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Depois de realizada SDS PAGE pode realizar-se a tcnica Western blot que
utiliza anticorpos para identificar alvos proteicos especficos ligados a uma
membrana; the specificity of the antibody-antigen interaction enables a
target protein to be identified in the midst of a complex protein mixture. a
especificidade da interao anticorpo-antignio permite uma protena alvo a
ser identificado no meio de uma mistura de protenas complexa. Western
blotting can produce qualitative and semi-quantitative data on a protein of
interest. Aps a eletroforese, as molculas separados so transferidos ou
transferidas para uma segunda matriz, geralmente uma membrana de
nitrocelulose ou de difluoreto de polivinilideno (PVDF). Next, the membrane
is blocked to prevent any nonspecific binding of antibodies to the surface of
the membrane. Em seguida, a membrana bloqueada para evitar qualquer
ligao no especfica de anticorpos superfcie da membrana. Existem
vrios mtodos de deteo mas o utilizado neste caso foi o mtodo de
deteo indireta. Neste mtodo um anticorpo primrio adicionado em
primeiro lugar para se ligar ao antignio. This is followed by a labeled
secondary antibody that is directed against the primary antibody. Isto
seguido por um anticorpo secundrio marcado, que dirigido contra o
anticorpo primrio. Labels include biotin, fluorescent probes such as
fluorescein or rhodamine, and enzyme conjugates such as horseradish
peroxidase or alkaline phosphatase.