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Copyright Taylor and Francis Group, LLC Published online: 02 Oct 2009.
Recibido: 26 de Febrero de 2001; recibida versin revisada: 4 de Abril de 2001; aceptado: 4 de Abril de 2001
Received: 26 February 2001; revised version received: 4 Abril 2001; accepted: 4 April 2001
Abstract
Different techniques and methods have been used to preserve foods. As long as scientific knowledge and technology have
improved, new systems were discovered and applied in order to preserve foods. Pressurisation is a very recent technology in the food
industry. It has been applied by this purpose since 1990. In this review after a brief historic description about high pressure
technology; systems, methods and pressurisation equipment applied in foods are also described. Characteristics related to lethal
effects and inactivation degree on pressurised microorganisms are extensively discussed and physic-chemist factors (temperature, pH,
water activity and concentration of other compounds in food media) implied in high pressure treatments are also reviewed. Pressurisation
is an excellent technique to sterilize foods and food ingredients, and it is already possible to get pressurised products in the food market.
In general, it can be state that high pressure treatments help to maintain and improve the sensorial quality and foods preservation.
2001 Altaga All rights reserved.
Resumen
Se han utilizado diferentes tcnicas y mtodos para la conservacin de los alimentos. A medida que avanzaba el conocimiento
cientfico y tecnolgico, se han descubierto y aplicado nuevas formas para conservar los alimentos. La presurizacin es una tcnica
muy reciente en el campo alimentario, empleado desde 1990. En este trabajo, tras una breve descripcin histrica de la tecnologa de
la alta presin; se describen tambin los sistemas, mtodos y equipos generadores de alta presin empleados en la industria alimentaria.
Se discuten de forma exhaustiva aspectos acerca de los efectos letales y del grado de inactivacin que provoca la presurizacin sobre los
microorganismos. Se revisan los factores fsico-qumicos ms importantes (temperatura, pH, actividad del agua, concentracin de
solutos y composicin del medio). La presurizacin es una buena tcnica de esterilizacin de alimentos y es ya una realidad comercial.
En lneas generales, se puede afirmar que la alta presin favorece y mejora la calidad sensorial y la conservacin de los alimentos. 2001
Altaga. Todos los derechos reservados.
Resumo
Utilizronse diferentes tcnicas e mtodos pra conservacin dos alimentos. A medida que avanzaba o coecemento cientfico
e tecnolxico, banse descubrindo e aplicando novas formas para conservar-los alimentos. A presurizacin unha tcnica moi novedosa
no campo alimentario, empregada desde 1990. Neste traballo, tras uhna breve descripcin histrica da tecnoloxa da alta presin,
describense os sistemas, mtodos e equipos xeneradores de alta presin empregados na industria alimentaria. Discutense de forma
exhaustiva aspectos acerca dos efectos letales e do grado de inactivacin que provoca a presurizacin sobre os microorganismos.
Rrevisanzs os factores fsico-qumicos mis importantes (temperatura, pH, actividade da auga, concentracin de solutos e composicin
do medio). A presurizacin unha boa tcnica de esterilizacin de alimentos e xa unha realidade comercial. En lias xenais, podese
afirmar que a alta presin favorece e mellora a calidade sensorial e a conservacin dos alimentos. 2001 Altaga. Todolos dereitos
reservados.
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Tabla 1.- Aplicaciones de la alta presin hidrosttica (APH) en diferentes productos alimentarios.
aplicadas no suelen ser inferiores a 400 MPa y no superan intensificador de alta presin para bombear el medio
los 900 MPa. presurizante desde un depsito hacia la cmara de
Los otros 2 sistemas se diferencian bsicamente presurizacin y as se alcanza la presin deseada. Este es
por el rango de temperaturas aplicadas. As, los sistemas el mtodo ms empleado a escala industrial.
de presin isosttica templada (PIT) emplean temperaturas En cuanto al tercer procedimiento, se basa en la
que oscilan entre 20C y 200C, mientras que los de propiedad de expansin del medio presurizante cuando
presin isosttica caliente (PIC) utilizan temperaturas de se le aplica temperatura, producindose una elevacin de
unos 2000C y el medio presurizante es un gas. la presin. El efecto se logra cuando se combina alta
El primer equipo para procesar alimentos que presin con alta temperatura. Este mtodo requiere un
emplea alta presin fue diseado por Mitsubishi Heavy control muy preciso de la temperatura dentro del volumen
Industries Ltd. en Japn (Pothakamury et al., 1995). interno total de la cmara de presurizacin.
La Alta Presin se puede producir por distintos El alimento se coloca en un recipiente de plstico
mtodos: compresin directa, compresin indirecta o por estril, se sella y se introduce en la cmara de presurizacin
calentamiento del medio presurizante. para su procesamiento. Se recomienda que el material
Para lograr la compresin directa se emplea un plstico sea una pelcula de alcohol de polivinilo (PVOH)
pistn para presurizar; la alta presin es generada por la y pelculas copolimricas de alcohol de etileno y vinilo
presurizacin del medio a travs del extremo del pistn (EVOH). No hay posibilidad de deformacin del paquete
de dimetro pequeo. Este mtodo permite compresiones porque la presin ejercida es uniforme (no hay gradientes).
muy rpidas, pero las limitaciones del sellado entre el Mertens (1993) expone y discute aspectos relacionados
pistn y la superficie interna de la vasija restringe su uso con la aplicabilidad de distintos materiales de envasado
a laboratorios pequeos o a plantas piloto. en la tecnologa de la alta presin. La cmara de
En el mtodo de compresin indirecta, se usa un presurizacin, donde se introduce el alimento en el
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material de envasado apropiado, se cierra y se llena con el (a 0.6 MPa puede colapsarse) (Walsby, 1972), alargamiento
medio transmisor de la presin, normalmente agua. La de las clulas y formacin de filamentos (Zobell y Cobet,
presin aplicada comprime el medio transmisor alrededor 1962; Zobell, 1970), separacin de la membrana celular de
del alimento provocando una disminucin del volumen la pared celular (Osumi et al., 1992), contraccin de la
que vara segn la presin y la temperatura aplicadas. A pared celular con la formacin de poros, modificaciones
temperatura ambiente es del orden del 4% a 100 MPa, del citoesqueleto, modificaciones de los ncleos y de los
7% a 200 MPa, 11.5% a 400 MPa y 15% a 600 MPa orgnulos intracelulares, coagulacin de la protena
(Barbosa-Cnovas et al., 1998). El hecho de que se citoplasmtica y liberacin de constituyentes
comprima tan poco volumen hace que el proceso sea poco intracelulares fuera de la clula (Cheftel, 1995). Tambin
peligroso, siempre que se use agua como medio provoca modificaciones bioqumicas y genticas al
presurizante. El alimento es sometido a alta presin por inactivar las enzimas involucradas en la replicacin y
un tiempo determinado, el cual depende del tipo del transcripcin del ADN (Smelt, 1998; Linton et al., 2000).
alimento y de la temperatura del proceso. Al finalizar el Algunos de estos cambios, expuestos por distintos autores
tiempo, la cmara se descomprime y se extrae el alimento se reflejan en la Tabla 2 (Hoover et al., 1989; Smelt, 1998).
tratado. Seguidamente, se coloca una nueva carga de Casi todas las bacterias pueden crecer hasta valores
alimento en la cmara de presurizacin y se inicia as otro de 20-30 MPa. A aquellos microorganismos que pueden
ciclo (Barbosa-Cnovas et al., 1998). crecer a presiones sensiblemente ms altas (40-50 MPa)
El proceso descrito en el prrafo anterior es un se les denomina barfilos; aquellos incapaces de crecer a
ejemplo tpico de un sistema de presurizacin discontinuo. presiones de 30-40 MPa se les conoce como barfobos, y
Es decir, en estos casos el alimento es presurizado por a los que crecen en el intervalo de 1-50 MPa se les llama
cargas, una despus de otra. Este sistema es el que euribricos. Los organismos barodricos sobreviven a
recomienda la firma sueca ABB Autoclave Systems, Inc. presiones de 50-200 MPa, pero no pueden crecer. Los
que fabrica equipos generadores de alta presin microorganismos pueden variar significativamente en su
(Zimmerman y Bergman, 1993) para presurizar alimentos. respuesta a la APH. Esta variacin existe no slo entre
Las ventajas que ofrece son: i) reduccin del riesgo de especies, sino tambin entre cepas de las mismas especies
contaminacin del alimento por los lubricantes de la (Galazka y Ledward, 1995).
mquina; ii) mayor flexibilidad, porque permite procesar El mayor grado de inactivacin sobre los
distintos tipos de alimentos sin necesidad de limpiar la microorganismos se lleva a cabo en la etapa logartmica
cmara tras cada operacin y sin peligro de de crecimiento. En general, los microorganismos Gram
recontaminacin; iii) simplicidad de fabricacin y negativos son los ms sensibles a las Altas Presiones; les
limpieza. La velocidad de produccin de los procesos siguen las levaduras y hongos, los Gram positivos y por
discontinuos se puede aumentar operando con sucesivas ltimo las esporas; los virus son muy resistentes a las altas
cmaras de presin sin tiempos de induccin en el presiones, aunque depende del tipo de virus (Smelt, 1998).
procesado, pues el sistema opera secuencialmente, La mayora de los autores coinciden en que las esporas
convirtiendo el proceso en semi-continuo (Barbosa- bacterianas son las formas de vida ms resistentes a la
Cnovas et al., 1998). No obstante, es ms fcil presurizacin (Farkas y Hoover, 2000). Presiones de 400
automatizar un proceso que trabaja con materiales semi- a 600 MPa inactivan las clulas vegetativas, mientras que
fluidos ms o menos homogneos que con slidos para inactivar las esporas se necesitan presiones mayores.
deformes y de tamaos irregulares. Ya en la primera mitad del siglo pasado se comprob que
El proceso en los sistemas PIF puede ser de dos la inactivacin de ciertas esporas requiere presiones de
tipos: bolsa hmeda, en el que el molde elastmero se 1200 MPa (Larson y Hartzell, 1918). Otros autores ms
llena con la muestra fuera del cilindro de presurizacin y actuales rebajan esta presin a 1000 MPa (Sangronis et
bolsa seca, donde el molde se fija en el cilindro y se llena al., 1997) y en algunos casos se requieren valores de hasta
in situ con la muestra que se va a presurizar. El primero 1500 MPa a temperatura ambiente (Smelt, 1998). En la
se emplea en procesos discontinuos y el segundo en los Tabla 3 se recopilan las condiciones de presurizacin
semicontinuos y en lnea. Aunque no se dispone de equipos necesarias para reducir la poblacin de ciertos
que trabajan en rgimen continuo, actualmente se est microorganismos patgenos, en distintos substratos.
trabajando en el diseo de plantas de presurizacin que La inactivacin de los microorganismos por la
operarn en un futuro prximo en continuo y en lnea APH puede ser debida a un incremento en la
segn indica la empresa Flow International Corporation. permeabilidad de la membrana, la inhibicin de las
reacciones productoras de energa y la desnaturalizacin
EFECTO DE LA APH SOBRE LOS MICRO- de las enzimas esenciales para el desarrollo y reproduccin
ORGANISMOS de la clula (Pothakamury et al., 1995).
Varios sistemas enzimticos de los
La extensin del efecto de la APH sobre la microorganismos son inhibidos o inactivados por la
inactivacin microbiana depende de variables de presin. Este es el caso de varias deshidrogenasas en
tratamiento, tales como presin, tiempo y temperatura de Escherichia coli (100 MPa), carboxipeptidasas de las
exposicin, adems de la composicin del alimento y tipo levaduras (400 MPa) y la ATPasa localizada en la capa
de microorganismos involucrados (Sangronis et al., 1997). de los fosfolpidos, involucrada en el fenmeno del
La APH produce cambios de tipo morfolgico en las transporte activo a travs de la membrana. La actividad
clulas vegetativas: compresin del gas de las vacuolas de la ATPasa Na + /K + de la membrana celular se reduce
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Tabla 2.- Efecto de la alta presin hidroststica (APH) en ciertas caractersticas fisiolgicas de los microorganismos.
por la alta presin. Seguramente este efecto es debido a fosfolpidos de la membrana en condiciones de alta presin
la bicapa asociada (Chong et al., 1985). Cuando se aplica cuando las clulas crecen a 10 C, pues la temperatura de
la presin, varios sitios dentro de la clula bacteriana fusin de los lpidos aumenta, de una manera reversible,
pueden daarse y por lo tanto la ATPasa de la membrana en ms de 10C por cada 100 MPa (Cheftel, 1995).
no puede realizar su funcin, debido a la desnaturalizacin Un contaminante frecuente en leche es Listeria
directa o por la dislocacin de la membrana. El ATP ya monocytogenes. Una poblacin de L. monocytogenes de
no se hidroliza, y por lo tanto, ya no est disponible para 106 UFC/mL fue inactivada por la exposicin a 340 MPa
llevar a cabo el transporte activo de protones, el pH celular a 23C en leche ultrapasteurizada (Drake et al., 1997) y
se acidifica y la clula finalmente muere. la misma poblacin de Vibrio parahaemolyticus (patgeno
Se ha observado una disminucin en la sntesis del presente en productos marinos) fue inactivada por
ADN a altas presiones. sta se relaciona con la exposicin a 170 MPa durante 10 min a 23C en jugo de
inactivacin de las enzimas implicadas en esa sntesis. La almeja (Styles et al., 1991). Algunos investigadores
doble hlice del ADN permanece estable debido a que (Rademacher et al., 1998) consideran que la presurizacin
los enlaces de hidrgeno no se alteran con las altas de leche a 500 MPa durante unos minutos equivale a un
presiones. La desnaturalizacin de las protenas es tratamiento de pasterizacin (72 durante 15 s), estos
irreversible por encima de 300 MPa (entre 100 y 300 MPa autores demostraron que tiempos superiores a 8 minutos
es reversible). Pero la replicacin y transcripcin del ADN, presurizando entre 400 y 700 MPa no facilitaban la
as como la sntesis de las protenas, son inhibidas a niveles inactivacin microbiana, la cual oscila entre 1 y 2.5
mucho ms bajos de presin. Este fenmeno explica reducciones logartmicas.
parcialmente la ausencia del desarrollo microbiano con
los tratamientos de presiones antes mencionados Factores fsico-qumicos en la inactivacin de clulas
(Pothakamury et al., 1995). vegetativas por la presin
Las protenas se ven afectadas de forma importante
por la presin. La fluidez de la membrana celular parece El desarrollo de bacterias depende, entre otros
tener gran importancia en la inactivacin por la presin. factores, de la temperatura, del pH, de la composicin
Las clulas son ms resistentes a la presin cuando sus del medio de desarrollo y de la actividad del agua del
membranas son ms rgidas. Clulas de Lactobacillus mismo. La alta presin altera el pH del medio
plantarum, cultivadas a 10 C, mostraron una relacin disminuyndolo. Los microorganismos son ms
alta de cidos grasos saturados/insaturados y un susceptibles a la inactivacin en un medio no nutritivo
incremento en la resistencia a la presin. Esto puede ser que en uno enriquecido, el cual es ms protector debido a
debido a un menor grado de cristalizacin de los la presencia de aminocidos esenciales y vitaminas. La
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presencia de nutrientes que afectan a la actividad de agua en la termotolerancia entre las muestras presurizadas y
del medio como son el azcar y la sal ejercen una marcada las no presurizadas (Linton et al., 2000).
influencia en la resistencia a la APH. Otro factor fsico-qumico relevante es la
La temperatura es muy importante para que el concentracin de solutos en el medio. La destruccin de
tratamiento de presurizacin sea efectivo. Clulas de E. Saccharomyces cerevisiae en mermelada de fresa fue
coli O157:H7 se sometieron a tratamientos de alta presin menos efectiva y requiri niveles de presiones ms altos
a 200 MPa durante 30 min a 30 C. Las clulas una vez cuando el contenido en azcar se increment de un 20%
presurizadas, se sometan a temperaturas de 55, 58 y 60 a un 50%. Probablemente la resistencia a la presin es
C. Si esto se realizaba inmediatamente los resultados debida a las condiciones fisiolgicas del organismo al
indicaron que el tratamiento de alta presin aumentaba la reducirse la actividad del agua. Esta resistencia puede
sensibilidad al calor de estas bacterias. Cuando los cultivos disminuir al aumentar la temperatura y el tiempo de
tratados por la alta presin fueron almacenados a 3 C, presurizacin.
antes de someterlos a calentamiento, la sensibilidad al Para la inactivacin de Candida parapsilosis y
mismo persisti ms de 10 das. Candida tropicalis se requirieron niveles de presiones ms
Un estudio similar se realiz con E. coli O157:H7 altas o combinaciones de presin y temperatura cuando
en leche desnatada. Tambin, se observ un incremento se encontraban en alimentos ricos en azcar. Experimentos
en la sensibilidad al calentamiento inmediatamente realizados con la levadura Rhodotorula rubra procesados
despus del tratamiento con APH, pero tras almacenarla a 400 MPa y a diferentes temperaturas durante 15 min en
durante 4 das a 3 C no hubo diferencias significativas soluciones de sacarosa a concentraciones de 40% (a w =
Tabla 3.- Sensibilidad de algunos microorganismos patgenos (formas vegetativas o esporuladas) a la alta presin hidrosttica.
Salmonella senfterberg Alimento infantil a base de 340 MPa, 10 min, 23C 4 Metrick et al., 1989
775W pollo
Tampn fosfato+0.9% 340 MPa, 10 min, 23C 3 Metrick et al., 1989
NaCl,pH 7
Salmonella bareilly Tampn fosfato a pH 7 300 MPa, 20 min 8 Takahashi et al., 1991
Escherichia coli Tampn fosfato pH 7 700 MPa, 13 min, 6 Takahashi et al., 1991
0157:H7 Leche UHT 800 MPa, 10 min 2 Takahashi et al., 1991
Leche UHT 600 MPa, 30 min 2 Patterson et al., 1995
Carne de ave 700 MPa, 30 min 5 Takahashi et al., 1991
Listeria monocytogenes Tampn fosfato pH 7 340 MPa, 20 min <6 Styles et al., 1991
(Scott A) Leche cruda 340 MPa, 60 min, 23C 6 Styles et al., 1991
Leche UHT 340 MPa, 80 min, 23C 6 Styles et al., 1991
Staphylococcus aureus Cerdo 600 MPa, 10 min, 25C 6 Takahashi et al., 1991
Leche UHT 600 MPa, 30 min 2 Takahashi et al., 1991
Leche pasterizada 586 MPa, 3 ciclos de 1 5 Takahashi et al., 1991
min, 5C
Esporas de Bacillus Leche UHT 600 MPa, 60 min, 70C 4 Hayakawa et al., 1994
stearothermophilus
Esporas de Bacillus Agar nutritivo, pH 6-7 404 MPa, 15 min, 25C <0.5 Shigehisa et al., 1991
subtilis 168 Agar nutritivo, pH 6-7 404 MPa, 15 min, 70C 5 Shigehisa et al., 1991
Esporas de Clostridium Medio clostridial + agar, 404 MPa, 30 min, 25C <0.5 Shigehisa et al., 1991
sporogenes PA 3679 pH 7
Medio clostridial + agar, 404 MPa, 30 min, 25C <3 Shigehisa et al., 1991
pH 4
* Si no se especifica, el tratamiento se realiz a temperatura ambiente (20C). RLPM= Reduccin log de la poblacin microbiana.
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0.96), 50% (aw=0.94), y 55 % (aw= 0.91) indicaron claramente temperaturas bajas (0 C). Cuando la temperatura se
un efecto protector de la sacarosa frente a la inactivacin elev, el efecto letal a los mismos valores de APH lleg
por la presin hasta temperaturas de 30 C. La inactivacin a ser muy efectivo (Cheftel, 1995).
de este microorganismo s fue posible a temperaturas ms La presin induce la germinacin de las esporas,
altas 40-50 C (a w= 0.940.91) pero con tiempos de la subsecuente presin y la temperatura actan sobre
tratamiento ms largos. La presencia de 5 - 20% de etanol la espora germinada reduciendo as la carga bacteriana.
favoreci progresivamente la inactivacin de Rhodotorula Las clulas vegetativas obtenidas de las esporas
rubra al aplicar APH (200 MPa, 25 C, 15 min), mientras germinadas son mucho ms sensibles a la presin y/o
que la adicin de 50% - 60% de sacarosa al medio junto al calor. Las esporas una vez activadas, germinan
con el etanol revierte este efecto (Knorr, 1994). completamente y se pueden someter a APH para
Esto nos lleva a concluir que para una actividad conseguir la esterilizacin del alimento. Sin embargo
del agua cercana o por debajo de 0.9, las clulas vivas una proporcin de las esporas iniciales permanecen
entran en un estado latente en el cual la membrana celular todava en un estado de super latencia y no germinan
es modificada y llega a ser ms resistente a la presin. (Russel, 1982). La germinacin inducida por la presin
Este efecto fue confirmado por Oxen y Knorr (1994) en parece ser provocada por la ionizacin de los
otros experimentos realizados con Rhodotorula rubra. Por constituyentes de las esporas: las cargas elctricas
lo tanto, la inactivacin de los microorganismos sometidos resultantes aumentan la hidratacin del protoplasma de
a presurizacin depende de la actividad del agua. La la espora. La temperatura y los rangos de la presin
resistencia a la inactivacin se incrementa con una para la germinacin e inactivacin dependen de las
disminucin en la actividad de agua y puede ser atribuida especies de las esporas. Las presiones y temperaturas
a una reduccin y supresin del desarrollo de la clula. bajas causan la germinacin, pero no hay inactivacin
Las soluciones salinas tambin favorecen la apreciable de las esporas germinadas. Las presiones
resistencia a la APH. Soluciones de NaCl 2-4 M ejercen intermedias provocan una germinacin considerable y
un marcado efecto protector en E. coli o S. cerevisiae en una proporcin grande de las esporas germinadas es
soluciones tamponadas a pH 7 aplicando valores de inactivada. Las presiones altas causan menos
presin de 100-400 MPa. En el caso de E. coli este efecto germinacin y slo una pequea proporcin de las
se observ presurizando desde -20 C hasta 20 C. En el esporas germinadas resulta inviable.
caso de S. cerevisiae el efecto protector se midi slo a La inactivacin de las esporas es ms efectiva
20 C. Asimismo, en las levaduras Zygosacharomyces cuando el valor de pH es cercano a la neutralidad y
rouxii y S. cerevisiae se observaron efectos menos efectiva a niveles extremos de pH. Los solutos
baroprotectores usando NaCl y glucosa. Estos no inicos a baja aw tienen pocos efectos sobre la
microorganismos se inactivaron sin la adicin de estos inactivacin de las esporas mediante tratamientos de
solutos a 200 MPa. Al aadir NaCl al 20% o glucosa al APH. La presencia de solutos inicos como NaCl o
40% se necesit aplicar presiones de 400-500 MPa para CaCl 2 disminuye la inactivacin (Sale et al., 1969). La
conseguir el mismo nivel de inactivacin en las mismas mayora de las esporas no pueden germinar a presiones
condiciones de presurizacin (25 C, 30 min) (Takahashi altas en ausencia de iones inorgnicos. Los iones
et al., 1993). Sin embargo, en productos alimentarios tambin provocan un aumento en la prdida de la
desecados o con bajo contenido en agua, como las resistencia al calentamiento por las esporas en
especias, el tratamiento APH no es efectivo con fines de soluciones tampn si los comparamos con suspensiones
esterilizacin, al menos se necesita un porcentaje de agua de agua destilada a la misma presin y temperatura.
de un 70% para lograr reducir algo la poblacin La germinacin iniciada a tratamientos de APH
microbiana en mezclas de especias que contienen 105 bajos es dependiente de los constituyentes del medio. Los
microorganismos por gramo (Kowalski et al., 1992). aminocidos alanina y riboniacina actan como
potenciadores efectivos de la presin en la germinacin
Inactivacin de esporas bacterianas de esporas de Bacillus cereus. Los potenciadores e
inhibidores de la germinacin son menos eficaces cuando
Una de las operaciones ms difciles en la se incrementa la presin. Los inhibidores alcohol octlico
conservacin de los alimentos es la inactivacin de las y cloruro de mercurio previenen totalmente la germinacin
esporas bacterianas. Aunque es posible inactivar las de B. cereus y B. coagulans a 400 y 600 MPa,
esporas por tratamientos trmicos, no es muy deseable respectivamente (Cheftel, 1991).
debido a que el calor afecta a la calidad de los alimentos El azcar y la sal son inhibidores efectivos en la
destruyendo nutrientes termolbiles. A temperatura inactivacin de las esporas. La presencia de glucosa,
ambiente, las esporas de las levaduras y mohos se
sacarosa y glicerol disminuy la eficiencia en la
inactivan fcilmente a presiones que oscilan entre 300-
inactivacin. Un comportamiento similar se observ en
400 MPa. Pero las esporas bacterianas en muchas
esporas de B. licheniformis en vegetales dulces y salados
ocasiones resisten presiones de hasta 1000 MPa.
(Taki et al. 1991). Este efecto protector quiz se deba a la
Generalmente en la inactivacin de las esporas se
disminucin de la actividad de agua en la espora.
necesitan combinaciones de presin y temperatura,
El comportamiento de las esporas sometidas a
debido a que la aplicacin de APH resulta insuficiente.
altas presiones se ha investigado hace ya algunos aos,
Por ejemplo, las esporas microbianas no se inactivaron
cuando se sometieron a presiones de 1000 MPa a y as se comprob que las esporas de Bacillus spp.
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tratadas en un rango de presiones de 100 a 800 MPa, se y el efecto que provocan en las protenas (Balny y Masson,
inactivaban entre 100 y 300 MPa (Sale et al., 1969). La 1993; Gross y Jaenick, 1994; Balny, 1998), enzimas
germinacin de las esporas a formas vegetativas ocurre (Hendrickx et al., 1998; Ashie y Lanier, 2000) o/y otras
en ese mismo rango, siendo completamente inactivadas biomolculas (Mozhaev et al., 1994; Heremans, 1982;
con la aplicacin de esas presiones (Gould y Sale, 1970). 1995; Tauscher, 1995; Farkas y Hoover, 2000).
Ms recientemente, se lograron hasta 6 reducciones La APH causa una disminucin en el espacio
logartmicas en la velocidad de crecimiento de las molecular disponible o un aumento de la interaccin entre
esporas de Bacillus stearothermophilus cuando se partculas y afecta a las reacciones en las que se produce
aplicaron presiones de 600 MPa a 70 C y empleando 4- un cambio en el nmero de grupos ionizables. Las
6 ciclos de 5 min (Hayakawa et al., 1994). En condiciones reacciones no se ven modificadas por las altas presiones
similares, es decir, una combinacin de alta presin (600 si no existe un cambio de volumen entre productos y
MPa), temperatura (60 C); y con slo un ciclo de reactivos o si ambos poseen cargas iguales. Las reacciones
tratamiento (20-60 min) se inactivaron tambin esporas en las que se forman enlaces de hidrgeno se ven
de B. stearothermophilus (Seyderhelm y Knorr, 1992). favorecidas por la APH, debido a que estos enlaces
Se investigaron los efectos combinados de presin, provocan una disminucin en el volumen de las molculas.
temperatura, pH y la presencia de nisina y laurato de En las protenas, la presin acta principalmente en los
sacarosa sobre esporas de Bacillus subtilis 168 y enlaces hidrofbicos y electrostticos de la molcula. La
Clostridium sporogenes PA 3679. La poblacin de esporas APH causa la desprotonacin de los grupos cargados, la
de C. sporogenes PA 3679 se redujo a 2.5-log cuando se rotura de los puentes inicos y de los enlaces hidrofbicos,
expusieron a presiones de 404 MPa a 25C, pH 4 durante de este modo se producen cambios conformacionales y
30 min. Pero, el mismo tratamiento a pH 7 redujo las estructurales. Las transiciones estructurales estn
esporas menos de 0.5-log. La presurizacin de las esporas acompaadas de grandes cambios de hidratacin. Los
de B. subtilis 168 a 70C, pH 6 7 durante 15 min a 404 cambios de hidratacin son la mayor fuente de la
MPa result en una reduccin de 5-log, comparada con disminucin del volumen relativo a la disociacin y
una reduccin de <0.5-log para el mismo tratamiento de desdoblamiento de las protenas (Barbosa-Cnovas et al.,
presurizacin a 25C. Las esporas de Bacillus subtilis 1998). La extensin de la desnaturalizacin mediante la
figuran entre las esporas bacterianas ms resistentes a la APH depende del carcter hidrofbico o hidroflico de la
presin. molcula. Como hemos mencionado anteriormente,
Se observ que la nisina tuvo un efecto sinrgico presiones en el rango de 100-300 MPa provocan una
en la inactivacin de las esporas de B. subtilis 168 y C. desnaturalizacin reversible, debido a la disociacin de
sporogenes PA 3679 cuando se combinaron con la presin, las protenas oligomricas, mientras que presiones por
temperatura elevada y pH bajo. B. subtilis 168 fue encima de 300 MPa causan desnaturalizacin irreversible,
resistente a 0.1% de laurato de sacarosa. Pero, cuando se debido a la desnaturalizacin de la cadena protenica
combin con un pH de 6 y se le aplic una presin de 400 individual. Los cidos nucleicos en una clula son ms
MPa a 45 C durante 15 min un efecto sinrgico elimin baroresistentes que las molculas proteicas. Las molculas
la suspensin de esporas de 1 x 10 6/ mL. Las esporas del ADN son ms estables a altas presiones, mientras que
daadas trmicamente son ms sensibles a la nisina que temperaturas altas causan su desnaturalizacin.
las no expuestas al tratamiento trmico. Las propiedades Las altas presiones modifican la estructura terciaria
antimicrobianas del laurato de sacarosa para inactivar o y cuaternaria de las protenas, lo cual significa que las
interferir en el brote de las esporas se aumentaron enzimas son alteradas por la APH. Esta alteracin es
notablemente por la presin y por la temperatura alta debida a la modificacin de las estructuras
(Stewart et al., 2000). intermoleculares y cambios conformacionales en el sitio
activo de la enzima. Se ha observado que algunas enzimas
se inactivan con las altas presiones, mientras que otras se
EFECTOS DE LA APH SOBRE LOS ENZIMAS activan. Por ejemplo, las deshidrogenasas de E. coli se
inactivan completamente cuando se someten a presiones
La APH aumenta las velocidades de las reacciones que de 100 MPa durante 15 min a 27 C, mientras que la
involucran una disminucin del volumen y retarda aquellas actividad de la aspartasa de esta bacteria se increment
donde el volumen aumenta, es decir, su efecto se rige por cuando la presin se elev a 680 MPa.
el principio de Le Chatelier, segn la siguiente ecuacin: Hendrickx et al. (1998) agrupan en dos los efectos
P de la APH sobre las enzimas: presiones relativamente
Ln k cintica = Ln k0 V # bajas, del orden de 100 MPa que activan algunas enzimas
RT (fundamentalmente las de tipo monomrico) y presiones
donde k es la constante de la reaccin y V# el mucho ms altas, que provocan inactivacin enzimtica.
volumen de activacin (variacin de volumen entre el Tanto la activacin como la inactivacin mediante el uso
complejo activado y los reactivos). Distintos de APH tiene mucha relevancia en la calidad de los
investigadores explican de forma ms o menos detallada productos alimentarios. El efecto de inactivacin
las ecuaciones y fenmenos que describen los efectos enzimtica provocado por las altas presiones se investig
cinticos y termodinmicos asociados a las altas presiones por vez primera en 1932 (Ashie y Lanier, 2000).
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ALTAGA 2001 Tllez-Luis et al.: Aplicacin de la alta presin hidrosttica en la conservacin de los alimentos
Probablemente sean las polifenoloxidasas las ser que la autolisis prevaleci sobre la reactivacin a
enzimas sobre las que ms se han estudiado los efectos temperaturas de medio ambiente, mientras la reactivacin
de la APH. En la Tabla 4 se aprecia cmo vara la actividad predomin a bajas temperaturas debido a la disminucin
de algunas polifenoloxidasas segn el tipo de alimento y de la actividad proteoltica (Ashie y Lanier, 2000).
el tratamiento aplicado. Se determin la efectividad de la La Tabla 4 muestra las caractersticas de
alta presin sobre la actividad en polifenoloxidasas de inactivacin o la prdida de actividad de algunas enzimas
varias frutas. Presiones de 600, 700, 800 y 900 MPa a al someterlas a tratamientos de APH en distintas matrices
25 C inactivaron las polifenoloxidasas de manzanas, uvas, alimentarias. Obsrvese por ejemplo que la
aguacates y peras, respectivamente. Mientras que las transglutaminasa de surimi se inactiva a 300 MPa,
polifenoloxidasas de ciruelas requirieron 900 MPa a 50C mientras que la polifenoloxidasa de pera quintuplica su
(Weemaes et al., 1998). La diferencia de los sistemas actividad a 400 MPa. Se aprecia tambin que los valores
enzimticos en la estabilidad a la presin y temperatura de alta presin para reducir la actividad varan mucho,
probablemente es debido a los diferentes efectos incluso dentro de un mismo tipo de enzima como la
mecnicos sobre las distintas conformaciones enzimticas. polifenoloxidasa.
La matriz alimentaria tambin influye en la resistencia/
estabilidad a la presurizacin (Hendrickx et al., 1998).
Los efectos de activacin observados pueden ser CALIDAD SENSORIAL DE LOS ALIMENTOS
atribuidos a la configuracin reversible y/o a los cambios PRESURIZADOS
de conformacin de la enzima y/o a las molculas del
substrato (Cano et al., 1997). La APH modifica las caractersticas
Polifenoloxidasas de extractos de patatas y organolpticas de los alimentos. Casi en todos los casos
manzanas disminuyeron su actividad en un 60% a 800 acta mejorndolas. El zumo de pomelo tratado por
MPa durante 10 min. Tanto championes como patatas y APH, a diferencia de los procesos trmicos
manzanas mostraron un oscurecimiento despus de la convencionales, no posee el sabor amargo que le
presurizacin (Gomes y Ledward, 1996). En el guacamole confiere el limoneno. Los zumos de otros ctricos,
(crema de aguacate) se evaluaron los efectos sobre la despus del tratamiento a APH adquieren un sabor
aceptabilidad sensorial y el color tras realizar tratamientos fresco, sin prdida de la vitamina C y con una vida til
de presurizacin continuos utilizando ciclos o pulsos de de 17 meses. Se ha comprobado que melocotones y
alta presin y se midieron las actividades de la peras tratados por APH permanecen esterilizados
polifenoloxidasa y de la lipoxigenasa. Despus de un durante al menos 5 aos. Peras y kakis adquieren una
tratamiento continuo durante 20 min a 689 MPa, la textura ms blanda, se vuelven ms transparentes y
actividad de la polifenoloxidasa residual fue de 22 % y la dulces cuando son tratados con APH. Tanto colores,
de la lipoxigenasa se redujo hasta un 5% con slo 10 min como sabores y olores, no se ven afectados por la APH
de tratamiento. La aceptabilidad sensorial y el color del (Sangronis et al., 1997). Sin embargo, en el caso de
guacamole tratado por la APH no fueron algunos tipos de frutas como las peras se produce un
significativamente diferentes del guacamole no oscurecimiento rpido despus del tratamiento por altas
presurizado. El oscurecimiento del guacamole durante el presiones debido a que los valores de APH aplicados
almacenamiento a 5, 15 y 25 C despus de la incrementan la actividad de la polifenoloxidasa (Asaka
presurizacin, puede ser atribuido a la actividad de la y Hayashi, 1991). Esto no ocurre en otras frutas como
polifenoloxidasa residual despus de la alta presin y/o a manzanas (Ibarz et al. 1996), tampoco en pltanos, ni
su regeneracin durante el almacenamiento (Palou et al., en ciertos tubrculos (patatas y boniatos). Otros autores
2000). Los cambios en las enzimas presurizadas son (Kimura et al., 1994) afirman que las mermeladas
dependientes del pH, concentracin del substrato, obtenidas por APH retienen el sabor y el color de la
estructura de la subunidad de la enzima y temperatura de fruta fresca, a diferencia de las mermeladas
presurizacin. convencionales procesadas por calentamiento.
Otros autores investigaron los efectos de la alta En cuanto al efecto de APH sobre la textura, se
presin sobre la actividad de las proteasas endgenas de han observado efectos contrarios. Por un lado, los tejidos
msculo de pescado porque pueden ser responsables del de la carne y filetes de pescado en pre-rigor mortis ,
ablandamiento en la textura. Las enzimas se inactivaron tratados con APH se ablandan y se vuelven opacos. La
en mayor o menor medida, dependiendo de la cantidad carne fresca se ablanda en slo 10 min y adems se
de presin aplicada y de la duracin de la presurizacin. incrementa la digestibilidad de sus protenas, mientras que
La catepsina C de las especies de pescados Pomatomus a presin atmosfrica se necesitan 2 semanas para su
saltatrix y Calamus penna perdieron ms del 80% de su ablandamiento. Por otro lado, la estructura interna del
actividad cuando se trataron a presiones de 300 MPa tomate se endurece con la presurizacin.
durante 30 min. Bajo las mismas condiciones, las enzimas Se utiliz una tcnica histolgica para evaluar
tripsina y quimiotripsina retuvieron un 30-40 % de su las modificaciones producidas en la microestructura del
actividad. La actividad de todas las enzimas continu en melocotn y del mango utilizando los mtodos clsicos
declive cuando se almacenaron a temperatura ambiente, de congelacin y se compar con las obtenidas
pero fueron parcialmente recuperadas durante el mediante congelacin a alta presin (high pressure
almacenamiento a temperaturas de refrigeracin. Parece shift freezing). Con este mtodo, las muestras se
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Cienc. Tecnol. Aliment. Vol. 3, No.2, pp. 66-80, 2001 ISSN 1135-8122 2001 ALTAGA
congelaron a 20 C a presiones de 200 MPa, evitando deba a la desnaturalizacin proteica provocada por las
as la formacin de hielo. El nivel alto de altas presiones.
superenfriamiento provoca una nucleacin uniforme y Los huevos sometidos a altas presiones no tienen
rpida del hielo a travs del volumen del alimento. Este el sabor y el olor sulfuroso caracterstico provocado por
mtodo mantiene la estructura del tejido natural en casi el calentamiento. El calor produce la formacin de
toda su extensin, ya que se evitan los problemas lisinoalanina, promotora de estas caractersticas. Adems,
asociados con gradientes trmicos. La congelacin la lisinoalanina limita la asimilacin de aminocidos en
mediante altas presiones previene la prdida de la el cuerpo humano (Hayashi, 1989b).
calidad debido a la presencia de grandes cristales de La APH (200-300 MPa) impide el incremento en
hielo (Otero et al., 2000). Los cambios producidos en la acidez del yogur ya que evita la reproduccin de las
las transiciones de fase al aplicar altas presiones se bacterias lcticas (Hoover, 1993). Las altas presiones
pueden aprovechar para ciertas operaciones de retardan las reacciones de fermentacin, as, la leche no
procesado y conservacin en determinados alimentos se agria en 12 das cuando se trata a 70 MPa y la aplicacin
(Knorr et al., 1998). de presiones de 1371 MPa durante 1 hora posponen la
La alta presin provoca la gelatinizacin del descomposicin de la leche, que se puede consumir
almidn, efecto que se manifiesta a presiones superiores durante 4 das ms (Johnston et al., 1992).
a 400 MPa en harinas de trigo (Gomes et al., 1998). La Shimada et al. (1990) analizaron las caractersticas
alteracin de la estructura del almidn y de la protena organolpticas de 11 alimentos tras someterlos a 500 MPa
aplicando APH podra ser utilizada en el arroz para cocerlo durante 15 min. Encontraron que en arroz y soja no se
en pocos minutos (Hoover et al., 1989). La estructura producan cambios con respecto a la textura y apariencia
cristalina del almidn de maz y de arroz se destruyeron ni en cuanto al sabor y olor, pero la textura de patatas y
por presiones de 500 MPa, mientras que la del almidn otros tubrculos se volvi ms flexible y el sabor de
de la patata no se vio afectada. Estos cambios de la algunas patatas era ms dulce. Peras y manzanas
estructura cristalina se deben al incremento de la densidad. presurizadas resultaron ser ms dulces y transparentes,
Por consiguiente el mejoramiento de la estructura adems las peras adquirieron una textura ms blanda.
cristalina disminuye la densidad del grano (Hibi et al., Estos autores afirman que el pardeamiento enzimtico de
1993). El grano de sorgo se someti a presiones de 500 la patata se incrementaba con la presurizacin, esto puede
MPa a temperatura ambiente por periodos de 5 minutos, ser debido a un incremento en la actividad de la
observndose un incremento en la calidad de la malta de polifenoloxidasa, como se ha comentado previamente.
esta gramnea (Dewar et al., 1994). Grant et al., (1941), ya La APH inhibe las reacciones de condensacin
observaron a mediados del siglo pasado la gelatinizacin que inician el oscurecimiento no enzimtico conocida
y coagulacin de la clara de huevo y comprobaron que se como reaccin de Maillard. Este efecto puede ser
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ALTAGA 2001 Tllez-Luis et al.: Aplicacin de la alta presin hidrosttica en la conservacin de los alimentos
beneficioso o no, dependiendo del alimento presurizado. y fsica. Se estudi la mejora de la calidad del pur de
Tamaoka et al. (1991) comprobaron que las reacciones de melocotn utilizando un lavado con agua a altas presiones,
pardeamiento no enzimtico fueron inhibidas aplicando entre 345 a 758 MPa, para eliminar la podredumbre gris.
50-200 MPa. Otro grupo de investigacin (Hill et al,. El proceso se mostr eficaz y puede ser utilizado
1996) lleg a resultados similares, trabajando ambos comercialmente para procesos previos o posteriores al
grupos con sistemas modelos en lugar de matrices pelado. El lavado con agua a altas presiones puede ayudar
alimentarias. a asegurar la calidad del pur y a una utilizacin ms
La no alteracin del sabor de los alimentos puede eficiente del tejido de la fruta sana (Tidwell et al., 1997).
deberse al hecho de que la APH no ataca los enlaces Tambin se estudiaron los efectos de la alta presin
covalentes, los cuales son tpicos en el sabor, pero los sobre el comportamiento emulsificador de la protena
enlaces no covalentes como los puentes de hidrgeno concentrada del suero. Muestras de soluciones y
tpicos de la estructura terciaria de las protenas sufren emulsiones de protenas se sometieron a presiones de 800
modificaciones importantes (Sangronis et al., 1997). MPa durante 40 min. Se observ que la lactoglobulina, la
La APH representa una tecnologa de protena del suero presente en el concentrado de protena
procesamiento potencial para los alimentos marinos con en un 55%, sufri una agregacin limitada despus de
los que se fabrica surimi. La gelificacin de surimi someterla a un tratamiento de presurizacin. Mediante
mediante la APH se atribuye a un incremento de los datos de densidad ptica se apreci que una agregacin
enlaces cruzados de las cadenas de miosina en el msculo similar ocurre en el concentrado de protena. Esto es
del pescado. Se investigaron los efectos de la APH en la debido probablemente a la exposicin de las regiones
consistencia del gel del surimi de pescadilla del Pacfico hidrofbicas y/o los grupos sulfdricos de las protenas
y de carbonero de Alaska. En los geles obtenidos con del suero facilitando la formacin de oligmeros. Sin
presurizacin la resistencia a la deformacin se increment embargo, la agregacin de la protena del suero es la causa
3 veces con respecto a los geles obtenidos por principal de la perdida de la funcionalidad ya que ningn
calentamiento a 90 C en bao de agua. Tanto el surimi aumento en la superficie hidrofbica debera mejorar la
de carbonero como el de pescadilla mostraron un eficiencia emulsificadora. El tratamiento de APH a
incremento significativo en la resistencia a la deformacin temperatura ambiente, no parece mejorar las propiedades
del gel para todos los tratamientos de la presin excepto de emulsificacin de las protenas del suero (Galazka et
para los realizados a 50 C porque las proteasas en el al., 1995).
surimi tienen una temperatura ptima de actividad en torno Aunque las caractersticas sensoriales de los
a 55 C. La relacin entre la presin y los valores de alimentos en la mayora de los casos mejoran o no sufren
deformacin fue inversamente proporcional (Park, 2000). modificaciones con la APH, en otros s se alteran y algunas
Tanto la textura como la estructura histolgica de veces de forma indeseable. La influencia de la APH en
zanahorias mejoraron cuando se expusieron a presiones las caractersticas organolpticas de los alimentos depende
de 200 a 400 MPa a temperaturas de -20 C. Cuando se del tipo de alimento y de las condiciones de presurizacin
congelaron a 100 MPa se observaron daos histolgicos. y no se puede generalizar, hay que estudiar cada caso en
Este hecho se basa en que la densidad del agua a 200 particular antes de plantearse la comercializacin de un
MPa a -20 C es mayor que la densidad a presin producto alimenticio presurizado.
atmosfrica. Utilizando presiones por encima de los 500
MPa se obtuvieron resultados de textura peores que
utilizando 100 MPa debido a que durante la reduccin de BIBLIOGRAFA
la presin o la descongelacin existen estados de
transicin (Fuchigami et al., 1997). Amagat, E. H. 1878. Sr La Compressibilit de Gaz des
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