TDE AnaPaulaGoissis

Ana Paula Abdalla Goissis
ANLISE ESTRUTURAL DO COLGENO TIPO I.

CORRELAO ESTRUTURA:ATIVIDADE BIOLGICA
Dissertao de Mestrado apresentada ao programa de Ps-

Graduao Interunidades em Bioengenharia Escola de
Engenharia de So Carlos/ Faculdade de Medicina de Ribeiro
Preto/ Instituto de Qumica de So Carlos da Universidade de
So Paulo, como parte dos requisitos para obteno do Ttulo de
Mestre em Bioengenharia.
Orientador: Prof. Dr. Gilberto Goissis
So Carlos SP
2007
AUTORIZO A REPRODUO E DIVULGAO TOTAL OU PARCIAL DESTE
TRABALHO, POR QUALQUER MEIO CONVENCIONAL OU ELETRNICO,
PARA FINS DE ESTUDO E PESQUISA, DESDE QUE CITADA A FONTE.
Ficha catalogrfica preparada pela Seo de Tratamento

da Informao do Servio de Biblioteca EESC/USP
Goissis, Ana Paula Abdalla

G616a Anlise estrutural do colgeno do tipo I : correlao
estrutura : atividade biolgica / Ana Paula Abdalla
Goissis ; orientador Gilberto Goissis - So Carlos,
2007.
Dissertao (Mestrado-Programa de Ps-Graduao

Interunidades Bioengenharia)) - Escola de Engenharia de
So Carlos/Faculdade de Medicina de Ribeiro Preto/
Instituto de Qumica de So Carlos da Universidade de So
Paulo, 2007.
1. Colgeno. 2. colgeno estrutura. 3. Correlao

estrutural. 4. Atividade biolgica. 5. Matriz
extracelular. I. Ttulo.
DEDICATRIA
Aos meus pais Gilberto e Vilma, aos meus irmos Nando, Bia e Tina, alicerce e
apoio em todas as minhas conquistas.
A todos os meus avs, em especial aos paternos, v Joo e v Ottilia que me
acolheram durante toda esta jornada de minha vida, dando fora e coragem para enfrentar
os meus desafios.
Aos meus tios Joo Carlos e Mrcia, e ao meu primo Marcelo, que embora
distantes, sempre estiveram ao meu lado, me apoiando e ensinando que para vencer nesta
vida, precisamos de muita luta para conquistar vitrias.

AGRADECIMENTOS
Agradeo a Deus, por estar presente em todo os dias de minha vida, pois tenho certeza
que Ele nunca me deixou s, durante toda essa minha jornada.
Aos meus pais e aos meus irmos que sempre me apoiaram, me deram foras e que
acreditaram em mim durante toda essa minha trajetria.
Ao orientador Prof. Dr. Gilberto Goissis pela sua orientao, colaborao e estmulo
pesquisa.
A todos meus professores da ps-graduao, pela dedicao ao ensino, incentivo e
orientao.
A secretaria do curso de ps-graduao da bioengenharia e especialmente, a Janete pela
ateno que sempre me dispensaram.

Lista de Figuras_____________________________________________
LISTA DE FIGURAS
Figura 1. Ilustrao do tecido conjuntivo contendo a Matriz Extracelular e clulas, da
qual o colgeno do tipo I um dos integrantes mais importantes. O fundo
cinza representa o colgeno da matriz extracelular......................................2
Figura 2. Representao esquemtica da biossntese do colgeno por fibroblastos e sua
posterior organizao na estrutura em forma de fibras.................................3
Figura 3. Micrografia de pericrdio bovino obtido por Microscopia Eletrnica de
Transmisso mostrando o padro alternado de bandas mais claras e mais
escuras que no conjunto denominado de perodo D..................................4
Figura 4. Representao esquemtica da Matriz Extracelular e seus componentes
majoritrios...................................................................................................6
Figura 5. Esquema representativo das caractersticas estruturais da Laminina e seus
domnios funcionais de interao com ligantes............................................7
Figura 6. Esquema representativo das caractersticas estruturais da Fibronectina e seus
domnios funcionais de interao com ligantes...........................................8
Figura 7. Representao esquemtica de uma Glicosaminoglicana: a cido
Hialurnico; b Proteoglicana...................................................................10
Figura 8. Esquema representativo das caractersticas estruturais da tripla hlice e sua
formao a partir das cadeias alfa...............................................................13
Figura 9. Esquema ilustrativo para a reorganizao fibrilar do colgeno do tipo I nos
tecidos aps sua liberao para o meio extracelular...................................16

Lista de Figuras_____________________________________________
Figura 10. Representao esquemtica da interao do Fosfotungstato de Amnio com
grupos carregados positivamente na fibrila de colgeno............................17
Figura 11. Micrografia de Microscopia Eletrnica de Transmisso de fibras de
colgeno do tipo I obtida aps impregnao negativa................................18
Figura 12. a - Micrografia de Microscopia Eletrnica de Transmisso de fibras de
colgeno do tipo I obtida aps impregnao positiva. Overlap: bandas c1,
b2, b1 e a4. Gap: bandas a3, a2, a1, e2, e1, d, c3 e c2; b Densitometria
correspondente distncia de um perodo D..............................................19
Figura 13. Esquema representativo da distribuio dos aminocidos no perodo D de
molculas de Tropocolgeno dispostas alternadamente de de seu
comprimento. Representao apenas das bandas b1, a4, a3 e a2. ............20
Figura 14. Modelo pentafibrilar de Smith para a organizao fibrilar do colgeno
baseado no deslocamento da molcula de Tropocolgeno de de seu
comprimento...............................................................................................20
Figura 15. Estrutura primria para o intervalo entre as bandas b1 a2 para o modelo
pentafibrilar proposto por Smith: regio limite Gap:Overlap...................21
Figura 16. Esquema da transduo de sinais provenientes da Matriz Extracelular para
o interior da clula......................................................................................26
Figura17. Representao esquemtica da estrutura das Integrinas...............................27
Figura 18. Remodelagem do Tecido sseo: formao de osso novo por osteoblastos
associados reabsoro simultnea por osteoclastos.................................29
Figura 19. Esquema da remodelagem do osso induzida por estmulos mecnicos......30

Lista de Figuras_____________________________________________
Figura 20. Esquema representativo das alteraes da atividade celular do fibroblasto
em funo de tenses aplicadas sobre a Matriz Extracelular. Forma
relaxada (a) e forma sob tenso (b)............................................................31
Figura 21. Estrutura qumica dos aminocidos cido Asprtico, Arginina e Lisina...32
Figura 22. Modelo para mineralizao in vitro de matrizes de colgeno polianinico
com 46 12 cargas adicionais negativas, preparadas por hidrlises de
cadeias laterais de resduos de Asparagina e Glutamina presentes na
estrutura colagnica....................................................................................36
Figura 23. Representao esquemtica para a formao do trombo plaquetrio aps
trauma da parede vascular...........................................................................38
Figura 24. a - Representao esquemtica das relaes do colgeno do tipo I com
funes teciduais que incluem a adeso celular, molculas de ancoragem,
propriedades estruturais e Ageing de acordo com Di Lullo11. As posies
relativas se referem molcula de Tropocolgeno com cerca de 1000
resduos de aminocidos; b Representao do Tropocolgeno...............40
Figura 25. Representao esquemtica da molcula de Tropocolgeno......................50
Figura 26. Representao esquemtica da microfibrila de colgeno de acordo com o
modelo de Smith. As caixas colocadas entre os segmentos que formam a
microfibrila correspondem estrutura primria de 80 a 90, contando a
partir do resduo N-terminal.......................................................................51
Figura 27. Representao em modelo de bolas e basto dos aminocidos cidos (a) e
bsicos (b) presentes no colgeno do tipo I................................................53

Lista de Figuras_____________________________________________
Figura 28. Representao em modelo de bolas e basto dos aminocidos hidrofbicos
presentes no colgeno do tipo I...................................................................54
Figura 29. Representao esquemtica de um segmento da planilha da estrutura

primria do perodo D para ilustrar a origem dos grficos apresentados
neste trabalho..............................................................................................55
Figura 30. Distribuio da somatria dos valores numricos relativos ao Overlap e
Gap para os resduos de Valina, Leucina, Isoleucina, Metionina, e
Fenilalanina.................................................................................................58
Figura 31. Distribuio dos resduos de cido Asprtico e Glutmico nas alfas hlices
da microfibrila correspondente ao intervalo de um perodo D...................60
Figura 32. Distribuio dos resduos de Lisina e Arginina nas alfas hlices da
microfibrila correspondente ao intervalo de um perodo D........................61
Figura 33. Perfil da distribuio de aminocidos cidos mais bsicos (rea em laranja)
e dos hidrofbicos (linha preta) para a regio do perodo D: Overlap:
bandas c1, b2, b1 e a4. Gap, bandas a3, a2, a1, e2, e1, d, c3 e c2............62
Figura 34. Representao esquemtica em trs dimenses da distribuio dos
aminocidos hidrofbicos do perodo D do colgeno do tipo I..................63
Figura 35. Representao esquemtica tridimensional da distribuio dos aminocidos
hidrofbicos do perodo D do colgeno do tipo I ilustrando a formao de
canais. Viso de duas posies diferentes (giro de 180 ). ........................63
Figura 36. Representao esquemtica tridimensional aminocidos cidos (em
vermelho) juntamente com os aminocidos hidrofbicos (em preto) para o
perodo D do colgeno do tipo I. Viso de duas posies diferentes (giro de
180 )...........................................................................................................64
Lista de Figuras_____________________________________________
Figura37. Representao esquemtica tridimensional dos aminocidos bsicos (em

azul) juntamente com os aminocidos hidrofbicos (em preto) para o
perodo D do colgeno do tipo I. Viso de duas posies diferentes (giro de
180 ) ..........................................................................................................64
Figura 38. Representao esquemtica em trs dimenses da distribuio de
aminocidos cidos mais bsicos (em azul) e hidrofbicos (em preto) para
o perodo D do colgeno do tipo I..............................................................65
Figura 39. Distribuio dos aminocidos cidos e bsicos no perodo: rea preenchida
em laranja - distribuio normal; linha verde - distribuio resultante da
subtrao do nmero de aa (cidos mais bsicos) menos o nmero de
aminocidos hidrofbicos...........................................................................67
Figura 40. Ilustrao da formao de pontes salina entre dois aminocidos (a) e numa
protena (b, seta).........................................................................................68
Figura 41. Representao esquemtica para a resultante total de cargas na molcula de
Tropocolgeno do tipo I com base na sua estrutura primria. ...................70
Figura 42. Curva em laranja: distribuio normal de aminocidos cidos e bsicos no
perodo D; Curva em preto: distribuio normal dos aminocidos
hidrofbicos; Curva em verde: resultante da distribuio de cargas ao
longo do perodo D.....................................................................................71
Figura 43. Curva em preto: distribuio normal dos aminocidos hidrofbicos; Curva
em verde: resultante da distribuio de cargas ao longo do perodo D......72

Lista de Tabelas____________________________________________
LISTA DE TABELAS
Tabela 1. Tipos de colgeno com cerca de 300 nm de comprimento e com um domnio
helicoidal ininterrupto.................................................................................12
Tabela 2. Nmeros de resduos de aminocidos presentes na tripla hlice do colgeno
do tipo I.......................................................................................................15
Tabela 3. Localizao de eventos de natureza estrutural associado ao perodo D do
colgeno do tipo I. Identificao do ligante e stio da
interao...................................................................................................41
Tabela 4. Localizao de eventos que envolvem ligantes associados adeso celular e,
relacionados com o perodo D do colgeno do tipo I. Identificao do
ligante e stio da interao........................................................................42
Tabela 5. Localizao das seqncias e/ou integrinas envolvidas na adeso celular
associados ao perodo D do colgeno do tipo I. Identificao da clula e
stio da interao......................................................................................44
Tabela 6. Localizao de eventos de natureza qumica associados ao perodo D do
colgeno do tipo I. O agente e o stio da interao..................................45
Tabela 7. Distribuio dos aminocidos cidos, bsicos e hidrofbicos no Overlap e
Gap do perodo D do colgeno tipo I......................................................57
Tabela 8. Resumo da localizao das interaes de ligantes com o colgeno do tipo I e
sua identificao dentro do perodo D.....................................................73
Tabela 9. Nmero de eventos envolvendo as zonas Overlap e Gap do Perodo D do
colgeno do tipo I nas atividades da Matriz Extracelular........................75
Tabela 10. Nmero de eventos envolvendo o colgeno do tipo I nas atividades da
Matriz Extracelular nas zonas: mistas (regies formando aglomerados de
aminocidos hidrofbicos, cidos e bsicos em cinza); bolses ou canais
(regies de densidades de cargas positivas e/ou negativas delimitadas por
regies hidrofbicas em amarelo)............................................................76

Resumo
RESUMO
GOISSIS, A. P. A. Anlise estrutural do colgeno do tipo I. Correlao estrutura:

atividade biolgica. 2007. 98 f. Dissertao (Mestrado)- Ps-Graduao Interunidades
em Bioengenharia-Escola de Engenharia de So Carlos, Universidade de So Paulo,
2007.
Alm das funes mecnicas, sabe-se que o colgeno do tipo I um dos componentes mais
ativos na modulao das atividades biolgicas que ocorrem na matriz extracelular (MEC) tais
como a adeso celular, a coagulao e a mineralizao do osso. Estes eventos ocorrem nos
limites do perodo D, que provavelmente o domnio funcional que mais prevalece em relao
transferncia da informao extracelular para o interior da clula. O objetivo deste trabalho foi
estudar as correlaes existentes entre as atividades biolgicas da MEC e as caractersticas
estruturais do colgeno do tipo I, principalmente em relao distribuio topogrfica dos
aminocidos (aa) cidos, bsicos e hidrofbicos. A metodologia empregada foi baseada em
informaes j existentes sobre a estrutura colgeno do tipo I e suas atividades relacionadas com
a MEC. Os resultados mostraram que aa cidos, bsicos e hidrofbicos formam duas regies
distintas. Em uma delas, aa cidos e bsicos se alojam em reas delimitadas por aa
hidrofbicos; na outra, aa bsicos, cidos e hidrofbicos formam aglomerados localizados
principalmente nas proximidades dos limites Overlap:Gap. Exceto para os eventos de natureza
estrutural so as regies do colgeno do tipo I mais envolvidas na modulao das atividades da
MEC, com a interface Overlap:Gap funcionando como um divisor do controle destas
atividades. Enquanto 83,2% das atividades de adeso esto localizadas na zona do Overlap,
93,3% das atividades de natureza estruturais ocorrem a partir da zona limite Overlap:Gap e em
direo zona Gap. Embora nenhuma correlao possa ter sido estabelecida para a resultante de
carga, sugere-se que a participao do colgeno do tipo I nas atividades da MEC, possa estar
associada diferenas de interaes dos ligantes (carga, massa molecular e hidrofobicidade)
com gradientes eletrosttico e hidrofbico existentes ao longo do perodo D.
Palavras-chave: Colgeno. Correlao estrutural. Atividade biolgica. Matriz extracelular.

Abstract
ABSTRACT
GOISSIS, A. P. A. Structural analysis of type I collagen. Structure activities

relationships. 2007. 98 f. Dissertation (master degree)- Ps-Graduao Interunidades
em Bioengenharia-Escola de Engenharia de So Carlos, Universidade de So Paulo,
2007.
Besides mechanical function, it is known today that type I collagen plays a major role in
the modulation of many of the activities occurring in the extra-cellular matrix (ECM)
such as cell adhesion, coagulation cascade and mineral deposition during bone
formation. All these events occur by interaction of cells and ligands within the D-period
of collagen microfibrill assembly, which is perhaps the most prevalent module of ECM
information in the body. The purpose of this work was the study of correlations between
the biological activities of ECM and the structural features of collagen associated with
the distribution of acidic, basic and hydrophobic amino acids (aa) within the D period.
The methodology used was based on existing information with respect to the structure
of type I collagen and its function with respect to ECM activities. The results showed
that acidic, basic and hydrophobic aa are found in two major distinct regions: one in
which acidic and basic aa are located in areas defined by hydrophobic aa barriers; the
other in which acidic, basic and hydrophobic aa forming clusters located preferentially
in the boundaries of the Overlap:Gap zones. Except for the structural event, these
clusters are the major sites for the interaction involving cell adhesion. The results also
suggest that the Overlap:Gap interface function as a borderline for collagen
interactions with ECM since 83,2% of the activities related to cell adhesion are located
in the Overlap region while 93,3% of the activities of structural nature are enclosed
within the limiting zone of Overlap:Gap to the direction of the Gap zone. Although no
correlation could be established for net charge along the D period it is suggested that
type I collagen participation in the activities of the ECM may also be associated to
differences in ligand interactions (charge, molecular mass and hydrophobicity) with the
electrostatic and the hydrophobic gradients that exists within the D period.
Sumrio
SUMRIO
LISTA DE FIGURAS
LISTA DE TABELAS
RESUMO
ABSTRACT
I. INTRODUO
I.1. A Matriz extracelular.................................................................................................5
I.1.1. Constituintes macromoleculares presentes em todos os tecidos...........................6
I.1.1.1. Protenas no colagnicas....................................................................6
I.1.1.2. Colgeno............................................................................................11
I.1.1.2.1. Estrutura do colgeno do tipo I..................................................12
I.1.1.2.2. Composio qumica..................................................................13
I.1.1.2.3. Organizao do colgeno do tipo I.............................................16
I.1.2. Componentes presentes apenas em tecidos mineralizados..................................22
I.1.2.1. Componentes comuns aos dois tecidos..............................................22
I.1.2.2. Componentes exclusivos do Tecido sseo........................................23
I.1.2.3. Componentes exclusivos da Dentina..................................................24
I.2. A Interao clula:matriz extracelular.................................................................25
I.2.1. Transduo de sinais mediados por Integrinas....................................................27
I.3. Controle da atividade celular................................................................................28
I.3.1. Com base na adeso............................................................................................29
I.3.1.1. Remodelagem de tecidos...................................................................29
I.3.1.1.1. Tecido sseo..............................................................................29
I.3.1.1.2 Tecido Mole................................................................................30
I.3.1.1.3 Ageing.............................................................................32
I.3.2. Com Base na interao macromolecular..........................................33
I.3.2.1. Biomineralizao do Tecido sseo...................................................33
I.3.2.2. Processo de coagulao: plaquetas e a homeostase...........................37
I.4. Localizao das interaes de ligantes com o colgeno do tipo I e sua identificao
dentro do perodo D..........................................................................................................39
II. OBJETIVOS...............................................................................................................48
III. METODOLOGIA.....................................................................................................50
Sumrio
III.1. Descrio do mapa de distribuio da estrutura primria das cadeias alfas

que formam a microfibrila de acordo com o Modelo de
Smith.................................................................................................................................50
III.2. Elaborao dos grficos.......................................................................................52
A Programa Origin.....................................................................................................52
B Programa Excel Windows 98..........55
IV. RESULTADOS E DISCUSSO..............................................................................56
IV.1. Anlise estrutural do colgeno do tipo I.............................................................56
IV.2. Distribuio dos aminocidos cidos, bsicos e hidrofbicos presentes no
perodo D da Microfibrila...............................................................................................57
IV.3. Anlise da distribuio dos aminocidos de acordo com o Modelo de
Smith..................................................................................................................................61
IV.4. Caractersticas cido-bsicas das regies do perodo D do colgeno
envolvidas na interao com a
MEC...................................................................................................................................68
IV.5.Caractersticas das Inter-relaes do colgeno tipo I com eventos da matriz

extracelular........................................................................................................................73
V. CONCLUSES..........................................................................................................79
VI. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS...................................................................81
VII. ANEXOS ............................................................................................................91
Introduo 1
I. INTRODUO
No novo conceito de biomateriais, estes no devem servir apenas para o
preenchimento de espaos (RATNER, 1993), mas tambm devem estimular uma
resposta biolgica, quando implantados. O desenvolvimento desses biomateriais est
baseado no apenas na funo que se deseja substituir, mas nas relaes entre
estrutura e propriedade dos materiais (LANGER et al., 1990). Nesta categoria
enquadram-se os materiais inteligentes (HOFFMAN, 1995), biomimticos (MARK,
1994) e as Matrizes Extracelulares sintticas (MECs) destinados principalmente
engenharia de tecido (KIM, 1998). Dentro destes novos conceitos, o colgeno,
principalmente o colgeno tipo I vem desempenhando um papel preponderante, no
apenas em virtude de suas propriedades como material (MATSUI, 1996), mas
tambm pela sua participao nas interaes clula: Matriz Extracelular (MEC)
(RATNER, 1993) cuja resultante a manuteno da homeostase dos tecidos.
O termo colgeno deriva da palavra grega que significa cola e sua primeira
definio surgiu em 1983 no dicionrio de Oxford (ALBERTS, 1994) como sendo
aquele constituinte dos tecidos que, por aquecimento, d origem gelatina. o
principal constituinte dos seres vivos e alm de ser encontrado em abundncia na
pele, tendo, vasos sangneos, cartilagem, osso, crnea, est presente tambm nos
interstcios de todos os outros tecidos e rgos, com exceo do sangue, linfa e
tecidos queratinosos.
Introduo 2
Figura 1. Ilustrao do tecido conjuntivo contendo a Matriz Extracelular e clulas, da
qual o colgeno tipo I um dos integrantes mais importantes. O fundo
cinza representa o colgeno da Matriz Extracelular.
No ser humano, o colgeno corresponde cerca de 25% da protena total
(ALBERTS, 1994) e, por conseguinte, a 6% do peso corporal. At recentemente, sua
principal funo era somente a de manter a estrutura fsica de uma espcie, devido
sua grande resistncia mecnica conferida pela sua organizao macromolecular, que
resulta na formao de fibras, principalmente no caso do colgeno tipo I (Figura 1),
tecido sseo (TO) e tendes.
produzido na forma de pr-colgeno, pelos fibroblastos (tecido conjuntivo),
clulas musculares lisas (parede vascular) e osteoblastos (clulas formadoras do TO)
(KRUKOWSKI et al., 1995). Uma vez lanado para o meio extracelular, perde parte
de sua estrutura protica e, por um processo denominado fibrilognese, que consiste

Introduo 3
do empacotamento lateral e longitudinal das molculas de tropocolgeno d origem a
estruturas fibrilares (Figura 2).
Fibroblasto
Tropocolgeno
a
Fibrila de
colgeno tipo
Substncia amorfa
Fibra elstica Fibrila de colgeno
do tipo (III)
(Fibra Reticular)
Figura 2. Representao esquemtica da biossntese do colgeno por fibroblastos e
sua posterior organizao na estrutura em forma de fibras.
O colgeno mais importante o do tipo I que responsvel no apenas pela
manuteno da integridade da maioria dos tecidos em funo da suas propriedades
mecnicas (RAMACHANDRAN, 1967), mas tambm por sua participao ativa na
funcionalidade dos tecidos em funo de sua interao com as clulas presentes na
MEC. Est presente em todos os vertebrados, e includo na lista das maiores e mais
complexas macromolculas encontradas no reino animal. Juntamente com outras
macromolculas formam o que se denomina MEC (HAY, 1992).
Mais recentemente (DI LULLO et al., 2002) uma questo relevante em
relao ao colgeno tipo I vem sendo levantada e diz respeito relao entre a
unidade fsica perodo D (Figura 3) e sua participao no controle de eventos

Introduo 4
biolgicos envolvendo a atividade celular frente a estmulos que, no conjunto,
preservam a funcionalidade biolgica dos tecidos (LODISH et al., 1995). Na Figura
3, a denominao perodo D, na fibrila de colgeno, corresponde distncia limitada
por uma zona clara e uma escura disposta consecutivamente como indicada pelas
setas (Figura 3).
Figura 3. Micrografia de pericrdio bovino obtido por Microscopia Eletrnica de
Transmisso mostrando o padro alternado de bandas claras e escuras que
no conjunto denominado de perodo D.
Embora no seja possvel separar com uma linha divisria bem definida, pois
na grande maioria so eventos interligados, por uma questo didtica, este trabalho
divide as interaes matrizes:eventos teciduais em duas categorias:
1 Eventos onde a expresso da atividade depende da adeso celular sobre a
MEC. Esses processos so resultantes tanto de alteraes bioqumicas como da ao
mecnica sobre os tecidos (GUMBINER, 1996). Nesta categoria esto enquadrados,
por exemplo, a dinmica da remodelagem ssea (POLLACK, 1984), a remodelagem

Introduo 5
de tecido mole (HODDE, 2002) e o Ageing (BAILEY, 2001). Esses processos so
afetados pela simples presena, da seqncia de aa Arg, Gly, Asp quer na estrutura
primria do colgeno tipo I, quer em outras protenas da MEC tal como na
Fibronectina. As seqncias aminocidos (aa) Arg Gly - Asp - das mais
importantes para adeso celular e a ancoragem de molculas funcionais presentes na
MEC (HYNES, 2002; BHADRIRAJU; LINDA, 2000), apesar de existirem outras
seqncias de aa, que tambm so responsveis pela adeso celular (KNIGHT et al.,
1998).
2 - Eventos teciduais resultantes de interaes qumicas
macromoleculares que ocorrem na MEC; principalmente interaes eletrostticas, a
partir das quais so desencadeados eventos to importantes quanto aqueles resultantes
da adeso celular. Um exemplo a interao da Fosfoforina (DAHL; SABSAY;
VEIS, 1998) com colgeno tipo I que, nos dentes, dispara o processo de
mineralizao pela deposio de Hidroxiapatita (HA) resultando na formao da
Dentina. A Fosfoforina uma protena exclusiva da Dentina (HIDALGO; ITANO;
CONSOLARO, 2005).
I.1. A Matriz Extracelular
A MEC um produto celular complexo formado por glicoprotenas, colgeno,
glicosaminoglicanas (GAGs) e proteoglicanas (PG) como componentes estruturais
majoritrios mais importantes. Estes componentes so excretados pelas clulas e se
organizam no meio extracelular por meio de interaes mltiplas com receptores
especficos, situados na membrana citoplasmtica (ZAGRIS, 2001). Alm da funo
estrutural, controlam a presso onctica e as propriedades mecnicas.
Esquematicamente a MEC mostrada pela Figura 4. Como ser descrito a seguir,

Introduo 6
existem na MEC componentes comuns a todos os tecidos, e outros apenas em alguns,
como acontece, nos tecidos mineralizados.
Fibras de Carbohidratos Fluido Extracelular

MEC
Glicoprotena
Colesterol
Filamentos de
citoesqueleto
Protena Protena
perifrica Integral Citoplasma
Figura 4. Representao esquemtica da Matriz Extracelular e seus componentes
majoritrios.
I.1.1. Constituintes macromoleculares presentes em todos os tecidos.
Esta diviso est baseada nas caractersticas qumicas das macromolculas, a
maioria polissacardeos, protenas ou suas associaes.
I.1.1.1. Protenas no colagnicas
1 Glicoprotenas (GLYCOSAMINOGLYCANAS, 2006; TENRIO;
SANTOS; ZORN, 2003).
Seu nmero bastante varivel e incluem a Fibronectina, Bronectina,
Tenascina, Entactina e Laminina. Essas macromolculas esto envolvidas no
processo da adeso celular, em etapas especficas do desenvolvimento dos tecidos.
So molculas que contm mltiplos stios de ligao podendo interagir entre si, com
outras molculas da MEC, ou com a superfcie celular. So responsveis pela

Introduo 7
organizao do colgeno, das PG e das clulas em uma estrutura ordenada,
configurando o que chamamos de tecido.
A Lamininas: so glicoprotenas trimricas caracterizadas por apresentar
elevada massa molecular e presentes como componentes majoritrios da MEC, da
membrana basal e dos tecidos embrionrios. Uma molcula de Laminina tpica
(Figura 5) formada por trs cadeias polipeptdicas distintas, caracterizadas por
funes variadas, atribudas a diferentes domnios funcionais existentes na sua
estrutura. Um domnio uma regio especfica de uma protena e responsvel por
uma funo biolgica bem definida.

Cadeia A
Ligao com sulfato Cadeia B2

de lipdios
Cadeia B1
Ligao para o Ligao para o colgeno

colgeno tipo IV e sulfato de lipdios
Ligao para Integrinas e

Cadeias
Entactina
polipeptdicas
Ligao para neuritos
Stio de ligao para

sulfato de heparana
Figura 5. Esquema representativo das caractersticas estruturais da Laminina e seus
domnios funcionais de interao com ligantes.

Introduo 8
Suas interaes com as clulas acontecem sempre atravs das Integrinas,
receptores existentes na membrana celular, e parciais responsveis pelo incio dos
sinais intracelulares de transduo. A Laminina importante na adeso celular,
migrao direcional, modulao mitognica, direcionamento do axnio, manuteno
do fentipo de clula diferenciada e a induo de novas maneiras de expresso
celular. Liga-se tambm ao colgeno tipo IV e a Ebronectina.
B - Entactina: aparece nos estgios iniciais da fibrilognese e aparentemente,
est relacionada com a migrao direcional das clulas.
C - Fibronectina: uma protena formada por duas cadeias polipeptdicas
iguais, e como a Laminina, apresenta domnios mltiplos de adeso. Podem ligar-se
ao colgeno, Entactina, GAGs e clulas, em processos importantes para a migrao
celular, durante a gastrulao. A Fibronectina tem importncia, tambm, na regulao
do gen responsvel pela produo da colagenase, uma enzima especfica para a
degradao do colgeno.
Fibrina
Heparina e Fibrina
superfcie
clulas de
Heparina
Fibrina
Seqncia Colgeno
RGD
Ponte de
disulfeto
Figura 6. Esquema representativo das caractersticas estruturais da Fibronectina e
seus domnios de interao com ligantes.

Introduo 9
2. Glicosaminoglicanas
Glicosaminoglicanas (GAGs) so componentes majoritrios da MEC, e
importantes nos processos que controlam a proliferao celular, a migrao, a
diferenciao e a manuteno das estruturas morfogenticas. As mais importantes, do
ponto de vista fisiolgico, so o cido hialurnico, o sulfato de condroitina, o sulfato
de dermatana, o sulfato de queratana e o sulfato de heparana. Suas unidades bsicas
so dissacardeos, formados por uma molcula de cido urnico e uma de N-
acetylgalactosamine ou de N-acetylglucosamine. As GAGs apresentam alta massa
molecular, com um nmero elevado de cargas negativas localizadas na superfcie das
clulas ou na MEC. O cido hialurnico o nico, entre as GAGs, que no contm o
grupo sulfato e tambm no est ligado covalentemente a protenas. Sua massa
molecular pode variar entre 100,000 - 10,000,000 D. Em relao sua associao
com protenas, as GAGs podem ser divididas em dois grandes grupos:
A O grupo dos cidos Hialurnicos: formado por milhares de unidades do
dissacardeo cido d-hialurnco - N-acetil-d-glucosamina (Figura 7a), dando origem a
molculas de milhes de Daltons de massa molecular e que formam, na MEC,
complexos com as PG, sem a participao de ligaes covalentes.
B O grupo das Proteoglicanas: composto de macromolculas formadas
pela associao das outras GAGs, por meio de ligao covalente, e caracterizadas por
elevada massa molecular (Figura 7b).
Dentre as PG mais importantes esto a Decorina e a Biglicana (TENRIO;
SANTOS; ZORN, 2003; BHADRIRAJU; LINDA, 2000) com massa molecular
reduzida e rica em leucina. So formadas por uma protena central estrutural, na qual
vrias molculas de GAGs esto covalentemente ligadas (Figura 7b). Intervem em

Introduo 10
vrios processos celulares que incluem a proliferao, a migrao, a adeso e
agregao celular. So importantes no controle dos processos inflamatrios,
remodelagem e mineralizao (HOSHI et al., 1999).
COO CH2OH
H O O
H H
H
a OH H HO H H
O
O
H OH H NHCOCH 3
n
Protena central
cido hialurnico
Sulfato de queratan
Sulfato de condroitina
Figura 7. Representao esquemtica de uma glicosaminoglicanas: (a) cido
Hialurnico (b) Proteoglicana.
Em relao ao colgeno, sua funo manter ntegra a estrutura fibrilar, ao
mesmo tempo em que esconde os stios potenciais que do origem no apenas a
mineralizao, mas tambm a outros eventos celulares (DOUGLAS et al., 2000). O
stio de ligao da Decorina ao colgeno parece ser o mesmo, onde deformaes

Introduo 11
estruturais ocorrem induzidas por aes mecnicas (BARENBERG; FILISKO; GEIL,
1978). As concentraes da Biglicana e Decorina so bastante elevadas na pr-
dentina (RIMINUCCI; BIANCO, 2003).
3 Osteopontina (SREENATH et al., 2003)
Embora seja uma glicoprotena, descrita separadamente. Pertence famlia
das Sialoprotenas encontradas na MEC de todos os tecidos, mas tem funo
importante no tecido sseo (TO). No TO, depois do colgeno o componente
protico mais abundante. rica em resduos de cido Asprtico (Asp) e torna-se
mais cida aps a fosforilao dos resduos de Serina (Ser) e Treonina (Thr),
presentes na sua estrutura primria. Tm vrios domnios para adeso celular do tipo
Arg-Gly-Asp importantes para a adeso de osteoblastos e osteoclastos. Sua
concentrao nos tecidos aumenta significativamente na presena de doenas tais
como cncer, aterosclerose, estenose de bioprteses valvulares e infarto do miocrdio.
I.1.1.2. Colgeno
Em relao aos tipos, resultantes do processo biossinttico, os colgenos so
formados de 19 cadeias diferentes (cadeia : denominao dada a cada cadeia
polipeptdica que forma a tripla hlice do colgeno) e que por associao 3 a 3, do
origem , pelo menos, 27 tipos diferentes de colgeno. Estes so classificados em trs
grandes grupos, em funo das caractersticas da organizao macromolecular da
tripla hlice (SILVA, 2005):
1 - Molculas com cerca de 300 nm de comprimento, com um domnio
helicoidal ininterrupto, dos quais alguns exemplos so mostrados na Tabela 1. So

Introduo 12
encontrados nos diferentes tipos de tecidos e sua classificao feita de acordo com
as caractersticas da estrutura primria das cadeias que formam a tripla hlice.
2 - Molculas com domnios helicoidais ininterruptos com comprimento igual
ou maior que 300 nm;
3 - Molculas menores que 300 nm de comprimento com domnios helicoidais
ininterruptos ou no.
O colgeno tipo I, enfoque principal deste trabalho, formado por trs cadeias
polipeptdicas do tipo 1(I), 1(I) e 2(I). Nos tecidos, encontrado na forma de
fibras com dimetros entre 80 e 160 nm, formando as estruturas do sistema vascular,
tendes, tecido sseo e muscular.
Tabela 1. Tipos de colgenos com cerca de 300 nm de comprimento e com um
domnio helicoidal ininterrupto.
Tipo Composio em hlice Localizao

I [1(I)]22(I) Pele, tendo, ossos, crnea.
II [1(II)]3 Cartilagem, humor vtreo.
III [1(III)]3 Vasos sangneos, trato gastrintestinal.
IV [1(IV)]22(IV)] Membrana basal.
I.1.1.2.1. Estrutura do colgeno tipo I (SILVA, 2005)
O colgeno tipo I formado por trs cadeias polipeptdicas caracterizadas pela
repetio de um triplete Gly-X-Y onde X , geralmente, uma Prolina (Pro) e Y uma
Hidroxiprolina (Hypro) (Figura 8). Nas cadeias , a distncia entre dois resduos
consecutivos de Gly 8,7 e, no eixo maior da tripla hlice, cada resduo de aa
contribui na descendncia em cerca de 2,8 . As posies X e Y alm da Pro ou

Introduo 13
Hypro podem ser ocupadas por outros aa naturais. Esta estrutura corresponde sua
unidade monomrica e recebe o nome de Tropocolgeno.
N-Terminal
Figura 8. Esquema representativo das caractersticas estruturais da tripla hlice e sua
formao a partir das cadeias alfa.
Cada cadeia apresenta uma massa molecular de aproximadamente 100.000
mol/g e, para o caso do colgeno tipo I, a cadeia alfa-1 contm 1056 resduos de aa e
a alfa-2 1038 resduos, dando origem a uma tripla hlice com cerca de 300 nm de
comprimento e 1,5 nm de dimetro. Alm da regio helicoidal, existem nas
extremidades, seqncias que no fazem parte desta estrutura e so denominadas de
telopeptdeos N- terminal com 16 resduos de aa e C-terminal com 26 resduos de aa
(Figura 8) (SILVA, 2005).
I.1.1.2.2 Composio qumica
Em relao aos aa mais significativos o colgeno tipo I apresenta uma
concentrao de Gly de 33%, a Pro de 12% e a Hypro 11%. As concentraes para os
outros aa constituintes so mostradas abaixo (Tabela 2).

Introduo 14
Resumidamente, em relao ao contedo de aa, podemos dizer que o colgeno
tipo I apresenta as seguintes caractersticas:
A - 0,7% de Hidroxilisina (Hyl);
B - No possui Triptofano (Trp) e os resduos de Tirosina encontram-se
exclusivamente na regio dos telopeptdeos, que correspondem s regies no
helicoidais do Tropocolgeno;
C - Os aa polares constituem quase 40% da molcula: 11% so bsicos e 9%
cidos, os outros 17%, correspondem a aa hidroxilados;
D - Cerca de 4% dos resduos correspondem a amidas de Asp e Glutmico
(Glu).
E - Uma das caractersticas da estrutura primria que diferencia o colgeno de
outras protenas a presena, em altas concentraes, de Gly, Pro, e Hypro em
concentraes menores. Estes dois ltimos se originam da hidroxilao dos resduos
de Pro e Lys, aps o processo de traduo.
F - A distribuio ordenada dos aa no perodo D tem origem na interao
particular das molculas de Tropocolgeno para a formao das estruturas fibrilares, e
est presente como unidade repetitiva, em todos os colgenos formados por triplas
hlices, no segmentados (CHAPMAN; TZAPHLIDOU; MEEK, 1990), cuja origem
ser mostrada a seguir.

Introduo 15
Tabela 2. Nmero de resduos de aminocidos presentes na tripla hlice do colgeno
tipo I.
Aminocido Cadeia Cadeia

Aminocido
Alfa-1 Alfa-2 Alfa-1 Alfa-2
Estruturais Hidrofbicos
Glicina 345 346 Leucina 9 18
Hidroxiprolina 114 99 Isoleucina 22 33
Prolina 127 108 Metionina 7 4
Bsicos Fenilalanina 13 15
Lisina 34 21 Tirosina 5 4
Arginina 53 56 Valina 17 34
Histidina 3 8
Hidroxilisina 4 9 Outros
cidos/Amidas Alanina 124 111
cido Asprtico 33 24 Treonina 17 20
Asparagina 13 23 Serina 37 35
cido Glutmico 52 46
Glutamina 27 24
Uma vez fora da clula, o tropocolgeno organiza-se, formando estruturas
fibrilares (Figura 9).

Introduo 16
Crescimento lateral
Tripla hlice
Crescimento
Cadeia longitudinal
Fibra de colgeno
Figura 9. Esquema ilustrativo para a reorganizao fibrilar do colgeno tipo I nos
tecidos aps sua liberao para o meio extracelular.
I.1.1.2.3. Organizao do colgeno tipo I
Muito do que se sabe da organizao macromolecular do colgeno, foi pela
avaliao, por Microscopia Eletrnica de Transmisso (MET) (CHAPMAN;
TZAPHLIDOU; MEEK, 1990), de amostras impregnadas com sais de metais

1+
pesados, principalmente com o Acetato de Uranila (AU ) e Fosfotungstato de
3-
Amnio (FTA ).
Para entendermos melhor a origem do perodo D e sua natureza, ser feita
uma breve descrio das tcnicas utilizadas para impregnao de materiais de
colgeno com metais pesados. Basicamente, resume-se a duas tcnicas, onde as
imagens geradas so uns reflexos da distribuio dos metais pesados sobre a estrutura
fibrilar.
Introduo 17
A - Impregnao negativa
Amostras so imersas seqencialmente em solues de Acetato de Uranila
(AU) e Fosfotungstato de Amnio (FTA), e em seguida, submetidas tcnica de
MET. Neste caso, a micrografia (semelhante a um negativo de fotografia comum)
resultante da interao dos feixes de eltrons com AU e FTA, fixados na matriz por
dois mecanismos: 1 simples distribuio das substncias nos espaos vazios
existentes na matriz; 2 por interao eletrosttica dos nions e ctions dos metais
pesados, com stios carregados negativa e positivamente. No caso do AU com stios
de cargas negativas (resduos de Asp e Glu) e, no caso do FTA, com stios de cargas
positivas (Lys, Arg, His e Hyl), como mostradas pela Figura 10.
Figura 10. Representao esquemtica da interao do Fosfotungstato de Amnio
com grupos carregados positivamente na fibrila de colgeno.
No caso de matriz de colgeno tipo I (Figura 11) a imagem mostra uma
estrutura formada alternadamente por zonas escuras e clara, que somadas, tm cerca
de 67 nm. A zona mais clara com cerca de 31 nm, foi denominada de Overlap e a
mais escura, com cerca de 36 nm, foi denominada de Gap. O conjunto Overlap: Gap
o perodo D da estrutura fibrilar do colgeno tipo I.

Introduo 18
Perodo D = 67O
G ap
360
O verlap
310
Figura 11. Micrografia de Microscopia Eletrnica de Transmisso de fibras de
colgeno tipo I obtida aps impregnao negativa.
B - Impregnao positiva
A tcnica consiste, simplesmente, na lavagem da amostra, aps a impregnao
negativa. Este processo de lavagem remove o AU e o FTA distribudos fisicamente
nos espaos vazios e os metais pesados restantes so aqueles ligados
eletrostaticamente a stios positivos ou negativos existentes na matriz. Portanto, a
imagem resultante um reflexo da distribuio dos aa bsicos e cidos presentes e
mostra que, na estrutura da fibrila, estes aa no esto distribudos aleatoriamente,
como evidenciados pelas bandas existentes. Estas bandas mostram que, no sentido
transverso da fibrila, os aa cidos e bsicos esto concentrados transversalmente
fibrila de colgeno, distribudas em zonas perpendiculares ao eixo maior do perodo
D, bem definidas e tambm peridicas (Figura 12a). Estes sub-perodos no Overlap,
zona de maior densidade de aa, foram denominados de bandas c1, b2, b1 e a4. No
Gap, a zona de menor densidade de aa, estes sub-perodos foram denominados de
bandas a3, a2, a1, e2, e1, d, c3 e c2 (Figura 12a).

Introduo 19
OVERLAP GAP
b1
Nmero de aminocidos cidos+bsicos (verm)

5
a2
b2 d
a3
vs Hidrofbicos (preto) 4 e2 c2
a1
e1
3
b-
c1
2
a4
c3
1
0
50 100 150 200
Posico do aminocido no perodo
Figura 12. a - Micrografia de Microscopia Eletrnica de Transmisso de fibras de
colgeno tipo I obtida aps impregnao positiva. Overlap: bandas c1, b2,
b1 e a4. Gap: bandas a3, a2, a1, e2, e1, d, c3 e c2; b Densitometria
correspondente distncia de um perodo D.
A Figura 13 mostra um perfil de distribuio de aa cidos e bsicos, no
sentido transverso de uma fibrila (unidade bsica da fibrila), apenas das regies
correspondentes aos sub-perodos b1 at a2, onde fica caracterizada a distribuio
preferencial dos aa cidos e bsicos ao longo do perodo D (CHAPMAN;
TZAPHLIDOU; MEEK, 1990).
Com base no padro de interao de ctions e nions, de metais pesados com
materiais de colgeno tipo I, Smith (1998) props um modelo (Figura 14), aceito at
hoje, criando a microfibrila como unidade bsica da estrutura fibrilar. Este modelo,
denominado de pentafibrilar quarto alternado, formado (Figura 14) por cinco
molculas de Tropocolgeno justapostas ao longo de um eixo longitudinal e

Introduo 20
deslocadas umas das outras em de seu comprimento, ou seja, cerca de 234 resduos
de aa. O modelo justifica a formao de bolses de aa cidos e bsicos como
mostrado pela sua estrutura primria (Figura 15), que tem a mesma distribuio
quantitativa que aquela da densitometria mostrada na Figura 12b, e obtida
experimentalmente.
L in h a p r e ta : H id r o f b ic o s
b1
a1
a3
a4
b1 58 a4 a837 a2
Figura 13. Esquema representativo da distribuio dos aminocidos no perodo D de
molculas de tropocolgeno dispostas alternadamente de de seu
comprimento. Representao apenas das bandas b1, a4, a3 e a2.
Figura 14. Modelo pentafibrilar de Smith para a reorganizao fibrilar do colgeno
baseado no deslocamento da molcula de tropocolgeno de de seu
comprimento.
Introduo 21
1 2 1 1 2 1 1 2 1 1 2 1 1 2 1
GL PR PR 100 GL PR AL GL PR AS GL AL PR GL AR GL 22 b1
Y O O 0 Y O A Y O P Y A O Y G U
PR GL PR TH GL PR AL GL AL LE GL TH PR GL AR
O Y O R Y O A Y A U Y R O Y G
PR PR GL PR PR GL PR VA GL PR PR GL 3 P V G
O O Y O O Y O L Y O O Y 00 RO AL LY
GL PR PR GL TH TH GL VA AL GL PR LE GL VA PR 23
Y O O Y R R Y L A Y O U Y L O
PR GL PR PR GL PR AL GL PR PR GL PR PR GL PR
O Y O O Y O 770 A Y O O Y O O Y O
PR PR GL GL PR GL PR AL GL PR PR GL GL PR GL
O O Y N O Y O A Y O O Y N O Y
GL PR PR GL GL PR GL PR AL GL PR PR GL GL PR 70
Y O O Y N O Y O A Y O O Y N O
PR GL PR ILE GL GL SE GL PR GL GL PR AL GL GL a4
O Y O Y N R Y O U Y O A Y N
PR PR GL AL LE GL GL TH GL 5 AR LE G AR A G
O O Y A U Y N R Y 40 G U LY G LA LY a4
GL PR PR GL LE GL AL SE GL AR GL GL AR AL
Y O O Y U ILE Y A R Y G U Y G A a4
PR GL PR 101 GL GL AL AL GL G GL GL A LE GL AR
O Y O 0 N Y A A Y LN Y Y RG U Y G a4
PR VA GL AR A GL PR PR GL PR SE GL PR PH GL
O L Y G L A Y O O Y O R Y O E Y a4
3G
SE SE PR GL PR GL GL SE AL GL PR GL LY GL PR LE a4
R R O Y O N Y R A Y O Y 0 Y O U
AL GL PR VA GL AR LE GL PR SE GL PR TH GL PR a4
A Y O L Y G U Y O R Y O R Y O
GL GL SE VA GL 7 GL PR GL AR SE G AL TH GL
Y Y R L ILE Y 80 N O Y G R LY A R Y
PH GL AL GL LE VA GL SE LE GL A S GL PR TH
E Y A Y U L Y R U Y RG ER Y O R
AS TY GL LE GL VA ME GL GL PH GL AR LE GL AL 80
P R Y U Y L T Y N E Y G U Y A
LE GL PH PR LE GL PR LE GL PR LE GL PR LE GL
U U E O U Y O U Y O U Y O U Y
SE PH AS GL PR LE GL PR ME 55 GL PR PH GL PR LE
R E P Y O U Y O T 0 Y O E Y O U
PH LE GL GL PR GL GL PR AL GL PR ME GL PR a3
E 0 U N Y O U Y O A Y O T Y O
LE SE AR SE G AR GL G AS AL GL LY PH GL
U 0 R G R L Y G U L Y P A Y S E Y a3
PR PH GL AR GL GL AR GL GL AS AL GL LY ME a3
O 0 E Y G N Y G U Y P A Y S T
GL LE GL GL AR AL GL AR VA GL AS 32 HIS GL LYS
N 0 U U Y G A Y G L Y P 0 Y a3
PR PR AR GL G AL AL GL AL AR GL AR GL
O 0 O G U LY A A Y A G Y G ILE Y a3
PR GL GL A G 7 GL AL AL GL AL VA GL AR H
O 0 N Y RG LU 90 Y A A Y A L Y G I S a3
GL PR PH GL AR LE GL AL PR GL AL PH GL AR
N 0 O E Y G U Y A O Y A E Y G
GL PR PR LE GL PR VA GL LY VA GL SE HI GL
U 0 O O U Y O L Y S L Y R S Y 90
LY GL GL PR PH GL PR LE GL ME PR GL AS PH
S 0 N Y O E Y O U Y T O Y N E
AL GL LE GL PR PR GL PR P G L LE GL SE
A 0 U U Y O O Y O 560 RO LY YS U Y R
HI LY PR VA GL LY GL GL AL PR GL AS LE GL
S 0 S O L Y S Y Y A O Y P U Y
AS AL GL AL LE GL LY PR GL AL PR GL AS LE
P 0 A Y A U Y S O Y A O Y P U
GL HIS PR GL PR AS GL LY GL GL AL AL GL AS
Y 0 O Y O P Y S U Y A A Y P a2
GL AS SE PR GL AR GL G AR SE G 3 L L G
YS EU LY
Y 0 P R O Y G U LY G R LY 30 a2
Figura 15. Estrutura primria para o intervalo entre as bandas b1a2 para o modelo
pentafibrilar proposto por Smith: regio limite Gap:Overlap.

Introduo 22
I.1.2. Componentes presentes apenas em tecidos mineralizados
Os componentes mais importantes dos tecidos mineralizados so os elementos
celulares, a fase mineral, colgeno tipo I, PG e protenas cidas.
O tecido sseo (KAPLAN et al., 1996) tem funes de sustentao, proteo
de rgos internos vitais, produo de clulas sangneas e armazenamento de clcio,
o qual tem papel importante na contrao muscular, secrees, impulsos nervosos e
outros mecanismos. Da massa total do osso, 75 % esto sob a forma de HA
(C10(PO4)6(OH)2 ), depositada sobre as fibras colagnicas, sendo que a relao
clcio/fsforo (Ca/P) pode variar entre 1,5 a 1,77. A HA pode estar associada,
tambm, aos nions citrato, carbonato, fluoreto e o on hidroxila (MAITLAND;
ARSENAULT, 1991).
A Dentina (HIDALGO; ITANO; CONSOLARO, 2005) encontrada apenas
nos dentes. Sua composio qumica semelhante ao TO, com o colgeno encontrado
em concentraes de cerca 90%, associado a uma HA rica em carbonato (CO3-2). As
outras protenas existentes, na sua maioria, so protenas cidas, algumas encontradas
tambm no TO e outras encontradas exclusivamente na dentina. Histologicamente, a
Dentina formada por duas zonas distintas, a pr-dentina, onde esto os
odontoblastos e a frente de mineralizao, separadas entre si por uma distncia entre
10-30 m. Assim como no TO, o processo de biomineralizao envolve uma
interao complexa entre clula, odontoblastos, colgeno e protenas no colagnicas.
Em roedores, sua formao contnua em virtude do desgaste permanente.
I.1.2.1. Componentes comuns aos dois tecidos.
As protenas da MEC de Dentina e TO podem ser divididas em duas
categorias: as colagnicas e no colagnicas. Estas ltimas, na sua maioria, so

Introduo 23
protenas cidas do tipo PG (Decorina e Biglicana) (BHADRIRAJU; LINDA, 2000;
TENRIO; SANTOS; ZORN, 2003), osteopontina, sialoprotena bovina ou BSP,
osteonectina (HARRIS et al., 2000; ALDINGER et al., 2001) e osteocalcina
(BERDAL et al., 1991).
Protenas No Colagnicas Comuns aos dois Tecidos
- SIALOPROTENA BOVINA (BSP) (HARRIS et al., 2000; ALDINGER et
al., 2001)
A BSP produzida por clulas osteognicas totalmente maduras, portanto,
capazes de depositar uma matriz mineral, mas apenas nos estgios iniciais da
mineralizao. Da mesma forma que a Decorina, a BSP tem grande afinidade pelo
colgeno tipo I e sua interao ocorre, tambm, na vizinhana da interface
Overlap:Gap do perodo D, da estrutura fibrilar do colgeno. Apresenta, na sua
estrutura primria, a seqncia Arg-Gly-Asp e, portanto, est envolvida com a
interao matriz:clula.
- OSTEOCALCINA (BERDAL et al., 1991)
Corresponde cerca de 10% do total das protenas no colagnicas e
produzida por osteoblastos. Sua concentrao, estequiomtricamente,
aproximadamente igual ao nmero de molculas de Tropocolgeno presentes no osso
e produzida apenas nos estgios finais da mineralizao.
I.1.2.2. Componentes exclusivos do Tecido sseo.
PROTENAS MORFOGENTICAS SSEAS (BMPS) (ALDINGER et
al., 2001).
Introduo 24
um conjunto de vrias protenas capazes de induzir a formao de TO
quando implantadas no subcutneo ou no tecido muscular, razo pela qual foram
denominadas de protenas morfogenticas do TO. Sua funo exata ainda no
conhecida, mas sabe-se que tem um papel importante no desenvolvimento de TO,
principalmente na embriognese.
I.1.2.3. Componentes exclusivos da Dentina (BENIASH et al., 1991; HE et
al., 2003)
A - FOSFOPROTENA SILICA DENTINRIA (DSPP): uma protena
que d origem a sialoprotena dentinria (DSP) e a fosfoprotena dentinria (DPP).
At recentemente, pensava-se pertencerem exclusivamente dentina. Sabe-se hoje
que DSP e DPP tambm so produzidas no TO numa razo de concentrao estimada
de 1:400.
B - FOSFOPROTENA DENTINRIA (DPP): uma protena, localizada
na frente de mineralizao, ricas em seqncias de aa contendo resduos de Asp e
Fosfoserina. Tem uma grande afinidade com clcio.
C - SIALOPROTENA DENTINRIA (DSP): uma glicoprotena
perfazendo cerca de 5% do total das protenas no colagnicas. Apresenta um alto
grau de fosforilao sendo rica em seqncias de aa contendo resduos de Asp. Est
associada ao crescimento da HA. Apresenta tambm a seqncia Arg-Gly-Asp para
adeso celular.
D - MATRIZ PROTICA DENTINRIA (DMP1): uma protena cida
rica em Ser e Asp, produzida por odontoblastos maduros, e envolvida ativamente na
produo da matriz mineralizada da Dentina.

Introduo 25
E - MATRIZ PROTICA DENTINRIA (DMP2) (BENIASH et al.,
1991): tambm chamada Fosfoforina e, depois do colgeno, a protena mais
abundante na Dentina. uma protena exclusiva da Dentina, apresentando um
elevado grau de fosforilao. Fosfoforinas de vrias fontes contm entre 35% e 45%
resduos de Asp e 40 a 55% de Ser, dos quais 90% se encontram fosforilados. Tm
um pI de 1,1 e s so observadas na fase inicial da mineralizao. Seu stio de
ligao com o colgeno ocorre prximo interface Overlap:Gap (DAHL; SABSAY;
VEIS, 1998). Esta ligao ocorre com alteraes conformacionais do colgeno, com
um encurtamento das distncias interbandas nesta regio (DAHL; SABSAY; VEIS,
1998).
I.2. A Interao clula:matriz extracelular (LODISH et al., 1995;
GUMBINER, 1996; HYNES, 2002; BHADRIRAJU; LINDA, 2000).
A MEC interage com as clulas promovendo ou regulando funes tais como
a migrao, a adeso, proliferao, diferenciao e morfognese. Este controle
exercido pela interao entre mltiplos stios que formam a MEC dando origem a
uma MEC estvel. A clula, por sua vez, responde por meio de receptores colocados
na membrana celular que incluem as Integrinas e no Integrinas. Em resumo:
A - A clula interage com o meio externo por meio de protenas presentes na
membrana celular cuja funo intermediar a transposio de informaes originadas
na MEC, para seu interior;
B - Muitas destas protenas so receptores caracterizados por stios de ligao
com a MEC acoplada a um sistema de sinalizao que regula ou modifica a atividade
celular;
Introduo 26
C - Quando um receptor interage com seu ligante especfico, normalmente
uma macromolcula da MEC, como resposta a um sinal recebido e s alteraes
conformacionais que ocorrem, a clula inicia uma reao em cascata intermediada por
enzimas, resultando na amplificao deste sinal. Esta cadeia de eventos denominada
de Transduo de Sinal (LAUFENBURGER; LINDERMAN, 1993);
D - A Transduo de Sinal modula a resposta dos genes controlando, portanto,
funes celulares que incluem a sobrevivncia, a proliferao, a migrao e a
diferenciao.
MEC
Stio de ligao na
MEC Fluxo de
informao
Protenas
transmembrnicas
Transduo de sinal
Regulao gnica
Migrao
Proliferao
Sobrevivncia Diferenciao
Espao intracelular
Figura 16. Esquema da transduo de sinais provenientes da Matriz
Extracelular para o interior da clula.

Introduo 27
I.2.1. Transduo de sinais mediados por Integrinas
As Integrinas (Figura 17) descobertas em 1980, pertencem a uma famlia de
glicoprotenas localizadas na superfcie da clula. So responsveis pela adeso
celular a vrios substratos.
Figura17. Representao esquemtica da estrutura das Integrinas.
Conquanto possam mediar a interao clula:clula, sua funo mais
importante promover a adeso celular MEC, influenciando seu comportamento em
relao morfologia celular, adeso celular, migrao bem como sua proliferao e
diferenciao.
As Integrinas (COPPOLINO; DEDHAR, 2000) so molculas
heterodimricas formadas por associao entre si de 16 subunidades denominadas e

Introduo 28
. A combinao de uma subunidade com uma define um receptor com
identidade especfica. Nem todas as subunidades so capazes de interagir, razo pela
qual s foram identificadas at hoje, apenas 20 Integrinas diferentes.
Com base na sua composio (XU et al., 2000), as Integrinas so classificadas
de acordo com o tipo de subunidades. As de maior interesse, neste trabalho so: as
Integrinas 1, que na sua maioria, esto associadas com a interao entre a clula e a
MEC; as Integrinas do tipo 2 que esto restritas aos leuccitos e tipicamente ligam-
se a protenas da superfcie de outras clulas, como Integrina 12, especfica da
adeso celular sobre o colgeno.
Hoje se sabe que as Integrinas no so apenas receptores de adeso utilizada
para mediar conexes fsicas entre a MEC e a clula. Esto envolvidas tambm em
atividades complexas das clulas tais como a citoquinese (processo pelo qual durante
a mitose uma clula divide-se em duas clulas filhas) e migrao celular.
Conseqentemente, est associada, tambm, a vrias doenas que incluem as
cardiovasculares, desordem de natureza imunolgica e vrios tipos de cncer.
I.3. Controle da atividade celular
Como j mencionado anteriormente, embora no seja possvel separar com
uma linha divisria bem definida (pois na grande maioria so eventos interligados),
por uma questo didtica, este trabalho dividiu as interaes matrizes:eventos
teciduais em duas categorias e alguns exemplos sero descritos a seguir.

Introduo 29
I.3.1. Com base na Adeso
I.3.1.1. Remodelagem de Tecidos
I.3.1.1.1. Tecido sseo
Um exemplo clssico do controle de fatores externos sobre a fisiologia celular
e conseqentemente a adeso, da qual depende a atividade celular, a remodelagem
do TO (NOMURA; YAMAMOTO, 2000). O osso um tecido dinmico,
constantemente em formao pela ao osteoblstica, simultaneamente com a
reabsoro pela atividade osteoclstica (Figura 18) (LEMER, 2000).
Clulas sseas
Osso
Osteoclastos
Formao por Osteoblastos Reabsoro por Osteoclastos
Osteoblastos
Figura 18. Remodelagem do Tecido sseo: formao de osso novo por osteoblastos
associados reabsoro simultnea por osteoclastos.
A resultante a adaptao da forma do osso a novas demandas de presso.
Esse mecanismo recebe o nome de Remodelagem e pode ser resumidamente descrito:
A - Estmulos mecnicos agem sobre o TO, gerando correntes eltricas
resultantes da variao de potenciais de corrente e da piezeletricidade. Nas zonas de
maior compresso (potencial negativo), h um estmulo formao do tecido e nas
zonas de menor compresso (potencial positivo), a reabsoro (Figura 19).

Introduo 30
B - Como conseqncia destes efeitos, temos osteoblastos e osteoclastos que
ao interagirem com uma seqncia de aa Arg-Gly-Asp localizada na MEC (LEMER,
2000) iniciam o processo de construo e reconstruo, a Remodelagem.
A piezeletricidade uma propriedade de materiais, incluindo o colgeno e as
PG que tm a capacidade de gerar correntes eltricas aps um estmulo mecnico e,
no caso dos materiais naturais, no dependem da viabilidade do tecido (WEINSTEIN;
BUCKWALTER, 2000).
A funo de sensor mecnico exercida por ostecitos, presente no TO. So
osteoblastos maduros aprisionados na matriz mineralizada que, ao detectar alteraes
de presso, induzem a matriz a formar ou reabsorver TO de acordo com a carga
mecnica transmitida para as clulas efetoras, que so os osteoblastos jovens e os
osteoclastos (MARTIN, 2000). Uma evidncia da sensibilidade de osteoblastos a
correntes eltricas sobre a remodelagem o aumento significativo sobre a velocidade
de sua proliferao tambm observada in vitro (WIESMANN et al., 2001).
ALTERAO DA JUNO
STRESS MECNICO
ESTMULO MECNICO HIDROXIAPATITA
COLGENO: HIDROXIAPATITA
EFEITO PIEZOELTRICO
DO COLGENO
CRESCIMENTO ESTMULO CELULAR

SSEO CATDICO
SINAL ELTRICO
REABSORO INIBIO CELULAR

DO OSSSO ANDICA
Figura 19. Esquema da remodelagem do osso induzida por estmulos mecnicos.

I.3.1.1.2 Tecido Mole
O efeito de estmulos externos sobre a fisiologia celular no se limita ao TO,
sendo um fenmeno geral. No caso do fibroblasto (Figura 20), os estmulos

Introduo 31
provenientes do meio externo, tambm na forma de foras mecnicas, alteram a
interao da superfcie celular na zona de contato com a MEC definindo a atividade
da clula (INGBER, 1994).
Esta atividade mediada por Integrinas que, fisicamente, ligam a MEC ao
citoesqueleto e so responsveis por sensoriar mudanas de estados tencionados da
MEC. Na sua forma sob tenso, predomina a produo de colagenase, enquanto na
forma relaxada, h uma diminuio desta enzima com conseqente aumento da
produo de colgeno. A funo da colagenase digerir o colgeno, o principal
componente da MEC.
Sntese MEC Sntese MEC
a b
Colagenase Colagenase
Figura 20. Esquema representativo das alteraes da atividade celular do fibroblasto
em funo de tenses aplicadas sobre a Matriz Extracelular. Forma
relaxada (a) e forma sob tenso (b).
Outros efeitos sobre a regulao da atividade de fibroblastos esto associados
contrao ou relaxamento de matrizes colagnicas (GRINNELL et al., 1999), que
tem como resultantes alteraes da morfologia celular. Fibroblastos aderidos em
superfcies no tencionadas, antes de sua proliferao, tomam uma forma esfrica.
Em matrizes estressadas, se alongam e perdem protuberncias celulares, sugerindo a

Introduo 32
produo de diferentes fatores de crescimento celular, mecanismos de transduo de
sinal como resposta ao stress mecnico (GRINNELL et al., 1999).
Este conhecimento vem permitindo o desenvolvimento de tecnologias para o
tratamento de escaras hipertrficas ou em leses de grande extenso, como no caso de
queimados (INGBER, 1994), no sentido de minimizar a formao de tecido fibrtico
responsvel, muitas vezes, pela perda do movimento de articulaes nas leses de
grande extenso.
I.3.1.1.3. Ageing
O termo "ageing" (envelhecimento) aplica-se a todas as alteraes qumicas e
estruturais da MEC, que ocorrem nas cadeias laterais de aa (Figura 21),
principalmente Arg, a Lys, e o Asp presentes no colgeno tipo I.
Figura 21. Estruturas qumicas dos aminocidos cidas Asprtico, Arginina e Lisina.
So alteraes lentas, levando meses, ou mesmo anos e avanam com a idade
(BAILEY; PAUL; KNOTT, 1998). A resultante a reduo na renovao celular e
perda das propriedades fsicas dos tecidos, o que diminui a sua flexibilidade e
Introduo 33
permeabilidade. Essas alteraes so aceleradas no indivduo diabtico devido
hiperglicemia, sendo uma das maiores causas de morbidade e mortalidade nesses
indivduos (BAILEY, 2001). Outras doenas relacionadas com o Ageing incluem a
aterosclerose (GRINNELL et al., 1999) e a osteoporose (BAILEY; PAUL; KNOTT,
1998).
A reao qumica mais importante no Ageing a glicao envolvendo a
glicose, um acar com seis tomos de carbono. Estas ocorrem tambm com a ribose,
um acar com 5 tomos de carbono. Nos tecidos seus produtos so denominados
AGEs (Advantaced Glycation End-Products) (BAILEY, 2001). As conseqncias do
Ageing so:
1 A modificao da Arg particularmente importante porque a seqncia
Arg Gly Asp um stio de reconhecimento de Integrinas responsveis pela
mediao da adeso de vrias clulas sobre a MEC, inclusive osteoblastos e
osteoclastos (REKHTER, 1999). Outros stios de adeso celular tambm so
alterados e incluem principalmente a Asp e a Arg.
2 As reaes envolvendo os aa Lys e Arg provocam alteraes significativas
no perfil de distribuio de carga ao longo do perodo D, alterando significativamente
interaes dependentes exclusivamente, de interaes eletrostticas, como por
exemplo, o caso da fibrilognese do colgeno (PROCKOP; FERLATA, 1998) ou da
interao com a heparina (DELACOUX et al., 2000).
I.3.2. Com base na interao Macromolecular
I.3.2.1. Biomineralizao do Tecido sseo

Introduo 34
A Biomineralizao um processo atravs dos quais organismos vivos
constroem estruturas funcionais, formadas por uma fase mineral associada a uma
matriz orgnica como no TO, dentes e carapaas de moluscos. Essas matrizes
controlam a cristalizao, crescimento e orientao da fase mineral, sobre stios
especficos, distribudos uniformemente sobre a matriz orgnica.
No TO e na Dentina (MANN, 1989; CALVERT, 1994), o colgeno tipo I, d
incio ou inibe por completo, a deposio de HA por um mecanismo complexo e
desconhecido que envolve protenas cidas presentes na MEC. Em animais superiores
o desequilbrio dos mecanismos que mantm estas estruturas mineralizadas resulta em
doenas tais como a osteoporose, a aterosclerose, a formao do clculo renal e a
desmineralizao dos dentes (CALVERT, 1994).
Na formao da Dentina, a Biomineralizao disparada apenas pela
interao de uma das molculas de protenas existentes na MEC, da Fosfoforina com
o colgeno tipo I. A resultante a deposio de HA. Embora o colgeno tipo I esteja
distribudo em todo organismo, sua mineralizao, alm do TO e dentes, s ocorre em
outros tecidos em condies patolgicas como na calcificao de vlvulas cardacas
biolgicas (BRAILE, 1990) e metaplasia (METAPLASIA, 2006) ssea ou na
presena de um osteoindutor com a BMP (ALDINGER et al., 1991).
Na Dentina, a interao do colgeno com a Fosfoforina ocorre na interface
Gap:Overlap (BENIASH et al., 2000) com alteraes conformacionais do colgeno,
principalmente com um encurtamento das distncias interbandas nesta regio
(DAHL; SABSAY; VEIS,1998), de modo anlogo, mas na direo oposta ao descrito
para a protena G. A protena G controla a formao e o crescimento de cristais de
oxalato de clcio sobre si mesma em um stio contendo 10 grupos carboxlicos

Introduo 35
(Grupos do tipo COOH de resduos de Asp e Glu). Em mutantes, onde 4 destas
carboxilas so substitudas por grupos carboxamida (COONH2) (CLARK et al.,
1999), a formao do oxalato de clcio inibida como conseqncia de mudanas no
potencial eletrosttico de superfcie da protena, associado a alteraes das
caractersticas de natureza eletrostticas e hidrofbicas superficiais da protena G.
Como mostraremos posteriormente, esta uma caracterstica das zonas Gap:Overlap
do colgeno.
Com base na interao da Fosfoforina com o colgeno tipo I e em funo de
resultados de mineralizao observados para colgeno aninico in vitro e in vivo foi
proposto um modelo para a mineralizao do colgeno como resultado da interao
com a Fosfoforina (Figura 22) (GOISSIS; MARGINADOR; MARTINS, 2003;
SILVA, 2005). O modelo prope as seguintes etapas:
Primeiro: ons clcio ligam-se na matriz colagnica, mas a mineralizao das
fibrilas do colgeno no prossegue devido presena de uma barreira hidrofbica
presente na juno Gap:Overlap.
Segundo: a interao com a Fosfoforina na interface Gap:Overlap, da mesma
forma que na protena G, provoca mudanas no padro de interaes eletrostticas
induzindo a modificaes na topografia dos aa hidrofbicos presentes. Isto foi
sugerido pela diminuio da distncia entre bandas observadas nessas regies
(BENIASH et al., 2000; GOISSIS; MARGINADOR; MARTINS, 2003).
Terceiro: esta alterao no padro de interao eletrosttica seria a
responsvel por mudanas na conformao da barreira hidrofbica nas zonas Overlap
e Gap permitindo a migrao do clcio atravs da regio do Gap.

Introduo 36
Quarto: a fora que estimula o avano da mineralizao o crescimento da
fase mineral que encontram seus limites nas zonas do Gap e do Overlap, que so
separados por uma regio de alta hidrofobicidade (BRAILE, 1990). In vivo, o incio
da mineralizao ocorre na interface Gap:Overlap tanto no TO normal quanto na
Dentina onde o sinal para mineralizao dado pela Fosfoforina, uma protena
altamente aninica que se liga ao colgeno na zona entre Gap e Overlap (WEINER;
TRAUB, 1986) dando incio, assim, a deposio de Fosfato de Clcio.
O modelo proposto (Figura 22) sugere que a zona de pr-mineralizao de
matrizes de colgeno altamente dinmica.
++ ++
Figura 22. Modelo para mineralizao in vitro de matrizes de colgeno polianinico
com 46 12, cargas adicionais negativas, preparadas por hidrlises de
cadeias laterais de resduos de Asparagina e Glutamina, presentes na
estrutura colagnica.
Introduo 37
I.3.2.2. Processo de coagulao: plaquetas e a homeostase (LI,
2004).
A funo das plaquetas evitar a continuao do processo hemorrgico que
ocorre ps-trauma, por meio da formao do cogulo. O principal gatilho para a
formao de um trombo hemosttico a descontinuidade da barreira endotelial que
separa o sangue da MEC (Figura 23a). Em contato com a MEC o sistema reage por
meio de trs etapas consecutivas que correspondem adeso plaquetria, ativao
da membrana e agregao celular.
O primeiro contato entre plaquetria e a MEC exposta estabelecida pela
interao da glicoprotena plaquetria Ib-V-IX com o fator de von de Willebrand, j
aderido superfcie do colgeno (figura 23b).
Este processo diminui a velocidade da plaqueta, permitindo a ligao do
receptor GPVI, presente na sua membrana interna, com o colgeno, ativando desta
forma o sistema Integrina da plaqueta. O resultado uma firme adeso (figura 23 b).
Esta ligao mediada por Integrinas 21 e II3. Estas, mais o fator de von de
Willebrand, ligado ao colgeno, so as interaes mais importantes para a adeso
(Figura 23c).
A ligao da plaqueta no apenas ativa como tambm alteram a forma da
plaqueta j aderida (Figura 23 d) que seguida por mais adeses plaquetrias. Estas
ligaes so feitas por molculas de fibrinognio (Figura 23 e). D-se o incio da
secreo de grnulos que no apenas refora o processo de ativao mas torna
irreversvel a agregao. Durante o processo de ativao a plaqueta expele pequenas
vesculas, a partir de sua membrana plasmtica, e a homeostase se inicia com a

Introduo 38
ativao do processo de coagulao, associado formao de trombina e fibrina
(Figura 23f).
a b
Sangue
Cel Endoteliais Cel. Endoteliais
fvW Subendotlio fvW Subendotlio

Colgeno
Colgeno
d
c
GPIIb IIIa
HEPARINA
12
III3
Cel. Endoteliais Cel. Endoteliais
fvW Subendotlio fvW Subendotlio

Colgeno Colgeno
e
f
Microparticula
PROTROMBINA
TROMBINA
FIBRINA
Cel. Endoteliais Cel. Endoteliais
Subendotlio Subendotlio
Colgeno Colgeno
Figura 23. Representao esquemtica para a formao do trombo plaquetrio aps
trauma da parede vascular.

Introduo 39
I.4. Localizao das interaes de ligantes com o colgeno tipo I e sua
identificao dentro do perodo D.
Antes de discutirmos a topografia da distribuio dos aa na microfibrila
do colgeno tipo I, com base no exposto na introduo, onde mostramos que o
colgeno no tem apenas funo mecnica, mas participa ativamente de eventos
importantes, que mantm a funcionalidade dos tecidos, cremos que a pergunta mais
importante seria qual a relao entre a unidade fsico perodo D e estes eventos,
assunto abordado pela primeira vez por Di Lullo (2002). Embora seu trabalho no
entre em detalhes sobre a importncia da topografia dos aa no perodo D, isto , sua
distribuio em relao sub-periodicidade, ela deixa clara sua importncia em
relao participao do colgeno tipo I nos eventos biolgicos que ocorrem na
MEC. Isto faz sentido se considerarmos que as protenas correspondem a
aproximadamente 20% da massa corporal e deste valor, 30% ou mais representado
pelos diferentes tipos de colgeno.
Sabendo-se que o colgeno tipo I representa cerca de 90% do total do
colgeno existente, uma estimativa grosseira do nmero de monmeros de colgeno
tipo I (tropocolgeno), no homem adulto tem cerca de 1021 unidades. Assim sendo, o
colgeno tipo I, em relao ao perodo D a molcula biolgica com o maior nmero
de domnios funcionais existentes no reino animal, sendo talvez o domnio mais
importante em relao transferncia de informao extracelular existente.
Em relao ao perodo D, a aproximao de Di Lullo (2002) para a
localizao das regies responsveis pela adeso celular, molculas de ancoragem
como Fibronectina e Laminina, mutaes, como por exemplo, a sndrome de Marfam
e Ageing, foi feita de modo abrangente, identificando zonas associadas a conjunto de
sub-perodos, responsveis por interaes biolgicas. Entretanto, nenhuma correlao

Introduo 40
foi feita entre os tipos de interaes e a topografia de distribuio de aa, caracterstica
da sub-periodicidade do perodo D. As zonas definidas por Di Lullo (2002) esto
representadas esquematicamente na Figura 24a e resumidamente so descritas a
seguir:
Zona 1: Uma zona prxima regio N-terminal do Tropocolgeno
(Figura 28b) que inclu as bandas c3 at a4;
Zona 2: Outra regio prxima regio C-terminal que inclui as bandas c2
at a1;
Zona 3: Coincidente com a zona 2, exceto que em triplas hlices
diferentes e tambm prximas regio C-terminal.
PERODO D
a
(a)
N - terminal
C-terminal
Zona 1
Zona 2
Zona 3
b
936 resduos de aminocidos
Figura 24. a - Representao esquemtica das relaes do colgeno tipo I com

funes teciduais que incluem a adeso celular, molculas de ancoragem,
propriedades estruturais e Ageing de acordo com Di Lullo (2002). As
posies relativas se referem molcula de tropocolgeno com cerca de
1000 resduos de aminocidos; b Representao do tropocolgeno.
Introduo 41
As Tabelas abaixo (Tabelas 3, 4, 5 e 6) resumem as relaes entre as
atividades biolgicas e as bandas dos sub-perodos do colgeno tipo I envolvidas na
intermediao das respostas.
O resultado da Tabela 3 resume as interaes do colgeno tipo I, com
ligantes associados a eventos estruturais.
Tabela 3. Localizao de eventos de natureza estrutural associado ao perodo D do
colgeno tipo I. Identificao do ligante e stio da interao.
Identificao Funo Stio de Localizao na

interao cadeia
Decorina (PG, cida) Estabilizao da Bandas d, e No identificado
fibrila de colgeno
A Decorina uma proteoglicanas de massa molecular pequena e rica em
Leucina (Leu). Participam da organizao da MEC e associada transparncia da
crnea, propriedades mecnicas da pele e tendes, elasticidade de vasos sangneos e
proliferao de clulas tumorais. Uma de suas funes mais importantes modular o
processo de fibrilognese ao interagir com as bandas d e e (FLEISCHMANGER, 1991;
KEENE ET AL, 2000).
interao cadeia
Sulfato de Dermatana Estrutural: Bandas e, d No identificado
Condroitina (PG, estrutura da MEC
cidas)
Os Sulfatos Dermatana e de Condroitina, so responsveis, assim como o
colgeno tipo I, pela manuteno das propriedades da MEC. Stios de interao esto
localizados nas bandas d e e (SCOTT, 1991).
interao cadeia
Sulfato de Queratana Estrutural: Bandas a, c No identificado
(PG, cida) estrutura da MEC
Tem as mesmas funes que os Sulfatos Dermatana e de Condroitina e
interagem com o colgeno tipo I por meio das bandas a e c (SCOTT, 1991).
interao cadeia
Colgeno tipo I Fibrilognese Bandas a4, a3. 781-794 e 776 e
822 cadeia (I)
Interao colgeno tipo I: colgeno tipo I para formao das fibrilas que
ocorrem entre os telopeptdeos N- e C- terminais envolvendo a seqncia de aa 776-
822 da cadeia alfa 1(I) e 781-794 da outra cadeia alfa I. As interaes so de natureza
hidrofbica e eletrosttica, com participao ativa de resduos de Phe e Tyr (MARTIN,
2000).
Introduo 42
Tabela 3 (Continuao). Localizao de eventos de natureza estrutural associado ao
perodo D do colgeno tipo I. Identificao do ligante e stio da
interao.
Identificao Funo Stio de interao Localizao na

cadeia
Fibronectina Formao de fibras a4 774-777 cadeia (I)
(Glicoprotena) de fibronectina
A fibronectina uma protena de adeso celular que interage com o colgeno tipo I
por meio dos aa Gln e Ala das posies 774 e 777 da cadeia alfa 1(I). Esta interao resulta
in fibrilas de colgeno menores (DZAMBA et al., 1993).
cadeia
Colgeno tipo IV Interao com Banda d No identificado
colgeno tipo I
Colgeno tipo IV est distribudo na MEC tanto na pele como em outros tecidos
conectivos. Sua forma de microfilamentos, orientados transversalmente s fibrilas de
colgeno tipo I. A interao ocorre na banda d, o mesmo stio que para as Decorinas
(KEENE; RIDGWAY; IOZZOB, 1998).
Tabela 4. Localizao de eventos que envolvem ligantes associados adeso celular

e relacionados com o perodo D do colgeno tipo I. Identificao do
ligante e stio da interao.
cadeia
Decorina (PG, cida) Inibio fagocitose Bandas c1 No identificado
do colgeno
Alm de regular a fibrilogenese do colgeno tipo I, mascara a interao da
Integrina 21 inibindo a fagocitose das fibras de colgeno tipo I (remodelagem fisiolgica
da MEC). Liga-se na banda c1 (BHIDE et al., 2005).
cadeia
Heparina (PG) Inibio da Banda a3 87-92 cadeia I
angiognese
Heparina um anlogo do sulfato de heparana associada regulao da adeso e
proliferao celular e na organizao da MEC. Interage com o colgeno prximo regio N-
terminal no limite da zona Overlap:Gap. O nico stio de interao bsico e corresponde
seqncia de aa 87-92 (LysGlyHisArgGlyPhe) da cadeia 1(I) (banda a3) . Esta regio do
colgeno, identificada atravs da heparina, est associada a clulas endoteliais responsveis
pela angiognese (SAN ANTONIO et al., 1994).
Introduo 43
Tabela 4 (Continuao). Localizao de eventos que envolvem ligantes associados

adeso celular e relacionados com o perodo D do colgeno tipo I.
Identificao do ligante e stio da interao.

cadeia
Precursor da Adeso celular (Mal Banda a3 87-92, cadeia 1
protena amielide de Alzheimer)
(glicoprotena)
O Precursor da Protena Amielide (PPA) est associado deposio da
protena amielide A4 no crebro de pacientes com histrico do mal de Alzheimer. Seu stio
de interao o mesmo que aquele da Heparina, sugerindo uma interao competitiva e
associada adeso celular. Possui tambm stios de ligaes Laminina, e GAGs (BEHER et
al., 1996).
cadeia
POMC, Prot. Crescimento celular Banda a3 e b2 (dois 83-93 e 23-45
oligomrica da stios/banda)
matriz da cartil.
Na MEC de cartilagem e tendo, depois do colgeno a protena mais importante.
Esta envolvida com as atividades de crescimento celular e desenvolvimento da matriz e liga-
se ao colgeno por meio de 4 stios bem definidos, dois deles localizados na banda a3 e dois
na banda b2, correspondendo s seqncias 83-93 e 23-45 (ROSENBERG et al., 1998).
cadeia
PLCC, Protena de Adeso celular Banda b1 757-791, cadeias 1
ligao clula colgeno (I)
Associada adeso ao colgeno de algumas clulas como de ovrio de hamster
e fibroblastos. O stio de ligao sobre o colgeno corresponde 757 e 791, banda b1. Este
stio de ligao nico (KLEINMAN et al., 1978).
cadeia
Fator de von de Ativao da Banda a3 No identificado
Willebrand coagulao
O fator de von de Willebrand (FvW) uma glicoprotena associada adeso das
plaquetas na regio lesionada de vasos sangneos. O stio de ligao sobre colgeno tipo I
conhecido, mas em funo das caractersticas da topografia de aa do seu stio de ligao, foi
proposto que o FvW interage com uma regio formada por aa bsicos e hidrofbicos,
contendo cerca de oito resduos consecutivos da banda a3. responsvel pelo disparo do
processo de coagulao ao promover a adeso plaquetria sobre o colgeno atravs de
Integrina 21(ROMIJN et al., 2003).
cadeia
Fosfoforina Biomineralizao Bandas c e a No identificado
TO
A Fosfoforina, depois do colgeno, a protena mais abundante e exclusiva da
Dentina. Contm entre 35% e 45% resduos de Asp e 40 a 55% de Ser, dos quais 90% se
encontram fosforilados e, s observada na fase inicial da mineralizao. Liga-se ao
colgeno prximo interface Overlap:Gap, bandas c e a, e altera tanto a conformao
quanto as distncias interbandas (encurtamento) (BENIASH et al., 2000).
Introduo 44
Em relao Tabela 5, vale lembrar que embora diferentes tipos de colgeno
sejam reconhecidos por receptores celulares especficos (HEINO, 2000), dentre as
Integrinas, as duas mais importantes so as 11 e 21. A Integrina 11
encontrada nas clulas da musculatura lisa, enquanto a 21 nas clulas epiteliais e
plaquetas. Entretanto, muitas clulas, tais como os fibroblastos, osteoblastos,
condrcitos, clulas endoteliais e linfcitos podem, concomitantemente, expressar os
dois receptores. Na sua interao com colgeno, Integrinas 11 e 21 utilizam
apenas o domnio 1.
Tabela 5. Localizao de seqncias e/ou integrinas envolvidas na adeso celular
associados ao perodo D do colgeno tipo I. Identificao da clula e
stio da interao.
Identificao da Identificao do Stio de interao Localizao na

integrina ligante cadeia
21 e 11 Adeso celular b2, e2 501-509 e 127-134
Integrinas 21 e 11 so os dois receptores celulares mais importantes da
superfcie de clulas de eucariotos que interagem com o colgeno tipo I. Seus stios de
interao sobre o colgeno, ou se sobrepem, ou so adjacentes. Estes stios correspondem a
tripletes do tipo GlyGluArg contidos nas seqncias GlyPheProGlyGluArg (banda b2,
resduos 501-509) e seqncia GlyLeuProGlyArgGlyArgPro (banda e2, Resduos 127-134).
A seqncia GlyLeuProGlyGluArg est presente nas trs cadeias alfa (XU et al., 2000).
21 Plaquetas e Incio c3, a4 435-438, cadeia
Laminina 1(I)
A seqncia mnima para reconhecimento e AspGlyGluAla, resduos 552-822 e
435-438 (incio c3 e a4) da cadeia 1(I) (STAATZ et al., 1991).
Fibroblasto da Adeso (1 a3 a1(I)772 786 (784
derme integrina) 786 (Gly-Leu-Hyp)
A atividade para adeso de fibroblasto normal foi observada para a seqncia 1(I)
772 786 com a seqncia 784786 (GlyLeuHyp) banda a3 importante para o
reconhecimento celular. A integridade da tripla hlice fundamental para os eventos de
adeso e reconhecimento (GRAB et al., 1996).
Introduo 45
Tabela 5 (continuao). Localizao de seqncias e/ou integrinas envolvidas na
adeso celular associados ao perodo D do colgeno tipo I. Identificao
da clula e stio da interao.

21 Fibroblastos e Banda a4, c3, b2, Ver seqncias
outras clulas b1. abaixo
Seqncias responsveis pela adeso:
A Clulas de ovrio (hamster): seqncia 757-791 (b1, b2), cadeia 1(I).
B Clulas de carcinoma de mama: seqncia 434-438, c3, 1(I).
Seqncias responsveis pela inibio da adeso:
A Linfcitos T: eqncia 769-783 (b1, a4) 1(I) (GRAB et al., 1996).
21 Inibio da Banda c1 No identificado
fagocitose do
colgeno
Inibio pela Decorina do processo envolvendo a fagocitose das fibras de colgeno
tipo I contribui para a remodelagem fisiolgica da MEC. Em fibroblastos a Integrina tipo
21 e provavelmente se liga ao mesmo stio de ligao da Decorina, isto , banda c1
(BHIDE et al., 2005).
Integrina ligante cadeia
21 Clulas endoteliais: banda a3 87-92, cadeia 1(I)
angiognese
Heparina um anlogo do sulfato de heparana uma PG que interage com colgeno
tipo I na regio prxima regio N-terminal do tropocolgeno e dependente da estrutura
helicoidal. Interao: resduos 87-92, LysGlyHisArgGlyPhe da cadeia 1(I). Esta seqncia
tambm est envolvida na angiognese (SWEENEY et al., 1998).
Tabela 6. Localizao de eventos de natureza qumica associados ao perodo D do

colgeno tipo I. Identificao do agente e stio da interao.

cadeia
Colagenase (enzima) Hidrlise de ligao Bandas a4 775-776, 1 e 2
peptdica
A colagenase uma enzima da MEC que degrada especificamente fibras de
colgeno tipo I. Stio de hidrlise: ligao Gly775-Ile/Leu776, banda a4. Est associada a
vrias doenas: a artrite, a aterosclerose e clulas de tumor em metstase (FIELDS et al.,
2000; WU et al., 2001).
cadeia
Glicao Ageing c3,c2,c1 (todas as Identificado (ver
cadeias) texto)
Introduo 46
Tabela 6 (Continuao). Localizao de eventos de natureza qumica associados ao

perodo D do colgeno tipo I. Identificao do agente e stio da
interao.
"Ageing" (envelhecimento): alteraes qumicas e estruturais da MEC resultantes

da reao de acares, principalmente a glicose, com as cadeias laterais de aa, Arg, a Lys, e
o Asp presentes no colgeno tipo I. Resultante: a reduo da renovao celular e perda de
propriedades tais como a sua flexibilidade e permeabilidade. Doenas relacionadas:
aterosclerose a osteoporose. Stios da glicao: Lys: 1(I) e 2: Lys-434 (banda c3), Lys-
453 (c2), Lys-479 (c1), e Lys-924 (c2). As ltimas trs com mais de 80%, principalmente na
banda c1 (CHAPMAN; TZAPHLIDOU; MEEK, 1990; RIESER; AMIGABLE; LAST,
1992).

cadeia
cido Acetilsaliclico Estudos de c2, d No identificado
embebio
A aspirina um potente inibidor das reaes de Ageing. Na fibrila de colgeno tipo
I interage na banda c2 e d (HADLEY; MALIK; MEEK, 2001).
cadeia
Frutose Estudos de Ageing c1 No identificado
Utilizada para identificao dos stios de reaes que do origem ao Ageing.
Interage com o colgeno tipo I na banda c1 (HADLEY; MALIK; MEEK, 2001).
Hidrlise seletiva Preparao c2-c1, a No identificado
biomateriais
Tcnica utilizada para a preparao de colgeno aninico (SILVA, 2005).
Os resultados nas Tabelas 3, 4, 5 e 6 mostram, de modo claro, a importncia
do colgeno tipo I na atividade da MEC. Tanto do ponto de vista da adeso e
proliferao, como no aspecto estrutural da prpria matriz colagnica, quanto de
outras macromolculas que participam ativamente da MEC.
Portanto, a grande questo : qual o significado da periodicidade D do
colgeno tipo I e sua participao em eventos biolgicos, que so traduzidos em
mudanas, na engenharia da fabricao de protenas pelas clulas? Com certeza,
interaes de natureza eletrosttica e hidrofbica devem estar envolvidas, pois so
elas que comandam ou refinam a grande maioria dos eventos biolgicos,
principalmente, aqueles de funo modulada. Este o caso de enzimas,

Introduo 47
transportadoras de oxignio, no processo de biomineralizao, interaes moleculares
dentre os muitos existentes (MAHLER; CORDES, 1972).
No caso do colgeno tipo I, entre as interaes que, comprovadamente,
alteram os parmetros da estrutura microfibrilar, esto aquelas envolvendo a
Fosfoforina (BENIASH et al., 2000) e praticamente todos os eventos mencionados
nas Tabelas 3-6.
Como avaliao preliminar, os resultados mostrados nas Tabelas 3, 4, 5 e 6
foram resumidos em Tabelas (Tabela 9 e 10 Resultados e discusso) de modo a
facilitar a estimativa da freqncia com a qual as bandas da sub-periodicidade do
perodo D participam nos processos nelas descritos. O que chama a ateno, no
entanto, que a maioria das interaes descritas nas Tabelas 3, 4, 5 e 6, ocorrem na
regio das bandas c e a.

Objetivos 48
II. OBJETIVOS
O colgeno tipo I, que representa cerca de 90% do total de colgenos
existentes no homem adulto, tem cerca de 1021 unidades de molculas de
tropocolgeno. Assim sendo, considerado o perodo D, o colgeno a molcula
biolgica com o maior nmero de domnios funcionais existentes no reino animal, no
que diz respeito transferncia da informao extracelular para o interior da clula.
Entretanto, apesar da sua reconhecida importncia funcional, diferentemente
de outras protenas da MEC tais como a Fibronectina e Laminina, no existia um
mapa dos seus domnios funcionais e stios de interaes com ligantes at o trabalho
publicado por Di Lullo (2002). Neste trabalho, foi sugerida a existncia de trs zonas,
onde esto includas todas as interaes conhecidas do colgeno tipo I com ligantes
ou clulas. Todavia, para essas zonas alm de abrangentes quanto s dimenses do
perodo D do colgeno tipo I, no h qualquer anlise entre as interaes e a
topografia da distribuio dos aa.
Os objetivos deste trabalho foram:
1 Correlacionar s interaes biolgicas do colgeno tipo I, com as bandas
do perodo D, para a construo de um mapa que defina sua freqncia de
envolvimento com os eventos bioqumico-celulares envolvidos. Dessa forma, seria
possvel analisar a distribuio dos aa cidos, aa bsicos e aa hidrofbicos no
mapeamento do perodo D: a) do ponto de vista topogrfico; b) de algumas

Objetivos 49
propriedades, tais como a distribuio de cargas positivas e negativas. Alm disto,
seria possvel associar a topografia de aa cidos e aa bsicos distribuio de cargas.
2 Estabelecer uma correlao entre a topografia de distribuio dos aa
cidos, aa bsicos e aa hidrofbicos do colgeno tipo I com as atividades biolgicas
da MEC.
3 Propor um mecanismo para explicar a participao: a) do colgeno nos
eventos de natureza estrutural; b) de ligantes envolvidos nas atividades de adeso
celular, ou mesmo de natureza qumica, como no caso do Ageing.

Metodologia 50
III. METODOLOGIA
III. 1. Descrio do mapa de distribuio da estrutura primria das
cadeias alfas que formam a microfibrila de acordo com o modelo de Smith.
Esse trabalho foi desenvolvido com base na associao de molculas de
tropocolgeno (Figura 25). A associao de segmentos superpostos de um quarto do
comprimento do tropocolgeno do origem ao modelo pentafibrilar de Smith (1968),
caracterizado pelo perodo D, formado pelas zonas Overlap e Gap (Figura 26).
1/4
Figura 25. Representao esquemtica da molcula de tropocolgeno
A Figura 26 representa esquematicamente a estrutura primria dos resduos de
aminocidos e a definio dos intervalos das zonas do Overlap e Gap que formam
um perodo D. Cada segmento, contem 234 aminocidos, ou seja, um quarto do
comprimento da molcula de tropocolgeno (Figura 26). Os nmeros referem-se
posio dos aa na molcula com a repetio Gly-X-Y. Os nmeros nos crculos
referem-se posio da cadeia alfa na microfibrila. Os nmeros em crculos definem
a posio da molcula em relao ao plano que se alinha com o cristal.
A soma dos cinco segmentos que formam o perodo D, de forma repetitiva
constitue a microfibrila.
Metodologia 51
1. 1
234
235
92
93
2. 2
N
1
1
3. 1
Figura 26. Representao

4. 1
467
468
234
235
326
327
2 5. 2 esquemtica da microfibrila de
6. 1 colgeno de acordo com o
modelo de Smith. As caixas
7. 1
560
561
701
702
468
469
3 8. 2 colocadas entre os segmentos

9. 1 que formam a microfibrila
correspondem estrutura
10. 1
935
936
794
795
primria de 80 a 90, contando a
702
703
4 11. 2
12. 1 partir do resduo N-terminal.
13. 1
1016
1
936
937
14. 2
N
5 C 15. 1
Overlap Gap
Metodologia 52
Caractersticas:
1. A estrutura primria das cadeias 1 e 2 est alinhada segundo o modelo
pentafibrilar quarto alternado de Smith (1968).
2. Na representao plana, as cadeias que formam a tripla hlice esto
deslocadas da esquerda para a direita, ao longo do eixo maior da microfibrila. Esta
representao porque na molcula de colgeno os aa na sua descendncia e ao
longo do eixo maior esto deslocados umas das outras de 120.
3. Da esquerda para a direita, os resduos de aa so mostrados do N para o C
terminal.
4. Localizao das zonas Gap e Overlap e sua sub-periodicidade a, b, c, d e e
tem a orientao do C para o N-terminal.
III. 2. Elaborao dos grficos
A Programa Origin.
Todos os grficos foram construdos com o auxlio do programa Origin
6.0 e em todos foram aplicados a mesma normalizao de curva (Smooting, FFT 7).
Esse valor foi escolhido porque reduz a resoluo ao longo do perodo a 2 nm, um
valor comparvel com aqueles obtidos pelas tcnicas de microscopia (CHAPMAN;
TZAPHLIDOU; MEEK, 1990).
Curvas de distribuio para as cadeias alfa
Aminocidos cidos e bsicos: as curvas foram obtidas para os aa Asp,
Glu (cidos, Figura 27a) e His, Lys e Arg (bsicos, Figura 27b) individualmente aps
ter sido atribudo a cada um na planilha, o valor 1. As curvas para distribuies nas
cadeias alfa foram obtidas pelas somatrias de cada aa existente, cidos ou bsicos,
em cada cadeia nas regies do Overlap, Gap do perodo D.

Metodologia 53
(a)
cido Glutmico
cido Asprtico (Glu)
(Asp)
(b)
Histidina (His) Lisina (Lys) Arginina (Arg)
Carbono Nitrognio Oxignio Hidrognio
Figura 27. Representao em modelo de bolas e bastes dos aminocidos cidos (a)
e bsicos (b) presentes no colgeno tipo I
Aminocidos hidrofbicos: Procedimento similar foi adotado para os
aminocidos hidrofbicos exceto que foi considerada a somatria de todos contidos
na mesma hlice e, da mesma forma que para os aa cidos e aa bsicos, em cada
cadeia nas regies do Overlap, Gap do perodo D. Os aa hidrofbicos utilizados
foram Val, Ile, Leu, Phe, Met e Tyr. Suas estruturas so mostradas na Figura 28.
Metodologia 54
Valina (Val) Metionina (met) Leucina (Leu)
Isoleucina (Ile) Fenilalanina (Phe) Tirosina (Tyr)
Carbono Nitrognio Oxignio Hidrognio Enxofre
Figura 28. Representao em modelo de bolas e bastes dos aminocidos
hidrofbicos presentes no colgeno tipo I.
As curvas de distribuio tm nas ordenadas o nmero de
aminocidos/cadeia alfa e nas abscissas o nmero da cadeia alfa (trs por tripla
hlice) ao longo do perodo. Foi considerada alfa hlice nmero 1 aquela da primeira
tripla hlice como mostrado na Figura 29, que representa um segmento da planilha
maior de distribuio de aa, que compem a estrutura primria do colgeno tipo I
segundo modelo pentafibrilar de Smith (1968) e de acordo com a conveno de
Chapman (1990).
Metodologia 55
A S LY PR AR AR GL PR GL 27 ME PRO b2
P S X O G X G U X O U X 0 T X
AS LY PR AR SE GL PR GL AL PR b2
X P S X O G X R U X O U X A O
LE
U X
AS
P
GL
U X
PR 74 VA
O 0 L X
AR
G
PR
O X
PR
O
PR
O X
ME
T b2 Sentido
AS AR
N G X
VA GL
L U X
GL AL
N A X
VA SE
L R X
AR A
G LA X b2 tranversal:
X
TH LE
R U X
VA GL
L U X
GL VA
N L X
AL PR
A O X
AR P R
G O 40 b2 origem dos
LE
U X
AS
N
PR
O X
VA
L
PR
O X
GL
N
VA
L X
VA
L
PR
O X
AR
G b2 grficos do
PR H
O IS X
PR AL
O A X
PR PR
O O X 51 GLN PRO
0 X
PR PR
O O X b2 perodo D
Triplas hlices : origem aos grficos ao longo das cadeias

PR LE PR PR TH PR GL VA AL PR b2
X O U X O O X R O X N L X A O
PR PR 98 PR PR PR PR PR GL PR PR b2
O X O 0 O X O O X O O X N O X O
ILE THR X PR PR AL PR PR PR PR PR b2
O O X A O X O O X O O X
VA PR PR PR ILE PRO PR PR 28 PR PR b2
X L O X O O X X O O 0 X O O
PR ILE PR PR PR AL PR PR LY PR b2
O X O X O O X A O X O S X O
PR PR
O O X
AL PH 75 ARG SE AL PR
O X
A S LY
N S X b2
A E X 0 R X A
AL PR AL PR AR PR SE PR A L LY
X A O X A O X G O X R O X A S b2
PR PR GL AL AL AR GL AL AS AS 5 b1
O X O U X A A X G U X A P X N 0
AR IL LY GL AS PR GL GL AS GL b1
G E X S U X N O X U U X P U X
AR PR LY GL SE AL 52 GL GL AS AS 1
X G O X S U X R A 0 X U U X P P 8 b1
AR AR SE LY AL AS LY GL GL AS
G X G R X S A X N S X U U X P b1
TH PR P P PR PR A R LY AL HI
R O X 990 RO RO X O O X G S X A S X b1
GL AR SE SE PR AL A R LY PR GL 1 b1
X N G X R R X O A X G S X O U 9
AS TH AL PR AS PR AL AR 2 LY AL
P X R A X O N X O A X G 90 S X A b1
AL HI AS GL AS PR AR PR PR LY
A S X P U X P O X G O X O S X b1
GL AS AL AL 76 AS AS AS AL PR LY 2 b1
X N P X A A 0 X P N X N A X O S 0
PR AL PR AS AS GL AR AR PR b1
O X A O X P AL X P U X G G X O
GL PR AL TH LY AS PR GL PR AR b1
Y O X A R X S N X O U X O G X 60
AL PR AL PR LY AL AL GL PR AR 2 b1
X A O X A O X S A X A U X O G 1
PR GL AL AL AS LY 53 PR PR GL PR b1
O X Y A X A P X S 0 O X O U X O
PR PR PR PR AL GL TH SE AR GL
O O X O O X A U X R R X G U X b1
PR PR X00 PR AL PR AS AL PR AR GL
b1
X O O 0 X O A X O P X A O X G U 22
PR PR TH PR AL AL LE TH PR AR
O X O R X O A X A U X R O X G
PR PR PR PR PR VA PR PR 30 PRO VA
O O X O O X O L X O O X 0 L X
PR PR TH TH VA AL PR LE VA PR 2
X O O X R R X L A X O U X L O 3
PR PR PR PR 77 AL PR PR PR PR PR
O X O O X O 0 A X O O X O O X O
1 2 1
5 4 3 2 1
Figura 29. Representao esquemtica de um segmento da planilha da estrutura
primria do perodo D para ilustrar a origem dos grficos apresentados
neste trabalho.
B Programa Excel Windows 98.
As representaes grficas em trs dimenses foram feitas utilizando os
recursos grficos do programa Excel do Windows 98 e no tem qualquer refinamento.
Sua confeco teve como objetivo ilustrar as diferenas de topografia nas
distribuies de aa cidos e aa bsicos em relao aos aa hidrofbicos que no so
possveis de serem visualizadas nas curvas obtidas pelo Programa Origin.

Resultados e Discusso 56
IV. RESULTADOS E DISCUSSO
IV. 1. Anlise estrutural do colgeno tipo I

Um dos objetivos deste trabalho foi avaliar a distribuio topogrfica dos
aa cidos, aa bsicos e aa hidrofbicos no perodo D, para verificar particularidades
que eventualmente permitam estabelecer algum tipo de correlao entre a estrutura do
colgeno e sua participao nos eventos da MEC. Embora j exista uma anlise desta
distribuio em decorrncia do modelo de Smith (1968) proposto para a microfibrila,
onde aa cidos, aa bsicos e aa hidrofbicos se distribuem formando aglomerados
bem localizados que justifica o padro observado na MET do colgeno tipo I (Figura
12b), nenhuma correlao entre esta distribuio e atividades da MEC foi
estabelecida. Por outro lado, o trabalho de Di Lullo (2002) que delimita zonas
bastante abrangentes envolvendo o perodo D e as bandas a contidas nas atividades
da MEC, tambm no faz qualquer correlao com a distribuio dos aa cidos, aa
bsicos e aa hidrofbicos.
Portanto, ser apresentada a seguir, uma anlise da distribuio topogrfica dos
aa hidrofbicos, cidos e bsicos, em relao ao modelo pentafibrilar de Smith para
posteriormente, correlacionar a distribuio topogrfica destes aa no perodo D com
eventos que ocorrem na MEC.

IV. 2. Distribuio dos aminocidos cidos, bsicos e hidrofbicos presentes
no perodo D da microfibrila.
A composio percentual de aa cidos, aa bsicos e aa hidrofbicos nas
zonas Gap e Overlap mostrada na Tabela 7.
Tabela 7. Distribuio dos aminocidos cidos, bsicos e hidrofbicos no Overlap e
Gap do perodo D do colgeno tipo I.
Aminocidos Perodo D
Overlap Gap Totais
n % Hidrofbico. n Res % Hidrofbico. resduos
Res.
Hidrofbicos
Val, 34 14,9 238, 43 18,9 301,0 77
Leu, 40 17,6 408,0 28 12,3 285,6 68
Ile 11 4,8 137,5 17 7,4 212,5 28
Met. 11 4,8 60,5 8 3,5 44,0 19
Phe, 15 6,6 166,5 20 8,8 222,0 35
Totais 111 48,9 1010,5 116 51,1 1065,1 227
cidos
Ac. 28 12,4 57 25,2 85
Asprtico
c. 65 28,7 76 33,2 141
glutmico
Totais 93 41,2 133 58,2 226
Amidas
Asparagina 17 31 48
Glutamina 39 35 74
Totais 56 66 122
cidos + Amidas 149 199 348
Bsicos
Arginina 75 27,5 80 29,3 155
Histidina 9 3,2 7 2,6 16
Lisina 39 14,3 63 23,1 102
Totais 123 45,0 150 55,0 273
Aminocidos Hidrofbicos
Val, Ile e Phe, percentualmente se distribuem menos na zona do
Overlap com respectivamente 14,9, 4,8 e 6,6% (total de 23,6%) e mais na zona do
Gap com respectivamente 18,9, 7,4 e 8,8% (total de 35,4%), quase 1,5x o valor
encontrado na zona Overlap.
- O oposto ocorre com os aa Leu e Met. Enquanto na zona Overlap suas
distribuies correspondem respectivamente a 17,6 e 4,8% (total de 22,4%) na zona
do Gap suas distribuies so de respectivamente 12,3 e 3,5% (total de 15,8%).
Portanto a zona Overlap tem aproximadamente cerca de 1,5x a quantidade de
resduos de Leu e Met que a zona Gap.
- Nas zonas Gap e Overlap a relao numrica de resduos e os valores de
hidrofobicidade mostram que no seu conjunto, as duas zonas so praticamente iguais.
Em relao s suas distribuies (somatria de todos os aa hidrofbicos) ao
longo do eixo maior do perodo D, isto , ao longo de cada cadeia alfa que forma a
microfibrila, podemos observar (Figura 30) que existe uma preferncia.
30
Nmero de residuos hidrofbicos/cadeia alfa.
Total
25
20
15 Gap
10
5
Overlap
0
2 4 6 8 10 12 14
Posio da cadeia alfa na microfibrila
Figura 30. Distribuio da somatria dos valores numricos relativos ao Overlap e
Gap, para os resduos de Valina, Leucina, Isoleucina, Metionina, e
Fenilalanina.
Ao longo das cadeias alfa, os aa hidrofbicos esto presentes em todas, com
predominncia nas cadeias alfa-2, cerca de 66%, tanto na zona do Gap quanto do
Overlap. Embora no mostrado, estes resduos correspondem, na sua maioria, aos
resduos de aa Val, Ile e Leu (Figura 30). Enquanto Phe se distribui ao longo das trs
cadeias alfa, a MET est distribuda apenas nas cadeias alfa-1.
A - Val: cadeias alfa-2 da primeira, terceira e quarta triplas hlices;
B - Leu: cadeias alfa-2 da primeira, segunda e quarta triplas hlices;
C - Ile: cadeias alfa-2 da segunda e da quarta triplas hlices;
D - Met: cadeias alfa-1 e alfa-1da primeira tripla hlice;
E - Phe: cadeias alfa-1, alfa-2 e alfa-1da primeira tripla hlice.
Aminocidos cidos
Em relao distribuio percentual, enquanto o Glu praticamente se
distribui igualmente nas zonas do Gap (28,7%) e do Overlap (33,2%), o Asp, no
Gap tem 25,2% e no Overlap 12,4%, isto , praticamente o dobro de resduos. Em
relao ao contedo deste dois aa nas zonas Overlap e Gap, podemos dizer que a
ltima significativamente mais cida. Coincidentemente esta a regio onde ocorre
a maioria das interaes com ligantes carregados negativamente, a Decorina, os
Sufatos de Dermatana e Queratana (Tabela 3) sugerindo que as ligaes entre estes
ligantes e o colgeno tipo I ou no so feitas apenas por interao de cargas, ou as
cargas positivas esto concentradas em regies bem especficas dentro do perodo D.
Em relao a distribuio destes aa ao longo das cadeias alfa os
resultados da Figura 31 mostram diferenas significativas:
- Asp: Independentemente da regio do perodo D est distribudo
principalmente nas cadeias 1 da terceira tripla hlice da microfibrila, com grande
predominncia para a zona do Gap;

- Glu: Distribudo homogeneamente no apenas nas zonas Gap e
Overlap, mas tambm ao longo de todas as cadeias alfa-1.
16 3 17
GluoverHD
15 over 16 GlugapHD
Nmero de resduos de Asp/cadeia alfa
14 gap 15 GlutotHD
13 total 14
13
Resduos de Glu/ cadeia alfa.

12
11 12
10 11
9 10
8 9
7 8
6 7
5 6
4 5
3 4
2 3
1 2
0 1
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
Posio da cadeia alfa na microfibrila Posio da cadeia alfa na microfibrila
Figura 31. Distribuio dos resduos de cido Asprtico e Glutmico nas hlices
da microfibrila correspondente ao intervalo de um perodo D.
Aminocidos Bsicos
Em termos percentuais, Lys e Arg praticamente repetem o perfil de
distribuio de Asp e Glu, isto , enquanto que numricamente, a Arg apresenta uma
distribuio mais homogenea em relao s zonas Overlap e Gap (27,5% e 29,3%
respectivamento), a Lys tem praticamente o dobro do nmero de resduos na zona do
Gap (23,1%) em relao zona do Overlap (14,3%). A His est distribuda
praticamente de modo igual nas zonas Gap e Overlap. Em relao distribuio nas
cadeias, a Lys predomina nas cadeias alfa-1 da segunda e terceira triplas hlices
(Figura 32) tanto no Gap quanto no Overlap. A Arg Overlap distribui-se igualmente
entre cadeias alfa-1 e alfa-2, principalmente na terceira tripla hlice (Figura 32). No
Gap, nas cadeias alfa-1 da quarta tripla hlice, nas cadeias alfa-2 nas segunda e
terceira.
15 16
Kover Rover
KGap RGap
Ktot 14 Rtot
Resduos de Lys/cadeia alfa.
12
Resduos de Arg/cadeia alfa.

10
10
6
5
0 0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 3 6 9 12 15
Posio da cadeia alfa na microfibrila Posio da cadeia alfa na microfibrila
Figura 32. Distribuio dos resduos de Lisina e Arginina nas hlices da
microfibrila correspondente ao intervalo de um perodo D.
IV.3. Anlise da distribuio dos aminocidos de acordo com o Modelo de
Smith (1968).
A primeira caracterstica observada na distribuio aquela descrita na
introduo (Figura 12b) e repetida abaixo na Figura 33. Aminocidos cidos mais aa
bsicos e aa hidrofbicos formam zonas de distribuio alternadas dentro do perodo
D e, aparentemente, com alguma superposio.
Aminocidos Hidrofbicos
Embora no mostrado, os aa hidrofbicos Met, Tyr, Phe, Val, Leu e Ile
podem ser includos em duas categorias em relao suas distribuies ao longo da
pentafibrila no perodo D:
A Um grupo que inclui a Val, Leu e Ile que distribudo regularmente ao
longo do perodo D.
B Um segundo grupo incluindo a Phe e a Met que apresenta uma
distribuio mais pontual (mais localizada) ao longo do perodo D.

OVERLAP GAP
b1
5
a2
Nmero de aminocidos cidos+bsicos
b2 d
a3
4 e2 c2
a1
e1
vs Hidrofbicos
c1
2
a4
c3
1
0
50 100 150 200
Posico do aminocido no perodo
Figura 33. Perfil da distribuio de aminocidos cidos mais aminocidos bsicos
(rea em laranja) em comparao com aquela dos aminocidos
hidrofbicos (linha preta) para a regio do perodo D: Overlap: bandas
c1, b2, b1 e a4. Gap, bandas a3, a2, a1, e2, e1, d, c3 e c2.
A somatria da sua distribuio, numa viso tridimensional, mostrada na
Figura 34. Como podem ser observados os aa hidrofbicos, se distribuem ao longo da
microfibrila em forma de aglomerados bem localizados e sua associao com aa
cidos e aa bsicos pode ser de dois tipos: uns onde aa hidrofbicos delimitam reas
livres (bolses) (Figura 34 setas e crculos) ou canais (Figura 35) onde se alojam os
aa cidos mais aa bsicos; uns onde aa cidos mais aa bsicos e aa hidrofbicos
formam verdadeiros aglomerados.

c1
b2
b1
a4
a3
a2
a1
d1
e2
e1
c3
c2
Figura 34. Representao esquemtica tridimensional da distribuio dos

aminocidos hidrofbicos do perodo D do colgeno tipo I. Formao de
bolses.
Figura 35. Representao esquemtica tridimensional da distribuio dos
aminocidos hidrofbicos do perodo D do colgeno tipo I ilustrando a
formao de canais. Viso de duas posies diferentes (giro de 180 ).

Aminocidos cidos
Uma grande parte dos aa cidos (Figura 36) literalmente ocupa os espaos
delimitados pelos aa hidrofbicos e mostrados nas Figuras 34 e 35.
Figura 36. Representao esquemtica tridimensional aminocidos cidos (em
vermelho) juntamente com os aminocidos hidrofbicos (em preto) para o
perodo D do colgeno tipo I. Viso de duas posies diferentes (giro de
180 ).
Aminocidos Bsicos
Valem para os aa bsicos (Figuras 37), o mesmo comentrio acima feito
para os aa cidos.
Figura37. Representao esquemtica tridimensional dos aminocidos bsicos (em

azul) juntamente com os aminocidos hidrofbicos (em preto) para o
perodo D do colgeno tipo I Viso de duas posies diferentes (giro de
180 ).
Entretanto, a ilustrao tridimensional da distribuio dos aa cidos mais
aa bsicos e aa hidrofbicos, ao longo do perodo D (Figura 38), mostra que a
distribuio destes aa, embora seja basicamente caracterizada pela presena de
regies onde aa cidos mais aa bsicos esto delimitados por aa hidrofbicos,
apresenta, pelo menos, trs regies (Figura 38, indicado por elipses) onde esses aa
esto agrupados formando verdadeiros aglomerados de aa bsicos, cidos e
hidrofbicos. Estas regies, que esto localizadas entre as bandas a4 e a3, entre c2 e
c3 e em c1, tambm so regies caracterizadas por um grande nmero de eventos
envolvendo o colgeno tipo I nas atividades da MEC (Tabelas 4, 5 e 6).
c1
b2
b1 a4
a3 a2
a1
d e2
e1
c3
c2
Figura 38. Representao esquemtica tridimensional da distribuio de aminocidos

cidos mais bsicos (em azul) e hidrofbicos (em preto) para o perodo D
no colgeno tipo I.
Estes resultados sugerem, portanto, que a topografia da distribuio dos aa
cidos mais aa bsicos e aa hidrofbicos pode ser agrupada em:

- Um primeiro grupo cuja organizao d origem a espaos ou canais nos
quais esto alojadas as grandes maiorias dos aa cidos e bsicos, abrangendo as
bandas b1, b2, a2, a1, e1, e2, d e c3 (Figura 33);
- Um segundo grupo alinhado ao longo dos mesmos eixos transversos do
perodo D da microfibrila, com aa bsicos e cidos, formando aglomerados com aa
hidrofbicos localizados entre as bandas a4 - a3, c2-c1 e c1.
Para definir melhor estas zonas foi utilizado um artifcio na construo de um
novo perfil de distribuio de aa cidos mais aa bsicos com base:
1 Na planilha do anexo I, em que todos os aa do perodo D tiveram um valor
atribudo igual 0, exceto os aa cidos e os aa bsicos, que tiveram um valor atribudo
igual a 1;
2 No eixo perpendicular do perodo, onde os nmeros foram somados de tal
forma que o resultante corresponde ao total de resduos de aa cidos e aa bsicos,
para cada posio no perodo que vai de a posio 1 at 260 a fim de incluir a banda
c1 do prximo perodo. A curva resultante a mesma mostrada nas Figuras 12b e
Figura 29;
3 No mesmo procedimento feito para os aa hidrofbicos;
4 Com esses dois conjuntos de dados (itens 1 e 2), o total de aa cidos mais
bsicos para uma posio na microfibrila, (por exemplo, a posio nmero 10), foi
subtrado do total de aa hidrofbicos existentes na mesma posio;
5 Na subtrao, se na mesma posio no houver aa hidrofbicos, o total de
aa cidos mais bsicos permanece o mesmo, indicando que no esto alinhados na
mesma posio do perodo D. Se houver aa hidrofbicos, o nmero total de aa cidos
e bsicos diminui, alterando a curva de distribuio destes aa refletindo, portanto, os
nveis de superposio ou alternncia entre eles, ao longo do perodo D.

A curva resultante em comparao com a distribuio de aa cidos mais aa
bsicos esta mostrada na Figura 39.
6 OVERLAP GAP
(cidos + Bsicos) - Hidrofbicos totais
b2 b1 a3 a2
5 d
e2 c2
4
a1
e1
3
c1
c1
2 a4 c3
-1
-2
-3
50 100 150 200 250
Posio do aminocido no perodo D
Figura 39. Distribuio dos aminocidos cidos e aminocidos bsicos no perodo:
rea preenchida em laranja: distribuio normal; linha verde: distribuio
resultante da subtrao entre o nmero de aminocidos (cidos mais
bsicos) e o nmero de aminocidos hidrofbicos.
A curva resultante mostra que quando se faz a subtrao dos aa cidos mais
aa bsicos do nmero de resduos hidrofbicos, embora alteraes menores sejam
observadas em todas as bandas, algumas delas, perdem suas identidades em relao
ao perfil original da distribuio de aa cidos mais bsicos de acordo com o padro
obtido por MET (Figura 12b). Estas bandas foram:
1 Bandas a4 e a3;
2 Intervalo entre as bandas c2 e c1;
3 Banda c1.
4 Ombro direita da banda b2 que no passvel de definio quando da
avaliao da Figura 38.
Um aspecto interessante que, exceto pela banda b2, todas estas regies esto
localizadas prximas ao limite das zonas Gap e Overlap e que no conjunto esto
associadas cerca de 71,9% dos stios das interaes que envolvem o colgeno tipo I
com as atividades que ocorrem na MEC (Tabelas 3, 4, 5, 6 e 8).
IV.4. Caractersticas cido-bsicas das regies do perodo D do colgeno
envolvidas na interao com a MEC
Um outro aspecto analisado neste trabalho foi a distribuio de cargas
negativas e positivas ao longo do perodo D para avaliao das resultantes de carga,
principalmente porque muitos dos ligantes associados ao colgeno tipo I (Tabelas 3,
4, 5 e 6) so macromolculas carregadas negativamente em pH fisiolgico.
Em protenas no pH fisiolgico, as cadeias laterais dos aa cidos e aa bsicos
(exceo feita a His) contribuem respectivamente com uma unidade de carga negativa
e uma positiva respectivamente.
Ponte salina
(a)
(b)
Figura 40. Ilustrao da formao de pontes salinas entre dois aminocidos (a) e
numa protena (b, seta).

Portanto, para saber se uma protena em pH fisiolgico carregada negativa
ou positivamente, basta subtrair o total de cargas negativas do total de cargas
positivas independentemente da posio da carga na protena.
Este excedente de carga tem origem na formao de pontes salinas (Figura
40), onde uma carga negativa neutraliza uma carga positiva. Guardadas as devidas
propores, a ponte salina se assemelha ligao entre um on Cl- e um on Na+ nos
cristais de cloreto de sdio e, nas protenas, tem um papel importante para a
estabilizao da estrutura tridimensional.
Em maior escala, estas interaes ocorrem tambm com macromolculas
carregadas positivamente e negativamente. Portanto, se a maioria dos ligantes das
Tabelas 3 e 4 so carregados negativamente em pH fisiolgico, do ponto de vista
qumico, a reao destes com o colgeno seria um evento espontneo na direo de
formar complexos salinos.
No caso do colgeno tipo I, com um total de 226 resduos de Glu- e Asp- e 256
resduos de Lys+ e Arg+ (Tabela 3) a resultante de carga de 30 unidades de cargas
positivas. Como conseqncia, em pH fisiolgico, o colgeno tipo I uma molcula
carregada positivamente ou prxima da neutralidade. Entretanto, o fato do colgeno
tipo I ser uma molcula carregada positivamente em pH fisiolgico (Figura 41) e ter
uma distribuio de carga como aquela mostrada na Figura 12b esta no descreve
qual a resultante de carga para cada banda.
Portanto, foi determinado qual o perfil da resultante de carga no colgeno tipo
I ao longo do perodo D e sua eventual correlao com seus os ligantes (Tabela 4-6).
Glu ou Asp
O O Molcula negativa em
226
C pH fisiolgico
C
O- O
-
Ponte salina
His, Lys e Arg
273
NH3+ NH 3
+
Resultante: Excesso de
47 positivas
Colgeno Colgeno
Figura 41. Representao esquemtica para a resultante total de cargas na molcula
de tropocolgeno tipo I com base na sua estrutura primria.
Para isto, foi utilizado o mesmo expediente quando da subtrao dos aa
hidrofbicos da soma total de aa cidos mais aa bsicos (Figura 39, curva a). Neste
caso o nmero total de aa bsicos foi subtrado do total de aa cidos e o critrio de
subtrair aa bsicos de aa cidos foi baseado no seu maior nmero. O resultado obtido
est mostrado na Figura 42 e apresentou as seguintes caractersticas:
1 A resultante para distribuio de cargas positivas e negativas pontual,
isto , localizadas em regies bem definidas;
2 Uma regio caracterizada por uma elevada densidade de carga positiva
(Figura 42, setas azuis escuras) superposta com aa hidrofbicos. Regies como estas,
que chamamos de zonas mistas, foram localizadas junto s bandas a4-a3, banda c2-c1
e c1.
3 Outras regies caracterizadas por elevada densidade de cargas positivas ou
negativas e envolvidas nas atividades do colgeno com a MEC (Figura 42, setas azuis
claras e vermelhas) se diferenciam das zonas mistas, pelo fato de estarem em vales
formados por aa hidrofbicos. Estas regies foram denominadas de bolses e aquelas
com densidade de carga positiva foram localizadas entre os resduos 20-41 (b1), 20-
70 (b2), 121-166 (e1) e 166-195 (banda d) (critrio utilizado foi o pico para o nmero
de resduos de aa hidrofbicos). Aquela com densidade de carga negativa, est
localizada entre os aa 1-21 (banda c1) e 121-166 (banda e2). A estas regies no so
atribudas quaisquer atividades envolvendo a MEC e o colgeno em eventos de
adeso.
3
b1
Resultante de cargas e nmero de resduos de aminocidos
a2 d
a3 c2
2 b2 e2
a1 e1
cidos + bsicos e hidrofbicos
c1
c1
1
c3
a4
0
OVERLAP GAP
-1
20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260
Posio do evento ou do aminocido no perodo D
Figura 42. Curva em laranja: distribuio normal de aminocidos cidos e
aminocidos bsicos no perodo D; Curva em preto: distribuio normal
dos aminocidos hidrofbicos; Curva em verde: resultante da distribuio
de cargas ao longo do perodo D.

Outro aspecto da topografia, em relao resultante de carga,
comparativamente distribuio dos aa hidrofbicos mostrado na Figura 43.
3
Resultante de cargas e nmero de resduos de
2
aminocidos hidrofbicos
a4 a3
c2
1 a2 c3
b1 c1
c1 a1 d
e1
0
e2
OVERLAP GAP
b2
-1
50 100 150 200 250
Posio do evento ou do aminocido no perodo D
Figura 43. Curva em preto (rea preenchida): distribuio normal dos aminocidos
hidrofbicos; Curva em verde: resultante da distribuio de cargas ao
longo do perodo D. As posies das bandas esto distribudas
corretamente ao longo da abscissa; em vermelho: linha perfil da resultante
de carga ao longo do perodo D; em azul claro: linha perfil da distribuio
dos aminocidos hidrofbicos ao longo do perodo D.
A curva resultante para a distribuio de cargas (Figura 43, linhas vermelhas)
apresenta um mximo em c2 (resultante positiva), decrescendo a partir deste ponto

at aproximadamente a posio da banda b2 (resultante negativa), voltando a crescer
com um novo ponto de mximo prximo da banda a3 (resultante positiva). Decresce,
novamente, at a posio a1 (resultante negativa), completando o ciclo com o
mximo na banda c2. Com pequenos deslocamentos para posies mais altas no
perodo, este foi tambm o comportamento da distribuio para os aa hidrofbicos
(Figura 43, linha azul clara).
IV.5.Caractersticas das Inter-relaes do colgeno tipo I com eventos da
matriz extracelular
A Tabela 8 mostra os resultados das interaes do colgeno tipo I e as bandas
envolvidas nas interaes.
Tabela 8. Resumo da localizao das interaes de ligantes com o colgeno tipo I e

sua identificao dentro do perodo D.
RESUMO ENVOLVENDO EVENTOS DE NATUREZA ESTRUTURAL

Ligante Atuao Bandas
c1 b2 b1 a4 a3 e2 e1 d c3 c2
64,65
Decorina Colgeno - -/+ +
66
Dermat, Condroi MEC - -/+ +
Queratana MEC - + + -
Colgeno Fibrilognese + +
Fibronectina Fibras +
Colg. tipo IV Fibrilognese +
Nmero de interaes/banda
Nmero de interaes = 15 1 3 2 2 2 3 1 1
% Total 6,6 19,8 13,2 13,2 13,2 19,8 6,6 6,6
Tipo de banda c b a e d
Total/ banda 3 0 5 4 3
% 19,8 33,0 26,4 19,8
Sinais de - e +: Resultante de carga nestas bandas.

Tabela 8 (continuao). Resumo da localizao das interaes de ligantes com o

colgeno tipo I e sua identificao dentro do perodo D.
RESUMO ENVOLVENDO EVENTOS LIGANTES ASSOCIADOS ADESO

Ligante Atuao Bandas
c1 b2 b1 a4 a3 e2 e1 d c3 c2
Decorina Fagocit. col -
Heparina Cl endotel. +
Prec prot. Amieli. Adeso +
Prot. oligom cartil. Crescim. Cel. - +
Prot. lig. cel. Col. Adeso +
von de Willebrand Coagulao +
Fosfoforina Mineralizao - +
Nmero de interaes = 9 2 1 1 5
% Total 22,2 11,1 11,1 55,5
% 22,2 22,2 55,5
RESUMO ENVOLVENDO INTEGRINAS E ADESO
Identificao da Atuao Bandas
Integrina c1 b2 b1 a4 a3 e2 e1 d c3 c2
21 e 11 Adeso cel. - -
21 Plaquet. Lam. + 0
21 Fibroblastos e - + + 0
outra cls.
21 Fibroblasto +
derme
21 Cels Ovrio - +
Hamster
21 Cel Carcinoma 0
mama
21 Linfcitos T + +
inibio
21 Angiognese +
Nmero de interaes = 15 3 3 3 2 1 3
% Total 20,0 20,0 20,0 13,3 6,6 20,0
% 20,0 40,0 33,3 6,6

Tabela 8 (Continuao). Resumo da localizao das interaes de ligantes com o

colgeno tipo I e sua identificao dentro do perodo D.
RESUMO ENVOLVENDO EVENTOS DE NATUREZA QUIMICA

Identificao Do Atuao Bandas
agente c1 b2 b1 a4 a3 e2 e1 d c3 c2
Colagenase Hidrlise col. +
Glicao Ageing - -
cido acetil Embebio + -
saliclico
Frutose Embebio -
hidrlise c2-c1, a - + -
Nmero de interaes = 11
3 2 1 1 1 3
% Total 27,3 18,2 9,1 9,1 9,1 27,3
Total/banda 7 0 3 0 1
% 93,7 0 27,3 0 9,1
Tabela 9: Nmero de eventos envolvendo as zonas Overlap e Gap do perodo D do
colgeno tipo I nas atividades da Matriz Extracelular.
Overlap Gap
c1 b2 b1 a4 a3 e2 e1 d c3 c2
Natureza Estrutural (15)a 1 - - 3 2 2 2 3 1 1
% Eventos Overlap/Gap 38,6 59,4

Ligantes Associados Adeso (9) 2 1 1 - 5 - - - - -
% Eventos Overlap/Gap 100,0
Adeso com Integrina (15) - 3 3 3 2 1 - - 3 -
Natureza Qumica (11) 3 - - 2 1 - - 1 1 3
SOMA (Total 50) 6 4 4 8 10 3 2 4 5 4
% total/banda 13,0 8,7 8,7 17,4 21,8 6,5 4,3 8,7 11,9 8,7
Total Overlap = 69,6% Total Gap = 30,4%
a Nmero total de ventos.

Tabela 10: Nmero de eventos envolvendo o colgeno tipo I nas atividades da Matriz
Extracelular nas zonas: mistas (regies formando aglomerados de
aminocidos hidrofbicos, cidos e bsicos em cinza); bolses ou
canais (regies de densidades de cargas positivas e/ou negativas
delimitadas por regies hidrofbicas em amarelo).
Overlap Gap
c1 b2 b1 a4 a3 e2 e1 d c3 c2
Natureza Estrutural 1 - - 3 2 2 2 3 1 1
Total de interaes 1 0 5 7 2
% Interaes 6,7 0 33,3 46,7 13,3
% Eventos Overlap/Gap Mistas Bolso
53,3 46,7
Adeso (integrinas e ligantes) 2 4 4 3 7 1 - - 3 -
% Interaes 8,3 33,3 41,6 4,1 12,5
% Eventos Overlap/Gap Mistas Bolso
62,6 37,4
Natureza Qumica 3 - - 2 1 - - 1 1 3
% interaes 27,3 0 27,3 9.1 27,3
Mistas Bolso
% Eventos Overlap/Gap
90,9 9,1
Caractersticas das Interaes (Tabelas 9 e 10)
1 Eventos de Natureza estrutural: do total de eventos, 40,0% ocorre na
zona do Overlap e 60,0% na zona do Gap. O fato interessante que, todos os
eventos na zona Gap so devidos a Decorina, Sulfato de Condroitina e Dermatana,
molculas envolvidas na manuteno da estrutura da MEC. Apenas o Sulfato de
Queratana, tambm envolvido na manuteno da estrutura da MEC, interage na zona
do Overlap, prximo as interfaces das zonas Overlap/Gap. Esses resultados

sugerem que, a maior parte do controle estrutural da MEC, envolvendo o colgeno
tipo I, est localizado na zona do Gap.
Levando-se em considerao que do total das interaes atribudas zona do
Overlap, 33,3% ocorrem na interface Overlap/Gap podemos dizer que as interaes
de natureza estruturais tm origem na interface Overlap/Gap se estendendo para
zona do Gap e como conseqncia provvel que a zona Overlap tem pouca ou
nenhuma participao nestes eventos. A somatria dos eventos neste intervalo de
93,3%.
Enquanto Decorina, Sulfato de Condroitina e Dermatana interagem com o
perodo D em regies carregadas delimitadas por barreiras hidrofbicas (bolses), o
sulfato de Dermatana interage em zonas mistas, isto , aglomerados de aa sobre o
perodo D contento uma alta densidade de aa hidrofbicos associados a uma elevada
densidade de carga positiva (Figuras 42 e 43).
2 Macromolculas associadas a eventos de adeso: 100% das adeses
foram observadas na zona Over. De um total de nove interaes (Tabela 9), sete
ocorrem nas zonas mistas (duas na banda c1 e cinco na banda a3). As outras duas
foram observadas em bolses correspondentes as zonas b1 e b2.
3 Adeso mediada por Integrinas: no caso das Integrinas, o padro
observado foi similar ao das molculas de adeso com uma predominncia de 73,3%
da zona Overlap em relao zona do Gap que tem apenas 26,7% das ocorrncias.
Em relao aos eventos de adeso, levando em considerao a participao
das molculas de adeso e aqueles mediados pelas Integrinas, 83,3% ocorrem na zona
do Overlap e 12,7% na zona do Gap.

Em comparao com os dados observados para molculas estruturais, os
resultados sugerem que a juno Overlap/Gap um divisor funcional das interaes
do colgeno tipo I que ocorrem na MEC.
Em relaes aos bolses, eventos de adeso ocorrem preferencialmente nas
zonas mistas, 44,3%, e 55,7% nos bolses, uma distribuio similar quelas
observadas para as interaes de natureza estrutural.
4 - Interaes de Natureza Qumica: embora as distribuies nas zonas
Overlap/Gap, sejam aproximadamente iguais, surpreendentemente, 63,6% das
interaes ocorrem nas regies das mistas. Em princpio, o que se esperaria, um
maior nmero de interaes nas regies dos bolses por serem menos impedidas de
acessar essas zonas por estarem mais expostas. Esses resultados sugerem que, apesar
de aparentemente mais acessveis, no permitem a entrada de molculas pequenas.
5 Resultante de carga: Como mostram os resultados da Tabela 8
(indicaes feitas pelos sinais de e +) no foi possvel chegar a qualquer tipo de
correlao entre resultante de carga do perodo D do colgeno tipo I e atividades na
MEC.
Concluses 79
V. CONCLUSES
1 Em relao distribuio dos aa cidos, mais aa bsicos e aa hidrofbicos
o perodo D do colgeno tipo I caracterizado por apresentar duas regies distintas:
uma, onde aa se alojam em espaos delimitados por aa hidrofbicos; a outra, onde aa
bsicos, aa cidos e aa hidrofbicos formam aglomerados.
2 A interface Overlap: Gap parece funcionar com um divisor das atividades
da MEC envolvendo o colgeno tipo I. Enquanto a zona do Overlap est envolvida
nas atividades de adeso (83,2% das interaes) a zona do Gap controla efeitos de
natureza estrutural. Levando-se em considerao as interaes que ocorrem a partir
do limite Overlap: Gap e em direo ao Gap 93,3% destas interaes ocorrem neste
intervalo.
3 Exceto para o caso dos eventos de natureza estrutural, as zonas mistas isto
, aquelas formadas por aa cidos, aa bsicos e aa hidrofbicos e localizadas nas
proximidades do limite Overlap:Gap so aquelas mais envolvidas nas outras
atividades da MEC moduladas pelo colgeno tipo I.
4 Para explicar a amplitude de atividade biolgica resultante da interao de
ligantes com o colgeno tipo I proposto o que se segue baseado na existncia de
gradientes eletrosttico e hidrofbico existentes ao longo do perodo D. Assim sendo,
os ligantes poderiam:
Concluses 80
A Interagir em stios diferentes sobre o colgeno por meio de um
ajuste entre suas propriedades (carga, massa molecular e hidrofobicidade) e
o gradiente eletrosttico e hidrofbico existente.
B Em funo das caractersticas do gradiente eletrosttico e
hidrofbico a interao do ligante induz alteraes na superfcie do colgeno
expondo stios especficos para atividades biolgicas da MEC. Para citar
alguns exemplos, temos a Fosfoforina no processo de biomineralizao da
Dentina, o fator de von de Willebrand na formao do cogulo sanguneo, da
formao de estruturas tubulares por clulas endoteliais e a ao da
colagenase.
Referncias Bibliogrficas 81
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Anexos 91
VII. ANEXO
Planilha representativa da distribuio dos aminocidos no

perodo D quando cinco molculas de colgeno so dispostas
alternadamente de de seu comprimento.
Anexos 92
GL
N
LE
U
SE GL
R N
TY LE
R U
GL SE
Y R
TY TY
R R
AS GL
P Y
GL TY
U R
LY GL AS
S U P
SE PH GL
R E U
TH SE LY
R R S
GL AL SE
Y A R
GL GL TH
Y Y R
IL E LY GL
S Y
SE GL GL
R Y Y
VA GL
L Y ILE
SE HI GL AL AL GL PR L GL PR L GL PR GL SE
R S Y A A Y O EU Y O EU Y O Y R
AS PH AL AL 70 PR L PR P PR VA
X N E X A A 0 X O EU X O HE X O L
LE SE AR AL PR PR AL PR PR PR
U X R G X A O X O A X O O X O
GL LE VA AR AL PR AR PR ME PR
N U X L G X A O X G O X T O X
GL LE TH AR SE PR AR AL 23 ME PR
X N U X R G X R O X G A 5 X T O 1
PR GL PR VA PR AL 47 PR AR PR ME
O X N O X L O X A 0 O X G O X T
PR L PR P PR P SE ILE SE LE
O EU X O RO X O RO X R X R U X
PR P 94 PR P AL PR PR P ME PR
X O RO 0 X O RO X A O X O RO X T O
PR PR PR PR GL PR PR SE PR SE
O X O O X O U X O O X R O X R
PR ILE SE PR AL GL GL P 24 AR P
O X R O X A U X N RO X 0 G RO X
AL PR SE PR VA GL PR P AR PR
X A O X R O X L U X O RO X G O
SE PR AS SE 71 LY AL PR GL LE AR
R X O N X R 0 S X A O X N U X G
PR HI AL ILE PR L GL AL PR P
O S X A X O YS X Y A X O RO X
HI SE SE AS PR L AL PR PR L
X S R X R N X O YS X A O X O EU 10
GL PR PR AL GL PR PR GL PR PR
U X O O X A U X O O X Y O X O
GL AS PR P GL GL 48 PR T PR AL
N P X O RO X N U X 0 O HR X O A X
GL GL PR P AR GL TH PR AL PR
X N U X O RO X G U X R O X A O
Anexos 93
.
HI SE SE AS PR LY AL PR PR L
X S R X R N X O S X A O X O EU 10
GL PR PR AL GL PR PR GL PR PR
U X O O X A U X O O X Y O X O
GL AS PR P GL GL 48 PR T PR AL
N P X O RO X N U X 0 O HR X O A X
GL GL PR PR AR GL TH PR AL PR
X N U X O O X G U X R O X A O
PR GL 95 PR PR VA GL PR PR AL PR
O X N 0 O X O L X N O X O A X O
SE AL PR P PR L LY AL PR AL
R A X O RO X O EU X S A X O A X
PR PR PR PR HIS VA AR PR 25 PR AL
X O O X O O X L X G O 0 X O A
AL SE PR PR AS PR AS LY PR PR
A X R O X O P X O N X S O X O
SE SE AL PR 72 LE GL SE LE GL P
R R X A O X 0 U U X R U X N RO X
VA AL AL PR PH AS VA AS GL P
X L A X A O X E P X L N X N RO
PR SE LY AL AL LE GL SE PH GL
O X R S X A A X U U X R E X N 20
AL PR GL LY PR L PR GL GL PH
A O X U S X O EU X O U X N E X
AL PR GL LY PR AL 49 PR GL GL PH
X A O X U S X O A 0 X O U X N E
PR AL GL GL PR PR AL PR PR GL b2
O X A Y X U O X O A X O O X N
AR P 96 LY LE SE PR PR P PR P
G RO X 0 S U X R O X O RO X O RO X b2
AR P AR GL AL PR AL AL AL PR
X G RO X G Y X A O X A A X A O b2
PR AR PR LY AL SE SE PR 26 GL PR b2
O X G O X S A X R R X O 0 U X O
PR P AR P AR PR LY SE PR GL
O RO X G RO X G O X S R X O U X b2
AL PR AR PR 73 AR AL LY SE PR GL
X A O X G O 0 X G A X S R X O U b2
SE PR GL AR GL AR AS LY GL PR b2
R X O U X G U X G P X S U X O
AL PR TH AS AR GL TH GL PR GL
A O X R P X G U X R U X O U X 30 b2
SE SE GL GL AR GL SE AS PR GL
X R R X N U X G U X R P X O U b2
AL AL PR TH PH AR 50 AL TH AL PR b2
A X A O X R E X G 0 A X R A X O
PR P AL PR PR P LY AS SE GL
O RO X A O X O RO X S N X R N X b2
AL AL 97 AL PR PR P LY AL TH AL
X A A 0 X A O X O HE X S A X R A b2
LY PR AR AL GL PR GL LY PR SE
S X O G X A U X O U X S O X R b2
AS LY PR A AR GL PR GL 27 ME PR
P S X O RG X G U X O U X 0 T O X b2
AS LY PR A SE GL PR GL AL PR
X P S X O RG X R U X O U X A O b2
LE AS GL PR 74 VA AR PR PR PR ME
U X P U X O 0 L X G O X O O X T b2
AS AR VA GL GL AL VA SE AR AL b2
N G X L U X N A X L R X G A X
TH LE VA GL GL VA AL PR AR PR
X R U X L U X N L X A O X G O 40 b2
LE AS PR VA PR GL VA VA PR AR
U X N O X L O X N L X L O X G b2
PR HIS PR AL PR P 51 GL P PR P
O X O A X O RO X 0 N RO X O RO X b2
PR L PR PR TH PR GL VA AL PR
X O EU X O O X R O X N L X A O b2
PR PR 98 PR PR PR PR PR GL PR PR b2
O X O 0 O X O O X O O X N O X O
ILE TH PR P AL PR PR P PR P
R X O RO X A O X O RO X O RO X b2
VA PR PR PR ILE PR PR PR 28 PR P
X L O X O O X O X O O 0 X O RO b2
PR ILE PR PR PR AL PR PR LY PR b2
O X O X O O X A O X O S X O
PR P AL PH 75 AR SE AL PR AS LY
O RO X A E X 0 G R X A O X N S X b2
AL PR AL PR AR PR SE PR AL LY b2
X A O X A O X G O X R O X A S
PR PR GL AL AL AR GL AL AS AS
O X O U X A A X G U X A P X N 50 b1
Anexos 94
PR PR GL AL AL AR GL AL AS AS b1
O X O U X A A X G U X A P X N 50
AR I LE LY GL AS PR GL GL AS GL b1
G X S U X N O X U U X P U X
AR PR LY GL SE AL 52 GL GL AS AS b1
X G O X S U X R A 0 X U U X P P 18
AR AR SE LY AL AS LY GL GL AS b1
G X G R X S A X N S X U U X P
TH PR 99 PR PR PR PR AR LY AL HI
R O X 0 O O X O O X G S X A S X b1
GL AR SE SE PR AL AR LY PR GL
X N G X R R X O A X G S X O U 19 b1
AS TH AL PR AS PR AL AR 29 LY AL
P X R A X O N X O A X G 0 S X A b1
AL HIS AS GL AS PR AR PR PR LY
A X P U X P O X G O X O S X b1
GL AS AL AL 76 AS AS AS AL PR LY 20 b1
X N P X A A 0 X P N X N A X O S
PR AL PR AS AS GL AR AR PR
O X A O X P AL X P U X G G X O b1
GL PR AL TH LY AS PR GL PR AR
Y O X A R X S N X O U X O G X 60 b1
AL PR AL PR LY AL AL GL PR AR
X A O X A O X S A X A U X O G 21 b1
PR GL AL AL AS LY 53 PR PR GL PR b1
O X Y A X A P X S 0 O X O U X O
PR PR PR PR AL GL TH SE AR GL
O O X O O X A U X R R X G U X b1
PR PR X PR AL PR AS AL PR AR GL
X O O 000 X O A X O P X A O X G U 22 b1
PR PR TH PR AL AL LE TH PR AR
O X O R X O A X A U X R O X G
PR PR PR PR PR VA PR PR 30 PR VA
O O X O O X O L X O O X 0 O L X
PR PR TH TH VA AL PR LE VA PR 23
X O O X R R X L A X O U X L O
PR PR PR PR 77 AL PR PR PR PR PR
O X O O X O 0 A X O O X O O X O
PR PR GL PR PR AL PR PR GL PR
O O X N O X O A X O O X N O X
PR PR GL PR PR AL PR PR GL PR
X O O X N O X O A X O O X N O 70
PR PR ILE GL SE PR GL PR AL GL
O X O X N R X O U X O A X N a4
PR PR AL LE GL TH 54 AR LE AR AL
O O X A U X N R X 0 G U X G A X a4
PR PR LE ILE AL SE AR GL AR AL
X O O X U X A R X G U X G A a4
PR PR 10 G LN AL AL GL GL AR LE AR
O X O 10 X A A X N Y X G U X G a4
PR VA AR AL PR PR PR SE PR PH
O L X G A X O O X O R X O E X a4
SE SE PR PR GL SE AL PR GL 3X PR LE
R R O X O N X R A X O Y 0 X O U a4
AL GL PR VA AR LE PR SE PR TH PR
A Y O L X G U X O R X O R X O a4
GL SE VA I LE 78 GL PR AR SE AL TH
X Y R L X 0 N O X G R X A R X
PH AL LE VA SE LE AR SE PR T
E X A X U L X R U X G R X O HR
AS TY LE VA ME GL PH AR LE AL
P R X U X L T X N E X G U X A 80
LE GL PH PR LE PR LE PR LE PR LE
U U E O U X O U X O U X O U X
SE PH AS PR LE PR ME 55 PR PH PR LE
R E P X O U X O T 0 X O E X O U
LY GL PR PH PR LE ME PR AS PH
S 0 N X O E X O U X T O X N E
AL GL LE PR PR PR 56 PR LY LE SE
A 0 U U X O O X O 0 O X S U X R
HIS LY PR VA LY GL AL PR AS LE
0 S O L X S Y X A O X P U X
AS AL AL LE LY PR AL PR AS LE
P 0 A X A U X S O X A O X P U
GL HIS PR PR AS LY GL AL AL AS a2
Y 0 O X O P X S U X A A X P
GL AS SE PR AR GL AR SE 33 LY LE
Y 0 P R O X G U X G R X 0 S U X a2
AR GL VA PR LY AS AR GL LY AL
G 0 Y X L O X S P X G U X S A a2
TY GL GL SE 80 AS AR SE AR AS LY
R 0 Y U X R 0 P X G R X G P X S a2
TY AR PR GL AL GL PR AL AL GL
R 0 G O U X A U X O A X A N X a2
TY TY PR GL PR AS SE SE PR AS 10 a2
R 0 R X O U X O P X R R X O P 0
Anexos 95
TY TY PR GL PR A SE SE PR A 10
R 0 R X O U X O SP X R R X O SP 0 a2
TY LY PR PR AL PR PR PR AL a2
0 0 R S X O O X A O X O O X A
TY GL PR LY LE 57 AL PR AL AL
0 0 R N O X S UX 0 A O X A A X
LE L AR PR AL PR PR P
0 0 0 X U YS X G O X A O X O RO
PR GL AL LY PR AL PR AL
0 0 0 O X N A X S O X A O X A
SE ILE AS GL LY VA LY VA
0 0 0 R X P U X S L X S L X
SE P ILE AL AR PR 34 LY PR
0 0 0 X R RO X A X G O 0 X S O
AL SE SE AS SE LY GL LY
0 0 0 A X R R X P R X S U X S a1
SE P 81 PR A PR PR PR GL
0 0 0 R RO X 0 O SN X O O X O U X a1
PR A PR S AS SE PR GL
0 0 0 X O LA X O ER X N R X O U a1
GL SE LY PR GL PR SE PR 11
0 0 0 U X R S X O U X O R X O 0 a1
AR A AS AR AL AS PR A
0 0 0 G LA X P G X A P X O LA X a1
AR GL AS L 58 AL GL PR S
0 0 0 X G U X P YS 0 X A U X O ER
PR AR VA AS AR AL GL PR
0 0 0 O X G L X P G X A U X O
PR P AR AL PR AR AS GL
0 0 0 O RO X G A X O G X N U X
PR P AR VA PR AR AS GL
0 0 0 X O RO X G L X O G X N U
PR PR LE AR GL PR 35 AL AS
0 0 0 O X O U X G U X O 0 A X N
ME AL TH AL AL GL PR T
0 0 0 T A X R A X A U X O HR X
VA PR 82 HI LE PR GL PR A
0 0 0 X L O 0 X S U X O U X O LA
PR ME PR TH LE AL GL PR
0 0 0 O X T O X R U X A N X O
PR S ILE AL PR L ME GL 12
0 0 0 O ER X A X O EU X T N X 0
PR P VA PR ME LE TH GL
0 0 0 X O RO X L O X T U X R N
LE PR PR ILE 59 AL PR PR ME
0 0 0 U X O O X 0 A X O O X T
AL VA PR A LY PR AR A
0 0 0 A L X O LA X S O X G LA X
AS L PR P AR A AR PR
0 0 0 X N EU X O RO X G LA X G O
PR AL PR PR LE LY LE AR
0 0 0 O X A O X O U X S U X G e1
PR A AL PR TH LE 36 PR L
0 0 0 O LA X A O X R U X 0 O EU X e1
PR P AL PR PR L PR L
0 0 0 X O RO X A O X O EU X O EU e1
GL PR 83 AL AL SE TH GL PR
0 0 0 U X O 0 A X A R X R U X O e1
SE GL PR A PR S AR GL
0 0 0 R U X O LA X O ER X G U X e1
AL GL TH AL PR S AR GL 13
0 0 0 X A U X R A X O ER X G U 0 e1
AL GL TH AL PR S AR GL 13
0 0 0 X A U X R A X O ER X G U 0 e1
AR SE AS PR SE PR AR AR
0 0 0 G X R P X O R X O GX G e1
GL AR LY AS 60 PR A PR AR
0 0 0 U G X S P X 0 O SN X O G X e1
AS AR AR A ILE SE VA AR
0 0 0 X P G X G SP X R X L G e1
AL GL GL LY PR PR AL PR
0 0 0 A X U U X S O X O A X O e1
PR A SE GL AS PR PR A
0 0 0 O SN X R U X P O X O LA X e1
PR A AL GL AL PR 37 PR A
0 0 0 X O LA X A U X A O 0 X O LA e1
AL PR PR SE LY AS PR PR e1
0 0 0 A X O O X R S X P O X O
GL AS 84 SE AL TH LY AL PR
0 0 0 U N X 0 R A X R S X A O X e1
AS AL AL PR GL L AL PR
0 0 0 X P A X A O X U YS X A O e1
SE GL PR SE PR TH AL AL 14 e2
0 0 0 R X U O X R O X R A X A 0
Anexos 96
SE GL PR SE PR TH AL AL 14
0 0 0 R X U O X R O X R A X A 0 e2
PR P AL PR 61 PRO PRO AR A
0 0 0 O RO X A O X 0 X G LA X e2
PR SE AL PR VA PR AR A
0 0 0 X O R X A O X L O X G LA e2
AR PR PR AL PR PR AS AR
0 0 0 G X O O X A O X O N X G e2
AS A TH PR AL LE AS SE
0 0 0 P RG X R O X A U X P R X e2
AS AR AL PR PR PR AS AS e2
0 0 0 X P G X A O X O O X P N
SE AS AL TH GL AL 38 AL AS
0 0 0 R X P A X R N X A 0 A X P e2
PR G AR PR AS ILE TH SE
0 0 0 O LN X G O X P X R R X e2
PR SE 85 AR AL AS GL VA AL
0 0 0 X O R 0 X G A X P N X L A e2
AL PR AL AR AR AS AL TH
0 0 0 A X O A X G G X P A X R e2
LY HIS PR SE PR AR AL PR 15 e2
0 0 0 S X O R X O G X A O X 0
LY AL PR AL PR AR VA AL e2
0 0 0 X S A X O A X O G X L A
AS LY AS PR PR PR PR AL
0 0 0 P X S P X O 620 O X O O X A
AR GL AR GL PR PR PR PR
0 0 0 G U X G U X O O X O O X
AR AS AR AS ILE PR AL PR
0 0 0 X G P X G P X O X A O
GL AR GL AR PR PR PR PR
0 0 0 U X G U X G O X O O X O
TH TY PR GL PR PR 39 TH PR
0 0 0 R R X O U X O O X 0 R O X
P R GL VA GL VA PR AS P
0 0 0 X O U X L U X L O X N RO
PR TH 86 PRO PR AL PR PR TH
0 0 0 O X R 0 X O A X O O X R
AL AS PR PR AR A AL SE
0 0 0 A N X O O X G LA X A R X
PR AL PR AR A AL PR
0 0 0 X ILE O X A O X G LA X A O 160
PR AL PR PR GL AR PR AL
0 0 0 O X A O X O N X G O X A
PR PR AL PR 63 A L GL PR PR
0 0 0 O O X A O X 0 A U X O O X
VA P AS PR PR GL PR PR
0 0 0 X L RO X N O X O N X O O
AL PR PH AL VA AL PH PR
0 0 0 A X O E X A L X A E X O
PR AL AL PH ME AS PR PH
0 0 0 O A X A E X T N X O E X
AL AL AL PH ILE VA 40 PR PH
0 0 0 X A A X A E X L 0 X O E
AL PR PR AL PH ME AL PR
0 0 0 A X O O X A E X T A X O
PR AL 87 PRO PRO PR PH VA AL
0 0 0 O A X 0 X O E X L A X d
PR AL AL PR PR PH PR A
0 0 0 X O A X A O X O E X O LA d
AL PR AL PR PR PR AL VA 17
0 0 0 A X O A X O O X O A X L 0 d
PR PR AS AL L Y PR L Y PR
0 0 0 O O X P A X S O X S O X d
HI AL AL AL 64 LY PR LY AL
0 0 0 X S A X A A 0 X S O X S A d
PR PR GL AS AL LY GL LY
0 0 0 O X O N X P A X S U X S d
VA P P R GL AL PR AL GL
0 0 0 L RO X O N X A O X A U X d
VA PR PR GL TH A ILE GL
0 0 0 X L O X O N X R LA X U d
PR VA AL PR GL AL 41 PRO AL
0 0 0 O X L A X O U X A 0 X A d
AL PR LY AL PR AS GL A L
0 0 0 A O X S A X O P X N A X d
AL PR LY AL P R GL VA PR
0 0 0 X A O 880 X S A X O U X L O d
LY AL GL LY LY PR PR GL
0 0 0 S X A U X S S X O O X N d
SE L P R GL AL LY AR AS 18
0 0 0 R YS X O U X A S X G N X 0 d
Anexos 97
GL LY AR GL AS LY AL PR
0 0 0 X U S X G U X N S X A O d
AS SE AS PR GL AL SE AR
0 0 0 P X R P X O 650 U X A R X G d
AR AS AL GL A R AS GL P R
0 0 0 G N X A Y X G P X U O X d
AR AS LY AS L Y GL TH SE
0 0 0 X G P X S P X S U X R R d
GL AR AL AL VA AR PR GL
0 0 0 U X G A X A L X G O X U d
TH GL LY PR PR 42 GLN PRO
0 0 0 R U X S O X O HIS X 0 X d
T H GL LY AL AL VA AL PR
0 0 0 X R U X S A X A L X A O d
PR TH 89 AS LY PR PR VA GL
0 0 0 O X R 0 P X S O X O L X N d
AL PR A L GL PR L E AR PR
0 0 0 A O X A U X O U X G O X
SE P AS A AL PR AR VA 1
0 0 0 X R RO X N SP X A O X G L 90
PR AL PR AL AL PR GL AR
0 0 0 O X A O X A A X O U X G
AL PR PR VA 66 VA AL PR GL
0 0 0 A O X O L X 0 L A X O U X
VA PR VA PR AR A V A GL
0 0 0 X L O X L O X G LA X L U
PR AL PR PR PR VA PR PR
0 0 0 O X A O X O O X L O X O
VA PR AL PR AL AL PR L E
0 0 0 L O X A O X A A X O U X
AL PR TH P PR PR PR PR
0 0 0 X A O X R RO X O O 430 X O O
PR VA PR AL LY AL PR PR
0 0 0 O X L O X A S X A O X O
AL AL 99 AL PR AS PR AL LE
0 0 0 A A X 0 A O X P O X A U X
VA PR VA PR AS LY SE PR
0 0 0 X L O X L O X P S X R O
AL AL PR AL GL AS AL AL 20
0 0 0 A X A O X A U X P A X A 0
AR PR PR AL AL AS AL PR
0 0 0 G O X O A X A N X A O X
AR A AL PR AS G VA AL
0 0 0 X G LA X A O 670 X N LU X L A
PR AR PR PR AL AL PR AL
0 0 0 O X G O X O A X A O X A
AL PR ILE PR GL A L AL PR
0 0 0 A O X O X N A X A O X
SE P AL PR GL A PR PR
0 0 0 X R RO X A O X N LA X O O
PR AL AS PR GL AS AL
0 0 0 O X A N X ILE O X N 440 N X A
GL PR VA PR PR PR PR AS
0 0 0 N O X L O X O O X O N X
GL P AS A PR PR PR AS
0 0 0 X N RO 910 X N SN X O O X O N
PR GL AL VA PR PR AL PR c2
0 0 0 O X N A X L O X O A X O
AR PR PR AL PR AS AL 21
0 0 0 G ILE X O O X A O X P A X 0 c2
AR PR PR A GL PR AS AL
0 0 0 X G O X O LA X N O X N A c2
AS AR AL PR PR AL GL AS
0 0 0 P X G A X O 680 O X A N X P c2
L Y AS LY PR AL VA PR L E c2
0 0 0 S P X S O X A L X O U X
LY AS AL AL GL PR TH GL c2
0 0 0 X S P X A A X Y O X R N
GL LYAL LY GL AL AL PR c2
0 0 0 U X S A X S U X A A X O
TH GL AR SE AR G 45 LY AL
0 0 0 R U X G R X G LY X 0 S A X c2
PR GL AR A L Y GL LY AL
0 0 0 X O U X G LA X S U X S A c2
0 0 0
GL
U X
TH
R
92
0
SER X ARG GL
U X
AR
G
AL
A X
LY
S c2
GL GL AL AS GL GL AS AL
0 0 0 N U X A P X N U X N A X c2
LY GL GL SE GL G AL AL 22
0 0 0 X S U X Y R X N LU X A A 0 c2
Anexos 98
LY GL GL SE GL GL AL AL 22 c2
0 0 0 X S U X Y R X N U X A A 0
AS GL PR AL PR GL AL AS
0 0 0 P X N O X A O X N A X N c2
AR PR PR PR 69 AL PR PR L E
0 0 0 G O X O O X 0 A O X O U X c2
AR AS PR PR AL PR PR AL
0 0 0 X G P X O O X A O X O A c2
ILE ARG AL PR SE AL ILE PR

0 0 0 X A X O R X A X O c2
LY L TH ME PR PR AL VA
0 0 0 S EU X R T X O O X A L X c2
PR ILE TH AL PR SE 46 AL ILE
0 0 0 X O X R A X O R 0 X A
HIS LY PH TH PH PR AL AL
0 0 0 X S E X R E X O A X A
AR PH 93 PRO PH GL P H PR AL
0 0 0 G E X 0 E X N E X O A X
LY HIS PR PH GL P PR AL
0 0 0 X S X O E X N HE X O A
PH AR AL PR PR GL PH PR
0 0 0 E X G A X O O X N E X O 230
SE HIS AL AL PR L E PR L E
0 0 0 R X A A X O U X O U X
AS P AL AL PR PR PR PH
0 0 0 0 N HE 0 A A 0 O O 0 O E
SE AL PR PR
0 0 0 0 0 R 0 0 A 0 0 O 0 0 O
23
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Ana Paula Abdalla Goissis

ANLISE ESTRUTURAL DO COLGENO TIPO I.

Dissertao de Mestrado apresentada ao programa de Ps-

Orientador: Prof. Dr. Gilberto Goissis

Ficha catalogrfica preparada pela Seo de Tratamento

Goissis, Ana Paula Abdalla

Dissertao (Mestrado-Programa de Ps-Graduao

1. Colgeno. 2. colgeno estrutura. 3. Correlao

apoio em todas as minhas conquistas.

A todos os meus avs, em especial aos paternos, v Joo e v Ottilia que me

vida, precisamos de muita luta para conquistar vitrias.

que Ele nunca me deixou s, durante toda essa minha jornada.

acreditaram em mim durante toda essa minha trajetria.

A todos meus professores da ps-graduao, pela dedicao ao ensino, incentivo e

A secretaria do curso de ps-graduao da bioengenharia e especialmente, a Janete pela

ateno que sempre me dispensaram.

Figura 1. Ilustrao do tecido conjuntivo contendo a Matriz Extracelular e clulas, da

qual o colgeno do tipo I um dos integrantes mais importantes. O fundo

cinza representa o colgeno da matriz extracelular......................................2

Figura 2. Representao esquemtica da biossntese do colgeno por fibroblastos e sua

posterior organizao na estrutura em forma de fibras.................................3

Figura 3. Micrografia de pericrdio bovino obtido por Microscopia Eletrnica de

Transmisso mostrando o padro alternado de bandas mais claras e mais

escuras que no conjunto denominado de perodo D..................................4

Figura 4. Representao esquemtica da Matriz Extracelular e seus componentes

Figura 5. Esquema representativo das caractersticas estruturais da Laminina e seus

domnios funcionais de interao com ligantes............................................7

Figura 6. Esquema representativo das caractersticas estruturais da Fibronectina e seus

domnios funcionais de interao com ligantes...........................................8

Figura 7. Representao esquemtica de uma Glicosaminoglicana: a cido

Figura 8. Esquema representativo das caractersticas estruturais da tripla hlice e sua

formao a partir das cadeias alfa...............................................................13

Figura 9. Esquema ilustrativo para a reorganizao fibrilar do colgeno do tipo I nos

tecidos aps sua liberao para o meio extracelular...................................16

Figura 10. Representao esquemtica da interao do Fosfotungstato de Amnio com

grupos carregados positivamente na fibrila de colgeno............................17

Figura 11. Micrografia de Microscopia Eletrnica de Transmisso de fibras de

colgeno do tipo I obtida aps impregnao negativa................................18

Figura 12. a - Micrografia de Microscopia Eletrnica de Transmisso de fibras de

colgeno do tipo I obtida aps impregnao positiva. Overlap: bandas c1,

correspondente distncia de um perodo D..............................................19

Figura 13. Esquema representativo da distribuio dos aminocidos no perodo D de

molculas de Tropocolgeno dispostas alternadamente de de seu

comprimento. Representao apenas das bandas b1, a4, a3 e a2. ............20

Figura 14. Modelo pentafibrilar de Smith para a organizao fibrilar do colgeno

baseado no deslocamento da molcula de Tropocolgeno de de seu

pentafibrilar proposto por Smith: regio limite Gap:Overlap...................21

Figura 16. Esquema da transduo de sinais provenientes da Matriz Extracelular para

Figura17. Representao esquemtica da estrutura das Integrinas...............................27

associados reabsoro simultnea por osteoclastos.................................29

Figura 19. Esquema da remodelagem do osso induzida por estmulos mecnicos......30

Figura 20. Esquema representativo das alteraes da atividade celular do fibroblasto

em funo de tenses aplicadas sobre a Matriz Extracelular. Forma

relaxada (a) e forma sob tenso (b)............................................................31

Figura 22. Modelo para mineralizao in vitro de matrizes de colgeno polianinico

com 46 12 cargas adicionais negativas, preparadas por hidrlises de

cadeias laterais de resduos de Asparagina e Glutamina presentes na

Figura 23. Representao esquemtica para a formao do trombo plaquetrio aps

trauma da parede vascular...........................................................................38

Figura 24. a - Representao esquemtica das relaes do colgeno do tipo I com

funes teciduais que incluem a adeso celular, molculas de ancoragem,

propriedades estruturais e Ageing de acordo com Di Lullo11. As posies

relativas se referem molcula de Tropocolgeno com cerca de 1000