ANEXOS

ANEXO I

Clculos para a Preparao de Soluo Tampo de Fosfato de Potssio

0,1 M, p.H. 6,8

Dados:
M(K2HPO4) = 174,18 g/mol
M(KH2PO4)=136,09 g/mol

Clculo do nmero de mol n necessrio para a realizao de uma soluo

de concentrao 1M e de volume 25 mL:

Clculo da massa m correspondente a 0,025 mol de cada um dos

reagentes:

de K2HPO4

de KH2PO4
 ANEXO II

Clculos para Preparao de Soluo Tampo de Tris-HCl 0,1 M, p.H. 7,0

Dados:
M(HCl) = 36,5 g/mol
Densidade da soluo de HCl a 37% = 1,19 g/mL 1,19 Kg/L
M((HOCH2)3CNH2)= 121 g/mol

Clculo do nmero de mol n necessrio para a realizao de uma soluo

de concentrao 0,1M e de volume 100 mL:

Clculo da massa m, em gramas, correspondente a 0,010 mol de

(HOCH2)3CNH2:

de (HOCH2)3CNH2

Clculo do volume v, em mL, de HCl a 37 % necessrio para a realizao

de uma soluo de concentrao 0,1M e de volume 100 mL:

1. Clculo do valor de massa m, em gramas, de HCl por litro de

soluo:
de HCl por Litro de soluo
2. Clculo da massa m, em gramas, correspondente a 0,010 mol
necessrias para a realizao da soluo de HCl de
concentrao 0,1M e de volume 100 mL:

de HCl

3. Clculo do volume v, em mL, da soluo de HCl 37% necessrio:

de soluo de HCl a 37%.

 ANEXO III

Clculos para Preparao das solues padro de o-np

Dados:
M(C6H5NO3) = 139,1 g/mol

Clculo do nmero de moles n necessrio para a realizao de uma

soluo de concentrao 1 mM e de volume 100 mL:

Clculo da massa m, em gramas, correspondente a de

C6H5NO3:

de C6H5NO3

Clculo dos volume V1, em mL, que iro ser retirados da soluo-me
para realizao das solues padro:

Sendo:
C1 a concentrao da soluo-me 1000 M;
V1 o volume a ser retirado da soluo-me;
C2 a concentrao da soluo padro a realizar de 5 a 50 M;
V2 o volume total da soluo padro 10 mL.
Tabela A-I. Resumo dos valores obtidos nos clculos necessrios para a realizao das solues padro
de o-np
Volume retirado da Volume de soluo Volume total da Concentrao da
soluo-me (mL) tampo adicionada soluo (mL) soluo padro
(mL) (M)

0,05 9,95 10 5
0,10 9,90 10 10
0,15 9,85 10 15
0,20 9,80 10 20
0,25 9,75 10 25
0,30 9,70 10 30
0,35 9,65 10 35
0,40 9,60 10 40
0,45 9,55 10 45
0,50 9,50 10 50
 ANEXO IV

Clculos para Preparao das solues padro de Lactozym 2600 L para

o ensaio de Bradford

Dados:

Densidade de Lactozym 2600 L= 1,115 g/mL

Clculo da concentrao C2 , em grama por mililitro, da soluo me:

Clculo das concentraes C2, em grama por mililitro, das solues

padro feitas a partir da soluo-me:

Sendo:
C1 a concentrao da soluo-me 0,1115 g/mL;
V1 o volume que foi retirado da soluo-me de 2 a 60 L;
C2 a concentrao da soluo padro;
V2 o volume total da soluo padro 1 mL.
Tabela A-II. Resumo dos valores obtidos nos clculos necessrios para a realizao das solues padro
de protena
Volume retirado da Volume de soluo Volume total da Concentrao da
soluo-me (L) tampo adicionada soluo (mL) soluo padro
(L) (g/mL)

2 998 1 0,0002
5 995 1 0,0006
10 990 1 0,0011
15 985 1 0,0017
20 980 1 0,0022
25 975 1 0,0028
30 970 1 0,0033
40 960 1 0,0045
50 950 1 0,0056
60 940 1 0,0067
 ANEXO V

Clculo para a Preparao das diluies de Lactozym 2600 L utilizadas

paras os ensaios com enzima livre

Dados:
Densidade de Lactozym 2600 L= 1,115 g/mL

Clculo das concentraes C2, em grama por mililitro, das solues

padro feitas a partir de Lactozym 2600 L:

Sendo:
C1 a concentrao da preparao enzimtica 1,115 g/mL;
V1 o volume que foi retirado da soluo-me de 0,004 mL a 1 mL;
C2 a concentrao da soluo padro;
V2 o volume total da soluo padro 10 mL.

Tabela A-III. Resumo dos valores obtidos nos clculos necessrios para a realizao das diluies de
Lactozym 2600 L
Volume retirado da Volume de soluo Volume total da Concentrao da
soluo-me (L) tampo adicionada soluo (mL) soluo padro
(L) (g/mL)

0,02 9,980 10 0,0023

0,01 9,990 10 0,0012
0,008 9,992 10 0,0009
0,005 9,995 10 0,0006
0,004 9,994 10 0,0005
 ANEXO VI

Clculos para a Preparao de Soluo de cido Sulfrico 12N

Dados:
Densidade de H2SO4 95-97%= 1,84 g/mL
Equivalente-grama (E) de H2SO4= 49 g

Clculo do nmero de equivalentes, n eq., existentes numa soluo de

H2SO4 de concentrao 12N e de volume 50 mL:

Clculo da massa, m, de H2SO4 existente em 0,6 equivalentes:

Clculo do volume, v, de soluo de H2SO4 a 95-97% necessria para a

realizao de uma soluo de H2SO4 de concentrao 12N, tendo em
conta a massa, m calculada anteriormente:
 ANEXO VII

Clculo para a Preparao das solues padro de glucose

Dados:
M(C6H12O6) = 180,16 g/mol

Clculo do nmero de moles n necessrio para a realizao de uma

soluo de concentrao 50 mM e de volume 50 mL:

Clculo da massa m, em gramas, correspondente a de

C6H12O6:

de C6H12O6

Clculo dos volume V1, em mL, que iro ser retirados da soluo-me
para realizao das solues padro:

Sendo:
C1 a concentrao da soluo-me 50 mM;
V1 o volume a ser retirado da soluo-me;
C2 a concentrao da soluo padro a realizar de 0,25 a 2 mM;
V2 o volume total da soluo padro 10 mL.
Tabela A-IV. Resumo dos valores obtidos nos clculos necessrios para a realizao das solues padro
de glucose
Volume retirado da Volume de soluo Volume total da Concentrao da
soluo-me (mL) tampo adicionada soluo (mL) soluo padro
(mL) (mM)

0,05 9,95 10 0,25

0,10 9,90 10 0,50
0,15 9,85 10 0,75
0,18 9,82 10 0,90
0,20 9,80 10 1,00
0,25 9,75 10 1,25
0,30 9,70 10 1,50
0,35 9,65 10 1,75
0,38 9,62 10 1,90
0,40 9,60 10 2,00