UNIVERSIDAD SAN IGNACIO DE LOYOLA

FACULTAD DE INGENIERA Y ARQUITECTURA

CARRERA DE INGENIERA AGROINDUSTRIAL Y DE AGRONEGOCIOS
CURSO: BIOQUIMICA
PROFESORA: KEIDY CANCINO CH.

PRACTICA N 4

ACTIVIDAD DE LA ENZIMA AMILASA DURANTE LA GERMINACIN

Durante la formacin de las semillas, se acumulan grandes cantidades de sustancias de reserva, los cuales
servirn para el crecimiento y desarrollo de la plntula. El carbohidrato de reserva ms importante es el
almidn, constituye del 45 al 58% del peso seco y se localiza en el endospermo.
Durante la germinacin, el almidn se degrada por un conjunto de enzimas, entre las cuales est la -
amilasa. La concentracin de esta enzima es muy baja en la semilla, pero a medida que germina, se
incrementa, alcanzando un mximo a los 6 das.

I. OBJETIVO

Determinar la variacin en la actividad enzimtica de la enzima -amilasa, durante la germinacin.

II. MATERIALES
Semillas germinadas: 1, 4 y 5 das Tocuyo
Mortero Tubos de prueba de 15 ml
Espectrofotmetro Pipetas de 1 ml y 10 ml
Centrfuga Tampn acetato 50 mM pH 4,8
Beakers de 50 ml Solucin de almidn
Fiola 25 ml Solucin de lugol
Tubos de centrfuga

III. PROCEDIMIENTO

1. Tomar 5 semillas de cada tiempo de germinacin. Retirar el coleoptilo y dejar el endospermo.

2. Triturar con cuidado en un mortero las semillas con una cantidad de tampn acetato.
3. Filtrar utilizando tocuyo. Enrazar en una fiola de 25 ml con tampn acetato.
4. Colocar en tubos de centrfuga, parte del extracto y centrifugar a 3500 rpm por 5 minutos.
5. Decantar el sobrenadante y mantenerlo en tubo de ensayo.
6. En un tubo de ensayo, pipetear 1 ml de tampn y 1 ml de almidn. Agitar.
7. Agregar 1 ml del extracto enzimtico y 10 ml de agua destilada, agitar y esperar 10 minutos.
8. Transcurrido el tiempo, agregar 1 ml de lugol. Agitar. Esperar 10 minutos y leer en el espectrofotmetro a
620 nm.
9. Preparar previamente un tubo blanco, que no contiene el extracto enzimtico, para calibrar el equipo.
10. Calcular la actividad enzimtica como descenso en la absorbancia, por semilla y por minuto.

Donde.
A=Absorbancia del blanco
B= Absorbancia de la muestra
V= Volumen de aforo.
N= N semillas

11. Grafique sus resultados como descenso de la absorbancia (eje y) vs tiempo de germinacin (eje x).

IV. RESULTADOS

1. Calcular la actividad enzimtica para cada tiempo de germinacin, segn frmula.

2. Grafique sus resultados como absorbancia (eje y) vs tiempo (eje x) para cada experiencia.

V. DISCUSIONES

Discuta los resultados obtenidos y compare los datos de todas las mesas.

VI. CONCLUSIONES