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BD, el logotipo de BD y las dems marcas comerciales son propiedad de Becton, Dickinson and Company
2010 BD
Historial
Captulo 1: Prefacio 1
Acerca de esta gua . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
Convenciones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
Asistencia tcnica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
Captulo 2: Introduccin 7
Descripcin general de la enumeracin de clulas madre . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
Carga de tubos en el citmetro . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10
Descarga de tubos del citmetro . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
Flujo de trabajo diario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12
Captulo 5: Adquisicin 35
Adquisicin de controles de proceso . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
Marcado y adquisicin de muestras . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 38
Nueva rea de seleccin manual en un grfico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41
z Convenciones (pgina 3)
Antes de empezar En esta gua, se asume que ha ledo las Instrucciones de uso
de BD FACSCanto II y el Manual de referencia del software
clnico BD FACSCanto y que se ha familiarizado con la
calibracin del citmetro.
Captulo 1: Prefacio 3
Convenciones
Acerca de este tema Las siguientes tablas indican las convenciones utilizadas en
esta gua.
Smbolo Significado
Alerta de precaucin
Identifica una prctica peligrosa o insegura que
podra provocar prdidas de datos, daos materiales,
lesiones leves o graves o incluso la muerte
Peligro biolgico
4 Gua de utilizacin del Kit BD Stem Cell Enumeration para citmetros de flujo BD FACSCanto II
Convenciones tipogrficas
y de teclado Convencin Uso
Notas Una nota describe funciones o instrucciones
importantes.
Asistencia tcnica
Acerca de este tema Este tema ofrece informacin sobre cmo obtener asistencia
tcnica.
Referencias
N Cita
1 Shpall EJ, Jones RB, Bearman SI, et al. Transplantation of enriched CD34-positive
autologous marrow into breast cancer patients following high-dose chemotherapy:
influence of CD34-positive peripheral-blood progenitors and growth factors on
engraftment. J Clin Oncol. 1994;12:28-36.
3 Zander AR, Lyding J, Bielack S. Transplantation with blood stem cells. Blood Cells.
1991;17:301-309.
4 Greaves MF, Titley I, Colman SM, et al. CD34 cluster workshop report. In:
Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W, et al, eds. Leucocyte Typing V: White Cell
Differentiation Antigens. New York, NY: Oxford University Press; 1995;1:840-846.
Al procesar otros tipos de Si va a adquirir otros tipos de paneles a lo largo del da,
paneles optimice los parmetros despus de optimizar la aplicacin
BD Stem Cell Enumeration. Consulte Calibracin de la
aplicacin (pgina 32). No vuelva a procesar la Standard
Setup (Calibracin estndar) antes de adquirir las muestras
de clulas madre. Si lo hace, aparece un mensaje de error al
hacer clic en Run (Procesar), en el que se indica que los
parmetros del citmetro del panel BD Stem Cell + 7AAD no
se han optimizado. La lista de trabajo se detendr y no podr
proseguir hasta que vuelva a procesar la Standard Setup
(Calibracin estndar) seguida de la Application Setup
(Calibracin de la aplicacin).
N Tarea Consulte
1 Encienda el citmetro. Arranque del sistema (pgina 28)
N Tarea Consulte
4 Prepare las microesferas de Prospecto del kit de microesferas de
calibracin de 7 colores BD FACS. calibracin de 7 colores BD FACS
Nota: Compruebe que los lseres del
citmetro se han calentado durante
30 minutos antes de preparar las
microesferas de calibracin.
N Tarea Consulte
10 Establezca una nueva Worklist (Lista Adquisicin de controles de proceso
de trabajo) para los controles, (pgina 36)
procese los controles de BD Stem
Cell y observe los grficos.
12 Marque las muestras de los pacientes. Prospecto del kit BD Stem Cell
Enumeration
Precaucin: No marque las
muestras hasta que los
controles se hayan procesado
correctamente y los resultados se
encuentren dentro del rango
establecido para los lotes de control
de procesos que est utilizando.
14 Revise los Lab Reports (Informes de Revisin del Lab Report (Informe de
laboratorio). laboratorio) (pgina 93)
Captulo 2: Introduccin 15
N Tarea Consulte
15 Observe todos los grficos y vuelva a Nueva rea de seleccin manual en
definir el rea de seleccin si fuera un grfico (pgina 41)
necesario.
Tarea Descripcin
Opciones de configuracin
Acerca de este tema Este tema describe cmo establecer las opciones del software
que agilizan la adquisicin y el anlisis. Con las opciones
puede determinar si desea o no:
Icono de la
opcin Parmetros
Icono de la
opcin Parmetros
Manualmente:
Pestaas
Pestaas
Captulo 3: Configuracin del software 25
Calibracin de la aplicacin
Acerca de este tema Este tema describe cmo calibrar la aplicacin BD Stem Cell
Enumeration. Los valores de compensacin para el ensayo se
calculan con una muestra de optimizacin.
Al procesar otros tipos de Si va a adquirir otros tipos de paneles a lo largo del da,
paneles optimice los parmetros despus de optimizar la aplicacin
BD Stem Cell Enumeration (consulte paso 10 en la pgina 34).
No vuelva a procesar la Standard Setup (Calibracin estndar)
antes de adquirir las muestras de clulas madre. Si lo hace,
aparece un mensaje de error al hacer clic en Run (Procesar),
en el que se indica que los parmetros del citmetro del panel
BD Stem Cell + 7AAD no se han optimizado. La lista de
trabajo se detendr y no podr proseguir hasta que vuelva a
procesar la Standard Setup (Calibracin estndar) seguida de
la Application Setup (Calibracin de la aplicacin).
Precaucin:
Precaucin: Debido a los requisitos de temperatura de este
ensayo, el cargador no puede utilizarse para adquirir muestras.
Precaucin:
Precaucin: No marque las muestras hasta que los controles
se hayan procesado correctamente.
11. Revise todos los grficos para verificar que todas las
reas de seleccin incluyen las poblaciones adecuadas.
Consulte Nueva rea de seleccin manual en un grfico
(pgina 41) si es necesario volver a definir las reas de
seleccin.
Cmo utilizar esta Utilice esta informacin para revisar los grficos de datos,
informacin comprobar la ubicacin y los lmites de cada rea de seleccin
y ajustar dichas reas cuanto sea necesario.
Trminos clave Los trminos clave en la tabla de pautas sobre reas de seleccin
corresponden a la siguiente informacin:
Ejemplo de Lab Report Los grficos se muestra en el Lab Report (Informe de laboratorio)
(Informe de laboratorio) en el siguiente orden.
Specimen
ALP16-BD1
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1 2 3 4 5
6 7 8
N de N de
grfico rea(s) de seleccin grfico rea(s) de seleccin
Cmo utilizar esta Utilice esta informacin para revisar los grficos de datos,
informacin comprobar la ubicacin y los lmites de cada rea de seleccin
y ajustar dichas reas cuanto sea necesario.
Paso 1, grfico 6
Debris (Detritos)
48 Gua de utilizacin del Kit BD Stem Cell Enumeration para citmetros de flujo BD FACSCanto II
Paso 2, grfico 8
Viable
Paso 3, grfico 7
Viable
Captulo 6: Directrices sobre reas de seleccin y ejemplos 49
Paso 4, grfico 1
CD45Pos
Lymphs
(Linfocitos)
Paso 5, grfico 2
CD34Pos
50 Gua de utilizacin del Kit BD Stem Cell Enumeration para citmetros de flujo BD FACSCanto II
Paso 6, grfico 3
CD45Pos
CD45Dim
Paso 7, grfico 4
Viable CD34
Captulo 6: Directrices sobre reas de seleccin y ejemplos 51
Paso 8, grfico 5
Micro-
esferas
52 Gua de utilizacin del Kit BD Stem Cell Enumeration para citmetros de flujo BD FACSCanto II
Cmo utilizar esta Utilice esta informacin para revisar los grficos de datos,
informacin comprobar la ubicacin y los lmites de cada rea de seleccin
y ajustar dichas reas cuanto sea necesario. Consulte Lab
Report (Informe de laboratorio) de la definicin automtica
del rea de seleccin (pgina 60) y Lab Report (Informe de
laboratorio) de la definicin manual del rea de seleccin
(pgina 61) para ver los Lab Reports (Informes de laboratorio)
de esta muestra.
Captulo 6: Directrices sobre reas de seleccin y ejemplos 53
Paso 1, grfico 6
Paso 2, grfico 8
Definicin automtica de rea de seleccin
Viable
Paso 3, grfico 7
Definicin automtica de rea de seleccin
Viable
Paso 4, grfico 1
Definicin automtica de rea de seleccin Definicin manual de rea de seleccin
CD45Pos CD45Pos
Lymphs Lymphs
(Linfocitos) (Linfocitos)
Paso 5, grfico 2
Definicin automtica de rea de seleccin
CD34Pos
Paso 6, grfico 3
CD45Pos CD45Pos
CD45Dim CD45Dim
Paso 7, grfico 4
El rea de seleccin Viable CD34 depende de la Ajuste el rea de seleccin Viable CD34 para
definicin correcta del rea de seleccin de los que incluya el extremo izquierdo y el tercio
linfocitos viables en el grfico 1. Ajuste siempre el superior de los linfocitos viables. Las clulas
rea de seleccin Viable CD34 si el rea de seleccin con un FSC bajo y un SSC ms alto no son
de linfocitos se ajust anteriormente. viables, tal y como se define por dispersin.
Observe que los dos grficos son muy diferentes. Los cambios realizados en las reas de seleccin anteriores
afectan al modo en el que aparecen las poblaciones en los grficos posteriores.
Captulo 6: Directrices sobre reas de seleccin y ejemplos 59
Paso 8, grfico 5
Definicin automtica de rea de seleccin
Micro-
esferas
Specimen
ALP004-BD1
Director: BD Panel: BD Stem Cell + 7AAD
Acquired: 7/1/2008 5:37:59 PM
Analyzed: 7/16/2008 2:47:53 PM
TruC Lot ID: 12007
Bead/Pellet: 52000
Status: OK
Operator: PAL
Reviewer:
Results: 16072008.csv
Dilution Factor: 11 Column #2: Column #3:
BD FACSCanto II V96322014 BD FACSCanto v.2.4.3155.23769
QC Messages
Inspect all dot plots.
Comments
Captulo 6: Directrices sobre reas de seleccin y ejemplos 61
QC Messages
Manual Gate is in effect.
Inspect all dot plots.
Comments
62 Gua de utilizacin del Kit BD Stem Cell Enumeration para citmetros de flujo BD FACSCanto II
Cmo utilizar esta Utilice esta informacin para revisar los grficos de datos,
informacin comprobar la ubicacin y los lmites de cada rea de
seleccin y ajustar dichas reas cuanto sea necesario.
Paso 1, grfico 6
Debris (Detritos)
Captulo 6: Directrices sobre reas de seleccin y ejemplos 63
Paso 2, grfico 8
Viable
Paso 3, grfico 7
Viable
64 Gua de utilizacin del Kit BD Stem Cell Enumeration para citmetros de flujo BD FACSCanto II
Paso 4, grfico 1
CD45Pos
Lymphs
(Linfocitos)
Paso 5, grfico 2
CD34Pos
Captulo 6: Directrices sobre reas de seleccin y ejemplos 65
Paso 6, grfico 3
CD45Dim
CD45Pos
Paso 7, grfico 4
Viable CD34
66 Gua de utilizacin del Kit BD Stem Cell Enumeration para citmetros de flujo BD FACSCanto II
Paso 8, grfico 5
Micro-
esferas
Captulo 6: Directrices sobre reas de seleccin y ejemplos 67
Cmo utilizar esta Utilice esta informacin para revisar los grficos de datos,
informacin comprobar la ubicacin y los lmites de cada rea de
seleccin y ajustar dichas reas cuanto sea necesario.
68 Gua de utilizacin del Kit BD Stem Cell Enumeration para citmetros de flujo BD FACSCanto II
Paso 1, grfico 6
Paso 2, grfico 8
Viable Viable
El rea de seleccin Viable es demasiado ancha. Ajuste manualmente el rea de seleccin Viable
para que slo incluya los linfocitos y los
monocitos.
70 Gua de utilizacin del Kit BD Stem Cell Enumeration para citmetros de flujo BD FACSCanto II
Paso 3, grfico 7
Definicin automtica de rea de seleccin
Viable
Paso 4, grfico 1
Definicin automtica de rea de seleccin
CD45Pos
Lymphs
(Linfocitos)
Paso 5, grfico 2
Definicin automtica de rea de seleccin
CD34Pos
Paso 6, grfico 3
Definicin automtica de rea de seleccin Definicin manual de rea de seleccin
CD45Pos CD45Pos
CD45Dim CD45Dim
El extremo derecho del rea de seleccin CD45Dim Ajuste manualmente el rea de seleccin
no incluye todas las clulas en el grupo. CD45Dim, de modo que incluya el grupo de
clulas, pero no los linfocitos ms brillantes.
74 Gua de utilizacin del Kit BD Stem Cell Enumeration para citmetros de flujo BD FACSCanto II
Paso 7, grfico 4
Definicin automtica de rea de seleccin
Viable CD34
Captulo 6: Directrices sobre reas de seleccin y ejemplos 75
Paso 8, grfico 5
Definicin automtica de rea de seleccin
Micro-
esferas
Cmo utilizar esta Utilice esta informacin para revisar los grficos de datos,
informacin comprobar la ubicacin y los lmites de cada rea de seleccin
y ajustar dichas reas cuanto sea necesario.
Paso 1, grfico 6
Debris (Detritos)
Captulo 6: Directrices sobre reas de seleccin y ejemplos 77
Paso 2, grfico 8
Viable
Paso 3, grfico 7
Viable
78 Gua de utilizacin del Kit BD Stem Cell Enumeration para citmetros de flujo BD FACSCanto II
Paso 4, grfico 1
CD45Pos
Lymphs
(Linfocitos)
Paso 5, grfico 2
CD34Pos
Captulo 6: Directrices sobre reas de seleccin y ejemplos 79
Paso 6, grfico 3
CD45Pos
CD45Dim
Paso 7, grfico 4
Viable CD34
80 Gua de utilizacin del Kit BD Stem Cell Enumeration para citmetros de flujo BD FACSCanto II
Paso 8, grfico 5
Micro-
esferas
Captulo 6: Directrices sobre reas de seleccin y ejemplos 81
Cmo utilizar esta Utilice esta informacin para revisar los grficos de datos,
informacin comprobar la ubicacin y los lmites de cada rea de
seleccin y ajustar dichas reas cuanto sea necesario.
Paso 1, grfico 6
Debris (Detritos)
82 Gua de utilizacin del Kit BD Stem Cell Enumeration para citmetros de flujo BD FACSCanto II
Paso 2, grfico 8
Viable
Paso 3, grfico 7
Viable
Captulo 6: Directrices sobre reas de seleccin y ejemplos 83
Paso 4, grfico 1
CD45Pos
Lymphs
(Linfocitos)
Paso 5, grfico 2
CD34Pos
84 Gua de utilizacin del Kit BD Stem Cell Enumeration para citmetros de flujo BD FACSCanto II
Paso 6, grfico 3
CD45Pos CD45Dim
Paso 7, grfico 4
Viable CD34
Captulo 6: Directrices sobre reas de seleccin y ejemplos 85
Paso 8, grfico 5
Micro-
esferas
Necesita obtener informacin de forma ms
rpida?
Encontrar informacin sobre este producto tambin en el
sistema de Ayuda del software.
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Setup Beads
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Detectors
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Comments
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Captulo 7: Revisin de informes 89
N Nombre Funcin
1 Encabezado del Contiene el nombre del citmetro y el nmero de serie, la versin
informe de software, la fecha y la hora de la calibracin, la institucin, el
director, el operador y el resultado general (PASS (Apta) o FAIL
(No apta)).
N Nombre Funcin
4 Compensation Muestra los valores de superposicin de espectros calculados
(Compensacin) durante la calibracin a los voltajes actuales. Los valores 100%
sern aptos. Los valores >100% no sern aptos.
Informacin sobre la Para obtener ayuda con los valores que se encuentran fuera
resolucin de problemas del rango en el Cytometer Setup Report (Informe de
calibracin del citmetro), consulte el Manual de referencia
del software BD FACSCanto o bien el prospecto de las
microesferas de calibracin de 7 colores BD FACS.
2 Cytometer Setup
Cytometer Setup Report: 7/16/2007 04:37:00 AM, Overall Result: PASS
3 Bead Product: BD FACS 7-Color Setup Beads, Catalog Number: 335775
Lot Information: Lot ID 76697, Exp.: 2007-09-30
a b
Detectors
Detector Laser Voltage
FSC Blue 317
SSC Blue 407
4
FITC Blue 357
PE Blue 396
7AAD Blue 438
Trucount beads Red 516
Compensation
Fluorophores (%spectral overlap)
Detector FITC PE 7AAD Trucount beads
5 FITC 100.00 0.48 0.00 0.01
PE 24.67 100.00 5.50 c 0.01
7AAD 2.40 10.81 100.00 0.51
Trucount beads 0.00 0.09 10.09 100.00
Comments
N Nombre Funcin
1 Encabezado del Contiene el nombre del citmetro y el nmero de serie, la versin de
informe software, la fecha y la hora del procesamiento, la institucin, el
director y el operador.
Specimen
ALP16-BD1
%&,&BD !"
#$%&' 718
1
"!
()' 768
*&$ +,-
!'
!$
.&!,& PAL
/ %2&
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QC Messages
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8 Comments
94 Gua de utilizacin del Kit BD Stem Cell Enumeration para citmetros de flujo BD FACSCanto II
N Nombre Funcin
1 Encabezado del Contiene informacin sobre el laboratorio, los reactivos, en ensayo
informe y la muestra, as como las fechas y horas de la adquisicin y el anlisis.
5 Nombre del Indica el nombre del archivo de muestra y el nmero de lote del kit
archivo de BD Stem Cell Enumeration.
muestra y nmero
de lote del kit
Cmo obtener asistencia Utilice la siguiente informacin para ponerse en contacto con
el servicio de asistencia.
z Para obtener asistencia en EE.UU., llame al (877) 232-8995.
z Para obtener asistencia en Canad, llame al (888) 259-0187.
z Para obtener asistencia fuera de EE.UU. y Canad,
pngase en contacto con su representante o distribuidor
local de BD.
z Consulte nuestro sitio Web (bdbiosciences.com), para
obtener informacin de contacto actualizada.
Fallo de solapamiento
Mensaje de control de
calidad Posible causa Solucin recomendada
Spillover failure. (Fallo z No ha aadido el Vuelva a realizar el marcado y procese
de solapamiento.) 7-AAD al tubo. los tubos de calibracin y optimizacin.
z No utilizado Compruebe el sistema de fluidos del
controles BD Stem citmetro.
Cell para realizar la
calibracin.
z No ha aadido el
reactivo CD45/CD34
al tubo.
Captulo 8: Solucin de problemas 97
Mensaje de control de
calidad Posible causa Solucin recomendada
CD34 gate failure. Nmero insuficiente de Vuelva a definir el rea de seleccin
(Fallo en el rea de clulas CD34 en la manualmente.
seleccin CD34). muestra.a
Beads gate suspect. Ubicacin del rea de Vuelva a definir el rea de seleccin
(Duda en el rea de seleccin poco manualmente.
seleccin de habitual.
microesferas).
z No se ha utilizado Repita el marcado con un tubo
un tubo BD Trucount y adquiera la muestra recin
BD Trucount. teida.
z El tubo no tena
bola.
CD34Pos gate suspect. Ubicacin del rea de Vuelva a definir el rea de seleccin
(Duda en el rea de seleccin poco manualmente.
seleccin CD34Pos). habitual.
Captulo 8: Solucin de problemas 101
Mensaje de control de
calidad Posible causa Solucin recomendada
CD45 gate suspect. Ubicacin del rea de Vuelva a definir el rea de seleccin
(Duda en el rea de seleccin poco habitual. manualmente.
seleccin CD45).
CD45Dim gate suspect. Ubicacin del rea de Vuelva a definir el rea de seleccin
(Duda en el rea de seleccin poco habitual. manualmente.
seleccin CD45Dim).
Lymphs gate suspect. Ubicacin del rea de 1. Vuelva a definir el rea de seleccin
(Duda en el rea de seleccin poco manualmente.
seleccin de linfocitos). habitual. (En este
ejemplo, el rea de
seleccin incluye
monocitos).
Less than user-requesteda Recuento de CD34 3. Revise los grficos y los resultados de
Viable CD34 events bajo. La adquisicin los informes.
collected. (Se han super el tiempo de
4. Vuelva a marcar la muestra, aumente
recopilado menos espera tras 15 minutos.
el tiempo de detencin, adquiera la
eventos CD34 viables
muestra recin teida.
de los solicitados por el
usuario).
Insufficient Viable Nmero insuficiente de Revise los grficos y los resultados de los
CD45 events collected. clulas viables en la informes.
(Eventos CD45 viables muestra. La adquisicin
recopilados super el tiempo de
insuficientes). espera tras 15 minutos.
Mensaje de control de
calidad Posible causa Solucin recomendada
Less than user-requested Nmero insuficiente de Revise los grficos y los resultados de los
Viable CD45 events eventos CD45 viables informes.
collected. (Se han en la muestra. La
recopilado menos adquisicin super el
eventos CD45 viables tiempo de espera tras
de los solicitados por el 15 minutos.
usuario).
La muestra se ha Utilice un factor de dilucin menor.
diluido demasiado.
Advertencias generales
Mensaje de control de
calidad Posible causa Solucin recomendada
Cytometer settings Fallo de calibracin del 1. Vuelva a procesar la calibracin del
were generated from a citmetro citmetro y compruebe que se
failed setup result. completa con xito.
(Los parmetros del
2. Vuelva a procesar las muestras.
citmetro se generaron
a partir de un resultado
de calibracin
incorrecta).
Mensaje de control de
calidad Posible causa Solucin recomendada
One or more results are La concentracin de Diluya la muestra y vuelva a marcar y a
outside the alarm leucocitos es adquirir la muestra recin teida.
range. (Uno o ms >45.000 clulas/L.
resultados se
encuentran fuera del
rango de alarma).
Stem cell controls are Fallo de calibracin del Vuelva a procesar la calibracin del
out of range. (Los citmetro. citmetro y compruebe que es correcta
controles de clulas (Pass) y, a continuacin, vuelva a marcar
madre se encuentran y a procesar los controles.
fuera del rango).
Error de pipeteado. Vuelva a marcar y a procesar los controles.
Manual gate is in effect Las reas de seleccin NA. Para volver a aplicar el algoritmo de
(Se est utilizando un se han vuelto a definir rea de seleccin, haga clic en Autogate
rea de seleccin manualmente. (rea de seleccin automtica).
manual).
Anticoagulante de heparina
Observacin Posible causa Solucin recomendada
Franja de Se ha recopilado una 1. En el grfico 1, desplace el lmite izquierdo
plaquetas. muestra en del rea de seleccin de CD45Pos a la
anticoagulante de derecha para excluir las plaquetas.
heparina.
CD45Pos CD45Pos
Linfocitos Linfocitos
CD34+ CD34+