1Otazu MK 131185 UNA- PunoInvestigacin biotecnolgica

1I. Ttulo
2 Evaluacin de la actividad antimicrobiana de Uncaria tomentosa
3 sobre biopeliculas mixtas de Staphylococus aureus y Candida
4 albicans
5
6II. Resumen del Proyecto de Tesis
7La evaluacin de la actividad antifngica y bacterial del extracto
8hidroalcolico de Uncaria tomentosa (Ua de gato), se realizara los
9meses de abril a junio del 2017, comparando la actividad antibiofilm
10del extracto de U. tomentosa frente a cepas de Candida albicans,
11Staphylococus aureus y biofilm (C. albicans + S. aureus), para el
12cual se usara el mtodo de maceramiento de la corteza de U.
13tomentosa en etanol al 96% para posteriormente aplicarla en el
14mtodo de disco de difusin en agar mueller hinton se espera que la
15antibacteriana y antimictica sea sensible e directamente
16proporcional a la actividad en el biofilm.
17
III.18Palabras claves (Keywords)
19Antifunjicos, antimicrobiano, biofilm, Candida albicans,
20Staphylococus aureus
21
22IV. Justificacin del proyecto
23Una biopelicula es un ecosistema de microorganismos y sus productos
24extracelulares adheridos a una superficie bitica o abitica (1)
25Segn algunos institutos de salud indican que el 60% de infecciones
26microbianas involucran biopeliculas (2), en este caso se han
27estudiado los fenmenos de congregacin y adhesin, as como el
28efecto de factores moduladores como la saliva, azucares o el pH, se
29estima que el 65% de las candidiasis estn asociadas a la formacin
30de biopeliculas mixtas (3), debido a la resistencia de
31antimicrobianos, as como la evasin de defensas del husped, lo que
32hace que su eliminacin sea complicada. Las biopeliculas formadas
33tanto en dispositivos mdicos como en ambientes naturales con
34frecuencia son polimicrobianas(4). Las Candida albicans y
35Staphylococus aureus se desarrollan con facilidad incrementando la
36patogenicidad de las mismas(3,5), se observa que las clulas
37fngicas pueden moderar la accin de los antimicrobianos y las
38bacterias afectar la actividad de los agentes antifunjicos(6).
39
40V. Antecedentes del proyecto
41En las ltimas dcadas se han utilizado un amplio rango de modelos
42in-vitro para estudiar la formacin y desarrollo de biopeliculas en
43el propuesto por Ramage et al. (7) se forman biopeliculas en el
44fondo plano de los pocillos en placas de poli estireno y
45posteriormente se mide la reduccin de una sal de tetrazolio (XTT),
46la misma que resulta a consecuencia de la actividad enzimtica de
47las clulas viables en dichas biopeliculas (8) en lo que respecta a
48las bacterias el XTT es reducido por enzimas de la cadena
49respiratoria que estn localizadas en la membrana plasmtica,
50mientras que, en las levaduras, esta sal se reduce por
51deshidrogenasas mitocondriales (9). Sin embargo, se sabe que Uncaria
52tomentosa tiene efectos antimicrobianos para lo cual estudios
53revelan que la ua de gato es una planta promisoria en tratamientos

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54de infecciones fngicas el extracto hidroalcolico de U. tomentosa

55presenta una buena actividad antifngica frente a C. albicans
56(10)otros estudios determinan que U. tomentosa presenta actividad
57antibacteriana, revelados pos estudios que refieren concentracin
58mnima inhibitoria frente a S. aureus, E. coli dando como resultado
59positivas(11).
60
61VI. Hiptesis del trabajo
62Uncaria tomentosa tiene actividad antifungica y antibacterial asi
63mismo puede actuar sobre sepas mixtas (biopeliculas).
64
65VII. Objetivo general
66
67Evalular la actividad antimicrobiana del extracto hidroalcolico de
68Uncaria tomentosa frente a cepas mixtas de Candida albicans y
69staphylococus aureus.
70
71VIII. Objetivos especficos
72
73Comprobar la hiptesis de la resistencia a antimicrobianos en un
74biofilm
75
76Metodologa de investigacin
IX.
77-OBTENCION DEL EXTRACTO HIDROALCOLICO:
78
79 Se desecar la muestra por el lapso de una semana a temperatura
80ambiente en una bolsa de papel.
81Luego se llevara al proceso de maceracin, que se realizara con
82etanol al 96%: esta maceracin debe llevarse por cinco das a
83temperatura ambiente en un frasco con tapa rosca cubierto de
84cualquier ingreso de luz.
85
86
87-OBTENCION DE LA MUESTRA BIOLGICA:
88
89Las cepas de Candida albicans y Staphylococus aureus sern
90adquiridas del Hospital Regional Manuel Nez butrn (HRMNB) de la
91ciudad de puno.
92
93
94-ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA Y DIFUCION EN AGAR:
95
96Las cepas sern sembradas en placas con agar mueller hinton usando
97la tcnica de dilucin de McFarland equivalente a 10 -5 como indica el
98Instituto Nacional de Salud, colocando encima los discos de difusin
99para el cual se usara papel filtro en las que se usar con
100concentraciones diferentes del extracto hidroalcolico, en la
101misma placa se colocar el control positivo de origen farmacolgico
102(ciprofloxaxina y cefalexina) para comparar el grado de inhibicin
103frente a la cepas y el cultivo mixto, usando tres repeticiones
104para la prueba estadstica.
105
106
107-PRUEBA ESTADISTICA
108
109Se usara el software SPSS 20 statistic para usar la prueba de tukey
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110con un f=0.05
111
112X. Referencias
113
1141. Monroy TB, Maldonado VM, Martnez FF, Barrios BA, Octavio L,
115 Vargas S. Colonizacin por Candida albicans , Staphylococcus
116 aureus y Streptococcus mutans en pacientes por- tadores de
117 prtesis dentales Candida albicans , Staphylococcus aureus and
118 Streptococcus mutans colonization in patients wearing dental
119 prosthesis. :2739.
1202. Adam B, Baillie GS, Douglas LJ. Mixed species biofilms of
121 Candida albicans and Staphylococcus epidermidis.
122 2015;51(2002):3449.
1233. Douglas LJ. Medical importance of biofilms in Candida
124 infections. Rev Iberoam Micol organo la Asoc Esp Espec en
125 Micol [Internet]. 2002;19(3):13943. Available from:
126 http://www.thecandidadiet.com/wp-
127 content/uploads/research/139143.pdf
1284. Douglas LJ. Candida biofilms and their role in infection.
129 Trends Microbiol. 2003;11(1):306.
1305. Durn EL, Mujica MT, Jewtuchowicz VM, Finquelievich JL,
131 Victoria M, Adela C. Estudio de la variabilidad gentica entre
132 aislamientos clnicos de Candida albicans formadores de
133 biopelculas. 2007;26871.
1346. Harriott MM, Noverr MC. Ability of Candida albicans Mutants To
135 Induce Staphylococcus aureus Vancomycin Resistance during
136 Polymicrobial Biofilm Formation . 2010;54(9):374655.
1377. Ramage G, Lopez-ribot JL, Ramage G, Vandewalle K, Wickes BL.
138 Characteristics of biofilm formation by Candida albicans
139 Characteristics of biofilm formation by Candida albicans. 2002;
140 (January 2017).
1418. Pemn J, Cantn E. Actividad de la anidulafungina sobre
142 biopelculas de Candida. 2008;(Tabla 1):1248.
1439. Carneiro R. A simple method to measure cell viability in
144 proliferation and cytotoxicity assays. 2009;23(3):25562.
14510. Integrada C, Jnior PS, Pereira V, Pereira V, Socorro M, Costa
146 M, et al. Atividade Antifngica In Vitro do Extrato da Uncaria
147 Tomentosa L . ( Unha De Gato ) sobre Cepas do Gnero Candida In
148 Vitro Antifungic Activity Of Uncaria Tomentosa L . ( Cat TM s
149 Claw ) against Candida. 2011;
15011. Sol S, Universidade S, Yumi C, Ito K. Antimicrobial activity of
151 Uncaria tomentosa against oral human pathogens Antimicrobial
152 activity of Uncaria tomentosa against oral human pathogens
153 Atividade antimicrobiana da Uncaria tomentosa. 2007;(March).
154
155
156
157XI. Uso de los resultados y contribuciones del proyecto
158En caso de ser muy relevante los resultados se pueden usar para uso
159farmacolgico
160
161
162
163XII. Impactos esperados
164
165 i. Impactos en Ciencia y Tecnologa
8 3
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166
167Se dar a conocer un nuevo antibitico para algunos problemas que se
168presentan con frecuencia en hospitales, tambin se tendr como
169prototipo para realizar otras investigaciones a ms profundidad
170
171 ii. Impactos econmicos
172
173La disminucin de enfermedades es un factor positivo en la
174productibilidad de los trabajadores en los diferentes niveles de
175empresas, el cual acarrea un aumento en la economa de las
176empresas, asi mismo creando frmacos en base a este trabajo dara
177un aumento en los ingresos de diferentes farmacuticas
178
179 iii. Impactos sociales
180
181La lucha contra enfermedades tiene un impacto importante en la
182sociedad, un claro ejemplo esta en la zona altiplnica donde la
183mayora de enfermedades se usa la medicina tradicional, que te
184dice que planta usar para curar diversas afecciones, con este
185trabajo se podr dar mas veracidad a ese hecho.
186
187 iv. Impactos ambientales
188Al medio ambiente se vierten de forma continua residuos de
189antibiticos de consumo humano, no incluidos en la legislacin de
190regulacin, que van a parar a travs de las aguas residuales urbanas
191a las Estaciones Depuradoras de Aguas Residuales, donde pueden
192resistir al tratamiento y expandirse a travs de la reutilizacin
193agraria de los lodos el cual supone un riesgo ambiental, pero como
194el antimicrobiano a desarrollar es completamente orgnico de manera
195que en el medio ambiente se degrada con facilidad por factores como
196pH, temperatura el cual no afectar al medio ambiente.
197XIII. Recursos necesarios (Infraestructura, equipos y principales tecnologas en uso
198 relacionadas con la temtica del proyecto, seale medios y recursos para realizar el
199 proyecto)
200
201Se usaran incubadora a 37 C para las cepas, los agares sern
202obtenidos del laboratorio de ecologa de la universidad
203nacional del altiplano
204
205XIV. Localizacin del proyecto (indicar donde se llevar a cabo el proyecto)
206
207El trabajo se realizar en el laboratorio de microbiologa de la
208universidad nacional del altiplano, donde se harn las pruebas de
209antibiograma, cultivo, incubacin.
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220XV. Cronograma de actividades
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223XVI. Presupuesto
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