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ANALTICOS, FISICOQUMICOS Y
MICROBIOLGICOS
1
VALIDACIN DE MTODOS ANALTICOS
I. GENERALIDADES
3
VALIDACIN??
Por qu es necesaria la
validacin analtica?
Cul es el propsito de
la validacin analtica?
La validacin
L lid i i li
implica l
la d
demostracin
t i d
de l
la
determinacin de las fuentes de variabilidad y del
error sistemtico y al azar de un procedimiento,
procedimiento no
slo dentro de la calibracin sino en el anlisis de
muestras reales.
2. Mtodos No Normalizados:
Mtodo analtico desarrollado por
un tercero o que ha sido adaptado
por el laboratorio a partir de un
mtodo normalizado. (Ref. ILAC-
G18).
G18)
NOTA: El desarrollo del mtodo,
as como su adaptacin,
d i incluyen
i l l
la
etapa de su validacin.
3. Mtodos Desarrollados p
por
el Laboratorio:
Mtodo analtico que no se
encuentra en normas u otras
colecciones de mtodos, ni en
publicaciones de terceros,
habiendo sido desarrollado por
el propio laboratorio.
laboratorio
NOTA: El desarrollo del mtodo
incluye la etapa de su validacin.
validacin
La val
validacin
dac n de los mtodos de ensayo debe
debe:
Reflejar las condiciones reales de ensayo.
L
La extensin
xt si ded lal validacin
lid i necesaria
s i depender
d p d
del mtodo y su aplicacin.
LLa debe
d b realizar
li p s n l calificado
personal lifi d para
p esa
s
actividad.
En todos
t d s los
l s casos
c s s un parmetro
p rm tr para
p r la
l validacin
v lid cin
de ensayos es la descripcin del mtodo de ensayo.
Es recomendable
d bl la
l utilizacin
tili i de
d mtodos
t d s normalizados
li d s
cuando stos estn disponibles y sean apropiados.
"El llaboratorio
b t i d b
debe confirmar
fi m que pueded aplicar
li
correctamente los mtodos normalizados antes de las
pruebas o calibraciones. Si el mtodo normalizado cambia,
p
la confirmacin se repetir ". USP
Licda. Lucrecia Arriola 16
16
Cmo se dividen los mtodos segn el
RTCA 11
RTCA. 03 39: 06 ?
11.03.39:
1. C
Categora
I
2 Categora II
2.
3 Categora III
3.
4.. Categora
g IV
V
5. Mtodos Microbiolgicos
Son las
S l s propiedades,
i d d s caractersticas
t sti s o capacidades
id d s
cuantificables del mtodo que indican su grado de
calidad;
cal dad; incluyen
ncluyen exact
exactitud,
tud, efecto matr matricial,
c al,
repetibilidad, precisin intermedia, reproducibilidad,
especificidad, lmite de deteccin, lmite de
cuantificacin,
tifi i li
linealidad,
lid d rango, sensibilidad,
ibilid d
robustez, fortaleza y otras caractersticas
relacionadas con los resultados obtenidos por el
mtodo.
H 2 formas
Hay f d determinar
de d t i l linealidad:
la li lid d
La curva de
L d calibracin
lib i se grafica
fi colocando
l d l
las
concentraciones de las soluciones en el eje horizontal (x)
y las respuestas
p del instrumento en el ejej vertical (y),
esta relacin debe ser lineal con un coeficiente de
determinacin (r2) de por lo menos 0.98. (Es preferible
0 99)
0.99). Los valores deben caer dentro de una zona
horizontal angosta, los que queden fuera no son
aceptables para ser incluidos en el intervalo normal de
t b j
trabajo.
En donde:
Licda. Lucrecia Arriola 59
LINEALIDAD
CV menor o igual a 2.0% (desviacin estndar relativa o
coeficiente de variacin)
r mayor o igual a 0.99 (el coeficiente de correlacin es
una medida del grado de asociacin entre las mediciones y
la concentracin del analito)
r2 mayor o igual a 0.98 (el coeficiente de determinacin
mide la exactitud con la que se ajusta la curva de
regresin a los valores experimentales de y)
b aproximadamente igual a 0 (intercepto de la lnea)
m igual a la sensibilidad del sistema (pendiente de la
lnea)
a) Procedimiento:
V ifi
Verificar que ell mtodo
t d analtico
lti proporciona
i
linealidad, precisin y exactitud aceptables cuando
se aplica a muestras que contienen el analito en los
extremos y dentro del intervalo.
Lmite de cuantificacin
Aplicado a pruebas microbiolgicas cuantitativas. El
nmero ms bajo de microorganismos,
microorganismos dentro de
una variabilidad definida, que pueden ser contados
bajo las condiciones experimentales del mtodo bajo
evaluacin.
Licda. Lucrecia Arriola 68
VALIDACIN DE MTODOS
MICROBIOLGICOS
Cultivos de referencia
Termino colectivo para la cepa de referencia y los
stocks de referencia.
Material de referencia
Material suficientemente homogneo y estable en
relacin a una o ms propiedades especificadas, el
cual ha sido establecido como idneo para el uso
previsto, en un proceso de medicin.
Especificidad (selectividad)
La habilidad del mtodo para detectar el rango
requerido de microorganismos que podran estar
presentes en la muestra.
i= n
1 2
s= xi - x
n -1 i=0
En donde: n es el nmero de valores
2 2
N k s I k 1 s Z
s
N 1
En donde N es el nmero de repeticiones
k es el factor de cobertura, se utilizar k = 2, con un nivel
2
de confianza del 95%
si es el cuadrado de la desviacin estndar
s
CV 100 %
x
k
1 2
sZ ni xi x
k 1i 1
En donde
n es el nmero de valores
k es el factor de cobertura, se utilizar k = 2, con un nivel
de confianza del 95%
sZ es la
l ddesviacin
i i estndar
t d entret llas repeticiones
ti i o series
i