UNIVERSIDAD PARTICULAR DE CHICLAYO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MDICA

MONOGRAFIA

CURSO : MICROSCOPIA ESPECIAL Y FOTOGRAFA MEDICA.

TEMA : PREPARACIN Y COLORACIONES PARA

MICROSCOPIO ELECTRONICO

INTEGRANTES : GUERRERO RAMIREZ DIANA ELIZABETH.

MAZA MEDINA SANTOS

DOCENTE : Lic. Tm. Arellano Ubillus Juan Enrique.

CICLO : III

2014
 DEDICATORIA

Este trabajo est dedicado principalmente a Nuestro

Padre Celestial; por darnos la vida y la salud que
necesitamos da a da para hacer posible que sigamos
a delante dndonos: El conocimiento, La fuerza, el
Valor y sobre todo la Humildad para ser Profesionales
competentes y de calidad y as brindar un buen
servicio con garanta a la sociedad.
 PREPARACIONES Y COLORACIONES DE
MUESTRAS EN
MICROSCOPIO ELECTRONICO

INTRODUCCION
Los resultados de los estudios que emplean la tcnica de microscopa
electrnica de transmisin (TEM, siglas en ingls) para el anlisis de
materiales, dependen crticamente de la calidad de las lminas. En el
caso de muestras que contienen intercaras metal-cermica, es bien
sabido que el principal reto de la preparacin de lminas para el
Microscopio electrnico de Trasmisin (TEM); es el diferente ritmo de
adelgazamiento que presentan ambos tipos de slidos ante el ataque
inico convencional.
En fechas relativamente recientes, se ha desarrollado un sistema de
adelgazamiento que permite el uso de un haz inico focalizado (FIB,
siglas en ingls), cuya intensidad y rea de
Trabajo puede ser manipulada de forma precisa. Se espera que ello
permita adecuar el trabajo de adelgazamiento a las caractersticas
composicionales y morfolgicas del material.
La microscopa electrnica es una tcnica que requiere instrumentos de
alta complejidad y personal altamente especializado. Se utiliza la
microscopa electrnica de transmisin o convencional y la de barrido.
De forma resumida, el sistema funciona mediante la aceleracin de
iones trmicos extrados de un filamento de Ga.
Los iones impactan en un rea seleccionada, con una energa y
velocidad de barrido determinada. Tras un nmero de pasadas
preestablecido, se puede proceder a la inspeccin del trabajo realizado
mediante imgenes generadas por electrones
Secundarios que son extrados de la muestra por la incidencia de los
iones acelerados. Estas imgenes son anlogas a las obtenidas
mediante microscopa electrnica de barrido (SEM, siglas en ingls)
convencional. Denominaremos el dispositivo por sus iniciales inglesas,
FIB-SEM.
OBJETIVOS

Aprender y aplicar las diferentes tcnicas de coloracin en

Microscopio Electrnico.

Adquirir los conocimientos necesarios para la preparacin

de muestras en Microscopio Electrnico.

Garantizar la importancia de la Microscopia electrnica en

las diferentes tcnicas
CAPITULO I
1.-MICROSCOPIAELECTRONICA
Un Microscopio electrnico es aquel que utiliza electrones en lugar
de fotones o luz visible para visualizar o formar imgenes de objetos
diminutos debido a que la potencia amplificadora de un microscopio
ptico est limitada por la longitud de onda de la luz visible.

Las muestras para microscopa electrnica deben fijarse en

glutaraldehdo, que se solicita al laboratorio de Anatoma Patolgica con
las instrucciones para la toma y fijacin de la muestra. Los fragmentos
deben ser pequeos y tienen que fijarse en forma de varios trocitos
cuboideos de tejido de no ms de 1 mm, obtenidos con hoja de afeitar o
bistur limpios. Las muestras se incluyen en resinas sintticas (Epon) y
se practican cortes 10 veces ms delgados que los de microscopa de luz
llamados cortes ultrafinos. La tincin se realiza con sales de metales
pesados como citrato de plomo, tetrxido de Osmio o acetato de uranilo,
que permiten un contraste adecuado del tejido bajo el haz de electrones.
Los cortes ultrafinos se montan sobre grillas de cobre, se tien y se
observan al microscopio electrnico. Para documentar los hallazgos es
necesario obtener fotografas en blanco y negro de las preparaciones.
Las grillas, muestras, inclusiones y fotografas se guardan en un archivo
especial durante aos.

TECNICAS EN MICROSCOPIA ELECTRONICA DE

TRANSMISION

En esta tcnica la preparacin teida es traspasada por un haz de

electrones, lo cual proporciona la imagen ultra fina sobre una pantalla ad
hoc. El microscopio electrnico de transmisin es capaz de generar un
haz de electrones a alta tensin (80kV) y concentrarlo sobre la
preparacin mediante un complejo sistema de campos
electromagnticos equivalentes a las "lentes" del microscopio de luz.
La mayor utilidad de la microscopa electrnica de transmisin
es en Oncologa. Es particularmente til en el diagnstico de
neoplasias malignas, ya que permite identificar la estirpe o
diferenciacin de una neoplasia. Por ejemplo, al demostrar elementos de
diferenciacin no apreciables a microscopa de luz como desmosomas,
propios de clulas epiteliales, que orientan hacia carcinoma; micro
vellosidades bien desarrolladas, que sugieren adenocarcinoma; en
melanoma y grnulos densos rodeados por membrana en carcinoma
neuroendocrino.

En conjunto con la inmunohistoqumica permite identificar un alto

porcentaje de las neoplasias malignas (95%). Igualmente, en el
diagnstico diferencial de metstasis tumor maligno indiferenciado en
ganglio linftico (melanoma maligno, carcinoma, linfoma). En el
frecuente dilema adenocarcinoma versus mesotelioma maligno pleural;
tambin en el diagnstico de la granulomatosis de clulas de
Langerhans.

Esta tcnica juega un papel muy importante en el estudio de las

enfermedades del rin, en particular en glomerulopatas primarias y
secundarias. Junto con la inmunofluorescencia directa representan el
estudio bsico para llegar a un diagnstico preciso en cada caso.

Otras aplicaciones son la identificacin de partculas virales

intranucleares y citoplasmticas. Tambin en enfermedades metablicas
para estudiar el tipo de inclusiones o cuerpos de inclusin en las clulas
afectadas (Niemann-Pick, Tay-Sachs, amiloide,). En enfermedades
ampollares de la piel es el nico mtodo para diferenciar variedades de
epidermlisis bulosa congnita.

En ciertas enfermedades respiratorias se ha detectado un trastorno

importante del transporte mucociliar. Ultra estructuralmente, se
observan cilios con alteraciones en nmero y disposicin del esqueleto
ciliar micro tubular y ausencia de los brazos internos de dinena y de las
espculas radiales del esqueleto micro tubular constituyendo el llamado
sndrome de cilios inmviles o disquinesia ciliar. Estas anomalas
representan un trastorno de carcter congnito y la microscopa
electrnica es el nico mtodo que permite hacer un diagnstico preciso
en estos pacientes.
En muchos casos la informacin negativa, o sea la ausencia de algn
carcter morfolgico especfico, puede ser tambin muy til. El examen
cuidadoso y la evaluacin de las caractersticas ultra estructurales a la
luz del cuadro clnico y la imagen histopatolgica al microscopio de luz y
los estudios inmunohistoqumicos, permiten un diagnstico de certeza
en la mayora de los casos.

1.1Tcnica de la Replica:

Debido a que todas las muestras no pueden ser introducidas en el SEM

(ya sea por tamao, forma, etc.), la tcnica de la rplica permite obtener
una copia fiel de la muestra conservando sus caractersticas
superficiales. La muestra a la cual se aplic este
Procedimiento fue una moneda, y su procedimiento es el siguiente:

Se limpia con alcohol la superficie que ser copiada (moneda) y se seca.

Luego se coloca un pequeo fragmento de celulosa en la parte de la
superficie que se desea copiar, y despus se le hecha de 2 a 3 gotas de
acetona en el fragmento de celulosa.
Se deja secar la acetona 5 a 10 minutos y se retira el fragmento, de esta
manera obtenemos la rplica de la superficie.
Luego:
Colocamos esta replica sobre la base que contiene la cinta de carbn.
Seguidamente llevamos las muestras al metalizador que har el
recubrimiento por Sputtering.
1.2 Tcnica de recubrimiento con Oro (Sputtering)

Cuando el propsito del anlisis de una muestra no incluye la obtencin

de un espectro de RX, un elemento que se utiliza frecuentemente para
recubrir la superficie es el oro.
Consiste en una fuente de alimentacin en corriente continua regulable
de 1 a 3 KV conectada por una parte a una tarjeta de oro u oro-paladio y
por otra parte al porta muestras. El conjunto va acoplado a una bomba
de vaco. La introduccin de un gas tal como el argn en la campana de
vaco provoca que los tomos de argn impacten en la tarjeta de oro y
se desprendan tomos de dicha tarjeta que son atrados hacia la
muestra en la cual quedan depositados proporcionando un espesor de
recubrimiento que depende del tiempo de exposicin.
Maquina utilizada en el laboratorio de
Sputtering.

Recubrimiento de una muestra mediante

Sputtering.
1.3 Tcnica de recubrimiento con carbono (Evaporacin Trmica)

En el caso de precisarse un anlisis elemental en una muestra no conductora

es necesario recubrir la superficie de un elemento lo ms transparente posible
a los RX. Este elemento es el carbono.
Uno de los tipos de metalizadores de carbono se muestra esquemticamente
en el grfico. Consiste en dos electrodos conectados a una fuente de corriente
alterna de bajo voltaje y alta intensidad entre los que se intercala una barra de
carbono terminada en una punta afilada.
Al pasar la corriente, la punta de la barra se va evaporando, de forma que
roca la muestra con una fina capa de carbono.
La punta va acoplada a un muelle que la mantiene en todo momento en
contacto con el otro electrodo. Todo el conjunto est encerrado en vaco con el
fin de facilitar la deposicin de la pelcula de carbono sobre la muestra.

Recubrimiento con carbono

mediante Evaporacin Trmica

Recipientes de uso comn para la

inclusin de las muestras en MET.
Normalmente las muestras se marcan
con un trozo de papel indicando algn
tipo de convencin que ilustre

posteriormente su
contenido.

Los tejidos debidamente incluidos son cortados con el ultra

micrtomo, dependiendo del tipo de micrtomo utiliza cuchillas de
diamante o vidrio (la ms comn). Procesador automtico de tejidos.

Las tcnicas utilizadas son :

2 a) Crioultramicrotoma: Consiste en la realizacin de cortes ultra finos

por congelacin)

3 b)Criosubstitucin y PLT : Esta tcnica consiste en realizar la

substitucin del agua del material fijado por congelacin por otros agentes
de inclusin y todo este proceso se hace a baja temperatura

4 La PLT: consiste en realizar procesos de inclusin, de materiales fijados

qumicamente; pero se realiza una reduccin progresiva de la
temperatura en los pasos de deshidratacin, inclusin y polimerizacin
en diferentes resinas.

5 Fijacin a Alta presin permite la congelacin de muestras de 200m de

 espesor, sin los artefactos de la fijacin qumica. Con este sistema se
pueden observar muestras biolgicas e industrial preservando el estado
nativo y por tanto la informacin que se obtiene es real.

6 Tincin negativa y sombreados con metales pesados de materiales

particulados.

7 Tcnicas de inmunocitoqumica y otras tcnicas especiales.

Como la imagen que se forma en el TEM depende de que los electrones

puedan atravesar la muestra, sta ha de ser suficientemente delgada para
permitirlo. Todas las tcnicas de preparacin, tanto de muestras materiales
como biolgicas, persiguen el objetivo de adelgazar o conseguir secciones
muy finas del espcimen, menores a 100 nm., afectando al mnimo su
estructura original.

PREPARACION DE MUESTRAS EN MICROSCOPIO

ELECTRONICO

El proceso comienza con el tejido altamente hidratado y termina con

el tejido virtualmente libre de agua y preservado en una matriz de
resina.
Existen muchos caminos para la preparacin de tejidos para
Microcopia electrnica de transmisin.

Para este tipo de preparacin son ocho los pasos a seguir :

1.-FIJACION PRIMARIA :

Busca preservar la estructura del tejido vivo, evitando los procesos

auto lticos. Se realiza con glutaraldehdo. Su accin se centra en las
protenas.

La penetracin del glutaraldehdo es lenta, esto quiere decir que 1

mm de tejido es atravesado en una hora por el glutaraldehdo.

2.- LAVADO :

Normalmente se hace con un buffer.

Buffer: es necesario su uso debido a que el pH de los tejidos se baja
drsticamente durante el proceso de fijacin. El uso de buffer
mantiene el pH fisiolgico (7,2 a 7,4) los sistemas de buffer ms
comunes son: fosfato, s-collidine, tris-maleato y cacodylate.

3.-FIJACION SECUNDARIA :

Es llevada a cabo por la accin del tetrxido de osmio, el cual

reacciona principalmente con los lpidos. El tetrxido de osmio
generalmente no penetra ms de 0,5 mm en una hora.

4.- DESHIDRATACION :

La filosofa de la deshidratacin es el reemplazo del agua usando

etanol en series 70% 85% 95% y etanol absoluto.
5.1.- INFILTRACION DE SOLVENTES TRANSICIONALES:

Procedimiento por el cual hay transmisin de fluidos gradualmente

reemplazado por soluciones intermediarias altamente miscibles con
los agentes deshidratantes, la mayora de los protocolos emplean un
solvente transicional entre el deshidratante y la resina.

6.- INFILTRACION CON RESINA :

Mezclas de propilen oxidado con Epoxy son introducidas

reemplazando dentro de los tejidos despus de la deshidratacin. La
concentracin del solvente es minimizada gradualmente
incrementando las concentraciones de resina hasta llegar a la resina
pura.

7.- INCLUCION :

Sumergir el tejido en la resina pura.

8.-POLIMERIZACION DE LA RESINA :

Se logra acelerar el proceso de polimerizacin aumentando la

temperatura.
Recipientes de uso comn para la inclusin de las muestras en MET.
Normalmente las muestras se marcan con un trozo de papel indicando
algn tipo de convencin que ilustre posteriormente su contenido.
Los tejidos debidamente incluidos son cortados con el ultra
micrtomo, dependiendo del tipo de micrtomo utiliza cuchillas de
diamante o vidrio (la ms comn). Procesador automtico de tejidos

PROESADO DE MUESTRAS CON FIJACION POR CONGELACION PARA

HACER ESTUDIOS DE INMUNOCITOQUIMICAS

Las tcnicas utilizadas son :

8 a) Crioultramicrotoma: Consiste en la realizacin de cortes ultra

finos por congelacin)

9 b)Criosubstitucin y PLT : Esta tcnica consiste en realizar la

substitucin del agua del material fijado por congelacin por otros
agentes de inclusin y todo este proceso se hace a baja
temperatura

10 La PLT: consiste en realizar procesos de inclusin, de materiales

fijados qumicamente; pero se realiza una reduccin progresiva de
la temperatura en los pasos de deshidratacin, inclusin y
polimerizacin en diferentes resinas.

11 Fijacin a Alta presin permite la congelacin de muestras de

200m de espesor, sin los artefactos de la fijacin qumica. Con
este sistema se pueden observar muestras biolgicas e industrial
preservando el estado nativo y por tanto la informacin que se
 obtiene es real.

12 Tincin negativa y sombreados con metales pesados de materiales

particulados.

13 Tcnicas de inmunocitoqumica y otras tcnicas especiales.

PREPARACION DE MUESTRAS EN MICROSCOPIO ELECTRONICO

El proceso comienza con el tejido altamente hidratado y termina con el

tejido virtualmente libre de agua y preservado en una matriz de resina.
Existen muchos caminos para la preparacin de tejidos para Microcopia
electrnica de transmisin.

Para este tipo de preparacin son ocho los pasos a seguir :

1. FIJACION PRIMARIA :

Busca preservar la estructura del tejido vivo, evitando los procesos auto
lticos. Se realiza con glutaraldehdo. Su accin se centra en las
protenas.

La penetracin del glutaraldehdo es lenta, esto quiere decir que 1 mm

de tejido es atravesado en una hora por el glutaraldehdo.

2.- LAVADO :

Normalmente se hace con un buffer.

Buffer: es necesario su uso debido a que el pH de los tejidos se baja
drsticamente durante el proceso de fijacin. El uso de buffer
mantiene el pH fisiolgico (7,2 a 7,4) los sistemas de buffer ms
comunes son: fosfato, s-collidine, tris-maleato y cacodylate.
 3.-FIJACION SECUNDARIA :

Es llevada a cabo por la accin del tetrxido de osmio, el cual

reacciona principalmente con los lpidos. El tetrxido de osmio
generalmente no penetra ms de 0,5 mm en una hora.

4.- DESHIDRATACION :

La filosofa de la deshidratacin es el reemplazo del agua usando

etanol en series 70% 85% 95% y etanol absoluto.

5.- INFILTRACION DE SOLVENTES TRANSICIONALES:

Procedimiento por el cual hay transmisin de fluidos gradualmente

reemplazado por soluciones intermediarias altamente miscibles con los
agentes deshidratantes, la mayora de los protocolos emplean un
solvente transicional entre el deshidratante y la resina.

6.- INFILTRACION CON RESINA :

Mezclas de propilen oxidado con Epoxy son introducidas reemplazando

dentro de los tejidos despus de la deshidratacin. La concentracin del
solvente es minimizada gradualmente incrementando las
concentraciones de resina hasta llegar a la resina pura.

7.- INCLUCION :

Sumergir el tejido en la resina pura.

8.-POLIMERIZACION DE LA RESINA :

Se logra acelerar el proceso de polimerizacin aumentando la

temperatura.

Recipientes de uso comn para la inclusin de las muestras en MET.

Normalmente las muestras se marcan con un trozo de papel indicando
algn tipo de convencin que ilustre posteriormente su contenido.
Los tejidos debidamente incluidos son cortados con el ultra micrtomo,
dependiendo del tipo de micrtomo utiliza cuchillas de diamante o vidrio
(la ms comn). Procesador automtico de tejidos

PREPARACION DE MUESTRAS EN MICROSCOPIO ELECTRONICO

El proceso comienza con el tejido altamente hidratado y termina con el

tejido virtualmente libre de agua y preservado en una matriz de resina.
 Existen muchos caminos para la preparacin de tejidos para Microcopia
electrnica de transmisin.

Para este tipo de preparacin son ocho los pasos a seguir :

2. FIJACION PRIMARIA :

Busca preservar la estructura del tejido vivo, evitando los procesos auto
lticos. Se realiza con glutaraldehdo. Su accin se centra en las
protenas.

La penetracin del glutaraldehdo es lenta, esto quiere decir que 1 mm

de tejido es atravesado en una hora por el glutaraldehdo.

2.- LAVADO :

Normalmente se hace con un buffer.

Buffer: es necesario su uso debido a que el pH de los tejidos se baja
drsticamente durante el proceso de fijacin. El uso de buffer
mantiene el pH fisiolgico (7,2 a 7,4) los sistemas de buffer ms
comunes son: fosfato, s-collidine, tris-maleato y cacodylate.

3.-FIJACION SECUNDARIA :
 Es llevada a cabo por la accin del tetrxido de osmio, el cual
reacciona principalmente con los lpidos. El tetrxido de osmio
generalmente no penetra ms de 0,5 mm en una hora.

4.- DESHIDRATACION :

La filosofa de la deshidratacin es el reemplazo del agua usando

etanol en series 70% 85% 95% y etanol absoluto.

5.- INFILTRACION DE SOLVENTES TRANSICIONALES:

Procedimiento por el cual hay transmisin de fluidos gradualmente

reemplazado por soluciones intermediarias altamente miscibles con los
agentes deshidratantes, la mayora de los protocolos emplean un
solvente transicional entre el deshidratante y la resina.

6.- INFILTRACION CON RESINA :

Mezclas de propilen oxidado con Epoxy son introducidas reemplazando

dentro de los tejidos despus de la deshidratacin. La concentracin del
solvente es minimizada gradualmente incrementando las
concentraciones de resina hasta llegar a la resina pura.

7.- INCLUCION :

Sumergir el tejido en la resina pura.

8.-POLIMERIZACION DE LA RESINA :

Se logra acelerar el proceso de polimerizacin aumentando la

temperatura.
FIJADORES UTILIZADOS EN MICROSCOPIO
ELECTRONICO

A.-GLUTARALDEHIDO
El glutaraldehdo es un dialdehdo y para microscopia electrnica se
necesita un reactivo limpio y nuevo. Se obtiene comercialmente en
concentraciones de 25%, 50% y 70%, especialmente preparado para su
uso en microscopa electrnica. Las soluciones se guardan en el
refrigerador a 4C.
Para la fijacin se prepara solucin de 3% o 5% con amortiguador.
El glutaraldehdo fija muy bien la matriz de los organelos y el
Citoplasma,
Conservando bien ribosomas, miorotubulos, etc.
Su desventaja es un bajo contraste de las estructuras, sobre todo
membranas, por eso se usa principalmente en combinacin con otros
fijadores el tiempo de fijacin es de 3 hasta 5 horas.
B.- TETRAOXIDO DE OSMIO
Este excelente fijador para microscopa electrnica se consigue en forma
de cristales amarillos protegidos en tubos de vidrio o tambin en
solucin Acuosa al 4%, bajo nitrgeno contenido en la misma ampolleta.
Para la fijacin se emplean soluciones al 1% o al 2%.
Disolver los cristales de tetraxido de osmio en el agua destilada tarda
mucho tiempo Recomendndose preparar la solucin.
con un da de anticipacin a su empleo. Para guardar esta solucin se
deben usar recipientes de vidrio color mbar que hayan sido lavados
perfectamente con mezcla crmica (ac. Sulfrico y Ac. Crmico). Las
ampolletas que contienen el tetraxido de osmio se lavan tambin
perfectamente en mezcla crmica y se enjuagan en agua destilada
antes de romperse. Utilizando un lpiz diamante o una lima se rayan las
paredes de la ampolleta y se deposita sta en el recipiente de color
mbar. Una vez dentro se rompe la ampolleta con un agitador o se
provoca el choque de la ampolla contra las paredes del recipiente.
El tetraxido de osmio es peligroso y txico, ataca la mucosa nasal,
bucal, etc. siendo obligado a trabajar con extractor o al aire libre. Si
queremos guardar el resto de la solucin que no utilizamos
inmediatamente, es mejor preparar soluciones al 4% y guardar est en
tubos preferentemente bajo solucin de 1% o 2% para uso inmediato.
Adems de conservar bien todas las estructuras celulares aumentan el
contraste de ellas y estabiliza los aceites.
El tiempo de fijacin recomendado es de 1 a 2 horas en refrigeracin.

C.- PERMANGANATO DE POTASIO (KMnO )

Este reactivo se us mucho al principio de la microscopa electrnica. Su

empleo en estos aos es muy limitado. Se utiliza an para la
demostracin
de las membranas. Con KMnO no se conserva la matriz de los organelos,
ni el contenido del ncleo y se pierden los ribosomas. Las gotas de
aceite cambian su estructura y forman artefactos y las vacuolas se
modifican. Se puede utilizar para la demostracin de estructuras
membranosas de las clulas vegetales como el retculo endoplsmatico
y el aparato de Golgi.

D.- FORMALDEHIDO
La fijacin con formaldehdo es similar a la fijacin con glutaraldehdo,
aunque generalmente no se obtienen resultados tan buenos. El
formaldehdo comercial no es lo bastante limpio para su uso en
microscopa Electrnica, emplendose una solucin acuosa alcalinizada
con polvo paraformaldehdo a una temperatura de 60C.
Maquina utilizada en el laboratorio de
Sputtering.
Recubrimiento de una muestra mediante
Sputtering.

.
Recubrimiento con carbono mediante

Evaporacin Trmica.

.
Recipientes de uso comn para la inclusin de las muestras en MET.
Normalmente las muestras se marcan con un trozo de papel indicando algn
tipo de convencin que ilustre posteriormente su contenido.
Los tejidos debidamente incluidos son cortados con el ultra micrtomo,
dependiendo del tipo de micrtomo utiliza cuchillas de diamante o vidrio (la
ms comn). Procesador automtico de tejidos

14 PROESADO DE MUESTRAS CON FIJACION POR CONGELACION PARA

HACER ESTUDIOS DE INMUNOCITOQUIMICAS

Las tcnicas utilizadas son :

15 a) Crioultramicrotoma: Consiste en la realizacin de cortes ultra finos

por congelacin)

16 b)Criosubstitucin y PLT : Esta tcnica consiste en realizar la

substitucin del agua del material fijado por congelacin por otros agentes
de inclusin y todo este proceso se hace a baja temperatura

17 La PLT: consiste en realizar procesos de inclusin, de materiales fijados

qumicamente; pero se realiza una reduccin progresiva de la
temperatura en los pasos de deshidratacin, inclusin y polimerizacin
en diferentes resinas.

18 Fijacin a Alta presin permite la congelacin de muestras de 200m de

espesor, sin los artefactos de la fijacin qumica. Con este sistema se
pueden observar muestras biolgicas e industrial preservando el estado
nativo y por tanto la informacin que se obtiene es real.
19 Tincin negativa y sombreados con metales pesados de materiales
particulados.

20 Tcnicas de inmunocitoqumica y otras tcnicas especiales.

Como la imagen que se forma en el TEM depende de que los electrones

puedan atravesar la muestra, sta ha de ser suficientemente delgada
para permitirlo. Todas las tcnicas de preparacin, tanto de muestras
materiales como biolgicas, persiguen el objetivo de adelgazar o
conseguir secciones muy finas del espcimen, menores a 100 nm.,
afectando al mnimo su estructura original.

CONCLUCIONES

Adquirimos conocimientos para detectar los diferentes tipos de organismos

infecciosos, mediante Tcnicas y coloraciones utilizadas en Microscopia
electrnica.

Aprendimos las diferentes tcnicas utilizadas en Microscopio electrnico.

Segn lo aprendido garantizaremos anlisis de calidad .

DISCUCIONES
GLOSARIO
FIB Ionico focalizado
Grillas.
Desmosomas.
Glutaraldehido.
Cuboideos.
Uranilo
Ultrafino
Tetroxido
Osmio
Miorotubulos.
Desmosomas
Microvellosidades.
Melanosomas.
Inmunohistoquimica
Granulomatosis.
Dineina.
Crioultramicrotomia.
Criosubstitucion
PREPACIONES DE MUESTRA EN MICROSCOPIO DE ELCTRONICO

Preparacin de muestras biolgicas para el TEM

En general, la preparacin de estas muestras siempre sigue el mismo protocolo bsico:

fijacin qumica, lavado, deshidratacin en series de concentraciones crecientes de alcohol
o acetona, inclusin en resina y polimerizacin. Segn el objetivo perseguido, en alguno de
estos pasos se incluye una etapa de tincin con metales pesados, tales como el osmio, el
wolframio o el uranio. La siguiente etapa consiste en obtener cortes muy finos del material
polimerizado. Para ello se utiliza un ultra micrtomo que s est disponible en el Servicio.

Preparacin de muestras de materiales en polvo para el TEM

En la preparacin de este tipo de muestras slo hay que diluir una cantidad muy pequea de
muestra en un disolvente orgnico que no la afecte, habitualmente dicloroetano o acetona.
Tambin se puede utilizar agua si no hay alternativa. A continuacin se busca la mxima
dispersin sumergiendo la solucin en un bao de ultrasonidos y, al cabo de un tiempo, ya
se puede depositar una gota sobre una rejilla filmada con carbono para ser observada
directamente una vez se haya secado.

Preparacin de muestras materiales compactas para el TEM

Para este tipo de muestras se sigue un proceso de adelgazamiento en el que es necesario la

utilizacin de varios aparatos. En primer lugar el usuario ha de aportar una muestra que no
supere las 200 m. de grosor. el primer paso es cortar un disco de 3 mm. de dimetro con el
Ultrasonic Disk Cutter pues este es el tamao de la muestra que se puede introducir en el
TEM. El siguiente paso es excavar el disco por ambas caras hasta obtener una zona central
de unas 20 m. con el Dimpling Grinder. Una vez conseguido, se introduce este disco en
el Ion Milling para que sea atacado por ambos lados con sendos haces de iones de argn
hasta que estos realizan un pequeo orificio central, alrededor del cual queda una zona
suficientemente delgada.
MICROSCOPIO ELECTRONICO DE
TRASMICION

TEM POR SUS SIGLAS EN INGLES O MET EN ESPAOL

Es un Microscopio que utiliza un haz de electrones