1.

Elabore una tabla para las siguientes pruebas de ensayo:

Estado fsico,
Siembra y Reactivos Tiempo
color al T y t de
Nombre pH inicial cantidad del Utilidad necesarios mximo de Interpretacin
preparar el incubacin
inculo (g/L) lectura
medio
RM:
Agregar 5
gotas de RM
al 0.04% en 5
mL y observar RM:
el color del + : Rojo.
Inoculacin Reacciones de Mezcla de medio. : Amarillo.
directa por rojo de metilo y peptonas (7)
Lquido, mbar
difusin, a partir acetil-metil- VP:
claro, 35-37C por 48- VP:
Caldo RMVP 6.9 0.2
transparente
del cultivo en carbinol (Voges-
72 hrs.
Glucosa (5) Agregar a 5
estudio. Proskauer) del mL del medio + : Rojo-
sin precipitado. rosado.
grupo Fosfato de una pizca de
Inculo liviano. Enterobacter. potasio (5) creatinina :
ms 5 mL de Ausencia de color
KOH al 40%. rojo.
La lectura
final de hace
hasta 4 horas
ms tarde.
Caldo con 35-37C durante
nitrato 24-48 hrs.
SIM 7.3 0.2 Semislido, Sembrar por Diferenciacin e 35C durante Peptona de 24 hrs luego Mviles:
mbar. picadura de la identificacin 24-48 hrs. casena (20) de agregar el presencia de
longitud del tubo. de reactivo de turbidez o
Enterobacterias Peptona de Kovacs o de crecimiento ms
y detecta la carne (6.1) Erlich (antes all de la lnea de
produccin de adicionar 1 siembra.
sulfuros, indol y FeSO4 y mL de
Inmviles:
movilidad de (NH4)2SO4 cloroformo).
crecimiento en la
las mismas. (0.2)
lnea de siembra.
Tiosulfato SH2 ( + ):
de sodio (0.2) ennegrecimiento a
lo largo de la lnea
Agar (3.5) de siembra o en
todo el medio.
SH2 ( ): el
medio permanece
sin cambio de
color.
Indol ( + ):
 color rojo
Indol ( ):
sin cambio de
color.
Movilidad:
- ( + ):
presencia de
turbidez o
crecimiento ms
all de la lnea de
siembra.
- ( ):
crecimiento
Extracto de ___ hrs.
solamente en la
levadura (3) Agregar el lnea de siembra.
Peptona de reactivo de
Ornitina
Identificacin gelatina (10) Kovacs o de
decarboxilasa:
de Erlich (antes
A partir de un - ( + ): color
Enterobacterias Peptona de adicionar 1
Semislido, cultivo puro del prpura.
en base a su casena (10) mL de
prpura microorganismo 35-37 C - ( ): color
movilidad, cloroformo).
MIO 6.5 0.2 transparente a en estudio,
actividad de
durante 24-48 L-Ornitidina amarillo. A veces
ligeramente inocular por hrs. (5) La prueba de se puede
ornitina
opalescente. puncin profunda indol se desarrollar un
decarboxilasa y Dextrosa (1)
con ansa recta. realiza una color violceo en
produccin de
Agar (2) vez que se ha la superficie del
indol.
determinado medio.
Prpura de la movilidad y
bromocresol Prueba del
la prueba de
(0.02) indol:
ornitina.
- ( + ): color
rojo al agregar el
reactivo revelador.
- ( ): el color
del reactivo
revelador
permanece
incoloro-
amarillento.
Fenilalanina 7.3 0.2 Slido en pico A partir de un Para diferenciar 35-37 C Extracto de Para revelar, - ( + ):
desaminasa de flauta, cultivo puro de Morganella durante 18 a 24 levadura (3) agregar 4-5 desarrollo de color
amarillo 18-24 horas, morganii hrs. gotas de verde plido a
mbar. sembrar un biogrupo 1 y 2, DL- FeCl3 y intenso en el pico
inculo denso Proteus spp. y Fenilalanina efectuar la de flauta y en el
estriando la Providencia (2) observacin lquido de
superficie del spp., de la Fosfato dentro de los condensacin.
medio. mayora de disdico (1) primeros 5
- ( ): sin
otros miembros minutos
NaCl (5) cambios de color.
de la familia
El medio
 Enterobacteriac
eae, en base a permanece
la presencia de amarillo debido al
Agar (12)
la enzima color del reactivo
fenilalanina cloruro frrico.
desaminasa.
- ( + ):
Extracto de 48 horas decoloracin
carne (3) despus de alrededor del
Para detectar la incubar, se desarrollo
Inocular por 35-37C durante Almidn
Agar almidn 7.5 0.2 Slido
estra cerrada.
hidrlisis de
24-48 horas.
cubre la placa (hidrlisis).
almidn soluble (10) con solucin
de lugol y se - (-): color
Agar (12)
lee. parduzco (no
hidrlisis).

2. Elabore una tabla para las siguientes pruebas bioqumicas o medios de ensayo:

Estado fsico,
Siembra y
color al T y t de Indicador de Interpretacin
Nombre pH inicial cantidad del Utilidad
preparar el incubacin pH del viraje
inculo
medio
Para estudios de Amarillo:
Caldo rojo de fermentacin.
Lquido, color Por difusin de fermentacin de 35C durante
fenol + 7.4 0.2 Rojo de fenol
rojo inculo denso carbohidratos 18-24 horas Rojo: no hay
carbohidratos
por bacterias. fermentacin.
Para la
diferenciacin
de
Prpura intenso
Slido en pico No punzar el microorganismo 35C durante 24
o rojo azulado:
Urea de de flauta, color fondo; sirve s, bacilos hrs y todos los
Christensen
6.8 0.2 amarillo rosado como indicador. entricos, das sucesivos
Rojo de fenol Organismos
capaces de atacar
ligero. Inculo denso. basndose en la durante 6 das.
urea.
capacidad de
hidrolizar la
urea.
Gelatina 6.8 0.2 Semislido Por puncin, Para detectar 35C durante Gelatina Positivo:
nutritiva inculo denso. bacterias 24-48 horas. Licuefaccin del
proteolticas y medio al colocar
para el recuento los tubos en
de grmenes del refrigeracin 30
agua. min.
NOTA: Si el
resultado es
 negativo, incubar
72 hrs y repetir el
procedimiento.
Oxidacin:
Tubo abierto:
Determinar el amarillo (+)
metabolismo (cido).
oxidativo- Tubo cerrado:
fermentativo de verde (-)
las bacterias
Fermentacin:
Gram negativas,
Tubo abierto:
al ser 35C durante 48
amarillo (+) (cido
suplementado hrs. Puede
Hugh Leifson Semislido, Por puncin, Azul de con gas)
7.1 0.1 con hidratos de necesitar 3-4 o
(O/F) color verde inculo denso. bromotimol Tubo cerrado:
carbono. hasta 14 das de
amarillo (+)
Diferenciar incubacin.
(cido/cido con
especies
gas)
bacterianas.
Determinar Sin oxidacin o
movilidad y fermentacin:
produccin de Tubo abierto y
gas. cerrado:
verde/verde-azul
(-)
TSI 7.3 0.2 Slido en pico Por puncin y Para la 35C durante Rojo de fenol A=cido
de flauta, color estra diferenciacin 18-24 horas K=alcalino
rojo de
Pico K/fondo A
enterobacterias,
(pico rojo/fondo
en base a la
amarillo): slo
fermentacin de
fermenta glucosa.
glucosa, lactosa,
sacarosa y a la Pico A / fondo A
produccin de (pico
cido amarillo/fondo
sulfhdrico. amarillo):
fermenta glucosa,
lactosa y/o
sacarosa.
Pico K / fondo K
(pico rojo/fondo
rojo): no
fermentador de
azcares.
 La presencia de
burbujas, o
ruptura del
medio de
cultivo:
produccin de gas.
Ennegrecimiento
del medio:
produccin de H2S
Para la (+): crecimiento
diferenciacin y color azul en el
Sembrar en de pico, alcalinidad.
superficie un enterobacterias, (-): el medio
Slido en pico inculo ligero, en base a la permanece de
Citrato de 35C durante Azul de
6.9 0.2 de flauta, color usando una capacidad de color verde debido
Simmons 24-48 horas. bromotimol
verde ansa sin usar citrato a que no hay
arrastrar el como nica desarrollo
agar. fuente de bacteriano y no
carbono y hay cambio de
energa. color.
LIA 6.7 0.2 Slido en pico Por puncin y Para diferenciar 35C durante Prpura de Decarboxilacin
de flauta, color estra, inculo microorganismo 18-24 horas. bromocresol de la lisina:
violeta poco denso. s,
(+): Pico
especialmente
violeta/fondo
Salmonella spp.,
violeta.
basado en la
(-): Pico
decarboxilacin
violeta/fondo
/ desaminacin
amarillo.
de la lisina y en
la produccin de Desaminacin
H2S. de la lisina:
Pico rojizo/fondo
amarillo. Esto
sucede con cepas
del gnero
Proteus,
Providencia y
alguna cepas de
Morganella spp.
Produccin de
H2S:
(+):Ennegrecimi
 ento del medio
(especialmente en
el lmite del pico y
fondo)

3. Por qu el medio TSI no debe leerse antes de 18 horas ni despus de 24 horas de incubacin?

Porque habr oxidacin aerobia de los productos de fermentacin de la lactosa, de la sacarosa o de ambas y el medio en la
parte del agar inclinado terminar por revertir al estado alcalino.

4. Cmo se interpretan los resultados obtenidos a partir del medio TSI?

Pico K/fondo A (pico rojo/fondo amarillo): slo fermenta glucosa.

Pico A / fondo A (pico amarillo/fondo amarillo): fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.

Pico K / fondo K (pico rojo/fondo rojo): no fermentador de azcares.

La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo: produccin de gas.

Ennegrecimiento del medio: produccin de H2S

A= cido; K= alcalino

5. Cmo se observa la desaminacin de la lisina en el medio LIA?

Se observa el pico rojizo y el fondo amarillo. Esto sucede con cepas del gnero Proteus, Providencia y alguna cepas de
Morganella spp.

6. Por qu es importante leer la prueba de rojo de metilo a las 48 horas de incubacin?

Porque los productos finales alcanzan niveles detectables con el tiempo. Si los resultados son dudosos a las 48 horas, habr
que repetir las pruebas con los cultivos incubados a 35-37C durante 4 a 5 das en aerobiosis; en esos casos deben incubarse
duplicados de las pruebas a 25C.

7. Cmo se interpreta la prueba Oxidacin-Fermentacin? Cmo se reportan los posibles resultados obtenidos
a partir del medio O/F de Hugh-Leifson?
 Microorganismos oxidativos del hidrato de carbono en estudio: producen una reaccin cida solo en el tubo abierto.
Presentan poco o nulo desarrollo y ausencia de produccin de cido en el tubo cerrado.

Microorganismos fermentadores del hidrato de carbono en estudio: producen una reaccin cida en ambos tipos de
tubos.

Microorganismos que no utilizan el hidrato de carbono en estudio: no producen cambios ninguno de los 2 tubos, los
cuales permanecen verdes.

Se debe informar: produccin de cido (A), cido con gas (AG), alcalino (K) o sin cambio (-).

Tambin, puede informarse si el organismo es mvil, cuando crece lejos de la lnea de inoculacin.

Las reacciones tpicas son las siguientes:

9. Si el medio SIM se encuentra totalmente ennegrecido a causa de la produccin de H2S Cmo interpretara la
prueba de motilidad?

M (+) / SH2 (-): enturbiamiento del medio.

M (+) / SH2 (+): ennegrecimiento de todo el medio.
M (-) / SH2 (-): crecimiento solamente en la estra.
 M (-) / SH2 (+): precipitado negro alrededor de la estra (pero no ennegrecimiento de todo el medio).

10. Qu importancia tiene la identificacin de las bacterias?

Cuando se han aislado las bacterias causantes de un proceso infeccioso, stas deben ser identificadas hasta llegar a GENERO
Y ESPECIE, para lograrlo se debe evaluar su actividad bioqumica o metablica. Del microorganismo aislado depender el tipo
de tratamiento que debe ser administrado al paciente.