ACOPLAMIENTO A LA CADENA RESPIRATORIA.

OTROS MODOS DE ACOPLAMIENTO:

TRANSPORTE DE IONES Y METABOLITOS A TRAVÉS DE LA MEMBRANA INTERNA
MITOCONDRIAL.
Durante la transferencia de electrones desde el NADH y otros sustratos respiratorios al O2 vía cadena de
transporte electrónico mitocondrial, se translocan protones a través de la membrana interna y se establece un
gradiente de protones y carga.
Este bombeo de protones a través de la membrana da lugar a una diferencia en la concentración de protones a
ambos lados de la membrana, de tal manera que el espacio intermembrana se vuelve más ácido y la matriz más
alcalina.
La energía almacenada en el gradiente electroquímico, a menudo se denomina fuerza protón motriz, se utiliza
para impulsar la síntesis de ATP mediante el movimiento de los protones a favor de gradiente electroquímico a
través de la ATP sintasa. Este proceso se denominó quimiosmosis (Peter Mitchell 1961).

OTRAS HIPÓTESIS:
− Hipótesis del acoplamiento químico:
Sugería que la transferencia de electrones daba lugar a la formación de un intermediario de alta energía que
actuaría como un compuesto con un elevado potencial de transferencia de fosforilos al ADP para formar
ATP.
− Hipotesis conformacional:
Sugiere que se debe de inducir a la enzima a un cambio conformacional que conllevaría a la síntesis de
ATP.
Ninguna de las dos a podido ser demostrada a día de hoy.

ACOPLAMIENTO DE LA SÍNTESIS DE ATP CON EL TRANSPORTE ELECTRÓNICO:

La velocidad de síntesis del ATP, reflejo de la necesidad de ATP por parte de la célula, regula la velocidad de
síntesis de ATP en la mitocondria, la cual, a su vez, regula la velocidad de transferencia de electrones. El
acoplamiento de la síntesis de ATP al transporte electrónico se consigue gracias al gradiente electroquímico.
La velocidad de transporte electrónico mitocondrial monitorizada por la velocidad de consumo del O2, sólo puede
darse rápidamente después de la adición de un dador de electrones, ADP y Pi.

− Razones P/O para el transporte electrónico mitocondrial y fosforilación oxidativa:

La razón P/O (fosfato incorporado en ATP a átomos de O2 utilizados) es una medida del número de
moléculas de ATP formadas durante la transferencia de dos electrones a través de un segmento de la
cadena de transporte electrónico.

AGENTES DESACOPLANTES DE LA FOSFORILACIÓN OXIDATIVA:

− Oligomicina (inhibidor):
Bloquea la síntesis de ATP al impedir el movimiento de protones a través de la ATP sintasa.
− 2,4 dinitrofenol o la carbonilcianuro-p-trifluorometoxi fenilhidrazona (desacoplante):
Son ácidos débiles hidrofóbicos que están protonados en el espacio intermembrana, en donde existe una
mayor concentración de protones como resultado de la transferencia electrónica activa.
Difunden rápidamente a través de la membrana en dirección a la matriz protones desde el espacio
intermembrana, disipando el gradiente electroquímico.
Con este transporte no generan ATP, pero consumen O2.

PROTEÍNAS DESACOPLADORAS
El tejido adiposo marrón juega un papel importante en la termogénesis.
El principal agente implicado en la termogénesis del frío en la grasa
marrón es la proteína desacopladora UCP-1.
UCP-1: transporta protones hacia el interior a través de la membrana mitocondrial interna y de este modo actúa
desacoplando la síntesis de ATP del transporte electrónico.
ESTRUCTURA DE LA ATP SINTASA:
Es un enzima grande y complejo, anclado a la membrana, parece una pelota sujeta de un palo. Está formada por
dos subunidades.
− Subunidad F1:
Se proyecta hacia la matriz mitocondrial y posee a actividad catalítica de la enzima.
Formada por cinco tipos de cadenas polipeptídicas (α3, β3, γ, δ, ε ), con la estequiometría indicada en los
subíndices.
o α y β:
Se disponen de forma alternada en un anillo hexamérico, son homólogas entre sí.
 Subunidad β:
Cada subunidad β tiene una conformación diferente según la presencia o ausencia de sustrato.
Una subunidad β está unida a un análogo del ATP.
Segunda subunidad β unida al ADP.
Tercera subunidad β vacía.
o γyε :
Forman el tallo central.
 Subunidad γ:
Contiene un superhelicoide de hélices a que llega hasta el centro del hexámero αβ.
Rompe la simetría del hexámero αβ.
− Subundidad F0:
Es un segmento hidrofóbico que atraviesa la membrana mitocondrial interna.
Contiene el conducto de protones del complejo.
o Subunidades c:
Entre 10-14 subunidades c forman el anillo del conducto de protones.
Cada cadena polipeptídica forma una pareja de hélices α que atraviesan la membrana.
Un residuo de ácido aspártico se sitúa en la mitad de la segunda hélice de cada
cadena.
o Subunidad a:
Localizada en la periferia del anillo.
Contiene dos semiconductos de protones que no atraviesan la membrana.
Cada semiconducto está interaccionando directamente con una subunidad c.

El conducto de protones es dependiente tanto del anillo c como de la subunidad a.

Las unidades F1 y F0 están conectadas de dos formas, mediante el tallo centras γε y mediante una columna
externa.
o Columna externa:
Formada por 1 subunidad α, 2 subunidades ß y 1 subunidad δ.

MECANISMO DE CAMBIO DE UNIÓN (mecanismo unidad F0) :

Sugiere que las 3subunidades β de la ATP sintasa adoptan conformaciones diferentes que cambian durante la
catálisis con sólo una subundidad β que actúa como sitio catalítico.
Una subunidad β tiene una conformacióna abierta (O), con baja afinidad hacia los ligandos está vacía.
Una segunda subunidad β tiene conformación relajada (L), unida al ADP y Pi, es inactiva.
Una tercera subunidad β tiene conformación tensa (T), alta afinidad por el ATP, es activa en la catálisis.
La rotación de la subunidad γ en forma antihoraria transforma las 3 subunidades β. Esta rotación hará que la
subunidad que tenga la conformación T adopte la conformación O, lo que permitirá que el ATP formado en esta
subunidad se pueda liberar. La subunidad que se encontraba en conformación L adoptará la conformación T, lo
que permitirá la conversión del ADP y Pi unidos en ATP. Por último, la subunidad que estaba en la
conformación O adoptará la conformación L, lo que impedirá que el ADP y Pi unidos se puedan escapar. El
ciclo se completa con
la unión del ADP y Pi a la
subunidad que esté en la
conformación
O.
MECANISMO UNIDAD F1:
Un protón procedente del espacio intermembranal se introduce en el semiconducto citosólico para neutralizar la
carga de un residuo de aspartato (convirtiéndose en ácido aspártico) de la subunidad c. Con esta carga
neutralizada el anillo c puede girar en sentido horario el equivalente a una subunidad c, lo que desplaza un residuo
de ácido aspártico desde la membrana hasta el semiconducto de la matriz. Este protón puede fluir hacia la matriz,
lo que reinstaura las condiciones iniciales del sistema
Cada protón entra en el semiconducto citosólico, sigue una vuelta completa del anillo c y sale por el otro
semiconducto hacia la matriz.

MECANISMO DE LA ATP SINTASA:

En anillo c está íntimamente conectado con las subunidades γ y ε . Así pues, al girar el anillo c, estas
subunidades rotan en el interior del hexámero αβ de F1. La cadena exterior formada por las dos cadenas b y la
subunidad δ impiden la rotación del hexámero αβ. De este modo, la rotación del anillo c impulsada por el
gradiente de protones da lugar a la rotación de la subunidad γ, que, a su vez, provoca la síntesis de ATP mediante
el mecanismo de unión.

TRANSPOTADORES DE IONES Y METABOLITOS A TRAVÉS DE LA MEMBRANA

MITOCONDRIAL:
− ATP-ADP translocasa:
Es muy abundante, es un dímero de subunidades idénticas.
Contiene un único centro de unión a nucleótidos que se orienta alternativamente hacia el lado de la matriz y
hacia el lado citosólico de la membrana.
El ATP y el ADP se unen casi con la misma afinidad.
o Mecanismo:
La translocasa cataliza la entrada de ADP en la matriz acoplada a la salida de ATP y viceversa.
El potencial de membrana y por tanto la fuerza protón motriz, disminuye a causa del intercambio de
ATP por ADP, ya que da lugar a la transferencia neta de una carga negativa hacia el exterior de la matriz.

− Transportador fosfato:
Actúa de manera coordinada con la ATP-ADP translocasa.
Interviene en el intercambio eléctricamente neutro de H2PO4- por
OH, lo que es lo mismo entrada a la vez de H2PO4- y H+.
La acción conjunta de estos dos transportadores provoca el intercambio
de ADP y Pi citosólicos (necesarios para el mecanismo de la ATP
sintasa) por ATP de la matriz, a costa de la entrada de un H+.

Debido a estos mecanismos acoplados a la membrana mitocondrial

interna deducimos que en el transporte de dos electrones procedentes del
NADH mediante la cadena de transporte electrónico se producen 2,5
ATP.
El ADP es el controlador de las reacciones mitocondriales porque en la mitocondria apenas existe el AMP.