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colorrectal
Recomendacin (2013)
jmauge@clinic.cat
de entrenamiento (11-13). La prueba del guayaco generalmente deteccin de hemoglobina humana en heces sea la ms recomendada
es capaz de identificar hasta 0,3 mg (300 g) de hemoglobina por para el cribado del CCR.
gramo de heces (14). La novedad de esta prueba ha hecho que aparezcan numerosas
La aparicin de nuevas pruebas inmunoqumicas, que presentan publicaciones que la evalan; algunas han comparado sensibilidad
muchas ms ventajas tanto a nivel prctico como metodolgico y y especificidad en diferentes puntos de corte, otras han estudiado las
donde la deteccin de la sangre se realiza identificando de forma ventajas e inconvenientes de analizar una o ms muestras de heces
especfica hemoglobina humana en muy poca cantidad de heces, por individuo. Se ha estudiado tambin el efecto sobre las muestras
y por tanto, sin que sea necesaria realizar una restriccin diettica, de la temperatura y del tiempo que se tarda en hacer la medida y
han hecho que el test del guayaco pueda considerarse hoy da como cmo repercute en su conservacin y por tanto en la cuantificacin
obsoleto.. de la hemoglobina; pero antes de abordar todos estos detalles, es
oportuno conocer una serie de particularidades relacionadas con
3.2. Mtodos inmunoqumicos la obtencin de la muestra. La presencia mayoritaria de un solo
fabricante, origin que inicialmente la mayora de publicaciones
Los mtodos inmunoqumicos que detectan la presencia de sangre
hicieran referencia a la cantidad de hemoglobina detectada en cada
oculta en las heces se pueden clasificar en dos grandes grupos: la
muestra en funcin de los resultados obtenidos a travs de este primer
prueba rpida cualitativa, y la de ms reciente aparicin prueba
mtodo, pero la aparicin de otras compaas con nuevos diseos en
inmunoqumica cuantitativa.
los tubos de recogida de muestra oblig a plantear la estandarizacin
de los resultados. La variabilidad existente en la cantidad de muestra
3.2.1. Pruebas rpidas cualitativas recogida y el volumen de solucin conservadora entre diferentes
Las pruebas rpidas detectan la presencia de hemoglobina utili- fabricantes ocasiona que, para una misma cantidad de hemoglobina
zando un mtodo inmunocromatogrfico de un solo paso. Utilizan el resultado obtenido por diferentes compaas sea diferente. La
anticuerpos monoclonales frente a la hemoglobina humana, conjuga- explicacin de este hecho es la siguiente: habitualmente el resultado
dos con partculas de color azul, que en presencia de hemoglobina se se expresa en nanogramos de hemoglobina por mililitro de solucin
unen a ella formando un complejo antgeno-anticuerpo que migra por conservadora. Esta concentracin depender tanto de la cantidad de
la membrana del dispositivo hasta unirse a anticuerpos policlonales heces recogida (mg) como del volumen de solucin conservadora
fijados en una zona concreta de la membrana. El complejo sndwich contenido en cada tubo (mL). A modo de ejemplo presentamos tres
antgeno-anticuerpo-antgeno concentra las partculas de colorante, situaciones que corresponden a tres fabricantes reales. Fabricante
indicando a travs de la aparicin de una lnea azul la presencia de A: 10 mg de heces en 2 mL de solucin conservadora. Fabricante
la hemoglobina humana. Los complejos no unidos a hemoglobina B: 10 mg de heces en 1,7 mL de solucin conservadora. Fabricante
humana tambin migran por la membrana, unindose a una zona C: 20 mg de heces en 1,6 mL de solucin conservadora. Para una
de control donde quedan inmovilizados por un anticuerpo que se misma cantidad de hemoglobina en heces, por ejemplo 20 g de
une especficamente a la forma libre, haciendo aparecer tambin hemoglobina en un gramo de heces, el resultado obtenido en ng
en esa zona una lnea de control. La lnea de control debe aparecer (hemoglobina) / mL (solucin conservadora) ser diferente en cada
para que el test sea considerado vlido, considerndose positivo uno de los diferentes casos; 100 ng/mL en el fabricante A, 117 ng/
para la presencia de hemoglobina, si adems de sta aparece otra mL en fabricante B y 250 ng/mL en el fabricante C. Esto obliga a
lnea y negativo si nicamente se observa la lnea de control (15). la estandarizacin y a proponer que los resultados deben al menos
Como se desprende de la explicacin, la immunocromatografa de expresarse en mg/Kg (hemoglobina/heces) o por lo menos a facilitar
un solo paso no permite cuantificar la hemoglobina presente en las su equivalencia (23).
heces, sino que slo identifica la presencia o ausencia en funcin de
una cantidad preestablecida de hemoglobina en cada dispositivo.. 3.2.3 Aspectos pre-analticos
Otro punto a discutir es la conservacin de la muestra. La parti-
3.2.2. Mtodos inmunoqumicos cuantitativos cularidad de la pre-analtica en los programas de cribado hace que
La utilizacin de pruebas inmunoqumicas y en especial las este aspecto sea muy crtico. Diferentes estudios (24-27) demuestran
que se basan en la aglutinacin a travs de partculas de ltex, ha que gracias a la solucin de conservacin que est presente en la
permitido aumentar la sensibilidad para la deteccin de lesiones en mayora de tubos, la hemoglobina es estable a temperatura ambiente
el colon sin perder especificidad (16-20). Este mtodo se basa en aproximadamente durante una semana, llegando a 10-15 das si se
una reaccin antgeno-anticuerpo especfica, donde los anticuerpos conserva refrigerada. Es decir que cuanto ms tiempo pasa, ms
contra la hemoglobina humana estn unidos a partculas de ltex crece la posibilidad de infravalorar un resultado. Es muy importante
poliestireno suspendidas en una solucin tampn. La reaccin en- tambin tener en consideracin la temperatura ambiental, hacindose
tre el antgeno (hemoglobina humana) y el anticuerpo unido a las evidente una disminucin tanto en las concentraciones medias de
partculas de ltex ocurre a 37 C, produciendo una respuesta de hemoglobina como en las tasas de resultados positivos cuando la
aglutinacin que se manifiesta en forma de turbidez que se lee a 530 temperatura ambiente es ms elevada (24).
nm, comparando la luz dispersada a 90 con la transmitida a 180, Estas circunstancias obligan a ser muy riguroso en este aspecto, reco-
y calibrando con una serie de patrones. Otra ventaja de las pruebas mendando conservar siempre la muestra refrigerada y a reducir, cuanto
de aglutinacin con ltex, adems de permitir escoger un punto de ms mejor, el tiempo entre la obtencin de la muestra y su anlisis. Hay
corte ptimo para cada programa de cribado (21), es la posibilidad que incidir sobre todo en la conservacin refrigerada de las muestras,
de automatizar y estandarizar los resultados a travs de controles ya que se ha descrito que los efectos de la temperatura son mucho ms
de calidad. Por otra parte, han demostrado ser ms coste-efectivas importantes que el tiempo transcurrido antes de ser analizadas (27).
que la prueba del guayaco (22). Todas estas evidencias han hecho En caso de que el laboratorio reciba muestras fuera de estos in-
que en la actualidad la prueba inmunoqumica cuantitativa para la tervalos, hay que sopesar lo que puede representar a nivel logstico
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