Nutricin y cultivo de

los microorganismos
NUTRICION

La nutricin proceso por el que toman del medio las

sustancias qumicas que necesitan para crecer
(nutrientes).
Objetivos:
fines energticos (reacciones de mantenimiento)
fines biosintticos (reacciones anabolismo)
clasificaciones

Punto de vista del aprovisionamiento de energa:

litotrofas (molculas inorgnicas donantes de electrones
para respiracin: SH2, S0, NH3, NO2-, Fe2+)
organotrofas (molculas orgnicas: hidratos de C,
hidrocarburos, lpidos, protenas, alcoholes, etc)

Punto de vista biosinttico (crecimiento):

autotrofas: fijacin del CO2

heterotrofas: fuente orgnica de carbono
clasificaciones

Otros conceptos:
autotrofas estricta: no pueden crecer
usando materia orgnica
mixotrofas: metabolismo energtico
litotrofo, pero usan fuente orgnica de C
para su metabolismo biosinttico
Nutrientes segn las
cantidades requeridas
Macronutrientes (C, H, O, N, P, S, K, Mg, Na)

Micronutrientes o elementos traza (Co, Cu,

Zn, Mo...)
 El mundo microbiano amplia diversidad metablica.

Autotrofos (CO2)------Heterotrofos...(fuente

carbono).....

Heterotrofos: Metilotrofas que slo usan metano o metanol

como fuente de carbono y energa, hasta los verstiles

Pseudomonas, que usan ms de 100 fuentes de C

orgnico.

crecen en oscuridad en medios a base

solamente de sales minerales

(Quimiolitoautotrofos= Quimioautotrofos)
carbono, oxgeno, hidrgeno y nitrgeno.

Elementos constituyen del esqueleto de las

macromolculas as como las pequeas

molculas orgnicas
Clases de nutrientes
Universales (los requeridos en esta forma
por todos los procariotas):
H2O, CO2, fosfatos y sales minerales
Particulares: elementos que se pueden
captar de diferentes maneras, segn
especies:
N: como N inorgnico (oxidado o reducido),
como N orgnico; fijacin de N2 (en ausencia
de N combinado) (solo en bacterias)
S: como S orgnico o inorgnico
Factores de crecimiento
Universales

El Agua
Principal constituyente del protoplasto
bacteriano
medio universal donde ocurren las
reacciones biolgicas
un reactante en exceso (producto de
algunas reacciones bioqumicas).

Fuentes de agua:
endgena (procedente de oxido-reducciones)
exgena (la mayora)

El agua representa el 90% del peso hmedo de una clula

y las macromolculas la masa global del peso seco
La disponibilidad de agua se mide como
actividad de agua (potencial de agua; aw)
aW= PS/PW (PS es la presin parcial de vapor de agua en la solucin
problema y PW es la presin parcial de vapor del agua destilada).

aW = humedad relativa aire sobre la

solucin/100

en bacterias como Caulobacter, Spirillum, aw

est cercano a 1
en bacterias que viven en sangre y fluidos,
Escherichia y Streptococcus (aw = 0.995)

La disponibilidad de agua se mide como
actividad de agua (potencial de agua; aw)

en bacterias marinas, Vibrio y Pseudomonas (aw

= 0.980)
ciertos bacilos Gram-positivos aguantan cierta
sequedad (aw = 0.950)
microorganismos xerfilos (aw en torno a 0.75)
arqueas halfilas extremas (Halobacterium)
levaduras sacarfilas, que viven en zumos y jugos
Universales
El CO2
Los autotrofos lo requieren como fuente de C y lo reducen
usando como fuente de energa la luz (en el caso de las
fotoautotrofas) u oxidaciones de determinadas sustancias
inorgnicas (los quimioautolitotrofos).

Las arqueas metanognicas lo pueden usar como aceptor

de electrones procedentes del H2 o como fuente de C.

Los heterotrofos necesitan pequeas cantidades de CO2

para sus carboxilaciones en rutas metablicas

Normalmente, las bacterias crecen a la concentracin de

CO2 atmosfrico (0.03%),
Universales

FOSFATOS
El P suele requerirse en forma de fosfatos
bacterias que usan fosfatos orgnicos
e inorgnicos
Requieren fosfatasas extracelulares
(secretadas) (Gram - : periplsmicas)

El fsforo se usa principalmente para la

sntesis:
cidos nucleicos
fosfolpidos,
coenzimas
protenas
Universales
Sales minerales: cationes
K+ (en activacin de enzimas; con teicoicos de
Gram+)
Mg2+ (estabiliza ribosomas, membranas y cidos
nucleicos; cofactor en reacciones con ATP; en
clorofilas y bacterioclorofilas)
Ca2+ (cofactor de enzimas como proteinasas)
Fe2+ (en citocromos, FeS-protenas; cofactor en
enzimas)
oligoelementos o micronutrientes
Mn2+ (cofactor de ciertas enzimas)
Co2+ (vitamina B12)
Zn2+ (estabiliza ADN-polimerasas y ARN-polimerasas)
Mo (en molibdoflavoprotenas, en la nitrogenasa)
Ni (en hidrogenasas)
Nutrientes particulares

N y S (que requieren todos los seres vivos)

se encuentran en la clula en estado reducido:

El radical -NH2 : aminocidos, bases nitrogenadas

(cidos nucleicos, coenzimas);

El radical -SH : aminocidos, coenzimas como la CoA.

FACTORES DE CRECIMIENTO

Son molculas orgnicas especficas requeridas en muy

pequeas cantidades por algunas bacterias

No tienen funcin plstica (no sillares de

macromolculas) ni sirven de fuente de energa suelen
ser coenzimas, vitaminas

Ejemplos:
Brucella requieren biotina, niacina, tiamina y pantotnico
Haemophilus necesita piridn-nucletidos
Factor o vitamina funciones principales
p-aminobenzoico (PABA) precursor del cido flico

Acido flico metabolismo de compuestos C1,

transferencia de grupos metilo
Biotina biosntesis de cidos grasos; fijacin de
CO2
Tiamina (vitamina B1) descarboxilaciones; transcetolasas.
Complejo B6 (piridoxal, transformaciones de aminocidos y
piridoxamina) cetocidos
Grupo Vitamina K, quinonas transportadores de electrones
(ubiquinonas, menaquinonas, etc.)
CAPTACIN DE NUTRIENTES

1. Transporte pasivo inespecfico (= difusin simple);

2. Transporte pasivo especfico (= difusin facilitada);

3. Transporte activo.
DIFUSIN

SIMPLE: (C) a ambos lados de la membrana

O2, CO2 ,NH3, agua y otras pequeas sustancias
polares no ionizadas.

FACILITADA:
Protenas permeasa o facilitador
(sin gasto de energa)
Glicerol
TRANSPORTE ACTIVO

Contra de un gradiente de concentracin

Gasto energtico
gradiente de H+ (potencial electroqumico de
protones)
ATP
Permeasas especficas e inducibles
Tipos de transporte Transportadores
activo transmembranales
 Estructura y funcin de las protenas
transportadoras de membrana

Dirigido por la energa derivada de

la fuerza motriz de protones

Modificacin qumica de la
sustancia transportada a partir de
fosfoenolpiruvato

Participacin de proteinas
periplasmaticas y energa
derivada de ATP
Sistemas de
transportadores ABC
TRANSPORTE DE HIERRO

Fe tiene una rol en la respiracin celular

(componente de citocromo y protenas
Fe-S)
Bacterias secretan siderforos para quelar
(complejos) con el hierro frrico (Fe 3+)
Escherichia coli secreta un siderforo:
enterobactina
receptor especfico de la membrana externa
hierro se libera al espacio periplsmico
Trasporte tipo ABC lo entra al citoplasma
Medios de cultivo
Un medio de cultivo
Solucin acuosa o en estado de gel que
contiene todas las sustancias necesarias
para el crecimiento de los
microorganismos
 Composicin de un medio
de cultivo
Agua, infusiones y extractos

Extracto de levadura (fuente de vitamina B y aminocidos)

Fuente de nitrgeno: peptonas (N orgnico) (leche, carne y levadura)

Fuente de energa: Azcares

Sales minerales (regulacin de presin osmtica o como solucin buffer)

Indicadores de pH

Indicadores redox (identificacin de reacciones oxido-reduccin)

Agentes selectivos (Sales biliares)

composicin de un medio
de cultivo
Suplementos (factores de crecimiento, aminocidos,
pirimidinas)

Agentes solidificantes: agar agar, gelatina, slice,

agarosa

Agentes reductores (para asegurar anaerobiosis)

Agentes quelantes (garantiza la no formacin de

compuestos insolubles de los metales con los fosfatos).
 Clasificacin de los medios de
Estado fsico:
cultivo
- Slidos: rebanadas de pan, agar,etc...
- Lquidos (caldos): caldo nutritivo, leche
desnatada, etc...
- Semislidos: con pequeas cantidades Origen de sus componentes:
de agar - Artificiales
- Naturales
- Mixtos

Composicin qumica:

- Definidos o sintticos
- Indefinidos o complejos
- Semisinttico
Medios selectivos
Medios diferenciales
Selectivos-diferencial
Medios de Transporte
Segn su estado:

Slidos

Lquidos
Los medios de cultivo se
pueden clasificar :

Composicin qumica
Medios complejos o indefinidos
Medios sintticos o definidos:
Medio semisinttico
Medios complejos o
indefinidos:
su composicin qumica exacta se
desconoce, (extractos de materiales
naturales complejos)

Ejemplos:

Digeridos crudos de extracto de carne

Digeridos de extracto de levadura
Digeridos de peptona de carne o de soja
Digeridos de casena (de la leche).
 Medio rico
nutricionalmente e
indefinido qumicamente.
Confeccin fcil y rpida
Contienen fuentes variadas
de C y N orgnicos, sales
minerales y micronutrientes.

No podemos tener un
control nutricional preciso

Agar nutritivo : utilizado para propsitos generales para mo

poco exigentes :
Peptona (fuente C y N), Extracto de carne , NaCl y agar
Medios sintticos o definidos

En agua destilada cantidades concretas

de distintas sustancias qumicas puras,
orgnicas y/o inorgnicas.
La composicin concreta de un medio
sinttico depender de la bacteria que
queramos cultivar
 ___________________________________________________________________________
Medio sinttico para Escherichia coli Medio sinttico para Leuconostoc mesenteroides
K2HPO4 7.0 g K2HPO4
0.6 g
KH2PO4 2.0 g KH2PO4
0.6 g
(NH4)2SO4 1.0 g NH4Cl
3.0 g
MgSO4 0.1 g MgSO4
0.1 g
CaCl2 0.02 g Glucosa
25 g
Glucosa 10 g acetato sdico
20 g
microelementos:
(Fe, Co, Mn, Zn, Cu, Ni, Mo) 2-10 g cada uno
agua destilada 1000 ml aminocidos (los 20)
100-200 g cada uno
purinas (adenina, guanina)10 mg cada una
pirimidinas (uracilo, xantina), 10 mg cada una
vitaminas: biotina, flico,
nicotnico, piridoxal, piridoxamina,
piridoxina, riboflavina, tiamina,
pantotnico, PABA)......0.01-1 mg cada una
elementos traza 2-10 g cada uno
agua destilada 1000 ml
___________________________________________________________________________
 Medios semisintticos
Sustancias qumicas de naturaleza y
cantidad conocidas y sustancias de
naturaleza y composicin indefinidas.
 Medios selectivos permiten seleccionar un tipo
(o unos pocos tipos) de microorganismos.
P. ej. Co2 como fuente de carbono es selectivo para
auttrofos, el cristal violeta inhibe el crecimiento de
bacterias Gram (+).

Medios diferenciales permiten distinguir a simple

vista dos o ms tipos de bacterias en funcin de
su distinto comportamiento respecto de algn
nutriente del medio.
P. ej. Agar sangre diferencia hemolticas de no
hemolticas, McConkey diferncia lactosa (+) de
lactosa(-). Viraje de color de una sustancia indicadora
presente en el medio.
Escherichia coli en EMB

En el medio EMB (eosina-azul de

metileno)
ciertos tipos metablicos de
bacterias producen cambios de
color y precipitacin de sales
cuando producen cidos por
fermentacin de ciertas fuentes
de carbono.

Peptona
Lactosa
Verdosa con brillo metlico centro negro (E.coli) Sacarosa
Hidrogeno fosfato dipotasio
Morado cremoso (Klebsiella) Azul de metileno
Eosina amarillenta
Transparente color ambar L- S-(Salmonella y Shiguella) Agar-agar
 Eosin-methylene blue (EMB) agar

Escherichia coli (a gram-negative coliform bacterium)

showing good growth of dark blue-black colonies with
Mixed culture of Escherichia coli and Pseudomonas
metallic green sheen indicating vigorous fermentation of
aeruginosa. Note the metallic green sheen of the strong
lactose and acid production which precipitates the green
lactose-fermenting Escherichia coli and the pinkish
metallic pigment.
colonies of nonfermenter Pseudomonas aeruginosa
Hemlisis en agar sangre

El medio Agar-sangre.
5% de sangre de caballo o carnero que
revela la capacidad (y el tipo) de
hemlisis de ciertas bacterias.
Infusin de msculo de corazon y
peptona (nutrientes para el
crecimiento)
NaCl que mantiene el balance
osmtico

http://www.microbelibrary.org/asmonly/details.asp?id=1986&Lang=&ISkip=20

S. aureus Streptococcus
 Streptococcus Alpha hemolticos

Streptococcus
Streptococcus Betha
Gamma
hemolticos
Algunos medios son simultneamente
selectivos y diferenciales.

P. ej., Agar de MacConkey :

Medio de color rosado y transparente
Lactosa, peptonas, el colorante vital rojo neutro, sales
biliares, violeta cristal y otros.
Selectivo contra muchas Gram-positivas y
contraselecciona muchas Gram-negativas
Sales biliares son agentes tensioactivos que
desorganizan muchas membranas externas.
Las Enterobacterias soportar sales biliares
Staphylococcus aureus MacConkey Agar: no crece

Peptona de carne
Peptona de casena
Cloruro sdico
Lactosa
Mezcla de sales biliares
Rojo neutro
Cristal violeta

crece
 Dos tipos de Enterobacterias
Bacterias Lac+
Excretan al medio cidos orgnicos: Colonias de color rojo intenso,
debido al viraje del rojo neutro, se forma un halo turbio a cierta
distancia de estas colonias, fenmeno ocasionado por la
precipitacin de las sales biliares inducida por la acidez.

Bacterias Lac-
Fuente de C las peptonas (desaminan), incorporan el esqueleto
carbonado, excretando iones NH4+, que alcalinizan el medio de
cultivo, indicador rojo neutro vira a amarillo
 Eschericia coli on MacConkey :Lac +
(Rojas con halo turbio).

MacConkey Lac -
(incoloras)
Salmonella
typhimurium
Medios selectivos
Agar Manitol sal

2. S. epidermidis
1. S. aureus

Peptona
Extracto de carne Selectivo y diferencial para la familia
Micrococacea las colonias que son
Cloruro sodico 7.5%
capaz de desdoblar el manitol y
D- Manitol presentan colonias amarillas
Rojo de fenol
 Baid parker

Peptona de caseina
Extracto de carne
Extracto de levadura
Cloruro de litio
Yema de huevo

Micrococacea
Staphilococo desdobla la yema de huevo a traves
de la enzima lecitinasa y crece formando un doble
halo alrededor de la colonia
Presentando un color negro por que reduce el
cloruro de litio
Chromocult
Peptona, cloruro sodico,
dihidrogeno de potasio,
piruvato sodico, lauril
sulfato, Tergitol (inhibe
Gram +), 2 sustrato
cromogenicos
Coliformes E.coli
Salmon GAL b -
galactosidasa (rojas)
X glucoronido- b-D
glucoronidasa (azules)
Agar SS

Lactosa
Bilis de buey
Citrato sdico
Tiosulfato sdico
Verde brillante
Rojo de fenol

Selectivo y diferencial para la

familia Enterobacteriacea
Coliformes crecen formando
colonias amarillas
Las que no desdoblan la lactosa
crecen transparente
 medios selectivos

Proteus o Salmonella

Vibrionaceas

Salmonella o Shigella

Medio TCBS

Vibrionaceas
Enterobacterias

Medio SS
Medio TCBS

ESTUDIO PILOTO PARA LA RECUPERACIN DEL MORRO DE MORAVIA: FASE I

GRUPO DE MICROBIODIVERSIDAD Y BIOPROSPECCIN
Agar MRS ( de Man Rogosa y
Sharpe )

Peptona universal
Extracto de carne
Extracto de levadura
D glucosa
Hidrogencitrato diamnico
Acetato sdico
Sulfato de magnesio
Sulfato de manganeso
Preparacin de un medio
de cultivo
Cristalera-extran-kraft

Leer instrucciones sobre el medio

Agua destilada-desionizada

Pesar exactamente los materiales y medir agua

Calor directo o bao Maria

Homogeneidad especialmente en slidos

Esterilizar en autoclave: Temperatura y presin

 Presin

Temperatura
Medios para aislamientos primarios

Para usos generales: no selectivos, para

cultivo de una amplia variedad de
organismos difciles de hacer crecer. A
menudo estn enriquecidos con
materiales como: sangre, suero,
Hemoglobina, glutamina, u otros factores
accesorios para el crecimiento de las
bacterias (Agar Sangre, Schaeadler, etc)
 Medios de transporte

Sirven para transportar muestras clnicas

desde el lugar de la afeccin hasta el
laboratorio para ser posteriormente
analizado.

Agar stuart
Medios para identificacin:

formulaciones especiales en las que se estudian las

caractersticas fisiolgicas (nutricin y respiracin
sobre todo) especficas de las bacterias.
Seleccionando los medios adecuados se puede llegar
a la identificacin de casi cualquier bacteria
(Oxidacin-Fermentacin)
 Degradation of Biological
Macromolecules by Bacillus species

Bacillus spp. isolated from the

environment

Escherichia coli
MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO

Son medios complejos (normalmente) con aditivos adicionales para

favorecer el crecimiento de determinados microorganismos
(particularmente hetertrofos exigentes).

Ejemplo: adiccin de sangre, suero o extractos de tejidos de

animales y plantas.

BHI, Caldo cerebro corazn, Peptona buforada,

Tetrationato
 Streak Plate: Quadrant Streak (Four Sector)

Staphylococcus aureus on mannitol salt agar. Serratia marcescens, strain db11, on trypticase
Mannitol fermentation is indicated by a change soy agar
from red to yellow agar
 Streak Plate: Quadrant Streak (Four
Sector)

Thiobacillus thioparus isolated from an Antarctic lake Staphylococcus aureus on trypticase soy agar.
 Morfologa de las colonias

Bacillus subtilis

Proteus vulgaris

Staphylococcus aures
 Morfologa de las colonias

Klebsiella pneumoniae
Circular form. Serratia marcescens
cultivated on trypticase soy agar

Circular form. Streptomyces albus

cultivated on nutrient agar

Circular form. Staphylococcus aureus

cultivated on trypticase soy agar
Weakly irregular form. Bacillus thuringiensis
cultivated on 5% sheep blood agar

Filamentous form. Nocardia asteroides cultivated

on trypticase soy agar
http://www.microbelibrary.org/asmonly/details.asp?id=2566&Lang=English

Circular form, umbonate elevation. Pasteurella

multocida cultivated on 5% sheep blood agar Irregular form. Mycobacterium marinum
cultivated on Mycobacterium 7H11 agar with
oleic acid-albumin-dextrose-catalase
enrichment.