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Las tcnicas utilizadas por la ingeniera gentica son varias, y cada una
atiende un aspecto de la tarea de preparacin y solucin de los problemas
especficos de esta tecnologa, sin embargo muchas de ellas ha tenido xito
en otros campos tecno cientficos.
LA GEL-ELECTROFORESIS
Esta tcnica permite tratar con bajas concentraciones de ADN, de hasta 100
nanogramos3 y su objetivo es mediante un mtodo bioqumico, basado en
reacciones enzimticas poder analizar de forma rpida la variabilidad
gentica que se puede encontrar en una poblacin determinada. La prctica
de la electroforesis de enzimas en gel aplica la afirmacin terica de que el
producto de un gen, ser una protena que tendr actividad enzimtica.
ADN RECOMBINANTE
A) tenerlos aislados,
De una manera muy simple podemos decir que "cortamos" un gen humano
y se lo "pegamos" al ADN de una bacteria; si por ejemplo es el gen que
regula la fabricacin de insulina, lo que haramos al ponrselo a una
bacteria es "obligar" a sta a que fabrique la insulina.
TCNICA DE LA PCR
VECTORES
Secuenciacin de ADN
Terapias gnicas
Cmo hacer que el gen deseado llegue hasta el ncleo de las clulas de un
organismo vivo y se exprese en el momento y lugar precisos? sta es la
pregunta clave de la TG, y toda la futura perfeccin que pueda alcanzar
depende casi por completo de la resolucin de este problema. La TTG debe:
1.- Suministrar una transferencia gnica eficiente y precisa.
2.- Garantizar una expresin gnica persistente y bien regulada.
3.- Procurar una adecuada localizacin subcelular y un procesamiento
adecuado del producto gnico.
Como hemos dicho, un gen es un fragmento de ADN. Los genes normales
que se utilizan para reemplazar los genes defectuosos se pueden obtener a
partir de bibliotecas de genes en las cuales se encuentran almacenados,
como ya hemos dicho. Estos genes pueden ser llevados a la clula por
medio de los llamados vehculos o "vectores", denominados as por su
similitud con los agentes biolgicos que transmiten enfermedades. El
trmino vector anteriormente se utilizaba slo para designar a los plsmidos
o a los virus modificados que se utilizaban como vehculos que
transportaban el gen deseado a una clula. El mismo ha pasado a ser un
trmino genrico que involucra los diversos medios, ya sean biolgicos,
qumicos o fsicos, por medio de los cuales se puede hacer llegar el gen a la
clula, y as se emplea en diversos textos y publicaciones aunque algunos
prefieren reservar el trmino vector para los vehculos biolgicos
propiamente dichos. Es por eso que hablamos de mtodos de transferencia
o vectores virales y no virales, los cuales pueden cumplir su cometido tanto
en clulas extradas del paciente que se va a tratar, modificadas in vitro y
luego reimplantadas (tcnicas ex vivo), o directamente en el paciente
(tcnicas in vivo).
Los vectores virales se basan en el principio de que los virus son fragmentos
de ADN o ARN encapsulados que ingresan a las clulas y dirigen la
maquinaria celular para sus propsitos de reproduccin. Estos virus estn
formados por varios genes y pueden ser modificados por ingeniera
gentica, extrayndoseles aquellos que les confieren sus caractersticas
dainas e intercambindose por el o los genes deseados, sin que pierdan la
capacidad de encapsularse, pero s la de autor reproducirse en el individuo.
Se cultivan y se purifican en medios celulares especiales hasta que se
verifica su inocuidad10. En el fondo, los vectores virales son virus
modificados con los cuales literalmente se infecta al individuo. Estos virus
irn a una gran cantidad de clulas del organismo, depositando su material
gentico en el ncleo, el cual posteriormente se expresar como protenas.
Los principales vectores virales son los retrovirus y los adenovirus. Fueron
los primeros en ser utilizados porque se conoca bastante bien su
constitucin y su comportamiento. Sin embargo, cada tipo de virus podra
constituirse, con las modificaciones pertinentes, en un vector viral, y hay
muchos otros que estn siendo utilizados en los protocolos de
experimentacin.
Los mtodos de transferencia no virales fueron desarrollados como
alternativa debido a ciertos inconvenientes que presentan los vectores
virales (ver adelante). Entre los principales encontramos los liposomas y el
DNA desnudo, entre otros. Los liposomas son microesferas compuestas por
una membrana lipdica que rodea un medio acuoso interno. Hay dos tipos:
los liposomas catinicos, que estn cargados positivamente y que
interactan con el ADN (de carga negativa) para formar un complejo
estable. Este complejo puede entrar a las clulas luego de su administracin
endovenosa. Entre los ms usados est la lipofectina. Por otro lado, los
liposomas con carga negativa no forman complejos con el ADN, sino que lo
atrapan, formando una cpsula alrededor. Entre sus ventajas est que
pueden llevar grandes fragmentos de ADN, potencialmente tan largos como
el tamao de un cromosoma, a diferencia de los vectores virales, que slo
pueden llevar un ADN de longitud ms bien pequea.
El ADN desnudo consiste en inyectar directamente plsmidos de ADN, es
decir, constructos de ADN confeccionados por ingeniera gentica, los cuales
se ha visto presentan cierto grado de expresin en los diversos tejidos luego
de su administracin.
Limitaciones ticas de la TG
stas estn relacionadas en gran parte con la posibilidad del desarrollo de la
terapia de clulas germinales, la cual ha originado grandes controversias, ya
que al transmitirse los cambios efectuados en ellas a las siguientes
generaciones se afecta el patrimonio gentico de la especie humana, y un
error de juicio y/o tecnolgico pudiera tener muy malas e imprevisibles
consecuencias. Por este motivo, este tipo de terapia ha sido totalmente
proscrita por diferentes organismos internacionales (OMS, UNESCO y
Consejo de Europa, entre otros).
Como ante toda novedad, la terapia gnica tiene partidarios entusiastas
que, tal vez de una manera poco realista, ven en ella poco menos que el
control de las enfermedades, y, por otro lado, grandes detractores. En todo
caso, si se llegan a superar todos las dificultades tcnicas, la TG puede
redefinir la prctica de la medicina el prximo siglo, considerando sobre
todo que desde hace slo unos 8 aos es que se tienen los primeros
protocolos. Aunque hasta la fecha no se haya curado por completo a ningn
paciente con este tipo de terapia, las perspectivas son atrayentes y vale la
pena seguir explorndola como posibilidad, pero dentro de lmites ticos.
Concebida en un principio para tratar enfermedades metablicas raras, en
la actualidad se espera que la terapia gnica pueda incidir en la cura de
enfermedades como el cncer, la enfermedad coronaria y otras que hemos
mencionado. No se puede dudar que es un nuevo y largo camino a recorrer,
que seguramente traer muchas satisfacciones a la prctica de la medicina,
probablemente en un futuro no muy lejano.
OTROS
Aplicaciones:
a) Plsmidos
b) Virus bacterifagos
c) Csmidos
d) Virus animales para la donacin en eucariotas, y levaduras
e) Plsmido Ti de la bacteria Agrobacterium tumefaciens
a) Plsmido:
Es un fragmento circular de ADN bicatenario independiente del
cromosoma bacteriano con capacidad de
replicacin autnoma utilizando los enzimas bacterianos. Si quedan
libres en el medio extracelular, pueden penetrar en el interior de
otras bacterias mediante el proceso llamado transformacin (este
proceso se puede facilitar aadiendo cloruro de calcio que
permeabiliza al ADN las membranas de las bacterias)
Son de pequeo tamao (3kb) Llevan marcadores que permiten la
seleccin de los transformantes. Los ms comunes son genes que
confieren resistencia a antibiticos como: ampicilina, tetraciclina,
cloranfenicol y neomicina.
Ponemos como ejemplo un plsmido que contiene un sitio para el
enzima de restriccin llamado BamH1, que se localiza dentro del gen
para la resistencia a la tetraciclina y otro lugar para la enzima de
restriccin Pstl que est dentro del gen de resistencia a la ampicilina.
Si se inserta un fragmento de ADN forneo en uno de estos sitios, la
resistencia para el antibitico se pierde, fenmeno conocido como
inactivacin por insercin. Esta inactivacin por insercin se usa para
detectar la presencia del ADN donado dentro del plsmido.
Si el plsmido es digerido por BamH1 y se liga a un ADN forneo
digerido por el mismo enzima de restriccin y se introduce en
bacterias, aquellas bacterias que siendo resistentes a la ampicilina
son sensibles a la tetraciclina, son las que contienen el plsmido con
el ADN donado
El paso del plsmido al interior de una bacteria se llama
transformacin.
b)
Transgnesis
La
CLONACIN DE ANIMALES
TERAPIA GNICA.
CLONACIN
- Concepto
Ingeniera Gentica:
Aislar y multiplicar en un tubo de ensayo un determinado gen.
Obtener uno o varios individuos a partir de una clula somtica
o de un ncleo de otro individuo. Los individuos clonados son
idnticos o casi idnticos al original.
- Tipos de clonacin
Paraclonacin
Transferencia de ncleos procedentes de clulas fetales en
cultivo a vulos no fecundados enucleados y a veces, a
zigotos enucleados. El "progenitor" de los clones es el
embrin o feto.
Clonacin verdadera
Transferencia de ncleos de clulas de individuos ya nacidos
a vulos o zigotos enucleados.
Se originan individuos casi idnticos entre s (salvo
mutaciones somticas) y muy parecidos al donante (del que
se diferencian en mutaciones somticas y en el genoma
mitocondrial, que procede del vulo receptor).
Gemelacin artificial
Este tipo de clonacin consiste en tomar un embrin de
hasta 8 clulas y generar embriones idnticos
preimplantatorios (se podran generar hasta 8 embriones
idnticos, uno a partir de cada blastmera). Las blastmeras
biopsiadas del embrin original se introducen
individualmente o de dos en dos en una zona pelcida vaca
(puede proceder de otro animal, pues despus el embrin
sale de ella), o en una cubierta artificial (ZPA), y de cada uno
se generan embriones idnticos al original (clones).
Clonacin teraputica
Crear un embrin clonado para producir clulas madre
embrionarias con el mismo ADN que la clula donante.
La oveja Dolly
La oveja Dolly (5 de julio de 1996-14 de febrero de 2003)
fue el primer mamfero clonado a partir de una clula
adulta. Sus creadores fueron los cientficos del Instituto
Roslin de Edimburgo (Escocia), Ian Wilmut, Keith
Campbell. Su nacimiento no fue anunciado hasta siete
meses despus, el 23 de febrero de 1997.
Nacimiento
Dolly fue en realidad una oveja resultado de una combinacin nuclear
desde una clula donante diferenciada a un vulo no fecundado y
anucleado (sin ncleo). La clula de la que vena Dolly era una ya
diferenciada o especializada, procedente de un tejido concreto,
la glndula mamaria, de un animal adulto (una oveja Fin Dorset de
seis aos), lo cual supona una novedad. Hasta ese momento se crea
que slo se podan obtener clones de una clula embrionaria, es
decir, no especializada. Cinco meses despus naca Dolly, que fue el
nico cordero resultante de 277 fusiones de vulos anucleados con
ncleos de clulas mamarias.
Vida
Dolly vivi siempre en el Instituto Roslin. All fue cruzada con un
macho Welsh Mountain para producir seis cras en total. De su primer
parto nace Bonnie, en abril de 1998. Al ao siguiente, Dolly produce
mellizos: Sally y Rosie, y en el siguiente parto trillizos: Lucy, Darcy y
Cotton. En el otoo de 2001, a los cinco aos, Dolly
desarrolla artritis comenzando a caminar dolorosamente, siendo
tratada exitosamente con pastillas antiinflamatorias.
Fallecimiento
El 14 de febrero de 2003, Dolly fue sacrificada debido a una
enfermedad progresiva pulmonar. Fue un animal de la raza Finn
Dorset, cuyos individuos tienen una expectativa de vida de cerca de
11 a 12 aos. Sin embargo, Dolly vivi solo seis aos y medio. La
necropsia mostr que tena una forma de cncer de pulmn
llamada Jaagsiekte, que es una enfermedad de ovejas causada por
el retrovirus JSRV. Los tcnicos de Roslin no han podido certificar que
haya conexin entre esa muerte prematura y el ser clon, pues otras
ovejas de la misma manada sufrieron y murieron de la misma
enfermedad. Tales enfermedades pulmonares son un particular
peligro en las estabulaciones internas, como fue la de Dolly por
razones de seguridad.
Sin embargo, algunos han especulado que era parapljica, debido a
sus pezuas torcidas. Haba un factor agravante al deceso de Dolly y
era que tena una edad gentica de seis aos, la misma edad de la
oveja de la cual fue clonada. Una base para esta idea fue el hallazgo
de sus telmeros cortos, que son generalmente el resultado del
proceso de envejecimiento. Sin embargo, el Roslin Institute ha
establecido que los controles intensivos de su salud no revelaron
anormalidad alguna en Dolly, que pudieran hacer pensar en
envejecimiento prematuro. Los restos disecados de la oveja Dolly
estn expuestos en el museo real de Escocia.
- Beneficios
- Riesgos
- tica y moral
BIBLIOGRAFIA
http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-
98871998000700013
http://www.tirsoferrol.org/ciencias/pdf/a22_ingenieria%20genetica.pdf