Manual de Prácticas de Inmunohematología.

Facultad de Bioanlisis, Veracruz Manual de Procedimientos de laboratorio
PRACTICA No.1
Lavado de eritrocitos y preparacin de la suspensin
al 2-5%.
1. INTRODUCCIN.
1.1 El lavado de clulas es un procedimiento en el que se mezcla un

volumen de clulas rojas con volmenes de SSF, para permitir la
remocin de protenas no absorbidas a dicha clula, utilizando el mtodo
de centrifugacin.
1.2 La preparacin de la suspensin de clulas permite cuantificar

porcentualmente la concentracin adecuada para para la reaccin
antgeno-anticuerpo (Ag-Ac ).
2. PRINCIPIO Y METODOLOGA.
2.1 Remover protenas no absorbidas al glbulo rojo que puedan interferir en

la reaccin Ag -Ac.
2.2 Preparar porcentualmente la concentracin de la suspensin celular

adecuada para optimizar la reaccin Ag-Ac.
3. LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipos de laboratorio.
Centrfuga.
1
3.2 Materiales de laboratorio.
CANTIDAD DESCRIPCIN
Muestra de sangre en estudio
1 Pizeta con SSF
3 Tubos de ensaye de 13 X 100
1 Gradilla
2 Guantes quirrgicos
1 Papel parafinado
1 Lpiz graso
1 Pipeta Pasteur
1 Bulbo de goma
4. PROCEDIMIENTO.
4.1 Lavado de clulas
1. Utilizar guantes
2. Agregar una alcuota de SSF al tubo previamente identificado.
3. Agregar un volumen de glbulos rojos al tubo que contiene la alcuota de

SSF, mezclando suavemente.
4. Agregar volmenes de SSF a presin hasta las tres cuartas partes del tubo.
5. Colocar el tubo en la centrfuga calibrndolo con otro tubo que contenga

igual volumen de SSF.
6. Proceder al lavado de clulas centrifugando a 2000 RPM por 3 min.
7. Lavar los glbulos rojos las veces que sea necesario.
8. Decantar el sobrenadante de SSF, en cada lavado.
4.2 Preparacin de la suspensin celular del 2 al 5%
1. Colocar en un tubo de ensaye de 12 X 75, 29 gotas de SSF ms una gota

del paquete globular previamente lavado.
2
2. Mezclar suavemente con la pipeta Pasteur.

3. Etiquetar con nombre de la suspensin y fecha de elaboracin.
5. PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS
Se trabajar de manera individual.
5.1 Reporte de Resultados

Se emitir el reporte de resultados de la prctica realizada.
._______________________________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
6. CONFIABILIDAD ANALTICA
1. Realizar el lavado celular de acuerdo con los procedimientos indicados.

2. Llenar con SSF las tres cuartas partes del tubo.
3. Decantar completamente la SSF en cada lavado.
4. Resuspender el paquete celular con pequeas alcuotas de SSF despus
de cada lavado.
5. Evitar el contacto de la luz del tubo con los dedos.
6. Realizar peridicamente control de calidad a la centrfuga por personal
tcnico especializado.
7. Utilizar las revoluciones y tiempo indicados.
7. GARANTA DE CALIDAD.
Con la gua del maestro, se evaluar la calidad de la suspensin celular.
8. BIBLIOGRAFA.
T.Romero, D.Hernandez, A.Sojo,,A.Jimenez, C.Ospino, Z.DvilaM.Arias. Manual de

tcnicas y procedimientos en banco de sangre.2 Ed.Caracas, Venezuela,Editorial
Prado. 2003.
3
PRACTICA No.2
Preparacin de hemates
A, B y O.
1. INTRODUCCIN.
En el laboratorio de inmunohematologa se emplearn muestras de hemates

conocidos tomados de segmentos de unidades de sangre de extraccin reciente,
con tamizaje serolgico negativo para ser utilizados como reactivos celulares en la
determinacin de la fase inversa de los grupos sanguneos del sistema ABO.
La preparacin de reactivos celulares de hemates conocidos A, B y O se preparan
en el laboratorio de inmunohematologa porque permiten:
1. Obtener una suspensin de clulas reactivas al 2.5% para determinar fase

srica del sistema ABO.
2. Solucionar discrepancias en los grupos sanguneos del sistema ABO.
3. Realizar control de calidad en los reactivos hemoclasificadores del sistema
ABO.
4
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
Centrfuga
CANTIDAD DESCRIPCIN
Segmentos con unidades de sangre A, B y
O
1 Pizeta con SSF
1 Gradilla
1 Papel parafinado
1 Lpiz graso
4 Pipetas Pasteur
1 Bulbo de goma
Sueros hemoclasificadores Anti A, Anti B,
Anti AB.
4. PROCEDIMIENTO.
1. Utilizar guantes quirrgicos

2. Tomar varios segmentos de unidades de sangre A y B
3. Marcar tubos de 13 X 100 con las siglas A, B y O.
4. Colocar el contenido de los segmentos en los tubos.
5. Verificar grupo sanguneo ABO
6. Iniciar la fase de lavado de clulas, decantando totalmente la SSF en
cada lavado.
7. Etiquetar los tubos de 15 X 150 con las siglas A, B y O.
8. Colocar a cada tubo de 15 X 150 9.7ml de SSF mas.3 ml ( 5 gotas) de
clulas empaquetadas.
9. Tapar los tubos y mezclar la suspensin con movimientos suaves.
10 Verificar el grupo sanguneo a cada suspensin. Conservar los hemates
en refrigeracin a temperatura de 1 a 6C o hasta observar evidencia de
hemlisis.
5
Esquema de Concentracin de la Suspensin Celular.
Concentracin % Volumen de Volumen de Total

Clulas SSF ( ml ) (ml )
Empaquetadas
5 0.5 ml 10 gotas 9.5 10
3 0.3 ml 6 gotas 9.7 10
2 0.2 ml 4 gotas 9.8 10

._______________________________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
1. Seleccionar unidades de sangre con tamizaje serolgico negativo y Rho (D)

negativas.
2. Observar evidencia de hemlisis en los segmentos a separar.
3. Verificar grupos y subgrupos del sistema ABO y antgeno D del sistema Rh
4. Decantar totalmente la solucin en cada lavado.
5. Preparar la suspensin celular entre el 2 y 5 %.
6. Mantener los tubos en el refrigerador si no son utilizados.
7. En caso de utilizar hemates Rho (D) positivos, registrar la informacin en la
etiqueta de los tubos.
8. Mezclar con movimiento suave la suspensin al ser utilizada.
7.GARANTA DE CALIDAD.
6
8.BIBLIOGRAFA.
T.Romero, D.Hernndez, A.Sojo,,A.Jimenez, C.Ospino, Z.DvilaM.Arias. Manual de

Prado. 2003
PRACTICA No.3
Titulacin de anticuerpos naturales e inmunes
1 INTRODUCCIN.
La titulacin de anticuerpos naturales e inmunes es un procedimiento que en

ciertas condiciones de temperatura y medios de reaccin determina la
concentracin aproximada de un anticuerpo natural inmune en el suero en
estudio, utilizando el mtodo de la doble dilucin, y el resultado se expresa como el
valor recproco de la mayor dilucin en la que se observa aglutinacin
macroscpica.
El principio de esta tcnica es el de cuantificar la concentracin de un anticuerpo
presente en una muestra de suero con fines teraputicos, de investigacin y en la
elaboracin y control de calidad de los reactivos.
7
3LISTADE REQUERIMIENTOS.
Centrfuga
Bao de Mara a 37C
Termmetro para bao Mara
CANTIDAD DESCRIPCIN
Suero en estudio
Suspensin de hemates que contengan
el Ag correspondiente al Ac a titular
1 Pizeta con SSF
12 Tubos de ensaye de 12 X 75 mm
1 Gradilla
1 Papel parafinado
1 Lpiz graso
4 Pipetas Pasteur
1 Bulbo de goma
4.PROCEDIMIENTO.
Titulacin de anticuerpo naturales anti A y anti B.
Realizar ttulo de Ac naturales del sistema ABO, segn grupo sanguneo.

Si es grupo O titular anti A y anti B
Si es grupo A titular anti B
Si es grupo B titular anti A

2. Obtener el suero en estudio
8
3. Identificar dos hileras de tubos de 12 X 75 mm con la letra A y la doble

dilucin ejemplo: A , A , A 1/8, A 1/16, A 1/32, A 1/64, A 1/128, A 1/256, A 1/512, A 1/1024,
e igualmente para la serie B.
4. Agregar a cada hilera un tubo adicional con la sigla A11, B11, para continuar
diluyendo si es necesario.
5. Colocar con pipeta Pasteur cuatro gotas de SSF en cada tubo de las dos
hileras, excepto en los tubos nmero 11.
6. Agregar a los tubos de cada hilera cuatro gotas del suero en estudio con
pipeta Pasteur.
7. Mezclar y pipetear el contenido del tubo A y transferir cuatro gotas al tubo
A , y as sucesivamente hasta el tubo nmero 11.
8. Repetir el paso no 7 en la hilera B.
9. Agregar a la hilera A una gota de hemates A y a la hilera B una gota de
hemates B excepto en los tubos A11, B11.
10.Mezclar y centrifugar durante un minuto a 1000 rpm.
11. Leer aglutinacin y/o hemlisis en cada tubo, de la hilera A, comenzando
en el tubo A1/2 hasta el A 1/1024 sobre una fuente de luz, proceder de la
misma manera con la hilera B.
12. Anotar resultados en cruces, tubo en mano en formato correspondiente.
5 .PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS

._______________________________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
6.CONFIABILIDAD ANALTICA
1. Verificar la vigencia de los hemates y reactivos

2. Pipetear sin hacer espuma
9
3. Emplear mtodo de la doble dilucin

4. Realizar el ttulo dependiendo del grupo: Grupo O ttulos anti A y anti B, grupo A
ttulos anti B, grupo B, ttulos anti A.
5. Utilizar pipeta limpia para cada traslado
6. Agregar las gotas con la pipeta en una misma posicin. El ngulo fcil de
trabajar es el ngulo recto.
7. Utilizar suero fresco
8. Mezclar bien cada dilucin (4 veces )
9. Pasar slo 4 gotas de un tubo a otro
10. Evitar interrumpir procedimiento una vez comenzado
11. Registrar resultados como el valor recproco de la mayor dilucin en la que se
observa aglutinacin macroscpica.
Con la gua del maestro, se evaluar los ttulos de los anticuerpos naturales.
8.BIBLIOGRAFA.

Prado. 2003.
PRACTICA No.4
Determinacin del sistema ABO
Fase globular
1. INTRODUCCIN.
Es el sistema que se utiliza de rutina en la tipificacin del grupo sanguneo en el
banco de sangre. En este se determina el antgeno ABH presente en los glbulos
rojos mediante una reaccin de aglutinacin.
10
Se determina la presencia o ausencia de los antgenos del sistema ABO mediante
aglutinacin en placa o en tubo, despus de ponerlos a reaccionar con anticuerpos
monoclonales contenidos en antisueros conocidos.
Centrfuga
Bao de Mara a 37C
CANTIDAD DESCRIPCIN
Muestra de sangre anticoagulada
Sueros hemoclasificadores Anti A, Anti
B, Anti AB
1 Pizeta con SSF
1 Gradilla
1 Papel parafinado
1 Lpiz graso
4 Pipetas Pasteur
1 Bulbo de goma
4. PROCEDIMIENTO.
1. Usar guantes quirrgicos

2. Separar la muestra de sangre en tubos, previamente identificados.
3. Marcar tubos de 12 X 75 con las siglas A, B y AB que le corresponde para
la identificacin de la suspensin.
4. Preparar una suspensin de glbulos rojos de 2-5%previamente lavados.
5. Colocar en los tubosmarcados con las siglas A, B y AB, una gota de
reactivo anti-A,anti-B y anti AB respectivamente.
11
6. Agregar a cada tubo una gota de la suspensin globular del 2-5% de la

muestra en estudio.
7. Mezclar suavemente y centrifugar
8. Leer y reportar los resultados de la reaccin (aglutinacin, hemlisis)
9. Forma de reportar los resultados de los grupos sanguneos del sistema
ABO, fase globular:
Interpretacin
GRUPO DIRECTO O FASE GLOBULAR de
Resultados
Anti A Anti B Anti AB
4+ 4+ A
4+ 4+ B
4+ 4+ 4+ AB
O
5.PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS

GRUPO DIRECTO FASE GLOBULAR Interpretacin

de
Resultados
Anti A Anti B Anti AB

2. Separar de la muestra de sangre en un tubo previamente identificado.
3. Preparar la suspensin de eritrocitos entre 2 al 3% lavados una vez.
4. Agregar los reactivos sricos antes de la suspensin globular
5. Reportar la intensidad de la aglutinacin en cruces
6. Verificar vigencia de los reactivos
7. Leer instructivo de la casa comercial de los reactivos
12
8. Dar tiempo y revoluciones adecuadas a la centrfuga

9. Utilizar una fuente de luz adecuada
10. Evitar dejar restos de los reactivos en el gotero
11. Evitar el contacto del gotero del reactivo con las paredes del tubo de ensaye
12. Desprender suavemente el botn de GR al realizar lectura
13. Conservar los reactivos a una temperatura de 1 a 6C
14. Utilizar una gota de cada reactivo
Con la gua del maestro, se evaluarn las reacciones de aglutinacin en tubo.
8.BIBLIOGRAFA.

Prado. 2003.
PRACTICA No.5
Determinacin del sistema ABO
Fase srica
1. INTRODUCCIN.
Es el sistema que se utiliza de rutina en la tipificacin del grupo sanguneo en el

banco de sangre y como complemento de la fase srica. En ella se determinan los
anticuerpos anti A, anti B y anti AB de origen natural presentes en el suero.
13
Se determina la presencia o ausencia de los anticuerpos del sistema ABO
mediante aglutinacin en tubo, despus de ponerlos a reaccionar con clulas
reactivo conocidas.
Centrfuga
Bao de Mara a 37C
CANTIDAD DESCRIPCIN
Suero problema
Eritrocitos reactivo A y B.
1 Pizeta con SSF
1 Gradilla
1 Papel parafinado
1 Lpiz graso
4 Pipetas Pasteur
1 Bulbo de goma
4.PROCEDIMIENTO.
1. Colocar dos gotas de suero en estudio a tubos marcados A y B.

2. Agregar una gota de hemates A y una gota de hemates B en los tubos
correspondientes.
3. Mezclar suavemente y centrifugar
14
4. Leer y reportar en cruces los resultados de la reaccin (aglutinacin o

hemlisis) en los tubos del suero y glbulos rojos.
5. Recoger el material, conservar la muestra de 1C a 6C durante 5 a 8 das
6. Forma de reportar los resultados de los grupos sanguneos del sistema ABO,
fase srica:
Interpretacin
De resultados
A B O
4+ A
4+ B
3+ 4+ O
AB

GRUPO INVERSO FASE SRICA Interpretaci

n
De
resultados
A1 A2 B O

4. Aadir el suero en estudio y luego los hemates
15

10. Mezclar los reactivos celulares suavemente antes de ser usados
11. Conservar la muestra de 5 a 8 das despus de realizar el procedimiento
12. Desprender suavemente el botn de GR al realizar lectura
7.GARANTA DE CALIDAD
8.BIBLIOGRAFA.

Prado. 2003.
PRACTICA No.6
Determinacin de los subgrupos de A y B
1.INTRODUCCIN.
16
Los subgrupos son debidos a que el Ag A, se presenta bajo varias formas que
difieren entre si cualitativamente y cuantitativamente y sta diferencia guarda
relacin con la cantidad de Ag presente en los GR el cual disminuye
progresivamente desde A1 hasta la forma ms dbil.
1. Se detectan los subgrupos A1, A1B, A inter, A2, A2B u otras formas ms dbiles
delos subgrupos en los GR.
2. Se resuelven las discrepancias de los grupos sanguneos del sistema ABO,
Identificando los subgrupos de A y AB.
3. Se identifican subgrupos dbiles de A y AB en donantes y receptores para evitar
posibles reacciones hemolticas transfusionales.
CANTIDAD DESCRIPCIN
Lectina y/o Suero Anti A1 Absorbido
Eritrocitos
1 Pizeta con SSF
1 Gradilla
1 Papel parafinado
1 Lpiz graso
4 Pipetas Pasteur
1 Bulbo de goma
Centrfuga
Bao de Mara a 37C
4.PROCEDIMIENTO.
17
1. Marcar un tubo de ensaye de 12 x 75 mm con las siglas Lec A1 y/o Suero

Anti A1 absorbido.
2. Colocar una gota de suero anti A1 absorbido (AntiA1) o lectinaanti A 1 en el
tubo identificado.
3. Aadir una gota de la suspensin de eritrocitos en estudio.
4. Mezclar y centrifugar a revoluciones y tiempo indicado.
5. Remover suavemente los eritrocitos sedimentados.
6. Observar aglutinacin macroscpica.
7. Registrar la intensidad de la aglutinacin.
a) Si se observa un botn (4+) los eritrocitos pertenecen al subgrupo A1 o

A1B.
b) Si se observa una aglutinacin moderada (1-2+), los eritrocitos
pertenecen al subgrupo A2, A inter, A2B (A intermedios).
Reacci con GR Reacci del suer Interpretaci

n n o n
Anti A Anti Anti A1 Anti H A1 A2 B O
AB
4+ 4+ 4+ 4+ A1
4+ 4+ 2+ 3+ 4+ Aint
4+ 4+ 2+ 4+ A2
2+ 2+ 3+ 4+ A3
4+ 2+ 4+ Ael
3+ 4+ 4+ Alae
18

2. Trabajar con muestras de sangre fresca
5. Seguir estrictamente las instruccionesdel fabricanteantes de utilizar
el suero anti A absorbido (Anti A1) o lectina Anti A1, Anti H
6. Usar clulas A1 como testigo positivo y clulas A2 u O testigo negativo
7. Confirmar subgrupos A1 para preparar hemates A1 clasificadores.
13. Mezclar los reactivos celulares suavemente antes de ser usados
8.BIBLIOGRAFA.

Prado. 2003.
PRACTICA No.7
19
Identificacin de antgeno H
eneritrocitos
1. INTRODUCCIN.
La sustancia H se encuentra en las clulas rojas humanas, es la sustancia bsica
de la cual se han formado las sustancias A y B, mediante la influencia de los genes
A y B respectivamente.
Las clulas rojas del grupo O en las cuales no hay Ag A y B, contienen la mayor
concentracin de sustancia H y los subgrupos de A, a medida que son ms
dbiles poseen ms sustancia H.
1. Se detecta la presencia del Ag H, en los GR.
2. Se resuelve discrepancias de los grupos sanguneos del sistema ABO.
3. Se
CANTIDAD DESCRIPCIN
Lectina Anti H
Eritrocitos
1 Pizeta con SSF
1 Gradilla
1 Papel parafinado
1 Lpiz graso
4 Pipetas Pasteur
1 Bulbo de goma
investigan subgrupos de A.
Centrfuga
Bao de Mara a 37C
20
4.PROCEDIMIENTO.
1. Marcar un tubo de ensaye de 12 x 75 mm con las siglas anti H

2. Colocar una gota de lectina Anti H en el tubo identificado.
3. Aadir una gota de la suspensin de eritrocitos en estudio lavados una vez.
4. Mezclar y centrifugar suavemente los eritrocitos sedimentados y observar si
existe aglutinacin macroscpica.
5. Registrar la intensidad de la aglutinacin.

a) La lectina anti H aglutina aquellas clulas que contienen el antgeno H
b) Si se observa una reaccin negativa con la lectina anti H, los eritrocitos son del
grupo A1 o A1 B.
c) Si se observa una aglutinacin de 3+ los eritrocitos pertenecen a los subgrupos
A1-2 (intermedio), AB, o A2.
d) Si se observa una aglutinacin de 2+ los eritrocitos pertenecen a los subgrupos
A2 o A2B.
e) Usar clulas O A2 como testigo positivo y clulas A1 como testigo negativo.
2. Trabajar con muestras de sangre fresca
5. Seguir estrictamente las instruccionesdel fabricanteantes de utilizar la
lectina Anti H
6. Usar clulas O A2 como testigo positivo y clulas A1 como testigo
negativo.
21

8.BIBLIOGRAFA.
Prado. 2003.
PRACTICA No.8
Determinacin del factor Rh (D)
1 INTRODUCCIN.
Es un procedimiento en el que se determina la presencia o ausencia del antgeno

(D) en la membrana del glbulo rojo. La presencia de este antgeno se denomina
Rh (D) positivo y la ausencia Rh (D) negativo.
Se determinar la presencia ausencia del antgeno D en una muestra de sangre.
Centrfuga
CANTIDAD DESCRIPCIN
Muestra de sangre
Reactivo anti-D monoclonal policlonal
1 Pizeta con SSF
1 Tubo de ensaye de 12 X 75 mm
1 Gradilla
1 Papel parafinado
1 Lpiz graso
22
1 Pipeta Pasteur
1 Bulbo de goma
4 PROCEDIMIENTO.
1. Leer las instrucciones del fabricante del reactivo a utilizar.

2. Preparar una suspensin celular al 2 a 3%
3. Marcar un tubo de 12 X 75 ml 1.4, agregar 1 gota de reactivo anti-D
( monoclonal policlonal).
4. Aadir una gota de la suspensin celular con pipeta de Pasteur.
5. Mezclar y centrifugar 1 min a 1000 rpm.
6. Leer y reportar la reaccin en cruces en el formato correspondiente.
7. Investigar el D dbil si el resultado es negativo.

1. Investigar D dbil a todo resultado Rh D negativo.

2.Realizar prueba de antiglobulina directa a todos los Rh ( D ) negativo.
3. Leer las instrucciones del fabricante del reactivo utilizado.
8.BIBLIOGRAFA.

Prado. 2003.
23
PRACTICA No.9
Prueba para el D dbil (Du) .
1.INTRODUCCIN
El D dbil se ha descrito como una forma dbil del antgeno Rh (D). Las clulas
rojas D negativo D positivo tienen pocos sitios antignicos D, habindose
demostrado que slo toman un 7-25% del anticuerpo anti-D que normalmente fija
una clula Rh ( D ) positivo.
Las normas del Banco de Sangre deben requerir que:
1. Toda sangre con resultado negativo o positivo dbil debe ser probada
para D mediante la prueba de Coombs indirecta.
2. Si un donante resulta Rh negativo, D positivo, debe ser considerado
como un Rh positivo y su sangre debe ser transfundida a un Rh positivo.
3. Cuando se trata de un receptor Rh negativo, D positivo, ciertos bancos
de sangre recomiendan que se debe considerar como Rh negativo y
transfundirse con sangre Rh negativo. Algunos autores piensan que estos
individuos pueden ser transfundidos con sangre Rh positivo, aunque en
raros casos se ha reportado inmunizacin de tales receptores con
produccin de anti-D., como igualmente ha sucedido con algunos
pacientes Rh positivo.
4. Embarazadas Rh negativo, D negativo, si su hijo es Rh positivo deben
recibir la inmunoglobulina anti-Rh para prevenir la inmunizacin. Las
madres D positivo no la requieren.
2. PRINCIPIO Y METODOLOGA.Se determinar la presencia o ausencia del

antgeno D en una muestra de sangre.
24
CANTIDAD DESCRIPCIN
Muestra de sangre
Reactivo anti-D monoclonal policlonal 3.
Reactivo de antiglobulina humana
Clulas control de Coombs
1 Pizeta con SSF
1 Gradilla
1 Papel parafinado
1 Lpiz graso
1 Pipeta Pasteur
1 Bulbo de goma
LISTA DE REQUERIMIENTOS.
Centrfuga
Bao de Mara
Termmetro
4 PROCEDIMIENTO.
Si no se observa aglutinacin en la determinacin del Rh, determinar el D

dbil.
25
1. Agregar un tubo control (1.5 ) el cual contiene lo indicado por el fabricante

para el anti-D, pero sin anticuerpo, ms una gota de clulas problemas
suspendidas de 2 a 3 %.
2. Incubar los tubos 1.4 y 1.5 en bao de mara a 37C, por un tiempo
mnimo de 20,minutos.
3. Centrifugar ambos tubos a 15 segundos a 3400 rpm, 1 minuto a 1000
rpm.
4. Suspender los botones celulares y examinar la aglutinacin; si los
eritrocitos no son aglutinados continuar con la fase antiglobulina.
5. Lavar 4 veces con solucin salina fisiolgica, cumpliendo con la tcnica
del lavado de clulas.
6. Agregar a cada tubo dos (2) gotas de antiglobulina humana
poliespecfico.
7. Mezclar y centrifugar a 15 segundos a 3400 rpm 1 min por 1000 rpm.
8. Resuspender las clulas desprendiendo suavemente el botn, leer
macroscpicamente registrando los resultados.
9. Agregar 1 gota de clulas control de Coombs a los resultados negativos,
centrifugar e interpretar resultado.
Interpretacin de prueba para D dbil:
Tubo con Rh D ( 1.4 ) Tubo control ( 1.5 ) Interpretacin

Negativo Negativo Rh ( D ) negativo
Positivo Negativo Rh ( D ) positivo
Positivo Positivo Bloqueo in vivo por anticuerpo, definir
situacin, verificar con Rh salino.

1. Investigar D dbil a todo resultado Rh D negativo.

2.Realizar prueba de antiglobulina directa a todos los Rh ( D ) negativo.
3. Leer las instrucciones del fabricante del reactivo utilizado.
26
4. Agregar CCC a toda reaccin de antiglobulina humana negativa.
8.BIBLIOGRAFA.

Prado. 2003.
PRACTICA No.10
Preparacin de clulas control de Coombs .
1. INTRODUCCIN
Son clulas del grupo O Rh ( D ) positivo sensibilizadas con suero diluido IgG
anti-D o Rh GAM
Con el empleo de las clulas control de Coombs se confirmar las pruebas de
antiglobulina negativa.
Centrfuga
Bao de Mara
27
Termmetro
3.2 Materiales de laboratorio:
CANTIDAD DESCRIPCIN
Muestra de sangre
Reactivo anti-D monoclonal
policlonal
Reactivo de antiglobulina humana
Clulas control de Coombs
1 Pizeta con SSF
1 Gradilla
1 Papel parafinado
1 Lpiz graso
1 Pipeta Pasteur
1 Bulbo de goma
4.PROCEDIMIENTO.
1. Marcar un tubo de 13 X 100 mm hasta los niveles de 3 y 6 ml y llenarlo hasta

la marca de 6 con salina.
2. Agregar una gota de suero anti-Rh con el gotero en forma vertical.
3. Cubrir el tubo con parafilm y mezclar por inversin unas 20 veces.
4. Retirar un volumen de esta solucin hasta que llegue el nivel a la marca de 3
ml.De nuevo, llenar el nivel con salina, hasta la marca 6, cubrir con parafilm y
mezclar por inversin 20 veces.
5. Agregar el contenido completo de un segmento de clulas O Rh positivo al
tubo. Cubrir con parafilm y mezclar por inversin 20 veces.
6. Incubar a 37C durante 30 minutos, teniendo el cuidado de que el nivel del
agua del bao Mara sobrepase el nivel de la suspensin en el tubo.
Pasado este tiempo, las clulas estn sensibilizadas y listas para ser usadas
como control en las pruebas de antiglobulina que resultan
negativas.Conservadas en el refrigerador, duran hasta 7 das. Se pueden
tomar fracciones para preparar las del da, previo lavado 4 veces con
solucin salina.La suspensin final debe ser del 2%.
28
6 CONFIABILIDAD ANALTICA
1. Hacer un Coombs directo que debe ser positivo 2+

2. Vigilar que la temperatura del bao Mara se conserve a 37C.
3. Mezclar cada cierto intervalo de tiempo.
4. Hacer los lavados correctamente.
5. Realizar control de calidad del reactivo
6. La suspensin de las CCC debe ser del 2 al 5%
8.BIBLIOGRAFA.
Prado. 2003.
PRACTICA No.11
Prueba de AntiglobulinaDirecta .
1.INTRODUCCIN
La prueba de antiglobulina directa es un procedimiento que se usa para determinar

la sensibilizacin in vivo de los glbulos rojos, es decir, cuando la reaccin entre el
Ag y su correspondiente anticuerpo se efecta en el organismo mientras ambos
estn circulando.
La prueba de la antiglobulina directa permite detectar la sensibilizacin in vivo de
los glbulos rojos por inmunoglobulina de la clase IgG y/ fracciones del
complemento C3.
29
Centrfuga
CANTIDAD DESCRIPCIN
Muestra de sangre
Clulas Control de Coombs
Reactivo de antiglobulina humana y
monoespecfico( IgG, C3d, C3b, C4 )
2 Tubos de 12 X 75
1 Pizeta con SSF
1 Gradilla
1 Papel parafinado
1 Lpiz graso
1 Pipeta Pasteur
4.PROCEDIMIENTO.

2. Marcar un tubo de ensaye 12 X 75 mm con las siglas CD
3. Preparar una suspensin al 5% en SSF de clulas rojas de la muestra en
estudio.
4. Colocar al tubo marcado, una gota de la suspensin de hemates en estudio.
5. Agregar SSF al tubo y realizar cuatro lavados consecutivos decantando
completamente toda la salina en cada uno de los lavados.
6. Inmediatamente despus del ltimo lavado, agregar dos gotas del reactivo de
AGHP ( antiglobulina humana poliespecfica )
7. Mezclar y centrifugar por un minuto a 1000 rpm.
8. Observar el tubo cuantificando la aglutinacin de la reaccin antgeno-
anticuerpo y anotar resultados en el formato correspondiente.
9. La prueba negativa debe confirmarse con clulas control de Coombs, agregar
una gota, mezclar, centrifugar, leer y anotar resultados.
30

Interpretacin de los resultados:

1. Si la prueba de antiglobulina muestra aglutinacin, se interpreta como positiva,
significa que hubo sensibilizacin in vivo de los eritrocitos y se reporta: prueba
de antiglobulina de Coombs positiva, sealando en cruces la intensidad de la
reaccin. En este caso realizar prueba de Coombs directo utilizando reactivos
monoespecficos.
2. Si no hubo aglutinacin la prueba es negativa y significa que no existe
sensibilizacin eritrocitaria; esta prueba ser vlida solamente si la prueba
control de Coombs es positiva
1. Leer las instrucciones del fabricante al utilizar los reactivos comerciales.

2. Los lavados de las clulas deben ser consecutivos.
3. Resuspender las clulas que quedan adheridas al fondo del tubo con una
pequea cantidad de SSF; luego agregar la SSF presionando la pizeta para
que la resuspensin de las clulas quede homognea.
4. Los tubos deben ser llenados con SSF hasta aproximadamente las tres cuartas
partes del tubo.
5. En cada uno de los lavados decantar totalmente la SSF.
6. En caso de tener que reportar un ttulo, realizar diluciones del suero de Coombs
y poner en contacto estas diluciones con las clulas en estudio.
8. BIBLIOGRAFA.

Prado. 2003.
31
PRACTICA No.12
Pruebas Pretransfusionales
1. INTRODUCCIN
Es una serie de procedimientos que se realizan rutinariamente en el Banco de
Sangre con la finalidad de asegurar la compatibilidad sangunea entre el receptor y
el donador para evitar reacciones hemolticas transfusionales en el usuario.
1. Detectar incompatibilidades del sistema ABO y Rh
2. Garantizar al receptor la administracin de una transfusin ABO y Rh
compatibles.
2. Detectar anticuerpos en el suero del receptor que estn dirigidos a los
antgenos del donante.
3. Cumplir con la normativa de la Ley de Transfusin y Bancos de Sangre y su
32
reglamento.
Centrfuga
Bao Mara a 37C
CANTIDAD DESCRIPCIN
Muestras de sangre
Clulas Control de Coombs
Reactivo de antiglobulina humana y
monoespecfico( IgG, C3d, C3b, C4 )
Reactivos ABO y Rh
Albmina bovina al 22%
Tarjetas de identificacin de la transfusin
Tijera
Pinzas
Etiquetas autoadhesivas
Gasas
Papel secante
2 Tubos de 12 X 75
2 Tubos de 13 X 100
1 Pizeta con SSF
1 Gradilla
1 Papel parafinado
1 Lpiz graso
1 Pipeta Pasteur
1 Bulbo de goma
4. PROCEDIMIENTO.
1. Realizar los siguientes procedimientos:

1.1 Recibir solicitud de transfusin de sangre y/o componentes
sanguneos.
33
1.2 Verificar la identificacin del receptor, confrontando los datos de la

solicitud, con la historia clnica del paciente, (apellidos y nombre
completos, fecha de ingreso, nmero de Cdula de Identidad,
nmero de Historia, Servicio, cama, fecha de nacimiento).
1.3 Revisar que la solicitud de transfusin lleve diagnstico, razn a
indicacin de la transfusin, si ha sido transfundido con anterioridad,
reacciones adversas, nombre, firma y siglas del mdico que indica el
tratamiento, fecha, grupo sanguneo, boleta de grupo sanguneo,
todos los datos escritos en letra clara.
1.4 Colocar lamuestra de sangre, identificando al receptor por sus
apellidos y nombre completo, confrontar este dato con la solicitud de
transfusin, historia clnica.
1.5 Procesar la muestra de sangre, comprobando nuevamente la
identificacin tanto en el receptor, los tubos y la solicitud de
transfusin.
1.5.1Determinar grupos sanguneos ABO y Rh
1.5.2 Resolver discrepancias antes de iniciar la prueba cruzada.
1.5.3 Detectar Ac irregulares utilizando clulas pantallas con gentica
conocida. Realizar prueba de antiglobulina directa.
1.5.4 Registrar resultados en formatos correspondientes, y en los tubos que
contienen el paquete celular y suero.
1.6 Seleccionar la sangre adecuada para la transfusin.
1.6.1Extraer del refrigerador la unidad unidades ABO y Rh compatibles

con el receptor.
1.6.2Observar las condiciones fsicas de la unidad ( hemlisis, coloracin

del paquete celular, demarcacin de la lnea paquete celular plasma,
burbujas de aire).
1.6.3 Observar fecha de expiracin, y resultados del tamizaje serolgico.
1.7 Procesar la muestra de sangre del donador.

1.8 Separar uno de los segmentos sellados del tubo integrado a la
unidad de sangre, identificndolo con una etiqueta que contenga
serial de donacin, Nm de segmento y fecha de preparacin.
1.9 Colocar el segmento en tubo de ensaye identificado.
1.10 Verificar con esta muestra grupo sanguneo ABO y Rh.
1.11 Determinar subgrupos y otros Ag cuando el receptor contenga Ac
irregulares.
1.12 Realizar Prueba Cruzada Mayor.

1.12.1Preparar una suspensin al 2 al 5% con los glbulos rojos del
donante lavados una vez.
34
1.12.2 Identificar un tubo de 12 X 75

1.12.3 Colocar dos gotas del suero del receptor en el tubo previamente
identificado.
1.12.4 Agregar al mismo tubo una gota de suspensin de hemates del
donador previamente lavados.
1.12.5 Mezclar y centrifugar a velocidad y revoluciones establecidas 1
1.12.6 Leer desprendiendo suavemente el botn celular, observando
hemlisis y/o aglutinacin.
1.12.7 Registrar el resultado tubo en mano.
1.12.8 Agregar dos gotas de albmina, mezclar e incubar a temperatura
de 37C durante 20 a 30 min.
1.12.9 Mezclar y centrifugar a revoluciones establecidas.
1.13 Lavar cuatro veces con SSF para la prueba de antiglobulinaindirecta

decantando totalmente la SSF en cada lavado.
1.14 Agregar dos gotas de reactivo de antiglobulina humana.
1.15 Agregar una gota de clulas de Coombs si el resultado de la
prueba es negativo.Centrifugar, leer y registrar resultado, el cual
debe ser positivo; si el resultado es negativo, repetir el
procedimiento.
1.15.1Registrar los resultados obtenidos en los formatos correspondientes
(solicitud de transfusin, tarjeta deidentificacin, libros de registro.)
1.15.2 Guardar los tubos del receptor y donante tapados en envase o
gradilla identificada, a una temperatura de 1 a 6C por siete das.
1.15.3Colocar la unidad unidades de sangre componentes en el
sitio para su conservacin, hasta el momento de la transfusin.
Prueba Cruzada menor.

Es el procedimiento inverso de la prueba cruzada mayor, en donde las clulas del
receptor se ponen en contacto con el suero plasma del donante y los mismos
pasos de la prueba cruzada mayor. Es una prueba opcional y se realiza cuando al
donante no se le investiga deteccin de anticuerpos.
35

Interpretacin de los resultados:

1. Se considera que existe compatibilidad si no se visualiza hemlisis
aglutinacin en ninguno de los pasos de la prueba cruzada.
2. Si el resultado es positivo, se invalida la prueba, repetir el procedimiento
verificando todos sus pasos.
6.CONFIABILIDAD ANALTICA.
36
La persona encargada de preparar la transfusin ( tecnlogo, tcnico, enfermera en

hemoterapia ), deber cumplir con la siguiente normativa, para asegurar al receptor
los mayores beneficios de la transfusin.
1. Verificar al momento de fijar la solicitud de la transfusin de sangre

componentes que el formato establecido lleve registrados los datos exigidos.
1.1 Identificacin del receptor:
- Nombre y apellidos completos.
- Nmero de historia clnica, ubicacin, fecha de nacimiento, fecha de
ingreso.
- Diagnstico, transfusiones, razn de la indicacin, embarazo,
reacciones transfusionales.
- Nombre, apellidos y firma del mdico que la indique.
- Todos estos datos deben estar escritos con letra clara y legible.
2 La muestra de sangre deber ser tomada por el personal autorizado
cumpliendo con los requisitos exigidos en el procedimiento de toma de muestra
de sangre.
3 Antes de iniciar el procedimiento de la prueba de compatibilidad, conformar la
informacin contenida en el tubo etiquetado y la solicitud de transfusin.
4 Si el receptor ha recibido mltiples transfusiones es recomendable tomar
nuevas muestras de sangre.
5 Utilizar suero fresco con menos de 48 horas de extrado para el procedimiento
de la prueba de compatibilidad.
6 Realizar deteccin de anticuerpos y prueba de antiglobulina directa al receptor.
7 Seleccionar la unidad unidades de sangre cumpliendo normas establecidas:
-ABO y Rh ( D ) compatible con el receptor.
-Revisar condiciones fsicas de la unidad de sangre.
-Verificar el tamizaje serolgico ( sfilis, Chagas, Ag de la hepatitis B, anticore,
VHC, ALT, HIV y otros.
-Observar hemlisis, burbujas de aire, coloracin del paquete celular.
8. Cumplir con las fases establecidas ( centrifugacin inmediata, albmina,
temperatura de 37C, prueba de antiglobulina indirecta.
9. Resolver discrepancias de grupos sanguneos, antes de iniciar la prueba mayor.
10. Identificar la unidad de sangre con etiqueta que incluya informacin tanto del
receptor como donador.
11 Guardar los tubos pilotos ( receptor, donador, por espacio de 7 das en nevera
a temperatura de 1 a 6C ).
12. La prueba cruzada menor es opcional ( cuando no se realiza la deteccin de
anticuerpos al donante.)
Con la gua del maestro, se evaluarn las reacciones de aglutinacin y/ hemlisis

en tubo e interpretacin de los resultados.
37
8.BIBLIOGRAFA.

Prado. 2003.
PRACTICA No.13
Diferenciacin del rouleaux de una verdadera aglutinacin.
38
1. INTRODUCCIN.
El fenmeno de rouleaux es una forma de pseudoaglutinacin no especfica

en la cual los glbulos rojos son agregados en forma de pilas de monedas,
debido a ciertas propiedades del suero en el que se encuentran
suspendidos.
2 PRINCIPIO Y METODOLOGA .
Diferenciar una pseudoaglutinacin no especfica de una verdadera
aglutinacin.
Centrfuga.
CANTIDAD DESCRIPCIN
Suero fresco
Glbulos rojos previamente seleccionados
1 Pizeta con SSF
3 Tubos de ensaye de 12 X 75mm
1 Gradilla
1 Papel parafinado
1 Lpiz graso
1 Pipeta Pasteur
1 Bulbo de goma
39
4 PROCEDIMIENTO.
Para diferenciar el rouleaux de una verdadera aglutinacin se usan dos

tcnicas:
a) Despus de una incubacin y resuspensin de rutina, continuar con los

pasos siguientes:
1. Centrifugar de nuevo la mezcla suero/hemates

2. Eliminar el suero sobrenadante
3. Sustituirlo por un volumen equivalente de SSF (dos gotas) y mezclar
suavemente.
4. Centrifugar la mezcla de solucin salina y observar aglutinacin.
5. Leer resuspendiendo la mezcla y observar aglutinacin.
b) Realizar el siguiente procedimiento:
1. Identificar un tubo de ensaye 12 X 75 mm

2. Colocar dos gotas de suero problema
3. Agregar una gota de la suspensin de los glbulos rojos del 2 al 3%
previamente seleccionados y lavados una vez.
4.Incubar a 37C durante 30 min
5. Retirar el sobrenadante con una pipeta Pasteur
6. Agregar igual volumen de SSF ( dos gotas ) y mezclar.
7. Centrifugar y leer suspendiendo el botn de clulas suavemente,
Interpretacin
Procedimiento a):
40
1. Si las clulas se dispersan uniformemente se trata de un fenmeno de

rouleaux.
2. La aglutinacin verdadera permanecer.
Procedimiento b)
1. Si se trata de un fenmeno de rouleaux las clulas se dispersan

uniformemente.
2. La verdadera aglutinacin no se ver afectada.
3.2 Utilizar glbulos rojos frescos

3.3 Utilizar suero fresco problema
3.4 Lavar los glbulos rojos seleccionados, una vez.
8.BIBLIOGRAFA.

Prado. 2003.
41
PRACTICA No.14
Determinacin de crioaglutininas.
1.INTRODUCCIN.
Es un procedimiento para determinar e investigar Ac fros ( IgM ), que ayudan al

diagnstico de ciertas enfermedades ( ej.: neumonas por micoplasmas,
enfermedades linfoproliferativas).
2 PRINCIPIO Y METODOLOG .
1. Detectar autoanticuerpos fros en una muestra de suero.
2. Cuantificar anticuerpos atpicos de tipo IgM en una muestra de suero.
Centrfuga.
Bandeja con agua natural y trocitos de hielo
Termmetro para bao de Mara
CANTIDAD DESCRIPCIN
42
Suero fresco
Glbulos rojos previamente seleccionados
1 Pizeta con SSF
3 Tubos de ensaye de 12 X 75mm
1 Gradilla
1 Papel parafinado
1 Lpiz graso
1 Pipeta Pasteur
1 Bulbo de goma
5 PROCEDIMIENTO.
Realizar el siguiente procedimiento:
1. Identificar un tubo de ensaye 12 X 75 mm

2. Colocar dos gotas de suero problema
3. Agregar una gota de la suspensin de los glbulos rojos del 2 al 3%
previamente seleccionados y lavados una vez.
4.incubar a 37C durante 30 min
5. Retirar el sobrenadante con una pipeta Pasteur
6. Agregar igual volumen de SSF ( dos gotas ) y mezclar.
7. Centrifugar y leer suspendiendo el botn de clulas suavemente,
3.2 Utilizar glbulos rojos frescos
43
3.3 Utilizar suero fresco problema

3.4 Lavar los glbulos rojos seleccionados, una vez.
Con la gua del maestro, se evaluar la calidad de la suspensin celular .
8.BIBLIOGRAFA.

Prado. 2003.
Normas generales utilizadas en Banco de Sangre
1 .Evitar extraer muestras de sangre de conexiones de soluciones.
2. Separar toda muestra de sangre completa
3 .Utilizar concentraciones de hemates en suspensin entre 2 a 5 %
4 .Utilizar proporciones de una gota de suspensin de hemates con dos gotas de suero.
5. Cumplir con la centrifugacin y tiempo establecido en cada procedimiento
6. Dejar retraer el cogulo por espacio de cinco a diez minutos.
7 .Realizar lectura de las reacciones cuantificando en cruces y registrando la informacin,
tubo en mano.
8 .La presencia de hemlisis en la lectura de un resultado se interpreta como una reaccin
Ag Ac positivo y se registra como hemlisis parcial(HP) o hemlisis total(HT)
9. Todo resultado dbil o dudoso deber observarse con lupa o microscopio.
10. Registrar todos los resultados en tubos previamente identificados, hoja de
solicitud de exmenes y libro correspondiente
11. Utilizar material de vidrio limpio y sin rayas para realizar los procedimientos
12 .Conservar los reactivos serolgicos y celulares a temperatura de 1 a 6C segn
44
las instrucciones del fabricante
13. Controlar la temperatura de la nevera entre 1 a 6 C
14. Mantener el bao de Mara a temperatura de 37 C.
15. Ante cualquier duda sobre el resultado esperado realizar de nuevo el experimento
16 .Mantener en orden el campo y sitio de trabajo
17. Descartar el material usado en procedimientos de enfermos cuyo diagnstico sea
SIDA, hepatitis u otros.
18. Descartar las unidades con serologa positiva, rotularse y enviarse al crematorio para
su incineracin.
19. No frenar la centrfuga cuando est funcionando
20. Pasar con pipeta de pasteur el suero al tubo previamente identificado
Normas de Bioseguridad
El principal riesgo que corre el personal del laboratorio es la contaminacin de las manos y
de las mucosas oculares, nasal y bucal por sangre y otras secreciones. Esa contaminacin
se produce como consecuencia de cortes y pinchazos provocados por objetos afilados, as
como por el derrame y las salpicaduras de material de muestra. En el presente manual se
describen prcticas y procedimientos ideados para que esos accidentes se reduzcan al
mnimo.
1 Colocarse guantes, deseche los guantes siempre que piense que se han contaminado,
lvese las manos y pngase un par de guantes nuevos.
2 No toque con las manos enguantadas los ojos, la nariz y otras mucosas expuestas con
la piel descubierta
3 No abandone el trabajo ni se pasee por el laboratorio con los guantes puestos.
4 Lvese las manos con agua y jabn inmediatamente despus de haberse contaminado
y una vez que haya terminado su trabajo.
5 Mientras est en el laboratorio, pngase bata o uniforme, son preferibles las batas
largas. Qutese la ropa de proteccin antes de salir del laboratorio.
45
6 Mantenga el laboratorio limpio y ordenado, evitando la presencia de material y equipo

que no tengan relacin con el trabajo.
7 Desinfecte la superficie de trabajo una vez terminada cada tarea y al finalizar la

jornada, con desinfectante general eficaz; puede usarse una solucin de hipoclorito con
una concentracin de 0.1 % de cloro libre (1 g L 1000 ppm)
8 Evite usar agujas y otros instrumentos, coloque las agujas, jeringas y otros
instrumentos usados, en un recipiente imperforable. No vuelva a tapar las agujas
usadas ni las desacople de las jeringas.
9 Nunca pipetee lquidos con la boca.
10 10. Lleve a cabo todos los procedimientos tcnicos de forma tal que sea mnimo el
riesgo de producir aerosoles, gotitas, salpicaduras o derrame.
11 Mientras est en el laboratorio no coma, beba, fume ni se aplique cosmticos, tampoco

guarde alimentos ni enseres personales dentro de la nevera y congelador.
12. Asegrese de que exista un programa eficaz de lucha contra insectos y roedores.
13. Si se derrama el material infectado cbrase en primer lugar con papel u otro material
absorbente. Virtase un desinfectante alrededor de la zona afectada y sobre el material
absorbente y djese actuar durante diez minutos. El desinfectante que se recomienda
de ordinario para limpiar superficies contaminadas es una solucin de hipoclorito con
0.55 de cloro libre (5 g/L 5000 ppm). La mezcla de desinfectante y material derramado
debe limpiarse con material absorbente, el cual se dejar en el recipiente de desechos
contaminados. A continuacin hay que limpiar de nuevo la superficie con desinfectante.
Durante todo este proceso hay que llevar guantes y evitar el contacto directo entre las
manos enguantadas y el material denominado desinfectante. Los vidrios o plsticos rotos
se recogern con escoba y recogedor.
14. En caso de pinchazos con agujas u otros objetos, cortes y contaminacin de la piel
con
material derramado o salpicado, hay que lavarse concienzudamente con agua y jabn. Si
se produce una herida sangrante, debe favorecerse la hemorragia.
Todo derrame, accidente y exposicin con material infeccioso, se comunicar de inmediato
alsupervisor del laboratorio, y se llevar un registro por escrito de todo incidente de ste
tipo, facilitando la evaluacin, vigilancia, tratamiento y en caso necesario, el asesoramiento
mdico apropiado.
46
47

Manual de Prácticas de Inmunohematología.

Uploaded by

Document Information

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Manual de Prácticas de Inmunohematología.

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

Facultad de Bioanlisis, Veracruz Manual de Procedimientos de laboratorio

1.1 El lavado de clulas es un procedimiento en el que se mezcla un

1.2 La preparacin de la suspensin de clulas permite cuantificar

2.1 Remover protenas no absorbidas al glbulo rojo que puedan interferir en

2.2 Preparar porcentualmente la concentracin de la suspensin celular

3.1 Equipos de laboratorio.

3.2 Materiales de laboratorio.

4.1 Lavado de clulas

2. Agregar una alcuota de SSF al tubo previamente identificado.

3. Agregar un volumen de glbulos rojos al tubo que contiene la alcuota de

5. Colocar el tubo en la centrfuga calibrndolo con otro tubo que contenga

6. Proceder al lavado de clulas centrifugando a 2000 RPM por 3 min.

7. Lavar los glbulos rojos las veces que sea necesario.

8. Decantar el sobrenadante de SSF, en cada lavado.

4.2 Preparacin de la suspensin celular del 2 al 5%

1. Colocar en un tubo de ensaye de 12 X 75, 29 gotas de SSF ms una gota

2. Mezclar suavemente con la pipeta Pasteur.

5. PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS

Se trabajar de manera individual.

5.1 Reporte de Resultados

1. Realizar el lavado celular de acuerdo con los procedimientos indicados.

Con la gua del maestro, se evaluar la calidad de la suspensin celular.

T.Romero, D.Hernandez, A.Sojo,,A.Jimenez, C.Ospino, Z.DvilaM.Arias. Manual de

En el laboratorio de inmunohematologa se emplearn muestras de hemates

1. Obtener una suspensin de clulas reactivas al 2.5% para determinar fase

3.1 Equipos de laboratorio.

3.2 Materiales de laboratorio.

1. Utilizar guantes quirrgicos

Esquema de Concentracin de la Suspensin Celular.

Concentracin % Volumen de Volumen de Total

5. PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS

Se trabajar de manera individual.

5.1 Reporte de Resultados

1. Seleccionar unidades de sangre con tamizaje serolgico negativo y Rho (D)

Con la gua del maestro, se evaluar la calidad de la suspensin celular.

T.Romero, D.Hernndez, A.Sojo,,A.Jimenez, C.Ospino, Z.DvilaM.Arias. Manual de

La titulacin de anticuerpos naturales e inmunes es un procedimiento que en

3.1 Equipos de laboratorio.

Bao de Mara a 37C

Termmetro para bao Mara

6.2 Materiales de laboratorio.

Titulacin de anticuerpo naturales anti A y anti B.

Realizar ttulo de Ac naturales del sistema ABO, segn grupo sanguneo.

1. Utilizar guantes quirrgicos

3. Identificar dos hileras de tubos de 12 X 75 mm con la letra A y la doble

5 .PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS

Se trabajar de manera individual.

5.1 Reporte de Resultados

Se emitir el reporte de resultados de la prctica realizada.

1. Verificar la vigencia de los hemates y reactivos

3. Emplear mtodo de la doble dilucin

T.Romero, D.Hernndez, A.Sojo,,A.Jimenez, C.Ospino, Z.DvilaM.Arias. Manual de

3.1 Equipos de laboratorio.

Bao de Mara a 37C

Termmetro para bao Mara

3.2 Materiales de laboratorio.

1. Usar guantes quirrgicos

6. Agregar a cada tubo una gota de la suspensin globular del 2-5% de la

5.PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS

Se trabajar de manera individual.

5.1 Reporte de Resultados

GRUPO DIRECTO FASE GLOBULAR Interpretacin

1. Usar guantes quirrgicos

8. Dar tiempo y revoluciones adecuadas a la centrfuga