FUNGII N APLICAII INDUSTRIALE.

BIOTEHNOLOGII

METABOLII FUNGICI DE INTERES MEDICINAL

MICOTERAPIE
 aplicaii alimentare ale unor specii de microorganisme

produse naturale alimente: pine, vin, brnzeturi

Penicillium roquefortii

brnzeturi Roquefort, Gorgonzola,
Stilton Blue, Danish Blue

Saccharomyces cerevisiae

bere, produse de panificaie

Penicillium camemberti

brnzeturi Camembert, Brie
miceliul = crusta

specii de Aspergillus, Rhisopus, Saccharomyces

Aspergillus oryzae
alimente fermentate:
sake sos de soia, pasta de soia, tofu fermentat (sufu)
 levurile sunt utilizate n:
producerea de substane medicamentoase, alimente, enzime
cercetrile tiinifice de biologie celular i molecular

Schizosaccharomyces pombe
S. pombe

organism model
elucidarea mecanismelor de control al ciclului
celular (Premiul Nobel 2001)
moleculele cheie care controleaza ciclul,
funciile acestora, caracterul lor universal
izolat din bere de mei (1890, Zanzibar - Africa
oriental)
pombe = bere (Swahili)
 Aplicaii industriale actuale

implic specii fungice capabile s:

fermenteze anumite substraturi
sintetizeze metabolii diveri
transforme sau amelioreze produse existente, naturale sau sintetice

Fermentare fervere (lat.) = a fierbe

(la nceputul fermentaiei alcoolice, la
suprafaa lichidului se ridic bule de gaz)

biotehnologii: ansamblu de metode i procedee care utilizeaz microorganisme vii

sau anumii constitueni celulari ai acestora
 TULPINI FUNGICE
obinere, ameliorare, conservare
Caracteristicile tulpinilor selectate pentru producia bioindustrial

cretere rapid, facil, pe substraturi ieftine

posibilitate de a secreta enzime n cantiti ridicate

stabilitate genetic relativ (condiii de stres

determinat de multiplicarea pe scar larg)

capacitate de biotransformare sau de secreie cu

randament maxim

posibilitate de separare i purificare a metabolitilor

cu costuri minime
 Tulpini fungice

speciile fungice utilizate pe scar larg

micromicete
mucegaiuri levuri

tulpinile de referin sunt stocate n colecii internaionale:

ATCC: American Type Culture Collection (SUA)

CBS: Centraalbureau voor Schimmelcultures (Olanda)
CICM: Collection Internationale de Cultures de Microorganismes (Frana)
NCTC: National Collection of Type Culture (Marea Britanie)
 Tulpini fungice

Selecionarea de noi tulpini

recoltate din mediul ambiant din toate tipurile de habitate: aer, sol, ap dulce/srat

triaj primar tulpini cu potenial de biosintez a unor metabolii cu proprieti:

pentru industria agro-

terapeutice (antibiotice,
alimentar (sintez de
antifungice, antivirale, fitosanitare (ierbicide,
proteine, fermentaii, de depoluare biologic
antitumorale, pesticide, nematicide)
activitate enzimatic
antiinflamatoare etc.)
etc.)

tulpinile sunt izolate, purificate, identificate

moleculele active sunt izolate si caracterizate

 Tulpini fungice

obiective:

exometabolii = substane excretate sau secretate pe parcursul dezvoltrii

miceliului n mediu nutritiv lichid + agitare continu
se regsesc n supernatant

endometabolii extracia de la nivelul miceliului mult mai lung i mai

costisitoare
etap suplimentar: distrugerea peretelui celular i a membranei
plasmatice

automatizarea ct mai complet a proceselor tehnologice i de analiz

 Tulpini fungice

Ameliorarea tulpinilor fungice

tulpinile slbatice:
adaptate mediului nconjurtor i competiiei cu alte microorganisme
nu sunt programate s produc metabolii n cantiti crescute

sisteme de autoreglare blocheaz sinteza odat ce concentraia necesar a

fost atins n celul

tulpinile selecionate pentru producia industrial ameliorate din punct de

vedere al activitii de biosintez:
produc metabolii n cantiti superioare necesitilor proprii
sintetizeaz molecule noi, chiar inexistente n patrimoniul genetic al speciei
respective
 Tulpini fungice

manipulrile urmeaz dou direcii:

modificarea informaiei genetice coninut n celul (mutaii induse sau

aleatorii)
transferul de informaie genetic suplimentar n celul
fuziune de protoplati
recombinri genetice, transgenie

ulterior trebuie asigurat stabilitatea genomic a tulpinii ameliorate n condiiile

cultivrii intensive
 Tulpini fungice

Conservarea tulpinilor fungice

Congelare
des folosit
msuri de precauie pentru a reduce procentul de
celule care mor:
temperatura de congelare foarte mic (-80oC
sau azot lichid)
viteza de congelare lent (1oC/min) +
decongelare foarte rapid
substane crioprotectoare: glicerol, DMSO,
lapte ecremat de concentraie dubl

Liofilizare
sublimarea realizat rapid
nchiderea flacoanelor sub vid (evita
contaminarea datorat aerului ambiant)

o suspensie de spori concentrat (min 107 spori/ml)
poate fi conservat mai muli ani la ntuneric
 PRODUCIA INDUSTRIAL
Medii de cultur

subproduse ale industriei agricole sau petroliere:

sursa de azot:
extract apos de semine de porumb, fin de soia, fin de pete, fin
de arahide, deeuri de abator

sursa de carbon:
melasa: 50% glucide diverse, aminoacizi, vitamine, sruri minerale
zer
amidon: specii fungice capabile s secrete amilaze (Mucorales,
Aspergillus etc.)
deeuri celulozice (lemn, paie, turb): specii celulolitice (Trichoderma)
ape sulfitice (deeuri de la fabricarea pastei de hrtie coninnd oze
provenite din degradarea hemicelulozei)
parafine (subprodus al rafinrii petrolului): aplicare limitat nu conin
oxigen n molecul aerare intensiv a mediului de cultur
 Producia industrial

Bioreactoare
cuve de oel de capacitate mare (50-1000 m3)
dispozitive de oxigenare i agitare a mediului de cultur

agitarea:
mecanic: turbine cu palete (tip Waldhof)
pneumatic: aer comprimat (tip Lefranois, Vogelbusch)

aparatur de control a pH-ului, concentraiei de oxigen, temperaturii, vitezei de

agitare etc.
 Producia industrial

Extracia

etapa final a procesului industrial

produii dorii sunt izolai din:

biomas
recuperat prin decantare, filtrare sau centrifugare diferenial

supernatant
produii rezultai n urma metabolismului fungic i excretai n mediu
extrai prin tehnici de dializ, cromatografie etc.
 METABOLII FUNGICI
Metabolii primari

acizi organici, vitamine, alcooli

se acumuleaz n mediul de cultur n timpul fazei exponeniale de cretere a
miceliului n special n perioada terminal a culturii
 Metabolii primari

Acizi organici
produi finali ai glicolizei (acidul lactic, propionic, gluconic etc.) sau ai oxidrii
incomplete a ozelor (acid citric, itaconic, fumaric, oxalic etc.)

Acidul lactic
specii de Rhizopus, Lactobacillus
medii cu coninut de amidon
domeniul alimentar (acidifiant pentru sucuri, siropuri), farmaceutic (lactat),
industria textil

acidul lactic
sporangiofori cultura

Rhizopus oryzae
 Metabolii primari

Acidul citric
industria
farmaceutic (comprimate efervescente, citrat)
cosmetic (loiuni astringente, ampoane)
alimentar (buturi carbogazoase, conserve, produse de cofetrie)
anual produse 400 000 tone

anterior izolat din sucul de lmie i ananas

actualmente biosintez Aspergillus, Penicillium, Saccharomyces ameliorate
genetic
medii cu coninut de melas
cele mai utilizate specii: A. niger i Saccharomycopsis lipolytica

acidul citric

A.niger
 Metabolii primari

Acidul itaconic

duble legturi uor polimerizabil

utilizat ca rin nlocuitoare pentru
acidul acrilic
tulpini mutante de Aspergillus terreus
medii cu melas

El-Imam AA, Du C (2014) Fermentative Itaconic Acid Production . J

Biodivers Biopros Dev 1: 119. doi:10.4172/2376-0214.1000119

A. terreus
acidul itaconic
 Metabolii primari

Aminoacizi

avantajul obinerii prin biosintez:

se obin direct formele levogire (asimilabile n mod direct de ctre
mamifere)
sinteza chimic produce numai racemici

acid aspartic

Acidul glutamic, acidul aspartic

specii de Penicillium, Hansenula, Rhizopus

corectori de gust (glutamat)
n alimentaia parenteral
n cosmetologie

acid glutamic
 Metabolii primari

Vitamine
cele mai promitoare genuri: Streptomyces i Nocardia

Vitamina B1 (tiamina)
prezent n mod normal n celula fungic
producia pe scar industrial nc insuficient

Vitamina B2 (riboflavina)
sintetizat de ctre Ashbya gossypii (ascomicet parazit
a bumbacului i arborelui de cafea)

A. gossypii

Vitamine liposolubile: ergosterol, provitamina A

 Metabolii primari

Alcooli i solveni industriali

specii ameliorate din genurile Candida, Saccharomyces, Debaryomyces

xilitol, dihidroxiaceton

Trichoderma sp.

specii de Trichoderma degradeaz deeurile celulozice

amestec de aceton butanol etanol
 Metabolii secundari
insecticide biologice, antibiotice, alcaloizi din ergot, produi utilizai n industria
alimentar
Insecticide biologice
utilizate din ce n ce mai mult n locul pesticidelor i ierbicidelor de sintez (efecte
nocive)

Arthrobotrys conoides
blocnd un nematod

preparate obinute din Arthrobotrys i Dactylaria nematicide

specii ale ordinului Entomophtorales combaterea mutelor, unor fluturi

specii de Chytridiomicete combaterea tnarilor (vectori ai paludismului,

filariozei, febrei Dengue)
 Metabolii secundari

Substane terapeutice
Alcaloizi din ergot
culturi de secar infectate artificial (necesit supraveghere)

biotehnologie:
producia industrial n bioreactoare de mare capacitate
specia Claviceps purpurea
separarea i extracia ulterioar a alcaloizilor este costisitoare

selecionarea unor tulpini modificate de C. paspali

sintetizeaza doar un singur alcaloid

C. paspali cultur de C.
parazitnd paspali de 9 zile
Paspalum dilatatum
 Metabolii secundari

Antibacteriene

Peniciline
sintetizate de ctre Penicillium chrysogenum

P. chrysogenum
Cefalosporine
sintetizate de ctre Cephalosporium acremonium

C. acremonium

numeroase alte antibiotice sunt ulterior obinute la scar industrial prin

semisintez: meticilina, ampicilina, amoxicilina, cefalotina, cefaloridina etc.
 Metabolii secundari

Antifungice

Griseofulvina
sintetizat de Penicillium griseofulvum

P. griseofulvum

Ciclosporina
imunosupresor important
secretata de Tolypocladium inflatum

T. inflatum
 Metabolii secundari

Enzime
cea mai important utilizare pe scar industrial a speciilor fungice, din
punct de vedere cantitativ

Amilaze
fungii produc n principal -amilaze
frecvent utilizate: Aspergillus niger i A. oryzae
mediul de cultur conine aminoacizi, zinc, fier

Invertaze
hidroliza zaharozei glucoz + fructoz
utile n producia de cofetrie
-fructozidaza este produs de ctre specii de
Candida, Saccharomyces, Alternaria, Penicillium

conidii de Alternaria alternata

 Metabolii secundari

Enzime pectinolitice
clarifierea sucurilor de fructe, procesarea cafelei i a pulberii de cacao
produse de ctre specii de Rhizopus, Aspergillus, Penicillium, Botrytis

Enzime proteolitice
industria agroalimentar, producerea de detergeni (asociere cu amilaze i
lipaze)
secretate de tulpini de Aspergillus
 BIOCONVERSII

microorganismele biotransform prin metabolismul propriu un anumit substrat n

molecule specifice

importante pentru obinerea anumitor substane medicamentoase

reaciile metabolice implicate: hidroxilri, acilri, fosforilri, oxidri, reduceri

genurile des utilizate: Curvularia, Rhizopus, Aspergillus, Fusarium

Bioconversia steroizilor
11-hidroxilarea nucleului steroidic hidrocortizon i la prednisolon

hidrocortizon
MICOTERAPIE

tradiia recomand utilizarea ciupercilor

medicinale de secole

micoterapia (tratamentul cu ciuperci) i are

originea n anii 1970/1980

diverse studii tiinifice confirm interesul

utilizrii ciupercilor mpotriva cancerului
 Micoterapie

Partea utilizat
macromicetele sunt formate din:

miceliu subteran conine chitosan (precursor al chitinei)

carpozom conine chitin

plrie

carpozom
picior
hife

spor

miceliu
 Micoterapie

Dezavantajele carpozomilor

chitina

chitina fixeaz metalele i glucidele

poate fixa metalele grele sau compui radioactivi

principiile active (peptidoglicani) se extrag dificil datorit chitinei

degradarea chitinei N-acetil-glucosamine pot amplifica efectele biologice ale

poliaminelor (induc proliferarea celular, n special a celulelor maligne)
 Micoterapie

Avantajele miceliului

n principal miceliile conin principiile active

chitosanul coninut n micelii inhib poliaminele evit efectul lor negativ

exclude riscul de contaminare

permite o mai bun biodisponibilitate (de cinci ori mai mare)

chitosan
 Micoterapie

Originea produselor

probleme principale:

carpozomul concentreaz elemente toxice (pesticide, metale)

modul de depozitare influeneaz considerabil i foarte rapid inactivarea

principiilor active

modul de cultur (pe cereale) induce un risc de contaminare cu micotoxine

modul de uscare i pulverizare poate distruge principiile active fragile

 Micoterapie

Principalele ciuperci comestibile cu proprieti medicinale

numeroase micelii au o eficacitate terapeutic acompaniat de inocuitate
cele mai studiate 10 specii:

Coriolus versicolor (Karawatak) Agaricus blazei

Grifola frondosa (Matak)

Ganoderma lucidum (Reishi)

Hericium erinaceus
 Micoterapie

Pleurotus ostreatus (pstrv de fag)

Polyporus umbellatus

Lentinus edodes (shiitak)

Armillaria mellea (ghebe)

Phellinus linteus
 Micoterapie

Principiile active

n general sunt poliozide ramificate specifice, hormoni sau inhibitori enzimatici

miceliile conin cantiti reduse de minerale i vitamine
principalele molecule active:

Miceliul Principiu activ

Coriolus versicolor Krestina
Ganoderma lucidum Acizi ganoderici, Glican
Grifola frondosa Fractiunea D, Grifolan
Agaricus blazei Blazeina
Lentinus edodes Lentinan
Hericium erinaceus Erinacerine H i I
Pleurotus ostreatus Alfa-glucan cu greutate molecular redus
Polyporus umbellatus Poliporusterone A i B, acetosiringona
Armillaria mellea Armillaripina, Armillarigina,
Phellinus linteus Beta-(1-3)-glicani substituii cu manoz
 Micoterapie

Principalele utilizri terapeutice

polizaharidele miceliene proprieti imunostimulante i antitumorale

pot complementa tratamentul alopat

nu interfer cu tratamentele clasice i sunt lipsite de toxicitate

principalii compui comercializai:

lentinan Lentinus edodes
krestina Coriolus versicolor
schizofilan Schizophillum commune

aciune:
stimularea limfocitelor T, a monocitelor/macrofagelor sau a limfocitelor natural
killer
asupra caspazelor apoptoza celulelor tumorale
 Micoterapie

Dozaj i eficacitate

eficacitatea depinde de:

concentraia de principii active
fenomenele sinergice prezente
biodisponibilitatea
modul de conservare a produsului

miceliile concentreaz polifenolii din substratul pe care se dezvolt cultivarea

pe scoare mbogite cu polifenoli, antioxidani sau antitumorale amplific eficiena
miceliului

dozaj: 150 - 300 mg miceliu/zi; tratamentul dureaz cel puin trei luni n vederea
modificrii statusului imunitar

regim alimentar fr lactate i srac n poliamine amplific eficacitatea

corectarea unei eventuale carene de vit. D3 micoterapiei