NORMA CHILENA OFICIAL NCh1620/1.

Of84

Agua potable - Determinacin de bacterias coliformes

totales - Parte 1: Mtodo de los tubos mltiples (NMP)

Prembulo

El Instituto Nacional de Normalizacin, INN, es el organismo que tiene a su cargo el

estudio y preparacin de las normas tcnicas a nivel nacional. Es miembro de la
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION (ISO) y de la COMISION
PANAMERICANA DE NORMAS TECNICAS (COPANT), representando a Chile ante esos
organismos.

La norma NCh1620/1 ha sido preparada por la Divisin de Normas del Instituto Nacional
de Normalizacin, y en su estudio participaron los organismos y las personas naturales
siguientes:

Agua Potable Maip Camilo Concha S.

Aguas Industriales Ltda., AGUASIN Severino Garca G.
Alejandra Sandoval H.
Empresa de Agua Potable Lo Castillo
Ltda., EAPLOC Elizabeth Echeverra O.
Empresa de Obras Sanitarias de la V Regin, ESVAL Jos Gorgolln C.
Empresa Metropolitana de Obras
Sanitarias, EMOS Flix Bl P.
Fernando Garcs A.
Lino A. Yelpi P.
Instituto de Ecologa de Chile Juan Grau
Instituto de Fomento Pesquero, IFOP Marion Belmonte S.
Instituto de Investigaciones y Control,
Ejrcito de Chile, IDIC Emilio Lorenzini B.
Instituto de Investigaciones y Ensayes
Farmacolgicos, IDIEF Sonia Avendao V.
Instituto de Salud Pblica de Chile Cecilia Venegoni M.

I
NCh1620/1
Instituto Nacional de Normalizacin, INN Leonor Ceruti M.
Laboratorio Qumico Carlos Latorre Teresa Carmona V.
Laboratorio Tecnoanlisis de Alimentos Pedro Cheul G.
Servicio Agrcola y Ganadero, Divisin
Proteccin Recursos Naturales, SAG-DIPROREN Manuel Cubillos L.
Servicio Nacional de Obras Sanitarias, SENDOS Carlos Morales N.
Zita Ruiz I.
Universidad Catlica de Chile, Instituto
de Ciencias Qumicas Guido Concha G.
Universidad de Concepcin, Facultad de
Ciencias Biolgicas y de Recursos Naturales Rolf Kmmerlin R.
Universidad de Concepcin, Facultad de
Farmacia Claudio Villegas F.
Universidad de Chile, Facultad de Ciencias
Fsicas y Matemticas, Seccin Ingeniera
Sanitaria y Ambiental, SISA Gabriela Castillo M.
Universidad del Norte, Depto. Geociencias Hugo Alonso C.

Esta norma se estudi para establecer un mtodo normalizado para determinar bacterias
coliformes totales en agua potable segn el mtodo de los tubos mltiples (NMP).

Esta norma concuerda con el mtodo establecido en Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater, 15th Ed.

El anexo A forma parte del cuerpo de la norma.

Los anexos B y C no forman parte del cuerpo de la norma, se insertan slo a ttulo
informativo.

Esta norma ha sido aprobada por el H. Consejo del Instituto Nacional de Normalizacin,
en sesin efectuada el 22 de junio de 1984.

Esta norma ha sido declarada Oficial de la Repblica de Chile por Decreto N 285, de
fecha 30 de agosto de 1984, del Ministerio de Salud, publicado en el Diario Oficial
N 32024 del 17 de Noviembre de 1984.

II
 NORMA CHILENA OFICIAL NCh1620/1.Of84

Agua potable - Determinacin de bacterias coliformes

totales - Parte 1: Mtodo de los tubos mltiples (NMP)

1 Alcance y campo de aplicacin

1.1 Esta norma establece la determinacin del nmero ms probable de bacterias

coliformes totales en agua, mediante la tcnica de tubos mltiples.

1.2 Esta norma se aplica al agua potable.

2 Referencias

NCh1175 Alimentos - Material para ensayos microbiolgicos - Requisitos

generales.

3 Resumen del mtodo

3.1 Principios

El mtodo se basa en la capacidad que tienen los organismos coliformes de fermentar la

lactosa con produccin de gas, al ser incubados a 35 0,5 C durante 48 h.

3.2 Requisitos generales

Cumplir las especificaciones generales que se establecen en NCh1175.

1
NCh1620/1
4 Terminologa

4.1 bacterias coliformes totales: comprende todos los bacilos Gram negativos, aerobios
o anaerobios facultativos, no esporulados, que fermentan la lactosa con produccin de
gas a 35 0,5 C dentro de 48 3 h, de acuerdo al mtodo descrito en esta norma.

4.2 tcnica de tubos mltiples: mtodo cuantitativo para estimar la concentracin de

bacterias presentes en el agua, mediante la inoculacin de una serie de tubos en
concentraciones decimales decrecientes de la muestra, en un medio de cultivo
adecuado, las cuales se incuban en condiciones de tiempo y temperatura determinados.

5 Reactivos y medios de cultivo

5.1 Reactivos

5.1.1 Agua destilada

Exenta de sustancias txicas o nutrientes que puedan influir en el desarrollo o

supervivencia de microorganismos.

5.1.2 Agua tamponada para dilucin

5.1.2.1 Componentes

Solucin stock de fosfato monopotsico: disolver 34,0 g de fosfato monopotsico

(KH2 PO4) en 500 ml de agua destilada, ajustar el pH a 7,2 0,5 con solucin normal
de hidrxido de sodio (NaOH;1N) y diluir a 1 ! con agua destilada.

Solucin stock de sulfato de magnesio: disolver 50 g de sulfato de magnesio (MgSO4)

en 1 ! de agua destilada.

Solucin stock de cloruro de magnesio: disolver 38 g de cloruro de magnesio (MgC!2) en

1 ! de agua destilada.

5.1.2.2 Preparacin

Agregar 1,25 ml de solucin stock de fosfato monopotsico y 5,0 ml de solucin stock

de sulfato de magnesio o solucin stock de cloruro de magnesio a 1 ! de agua destilada.
Esterilizar en autoclave a 121 2 C durante 15 min.

5.1.3 Alcohol etlico de 95%

5.1.4 Solucin de alcohol-acetona: mezclar volmenes iguales de alcohol etlico (5.1.3)

y acetona.

2
 NCh1620/1

5.1.5 Solucin de cristal violeta: disolver 2 g de cristal violeta en 20 ml de alcohol

etlico (5.1.3). Disolver 0,8 g de oxalato de amonio en 80 ml de agua destilada (5.1.1).

Mezclar ambas soluciones, dejar reposar durante 24 h y filtrar a travs de papel grueso
o algodn.

5.1.6 Solucin de lugol: disolver 2 g de yoduro de potasio (Kl) en 5 ml de agua

destilada, agregar 1 g de cristales de yodo (l2 ) y agitar hasta disolver totalmente el
yodo. Agregar 295 ml de agua destilada y mezclar.

5.1.7 Solucin de fucsina

Solucin stock: disolver 1,0 g de fucsina en 100 ml de agua destilada.

Solucin diluida: diluir 10 ml de la solucin stock de fucsina en 90 ml de agua destilada.

5.1.8 Solucin de safranina

Solucin stock: disolver 2,5 g de safranina en 100 ml de alcohol etlico de 95% (5.1.3).

Solucin diluida: diluir 10 ml de la solucin stock de safranina en 90 ml de agua

destilada.

5.2 Medios de cultivo

5.2.1 Agar eosina azul de metileno, modificado segn Levine:

5.2.1.1 Composicin del medio basal:

peptona 10,0 g

lactosa 10,0 g

fosfato dipotsico (K2HPO4) 2,0 g

agar 15,0 g

eosina 0,4 g

azul de metileno 0,065 g

5.2.1.2 Disolver en 1 ! de agua destilada y esterilizar en autoclave a 121 2 C

durante 10 a 12 min. El pH final del medio debe ser 7,1 despus de la esterilizacin.

5.2.1.3 Dejar enfriar a 40 - 45 C y distribuir aspticamente en placas de Petri estriles

en volmenes de 12 a 15 ml.

3
NCh1620/1

5.2.2 Agar Endo

5.2.2.1 Composicin del medio basal:

peptona 10,0 g

lactosa 10,0 g

fosfato dipotsico (K2HPO4) 3,5 g

agar 15,0 g

sulfito de sodio 2,5 g

fucsina bsica 0,4 g

5.2.2.2 Disolver los componentes en 1 ! de agua destilada (5.1.1) en un bao de agua

hirviendo, enfriar a 45 C y distribuir en placas de Petri (6.10) en cantidades de 15 a
20 ml. No esterilizar en autoclave. El pH final del medio debe ser 7,4 0,1.

5.2.3 Agar nutritivo

5.2.3.1 Composicin del medio basal:

peptona 5,0 g

extracto de carne 3,0 g

agar 15,0 g

5.2.3.2 Disolver en 1 ! de agua destilada, y distribuir en caliente en tubos de cultivo en

volmenes de 4 o 5 ml. Esterilizar en autoclave a 121 2 C durante 10 a 12 min.

5.2.3.3 Enfriar a 45 C y dejar los tubos inclinados hasta que el medio solidifique de
modo de obtener una superficie de agar de 6 a 7 cm de largo. El pH final del medio debe
ser 6,8.

5.2.4 Caldo lactosado

5.2.4.1 Composicin del medio basal:

Concentracin Concentracin
Simple Doble

extracto de carne 3,0 g 6,0 g

peptona 5,0 g 10,0 g
lactosa 5,0 g 10,0 g

4
 NCh1620/1
5.2.4.2 Disolver en 1 ! de agua destilada, calentando suavemente para disolver los
componentes, y distribuir en tubos de cultivo (6.14) con tubos Durham en su interior
(6.15).

5.2.4.3 Esterilizar en autoclave a 121 2 C durante 15 min. El pH final del medio

debe ser de 6,9 0,2.

5.2.5 Caldo lauril sulfato triptosa

5.2.5.1 Composicin del medio basal:

Concentracin Concentracin
Simple Doble

triptosa 20,0 g 40,0 g

lactosa 5,0 g 10,0 g

fosfato dipotsico (K2HPO4) 2,75 g 5,5 g

fosfato monopotsico (KH2PO4) 2,75 g 5,5 g

cloruro de sodio 5,0 g 10,0 g

lauril sulfato de sodio 0,1 g 0,2 g

5.2.5.2 Disolver en 1 ! de agua destilada, y distribuir en volmenes de 10 ml en tubos

de cultivo (6.14) con tubos Durham (6.15) en su interior.

5.2.5.3 Esterilizar en autoclave a 121 2 C durante 15 min. El pH final del medio

debe ser de aproximadamente 6,8.

5.2.6 Caldo bilis lactosa verde brillante

5.2.6.1 Composicin del medio basal:

peptona 10,0 g

lactosa 10,0 g

sales biliares 20,0 g

verde brillante 0,0133 g

5.2.6.2 Disolver los componentes en 1 ! de agua destilada, distribuir en tubos de

cultivo en cantidades tales que el Iquido cubra el tubo Durham despus de la
esterilizacin y esterilizar en autoclave a 121 2 C durante 15 min. El pH final del
medio debe ser 7,2.

5
NCh1620/1

6 Aparatos

6.1 Autoclave, regulable a 121 2 C.

6.2 Aguja de inoculacin, ligeramente curvada en la punta.

6.3 Asa de nicrn o platino-iridio, de 3 mm de dimetro mnimo.

6.4 Equipo potenciomtrico para determinar pH, con una exactitud de 0,1 unidades
de pH.

6.5 Estufa de cultivo, regulable a 35 0,5 C.

6.5 Estufa de esterilizacin, con circulacin de aire caliente, regulable a 170 10 C.

6.7 Frascos o matraces de dilucin, estriles.

6.8 Microscopio, provisto de objetivo de inmersin (100 x).

6.9 Pipetas bacterioigicas, de 1,5 y 10 ml, con subdivisiones de 0,1 ml, estriles.

6.10 Placas de Petri, estriles, de 100 mm de dimetro por 15 mm de profundidad.

6.11 Portaobjetos

6.12 Recipientes para pipetas, cilndricos o rectangulares, de aluminio, acero inoxidable,

vidrio pyrex u otro material no corrosivo y resistente al calor, provistos de tapa; o
envolturas de papel Kraft. No deben usarse recipientes de cobre o de aleaciones de
cobre.

6.13 Recipientes para placas de Petri, cilndricos, cuadrados o rectangulares, provistos

de tapa; o canastillos de alambre, de acero inoxidable tejido, o envolturas de papel
Kraft. No deben usarse recipientes de cobre o de aleaciones de cobre.

6.14 Tubos de cultivo, de 20 mm x 150 mm y de 16 mm x 150 mm.

6.15 Tubos Durham, de dimetro no inferior al 40% del dimetro del tubo de cultivo,
debiendo quedar completamente Ileno y sumergido en el medio.

6.18 Otro material de uso habitual en laboratorio.

6
 NCh1620/1
7 Procedimiento

7.1 Ensayo presuntivo

7.1.1 Inocular la muestra en tubos de cultivo con caldo lauril sulfato triptosa (5.2.5), o
caldo lactosado (5.2.4), en los volmenes y series que se indican en la tabla 1, segn si
el agua est o no clorada.

Tabla 1 - Volmenes de muestra y serie de tubos inoculados

Volumen de la Concentracin del caldo N de tubos inoculados

muestra, ml lauril triptosa o caldo
Agua clorada Agua no clorada
lactosado

10 doble 5 5

1 simple 1 5

0,1* simple 1 5

*) Diluir 1 ml de muestra en 9 ml de agua tamponada para dilucin (5.1.2), e inocular 1 ml

de esta dilucin.

7.1.2 Incubar los tubos a 35 0,5 C.

7.1.3 Examinar los tubos a las 24 2 h de incubacin, y reincubar por 24 h adicionales

aquellos tubos que no presenten formacin de gas dentro del tubo Durham, o sean
dudosos.

7.1.4 Anotar el nmero total de tubos que presenten turbiedad y formacin de gas
dentro de las 48 3 h de incubacin.

El enturbiamiento del medio de cultivo acompaado de formacin de gas, en cualquier

cantidad, dentro de 48 3 h de incubacin constituye un ensayo presuntivo positivo.

7.2 Ensayo confirmativo

7.2.1 Someter al ensayo confirmativo todos los tubos de caldo lauril sulfato triptosa o
caldo lactosado que dieron positivo el ensayo presuntivo a las 24 h ya las 48 3 h de
incubacin (7.1.3 y 7.1.4). Se recomienda realizar inmediatamente la prueba
confirmativa de los tubos positivos a las 24 h, ya que las bacterias coliformes podran
ser inhibidas por la flora bacteriana acompaante, debido a accin antagonista y/o
variacin del pH.

7.2.2 Agitar suavemente los tubos positivos y transferir una asada de cada tubo a otro
tubo de cultivo que contenga caldo bilis lactosa verde brillante. (5.2.6).

7.2.3 Incubar a 35 0,5 C durante 48 3 h.

7
NCh1620/1
7.2.4 Examinar los tubos despus de la incubacin y anotar el nmero total de tubos
que presenten formacin de gas dentro de las 48 3 h de incubacin.

La formacin de gas, en cualquier cantidad, dentro de 48 3 h de incubacin

constituye un ensayo confirmativo positivo.

7.3 Ensayo completo

7.3.1 Efectuar el ensayo completo a:

a) muestras de calidad desconocida;

b) muestras que den resultados inesperados;

c) muestras con un alto recuento de bacterias aerobias viables a 35 C;

d) muestras tomadas con el objeto de efectuar un control de calidad;

e) el 5% de las muestras que dieron positivo al ensayo confirmativo; y/o

f) muestras de repeticin tomadas en un punto en el cual se obtenga en forma

reiterada 3 o ms porciones positivas de 10 ml en el ensayo confirmativo.

7.3.2 Mediante una aguja de inoculacin (6.2), sacar un inculo de cada tubo de cultivo
positivo en caldo bilis lactosa verde briIlante y sembrarlo sobre la superficie de una placa
de agar eosina azul de metileno modificado (5.2.1) o agar Endo (5.2.2), teniendo
cuidado de no romper el agar y girando la placa a fin de obtener un buen aislamiento.

7.3.3 Incubar las placas en posicin invertida a 35 0,5 C durante 24 2 h.

7.3.4 Despus de la incubacin, verificar el desarrollo de colonias, las cuales pueden

presentar las siguientes caractersticas, en agar Endo o agar eosina azul de metileno
modificado:

a) colonias tpicas de coliformes: de color rosado oscuro, con ncleo central, con o sin
brillo metlico;

b) colonias atpicas: de color rosado, opacas, sin ncleo;

c) colonias negativas: transparentes, de caractersticas diferentes a las anteriores.

7.3.5 De cada placa que presente desarrollo, repicar con un asa (6.3) 3 colonias
aisladas (2 colonias tpicas y 1 colonia atpica) y sembrar cada una de ellas en un tubo
con caldo lauril sulfato triptosa (5.2.5) o caldo lactosado (5.2.4) y en un tubo de agar
nutritivo (5.2.3).

7.3.6 Incubar los tubos de caldo lauril sulfato triptosa o caldo lactosado a 35 0,5 C
durante 24 2 h. Si no se produce gas dentro de las 24 2 h de incubacin,
reincubar los tubos y volver a examinar a las 48 3 h de incubacin total.
8
 NCh1620/1
7.3.7 Incubar los tubos de agar nutritivo a 35 0,5 C durante 24 h.

7.3.8 A cada tubo de agar nutritivo cuyo correspondiente tubo de caldo lauril sulfato
triptosa o caldo lactosado haya evidenciado formacin de gas, realizar tincin de Gram,
segn se indica en 7.3.9.

7.3.9 Tincin de Gram

7.3.9.1 Limpiar una lmina portaobjeto (6.11), colocar sobre ella una gota de agua
destilada (5.1.1) y una pequea cantidad de inculo; esparcir sobre la Imina y fijar a la
Ilama de un mechero.

7.3.9.2 Dejar enfriar y cubrir la lmina con gotas de solucin de cristal violeta (5.1.5)
durante 1 min. Eliminar el exceso de colorante enjuagando con agua destilada.

7.3.9.3 Agregar solucin de lugol (5.1.6) y dejar durante 1 min. Decolorar rpidamente
con solucin de alcohol-acetona (5.1.4). Agregar solucin de fucsina (5.1.7) o solucin
de safranina (5.1.8) y dejar durante 30 s.

7.3.9.4 Lavar la lmina con agua destilada, secar y observar al microscopio (6.8)
utilizando el objetivo de inmersin (100 x).

Las bacterias coliformes se presentan como bacilos Gram-negativos de color rosado.

7.3.10 La formacin de gas en el tubo de caldo lauril sulfato triptosa o caldo lactosado
y la verificacin de la presencia de bacilos Gram-negativos no esporulados en la tincin
del cultivo proveniente del tubo de agar nutritivo constituyen un ensayo completo
positivo.

8 Expresin de resultados

8.1 Determinar un cdigo de 3 cifras con la combinacin de tubos positivos y negativos

obtenidos en cada dilucin, en el ensayo confirmativo (7.2).

8.2 Con el cdigo establecido, entrar a la tabla 2 y leer directamente el Nmero Ms

Probable de bacterias colifomnes por 100 ml, en la columna correspondiente al nmero
de tubos sembrados en cada dilucin (ver anexo A).

8.3 Expresar el resultado como NMP por 100 ml.

NOTA - En anexo B, se indica un ejemplo para calcular el NMP/100 ml.

9
NCh1620/1
9 Informe

En el informe se debe indicar:

a) identificacin de la muestra;

b) nmero de horas transcurridas entre la toma de la muestra y el ensayo;

c) contenido de cloro libre residual, determinado segn mtodo colorimtrico;

d) referencia al mtodo;

e) resultados obtenidos;

f) cualquier particularidad del ensayo que sea opcional o no est considerada en

esta norma y que pueda afectar los resultados.

10
 NCh1620/1
Anexo A
(Normativo)

Nmero Ms Probable (NMP) de bacterias coliformes por 100 ml, sembrando la

combinacin de:

a) 5 tubos con 10 ml, 1 tubo con 1 ml y 1 tubo con 0,1 ml; y

b) 5 tubos con 10 ml, 5 tubos con 1 ml y 5 tubos con 0,1 ml.

Tabla 2 - Tabla para el clculo del Nmero Ms Probable (NMP).

Nmero de Nmero ms Nmero de Nmero de Nmero de Nmero ms

tubos positivos probable en tubos positivos ms probable tubos positivos probable en
siembra de: en siembra siembra de:
de:
10 1 0,1 5-10 5-10 10 1 0,1 5-10 5-10 10 1 0,1 5-10 5-10
ml 1- 1 5- 1 ml 1- 1 5- 1 ml 1- 1 5- 1
1- 0,1 5- 0,1 1- 0,1 5- 0,1 1- 0,1 5- 0,1

0 0 0 0 3 4 13 1 1 2 8,1
0 0 1 2,0 1,8 0 3 5 15 1 1 3 10
0 0 2 3,6 0 4 0 7,5 1 1 4 12
0 0 3 5,4 0 4 1 9,4 1 1 5 14
0 0 4 7,2 0 4 2 11 1 2 0 6,1
0 0 5 9,0 0 4 3 13 1 2 1 8,2
0 1 0 2,0 1,8 0 4 4 15 1 2 2 10
0 1 1 4,0 3,6 0 4 5 17 1 2 3 12
0 1 2 5,5 0 5 0 9,4 1 2 4 15
0 1 3 7,3 0 5 1 11 1 2 5 17
0 1 4 9,1 0 5 2 13 1 3 0 8,3
0 1 5 11 0 5 3 15 1 3 1 10
0 2 0 3,7 0 5 4 17 1 3 2 13
0 2 1 5,5 0 5 5 19 1 3 3 15
0 2 2 7,4 1 0 0 2,2 2,0 1 3 4 17
0 2 3 9,2 1 0 1 4,4 4,0 1 3 5 19
0, 2 4 11 1 0 2 6,0 1 4 0 11
0 2 5 13 1 0 3 8,0 1 4 1 13
0 3 0 5,6 1 0 4 10 1 4 2 15
0 3 1 7,4 1 0 5 12 1 4 3 17
0 3 2 9,3 1 1 0 4,4 4,0 1 4 4 19
0 3 3 11 1 1 1 6,7 6,1 1 4 5 22

(contina)
11
NCh1620/1
Anexo A
(continuacin)

Tabla 2 - Tabla para el clculo del Nmero Ms Probable (NMP)

Nmero de Nmero ms Nmero de Nmeros ms Nmero de Nmero ms

tubos positivos probable en tubos positivos probables en tubos positivos probable en
siembra de: siembra de: siembra de:
5-10 5-10 5-10 5-10 5-10 5-10
10 1 0,1 1- 1 5- 1 10 1 0,1 1- 1 5- 1 10 1 0,1 1- 1 5- 1
ml 1- 0,1 5- 0,1 ml 1- 0,1 5- 0,1 ml 1- 0,1 5- 0,1

1 5 0 13 2 3 0 12 3 1 0 12 11
1 5 1 15 2 3 1 14 3 1 1 16 14
1 5 2 17 2 3 2 17 3 1 2 17
1 5 3 19 2 3 3 20 3 1 3 20
1 5 4 22 2 3 4 22 3 1 4 23
1 5 5 24 2 3 5 25 3 1 5 27
2 0 0 5,0 4,5 2 4 0 15 3 2 0 14
2 0 1 7,5 6,8 2 4 1 17 3 2 1 17
2 0 2 9,1 2 4 2 20 3 2 2 20
2 0 3 12 2 4 3 23 3 2 3 24
2 0 4 14 2 4 4 25 3 2 4 27
2 0 5 16 2 4 5 28 3 2 5 31
2 1 0 7,6 6,8 2 5 0 17 3 3 0 17
2 1 1 10 9,2 2 5 1 20 3 3 1 21
2 1 2 12 2 5 2 23 3 3 2 24
2 1 3 14 2 5 3 26 3 3 3 28
2 1 4 17 2 5 4 29 3 3 4 31
2 1 5 19 2 5 5 32 3 3 5 35
2 2 0 9,3 3 0 0 8,8 7,8 3 4 0 21
2 2 1 12 3 0 1 12 11 3 4 1 24
2 2 2 14 3 0 2 13 3 4 2 28
2 2 3 17 3 0 3 16 3 4 3 32
2 2 4 19 3 0 4 20 3 4 4 36
2 2 5 22 3 0 5 23 3 4 5 40

(continua)

12
 NCh1620/1
Anexo A
(conclusin)

Tabla 2 - Tabla para el clculo del Nmero Ms Probable (NMP)

Nmero de Nmero ms Nmero de Nmero ms Nmero de Nmero ms

tubos positivos probable en tubos positivos probable en tubos positivos probable en
siembra de: siembre de: siembre de:
5-10 5-10 5-10 5-10 5-10 5-10
10 1 0,1 1- 1 5- 1 10 1 0,1 1- 1 5- 1 10 1 0,1 1- 1 5- 1
ml 1- 0,1 5- 0,1 ml 1- 0,1 5- 0,1 ml 1- 0,1 5- 0,1

3 5 0 25 4 3 2 39 5 1 4 110
3 5 1 29 4 3 3 45 5 1 5 130
3 5 2 32 4 3 4 52 5 2 0 49
3 5 3 37 4 3 5 59 5 2 1 70
3 5 4 41 4 4 0 34 5 2 2 95
3 5 5 45 4 4 1 40 5 2 3 120
4 0 0 15 13 4 4 2 47 5 2 4 150
4 0 1 20 17 4 4 3 54 5 2 5 180
4 0 2 21 4 4 4 62 5 3 0 79
4 0 3 25 4 4 5 69 5 3 1 110
4 0 4 30 4 5 0 41 5 3 2 140
4 0 5 36 4 5 1 48 5 3 3 180
4 1 0 21 17 4 5 2 56 5 3 4 210
4 1 1 27 21 4 5 3 64 5 3 5 250
4 1 2 26 4 5 4 72 5 4 0 130
4 1 3 31 4 5 5 81 5 4 1 170
4 1 4 36 5 0 0 38 23 5 4 2 22
4 1 5 42 5 0 1 96 31 5 4 3 280
4 2 0 22 5 0 2 43 5 4 4 350
4 2 1 26 5 0 3 58 5 4 5 430
4 2 2 32 5 0 4 76 5 5 0 240
4 2 3 38 5 0 5 95 5 5 1 350
4 2 4 44 5 1 0 240 33 5 5 2 540
4 2 5 50 5 1 1 46 5 5 3 920
4 3 0 27 5 1 2 64 5 5 4 1 600
4 3 1 33 5 1 3 84

13
NCh1620/1
Anexo B
(Informativo)

Clculo del Nmero Ms Probable (NMP) de bacterias coliformes por 100 ml de

agua.

B.1 De una muestra de agua potable clorada se inoculan:

5 tubos con 10 ml de muestra;

1 tubo con 1 ml de muestra;

1 tubo con 0,1 ml de muestra.

B.2 Los resultados obtenidos en el ensayo confirmativo son los siguientes:

3 tubos positivos en la siembra de 10 ml;

1 tubo positivo en la siembra de 1 ml;

0 tubo positivo en la siembra de 0,1 ml.

B.3 El cdigo correspondiente de esta muestra es: 3-1-0.

B.4 En la tabla 2 (anexo A), el cdigo 3-1-0 corresponde a un valor de 12 para la

siembra de 5 tubos con 10 ml, 1 tubo con 1 ml y 1 tubo con 0,1 ml.

B.5 Expresar el resultado como:

NMP de bacterias coliformes/100 ml = 12.

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NCh1620/1

15
NCh1620/1

16
NORMA CHILENA OFICIAL NCh 1620/1.Of84

INSTITUTO NACIONAL DE NORMALIZACION ! INN-CHILE

Agua potable - Determinacin de bacterias coliformes

totales - Parte 1: Mtodo de los tubos mltiples (NMP)

Drinking water - Determination of total coliform bacteria - Part 1: Multiple-tube

fermentation technique (MPN)

Primera edicin : 1984

Reimpresin : 1999

Descriptores: agua potable, anlisis qumico, anlisis microbiolgico, determinacin de

contenido, mtodos de conteo de bacterias, bacterias coliformes
CIN 13.060.40; 71.060
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