INSTITUTO TECNOLGICO DE TORREN

MICROBIOLOGA DE ALIMENTOS

INGENIERA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

4SEMESTRE

REPORTE DE PRCTICA

Tincin de Gram en pruebas Bioqumicas

GERARDO CHEW MADINEVEITIA

INTEGRANTES:
o AMAIRANI YESENIA JUAREZ
o ENRIQUE MEDINA GARCA
o HATZIRI QUINTERO RUZ
o ELSY STEFANY PACHECO
o AMERICA OVALLE RUBIO
o REBECA TORRES GARCA
o ERIKA RODRIGUEZ
HERNANDZ
TINCIN DE GRAM EN PRUEBAS BIOQUMICAS

Esta tincin nos permite separar a la mayora de las bacterias en dos grupos las
Gram positivas que se tien de color violeta y las Gram negativas que se tie de
color rosa. La diferencia en la tincin radica en las estructuras de la pared celular
de las bacterias.
Pared celular de las bacterias Gram Positivas
Se observa la capa gruesa de peptidoglicano y la
ausencia de lipopolisacaridos

Pared celular de bacterias Gram Negativas

Se observa bajo con teido de pptido glicano y alto
contenido de lpidos en forma de lipopolisacaridos

Reactivos usados en la Tincin de Gram

Agua estril para realizar el frotis
Cristal violeta (violeta de genciana)
Safranina
Mezcla de alcohol-acetona 1:1
Agua corriente para enjuagar
Tcnica de la Tincin de Gram
De preferencia la tincin debe ser llevada a cabo en un recipiente para que los
desechos sean desechados correctamente.
MATERIALES:
Mechero de Bunsen
Asa bacteriolgica
Portaobjetos
Varillas de vidrio (soporte)
Pizeta
Gasas

REACTIVOS:
 PROCEDIMIENTO

I. Teniendo en la mesa un mechero, lo primero es flamear el asa

bacteriolgica hasta el rojo vivo y esperar a que enfre un poco.
II. Tomar con el asa una gota de agua estril o dejar caer la gota con cuidado
en el portaobjetos.
III. Flamear de nuevo el asa y esperar a que enfre.
IV. Tomar con el asa un poco de muestra bacteria a partir de una colonia
aislada.
V. Despus colocarla en la gota de agua y homogenizar suavemente con
movimientos circulares.
VI. Esperar que seque pasando el portaobjetos durante 1 o 2 segundos por la
flama del mechero, el calor no debe ser directo (solo pasar por la flama).
 PROCEDIMIENTO PARA TINCIN.
I. Agregar cristal violeta, solo el suficiente para que se cubra el extendido
bacteriano dejar actuar durante 60 segundos.
II. Agregar el lugol, solo el suficiente, dejar actuar durante 60 segundos.
III. Enjuagar con agua corriente.
IV. Agregar una o dos gotas de alcohol-acetona e inmediatamente enjuagar
con agua corriente.
V. Agregar Safranina, solo la suficiente, Dejar actuar durante 60 segundos.
VI. Enjuagar con agua corriente.
VII. Dejar secar a temperatura ambiente.
VIII. Observar en un microscopio ptico con un objetivo 100X usando aceite de
inmersin.
 CONCLUSIN:

Como ya sabemos lo
lavados con agua son para arrastrar mecnicamente el
exceso de colorante y quitar el alcohol-cetona,
con el colorante cristal violeta las bacterias ya sean Gram Positivas y/o Negativas
sern teidas de color violeta.
Adems de mucha importancia no sobrepasar
los tiempos de tincin y

decoloracin, mientras
que los cultivos viejos hacen que las bacterias
Gram positivas se tian temporalmente de color
rosa.
Los Gram positivos se pueden cambiar a Gram negativos al aumentar la acidez;
mientras que los Gram negativos pueden hacerse Gram positivos al aumentar la
alcalinidad.
BIBLIOGRAFA:

o Koneman, Diagnostico bacteriolgico, texto y atlas a color, 6ed,

Panamericana, Argentina, 2006.
o MacFadin, Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de
importancia clnica, 3ed, Panarmericana, Argentina, 2003.
o Bailey y Scott, Diagnostico bacteriolgico, 12ed Panamericana, Argentina,
2007.
o Q.F.B. de Fes-Cuautitlan-UNAM Mxico