin se le llama al gas con el analito
desorbido.

Figura 2. Los compuestos A y B entran a una cromatografa gaseosa, al final son

separados, existe una fase mvil que ayuda a que los compuestos fluyan.

2.2. Medio de separacin.

La geometra ms prctica para distribuir el slido y garantizar el debido contacto con el

analito, es un tubo de corto dimetro y gran distancia. Inicialmente se usaban tubos con
el slido empacado, pero con el tiempo dicho solido o fase estacionaria se empez a
distribuir de diferentes formas para aumentar la eficiencia de separacin. Inicialmente
este tubo tena un dimetro aproximado de 2 cm y un largo de 2 m, se les llamo
columnas ya que se ubicaban verticalmente y se alimentaba desde la copa. Con el
tiempo estas columnas se hicieron ms largas y de menor dimetro, debido a esto hubo
la necesidad de distribuirlas de forma helicoidal. Existen dos tipos de columnas, las
empacadas y las capilares.

7
 Empacadas: Se construyen con tubo de acero inoxidable, nquel o vidrio. Los
dimetros interiores van de 1,6 a 9 mm. La longitud suele ser inferior a los 3 m. Se
rellenan de un material adsorbente adecuado a las sustancias que se quiere separar.

Capilares: Se construyen con slice fundida. Los dimetros interiores suelen ser de
200-250 m. La longitud suele ser superior a los 20 m.

Existen dos tipos: Empacadas, con partculas slidas que ocupando el total del
dimetro de la columna (micro-empacadas). Tubulares abiertas, con trayectoria para el
flujo y sin restriccin por el centro de la columna. Estas ltimas son las ms utilizadas
actualmente. La distribucin de la fase estacionaria depende del tipo de columna; en la
figura 3 se muestra un ejemplo grfico.

Figura 3. Arriba. Columna capilar, abajo. Columna empacada.

8
La fase mvil por lo general es un gas inerte, los ms usados son el nitrgeno, el helio e
hidrogeno.

2.3. Separacin de compuestos

Ya se ha mencionado que la GC es un mtodo para separar compuestos que se realiza

en una columna que contiene en su interior un slido adsorbente. Los compuestos en
mezcla entran en un extremo de esta columna arrastrados mediante un gas inerte,
estos son adsorbidos por el slido. Luego de modificar variables tales como
temperatura o velocidad del gas, estos compuestos empiezan a ser desorbidos.

El xito de separacin de estos compuestos se basa en que estos eluyan en diferentes

tiempos, no muy lejanos ya que las corridas se volvern interminables ni muy cercanos
ya que los compuestos pueden traslaparse. El tiempo entre la elucin de un compuesto
a otro se le llama tiempo muerto.

El tiempo de elucin de una sustancia no es una constante, es funcin de: la

temperatura, el nmero de compuestos en la mezcla, el tipo de gas, velocidad del gas,
la geometra de la columna y de la fase estacionaria. Debido a esta dependencia en CG
se manipulan dichas variables para modificar el tiempo de elusin. De las anteriores
variables mencionadas, algunas son modificables y otras se deben dejar fijas ya que
resulta poco prctico o difcil variarlas.

En un ensayo se pueden manipular la temperatura de la columna y velocidad del gas; el

gas de arrastre no se puede cambiar, o no es habitual hacerlo ya que implica un cambio
brusco en la deteccin. Realmente la fase estacionaria no se puede cambiar, sino
colocar columnas seguidas pero esto implica el uso de ms de un detector. En la figura
4 se muestra un esquema sobre las variables en la separacin.

9
 Cromatografa de gases (gas-lquido)

Separacin de
compuestos

Fijas Variables de Modificables

control

Tipo de gas de
arrastre Temperatura
columna

Dimetro y longitud
de la columna
Velocidad gas
de arrastre
Fase Variable de
estacionaria respuesta

Orden de
elucin Tiempo de
elucin

Figura 4. Esquema de las variables en la separacin de compuestos mediante CG

Un ejemplo de tiempo de elucin se muestra en la figura 5, donde se usa un gas 1 y un

gas 2, se observa que el gas 2 arrastra ms rpido los compuestos que el gas 1.

La temperatura tambin modifica el tiempo de elucin de un compuesto. En el interior

de la columna cromatografa los compuestos pueden existir en dos fases (lquida y
gaseosa). Claramente cuando un compuesto se encuentra en fase lquida la afinidad
con la fase mvil es muy alta lo cual impedir que este salga, pero facilitara que otros

10
compuestos aun gaseosos eluyan sin problema. En la figura 6 se muestra como la
temperatura puede ayudar a separar dos compuestos.

Figura 5. Efecto del tipo de gas en el tiempo de elucin. Temperatura y velocidad

constate

Figura 6. Efecto de la temperatura en la separacin de dos compuestos. Velocidad y

tipo de gas constante
temperatura4>temperatura3>temperatura2>temperatura1
tiempo4>tiempo3>tiempo2>tiempo1

11
Figura 7. Efecto de la fase estacionaria en el orden de elucin de dos compuestos.
Temperatura, tipo de gas y velocidad constante

El orden de elusin de un compuesto depende solamente de la fase estacionaria y la

cantidad de compuestos en la mezcla. Un ejemplo de orden de elusin se muestra en la
figura 7 donde una mezcla de dos compuestos pasa por una columna con fase 1 y otra
con fase 2. La fase 1 hace eluir el compuesto A primero mientras la fase 2 hace eluir el
compuesto B primero. Se puede observar tambin que la primera tiene ms afinidad
con el compuesto A, mientras que la segunda es un poco ms a fin con el compuesto B.

3. Partes y componentes de la CG.

Un cromatgrafo de gases es un sistema compuesto por diferentes partes y

componentes indispensables para un buen anlisis. A continuacin se describirn los
ms importantes:

12
 Figura 8. Sistema de cromatografa de gases, elementos principales.

Gas de arrastre, Su funcin es transportar los compuestos de la muestra a travs de la

columna, y crear una matriz adecuada para el detector. Un gas portador debe reunir
ciertas condiciones:

Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la muestra como con la fase
estacionaria).
Debe ser capaz de minimizar la difusin gaseosa.
Fcilmente disponible y puro.
Econmico.
Adecuado al detector a utilizar.

Los gases ms usados son el nitrgeno, hidrogeno y helio.

Medidores de flujo, El gas de arrastre debe tener un rotmetro o un control para

regular su flujo, ya que es una variable importante en la cromatografa.

Inyector y medio de inyeccin, en cromatografa de gases no es indispensable que

todos los compuestos se encuentren en fase gaseosa dentro de la columna pero si es

13
necesario que entren en estado gaseoso para garantizar su homogenizacin y poder
ser arrastrados por la fase mvil hasta la columna. Al inyector se le debe controlar la
temperatura por medio de una resistencia elctrica, dicha temperatura debe garantizar
que la muestra este totalmente gaseosa.

En la teora la temperatura de ebullicin de una muestra se debera calcular por medio

de la termodinmica o el empirismo, pero es claro que se necesitan las fracciones
msicas para dicho clculo limitndose este procedimiento. En la prctica la
temperatura que se ajusta en el inyector es aproximadamente 10 a 40 C sobre la
temperatura de ebullicin ms alta. En la figura 9 se muestra las partes de un inyector
convencional.

El medio de inyeccin es un punto crtico ya que la forma en que se inyecta, la

velocidad y la cantidad son indispensables para una buena seal del detector. Para
evitar el error humano se han diseado automuestreadores que facilitan el estilo de
inyeccin y la cantidad exacta a introducir en el cromatgrafo. En la figura 10 se
muestran los dos tipos de inyeccin ms comunes.

Figura 9. Inyector convencional

14
 Figura 10. Izquierda, microjeringas. Derecha, automuestreador

Columna

La columna es el corazn de la cromatografa a de gases, ya que es el lugar donde se

separan los compuestos que se desean identificar. Como se mencion previamente
(pgina 7); las columnas ms usadas son las capilares, aunque an se usan las
rellenas especialmente para la separacin de gases incondensables. En la figura 11 se
muestran la apariencia externa de los dos tipos de columnas.

En la prctica las columnas cromatografcas se reconocen como polares,

medianamente polares o no polares. Una columna se selecciona por parmetros ms
rigurosos y exactos pero generalmente la seleccin de una columna se realiza mediante
su polaridad y las bases de datos de compuestos separados por diferentes columnas
(esa ltima es dada por el fabricante)

15
 Figura 11. Izquierda; columna capilar. Derecha, columna empacada.

En la tabla 1 se muestra las diferentes clases de fases estacionarias ms usadas. Estas

fases inicialmente fueron creadas por una empresa o una persona dndole un nombre
de referencia, pero con el tiempo dems empresas han sacado dicha fase con otro
nombre o una modificacin, bautizndola de diferente forma. Un ejemplo es la fase
polietilenglicol, primero se llam carbowax 20M, despus salieron otras columnas con la
misma fase con nombre tales como DBwax, stabilwax, famewax entre otras. En los
anexos se encuentra una tabla para ver las analogas de columnas entre diferentes
fabricantes.

Horno, este se encarga de elevar la temperatura de la columna, generalmente se

realiza por conveccin forzada y la generacin de calor se da por una resistencia
elctrica. Se puede programar para elevar o bajar la temperatura por escalones.

16
 Tabla 1. Fases estacionarias y parmetros.

Nombre
Temperatura Aplicaciones
Fase estacionaria comercial
mxima (C) comunes
pionero
Fase no polar de uso
general, hidrocarburos,
Polidimetilsiloxano OV-1 350 aromticos,
plurinucleares, drogas,
esteroides, PCBs
Esteres metlicos de
Poli(fenilmetildifenil)siloxano cidos grasos,
OV-3 350
(10% fenilo) alcaloides, drogas,
compuestos halgenos
Poli(fenilmetil)siloxano (50% Drogas, esteroides,
OV-17 250
fenilo) pesticidas, glicoles
Aromticos clorados,
Poli(trifluoropropildimetil)siloxa
OV-210 200 nitroaromaricos,
no
becenos alquisustitutos
cidos libres,
Carbowax alcoholes, teres,
Polietilenglicol 250
20M aceites esenciales,
glicoles
cidos grasos
Poli(dicianoalildimetil)siloxano OV-275 240 poliinsaturados, cidos
libres, alcoholes

Detector, es el componente que se encarga de mostrar una seal del compuesto

separado a la salida de la columna; sin detector simplemente los compuestos se
separaran pero no tendramos una lectura sobre este suceso. El detector mide alguna
propiedad del analito y emite una seal mediante un instrumento de medicin. Un
detector tambin es selectivo, es decir existen compuestos que l no analizara por la

17
simple razn que dicha propiedad en un compuesto eluido no existe. Ejemplo: el agua
se puede detectar por su conductividad trmica pero no por su calor de combustin ya
que esta no es combustible.

Nota: la temperatura del detector debe ser mayor o igual a la temperatura del inyector

Un detector ideal es el que posee:

Adecuada sensibilidad. Lo que constituye una adecuada sensibilidad no se puede

evaluar de forma cuantitativa. Por ejemplo, las sensibilidades de los detectores que
se van a describir difieren por un factor de 107. Aunque todos se utilizan
extensamente y son adecuados en ciertos casos; sin embargo, en algunas
aplicaciones los menos sensibles no resultan convenientes. En general, las
sensibilidades de los detectores actuales se encuentran en el intervalo de 10-8 a 10-15
g de analito/s.

Buena estabilidad y reproducibilidad.

Una respuesta lineal para los analito que se extienda a varios rdenes de magnitud.
Un intervalo de temperaturas de trabajo comprendido desde la temperatura ambiente
hasta al menos 400C.
Un tiempo de respuesta corto que lo haga independiente del caudal.
Alta fiabilidad y manejo sencillo. Hasta el punto de estar a prueba de la impericia de
operadores inexpertos.
Respuesta semejante para todos los analitos, o por el contrario, una respuesta
selectiva y altamente predecible para una o ms clases de analitos.
No destructivo de la muestra.

De hecho, no hay detector que rena todas esas caractersticas, y tampoco parece
probable que pueda llegar a disearse nunca.

Los detectores utilizados en cromatografa de gases son de tipo diferencial, no ofrecen

seal cuando pasa por ellos slamente el gas portador y responden ante alguna

18
propiedad que pueda variar cuando ste se encuentra mezclado con alguna substancia
eluida de la columna. Los detectores usados en cromatografa de gases, pueden
dividirse de forma genrica en detectores universales y detectores especficos; los
primeros ofrecen la ventaja de respoder prcticamente ante cualquier compuesto que
pueda eluir de la columna, no obstante, esta misma propiedad puede convertirse en un
serio inconveniente cuando se procede al anlisis de mezclas muy complejas; en este
ltimo caso, la utilizacin de detectores especficos resulta muy ventajosa ya que,
al responder nicamente frente a un grupo limitado de compuestos, los
cromatogramas que ofrecen resultan muy simplificados.

Entre la gran gama de detectores usados los mas tipicos se describiran textualmente. En
la tabla 2 se enumeran los detectores mas usados y se describen caracteristicas
practicas como la propiedad que mide, su sensibilidad y el carcter.

Detector FID

Los compuestos orgnicos se pirolizan a la temperatura de una llama de H2/aire

produciendo iones y electrones que conducen la electricidad a travs de la llama. La
seal depende del nmero de tomos de carbono que entra en el detector por unidad
de tiempo, por lo que es ms sensible a la masa que a la concentracin. Se aplica a
compuestos orgnicos pero es poco sensible a grupos como carbonilo, aminas,
alcoholes y halgenos. El detector es insensible a gases no combustibles como H2O,
CO2, SO2 y NOX.

Las ventajas de ste detector son su elevada sensibilidad (10-13 g/s), gran intervalo
lineal (107), bajo ruido, resistente. Su inconveniente que es destructivo de la muestra.
Es el detector ms utilizado en cromatografa de gases.

19
 Figura 12. Esquema del detector FID.

Detector TCD

Basado en los cambios en la conductividad trmica de la corriente de gas producidos

por molculas de analito (denominado catarmetro). Consiste en un elemento (Pt, Au,
W) calentado elctricamente cuya temperatura depende de la conductividad trmica del
gas (resistencia). Las conductividades trmicas del H2 y He son mayores que las de
muchos compuestos orgnicos, en presencia de pequeas cantidades de materia
orgnica, la conductividad trmica disminuye y la temperatura del detector aumenta.

ste detector tiene algunas ventajas como son su simplicidad, su amplio rango lineal
(105), y su carcter no destructivo. Su nico inconveniente es su baja sensibilidad (10-8
g/ml).

20
 Figura 13. Esquema del detector TCD

Detector ECD

El efluente pasa sobre un emisor (Ni-63) y un electrn de ste provoca la ionizacin

del gas portador. En ausencia de especies orgnicas se obtiene una corriente
constante, pero en presencia de ellas la corriente disminuye por su tendencia a capturar
electrones. Es muy sensible a compuestos con grupos funcionales electronegativos
como halgenos, perxidos, nitro y quinonas. Insensible a grupos como aminas,
alcoholes e hidrocarburos. stos detectores son altamente sensibles y no alteran la
muestra de manera significativa.

Figura 14. Esquema del detector ECD

21
 Tabla 2. Detectores mas usados y sus caracteristicas

Detectores efecto Sensibles a Carcter

Conductividad No destructivo. Poco
TCD Universal.
termina sensible
Destructivo,
Ionizacin de Compuestos medianamente
FID
flama. orgnicos. sensible, calidad de H2
y O2 media.
Halgenos, No destructivo, muy
Captura
ECD perxidos, nitro y sensible a gas portador,
electrnica.
quinonas. debe tener alta pureza
Destructivo, muy
Compuestos con
sensible para C-N y
Llama alcalina o C-N, C-P y
NPD C-P, calidad de H2 yO2
termoinico. algunos
buena y exacta.
hidrocarburos.
Destructivo, ms
sensible que el FID,
Fotomtrico de Compuestos con
FPD pero menos que el
lama. azufre y fsforo.
NPD, requiere buena
calidad de gases.
Compuestos C-H.
Mayor sensibilidad No destructivo, ms
FD Fotoionizacin.
aromticos, sensible que el FID.
menos cetonas.
Destructivo, funciona
por reaccin de un gas
Compuestos
Conductividad oxidante o reductante,
ELCD halgenos, con
electrlica seca. temperaturas de
nitrgeno y azufre.
detector alcanzan los
1000C
Destructivo, se debe
Emisin
AED C-N usar helio. Muy sensible
atmica.
y el ms nuevo.
MS Espectrometra
Universal. Destructivo.
de masas.
Infrarrojo por
FTIR transformada de Universal. No destructivo.
Fourier.

Interfaz detector usuario, es el que se encarga de mostrar las seales del detector en
forma ordenada. Antiguamente las interfaz era una impresora directa que a medida que

22
el analito era detectado el resultado era emitido en papel. Hoy en da la interfaz
detector-usuario se conecta a un computador donde mediante un software
especializado se emiten las seales y se puede trabajar con mucha ms eficiencia ya
que las herramientas de clculo se encuentran en el mismo programa.

La interfaz nos muestra el resultado de un anlisis mediante un cromatograma. Un

cromatograma es un medio en donde se muestran los compuestos mediante una seal
proporcional a su concentracin o masa, en la figura 15 se muestra como las seales
se emiten a medida que eluye el analito.

Figura 15. Dos compuestos recorren una columna a media que el tiempo fluye; cada
vez que un analito es eluido en el cromatograma se emite una seal.

En la figura 16 se muestra un cromatograma representativo. Un cromatograma esta

compuestos por dos ejes, Y y X. En el eje Y se muestra la magnitud de la seal del

23
detector (ejemplo: milivoltios). En el eje X se muestra el tiempo (ejemplo: minutos,
segundos). Existe una lnea base la cual es constante en el tiempo si no est eluyendo
algn analito, esta lnea en teora no se debe modificar en los tiempos muertos ya que
solo est pasando el gas de arrastre, pero en algunas ocasiones muestra pequeas
perturbaciones debidas a las impurezas encontradas en los gases de arrastre o en los
de combustin H2 y aire (tratndose de un detector que necesite llama) Debido a esto
los gases deben ser lo ms puros posibles.

Figura 16. Cromatograma representativo

Cuando eluye un analito la seal se ve representada como un pico. Estos picos deben
ser en lo ideal deben ser de base angosta y de altura grande, sin hombros, sin ruido y lo
ms claro posibles. Esto es debido a que si se desea cuantificar un pico no reproducible

24
en forma no sirve. Existen compuestos que emiten seales caractersticas como
pequeas colas despus de la elucin

En ocasiones pueden aparecer seales dobles errneas debidas a una mala inyeccin
o cantidad inyectada. En la figura 17 se muestran cmo deben ser las seales y
algunas de las tantas seales errneas, tales como aletas de tiburn debidas
generalmente a compuestos en degradacin, colinas, por mala inyeccin o mal mtodo.

Nota: la importancia de una buena inyeccin se ve representada en el cromatograma ya

que todas las imperfecciones sern plasmadas aqu.

Figura 17. Estilo de picos generados por compuestos eluidos.

25
4. Pasos para realizar una cromatografia de gases.

Ya se han nombrado las propiedades y la funcin de un CG, ahora se mostrara como

todas estas partes y funciones se aglomeran en un solo anlisis.

4.1. Preanlisis y pretratamiento de la muestra.

Lo primero es identificar la muestra y ordenar la informacin que se tiene de esta, tal

como: viscosidad, solubilidades, posibles compuestos en la mezcla, punto de
vaporizacin total de la muestra, material coloidal, color, acidez, solidos suspendidos,
tendencia corrosiva, estabilidad trmica, estabilidad qumica. Si no se conocen estas
propiedades es necesario realizar pruebas para identificarlas, de manera que se pueda
calificar la muestra para un anlisis en cromatografa de gases.

El rechazo de una muestra para analizar se puede dar por:

Degradacin trmica de mnimo uno de los compuestos en la mezcla.

Elevado punto de ebullicin total de la muestra >400C
Muestra solo soluble en solventes muy corrosivos.
Solidos suspendidos o disueltos (NaOH, sales, etc)
Muestra muy corrosiva aun disuelta.

Inicialmente se debe tener conocimiento de los compuestos posibles, sino se debe

tener un lista de las posibles sustancias existentes, claro est, no deben ser ms de 3 o
4 (por experiencia) ya que existen sustancias que eluyen al mismo tiempo y las mismas
condiciones de operacin. Si se desconoce totalmente los posibles compuestos de la
mezcla es necesario realizar una caracterizacin previa mediante tcnicas analticas
para identificar la posible naturaleza de dichos compuestos. Tcnicas tales como FTIR,
derivatizaciones, extracciones Liq-liq son empleadas. Nota: es necesario conocer el tipo
de compuestos que se desean analizar, ejemplo: aldehdos, cetonas, pesticidas,
aminas etc.

26
La tcnica ms usada para muestras con compuestos desconocidos (pero conociendo
el tipo) es la cromatografa de gases acoplada a espectrometra de masas. Esta tcnica
nos dice el posible compuesto que es cada pico, pero claramente se debe soportar con
otras tcnicas para darle ms peso.

Antes de usar el CG la muestra se debe diluir en un solvente seleccionado por ser

inerte con los compuestos presentes y con la fase estacionaria, tambin debe ser
voltil. La muestra se diluye a una concentracin conocida, se filtra, se dosifica en tubos
de ensayo y finalmente se almacena en condiciones controladas (20C, 1 atm).

La derivatizacin es un mtodo que se le aplica a muestras no analizables directamente

por CG para volverlas aceptables.

Entre las ms usadas estn:

Sililacin.
Acilacin.
Alquilacin.

4.2. Establecimiento de parmetros externos.

Conociendo la solubilidad o la polaridad de la muestra se elige la columna

cromatografa basndose en catlogos (anexos) o en tablas como la 1. Es posible
adaptar dos o ms columnas a un cromatgrafo (dependiendo del diseo del
fabricante). El gas de arrastre se elige dependiendo del detector a usar. El detector se
escoge dependiendo de la naturaleza de la muestra. En la tabla 2 se resumen los
detectores.

Nota: La tabla 2 sirve como primer paso en el momento de seleccionar un detector, se

deben consultar otros medios ms rigurosos para seleccionarlo.

27
4.3. Establecimientos de parmetros de separacin.

Una vez seleccionada la columna, el detector y el gas de arrastre se establecen los

parmetros de separacin los cuales son:

Temperatura del inyector: Como se ha mencionado antes, la temperatura debe ser

una a la cual se asegure que la muestra se ha vaporizado en su totalidad. max a
400C

Relacin de Split: Se refiere a la fraccin de la muestra inyectada que se va a

desechar, que no va a entrar a la columna; esto se realiza ya que una cantidad muy
grande puede arrojar seales extraas como las mostradas en la figura 17. Si se
desea analizar toda la muestra inyectada se ajusta el cromatgrafo en Splitless. En la
figura 18 se muestra el cambio mecnico del inyector para modificar Split a Splitlles.

Temperatura en columna o rampa: cuando se pretende analizar una muestra con 2

o 3 compuestos con puntos de ebullicin distantes, el cromatgrafo se puede operar
isotrmicamente. Pero si se trata de diversos compuestos se debe realizar una
rampa de temperatura para cambiar los tiempos de elusin y evitar que los picos
salgan traslapados, muy cercanos o que el tiempo de cada ensayo dure demasiado.
En la figura 19 se muestra la diferencia entre un mtodo con y sin rampa. Al
establecer una rampa se establece implcitamente el tiempo del ensayo.

Temperatura del detector: Esta temperatura debe ser mayor o igual a la del
inyector.

Caudal del gas de arrastre: se fija segn referencias, de no tenerlas, se ajusta a

ensayo y error.

28
 Caudal de aire, hidrogeno y gas amortiguador: estos parmetros los debe fijar
una persona con experiencia en CG, de lo contrario mirar manual de usuarios
shitmadzu.

Spl Splitl

Figura 18. Izquierda, inyector configurado para trabajar en Split. Derecha: inyector
configurado para trabajar en Splitless.

Cromatogramas: Al final de cada prueba se obtienen los resultados. Si el

cromatograma presenta problemas como picos amorfos, traslapados, fusionados o
perturbacin de la lnea base, se deben modificar las condiciones establecidas tales
como: Velocidad del gas, Rampa, Split y Cantidad de inyeccin. En la prctica
generalmente se sigue este procedimiento para establecer un mtodo (Ensayo y
error). En el peor de los casos se debe cambiar la columna elegida.

En la figura 20 se muestra un algoritmo para establecer un ensayo cromatogrfico

exitoso.

29
Figura 19. Arriba, izquierda: cromatograma de un numero de compuestos que eluyen isotrmicamente, derecha: perfil de
temperatura con el tiempo. Abajo, izquierda: cromatograma de un numero de compuestos que eluyen en rampa, Derecha:
rampa de temperatura.

30
 Muestra

Pre anlisis
muestra
Si

Cumple con los

parmetros?

No se puede analizar
Si No Derivatizacin No por CG

Se establece el
detector, columna y gas
Si No

Se puede mejorar el anlisis

Se establecen condiciones cambiando la columna, el gas o el
de separacin detector?

Si No
Cromatograma

Cumple con las Se puede mejorar la

No
caractersticas de separacin cambiando el
aceptabilidad? mtodo?

Si

Se cualifica y Caracterizacin de la
cuantifica muestra

Figura 20. Algoritmo para establecer un anlisis cromatogrfico exitoso.

31
4.4. Anlisis de resultados

Una vez establecido el cromatograma que cumpla con los estndares esperados, se
procede a analizarlo. Primero se debe reconocer a que compuesto corresponde cada
pico, despus a cuantificarlos.

Nota: si el cromatgrafo est acoplado a un espectrmetro de masas, FTIR o

resonancia magntica nuclear, estos se encargaran de reconocer con un margen de
error el compuesto que es cada pico.

4.4.1. Cualificacin

La cualificacin en CG se basa ms bien en comprobacin, la cromatografa de gases

es una tcnica para identificar compuestos esperados; debido a esto en pginas
anteriores se ha mencionado que si se desconoce totalmente los compuestos de la
mezcla se deben realizar tcnicas analticas para identificarlos. El primer paso es
realizar un anlisis por tiempos de retencin y luego por superposicin de picos.

Tiempos de retencin, bajo un mismo mtodo (columna, detector y rampa) un

compuesto inyectado individualmente en varias ocasiones debe eluir al mismo tiempo o
en un tiempo muy cercano ya sea inyectado en mezcla. Bajo este principio se basa el
anlisis por tiempos de retencin. Una mezcla donde existe posiblemente un
compuesto x; si al inyectar el presunto compuesto individualmente (independiente de su
concentracin) este eluye en un tiempo cercano o exacto al de un pico existente en el
cromatograma, es el primer indicio para pensar en la existencia de dicho compuesto en
la mezcla. Si por el contrario este compuesto eluye en tiempo ajeno a los del
cromatograma, se entendera que este no existe. En la figura 21 se muestra un ejemplo
grfico.

32
Figura 21. Izquierda, cromatograma de la muestra origina, Derecha, cromatograma del
compuesto x inyectado individualmente. El tiempo de elucin coincide.

Superposicin de picos, en el anlisis por tiempos de retencin se tiene un indicio de

que el compuesto X podra existir en la mezcla; en esta tcnica se pretende reforzar el
anterior anlisis. Esta tcnica se basa en agregar pequeas cantidades del compuesto
X a la mezcla original, si este compuesto realmente es el presunto pico al realizar un
ensayo dicho pico crecer, como se muestra en la figura 22. Se debe realizar este
procedimiento unas 4 veces para verificar exactamente que el pico este creciendo
proporcional a la mas agregada

Figura 22. Izquierda, cromatograma de la muestra original. Derecha, cromatograma de

la muestra con una pequea cantidad del compuesto x.

33
Nota: si el mtodo cromatografico se cambia dejando la misma columna, el orden de
elucin de los compuestos es el mismo.

4.4.2. Cuantificacin

El anlisis cuantitativo se basa en la comparacin de la altura o el rea del pico de un

compuesto eluido con la de un patrn inyectado bajo las mismas condiciones
cromatogrficas establecidas. El uso del rea o la altura depender de las
caractersticas del pico. En la actualidad el uso de computadores acoplados facilitan la
integracin de rea, aumenta la precisin del clculo.

Para lograr un anlisis cuantitativo de los componentes separados de una muestra,

existe una gran variedad de mtodos entre los cuales se destacan:

Calibracin absoluta
Mtodo del estndar interno.
Normalizacin de rea (con y sin factor de respuesta)

Cada mtodo tiene sus ventajas y desventajas.

Calibracin absoluta

Para realizar el clculo de composicin, se inyectan masas exactas del componente

puro al cromatgrafo y se determina el rea. Se realiza un grfico relacionando el rea
de pico con la masa (figura 23), se obtendr entonces una curva de calibracin que
debe ser lineal y pasar por el origen. Los puntos en la grfica pueden tener una
tendencia lineal o polinomial, siendo la primera la ms comn. Se debe aplicar un
mtodo de linealizacin (mnimos cuadrados) para obtener una tendencia y una
ecuacin que la describa.

34
La ecuacin de esta curva vendr dada entonces por

= (ec 1)

Donde A= rea del pico, m= pendiente, W i= masa del compuesto a cuantificar.

Figura 23. Curva de calibracin absoluta. Eje x, masa del compuesto en anlisis. Eje y:
rea generada por el pico del compuesto en anlisis.

Entonces se inyecta una masa o volumen exacto de la muestra y se determina el rea

del componente a analizar, por ejemplo el componente i.

Calculo para fraccin msica. Wtotal: masa total de la muestra inyectada

% = 100 (ec 2)

% = 100

35
Calculo para concentracin. Vtotal: volumen total de la muestra inyectada.
Ci: concentracin del analito.

= (ec 4)

Las desventajas de este mtodo son que la inyeccin de la muestra debe ser exacta y
que las condiciones del sistema no deben cambiar de una inyeccin a la otra. Las
inyecciones exactas se logran ms con un sistema automatizado de inyeccin o con el
uso de vlvulas de inyeccin manuales con lazo de volmenes exactos como el caso de
cromatografa liquida de alta resolucin

Mtodo del estndar interno

Este mtodo es conocido como calibracin relativa o indirecta. Primero que todo se
debe escoger un compuesto voltil que cumpla con estas caractersticas. A este
compuesto se le llama estndar interno.

Debe eluir en un tiempo ajeno a los otros picos

Debe eluir cercano al pico de inters
Debe usarse una concentracin similar al pico de inters.-
Debe ser de las mismas caractersticas estructurales.

Nota: Se debe crear una muestra sinttica que contenga una concentracin conocida
del compuesto i y del estndar interno, se ajustan con el solvente seleccionado.
Mediante pruebas preliminares en el cromatgrafo se debe encontrar una concentracin
del estndar interno en la cual el pico que genere tenga un rea similar a la del
compuesto de inters (compuesto i).

36
Conociendo la concentracin ideal del estndar interno, se escoge un intervalo corto de
concentracin del patrn (se le llama al compuesto i puro, grado analtico o HPLC).

Ejemplo: Se encontr una concentracin ideal de estndar interno de 500 ppm, se vara
el patrn de 100 ppm a 1000ppm, de 100 en 100. En la tabla 3 se observa el orden de
las pruebas. Equivaldran a 10 puntos.

Concentracin patrn Concentracin Estndar interno

100 500
200 500
300 500
400 500
500 500
600 500
700 500
800 500
900 500
1000 500

Tabla 3. Ejemplo de cmo establecer pruebas para realizar una curva de calibracin
con el mtodo del estndar interno.

Despus de tener el nmero de pruebas segn el intervalo escogido, se crean las

muestras sintticas (patrn, estndar interno, solvente) y luego se inyectan al
cromatgrafo con el mtodo establecido. Se apuntan las reas generadas por el patrn
y el estndar, luego se divide el rea del patrn por el rea del estndar.
Nota: Cada inyeccin se debe repetir hasta que la relacin de reas ser reproducible.
Ar: relacin de rea, Cr: relacin de concentraciones.

= (ec 5)


= (ec 6)

37
La relacin de rea (Ar) se grafica junto a la relacin de concentraciones (Cr) como se
muestra en la figura 24.

Figura 24. Curva de calibracin por estndar interno. Eje x: relacin Cr, Eje y: relacin
Ar

Los puntos graficados se linealizan con ayuda de un software o mediante el mtodo de

mnimos cuadrados; se obtiene una ecuacin (por lo general con la forma y=mx+b)

= (ec 7)

Luego se crea una muestra con la concentracin del estndar interno fijada, y una
concentracin de la muestra real en la cual se garantice que el compuesto i tendr una
relacin de rea dentro del rango escogido, si es necesario se aade solvente para
ajustar el aforo. En la figura 25 se muestra un procedimiento grfico para crear la
muestra de anlisis, los valores indispensables para el anlisis son el volumen de la
muestra medida que se aade a la mezcla de anlisis, la masa y el volumen de la
muestra para anlisis.

38
 Figura 25. Procedimiento grafico para realizar una muestra para anlisis. Los valores
en rojo son los que se buscan. Los dems se conocen. V1: volumen de la muestra
agregada al baln de anlisis, m1 es la masa de la muestra medida.

Al inyectar la mezcla para anlisis, se obtiene una relacin de reas del compuesto i y
del estndar interno, despejando la ecuacin 7.

Cpatroni=Ccompuestoi
Apatroni=Acompuestoi


= (ec 8)

Ahora se conoce la concentracin del compuesto i en la mezcla para anlisis, para

conocer la concentracin real se aplica la ecuacin 9:

2
1 = 2 (ec 9)
1

39
Donde V1: volumen de muestra agregada al baln de anlisis, V2: volumen baln de
anlisis, C2: concentracin hallada por cromatografa de gases. C1: concentracin real
del compuesto i en la muestra original.
Si se desea calcular la fraccin msica se aplica la siguiente ecuacin:

0 1
= (ec 10)
1

La ventaja de este mtodo es que es independiente del volumen de inyeccin de

muestra, lo que es sumamente importante para aquellas tcnicas cromatografas que
utilizan un mtodo de introduccin de muestra no automatizado como por ejemplo el
uso de jeringas de inyeccin en cromatografa gaseosa.

Normalizacin de rea

La normalizacin de rea es un medio para establecer el porcentaje de cada

componente en la muestra. Se calcula dividiendo el rea de cada componente entre el
rea total y multiplicando por 100%, es decir:

% = 100 (ec 11)

%Ai=%mi (fraccin msica)

Este trmino es independiente del volumen de inyeccin de muestra y debe cumplirse

que todos los picos deben estar separados. Sin embargo, esta ecuacin solo se puede
aplicar para una serie homologa de compuestos de punto de ebullicin muy parecidos y
con similares respuestas del detector, algo ms acorde con la realidad es usar el factor
de respuesta. Sin embargo el factor de respuesta depende del tipo de detector utilizado;
el clculo ms sencillo se aplica en un detector de ionizacin a la llama y este es el que
se explicara a continuacin.

40
Factor de Respuesta (clculos para el FID), Cada detector tiene su forma particular
de respuesta para cada analito, es por ello, que la composicin de cada componente en
la muestra no se puede relacionar directamente a menos que se unifique la respuesta
del detector para cada componente. La respuesta de un detector de ionizacin a la
llama (FID) es independiente de la temperatura, del flujo de gas de arrastre y de la
velocidad de flujo. Esto hace ms sencillos los clculos, ya que se puede realizar
relaciones directas de peso de muestra, lo cual contribuye a que este sea el detector
ideal para el anlisis cuantitativo. El clculo de factor de respuesta se realiza
experimentalmente de la siguiente forma. Se pesa una cantidad exactamente conocida
del patrn del analito a estudiar, se determina su rea en el cromatgrafo y luego se
realiza el clculo,

() = (ec 12)

Donde mi: masa inyectada, Ai: area del analito, (Fr)i: factor de respuesta del compuesto
i
As sucesivamente para todos los componentes en la muestra. Una vez conocido el
factor de respuesta de cada componente en la muestra, se puede realizar el clculo de
normalizacin de rea con factor de respuesta.

()
% = (ec 13)
()

Es de hacer notar, que en algunos libros se utiliza el factor de correccin o la

sensibilidad del detector para realizar estos clculos, en ese caso observara las
siguientes ecuaciones.

() = (ec 14)

Donde Fc es el factor de correccin

41
y para rea:

()
% = (ec 15)

()

Note que al final las reas corregidas sern iguales, solo se invierte los dividendos y
productos. Eso s es sumamente importante que no mezcle las dos ecuaciones o se
confunda en los calculas, ya que los resultados sern errneos.

5. Operacin del cromatgrafo de gases shimadzu.

Nota: En este captulo se enunciaran los aspectos ms importantes relacionados con la

operacin del cromatgrafo de gases shimadzu GC-14B. Si se desea realizar un
estudio ms profundo de este equipo, lase el manual de usuario de cromatgrafo.

5.1. Parmetros y partes.

El cromatgrafo de gases (gas-liquido) Shimadzu serie GC-14B est diseado para

realizar anlisis con inyeccin manual, la mxima temperatura de operacin es de
400C, se debe operar en una temperatura ambiente de 10C-30C y una humedad
relativa de 50-60%. Equipado con un detector FID.

Horno de la columna
Rango de temperatura -80 a 399C
Velocidad de calentamiento 0- 40C/min
Tiempo para mantener una temperatura 0-655 min
constante
Numero de velocidades programables 5

42
Velocidad de enfriamiento: 399C a 100C en 9 minutos con una temperatura ambiente
de 25C

5.1.1. Partes

En la figura 26 se muestra el aspecto externo del cromatografo de gases y sus

respectivas partes. Mediante el control de vlvulas de aguja se regula el flujo de los
gases de arrastre, gas de amortiguacin, hidrogeno y aire.

Figura 26. Aspecto externo del cromatgrafo de gases shimadzu, sus partes ms
importantes se sealan.

43
Al abrir la puerta del horno la apariencia es como observa en la figura 27. En su interior
se instala la columna, solo cuando el equipo este sin operar. Una abrazadera ayuda
sostener la columna. El calentamiento se realiza mediante una resistencia elctrica y la
distribucin de calor mediante un ventilador. La puerta se encuentra aislada mediante
un textil aislante.

5.1.2. Instalacin columna

La columna se instala mediante una abrazadera de 3 brazos, se afloja desde el centro

con una llave de peston. La abrazadera se ajusta al esqueleto de la columna y
mediante un tornillo se ajusta al cromatgrafo. En la figura 27 y 28 se muestra como
Debe ir la columna puesta en el horno.

Figura 27. Interior del cromatgrafo, columna instalada. Detrs de la malla se encuentra
el ventilador y la resistencia.

44
 Figura 28. Esquema columna/inyector/detector. A: 35mm, B= 75mm

Se le ajustan las frulas cuidando no fracturar la columna, despus de colocar las

frulas se deja una distancia de 50 mm a la izquierda (entrada al inyector) y 100mm a la
derecha (entrada al detector). Se corta la punta izquierda de manera que la distancia
entre la frula y el extremo sea de 35mm, se realiza lo mismo en la punta derecha pero
la medida debe ser de 75mm, en la figura 28 se muestra grficamente (A=35mm y
B=75mm).

Se colocan las puntas modificadas en su lugar y se ajustan los racores para cerrar las
frulas, luego afloje de nuevo el racor que entra al detector y deje ese extremo suelto.
Abra paso al gas de arrastre, deje unos 20 minutos para que purgue el sistema. Luego
coloque el extremo derecho de la columna dentro de un vaso con agua destilada o
miliq; espere a que haya burbujeo, sino no sucede se entiende que la columna esta

45
tapona en alguno de sus extremos, repita el procedimiento anterior. En la figura 29 se
muestra un ejemplo grfico.

Figura 29. Procedimiento grafico para verificar que la columna no este taponada.

Una vez se comprueba que el gas fluye, se cierra el gas y se instala de nuevo el
extremo derecho al cromatgrafo. El ajuste del Split o Splitless se realiza moviendo una
perilla ubicada en el extremo superior del cromatografo como se observa en la figura
30.

Figura 30. Control del Split, perilla blanca.

46
5.2. Encendido del cromatgrafo.

Nota: Aqu solo se describir el procedimiento bsico, se entiende que los gases y los
rangos de manejo ya se deben haber estandarizado por un profesional. Si necesita ms
informacin mire el manual de usuario shimadzu.

En la figura 31 se observa el botn de encendido. Primero se verifica que ningn otro

botn este presionado, luego se enciende el cromatgrafo. En el teclado se presiona
una sola vez el botn START, en la figura 33 se muestra el teclado del CG., se ajusta el
horno a 50C menos que la temperatura de sangrado de la columna de la siguiente
forma:

Se ajusta la temperatura a 241C (ejemplo), puede ser cualquier otra temperatura no

mayor a 400C. Luego se enciende el gas de arrastre y se ajusta el flujo.

Figura 31. Panel de encendido. Las luces de la derecha se encienden cuando una de
sus partes est funcionando. (Col: columna, Inj: inyector, Det: detector, Aux1:
resistencia auxiliar 1, Aux2: resistencia auxiliar 2, TCD, detector tcd)

Nota: el cromatgrafo de gases no posee un rotmetro como tal, el flujo se ajusta

mediante la presin del gas en el equipo, si se trata de nitrgeno se usa una tabla en la
puerta del cromatgrafo para el aire, es una aproximacin aceptable.(figura 32)

47
 Figura 32. Tablas de flujo del aire y el hidrogeno.

Luego se presiona el botn on/off de resistencia, de color verde traslucido (figura 31)

Con la siguiente combinacin monitorea la temperatura del horno

Se espera que llegue a la temperatura esperada, y se deja por 3 horas a esta

temperatura, esto se realiza para fundir la frula y evitar que se produzcan fugas.

Nota: No cierre el gas de arrastre mientras el cromatgrafo este en operacin! siempre

debe estar fluyendo gas por la columna, ya que sin l la temperatura funde el interior.

48
Figura 33. Teclado externo del cromatgrafo de gases.

5.3. Inicio de operacin.

Nota: el cromatgrafo tiene muchas aplicaciones y cambio de parmetros, en este

manual solo se explicaran los ms relevantes e indispensables para realizar una
corrida. No cambie parmetros sin conocer ya que podra desconfigurar el equipo!

Se explic como prender el equipo e instalar una columna. Partiendo desde el punto
que la columna est instalada y los gases conectados se explicara la operacin.

5.3.1. Encendido de Resistencias, Detector, y Gases.

El encendido de la columna se realiza como se explic anteriormente. Se encienden las

resistencias con el botn verde traslucido, se activa el detector con el botn largo (figura
34). No presione aun START.

Se da paso al gas de arrastre, se ajusta con las vlvulas ubicadas a la derecha del
controlador de flujo.
Se da paso al hidrogeno y al aire, se ajusta segn los parmetros establecidos.

49
 Figura 34. Panel del detector FID.

Se ajusta la temperatura inicial de la columna como se explic con anterioridad, se

recuerda que la temperatura de la imagen es un ejemplo grafico

Se ajusta la temperatura del inyector a la cual desea trabajar.

Se ajusta la temperatura del detector a la cual desea trabajar:

Se Presiona la Tecla START.

Se Monitorea la temperatura de la columna, el inyector y el detector. En la pantalla
se, muestra la temperatura actual, identifquelo mediante un punto que parpadea.

50
 Para proteger la columna de un posible cambio de temperatura que supere su lmite,
se programa el cromatgrafo para que no supere dicha temperatura y se neutralice si
llegase a suceder. A continuacin se muestran las teclas que debe presionar
exceptan la temperatura (ejemplo).

Para cambiar la sensibilidad del detector dado el caso que sea necesario se
presiona:

Los nmeros validos son 0,1, 2 y 3 siendo la ultima la mxima sensibilidad. (ver figura
34)

51
5.3.2. Programacin de rampas.

Para explicar cmo crear una rampa en el cromatgrafo, se realizara mediante un

ejemplo grfico, en la figura .35 se muestra una rampa que se desea manejar.

Figura 35. Ejemplo de rampa para separacin X compuestos.

Primero se establece la temperatura inicial de la columna:

Despus se establece el tiempo inicial de la columna:

52
 Luego se introducen el total de incrementos en la rampa (se pueden introducir hasta
5)

Una vez introducidos los incrementos, se programan las temperaturas al final de

cada incremento.

Despus se introduce cuanto duraran estas temperaturas constantes.

De esta forma se introduce una rampa al cromatgrafo.

Nota: Si el hidrogeno y el aire estn abiertos sin ejecutar una corrida, se recomienda
cerrar las vlvulas mientras realiza la programacin.

53
5.3.3. Inicio de un ensayo.

Una vez programado el mtodo cromatogrfico que incluye:

Velocidad del gas de arrastre.

Rampa.
Temperatura del inyector.
Temperatura del detector.
Hidrogeno y aire ajustados.
Columna instalada.
Muestra preparada.
Jeringa limpia.

Se prende la llama con un fosforo, la manera para verificar que la llama este encendida
es colocando un tubo de ensayo cerca a la llama, si el vidrio se empaa es significado
que est encendida, al no empaarse es significado que est apagada.

Se enciende el equipo peaksimple (rectangular, de color blanco. Si el bombillo rojo esta

encendido el equipo lo esta tambin)

Se enciende el computador y se abre el programa peaksimple, como se explica a

continuacin:

5.3.4. Manejo del software peaksimple.

La programacin del mtodo cromatogrfico se debe de hacer tanto en el panel del

cromatgrafo como en el programa peaksimple, de lo contrario, no se obtendr un
cromatograma real de la corrida ejecutada debido a que los tiempos de elucin no
sern los correctos, perdiendo tiempo y materiales.

54
A continuacin se explicarn los pasos bsicos necesarios para programar un mtodo
cromatogrfico en el Software peaksimple.

Abriendo el peaksimple y conociendo su interfaz.

Para abrir el peaksimple basta con hacer doble click en el icono que est en el escritorio
de la siguiente forma:

Una vez se ingresa al programa aparecer una interfaz similar a la que se ilustra en la
Figura 36.

Figura 36. Interfaz del peaksimple.

55
Las caractersticas bsicas de esta interfaz son:

Barra de herramientas: Esta se encuentra en la parte superior de la interfaz (ver

Figura 37) y en ella se encuentran las pestaas:

File: al ingresar en esta pestaa se encuentran las opciones generales de

guardado, impresin y configuracin de impresin.

Edit: Es una de las pestaas que ms se usa, ya que en ella se encuentra los
links channels y manual integration que se utilizan para la programacin del
mtodo y clculo manual de reas bajo la curva del cromatograma
respectivamente. Una explicacin ms detallada de estos links se har ms
adelante.

View: en esta pestaa se encuentra la opcin results donde una vez terminada
la corrida, se puede observar los resultados de tiempos de elucin y reas bajo la
curva de todos los picos obtenidos en el cromatograma.

Accesos rpidos: son aquellos que se encuentran debajo de las pestaas

mencionadas y se representan con iconos como el de un disquete, una
impresora, semforos enumerados del 1 al 4, etc. Al posicionar el cursor sobre
cada uno se desplegar una breve explicacin de la funcin de cada botn, as
que recomendamos que el usuario conozca la funcin de cada uno antes de
iniciar una corrida experimental por primera vez.

Figura 37. Barra de herramientas del peaksimple.

56
Botones de desplazamiento sobre el cromatograma: En la Figura 38 se ilustra su
ubicacin y al igual que con los de acceso rpido, se ilustra una breve explicacin de su
funcin cuando se ubica el cursor sobre ellos.

Figura 38. Botones de desplazamiento en el cromatograma.

Programando un mtodo cromatogrfico por primera vez.

Tomaremos como ejemplo la programacin del siguiente mtodo cromatogrfico:

Temperatura inicial: 60C

Tiempo de retencin a la temperatura inicial: 3 min.
Primer incremento de temperatura: 10C/min
Primera temperatura final: 100C
Tiempo de retencin a la primera temperatura final: 2 min.
Segundo incremento de temperatura: 5C/min
Segunda temperatura final: 150C
Tiempo de retencin a la segunda temperatura final: 3 min.

57
 Figura 39. Mtodo cromatogrfico de ejemplo.

A continuacin se ilustran los pasos necesarios para programar el mtodo ejemplo en el

peaksimple:

a) Ir a la barra de herramientas y hacer click en la pestaa Edit para desplegar el

submen, a continuacin hacer click en la opcin Channels.

Figura 40. Ingreso al panel channels.

58
b) Una vez en Channels se debe de ir a la opcin Temperature del Channel 1, que es
donde est instalado el detector. Aparecen hasta 6 canales debido a que el
software puede manejar 6 detectores conectados en lnea.

Figura 41. Ingreso al panel Temperature.

c) En el link Temperature se despliega un panel similar al que se ilustra en la Figura

42, en donde para iniciar la programacin del mtodo damos click en Add.

Tambin hay otras opciones como Change (si se quiere cambiar algo del mtodo ya
programado), Remove (para borrar alguna parte del mtodo programado), Load y
Save (para guardar y cargar algn mtodo ya realizado) y Clear (para borrar todo el
mtodo insertado en el software). Se recomienda que el usuario ensaye el
funcionamiento de cada una de las opciones antes de iniciar una corrida
experimental por primera vez.

59
 Figura 42. Panel cannel temperatura control.

d) La programacin del mtodo cromatogrfico se hace por secciones, la primera que

se ejecuta es la referente a las condiciones iniciales de la columna (Temperatura,
tiempo de retencin y primera rampa).

Basndonos en el mtodo ejemplo mencionado, llenamos el panel que se despliega

al ingresar a la opcin Add con la siguiente informacin y le damos click en O.K (ver
Figura 43 como ejemplo):

Initial temperature: 60 deg

Hold for: 3 min

Then ramp at: 10 deg/min

Until temperature is: 100 deg

60
 Figura 43. Ingreso de la primera seccin del mtodo cromatogrfico.

e) Despus de ingresar la primera parte del mtodo, aparecer una grfica de

referencia del mtodo programado en el panel de channel temperature control,
esta imagen sirve de gua para ver hasta que parte del mtodo se ha programado.

Figura 44. Imagen de la programacin de la primera parte del mtodo

cromatogrfico programado.

Para programar la parte faltante del mtodo volvemos a darle click en Add.

61
f) Como ya se adicion una parte del mtodo, la nueva temperatura inicial ser la
temperatura final programada en la seccin anterior, es decir, sera de 100C con
base en el mtodo ejemplo.

Los nuevos parmetros a programar son los siguientes:

Initial temperature: 100 deg

Hold for: 2 min

Then ramp at: 5 deg/min

Until temperature is: 150 deg

Figura 45 Imagen de la programacin de la segunda parte del mtodo

cromatogrfico programado.

Al hacer click en O.K aparecer el nuevo segmento del mtodo programado.

62
 Figura 46. Panel de channel temperatura control con imagen gua del mtodo
programado

Por ltimo, es necesario programar el tiempo de retencin a la temperatura final de

150C, para esto se vuelve a dar click en Add

g) La ltima seccin del mtodo por programar es el tiempo de retencin a la

temperatura final de 150C, para esto se adiciona en el peaksimple los siguientes
parmetros:
Initial temperature: 150 deg
Hold for: 3 min
Then ramp at: 0 deg/min
Until temperature is: 150 deg

63
 Figura 47. Panel de channel temperatura control con imagen gua de la ltima
seccin del mtodo programado

Al colocar el valor de 0 en la rampa, se le dice al software que el paso es isotrmico,

con lo que se concluye la programacin del mtodo ejemplo en el programa.

Para comprobar que las partes del mtodo estn completamente programadas basta
con observar la imagen de referencia que da el software en el panel channel
temperature control como se ilustra a continuacin.

64
 Figura 48. Mtodo ejemplo totalmente programado.

Finalmente terminada la programacin del mtodo se hace click en O.K de la ventana

channel temperature control. Con esto se termina de insertar el mtodo
cromatogrfico en el software.

Modificando parmetros de deteccin de picos cromatogrficos.

Despus de programar el mtodo de anlisis y antes de comenzar una corrida

experimental, es bueno definir la sensibilidad del software para la identificacin de
picos en el cromatograma, es decir, definir bajo qu condiciones de rea bajo la curva
el software toma un pico como un nuevo componente o simplemente como un ruido.

Esta especificacin se hace yendo a barra de

herramientas>Edit>Channels>integration. All se despliega un nuevo panel llamado
Channel integration 1, en donde a travs del parmetro Area reject se puede
configurar la sensibilidad del software. Picos con reas inferiores a la configurada no se
tomarn como picos, por lo que no sern reportados en los resultados.

65
Finalizada la configuracin damos click en O.K hasta salir completamente de los
paneles.

Figura 49. Acceso al panel integration para configurar la sensibilidad del software.

Figura 50. Panel cannel integration para modificacin de sensibilidad del software.

66
Una vez programada la rampa en el software y ajustado se procede a empezar el
ensayo

Para empezar la corrida cromatogrfica, se deben sincronizar 3 acciones al mismo

tiempo (es recomendable tener la ayuda de una persona para este paso). Se coloca el
teclado del PC cerca al teclado del cromatgrafo, se selecciona el programa
PeakSimple. Luego se saca la muestra en la jeringa cuidando que no queden burbujas
en su interior. El siguiente paso es introducir la jeringa en el inyector, luego se debe:

Presionar la barra espaciadora del PC.

Presionar START del teclado del cromatgrafo.
Inyectar.

Se observa en la pantalla del cromatgrafo como el tiempo empieza a correr, se puede

monitorear la temperatura de la columna, del detector y del inyector. En la figura 51 se
muestra cmo evoluciona un mtodo.

Figura 51. Evolucin del panel del cromatgrafo en una corrida con rampa.

67
5.3.5. Observando los resultados de la corrida experimental en tiempo real.

El programa peaksimple permite monitorear el tiempo real las corridas experimentales,

observando el tiempo de elucin de los compuestos de la mezcla en anlisis y
corroborando la reproducibilidad de la corrida con un cromatograma de otra prueba.

Para observar el tiempo de elucin de cada pico a medida que se desarrolla una corrida
basta con darle click derecho sobre el pico de inters y una vez desplegado el
submen, darle click en add component, inmediatamente despus de esta operacin
aparecer sobre el pico el tiempo de elucin al cual fue detectado bajo el mtodo
cromatogrfico programado.

Figura 52. Submenu para adicionar componentes a medida que se ejecuta una corrida
experimental.

68
Figura 53. Resultado final de agregar un componente durante una corrida experimental.

Al final de cada ensayo el cromatgrafo vuelve automticamente a la temperatura inicial

programada. Se procede a analizar los resultados en el software.

5.4. Visualizacin de los resultados finales de la corrida experimental.

Finalizada una corrida experimental se puede acceder a la tabla final de resultados

(tiempos de elucin, rea bajo la curva y peso de cada pico) ejecutando el siguiente
procedimiento:

Primero se deben de adicionar todos los picos que se consideren como componentes,
esto se hace siguiendo el procedimiento mencionado en el literal 1.4 para cada uno de
los picos observados en el cromatograma. La imagen 18 muestra un ejemplo del
resultado final de hacer este paso.

69
Figura 54. Ejemplo de la adicin como componentes de todos los picos identificados en
un cromatograma.

Posteriormente vamos a barra de herramientas>View>Results, este procedimiento

nos lleva a un segundo panel llamado Result, en el cual se muestran los tiempos de
elucin y reas bajo la curva de cada uno de los picos adicionados anteriormente, as
como el total del rea bajo la curva obtenida.

Figura 55. Ingreso al panel de resultados.

70
 Figura 56. Ejemplo de panel final de resultados de una corrida experimental.

5.4.1. Utilizacin de la integracin Manual para algunas ocasiones.

Algunas ocasiones es necesario efectuar manualmente la integracin del rea bajo la

curva de un pico debido a que el software no lo reconoce, en estos casos el
procedimiento de integracin de hace de la siguiente manera:

a) Dirigirse a barra de herramientas>Edit>Manual integration, inmediatamente

despus de esto se despliega en la parte izquierda de la pantalla un panel
adicional como se ilustra en la imagen 21.

71
 Figura 57. Panel de herramientas para integracin manual de picos.

b) Se selecciona el pico al cual deseamos calcular el rea bajo su curva

manualmente usando los bonotes de desplazamiento dentro del cromatograma.
Luego hacemos click en el icono siguiente:

Este icono en especial permite seleccionar los puntos de partida y fin desde
donde se piensa calcular el rea bajo la curva de un pico a travs de una lnea
recta. Si se quiere conocer ms informacin acerca de cada uno de los otros
iconos del panel de integracin manual, basta con posicionar el cursor sobre
ellos y se desplegar un texto donde explica su funcin.

c) Una vez seleccionado el icono, el cursor se convierte como en una especie de

mira con la cual hacemos click desde donde queremos que comience a calcular
el rea y arrastramos hasta donde deseamos que finalice la integracin del pico.

72
 Finalizado este procedimiento una lnea recta unir los puntos seleccionados y el
software calcular el valor del rea bajo la curva del pico, publicando su
resultado en el reporte final explicado en el literal 1.5.

Figura 58. Ejemplo del clculo del rea bajo la curva de un pico por integracin
manual.

Para apagar el cromatgrafo se debe apagar las resistencias elctricas primero, cerrar
el hidrogeno y aire. Luego se Espera a que la temperatura de la columna este menor o
igual a 30C con el gas de arrastre en funcin. Una vez alcanza los 30C se cierra el
gas y se apaga el cromatgrafo y el peaksimple.

73
5.5. Tips prcticos.

El agua no puede ser detectada por el FID, una gran ventaja si el agua es el
solvente.
Si se desea detectar agua se usa un detector TCD.
En ocasiones si se inyecta demasiado, la muestra puede apagar la llama. Nunca
inyectar ms de 2 L.
Antes de cada corrida, dejar el cromatgrafo prendido una hora a la temperatura
mxima que va a trabajar. Los laboratorios externos apagan los cromatgrafos una
vez por ao.
Al inyectar un compuesto puro y eluir dos picos se puede deber a una inyeccin muy
abundante o a una burbuja en la jeringa.
Trate con delicadeza el equipo y su mantenimiento es costoso.
No olvide cerrar ninguno de los gases, especialmente el aire, se consumen muy
rpido.
Tenga listo tubos de ensayo con agua miliq y solvente de lavado de jeringa.
Use papel liso para limpiar la jeringa, no reutilice papel.
Lave la jeringa a menudo con jabn neutro y puede dejarla en el ultrasonido a
temperatura ambiente por un par de horas.
Limpie la jeringa al final de cada corrida, de no hacerlo se puede trabar el embolo o
formarse costras en su interior.
Cuide las columnas, son costosas.

5.6. Mantenimiento

La limpieza la debe realizar una persona capacitada ya que las piezas son delicadas y
requieren un cuidado especial. Para mayor informacin mirar el manual de usuario
shimadzu o comunicarse con el jefe del laboratorio.

74
El mantenimiento se debe realizar mnimo cada ao o dependiente la frecuencia de
uso.

75
 6. Anexos. Tablas de analogas de columnas entre fabricantes.

Nomneclatura Macherey-
Restek Fase estacionaria Agilent Varian SGE phenomen Supelco Alltech Quadrex
USP Nagel
100% dimethyl
Rtx-1 (p. 49) G1, G2, G38 HP-1 / DB-1 CP Sil 5 CB BP-1 ZB-1 Optima-1 SPB-1 AT-1 007-1
polysiloxane
100% dimethyl
Rxi-1HT (p. 47) DB-1HT VF-1HT ZB-1HT EC-1, AT-1
polysiloxane
100% dimethyl HP-1/ HP-1ms VF-1ms / Optima-1ms,
ZB-1, SPB-1,
Rxi-1ms (p. 41) polysiloxane DB-1/ DB-1ms CP-Sil 5 CB BP-1 Optima-1ms AT-1 007-1
ZB-1ms Equity-1
(low bleed) Ultra-1 Low Bleed/MS Accent

5% diphenyl
Rtx-5 (p. 50) 95% dimethyl G27, G36 HP-5/ DB-5 CP Sil 8 CB BP-5 ZB-5 Optima-5 SPB-5 EC-5, AT-5 007-5
polysiloxane
5 diphenyl
Rxi-5HT (p. 47) 95% dimethyl DB-5HT VF-5HT ZB-5HT
polysiloxane %
5% diphenyl
95% dimethyl HP-5/ HP-5ms ZB-5, Optima-5, SPB-5, 007-5
Rxi-5ms (p. 41) G27, G36 CP-Sil 8 CB BP-5 AT-5ms
polysiloxane DB-5, Ultra-2 ZB-5ms Optima-5ms Equity-5
(low bleed)

VF-5ms /
Rxi-5Sil MS 5% phenyl/95% dimethyl DB-5ms, Optima-5ms
CP-Sil 8 CB BPX-5ZB-5ms SLB-5ms 007-5MS
(p. 42, 87, 95, 97) arylene polysiloxane DB-5ms UI Accent
Low Bleed/MS

76
 Arylene/methyl
Rxi-XLB (p. 44, 94) modified DB-XLB VF-XMS MR1 Optima-XLB
polysiloxane
20% diphenyl
Rtx-20 (p. 51) 80% dimethyl G28, G32 SPB-20 EC-20, AT-007-20
polysiloxane
35% diphenyl BPX-35, SPB-35,
Rtx-35 (p. 51) 65% dimethyl G42 HP-35, DB-35 ZB-35 AT-35 007-35
BPX-608 SPB-608
polysiloxane
35% phenyl/65%
Rxi-35Sil MS (p. 44) dimethyl DB-35ms VF-35ms BP-35 MR2 Optima-35ms
arylene polysiloxane
50% phenyl
Rtx-50 (p. 52) G3 HP-50 AT-50 Optima-17 SPB-50 AT-50 007-17
50% methyl polysiloxane
50% diphenyl
HP-50+, HP-17,
Rxi-17 (p. 44) 50% dimethyl CP-Sil 24 CB ZB-50 Optima-17
DB-17, DB-608
polysiloxane
50% phenyl/50%
Rxi-17Sil MS HP-17, DB-17, CP-Sil 24 CB,
dimethyl BPX-50 ZB-50 Optima-17ms
(p. 45, 73, 98) DB-17ms VF-17ms
arylene polysiloxane
65% diphenyl
Rtx-65 (p. 52) 35% dimethyl G17 007-65HT
polysiloxane
6% cyanopropyl
Rxi-624Sil MS phenyl/94%
G43 HP-624, DB-624 VF-624ms BP-624 ZB-624 Optima-624
(p. 46, 83, 103) dimethyl arylene
polysiloxane

77
 6% cyanopropyl phenyl HP-1301, CP-1301,
Rtx-1301 (p. 55) Optima-1301, AT-624,
94%dimethyl G43 HP-624, VF-1301ms, BP-624 ZB-624 SPB-1301 007-1301
Rtx-624 (p. 55) Optima-624 AT-1301
polysiloxane DB-1301, DB-62VF-624ms

14% cyanopropyl phenyl

HP-1701, PAS- CP Sil 19 CB, ZB-1701,
Rtx-1701 (p. 56) 86%dimethyl G46 BP-10 Optima-1701 SPB-1701 AT-1701 007-1701
1701, DB-1701 VF-1701ms ZB-1701P
polysiloxane

trifluoropropyl methyl
Rtx-200 (p. 54) G6 DB-210, DB-200VF-200ms Optima-210 AT-210 007-210
polysiloxane

trifluoropropyl methyl
Rtx-200ms (p. 54) VF-200ms
polysiloxane (low bleed)

50% cyanopropyl
Rtx-225 (p. 56) 50% phenylmethyl G7, G19 HP-225, DB-225CP Sil 43 CB BP-225 Optima-225 SPB-225 AT-225 007-225
polysiloxane

modified polysiloxane
Rtx-440 (p. 53) unique column
(unique phase)

90% biscyanopropyl SP-2330,

Rt-2330 (p. 57) 10% cyanopropyl phenyl G48 BPX-70 SP-2331, AT-Silar
polysiloxane SP-2380

Rt-2560 (p. 57, 69) bicyanopropyl polysiloxan HP-88 CP Sil 88 SP-2560

G14, G15, G16, HP-Wax,

Rtx-Wax (p. 58) polyethylene glycol CP Wax 52 CB BP-20 ZB-Wax Optima Wax AT-Wax
G20, G39 DB-Wax
G14, G15, G16, CP Wax 52 CB,
Stabilwax (p. 59, 84) polyethylene glycol Innowax ZB-WAX Plus Supelcowax-1
G20, G39 VF-WAX MS

78
 USP Macherey-
Restek PLOT Columns Phase Composition Agilent Varian SGE Phenomenex Supelco Alltech Quadrex
Nomenclature Nagel
Rt-
GS-Alumina, CP-AL2O3 / AluminaSulfat
AluminaBOND/Na2SO4 (p.1 Na2SO4 deactivation AT-Alumi
HP PLOT S Na2SO4 PLOT
MXT-AluminaBOND/Na2SO4

Rt-Alumina BOND/KCl GS-Alumina/KCl, AluminaChlor

KCl deactivation CP-Al203/KCl
(p. 108, 76) HP-PLOT Al203/KCl -PLOT

Rt-Alumina BOND/CFC
unique column
(p. 108, 74)

Rt-Msieve 5A (p. 109) GS-Msieve, HP AT-

CP-Molsieve 5 Molsieve 5A PLT-5A
MXT-Msieve 5A PLOT Molsieve Molsieve

Rt-Q-BOND (p. 110) CP-PoraPLOT Q

100% divinylbenzene Supel-Q-PLOT AT-Q
MXT-Q-BOND CP-PoraBond Q
porous divinyl benzene
Rt-QS-BOND (p. 110) GS-Q
homopolymer
Rt-S-BOND (p. 110) divinylbenzene 4-
CP-PoraPLOT
MXT-S-BOND vinylpyridine

divinylbenzene ethylene CP-PoraPLOT U

Rt-U-BOND (p. 110) HP-PLOT U
glycol/dimethylacrylate CP-PoraBond

79