Estudo Farmacognóstico e Avaliação Antimicrobiana de Richardia Brasiliensis Gomez (Rubiaceae)

UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIS
Instituto de Cincias Biolgicas
ADDA DANIELA LIMA FIGUEIREDO
Estudo Farmacognstico e Avaliao

Antimicrobiana de Richardia brasiliensis
Gomez (Rubiaceae)
GOINIA
2005
Livros Grtis
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2
ADDA DANIELA LIMA FIGUEIREDO
Estudo Farmacognstico e Avaliao

Antimicrobiana de Richardia brasiliensis
Gomez (Rubiaceae)
Dissertao de mestrado apresentada ao programa

de Ps-Graduao em Biologia Celular e Molecular
do Instituto de Cincias Biolgicas da Universidade
Federal de Gois como quesito parcial para obteno
do ttulo de Mestre em Biologia.
rea de Concentrao: Fisiologia Vegetal
ORIENTADOR: Prof. Dr. Jos Realino de Paula
GOINIA
2005
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No passo pela vida...

Bom mesmo ir a LUTA com determinao.
Abraar a vida e viver com PAIXO.
Perder com CLASSE e vencer com OUSADIA,
porque o mundo pertence a quem se atreve E
a VIDA muito para ser insignificante!"
(Charles Chaplin)
4
DEDICATRIA
A DEUS que me possibilitou a ddiva, em especial, de ser me ...
E
Ao meu filho Marco Tlio, razo do meu viver...
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AGRADECIMENTOS
A Deus, por me permitir viver e apreciar mais um momento to especial.
Ao Marco Tlio por existir... que sentido teria a minha vida sem esse prncipe?
Aos meus pais, por todo amor e apoio ao longo de toda a minha vida, sendo pessoas
simplesmente MARAVILHOSAS.
Aos meus irmos que so minhas grandes paixes... minha vida.
A Dri e a L que s vieram a somar a minha famlia, sendo pessoas indispensveis
e insubstituveis. Amo vocs muuuuuito!!!
Ao meu orientador Prof. Jos Realino que uma pessoa espetacular e um grande
orientador. Muito obrigada pelos maravilhosos dois anos de ensinamentos,
dedicao e pacincia.
A Prof Maria Teresa Freitas Bara que acompanhou de perto estes dois anos de
mestrado da maneira mais participativa e afetuosa possvel. Professora, muitssimo
obrigada por tudo... a senhora realmente foi um mais um anjo que Deus colocou em
minha vida.
A Prof Fabiana Cristina Pimenta que me auxiliou no fim desta caminhada, com
toda disposio, pacincia e sabedoria, e a quem eu sou eternamente grata pelos
ensinamentos.
A Prof Maria Helena Resende e ao Prof Heleno Dias Ferreira pela honra de me
transmitirem seus conhecimentos.
A Marlia e a Keila que se mostraram amigas to especiais: companheiras,
divertidas, solidrias, compreensivas e sbias. Obrigada por estarem comigo nestes
dois ltimos anos de minha vida, em especial pelo apoio e amizade nestes ltimos
meses.
6
Aos amigos de laboratrio, Renan, Maria do Carmo, Paula, Sirley, Lucy, Dna.
Cllia, pelos momentos de diverso e de muito trabalho e, em especial, pela
pacincia e companheirismo.
Aos professores do Curso de Ps-Graduao em Biologia Celular e Molecular
pelos conhecimentos transmitidos, pelo brilhantismo, pelo grande apoio e amizade
dedicadas. Em especial a Prof Eliane S. Seraphin que ser sempre para mim, o
exemplo de uma pessoa tica, uma excelente profissional e uma grande amiga.
Muito obrigada!!!
A todos os meus amigos, em especial a Sandra e a Kaysmer, que so pessoas
apaixonantes (minhas irmzinhas, mais velha e mais nova respectivamente), por me
ajudarem a crescer enquanto pessoa, a aproveitar os bons momentos e superar as
crises. Amo vocs!!!

7
LISTA DE FIGURAS
APRESENTAO GERAL
Figura 1- 2: Richardia brasiliensis Gomez no Horto de Plantas Medicinais da Faculdade de
Farmcia da Universidade Federal de Gois. 1- Aspecto geral. 2- Detalhe das folhas e
inflorescncia.......................................................................................................................19
Captulo 01: ESTUDO FARMACOGNSTICO DA PARTE AREA DE Richardia
brasiliensis GOMEZ (RUBIACEAE)
Figura 1 - 4: Cortes paradrmicos das folhas de Richardia brasiliensis Gomez. 1-
Epiderme superior com estmatos paracticos e clulas epidrmicas de parede sinuosa. 2-
Tricoma tector unicelular de parede verrucosa na epiderme superior. 3- Epiderme inferior
com estmatos paracticos e clulas epidrmicas com parede ondeada. 4- Tricoma tector
unicelular de parede verrucosa na epiderme inferior (C.E . clula epidrmica; Tr
tricoma; Es estmato).......................................................................................................31
Figura 5 - 7: Seco transversal da internervura no tero mdio inferior da folha de
Richardia brasiliensis Gomez. 5- Detalhe do parnquima palidico, epiderme unisseriada
e parnquima lacunoso. 6- Feixes vasculares entre parnquima palicdico e parnquima
lacunoso. 7- Idioblastos contendo rfides no parnquima lacunoso (Tr tricoma; P.p.
parnquima palidico; P.l. parnquima lacunoso; Ep epiderme; Epi epiderme
inferior; F.v. feixe vascular).............................................................................................32
Figura 8 - 9: Seco transversal da nervura principal e borda mediana da folha de
Richardia brasiliensis Gomez. 8- Aspecto geral da nervura principal. 9- Detalhe do feixe
vascular central (FVC feixe vascular central; FVL feixe vascular lateral; Epi
epiderme inferior; Xi xilema; Fl floema; Pc parnquima
clorofiliano)..........................................................................................................................33
8
Figura 10 - 11: Seco transversal do pecolo de Richardia brasiliensis Gomez. 10-
Aspecto geral do pecolo. 11- Detalhe do feixe vascular central (Fv Feixa vascular; Fvl
feixe vascular lateral; Xi xilema; Fl floema; Epi epiderme inferior; Tr tricoma; Cl
colnquima)..........................................................................................................................34
Figura 12 - 14: Seco transversal do caule em crescimento secundrio de Richardia
brasiliensis Gomez. 12- Aspecto geral do caule. 13- Detalhe da epiderme apresentando
estmato e base de tricoma tector. 14- Detalhe do feixe vascular central (Est estmato;
Cse cmara sub-estmtica; Tr tricoma; Ep epiderme; Pc parnquima cortical; Xi
xilema; Fl floema; Pm parnquima medular).................................................................35
Figura 15 - 16: Microscopia de p da parte area de Richardia brasiliensis Gomez. 15-
Tricoma tector unicelular de parede verrucosa. 16- Rfides de oxalato de
clcio....................................................................................................................................36
Captulo 02: ANATOMIA E PROSPECO FITOQUMICA DA RAIZ DE
Richardia brasiliensis Gomez (RUBIACEAE)
Figura 1: Detalhe das razes de Richardia brasiliensis Gomez no Horto de Plantas
Medicinais da UFG..............................................................................................................45
Figura 2 - 4: Seco transversal da raiz principal em crescimento secundrio de Richardia
brasiliensis Gomez. 2- Aspecto geral do sber. 3- Idioblastos contendo rfides na regio
parenquimtica. 4- Detalhe do feixe vascular central (Su sber; Id idioblasto; Xi
xilema; Fl floema).............................................................................................................51
Figura 5 - 6: Microscopia de p das razes de Richardia brasiliensis Gomez. 5- Rfides de
oxalato de clcio. 6- Gros de amido e rfides em luz polarizada (Rf rfide; GA gro de
amido)..................................................................................................................................52
9
LISTA DE TABELAS
Captulo 03: AVALIAO ANTIMICROBIANA DAS PARTES AREA E RAZES
DE Richardia brasiliensis GOMEZ (RUBIACEAE)
Tabela I: Procedncia das cepas bacterianas e de Candida
albicans................................................................................................................................60
Tabela II: Atividade antimicrobiana do extrato etanlico bruto das partes areas e da raiz
de Richardia brasiliensis Gomez (Rubiaceae) frente a diferentes
microrganismos....................................................................................................................65
10
RESUMO
Richardia brasiliensis Gomez uma planta invasora utilizada popularmente como
expectorante, emtico e diafortico atravs de infuso ou decocto da raiz. O presente
trabalho objetivou caracterizar anatomicamente, realizar densidade estomtica e anlise
fitoqumica das partes areas e das razes, a fim de fornecer subsdios farmacognsticos ao
controle de qualidade da droga vegetal e taxonmicos a famlia. A folha anfiestomtica
apresentando nas epidermes superior e inferior, estmatos paracticos e tricomas tectores
unicelulares de paredes verrucosas. A nervura principal apresenta feixe vascular colateral.
O pecolo possui feixe vascular em forma de arco e dois pequenos feixes vasculares
laterais. J a seco transversal do caule em crescimento secundrio apresenta aspecto
quadrangular. Na microscopia de p das partes areas observou-se a presena de rfides de
oxalato de clcio e fragmentos de feixes vasculares com espessamento em anel. A raiz
principal em crescimento secundrio, apresenta sber com vrias camadas de clulas,
parnquima cortical com grande quantidade de gros-de-amido e idioblastos contendo
rfides de oxalato de clcio. Na prospeco fitoqumica das razes verificou-se a presena
de cumarina, resina, esterides e triterpenides. J na prospeco fitoqumica, verificou-se
a presena de metablitos secundrios como: cumarinas, flavonides, alcalides, resina,
esterides e triterpenides. Alm disso, o presente trabalho objetivou estudar a atividade
antibacteriana do extrato etanlico bruto, das partes areas e das razes atravs da
determinao da concentrao inibitria mnima (CIM) para 24 cepas bacterianas e
Candida albicans. A semeadura das culturas de microrganismos ocorreu com o auxlio do
inoculador de Steers. O extrato etanlico bruto da parte area de R. brasiliensis apresentou
potencial antimicrobiano superior ao extrato etanlico bruto da parte subterrnea.
Enterobacter cloacae FT 505 e as diferentes cepas de Staphylococcus aureus
demonstraram ser menos sensveis ao extrato etanlico bruto das razes que o extrato
etanlico bruto da parte area.

11
ABSTRACT
Richardia brasiliensis Gomez is a weeds used as expectorant, emetic and popularly
diaphoretic through infusion or decocta of the root. The present work objectified to
characterize the anatomy, stomatal density and to realize the phytochemical screening of
the aerial parts and the roots, in order to supply the pharmacognostic to quality control of
the plant drug and taxonomic subsidies to the family. The leaf is anphystomatic, presenting
both epidermis, paracytic stomata and unicellular non-glandular trichome costed by a
papillose cuticle. The midrib presents collateral vascular bundle. Petiole possess vascular
bundle in arc form and two small lateral. Already the transversal section of stem in
secondary growth presents quadrangular aspect. In the microscopy analysis of power of the
aerial part it was observed presence of raphides calcium oxalate and fragments of vascular
bundles with increase in ring. The main root in secondary growth, presents to suber with
some layers of cells, cortical parenchyma with great amount of grain-of-starches and
idioblasts with raphides calcium oxalate. In the phytochemical screening in the roots were
detected coumarin, resin, steroid and triterpenoid. In the phytochemical screening, of the
aereal parts were detected: coumarins, flavonoids, alkaloids, resin, steroids and
triterpenoids. This work aims to study too of the antibacterial activity of the crude
ethanolic extract of the aereal parts and roots this plant. The minimal inibitory
concentration (MIC) for twnty four bacterium and Candida albicans. The microrganisms
culture were inoculated by the steers inoculater. The crude ethanolic extract of the aereal
parts were more active as roots extract. Enterobacter cloacae FT 505 and the differents
Staphylococcus aureus culture were less sensible is root ethanolic extract as aereal parts
extract.
12
SUMRIO
APRESENTAO GERAL.
CONSIDERAES GERAIS.............................................................................................18
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.................................................................................22
CAPTULO 01: ESTUDO FARMACOGNSTICO DA PARTE AREA DE
Richardia brasiliensis GOMEZ (RUBIACEAE)
INTRODUO....................................................................................................................25
MATERIAIS MTODOS....................................................................................................27
Material vegetal....................................................................................................................27
Caracterizao anatmica.....................................................................................................27
Contagem estomtica...........................................................................................................28
Prospeco fitoqumica........................................................................................................28
Determinao de cinzas totais, insolveis em cido e teor de umidade...............................28
Determinao de Flavonides Totais...................................................................................29
RESULTADOS E DISCUSSO.........................................................................................30
Descrio anatmica.............................................................................................................30
Doseamento de flavonides totais........................................................................................39
Determinao de umidade, cinzas totais e insolveis em cido...........................................39
CAPTULO 02: ANATOMIA E PROSPECO FITOQUMICA DA RAIZ DE
Richardia brasiliensis Gomez (RUBIACEAE)
INTRODUO....................................................................................................................46
MATERIAIS MTODOS....................................................................................................48
13
Material vegetal....................................................................................................................48
Caracterizao anatmica.....................................................................................................49
Determinao de cinzas totais..............................................................................................50
Determinao de cinzas insolveis em cido.......................................................................50
Determinao do teor de umidade........................................................................................51
RESULTADOS E DISCUSSO.........................................................................................52
Descrio anatmica.............................................................................................................52
Anlise fitoqumica..............................................................................................................52
Determinao do teor de cinzas totais, insolveis e teor de umidade..................................55
CAPTULO 03: AVALIAO ANTIMICROBIANA DA PARTE AREA E
RAZES DE Richardia brasiliensis GOMEZ (RUBIACEAE)
INTRODUO....................................................................................................................59
MATERIAIS E MTODOS................................................................................................61
Coleta do material vegetal....................................................................................................59
Preparao do extrato etanlico bruto..................................................................................59
Microrganismos utilizados...................................................................................................59
Determinao da Concentrao Inibitria Mnima (CIM)...................................................62
RESULTADOS E DISCUSSES........................................................................................65
CONCLUSES GERAIS..................................................................................................70
16
Ata de defesa
17
APRESENTAO GERAL
18
CONSIDERAES GERAIS
A famlia Rubiaceae compreende cerca de aproximadamente 7.000 espcies, sendo

portanto, uma das maiores famlias de angiospermas. Dentre os representantes desta
famlia, tem-se um grupo de plantas de porte herbceo que crescem espontaneamente em
todos os solos agrcolas, campos ou terrenos baldios (Joly, 1993) e que quase sempre se
comportam como indesejveis, denominadas como plantas daninhas. Estas plantas so
designadas tambm como plantas ruderais, plantas silvestres, mato, ino, plantas invasoras
e ervas daninhas (Lorenzi, 1991).
Richardia brasiliensis Gomez (Figura 1) uma Rubiaceae invasora bastante
freqente principalmente lavouras anuais, pomares, cafezais, culturas perenes, jardins e
terrenos baldios (Lorenzi, 1991), nas quais promove intensa interferncia competitiva,
especialmente no incio do ciclo das culturas de vero (Kissmann & Groth, 1994; Ruedell,
2000). Esta espcie de difcil controle por herbicidas de manejo e ps-emergentes, como
verificado por Pitelli (1991) no sistema de plantio direto na regio sul do Brasil. Alm de
apresentar efeitos inibitrios drsticos na germinao e desenvolvimento de pepino e arroz
(Salvati, 1988).
As plantas invasoras so competidoras eficientes por gua, luz e nutrientes,
diminuindo a produtividade de certas culturas, alm de poderem interferir diretamente no
crescimento de culturas e na comunidade microbiana atravs de inibio qumica,
conhecida como alelopatia (Alves, 1992). A grande habilidade das plantas daninhas quanto
sobrevivncia atribuda aos mecanismos desenvolvidos pela natureza, como: grande
agressividade competitiva, alta produo de sementes (em especial as espcies anuais),
facilidade de disperso das sementes e grande longevidade das sementes. Desta forma, as
plantas daninhas interferem na agricultura, na pecuria, na eficincia agrcola e na vida do
homem, causando maiores ou menores transtornos (Lorenzi, 1991).
Richardia brasiliensis, conhecida como poaia-branca, poaia-do-campo ou
simplesmente poaia, uma planta anual, herbcea, prostada, ramificada, de caule
densamente hirsuto, medindo 20-50 cm de comprimento, alm de apresentar grande vigor
vegetativo cobrindo completamente o solo infestado a semelhana de um tapete (Lorenzi,
1991). Suas folhas so simples e opostas, observando-se a presena de estpulas
interpeciolares. O pecolo curto ou quase ausente, o limbo foliar apresenta forma ovada a
19
lanceolada, de colorao verde-escura com tnue pilosidade na face ventral e sobre as

nervuras na face dorsal (Rosseto et al., 1997). De acordo com Lorenzi (1991), suas
inflorescncias so brancas, terminais em glomrulos achatados, com 10-15 mm de
dimetro, protegidos por um invlucro de 2-6 brcteas semelhantes a folhas, sendo o fruto
uma cpsula oboval-trgona, de 2-4mm de comprimento.
R. brasiliensis uma espcie nativa da Amrica do Sul, sendo encontrada desde a
Cordilheira dos Andes at a Costa Atlntica. No Brasil, tem vasta distribuio geogrfica,
com maior ocorrncia em regies agrcolas do Centro-Oeste, Sudeste e Sul. Esta planta
mais comum nos solos com boa umidade, mas no encharcados, alm de ser estimulada em
presena de boa iluminao e em solos de vegetao menos densa (Lorenzi, 1984).
Alm da importncia econmica relacionada s culturas agrcolas, a poaia
utilizada na medicina popular como expectorante, emtico e diafortico atravs de infuso
ou decocto da raiz (Grandi et al., 1989). Sabe-se que o conhecimento de plantas medicinais
simboliza muitas vezes o nico recurso teraputico de muitas comunidades e grupos
tnicos. Desta forma, tm-se relato do uso de plantas no tratamento e na cura de
enfermidades desde 5000 a 45000 a. C (Rocha & Silva, 1961). Ainda hoje nas regies mais
pobres do pas e at mesmo nas grandes cidades brasileiras, as plantas medicinais so
comercializadas em feiras livres, mercados populares e encontradas em quintais
residenciais (Maciel et al., 2002).
A nvel mundial, a terapia medicinal vem crescendo notadamente nestes ltimos
anos, com uma renda aproximada de 22 milhes de dlares por ano (Yunes et al., 2001).
Este aumento crescente na busca por terapias medicinais, em especial as plantas
medicinais, devido especialmente a facilidade na obteno dos espcimes, o baixo custo
e crena popular de que tudo que natural inofensivo (Rates, 1996). Entretanto, pouco se
sabe sobre os constituintes de certas plantas e os riscos que podem acarretar sade, e o
uso indiscriminado de plantas medicinais sem o respaldo cientfico, tem sido causa de
intoxicaes, atribudas aos efeitos j conhecidos da planta ou ainda pelo uso da espcie
errada (Simes et al., 1995). Segundo Farnsworth & Soerjato (1985), das 119 substncias
qumicas extradas de plantas e usadas na medicina, 74% foram descobertas atravs do
conhecimento popular.
Neste contexto, o Brasil seria privilegiado, pois detentor de aproximadamente um
tero da flora mundial. Entretanto, a maioria dos fitoterpicos fabricados pela indstria
nacional, est fundamentada somente no uso popular das plantas sem nenhuma
comprovao pr-clnica, no podendo, portanto, ser competitivo a nvel nacional e muito
20
menos internacionalmente, ficando atrs inclusive de pases menos desenvolvidos

tecnologicamente (Yunes et al., 2001).
Devido a importncia de Richardia brasiliensis Gomez, o presente trabalho
objetivou a caracterizao anatmica, a prospeco fitoqumica e qualidade e pureza da
droga, das partes areas e das razes, obtidas no sentido de obter dados padres para
identificao da matria-prima (droga vegetal). Alm de propor a realizao da avaliao
antimicrobiana a partir do extrato etanlico bruto das partes areas e da raiz, subsidiando
futuros estudos de atividades biolgicas.
21
Figura 1: Richardia brasiliensis Gomez no Horto de Plantas Medicinais da Faculdade de

Farmcia da Universidade Federal de Gois. A- Aspecto geral. B- Detalhe das folhas e
inflorescncia.
22
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
Alves, P. L. C. A. Interaes alelopticas entre plantas daninhas e hortalias. In: Simpsio

nacional sobre manejo de plantas daninhas em hortalias. Botucatu: Faculdade de
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Farnsworth, N. R. & Soerjato, D. D. Potential consequence of plant extintion in the United

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Grandi, T. S. M.; Trindade, J. A.; Pinto, M. J. F.; Ferreira, L. L. & Catella, A. C. Plantas
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Kissmann, K. & Groth, D. Plantas Infestantes e Nocivas. So Paulo: Basf Brasileira, 603
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Lorenzi, H. Consideraes sobre plantas daninhas no plantio direto. In: Plantio direto.
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Lorenzi, H. Plantas daninhas do Brasil: terrestres, aquticas, parasitas, txicas e

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Macedo, J. Prospectives for the rational use of the Brazilian Cerrados for food production.
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23
Maciel, M. A. M.; Pinto, A. C.; Veiga Jr.; Grunberg, N. & Echevarria, A. Plantas
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Pitelli, R. A. Weed-soybean interference studies in Brazil. In: Cooping, L. G.; Green, M.

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Rates, S. M. K. Promoo do uso racional de fitoterpicos: uma abordagem no ensino de

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Ribeiro, J. F. & Walter, B. M. T. Fitofisionomias do bioma cerrado. In: Sano, S. M. &

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Rocha e Silva, M. Fundamentos da Farmacologia e suas aplicaes teraputicas. Rio

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Rosseto, R. R.; Pitelli, R. L. C. M. & Pitelli, R. A. Estimativa da rea foliar de plantas

daninhas: poaia-branca. Revista Planta Daninha. v. 15. n. 1, p. 25-29, 1997.
Ruedell, J. Manejo integrado de plantas daninhas no Sul do Brasil. In: Encontro Nacional
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Salvati, S. S. Estudos sobre interaes alelopticas envolvendo plantas daninhas e

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Simes, C. M. O.; Mentz, L. A. M.; Schenkel, E. P.; Irgang, B. E. & Stehmann, J. R.

Planta da medicina popular no Rio Grande do Sul. 4 ed. Editora da Universidade
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Yunes, R. A.; Pedrosa, R. C. & Filho, V. C. Frmacos e fitoterpicos: a necessidade do

desenvolvimento da indstria de fitoterpicos e fitofrmacos no Brasil. Qum. Nova. v. 24,
n. 1, p. 147-152, 2001.
24
CAPTULO 01:
ESTUDO FARMACOGNSTICO DA PARTE AREA
DE Richardia brasiliensis GOMEZ (RUBIACEAE)

25
INTRODUO
O uso de plantas medicinais em terapias depende dentre outros fatores do controle
de sua qualidade. Desde a dcada de 30 se discute o problema da qualidade dos
fitoterpicos e plantas medicinais, ainda assim a qualidade das drogas vegetais
comercializadas hoje preocupante (Batistic et al., 1989). No h no pas dados cientficos
abrangentes sobre o uso de plantas medicinais, nem um controle eficaz da qualidade destes
produtos (Coelho, 2001).
Para anlise de uma droga vegetal deve-se levar em conta: a identificao,
verificao da pureza e a avaliao dos princpios ativos (Oliveira et al., 1991). No Brasil,
onde a utilizao de plantas medicinais ocupa lugar de destaque no uso popular, este tem
como origem os conhecimentos indgenas, dos escravos e imigrantes (Santos Filho, 1991).
Richardia brasiliensis Gomez uma planta invasora utilizada popularmente como
expectorante, emtico e diafortico atravs de infuso ou decocto da raiz (Grandi et al.,
1989), sendo bastante freqente em lavouras anuais, pomares, cafezais, culturas perenes,
jardins e terrenos baldios (Lorenzi, 1991), nas quais promove intensa interferncia
competitiva, especialmente no incio do ciclo das culturas de vero (Kissmann & Groth,
1994). Esta espcie de difcil controle por herbicidas de manejo e ps-emergentes, como
verificado por Pitelli (1991) no sistema de plantio direto na regio sul do Brasil. A
presena desta planta em hortas apresenta efeitos inibitrios drsticos na germinao e
desenvolvimento de pepino e arroz (Salvati, 1988).
R. brasiliensis tambm conhecida como poaia-branca, poaia-do-campo ou
simplesmente poaia, uma planta anual, herbcea, prostada, ramificada, de caule
densamente hirsuto, medindo 20-50 cm de comprimento, alm de apresentar grande vigor
vegetativo cobrindo completamente o solo colonizando a semelhana de um tapete
(Lorenzi, 1991).
26
A espcie nativa da Amrica do Sul, sendo encontrada desde a Cordilheira dos
Andes at a Costa Atlntica. No Brasil, tem vasta distribuio geogrfica, com maior
ocorrncia em regies agrcolas do Centro-Oeste, Sudeste e Sul. Esta planta mais comum
nos solos mesotrficos medianos a leves, com boa umidade, mas no encharcados, alm de
terem seu crescimento estimulado em presena de boa iluminao e em solos de vegetao
menos densa (Lorenzi, 1984).
Este trabalho objetivou a aquisio de conhecimentos farmacognsticos, atravs da
caracterizao anatmica e prospeco fitoqumica, da parte area de Richardia
brasiliensis Gomez, com intuito de fornecer subsdios a estudos futuros relacionados s
possveis propriedades medicinais da espcie.

27
MATERIAIS E MTODOS
Material vegetal
Amostras de plantas adultas de Richardia brasiliensis foram coletados no Horto de
Plantas Medicinais da Faculdade de Farmcia da Universidade Federal de Gois (UFG),
em Goinia, Gois (altitude de 768 m, 1640`33,3 S e 4914`39,5 W). Exsicatas foram
depositadas no herbrio da UFG, sob registro de n. UFG/27.226. O material vegetal foi
lavado em gua corrente e parte deste, material ainda fresco foi utilizado para a realizao
do estudo anatmico, o restante foi dessecado em estufa com circulao forada de ar
(modelo FABBE PRIMAR) a 40C, para em seguida ser modo em moinho de facas
(Tipo WILLYE modelo TE-650, marca TECNAL) at a forma de p, utilizado na
prospeco fitoqumica e microscopia de p.
Caracterizao anatmica
Aps a lavagem do material fresco, fragmentos do caule, pecolo e lmina foliar
(regies basal, mediana e apical) foram retirados com auxlio de lmina ou bisturi e fixados
FPA 70 (formaldedo, cido propinico e etanol) e posteriormente armazenados em etanol
70%.
Para a caracterizao anatmica das folhas foram realizados cortes histolgicos,
transversais e paradrmicos, mo livre em diferentes regies: bordos (pice, base e
mediana), nervura principal e pecolo.
Os cortes histolgicos foram submetidos dupla colorao com azul de
alcian/safranina, baseada na metodologia adaptada de Kraus & Arduin (1997), e colorao
de Etzold (Etzold, 1993). A microscopia de p foi realizada colocando uma pequena
quantidade de material pulverizado entre lmina e lamnula contendo uma gota de
Reagente de Steinmetz (Costa, 2001). As fotomicrografias referentes s estruturas

28
anatmicas foram feitas em microscpio ptico (modelo ZEISS-AXIOSKOP), filme
Kodacolor asa 100. As escalas referentes s ilustraes foram obtidas nas mesmas
condies pticas.
Contagem estomtica
A contagem estomtica foi realizada na regio mediana da folha de R. brasiliensis
tanto na epiderme superior quanto na inferior. Essa metodologia foi empregada utilizando-
se cortes paradrmicos de ambas as faces e analisando o material em microscpio ptico
(modelo ZEISS-AXIOSKOP), acoplado a cmara clara, de acordo com a tcnica de
Labouriau et al. (1961).
Prospeco fitoqumica
Os testes de prospeco fitoqumica foram realizados aps a secagem do material
vegetal em estufa (modelo FABBE PRIMAR) por 72 horas, sendo em seguida modo em
um moinho para que ento se inicie a prospeco fitoqumica qualitativa baseada em
metodologias adaptadas de Costa (2001) e Matos (1988), para os seguintes metablitos
secundrios: heterosdeos antraquinnicos, esterides e triterpenides, heterosdeos
flavonides, heterosdeos saponnicos, taninos, alcalides, cumarinas e resina.
Determinao do teor de cinzas totais, insolveis em cido e teor de umidade
Foi adotado o mtodo farmacopico (FARMACOPIA BRASILEIRA, 1988) na
determinao do teor de cinzas totais e insolveis em cido, e no teor de umidade. Os
testes para de determinao do teor de cinzas totais, insolveis em cido e teor de umidade
foram realizados em triplicata.

29
Doseamento de Flavonides Totais
O doseamento de flavonides totais foi realizado em triplicata, utilizando-se do
mtodo farmacopico (FARMACOPIA BRASILEIRA, 2002).

30
RESULTADOS E DISCUSSO
Descrio anatmica
A folha de Richardia brasiliensis anfiestomtica com estmatos paracticos
(Figuras 1 e 3), cuja densidade estomtica de 68,43 mm2 para a epiderme superior e
116,25 mm2 para epiderme inferior. Gavilanes (1999) estudando uma planta invasora de
reas cultivadas e de pastagem (Gomphrena celosioides) registrou que a densidade
estomtica de 252 por mm2 e 193 por mm2, para as epidermes adaxial e abaxial
respectivamente. Em espcies invasoras muito comum a presena de folhas
anfiestomtica como observado por Procpio et al. (2003) em vinte das dezenove espcies
estudadas. Essas caractersticas podem representar um aumento na taxa fotossinttica, j
que as trocas gasosas podem ser realizadas pelas duas faces da folha e, portanto, quanto
maior for a rea estomtica til, a maior possibilidade de adaptao da espcie ao ambiente
(Moot et al. 1982). Estmatos paracticos tambm foram descritos por Alves (2004) em
Rudgea viburnoides (Rubiaceae), demonstrando ser este o tipo mais comum para a famlia
Rubiaceae (Metcalfe & Chalke, 1950).
As clulas epidrmicas de R. brasiliensis apresentam paredes onduladas a sinuosas,
da mesma forma que as clulas epidrmicas da face abaxial das folhas de Palicourea
longepedunculata apresentam contorno sinuoso, enquanto as da face adaxial tm contorno
liso a levemente ondulado (Pereira et al., 2003).
Tricomas tectores unicelulares de paredes verrucosas foram so encontrados em
poaia (Figuras 2 e 4). A presena de tricomas tectores unisseriados de parede verrucosas,
tambm foi observada por Salatino et al. (1986), para Tocoyena formosa, e por Nascimento
et al. (1996), para Bathysa stipulata. A funo dos tricomas tectores depende do rgo
onde se encontram, de sua morfologia, de sua densidade e at mesmo de sua orientao,
isto , do ngulo de inclinao. Eles so densamente distribudos em folhas e caules e
podem servir como uma barreira mecnica contra temperaturas extremas, alta intensidade
31
luminosa, perda excessiva de gua, entre outros fatores (Werker, 2000). Assim, a presena
de tricomas em R. brasiliensis uma caracterstica que evidencia a adaptabilidade desta
espcie a ambientes hostis, como reas degradadas de cerrado. Essas estruturas reduzem a
perda de gua na transpirao, mas mantm a assimilao de gs carbnico por manter a
atmosfera saturada em vapor de gua em torno da folha (Fahn & Cutter, 1992). Em outras
espcies invasoras pode-se tambm observar a presena de numerosos tricomas, como em
Solanum viarum (jo-bravo), Bidens pilosa (pico-preto), Conyza bonariensis (buva),
Leonotis nepetaefolia (cordo-de-frade) (Procpio et al., 2003).
Richardia brasiliensis apresentou numerosos idioblastos contendo rfides (Figura
7), referidos tambm por Lersten (1974) para espcies de Rubiaceae. J os colteres, que
so estruturas comuns na famlia (Barros, 1959; Lersten, 1974), no foram registrados na
espcie em estudo.
Em seco transversal as epidermes adaxial e abaxial apresentam-se unisseriadas,
com clulas de tamanhos variados (Figura 5). O mesofilo dorsiventral com parnquima
palidico formado por duas camadas de clulas e parnquima lacunoso constitudo por em
mdia seis camadas de clulas com disposio compacta (Figura 5). Idioblastos com
rfides de oxalato de clcio so freqentes no parnquima lacunoso (Figura 7) e feixes
vasculares de menor porte com elementos com espessamento em anel (Figura 6).
A nervura central apresenta epiderme abaxial e adaxial unisseriadas (Figura 8). O
feixe vascular do tipo colateral aberto e, em contato com o floema foi registrado
esclernquima, com paredes celulares no lignificadas (Figura 9). Esa (1976) afirma que
nem sempre a lignina est presente na parede secundria que compe o esclernquima,
como tambm foi registrado por Delaporte et al. (2002) em folhas de Alteranthera
brasiliana, uma planta invasora.

32
O pecolo apresenta epiderme superior e inferior unisseriada com tricomas tectores
unisseriados com paredes verrucosas (Figura 10). Feixe vascular central colateral em forma
de arco (Figura 11), observando-se dois feixes vasculares laterais (Figura 10), conforme
descrito por Metcalfe & Chalke (1950) para Rubiaceae. Vieira (1988) descreveu a presena
de um feixe mediano em forma de arco, com as extremidades fortemente fletidas em
Tocoyena bullata (Rubiaceae).
A seco transversal do caule em crescimento secundrio apresenta aspecto
quadrangular (Figura 12), tambm verificado em outras plantas herbceas de carter
medicinal, como em Melissa officinalis e Lippia alba (Ferreira et al., 2003). A epiderme
unisseriada contendo tricomas tectores unicelulares e estmatos, parnquima cortical com
clulas isodiamtricas com tamanhos variados e feixe vascular central circular anfiflico e
parnquima medular central com clulas isodiamtricas com tamanhos variados (Figuras
13 e 14).
Na microscopia de p da parte area observou-se a presena de rfides de oxalato
de clcio (Figura 16), fragmentos de epiderme contendo estmatos e tricoma tector
unicelular com paredes verrucosas (Figura 15).

33
1 2
3 4
Figura 1 - 4: Cortes paradrmicos das folhas de Richardia brasiliensis Gomez. 1-
Epiderme superior com estmatos paracticos e clulas epidrmicas de parede sinuosa. 2-
Tricoma tector unicelular de parede verrucosa na epiderme superior. 3- Epiderme inferior
com estmatos paracticos e clulas epidrmicas com parede sinuosa. 4- Tricoma tector
unicelular de parede verrucosa na epiderme inferior (C.E . clula epidrmica; Tr
tricoma; Es estmato).
34
5 6
Figura 5 - 7: Seco transversal da internervura no tero mdio inferior da folha de

Richardia brasiliensis Gomez. 5- Detalhe do parnquima palidico, epiderme unisseriada
e parnquima lacunoso. 6- Feixes vasculares entre parnquima palidico e parnquima
lacunoso. 7- Idioblastos contendo rfides no parnquima lacunoso (P.p. parnquima
palidico; P.l. parnquima lacunoso; Eps epiderme superior; Epi epiderme inferior;
F.v. feixe vascular; Rf - rfides).
.
35
8 9
Figura 8 - 9: Seco transversal da nervura principal da folha de Richardia brasiliensis
Gomez. 8- Aspecto geral da nervura principal. 9- Detalhe do feixe vascular central (Fv -
feixe vascular; Epi epiderme inferior; Eps epiderme superior; Xi xilema; Fl
floema).
36
10 11
Figura 10 - 11: Seco transversal do pecolo de Richardia brasiliensis Gomez. 10-
Aspecto geral do pecolo. 11- Detalhe do feixe vascular central (Fv feixe vascular; Fl
feixe vascular lateral; Xi xilema; Fl floema; Ep epiderme; Tr tricoma).

37
12 13
14
Figura 12 - 14: Seco transversal do caule em crescimento secundrio de Richardia
brasiliensis Gomez. 12- Aspecto geral do caule. 13- Detalhe da epiderme apresentando
estmato a base de um tricoma tector. 14- Detalhe do feixe vascular central (FVC feixe
vascular central; Es estmato; Cse cmara sub-estomtica; Tr tricoma; Ep
epiderme; Pc parnquima cortical; Xi xilema; Fl floema; Pm parnquima medular).

38
15 16
Figura 15 - 16: Microscopia de p da parte area de Richardia brasiliensis Gomez. 15-
Tricoma tector unicelular de parede verrucosa. 16- Rfides de oxalato de clcio (Tr
tricoma; Rf rfides).
39
Prospeco fitoqumica
Na prospeco fitoqumica da parte area verificou-se a presena de cumarinas,
flavonides, esterides e triterpenides, alcalides e resina, no se detectando a presena
de saponinas, heterosdeos antraquinnicos e taninos. A prospeco fitoqumica com
presena de alcalides, flavonides, esterides e triterpenides na parte area tambm foi
detectada em Symphytum officinale (Toledo et al., 2003). J para Vanillosmopsis
erythropappa a ausncia de alcalides e presena de taninos e saponinas so fatores que
diferem dos metablitos secundrios encontrados em poaia (Souza et al., 2003).
Doseamento de flavonides
A porcentagem de flavonides totais para R. brasiliensis de 0,37%, sendo um
ndice prximo ao de plantas medicinais de grande uso popular como Ginkgo biloba
(Ginkgoaceae) e Calendula officinales, que possuem flavonides totais nas porcentagens
de 0,5 e 0,4, respectivamente (FARMACOPIA BRASILEIRA, 2002; Simes et al., 2003;
OMS, 1999). Segundo Simes et al. (2003) os flavonides podem apresentar efeito
mutagnico, antitumoral, anti-hemorrgico, hormanais, antimicrobiano, entre outras
atividades.
Determinao de umidade, cinzas totais e insolveis em cido
A determinao de umidade foi em mdia 11,3% para as amostras analisadas de
poaia, estando o valor encontrado dentro das normas estipuladas pelas Farmacopias, que
fica entre 8 e 14%. O teor de cinzas totais e insolveis fornece informaes sobre
substncias inorgnicas presentes na matria-prima vegetal. Valores acima dos
caractersticos indicam adulterao e/ou contaminao por material inorgnico como areia
40
e/ou slica (FARMACOPIA BRASILEIRA, 1988). O teor de cinzas totais foi de 14,05%
e a de cinzas insolveis foi de 1,846%.

41
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45
Captulo 02:
ANATOMIA E PROSPECO FITOQUMICA DA
RAIZ DE Richardia brasiliensis Gomez (RUBIACEAE)

46
INTRODUO
Desde a dcada de 30 se discute o problema da qualidade dos fitoterpicos e plantas
medicinais, ainda assim a qualidade das drogas vegetais comercializadas hoje
preocupante (Batistic et al., 1989). No h no pas dados cientficos abrangentes sobre o
uso de plantas medicinais, nem um controle eficaz da qualidade destes produtos (Coelho,
2001).
Para anlise de uma droga vegetal deve-se levar em conta: a identificao,
verificao da pureza e a avaliao dos princpios ativos (Oliveira et al., 1991). No Brasil,
onde a utilizao de plantas medicinais ocupa lugar de destaque no uso popular, este tem
como origem os conhecimentos indgenas, dos escravos e imigrantes (Santos Filho, 1991).
A famlia Rubiaceae compreende cerca de aproximadamente 7.000 espcies, sendo
portanto, uma das maiores famlias de angiospermas. Dentre os representantes desta
famlia, tem-se um grupo de plantas de porte herbceo que crescem espontaneamente em
todos os solos agrcolas, campos ou terrenos baldios (Joly, 1993) e que quase sempre se
comportam como indesejveis, sendo denominado como plantas daninhas. Estas plantas
so designadas tambm como plantas ruderais, plantas silvestres, mato, ino, plantas
invasoras e ervas daninhas (lorenzi, 1991).
Richardia brasiliensis Gomez, conhecida como poaia-branca, poaia-do-campo ou
simplesmente poaia (Figura 1), uma invasora bastante freqente em lavouras anuais,
pomares, cafezais, culturas perenes, jardins e terrenos baldios (Lorenzi, 1991), o qual
promove intensa interferncia competitiva, especialmente no incio do ciclo das culturas
de vero (Kissmann & Groth, 1994; Ruedell, 2000).

47
Figura 1: Aspecto geral (A) e detalhe das razes (B) de Richardia brasiliensis Gomez
coletada no Horto de Plantas Medicinais da FF/UFG.

48
R. brasiliensis uma planta anual, herbcea, prostada, ramificada, de caule
densamente hirsudo, medindo 20-50 cm de comprimento, alm de apresentar grande vigor
vegetativo cobrindo completamente o solo infestado a semelhana de um tapete (Lorenzi,
1991). Suas folhas so simples e opostas, observando-se a presena de estpulas
interpeciolares. O pecolo curto ou quase ausente, o limbo foliar apresenta forma ovada a
lanceolada, de colorao verde-escura com tnue pilosidade na face ventral e sobre as
nervuras na face dorsal (Rosseto et al., 1997). De acordo com LORENZI (1991), suas
inflorescncias so brancas, terminais em glomrulos achatados, com 10-15mm de
dimetro, protegidos por um invlucro de 2-6 brcteas semelhantes a folhas, sendo o fruto
uma cpsula oboval-trgona, de 2-4mm de comprimento.
utilizada popularmente como expectorante, emtico e diafortico atravs de infuso ou
decocto da raiz (Grandi et al., 1989).
A finalidade deste trabalho foi a aquisio de aspectos farmacognsticos dessa
planta medicinal, atravs da caracterizao anatmica e prospeco fitoqumica da raiz de
Richardia brasiliensis Gomez.
MATERIAIS E MTODOS
Material vegetal
Plantas adultas de Richardia brasiliensis Gomez foram coletadas no Horto de
Campus I, em Goinia, Gois (altitude de 768m, 1640`33,3 S e 4914`39,5 W), onde as
razes foram separadas e lavadas em gua corrente. O material botnico foi identificado
pelo Prof Dr. Jos Realino de Paula (Faculdade de Farmcia UFG) e a exsicata foi
depositada no Herbrio da UFG sob n 27.226. Parte do material ainda fresco foi utilizado
49
para a realizao do estudo anatmico, e o restante foi dessecado em estufa com circulao
forada de ar (modelo FABBE PRIMAR) a 40C, para em seguida ser modo em moinho
de facas (Tipo WILLYE modelo TE-650, marca TECNAL) at a forma de p, sendo este
utilizado na prospeco fitoqumica e na microscopia do p.
Caracterizao anatmica
Aps a lavagem do material fresco, fragmentos com cerca de 1cm de comprimento
foram extrados da raiz principal e razes laterais, com auxlio de lmina ou bisturi e
colocados em frascos, previamente identificados, contendo a soluo de formaldedo, cido
propinico e etanol 70% (v/v) (FPA) como fixador. Aps trs dias o FPA foi substitudo
por etanol 70% (v/v).
Cortes histolgicos transversais dos fragmentos de razes foram realizados a mo-
livre e submetidos dupla colorao, azul de alcian/safranina (Kraus & Arduin, 1997), e
aos reagentes de Etzold (Etzold, 1993) e Steinmetz (Costa, 2001). Aps colorao o
material vegetal foi transferido para lminas contendo glicerina aquosa e recobertos com
lamnula para anlise em microscpio ptico. A microscopia de p foi realizada
submetendo o material pulverizado ao Reagente de Steinmetz (Costa, 2001). As anlises e
fotomicrografias referentes s estruturas anatmicas foram feitas em microscpio ptico
(modelo ZEISS-AXIOSKOP), filme Kodacolor asa 100.
Prospeco fitoqumica
Os testes de prospeco fitoqumica foram realizados em triplicata, baseados em
metodologias adaptadas de Costa (2001) e Matos (1988). As pesquisas das classes de
substncias do metabolismo secundrio foram realizadas atravs de reaes gerais:
heterosdeos antraquinnicos (reao de Borntraeger), esterides e triterpenides (reagente

50
Liebermann-Burchard, reao de Keller-Killiani, do ncleo esteroidal e de Kedde),
flavonides (reao de shinoda, oxalo-brica, com cido sulfrico concentrado, com
hidrxidos alcalinos, com cloreto de alumnio e com cloreto frrico), saponinas (ndice de
espuma), taninos (reao com gelatina, com alcalides, com sais metlicos e com
hidrxidos alcalinos), alcalides (reativo de Mayer, de Dragendorff, de Bouchardat, de
Bertrand, de Hager e cido tnico), cumarinas (reao com NaOH 1N) e a presena de
resina (turvao do extrato etanlico com adio de gua).
Determinao do teor de cinzas totais
Em trs cadinhos previamente calcinados, resfriados e pesados foram colocadas 3
g da amostra em p, carbonizado em bico de Bunsen e incinerado 450C, durante duas
horas em mufla (EDG Equipamentos - modelo 3000), at a obteno de cinzas brancas. Os
cadinhos foram resfriados em dessecador e, em seguida, pesados. Foi calculada a
porcentagem de cinzas em relao amostra seca ao ar (FARMACOPIA BRASILEIRA,
1998).
Determinao do teor de cinzas insolveis em cido
O resduo obtido na determinao de cinzas totais foi fervido durante cinco minutos
com 20 mL de cido clordrico SR em cadinho coberto com vidro de relgio. Aps este
perodo, o vidro de relgio foi lavado com 5mL de gua quente e a mesma foi reunida ao
contedo do cadinho. A soluo do cadinho foi filtrada sobre papel de filtro quantitativo e
acrescentada gua quente at que o filtrado se tornasse neutro. O papel de filtro contendo o
resduo foi transferido para o cadinho original, e carbonizado sobre bico de Bunsen. Em
seguida, o material foi incinerado a cerca de 500.C por 1 hora, em mufla. Aps serem
resfriados em dessecador, os cadinhos com as amostras foram pesadas. Foi calculada a

51
porcentagem de cinzas insolveis em cido em relao droga seca ao ar
(FARMACOPIA BRASILEIRA, 1998).
Determinao do teor de umidade
O mtodo para determinao do teor de umidade foi o gravimtrico. Em trs pesa-
filtros previamente dessecados em estufa a 100-105.C, por 30 minutos, resfriados e
pesados, foi colocado 2g da amostra em p. Essa amostra foi dessecada em estufa
(FANEM - modelo 002 CB) a 100-105.C, durante 5 horas. Os pesa-filtros foram
resfriados em dessecador e pesados. A dessecao se manteve em intervalos de 1 hora,
sendo os pesa-filtros pesados com a amostra a cada perodo. O ensaio foi concludo quando
duas pesagens sucessivas dos pesa-filtros no diferiram entre si por mais de 5mg. Foi
calculada a porcentagem de gua em relao droga seca ao ar (FARMACOPIA
BRASILEIRA, 1998).
52
RESULTADOS E DISCUSSES
Descrio anatmica
A raiz principal em crescimento secundrio apresenta sber com vrias camadas de
clulas, parnquima cortical com grande quantidade de gros de amidos, esfricos e de
tamanhos variados (Figura 2), assim como em Jacaranda decurrens (Oliveira et al., 2003),
uma espcie tambm de uso medicinal. Alm disso, poaia possui idioblastos contendo
rfides de oxalato de clcio (Figura 3), floema externo ao xilema com raios
parenquimticos unisseriados. Xilema central contendo vasos de grande calibre isolados ou
em grupo de dois ou trs, e raios parenquimticos unisseriados (Figura 4). As razes
laterais em crescimento primrio apresentam epiderme unisseriada, parnquima cortical
com clulas de contedo fenlico, feixe vascular central com floema externo ao xilema.
Na microscopia do p das razes registrou-se a presena de rfides de oxalato de
clcio isolados ou agrupados, gros de amido esfricos com hilo puntiforme ou linear,
isolados ou agrupados em dois ou trs (Figura 5 e 6), e fragmentos de feixe vascular.
Prospeco fitoqumica
Na prospeco fitoqumica da parte subterrnea detectou-se a presena de
cumarinas, resinas e esterides e triterpenides, no se detectando a presena de saponinas,
heterosdeos antraquinnicos, taninos, alcalides e flavonides nas amostras analisadas. No
estudo com as razes de Jacaranda decurrens (Oliveira et al., 2003), uma espcie de uso
medicinal, se detectou a presena de cumarinas, resinas e esterides, assim como para as
amostras de razes de poaia.

53
2
3
4
Figura 2 - 4: Seco transversal da raiz principal em crescimento secundrio de Richardia
brasiliensis Gomez. 2- Aspecto geral do sber. 3- Idioblastos contendo rfides na regio
parenquimtica. 4- Detalhe do feixe vascular central (Su sber; Gr gros-de-amido; Rf
- rfides; Xi xilema; Fl floema).
54
Figura 5 - 6: Microscopia de p das razes de Richardia brasiliensis Gomez. 5- Rfides de
oxalato de clcio. 6- Gros de amido e rfides em luz polarizada (Rf rfide; Gr gro de
amido).
55
Determinao do teor de cinzas totais, insolveis e teor de umidade

O teor de umidade de 10,3% . O de cinzas totais foi de 7,85% e a de cinzas
insolveis foi de 0,6%. O teor de umidade est de acordo com o preconizado pelas
farmacopias que permitem uma variao de 8 a 14%. O teor de cinzas totais e insolveis
fornecem informaes sobre substncias inorgnicas presentes na matria-prima vegetal.
Valores acima dos encontrados indicam adulterao e/ou contaminao por material
inorgnico como areia e/ou slica (FARMACOPIA BRASILEIRA, 1988).

56
Coelho, S. O. Vis das plantas medicinais. Cincia Hoje. v.59, p. 58-59, 2001.
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58
Captulo 03:
AVALIAO ANTIMICROBIANA DA PARTE
AREA E RAZES DE Richardia brasiliensis GOMEZ
(RUBIACEAE)
59
INTRODUO
Richardia brasiliensis Gomez, conhecida como poaia-branca, poaia-do-campo ou
simplesmente poaia, uma planta invasora nativa da Amrica do Sul, sendo encontrada
desde a Cordilheira dos Andes at a Costa Atlntica. No Brasil, tem vasta distribuio
geogrfica, com maior ocorrncia em regies agrcolas do Centro-Oeste, Sudeste e Sul.
Esta planta mais comum nos solos com boa umidade, mas no encharcados, alm de ser
estimulada em presena de boa iluminao e em solos de vegetao menos densa
(Lorenzi, 1984).
R. brasiliensis bastante freqente em lavouras anuais, pomares, cafezais, culturas
perenes, jardins e terrenos baldios (Lorenzi, 1991), nas quais promove intensa
interferncia competitiva, especialmente no incio do ciclo das culturas de vero
(Kissmann & Groth, 1994; Ruedell, 2000). Esta erva-daninha uma espcie de difcil
controle por herbicidas de manejo e ps-emergentes, como verificado por Pitelli (1991)
no sistema de plantio direto na regio sul do Brasil. Pode tambm provocar efeitos
inibitrios drsticos na germinao e desenvolvimento de pepino e arroz (Salvati, 1988).
uma planta anual, herbcea, prostada, ramificada, de caule densamente hirsuto,
medindo 20-50cm de comprimento, alm de apresentar grande vigor vegetativo cobrindo
completamente o solo infestado a semelhana de um tapete (Lorenzi, 1991). Suas folhas
so simples e opostas, observando-se a presena de estpulas interpeciolares. O pecolo
curto ou quase ausente, o limbo foliar apresenta forma ovada a lanceolada, de colorao
verde-escura com tnue pilosidade na face ventral e sobre as nervuras na face dorsal
(Rosseto et al., 1997). De acordo com Lorenzi (1991), suas inflorescncias so brancas,
terminais em glomrulos achatados, com 10-15mm de dimetro, protegidos por um
invlucro de 2-6 brcteas semelhantes a folhas, sendo o fruto uma cpsula oboval-trgona,
de 2-4mm de comprimento.
60
utilizada popularmente como expectorante, emtico e diafortico atravs de infuso ou
decocto da raiz (Grandi et al., 1989).
O presente trabalho objetivou estudar a atividade antimicrobiana do extrato
etanlico bruto, da parte area e razes, de Richardia brasiliensis Gomez atravs da
determinao da concentrao inibitria mnima (CIM).

61
MATERIAIS E MTODOS
Coleta do material vegetal
Plantas adultas de Richardia brasiliensis Gomez foram coletadas no Horto de
Campus I, em Goinia, Gois (altitude de 768m, 1640`33,3S e 4914`39,5 W). Neste
local, o material vegetal foi dividido em partes areas (folhas e caule) e subterrnea (raiz),
sendo em seguida lavados em gua corrente. O material botnico foi identificado pelo
Prof Dr. Jos Realino de Paula (Faculdade de Farmcia UFG) e a exsicata foi depositada
no Herbrio da UFG sob n 27.226.
Preparao do extrato etanlico bruto
O material botnico foi dessecado em estufa com ventilao forada de ar (modelo
FABBE PRIMAR) a 40C e, em seguida, triturado em moinho de facas (Tipo WILLYE
modelo TE-650, marca TECNAL).
De acordo com metodologias adaptadas de Ferri (1996), o material pulverizado foi
submetido a um processo de macerao a frio, por no mnimo, trs dias, com agitao
ocasional, utilizando etanol 95% P.A. na proporo 1g/5mL, como lquido extrator. Aps a
macerao foi realizada a filtrao e o extrato obtido foi concentrado em evaporador
rotativo em temperatura inferior a 40C.
Microrganismos utilizados
Para a avaliao da atividade antimicrobiana dos extratos etanlicos bruto das
partes areas e razes de Richardia brasiliensis, foram utilizados microrganismos padro e

62
isolados clnicos cedidas pelo do Instituto de Patologia Tropical e Sade Pblica
(IPTSP)/UFG e outras instituies como apresentado na Tabela I.
Os microrganismos foram repicados em gar Mueller-Hinton e incubadas a 37C
por 24h antes do experimento. Para o preparo do inculo, as culturas de cada
microrganismo foram transferidas para tubos de ensaio contendo 2 mL de salina estril at
a obteno de uma turbidez equivalente a escala 1,0 de MacFarland. Foram produzidas
duas placas controle contendo cada uma apenas agar Mueller-Hinton.
A triagem da atividade antimicrobiana dos extratos foi realizada conforme
recomendado pelo National Committee for Clinical Laboratory Standard (NCCLS, 2000)
atualmente designado de CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute).

63
Tabela I: Microrganismos padro e isolados clnicos utilizados e procedncia.
Microrganismos Procedncia
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Staphylococcus aureus ATCC 29737
Staphylococcus aureus Isolado clnico da FFRP
Staphylococcus aureus 7+ Isolado clnico da FFRP
Rhodococcus equi ATCC 9341
Micrococcus luteus ATCC 25923
Micrococcus roseus Isolado clnico IPTSP/UFG
Escherichia coli ATCC 8739
Agrobacterium tumefaciens ATCC 333970/C58
Salmonella choleraesuis ATCC 10708
Salmonella typhymurium ATCC 14028
Salmonella sp. Isolado clnico IPTSP/UFG
Enterobacter aerogenes ATCC 13048
Enterobacter cloacae FT 502 Isolado clnico do LEMC-EPM-UFP
E. cloacae FT 505 Isolado clnico do LEMC-EPM-UFP
Serratia marcescens ATCC 14756
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Clostridium sporogenes ATCC 11437
Bacillus cereus ATCC 14579
Bacillus subtilis ATCC 007
Bacillus subtilis ATCC 6633
Bacillus stearotermophilus ATCC 1262
Candida albicans ATCC 10231
ATCC: American Type Culture Coletion.
FFRP: Faculdade de Farmcia de Ribeiro Preto/USP.
LEMC-EPM-UFP: Laboratrio Especial de Microbiologia Clnica Escola paulista de
Medicina.
64
Determinao da Concentrao Inibitria Mnima
A concentrao inibitria mnima (CIM) ao crescimento microbiano determinada
pela menor concentrao de extrato capaz de inibir a multiplicao dos microrganismos
analisados.
Para a determinao da CIM, foi pesado 476 mg do extrato etanlico bruto, para as
amostras da parte area e razes, em tubo de ensaio esterilizado, sendo este dissolvido em 2
mL de etanol 95% e realizada diluies seriadas obtendo-se as concentraes 11,9; 5,95;
2,975; 1,487; 0,743 e 0,371 mg/mL. Em seguida, foram adicionados 19mL de gar
Mueller-Hinton aos tubos, sendo ento, submetidos agitao em vrtex e vertidos em
placa de Petri estril at sua solidificao. Suspenses microbianas foram realizadas para
os 25 microrganismos selecionados com turbidez equivalente a metade da escala 1,0 de
MacFarland. Aps a solidificao do meio foi realizada a semeadura das culturas de
microrganismos com a utilizao do inoculador de Steers (Steers, 1959). As placas foram
incubadas a 37C por um perodo de 24 h, aps o qual a leitura foi realizada. Os ensaios
foram realizados em quadruplicatas (NCCLS, 2001).

65
RESULTADOS E DISCUSSES
O extrato etanlico bruto da parte area de Richardia brasiliensis apresentou
potencial antimicrobiano superior ao extrato etanlico bruto das razes, em 19 das 25 cepas
estudadas (Tabela II). A prospeco fitoqumica das razes detectou apenas metablicos
secundrios como esterides e triterpenides, resina e cumarina, alm destes, a parte area
apresenta tambm alcalides e flavonides (Figueiredo et al., 2005 unpublished
observations) o que possivelmente explica a maior atividade antimicrobiana de seu extrato.
Alcalides so encontrados em diversas espcies medicinais de Rubiaceae, como
em Psychotria ipecacuanha, Uncaria tomentosa, Cinchona spp. (Alves et al., 2004), e de
acordo com Khan & Omoloso (2003), Sarcocephalus coadunatus (Rubiaceae), possui
alcalides isolados para a espcie e apresenta um bom espectro na atividade antimicrobiana
para as diferentes fraes de seu extrato metanlico.
Linhagens isoladas de Palicourea longiflora, um representante da famlia
Rubiaceae txica a alimentao de bovinos, apresentam ao antibitica para as linhagens-
teste de Bacillus sp., B. subtilis, Staphylococcus aureus e Escherichia coli (Souza et al.
2004).
Flavonides isolados, em diversas plantas de uso medicinal, como 7`,4`-diidrxi-5-
metxi-flavona, 4`, 2, 4-tri-diidroxi-6-metxi-chalcona e um tipo de quercetina so
comprovadamente agentes antimicrobianos, alm de exercerem outras atividades
biolgicas como, por exemplo, antitumoral, antiinflamatria e antiviral (Simes et al.,.
2003).
A naftoquinona plumbagina, substncia extrada das razes de Plumbago scandens,
o provvel componente que explica a atividade antibacteriana, capaz de inibir
completamente o crescimento de S. aureus e C. albicans, entretanto no agindo sobre

66
bactrias gram negativas como E. coli e S. typhymurium (Paiva et al., 2003). O extrato
etanlico bruto das partes area e subterrnea de R. brasiliensis levou a uma inibio
completa de E. coli e S. typhymurium em concentraes relativamente pequenas com CIM
de 0,743 mg/mL, sendo o mesmo para C. albicans e 11,9mg/mL para S. aureus.
A maior ou menor sensibilidade de microrganismos ao extrato de plantas
medicinais podem ter resultados bastante diversificados. Cepas de S. aureus e E. cloacae
FT 505 foram os microrganismos menos sensveis ao extrato etanlico bruto das razes de
R. brasiliensis. Ferreira et al. (2004) demonstraram que fraes do extrato de Drosera
montana var. montana e D. communis levam a uma maior sensibilidade de bactrias como
S. aureus e C. albicans e a resistncia das bactrias gram-negativas testadas, como P.
aeruginosa, E. coli e S. choleraesuis. J Nakamura et al. (1999), observaram que no leo
essencial extrado das folhas de Ocimum gratissimum (Labiatae) h uma maior atividade
antibacteriana em S. aureus do que nas demais bactrias testadas.
Os testes antibacterianos com os extratos etanlicos bruto de R. brasiliensis para as
partes areas e da raiz demonstraram ser eficazes em pequenas concentraes. Isolamentos
de metablitos secundrios como os alcalides e flavonides presente nas partes areas e,
esterides e triterpenides presente nas razes, seguidos de novos testes microbiolgicos e
de atividade biolgica poderiam fornecer maiores dados a produo e controle da droga
vegetal.
67
Tabela II: Atividade antimicrobiana do extrato etanlico bruto das partes areas e da raiz
de Richardia brasiliensis Gomez (Rubiaceae) frente a diferentes microrganismos (G:
reao gram bacteriana; L: levedura; CIM: Concentrao Inibitria Mnima.)
CIM (mg/mL)
Microrganismos
Parte area Raiz
Staphylococcus aureus ATCC 29737 G+ 0,743 11,9
Staphylococcus aureus G+ 0,371 11,9
Staphylococcus aureus ATCC 25923 G+ 0,371 11,9
Staphylococcus aureus 7+ G+ 0,371 11,9
Rhodococcus equi ATCC 6939 G+ 0,371 11,9
Micrococcus luteus ATCC 9341 G+ 0,371 0,743
Micrococcus roseus G+ 0,371 1,487
Clostridium sporogenes ATCC 11437 G+ 0,371 1,487
Escherichia coli ATCC 25922 G- 0,371 0,743
Agrobacterium tumefaciens ATCC 333970/C58 G- 0,743 0,743
Salmonella choleraesuis ATCC 10708 G- 0,371 0,743
Salmonella typhymurium ATCC 14028 G- 0,371 0,743
Salmonella sp. G- 0,371 0,743
FT 502 Enterobacter cloacae G- 0,743 1,487
FT 505 E. cloacae G- 0,371 11,9
Enterobacter aerogenes ATCC 13048 G- 0,371 0,743
Serratia marcescens ATCC 14756 G- 0,371 0,743
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 G- 0,743 0,743
Bacillus stearo termophilus ATCC 1262 G+ 0,743 0,743
Bacillus subtilis ATCC 6633 G+ 0,743 5,95
Bacillus subtilis ATCC 007 G+ 0,743 0,743
Bacillus cereus ATCC 14579 G+ 0,371 1,487
Candida albicans ATCC 10231 L 0,743 0,743
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CONCLUSES GERAIS
A caracterizao microscpica das partes areas e das razes de Richardia
brasiliensis Gomez juntamente com a prospeco fitoqumica, teor de umidade, cinzas
totais e insolveis em cido, forneceram dados padres importantes na diagnose da droga
vegetal. Estes parmetros podero ser utilizados no controle de qualidade de amostras que
podem vir a serem comercializadas.
O extrato etanlico bruto mostrou-se eficaz no controle do crescimento
antimicrobiano, atravs da determinao das concentraes inibitrias mnimas em
pequenas concentraes. Alm disso, o espectro de atividade antimicrobiana dos extratos
melhor para o material da parte area.
Estes estudos alm de fornecerem importantes conhecimentos bsicos sobre a
espcie, embasam novos estudos, como o isolamento de substncias responsveis pela
atividade antimicrobiana e de atividade biolgica, para a confeco e controle da droga
vegetal.
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Estudo Farmacognóstico e Avaliação Antimicrobiana de Richardia Brasiliensis Gomez (Rubiaceae)

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Estudo Farmacognóstico e Avaliação Antimicrobiana de Richardia Brasiliensis Gomez (Rubiaceae)

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIS

Instituto de Cincias Biolgicas

ADDA DANIELA LIMA FIGUEIREDO

Estudo Farmacognstico e Avaliao

ADDA DANIELA LIMA FIGUEIREDO

Estudo Farmacognstico e Avaliao

Dissertao de mestrado apresentada ao programa

ORIENTADOR: Prof. Dr. Jos Realino de Paula

No passo pela vida...

A Deus, por me permitir viver e apreciar mais um momento to especial.

Aos meus irmos que so minhas grandes paixes... minha vida.

A Dri e a L que s vieram a somar a minha famlia, sendo pessoas indispensveis

e insubstituveis. Amo vocs muuuuuito!!!

orientador. Muito obrigada pelos maravilhosos dois anos de ensinamentos,

mestrado da maneira mais participativa e afetuosa possvel. Professora, muitssimo

toda disposio, pacincia e sabedoria, e a quem eu sou eternamente grata pelos

transmitirem seus conhecimentos.

A Marlia e a Keila que se mostraram amigas to especiais: companheiras,

divertidas, solidrias, compreensivas e sbias. Obrigada por estarem comigo nestes

Cllia, pelos momentos de diverso e de muito trabalho e, em especial, pela

Aos professores do Curso de Ps-Graduao em Biologia Celular e Molecular

pelos conhecimentos transmitidos, pelo brilhantismo, pelo grande apoio e amizade

A todos os meus amigos, em especial a Sandra e a Kaysmer, que so pessoas

apaixonantes (minhas irmzinhas, mais velha e mais nova respectivamente), por me

ajudarem a crescer enquanto pessoa, a aproveitar os bons momentos e superar as

crises. Amo vocs!!!

Figura 1- 2: Richardia brasiliensis Gomez no Horto de Plantas Medicinais da Faculdade de

Farmcia da Universidade Federal de Gois. 1- Aspecto geral. 2- Detalhe das folhas e

Captulo 01: ESTUDO FARMACOGNSTICO DA PARTE AREA DE Richardia

brasiliensis GOMEZ (RUBIACEAE)

Figura 1 - 4: Cortes paradrmicos das folhas de Richardia brasiliensis Gomez. 1-

Epiderme superior com estmatos paracticos e clulas epidrmicas de parede sinuosa. 2-

Tricoma tector unicelular de parede verrucosa na epiderme superior. 3- Epiderme inferior

unicelular de parede verrucosa na epiderme inferior (C.E . clula epidrmica; Tr

Figura 5 - 7: Seco transversal da internervura no tero mdio inferior da folha de

Richardia brasiliensis Gomez. 5- Detalhe do parnquima palidico, epiderme unisseriada

e parnquima lacunoso. 6- Feixes vasculares entre parnquima palicdico e parnquima

lacunoso. 7- Idioblastos contendo rfides no parnquima lacunoso (Tr tricoma; P.p.

parnquima palidico; P.l. parnquima lacunoso; Ep epiderme; Epi epiderme

inferior; F.v. feixe vascular).............................................................................................32

Figura 8 - 9: Seco transversal da nervura principal e borda mediana da folha de

Richardia brasiliensis Gomez. 8- Aspecto geral da nervura principal. 9- Detalhe do feixe

epiderme inferior; Xi xilema; Fl floema; Pc parnquima

Figura 10 - 11: Seco transversal do pecolo de Richardia brasiliensis Gomez. 10-

feixe vascular lateral; Xi xilema; Fl floema; Epi epiderme inferior; Tr tricoma; Cl

Figura 12 - 14: Seco transversal do caule em crescimento secundrio de Richardia

Cse cmara sub-estmtica; Tr tricoma; Ep epiderme; Pc parnquima cortical; Xi

xilema; Fl floema; Pm parnquima medular).................................................................35

Figura 15 - 16: Microscopia de p da parte area de Richardia brasiliensis Gomez. 15-

Tricoma tector unicelular de parede verrucosa. 16- Rfides de oxalato de

Captulo 02: ANATOMIA E PROSPECO FITOQUMICA DA RAIZ DE

Richardia brasiliensis Gomez (RUBIACEAE)

Figura 1: Detalhe das razes de Richardia brasiliensis Gomez no Horto de Plantas

Figura 2 - 4: Seco transversal da raiz principal em crescimento secundrio de Richardia

brasiliensis Gomez. 2- Aspecto geral do sber. 3- Idioblastos contendo rfides na regio

parenquimtica. 4- Detalhe do feixe vascular central (Su sber; Id idioblasto; Xi

Figura 5 - 6: Microscopia de p das razes de Richardia brasiliensis Gomez. 5- Rfides de

Captulo 03: AVALIAO ANTIMICROBIANA DAS PARTES AREA E RAZES

DE Richardia brasiliensis GOMEZ (RUBIACEAE)

Tabela I: Procedncia das cepas bacterianas e de Candida

de Richardia brasiliensis Gomez (Rubiaceae) frente a diferentes

expectorante, emtico e diafortico atravs de infuso ou decocto da raiz. O presente

trabalho objetivou caracterizar anatomicamente, realizar densidade estomtica e anlise