Muestras de referencia

Para la identificacin del ADN se debe realizar una extraccin de ADN que puede proc
eder de
sustancias tales como:
-Artculos personales (por ejemplo cepillo de dientes, maquina de afeitar).
-Banco de muestras (como un banco de esperma o la biopsia de un tejido).
-Parientes de sangre.
-Restos humanos previamente identificados.
-Algunas muestras de referencia son recolectadas con un hisopo bucal.
Existe otra clase de secuencias repetitivas de ADN dispersas, los microsatlites (
short tandem
repeats, STRs) que contienen repeticiones ms cortas, de 2 a 5 pb. Literalmente ci
entos de sistemas de
STRs han sido mapeados en todo el genoma humano, varios fueron investigados para
su aplicacin en tests
de identificacin de humanos. Fueron encontrados en casi todos los cromosomas en e
l genoma y pueden ser
amplificados usando una variedad de cebadores por el mtodo de PCR. Se analizan pr
incipalmente
repeticiones de 4 pb que son amplificadas por PCR con mayor fidelidad que las re
peticiones dinucletidicas
aunque tambin se usan repticiones tri y pentanucleotdicas. Al examinar mltiples STR
loci, se puede
obtener un alto grado de discriminacin entre individuos dada la enorme variedad d
e alelos presentes en una
poblacin.
Ventajas de los STRs sobre los VNTRs
El estudio de STRs por PCR presenta varias ventajas sobre las tcnicas convenciona
les de Southern
blot de los VNTRs. Se pueden obtener alelos discretos de los STRs, dado su menor
tamao, pudindose
diferenciar los fragmentos de ADN por una nica base. Adems puede usarse menor cant
idad de ADN o
incluso ADN degradado. Por lo tanto, la integridad y cantidad de muestra es un p
roblema menor al utilizar los
mtodos de tipificacin por basados en PCR que con los mtodos convencionales de obten
cin de
fragmentos de distintos tamaos como los VNTRs.
Para revisin del uso de STRs en identidad gentica, se puede acceder a:
http://www.promega.com/pnotes/58/5189c/5189c.html.
Short Tandem Repeats (STRs)
La regin repetida es variable entre muestras mientras
que las regiones laterales donde se unen los cebadores
para la PCR son constantes.
7 repeticiones
8 repeticiones
AATG
Homocigota = Ambos alelos tienen el mismo nmero de
repeticiones
Heterocigota = Los alelos son distintos y pueden ser diferenciados
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Las huellas dactilares de ADN resultaron un importante avance en medicina forens
e. Igualmente, debe
aclararse que esta metodologa ha sido discutida en algunos mbitos por problemas en
las interpretaciones
estadsticas. Es absolutamente necesario que se tengan en cuenta todos los control
es, incluyendo muestras
de ADN de la vctima, no slo del sospechoso. Otro cuestionamiento a esta tcnica, es
que dada la gran
amplificacin obtenida por PCR se pueden amplificar cantidades mnimas de ADN contam
inante de una
fuente no relacionada con el caso. Los resultados obtenidos de las muestras toma
das de los sospechosos se
comparan con el del ADN obtenido de una muestra de sangre tomada de la vctima (Fi
g. 9; carril 1). Aunque
slo se obtengan pequeas cantidades de la muestra del cuerpo de la vctima, el ADN se
puede amplificar
por PCR. Los resultados, usando una sonda que reconoce una de las secuencias rep
etitivas del ADN
humano, se muestran en la Figura 9.
1- A qu se debe que en los distintos individuos aparezcan fragmentos distintos mar
cados si se utiliza la
misma sonda?
2- Cul de los sospechosos le resultara culpable?
3- Por qu se analiza tambin el ADN de la vctima?
Figura 9: Anlisis de los VNTRs realizado con las distintas muestras obtenidas en
la escena, el carril 1 muestra
los fragmentos de VNTRs obtenidos de la muestra de sangre tomada de la vctima. La
s muestras obtenidas se
amplificaron por PCR y se sometieron a Southern blot utilizando una sonda que re
conoce una secuencia de 13 pb
comn a todos los VNTRs presentes en el genoma humano.

2.Todos los siguientes datos nos deben hacer pensar en eldiagnstico de prolactino
ma, EXCEPTO uno:
1)Mujer con amenorrea secundaria y prolactina basal mayorde 300 microg/L.
2)Embarazada con prolactinemia de 400 microg/L.
3)Mujer con amenorrea secundaria, test de embarazo nega-tivo y prolactinemia de
160 microg/L.
4)Mujer con alteraciones menstruales, prolactina de 75 mi-crog/L y adenoma hipof
isario de 23 mm.
5) Amenorrea primaria, prolactinemia de 200 microg/L y RMselar sin alteraciones.
3.Varn de 40 aos, sin antecedentes clnicos ni farmacolgicosde inters. Acude por disfu
ncin sexual, sin otra manifestacinclnica. Niveles sricos de prolactina: 330 microg/L
. En la TCcraneal se observa un macroadenoma de 1,5 cm, limitado a lasilla turca
. La actitud teraputica a seguir es:
1)No precisa tratamiento.
2)Ciruga transesfenoidal.
3)Ciruga combinada con bromocriptina, con o sin radioterapia.
4)Cabergolina, que es un agonista dopaminrgico.
5)Antagonistas de DA, como bromocriptina.
4.Una paciente de 25 aos, diagnosticada de hiperprolactine-mia idioptica, sin trat
amiento ni sintomatologa en la actua-lidad, salvo la existencia de menstruaciones
irregulares deforma ocasional, expresa en una visita rutinaria deseo deembarazo
. Cul de las siguientes actitudes terapeticas serala ms apropiada?:
1)No tratar, y cuando se produzca el embarazo, administrardosis bajas de bromocr
iptina, para mantener cifras deprolactina dentro de la normalidad.
2)Iniciar tratamiento con dosis bajas de bromocriptina, ycuando se produzca el e
mbarazo, aumentar la dosis hastamantener cifras de prolactina dentro de la norma
lidad.
3)Iniciar tratamiento con dosis bajas de bromocriptina, y cuandose produzca el e
mbarazo, suspender la medicacin, realizan-do controles analticos y campimtricos per
idicamente.
4)Iniciar tratamiento con cabergolina, y cuando se produzcael embarazo, mantener
dosis mnimas hasta mantener cifrasde prolactina dentro de la normalidad.
5)Mantener sin ningn tipo de tratamiento, antes y durante elembarazo.
5.Referente a la acromegalia, es cierto que:
1)El estudio anatomopatolgico postquirrgico determina sise trata de adenoma o carc
inoma.
2)Se puede asociar a HTA, diabetes mellitus e hiperprolacti-nemia.
3)La prueba de laboratorio diagnstica es la determinacinbasal de GH en suero.
4)La hipercalcemia y la hipercalciuria, con litiasis renal, sonfrecuentes.
5)La hipercalcemia asociada sugiere un MEN 2a.