MICROBIOLOGIA

INTRODUCCION

Un laboratorio de Microbiologa es un lugar habilitado para manejar y estudiar

microorganismos.

Los laboratorios debern disponer de los aparatos e instrumental necesario para el

correcto desarrollo de su actividad.

Debe existir un procedimiento de control de calidad en el laboratorio de Microbiologa que

implique la monitorizacin de los medios e instrumentos, con el fin de asegurar la
adecuada realizacin de los aislamientos, identificacin y caracterizacin de los
patgenos.

En este trabajo se dan a conocer los materiales y equipos del laboratorio de microbiologa
bsicos para tener en cuenta que instrumentos debemos utilizar adecuadamente en
nuestras practicas

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OBJETIVOS

Es tener un conocimiento bsico de los diferentes equipos y materiales usados en

el laboratorio de microbiologa,

Tener en cuenta las pautas de bioseguridad al manejar los equipos y materiales

del laboratorio.

CAPITULO l

EQUIPOS DEL LABORATORIO DE MICROBILOGIA

1. autoclave .- Priva de vida microbiana (esteriliza)

Una autoclave es un recipiente de presin metlico de paredes gruesas con un

cierre hermtico que permite trabajar a alta presin para realizar una reaccin
industrial, una coccin o una esterilizacin con vapor de agua. Su construccin
debe ser tal que resista la presin y temperatura desarrollada en su interior. La
presin elevada permite que el agua alcance temperaturas superiores a los 100

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C. La accin conjunta de la temperatura y el vapor produce la coagulacin de las

protenas de los microorganismos, entre ellas las esenciales para la vida y la
reproduccin de stos, hecho que lleva a su destruccin

FUNCIONAMIENTO: Las autoclaves funcionan permitiendo la entrada o generacin de

vapor de agua pero restringiendo su salida, hasta obtener una presin interna de 15
lb. Por encima de la presin atmosfrica, lo cual provoca que el vapor alcance una
temperatura de 121 grados Celsius. Un tiempo tpico de esterilizacin a
esta temperatura y presin es de 15-20 minutos.

USO:

Revisar el voltaje
Mirara la cantidad de agua
Abrir la espita y cerrarlo cuando evacua el vapor de agua

2. horno o pupinel

Los hornos de aire caliente, tambin llamados hornos de calor seco, son
dispositivos elctricos utilizados para esterilizacin que forman parte
del equipamiento de laboratorio. El horno utiliza calor seco para esterilizar los
objetos que se introducen en l. En general, pueden funcionar
con temperaturas comprendidas entre 50 y 300 C.

Posee un termostato que controla la temperatura mediante un control digital.

Su aislamiento trmico es de doble pared para mantener el calor y ahorrar energa
A diferencia de un autoclave, estos hornos no necesitan agua y tampoco deben
resistir presiones elevadas, hacindolos ms seguros para trabajar
El calor seco no permite eliminar algunas sustncias como los priones, que s
pueden eliminarse con calor hmedo.
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Los modos estndar de funcionamiento de un horno de aire caliente son:

45 minutos a 1 hora minutos a 180 C

30 minutos a 250 C

3. Estufa o incubadora

La estufa de secado se emplea para esterilizar o secar el material de vidrio

y metal utilizado en los exmenes o pruebas, que realiza el laboratorio y
que proviene de la seccin de lavado, donde se enva luego de ser usado
en algn procedimiento. La esterilizacin que se efecta en la estufa se
denomina de calor seco y se realiza a 180 C durante 2 horas;.

4. bao mara
El bao de Mara es un equipo que se utiliza en el laboratorio para realizar
pruebas serolgicas y procedimientos de incubacin, aglutinacin,
inactivacin, biomdicos, farmacuticos y hasta industriales. Los rangos de
temperatura ambiente y los 60 C. Los baos de Mara son fabricados con
cmaras cuya capacidad puede seleccionarse entre los 2 y los 30 litros.

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5. centrifuga
La centrfuga es un equipo de laboratorio que genera movimientos de
rotacin, tiene el objetivo de separar los componentes que constituyen una
sustancia.
la centrifuga es utilizada en los laboratorios como proceso de la separacin
de la sedimentacin de los componentes lquidos y slidos.
Hay diferente tipos de centrifuga, como:

Macro centrfuga que va desde los 2.000 y 6.000 R.P.M.

Micro centrifugas entre 10.000 y 18.000 R.P.M
Ultracentrfugas que va desde 20.000 y 75.000 R.P.M.

6. Agitador shaker

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Un agitador, a veces llamado mezclador, es un dispositivo que se utiliza en los

laboratorios de qumica y biologa para mezclar lquidos o
preparar disoluciones y suspensiones
Un agitador tpico tiene una placa o superficie que oscila horizontalmente,
propulsado por un motor elctrico. Los lquidos que van a ser agitados estn
contenidos en vasos, [[tubos (qumica tubos)]] o matraces Erlenmeyer que se
colocan sobre la superficie vibrante o, a veces, en tubos de ensayo o viales que se
insertan en los agujeros de la placa.

7. Cmara de flujo
Una cabina de flujo laminar, cmara de flujo laminar o campana de flujo
laminar es un recinto que emplea un ventilador para forzar el paso de aire a travs
de un filtro HEPA o ULPA y proporcionar aire limpio a la zona de trabajo libre de
partculas de hasta 0.1 micras
Dentro de estas cabinas o campanas se trabaja cultivos celulares o cualquier otro
sistema que deba mantenerse limpio y deba evitarse la contaminacin con
partculas minsculas.
Las cabinas de flujo laminar pueden tener una lmpara de rayos ultravioleta-C con
accin germicida para esterilizar el recinto y su contenido,

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8. Balanza analtica
Una balanza analtica es una clase de balanza de laboratorio diseada para
medir pequeas masas, en un principio de un rango menor del miligramo (y que
hoy da, las digitales, llegan hasta la diezmilsima de gramo: 0,0001 g o 0,1 mg).

9. Microscopio invertido

El microscopio invertido es un microscopio cuya estructura est invertida

en comparacin al microscopio convencional. La fuente de luz est ubicada
por encima de la platinay el principio de funcionamiento y formacin de la
imagen es el mismo que el del microscopio tradicional.

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Utilizado principalmente para cultivos celulares (clulas vivas) sin una

preparacin previa y para monitorear actividades (crecimiento,
comportamiento).

10. Destilador de agua

El destilador de agua es un instrumento de laboratorioque se usa para
purificar el agua corriente, mediante procesos controlados de vaporizacin
y enfriamiento.
El funcionamiento de un destilador est basado en un fenmeno que se
presenta libremente en la naturaleza y es conocido como el ciclo del agua

CAPITULO ll

MATERIALES USADOS EN EL LABORATORIO

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1. Tubos de ensayo
Consiste en un pequeo tubo cilndrico de vidrio con un extremo abierto
(que puede poseer una tapa) y el otro cerrado y redondeado, que se utiliza
en los laboratorios para contener pequeas muestras lquidas o slidas,
aunque pueden tener otras fases, como realizar reacciones qumicas en
pequea escala.

2. Matraz

Consiste en un recipiente de vidrio generalmente con base circular o algo esfrica

y un cuello recto y estrecho, que se usa en laboratorios para medir lquidos o mezclar
soluciones qumicas

3. Vaso precipitado
Un vaso de precipitados es un recipiente cilndrico de vidrio borosilicado
fino que se utiliza muy comnmente en el laboratorio, sobre todo, para
preparar o calentar sustancias y traspasar lquidos

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4. Probeta.
Recipiente de vidrio para medir volmenes, su precisin es bastante
aceptable, aunque por debajo de la pipeta. Las hay de capacidades muy
diferentes: 10, 25, 50 y 100 ml.

5. Pipeta
La pipeta es un instrumento volumtrico de laboratorio que permite medir
la alcuota de un lquido con bastante precisin. Suelen ser de vidrio. Est
formada por un tubo transparente que termina en una de sus puntas de
forma cnica, y tiene una graduacin (una serie de marcas grabadas) con
la que se indican distintos volmenes.

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6. Bureta
Las buretas son recipientes de forma alargada, graduadas, tubulares de
dimetro interno uniforme , dependiendo del volumen , de dcimas de
mililitro o menos. Su uso principal se da entre su uso volumtrico, debido a
la necesidad de medir con precisin volmenes de masa y de lquido
invariables.

7. Fiola
son recipientes de vidrio de cuello muy largo y angosto, en el cual tienen
una marca que seala un volumen exacto a una temperatura determinada
que esta grabada en el mismo recipiente y generalmente es 20c.

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8. Mortero con mano o mazo.

Pueden ser de vidrio, gata o porcelana. Se utilizan para triturar slidos
hasta volverlos polvo, tambin para triturar vegetales, aadir un disolvente
adecuado y posteriormente extraer los pigmentos, etc.

9. Laminas cubre y portaobjetos

Portaobjetos: son lminas de vidrio rectangulares, donde se coloca la
muestra para poder verla al microscopio, existen portaobjetos con
cavidades semiesfricas que pueden ser de distinto dimetro y
profundidad, se utilizan para tcnicas de laboratorio en las que se hacen
observaciones en vivo.
Cubreobjetos: Son laminas muy finas de vidrio, con las que se cubren las
muestras que quiero ver al microscopio

10. Asa de siembra

El asa bacteriolgica o asa de platino es un instrumento de

laboratorio tipo pinza que consta de una base que puede estar hecha
deplatino, acero, aluminio y un filamento que puede ser
de nicromo, tungsteno o platino que termina o en un arito de 5 mm o en
punta.

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Se emplea para transportar o arrastrar o trasvasar inculos (pequeo

volumen que contiene microorganismos en suspensin) desde la solucin
de trabajo tambin llamada solucin madre al medio de cultivo (slido o
lquido) o de un medio a otro (resiembra). Tambin sirve para la realizacin
de frotis.

11. Placa de ELISA

La tcnica ELISA (acrnimo del ingls Enzyme-Linked ImmunoSorbent

Assay: ensayo por inmunoabsorcin ligado a enzimas) es una tcnica
de inmunoensayo en la cual un antgeno inmovilizado se detecta mediante
un anticuerpoenlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable,
como cambio de color o algn otro tipo; en ocasiones,

12. Placa de Petri

La placa de Petri es un recipiente redondo, de cristal o plstico, con una cubierta
de la misma forma que la placa, pero algo ms grande de dimetro, para que se
pueda colocar encima y cerrar el recipiente, aunque no de forma hermtica.

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CONCLUSIONES

Todos los materiales son esenciales y cada uno tiene su propia funcin ya que
ayudan a llevar a cabo de manera eficiente investigaciones y experimentos que
sean necesarios.
MATERIAL DE VIDRIO El instrumental de vidrio usado para realizar
investigaciones o reacciones qumicas debe ser fabricado con materiales
resistentes a la accin de los agentes qumicos. El vidrio corriente no sirve para la
fabricacin de instrumentos de laboratorio por ser muy frgil y vulnerable a los
agentes qumicos y fsicos. Por tal razn se construyen de cristal de vidrio,
pudiendo ser este de vidrio grueso o delgado.

ORDEN Y USO DE LOS REACTIVOS

Cuando varias personas deban hacer uso de los mismos reactivos, cada cual debe
ir al lugar del
mismo con su vaso para tomar la cantidad necesaria. No llevar los reactivos a la
mesada.
Los productos qumicamente puros o para anlisis, extrados del envase en
cantidades excesivas,
no deben volverse a poner en el frasco original y tampoco deben ser manejados
con los dedos.
Al sacar un lquido para pasar a otro envase cuide que los rtulos estn hacia
arriba, de ese modo,
si chorrea no se perjudican las etiquetas.

MANEJO DEL TUBO DE ENSAYO

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1. No use tubos de ensayo que tengan rotura cerca del borde, el calor somete al vidrio a
tensiones yel tubo bajo la accin de la pinza puede romperse fcilmente.

2. Tome el tubo a uno o dos cm por debajo del borde con la pinza de madera y comience
calentando suavemente. Ponga el tubo por encima de la llama sin tocarla agitndola
ligeramente.

3. mantenga siempre el tubo con la boca apuntando en direccin contraria a la de su

cuerpo o al de cualquier otra persona que trabaje cerca.

4. Una vez que el lquido se calienta el tubo puede ubicarse dentro de la llama, a corta
distancia del

fondo, y nunca por encima del nivel del lquido contenido.

5. Si el tubo contiene materiales granulados o en polvo, el calentamiento debe ser ms

lento an.

BIBLIOGRAFIA

Prescott, L. M., Harley, J. P., y Klein, D. A. Microbiologa. 4 edicin. McGraw-Hill

Interamericana, 1999.
Madigan, M. T., Martinko, J. M., y Parker, J. Brock Biologa de los Microorganismos.
10 edicin. Prentice-Hall. Madrid, 2003.
Daz, R., Gamazo, C, y Lpez-Goi, I. Manual prctico de Microbiologa. 2 edicin.
Masson, S.A.. Barcelona, 1999.
P. de Kruiff. Los cazadores de microbios. 2 edicin. Aguilar, Madrid, 1960.

El Circo de la Ciencia.

http://ciencias.unizar.es/circo/images/chemistry.jpg

Wanadoo

http://html.rincondelvago.com/instrumentos-de-laboratorio_3.html

http://html.rincondelvago.com/acidos-y-bases_2.html

Wikipedia. La Enciclopedia Libre.

http://pt.wikipedia.org/wiki/S%C3%ADmbolo_de_risco

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INTRODUCCION

Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es

observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de
Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de
10.000 medios de cultivo diferentes.

En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de

enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos
de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor
nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los microorganismos
que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se aaden para promover el
crecimiento de los microorganismos menos resistentes.

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OBJETIVOS

Conocer, diferenciar, clasificar y preparar (pesada, preparacin esterilizacin y

conservacin) los diferentes medios de cultivo utilizados en el laboratorio de
microbiologa.

Saber cmo almacenar un medio de cultivo.

Tener en cuenta las condiciones generales para el cultivo

Saber cul son los ingredientes bsicos para los cultivos

Saber en qu momento se esteriliza un medio de cultivo y por qu

CAPITULO l

FUNDAMENTO TEORICO

1. MEDIOS DE CULTIVO

Un medio de cultivo es un sustrato o una solucin de nutrientes que permite el

desarrollo de microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un
cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que
los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias. Los
microorganismos son los seres ms abundantes de la tierra, pueden vivir en
condiciones extremas de pH, temperatura y tensin de oxgeno, colonizando una
amplia diversidad de nichos ecolgicos. Entre los requerimientos ms importantes
para su desarrollo estn el carbono, el oxgeno, nitrgeno, dixido de carbono e
hidrgeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de factores
de crecimiento especficos en forma de suero, sangre y extracto de levadura entre
otros.

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Evolucin

La primera noticia de la utilizacin de medios de cultivo llega del miclogo Brefeld, que
consigui aislar y cultivar esporas de hongos en medios slidos realizados a base de
gelatina. Este sistema no era adecuado para las bacterias (por su menor tamao) y no fue
hasta el ao 1878 cuando Lister populariz un mtodo enfocado al cultivo puro basado en
diluciones seriadas en un medio lquido.

Koch realiz sus investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de patata como
soporte nutritivo slido, pero no tard en recurrir al caldo de carne lquido, diseado por
Loeffler, al que, en 1881, aadi gelatina, logrando un medio slido transparente ideal
para la observacin de la morfologa macroscpica de las colonias microbianas.

En el ao 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiologa en relacin

con los medios de cultivo: el mdico alemn Walter Hesse introduce el agar-agar
(polisacrido extrado de algas rojas) como solidificante.

En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de cristal planas,
que se llaman desde entonces placas de Petri, para sustituir a las clsicas bandejas de
vidrio cubiertas con campanas que se usaban hasta entonces.

Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus investigaciones sobre las
bacterias quimioauttrofas (utilizacin de nitrgeno y azufre sobre todo) tuvieron gran
importancia en el desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento. Disearon
este tipo de medios de tal forma que su especial composicin qumica favoreca el
crecimiento de ciertos tipos de microorganismos que, en funcin de sus procesos

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metablicos, eran los nicos capaces de utilizar para su desarrollo ciertos nutrientes del
medio.

En 1892 Wrtz impuls el uso de los medios diferenciales, incorporando indicadores de

pH a la composicin de ciertos medios con lo cual se poda observar la produccin de
cidos en la fermentacin en ciertos microorganismos.

2. CONSTITUYENES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

A continuacin se da una idea general sobre algunos de los constituyentes habituales de

los medios de cultivo.

AGAR. Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo.
En el agar bacteriolgico el componente dominante es un polisacrido que se
obtiene de ciertas algas marinas y que presenta la indudable ventaja de que a
excepcin de algunos microorganismos marinos, no es utilizado como nutriente.
Un gel de agar al 1-2% se licua alrededor de los 100C y se gelifica alrededor de
los 40C, dependiendo de su grado de pureza.
EXTRACTOS. Su preparacin consiste en que ciertos rganos o tejidos animales
o vegetales (p.e. carne, hgado, cerebro, semillas, etc.) son extrados con agua y
calor y posteriormente concentrados hasta la forma final de pasta o polvo. Estos
preparados deshidratados son a menudo empleados en la elaboracin de los
medios de cultivo. Los ms utilizados son el extracto de carne, de levadura y el de
malta. 3
PEPTONAS. Son mezclas complejas de compuestos orgnicos, nitrogenados y
sales minerales, que se obtienen por digestin enzimtica o qumica de protenas
animales o vegetales (soja casena carne, etc.). Las peptonas son muy ricas en
ppticos y aminocidos, pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y
sales minerales.
FLUIDOS CORPORALES. Con frecuencia es necesario aadir a los medios de
cultivo de algunos patgenos sustancias como sangre completa, sangre
desfibrinada, plasma o suero sanguneo, sobre todo para conseguir el primer
aislamiento a partir del hospedador. La sangre no puede ser esterilizada, y por
tanto debe de ser obtenida en condiciones aspticas directamente de un animal
sano, y adicionada al medio de cultivo despus de que este haya sido auto
clavado. Los fluidos corporales no solo aportan factores de crecimiento sino que
tambin aportan sustancias que neutralizan a inhibidores del crecimiento de
algunas bacterias. Un ejemplo podra ser la catalasa presente en las clulas
sanguneas destruye el perxido de hidrgeno que algunas bacterias que no
poseen este enzima acumulan como producto del metabolismo del oxgeno.
SISTEMAS AMORTIGUADORES. Para mantener el pH dentro del rango optimo
del crecimiento bacteriano a veces, es necesario aadir algunos componentes al
medio de cultivo. Debido a que la mayora de las bacterias son neutrfilas, se

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suelen emplear sales del tipo de los fosfatos bisodicos bipotsicos u otras
sustancias como las peptonas para prevenir la desviacin del pH.
INDICADORES DE PH. Con el objeto de poder detectar variaciones en el pH
debido a fermentaciones u otros procesos, se hace necesario a veces aadir
indicadores acido-base que nos lo indiquen.
AGENTES REDUCTORES. Con el objetivo de crear en los medios de cultivo
condiciones que permitan el desarrollo de los grmenes microaerofilos
anaerobios se aaden estos agentes reductores siendo, los ms empleados la
cisteina y el tioglicolato entre otros.
AGENTES SELECTIVOS. La adicin de determinadas sustancias a un medio de
cultivo puede convertirlo en selectivo. As, por ejemplo, la adicin de cristal violeta,
sales biliares, azida sodica, telurito potasico, antibiticos, etc., a la concentracin
adecuada har que acten como agentes selectivos frene a determinados
microorganismos.

3. PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

En la actualidad, la mayora de los medios de cultivo se encuentran
comercializados; normalmente bajo la forma de liofilizados a los que es preciso
rehidratar. En estos casos la preparacin del medio de cultivo se reduce
sencillamente a pesar la cantidad deseada del mismo y disolverla en agua
destilada siguiendo las instrucciones del fabricante. Las sustancias termolbiles,
se esterilizan por filtracin y se aaden al resto de los componentes despus de
que estos hayan sido previamente esterilizados en el autoclave y enfriados a
temperatura ambiente a 40-50C si se trata de medios con agar. Antes de su
esterilizacin los medios lquidos se reparten en los recipientes adecuados (tubos,
matraces, etc.). Si es un medio slido y se ha de distribuir en tubos en matraces
ser necesario fundir el agar en bao Maria u horno microondas, una vez fundido y
homogenizado, se distribuye en caliente a los tubos matraces (no en placas
Petri) se tapa y se esteriliza en el autoclave. Una vez finalizada la esterilizacin los
medios se dejaran enfriar a temperatura ambiente y en el caso de medios slidos
contenidos en tubos debern, en su caso, inclinarse para que al solidificarse
adopten la forma de agar inclinado pico de flauta(slant) si tal es su finalidad. 5
Las placas de Petri se preparan vertiendo el medio fundido y estril dentro de ellas
y en un ambiente asptico (por ejemplo en la proximidad de la llama de un
mechero Bunsen) es conveniente homogenizar el medio en el transcurso de la
operacin para evitar que el agar sedimente en el fondo del recipiente y no se
distribuya por igual en todas las placas. Tambin es posible conservar el medio
destinado a preparar placas Petri solidificado y estril en tubos que se fundirn al
bao Maria en el momento de la preparacin de las mismas. Los caldos y medios
slidos pueden conservarse, una vez esterilizados, a temperatura ambiente pero
para reducir su deshidratacin y el consiguiente cambio en las concentraciones de
sus componentes es preferible conservarlos a 4C.

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4. CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo pueden clasificarse segn diferentes criterios, pero los ms
importantes son aquellos que se basan en:

1. Segn su consistencia

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Medios Lquidos.
Son los que se presentan en este estado, denominndose por ello caldos.
Contienen los nutrientes antes citados, con adicin de algn tampn, capaz de
mantener el pH adecuado. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la
obtencin de una suspensin bacteriana de una determinada concentracin.
Ejemplos: caldo nutritivo, caldo tioglicolato, agua peptonada, etc.

Medios Slidos.
Se prepara aadiendo un agente gelificante a un medio lquido determinado. Los
ms usados son gelatina y agar.
Este conjunto, convenientemente esterilizado, se vierte en una placa de Petri o en
tubos. Las exigencias nutritivas y las condiciones fsico-qumicas son similares a
las de los medios lquidos. Pero, a diferencia de ellos, presentan la posibilidad de
obtener colonias aisladas, siempre que la cantidad de inculo est suficientemente
diluida. En este caso se puede observar la existencia de colonias separadas unas
de otras, y cada una constituye un clon (conjunto de bacterias que provienen de
una clula madre, con el mismo patrimonio hereditario y las mismas caractersticas
fisiolgicas).
Ej.: agar nutritivo, agar EMB, CLDE y todos los medios de aislamiento primario y
de identificacin.

Medios Semislidos.
Se preparan a partir de medios lquidos, agregando un agente solidificante en una
proporcin menor que para preparar medios slidos. Uno de sus usos es la
investigacin de la movilidad de las bacterias.
Ej.: agar cepa, SIM, medios base para utilizacin de aminocidos.

2. Segn su composicin.

Medios complejos.
Son aquellos que contienen ingredientes cuya composicin no es exactamente
definida, y por consiguiente no es rigurosamente constante. Adems, no se conoce
exactamente la proporcin de cada uno de sus componentes. Esto tiene ciertos
inconvenientes en condiciones experimentales, donde la reproducibilidad no podr
ser exacta. En la prctica estos medios dan excelentes resultados y son los ms
empleados.
Ejemplo: caldo nutritivo.
Medios Sintticos
Son aquellos que poseen exclusivamente componentes qumicos definidos (se
conocen todos los componentes) disueltos en agua destilada, donde la proporcin
de cada uno de sus componentes es conocida exactamente. Entre ellos se
encuentran los medios mnimos, pues en ellos se intenta comprobar el crecimiento
de una bacteria determinada, con muy pocos nutrientes. Los medios definidos son
ampliamente usados en investigacin, pues a menudo se quiere conocer qu est
metabolizando el microorganismo experimental.
Ejemplos: medio basal de sales y una fuente de carbono determinada.

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Medios Semisintticos.
Cuando alguno de sus componentes no tiene composicin definida. En estos
casos, se aaden factores de crecimiento bajo la forma de un extracto orgnico
complejo, como por ejemplo, extracto de levaduras, peptona cono fuente de
nitrgeno, glucosa como fuente de carbono.

3. Segn su utilizacin o funcin.

Medios de Enriquecimiento.
Se basan en la libre competencia por los sustratos. Son siempre lquidos que
favorecen o permiten la multiplicacin de unas bacterias, inhibiendo parcialmente
la de otras. Pueden ser: de enriquecimiento propiamente dichos, que se basan en
las propiedades metablicas del microorganismo, o de enriquecimiento selectivo,
en cuyo caso se agrega un agente de seleccin que puede ser, un colorante, un
antibitico, etc. Este agente de seleccin no favorece el desarrollo del
microorganismo a enriquecer, sino que inhibe a la flora acompaante.
Ejemplos:
agua peptonada alcalina, se utiliza para V cholera (donde el pH alcalino
inhibe a todas las enterobacterias menos al Vibrio)
caldo selenito, acta inhibiendo el desarrollo de casi todas las
enterobacterias menos de Salmonella y Shigella.
caldo tioglicolato
caldo infusin cerebro corazn (BHI)

Medios Selectivos (o Inhibidores)

Pueden ser slidos o lquidos, a los que se les agrega uno o ms agentes de
seleccin. Favorecen el crecimiento de microorganismos particulares, en los que la
selectividad se consigue alterando las condiciones fsicas del medio o aadiendo
compuestos qumicos, que sean nocivos para las bacterias cuyo crecimiento no
interesa. Los medios inhibidores pueden considerarse una variante ms restrictiva
de los medios selectivos. Las posibilidades de seleccin son infinitas y existen
decenas de medios selectivos especiales disponibles.
Ejemplos:
- Agar Endo, eosina azul de metileno (EMB o Levine), agar MacConkey. (Las
sales biliares o colorantes como la fucsina bsica y el cristal violeta, componentes
de estos medios, favorecen el crecimiento de bacterias gramnegativas, al inhibir el
crecimiento de bacterias grampositivas).
- Agar salmonella-shigella (SS): medio selectivo para recuperar Salmonella
spp y Shigella spp. (Las sales biliares, el citrato de sodio y el verde brillante son
inhibidores de los grampositivos y de algunos gramnegativos. Las posibles
colonias de Shigella aparecen amarillas y las posibles de Salmonella aparecen
negras).
- Agar Tayer Martin: el medio base es agar chocolate con agregado de
antibiticos para inhibir el desarrollo de bacterias contaminantes:
- trimetroprima para inhibir Proteus spp y otros gramnegativos,
- vancomicina para inhibir grampositivos y

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- nistatina para inhibir levaduras.

Medios Diferenciales.
Son siempre slidos y se utilizan para diferenciar colonias. Son medios que
diferencian entre grupos distintos de bacterias e incluso permiten una identificacin
tentativa segn las caractersticas biolgicas del microorganismo. A estos medios
se les agrega, por ejemplo, un indicador de pH que permite diferenciar a
microorganismos que fermentan un determinado hidrato de carbono.
Ejemplos:
- Eosina azul de metileno (EMB- Levine): permite diferenciar bacilos gram
negativos fermentadores y no fermentadores de lactosa. Las bacterias no
fermentadoras dan colonias transparentes y las fermentadoras rosa o rojas, y E
coli da colonias con brillo verde metlico. Estas coloraciones son producidas por la
presencia del indicador de pH eosina amarilla y del colorante azul de metileno
(ste inhibe el desarrollo de la mayora de los gram positivos y junto a la eosina
sirve como indicador de fermentacin ya que a pH cido los colorantes precipitan).
- El agar MacConkey es tanto diferencial como selectivo, contiene lactosa y
colorante rojo neutro, las colonias fermentadoras de lactosa aparecen de color
rosa a rojo y son fcilmente distinguibles de las no fermentadoras.
- Agar MacConkey-sorbitol. Es un medio diferencial que permite sospechar
en 24 hs la presencia de E coli O157 en materia fecal, dado que esta especie no
fermenta el sorbitol.
- El agar Xilosa-lisina-desoxicolato (XLD) sirve para diferenciar patgenos
entricos. La mayora de los no patgenos fermentan lactosa, sacarosa o xilosa y
producen colonias amarillas. Shigella spp. no fermenta estos azcares y da
colonias rojas. Salmonella spp y Edwarsiella spp fermentan xilosa pero producen
lisina decarboxilasa produciendo cadaverina que neutraliza los cidos de la
fermentacin y dan colonias rojas con centros oscuros porque producen cido
sulfrico.
- Agar cistena lactosa deficiente en electrolitos (CLDE), contiene lactosa y
permite diferenciar las bacterias fermentadoras de lactosa (colonias amarillas) de
las no fermentadoras (colonias incoloras).

Medios Enriquecidos.
Son medios a los que se le agrega un nutriente extra (adems de las sustancias
nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el
crecimiento de microorganismos exigentes). Pueden ser lquidos o slidos. En
estos medios no crece un determinado grupo de bacterias sino todas. Este
enriquecimiento se hace por adicin de sangre u otros productos biolgicos
(sangre, suero, leche, huevo, bilis, lquido asctico, etc.) que aportan dichos
factores. En ocasiones es posible aadir suplementos artificiales a los medios para
producir un enriquecimiento del mismo, por ejemplo Polivitex, Isovitalex, etc.
Ejemplos: agar sangre, agar chocolate, caldo infusin cerebro-corazn, caldo
tristona-soya.

Medios de Identificacin.
Son los medios destinados a comprobar alguna cualidad especfica que puede
servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo. Estos medios han de
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 MICROBIOLOGIA

poseer los elementos necesarios para asegurar el crecimiento de los

microorganismos, el sustrato especfico que vaya a ser metabilozado y el indicador
que nos muestre el resultado.
Ejemplos.: agar citrato de Simons, agar sulfhdrico-indol-movilidad (SIM), agar
manitol salado, agar DNAsa, agar triple azcar hierro (TSI), y en general, cualquier
medio al que se le haya aadido un elemento diferencial, son medios utilizados
para identificacin.
Actualmente estn apareciendo en el mercado una gran cantidad de medios
especficos de identificacin para ciertos microorganismos, con lo cual se consigue
simultneamente identificar los grmenes a partir de la placa de cultivo gracias a la
utilizacin de sustratos cromognicos especficos.

Medios de Transporte.
Se usan para transporte de aquellas muestras que no van a procesarse de
inmediato o que deban ser trasladadas de un laboratorio a otro, y que puedan
contener microorganismos fastidiosos para su desarrollo por lo que se debe
impedir el sobrecrecimiento de bacterias que colonizan con frecuencia piel y
mucosas. Estos medios son generalmente semislidos, tamponados y sin
sustancias nutritivas.
Ejemplos: Stuart-Amies, Cary-Blair, etc.

PARTE EXPERIMENTAL

La preparacin de un buen medio de cultivo es fundamental para un buen

diagnstico bacteriolgico. El xito de la preparacin est influenciado por una
serie de factores como:

Exactitud de la pesada y perfecta medicin del volumen de agua

Control de pH
Correcta disolucin del medio de cultivo
Correcta esterilizacin
Correcta conservacin del medio de cultivo
Correcto fraccionamiento.

Para la preparacin de medios se parte de mezclas deshidratadas de los

compuestos que la integran. Habitualmente slo es necesario aadir agua y
esterilizar en autoclave, pero en algunas ocasiones es necesario aadir despus
de la esterilizacin algn componente termolbil que no hubiera resistido el calor.

Los medios deshidratados presentan ventajas:

- son muy estables,
- su utilizacin es muy simple, pudiendo prepararse poco tiempo antes de su
utilizacin,
- una pequea cantidad del producto permite la preparacin de una
importante cantidad de medio, no necesitando un gran volumen de
almacenamiento,

AGRONOMIA Pgina 25
 MICROBIOLOGIA

- son econmicos.

ACTIVIDADES A REALIZAR

Para la preparacin de los medios de cultivos se debern tener en cuenta las

indicaciones del fabricante.

Procedimiento general:

pesar la cantidad de medio de cultivo indicada por el fabricante.

colocar las cantidades pesadas en un frasco adecuado (previamente limpio
y rotulado) que ser el recipiente en el cual se va a esterilizar el medio de cultivo.
disolver el medio de cultivo agregando agua destilada hasta completar el
volumen total y calentar a bao mara hasta disolucin total del medio.
Verificar rpidamente el pH y ajustarlo, si es necesario, al valor indicado
por el fabricante. Es indispensable efectuar esta verificacin, pues el pH del agua
destilada puede variar segn las condiciones de obtencin y almacenamiento. El
ajuste debe hacerse a temperatura ambiente.
Una vez preparados los medios deben esterilizarse. La mayora de los
medios de cultivo se esterilizan en autoclave, durante 15 minutos, a 121C.
Los medios slidos se reparten cuando todava estn fundidos y se dejan
solidificar en su envase definitivo (placa o tubo).
Si los medios de cultivos no son fraccionados en el momento, debern
conservarse a 4C (heladera) por periodos variables. Deben ser etiquetados y se
debe aclarar la fecha de su esterilizacin.
Si hay que aadir sustancias de enriquecimiento termolbiles, se hace
despus de la esterilizacin, y con el medio ms fro pero an fundido. La adicin
debe ser asptica y lenta, para conseguir homogeneidad.
Los medios solidificados en placa deben ser puestos a temperatura
ambiente y despojados de la humedad que pudiesen tener antes de su utilizacin.

Los medios deshidratados son muy higroscpicos, es indispensable que los

frascos permanezcan abiertos solo el tiempo necesario para la obtencin del
producto. Su conservacin debe hacerse en lugar fresco y seco y no deben
utilizarse los medios hidratados ambientalmente.

Los medios deben someterse a un control de calidad que abarcar los siguientes
aspectos:
o Control de esterilidad: se efecta incubando algunas placas del lote
escogidas al azar y verificando la ausencia de crecimiento bacteriano.
o Control de composicin: se realiza para comprobar que el medio posee los
componentes que lo caracterizan de manera que permita el crecimiento de
determinados grmenes.
o Control de caducidad: se realiza para utilizar las placas durante el tiempo
que garantice su correcta utilizacin. Por trmino medio las placas preparadas
pueden conservarse entre 15 das y dos meses.

CONCLUSIONES

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 MICROBIOLOGIA

Un medio de cultivo consta de un gel o una solucin que cuenta con los
nutrientes necesarios para permitir, en condiciones favorables de pH y
temperatura, el crecimiento de virus, microorganismos, clulas, tejidos
vegetales o incluso pequeas plantas. Segn lo que se quiera hacer crecer,
el medio requerir unas u otras condiciones.

Clasificacin
Segn sus cualidades fsicas, se distinguen:

lquidos
semislidos
slidos
Segn su origen:

Naturales: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o

vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin qumica no
se conoce exactamente.
Sintticos: son los medios que contienen una composicin qumica definida
cualitativamente y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados
reproducibles.
semisinteticos: son los sintticos a los que se les aaden factores de crecimiento
bajo una forma de un extracto orgnico complejo, como por ejemplo extracto de
levadura.
Segn su formulacin:

Qumicamente definidos: se conoce la cantidad exacta de cada uno de los

compuestos que hay en el medio.
Complejos: se realizan a partir de extractos naturales (extracto de levadura,
sangre, etc.); no se conoce exactamente cul es la composicin del medio; sin
embargo, presenta la ventaja de que ya estn presentes todos o casi todos los
elementos que una clula puede requerir.
Segn su uso:

Medio general: medio en donde crecen todo tipo de microorganismos, excepto los
que necesitan condiciones especiales (por ejemplo, agar CLED).
Medio selectivo: permite seleccionar el crecimiento de una especie o grupo
determinado (hongos, bacterias entricas, protozoos...).
Medio diferencial: permite identificar una especie con otra, ambas en el mismo
medio. Puede ser por su crecimiento, su metabolismo,su respiracin, etc. (por
ejemplo, medio de McConkey).
Medio de enriquecimiento: contiene los nutrientes necesarios para apoyar el
crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, se utiliza para la cosecha
de diferentes tipos de microorganismos en un mismo medio.
Medio mnimo: contiene la mnima cantidad de nutrientes posible que permite el
crecimiento de una especie;

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 MICROBIOLOGIA

Medio de transporte: preparado para servir como almacenamiento temporal a

especmenes transportados o en transferencia; mantienen su viabilidad y su
concentracin;simple

Condiciones generales para el cultivo

Disponibilidad de nutrientes adecuados

Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener,

como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas
Consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo

productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en
estado semislido o slido. Actualmente los medios slidos son de uso universal,
por su versatilidad y comodidad, pero hay tambin gran cantidad de medios
lquidos cuyo uso est ampliamente extendido en el laboratorio.

Presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases

Condiciones adecuadas de humedad

Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es

imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en
los cultivos

Luz ambiental
La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en
presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los
microorganismos fotosintticos.
pH
La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los
microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. Temperatura
Esterilidad del medio
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la
aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos
medios. El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave
(que utiliza vapor de agua a presin como agente esterilizante)

BIBLIOGRAFA.

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 MICROBIOLOGIA

1. Microbiologa Clnica. Mdulo 1. Taxonoma y Fisiologa Microbiana.

Recoleccin y transporte de muestras para el diagnstico de infecciones. AAM-
Colegio de Bioqumicos de la Provincia de Entre Ros- Facultad de Bioqumica y
Ciencias Biolgicas Universidad Nacional del Litoral. 1997.
2. Microbiologa Clnica. Mdulo 2. Procesamiento inicial de las muestras para
el diagnstico mocrobiolgico. AAM- Colegio de Bioqumicos de la Provincia de
Entre Ros- Facultad de Bioqumica y Ciencias Biolgicas Universidad Nacional
del Litoral. 1997
3. Prescott L, Harley J, Klein D. Microbiologa. Cuarta Edicin. 1999.
4. Fumarola A, Rodrguez-Torres A, Garca-Rodrguez JA, Piedrota-Angulo G.
Microbiologa y Parasitologa Mdica. Segunda Edicin. 1987.
5. Daz Martn GA. Fundamentos y tcnicas de anlisis microbiolgico.
Medios de cultivo. Apuntes. Segundo curso: Laboratorio de Diagnstico Clnico
Unidad Temtica 14-1, Bloque temtico III. 2004-2005.
6. Vullo D, Waschman M, Alche L. Microbiologa en prctica. Manual de
tcnicas de laboratorio para la enseanza de la microbiologa bsica y aplicada.
Ed. Atlante. 2000. Cap. 7, 47-50.

INTRODUCCION

En la naturaleza, los microorganismos se encuentran formando poblaciones mixtas

con otros tipos de microorganismos. Los cultivos de estas mezclas se llaman por
ello cultivos mixtos. Sin embargo, el conocimiento de los microorganismos se
consigue mediante el estudio de cepas aisladas, cultivadas en el laboratorio en
cultivos puros (o axnicos). En ocasiones el estudio molecular conduce a la
caracterizacin de los microorganismos, an en poblaciones mixtas. Sin embargo
la identificacin bacteriana y la caracterizacin completa solo es posible tras el
aislamiento de la bacteria y la obtencin de cultivos puros. Por ello el primer
problema al estudiar una bacteria es su aislamiento del resto de los
microorganismos presentes (enn una muestra patolgica, de agua, de suelo, de
alimentos, etc.). Una vez que se ha logrado el aislamiento es posible obtener la
bacteria de inters en cultivo puro.

AGRONOMIA Pgina 29
 MICROBIOLOGIA

OBJETIVOS

Determinar las siembras de cultivo en medio slido y liquido.

Esterilizar correctamente los instrumentos de inoculacin en la flama del mechero.
Manipular correctamente sus dedos para remover y recolocar las tapas de tubos
de cultivo.
Realizar los procedimientos de rayado de placas (siembra por estras y/o cultivo
por extensin
para separar clulas de un cultivo mixto de modo que se aslen colonias discretas.

Distinguir los conceptos de cultivo puro y cultivo mixto.
Aplicar tcnicas de aislamiento para la localizacin de microorganismos concretos
en muestras contaminadas o con flora mixta.
Aplicar las tcnicas del agotamiento y las estras como las ms habituales en
aislamiento de microorganismos cultivables.
Observar la influencia de la temperatura sobre el desarrollo de los
microorganismos.

CAPITULO l
FUNDAMENTO TEORICO

Dispositivos empleados en la transferencia de muestras microbianas:

Los utensilios utilizados para la transferencia de muestras son los

siguientes:

Hisopo, pipeta (para uso microbiolgico sonterminales y la parte superior o

boquilla debe estar protegida con filtro de algodn), pipeta pasteur, cable de Kolle
o portasa con alambre de platino dispuesto en forma de: aguja, asa, esptula y/o
gancho.

AGRONOMIA Pgina 30
 MICROBIOLOGIA

En la transferencia de microorganismos se emplean agujas, asas de inoculacin,

hisopos, pipetas o pipetaspasteur que debern esterilizarse previamente. La
utilizacin de estos dispositivos, as como de los diferentes medios de cultivo
tienen aplicaciones especficas. Por ejemplo:

Los medios lquidos se preparan en tubos o matraces que se cubren con

tapones de algodn o tapones especiales. Un cultivo lquido puede ser transferido
mediante un asa microbiolgica, un hisopo, pipeta o pipeta pasteur; el inculo se
deposita dentro del caldo o medio lquido. En este tipo de cultivos los
microorganismos presentan un desarrollo particular que se manifiesta en la
superficie o a travs de todo el lquido. Una de las ventajas que presenta este tipo
de cultivo se refiere a laposibilidad de agitarlos acelerando la velocidad de
microorganismos anaerobios, por otra parte, en este tipo de cultivos, las
poblaciones se encuentran suspendidas y e fcil homogenizarlas, lo que permite
estandarizar laconcentracin del inculo. La desventaja que presentan, es que en
ellos e difcil detectar contaminacin a simple vista.

Los medios semislidos se preparan en tubos, se inoculan con aguja de siembra

(asa recta) o pipeta pasteur; en este ltimo caso es necesario calentar el medio y
cuando se encuentra en estado lquido y a una temperatura de aproximadamente
42C se agrega el inculo, se homogeniza y se deja solidificar. Estos medios se
emplean para estudiar la movilidad de los microorganismos y para favorecer la
separacin de microorganismos con diferentes requerimientos de oxgeno.

Los medios slidos se preparan en tubos o matraces dependiendo de la cantidad

o de las necesidades, despusde esterilizarlos, estos se inclinan o vierten en cajas
de petri. La siembra se realiza con el asa, inoculando lasuperficie del agar con
mucha suavidad; en estos medios, los microorganismos al multiplicarse forman
agregados que se hacen visibles a simple vista; a estos agregados se les
denominan colonias, las que presentancaractersticas que varan con el tipo de
microorganismo cultivado y el medio de cultivo empleado. En cualquier medio de
cultivo es de primordial importancia ajustar el pH, ya que an cuando la mayora
de losmicroorganismos crecen mejor en pH neutro, algunos requieren de pH
AGRONOMIA Pgina 31
 MICROBIOLOGIA

alcalino o cido, por lo que al proporcionar un pH adecuado se favorecer el

crecimiento del microorganismo de inters y la obtencin del cultivo. Con este
mismo propsito durante la incubacin se deben proporcionar las condiciones
adecuadas para el microorganismoen estudio. El crecimiento ptimo de los
microorganismos se presenta a temperaturas que la mayora de las veces estn
relacionadas con la de su hbitat natural. Algunos microorganismos crecen por
debajo de 15C, otros requieren temperaturas ms elevadas (30 a 45C) y algunos
hasta 80C. Para alcanzar y mantener estas temperaturas se puede usar una
incubadora microbiolgica o un bao de agua a temperatura constante, en tanto
que para lo microorganismos que presentan su crecimientoptimo a temperaturas
entre 20 y 25C se pueden incubar en la gaveta o cajn del laboratorio, a
temperaturaambiente. En general las incubadoras microbiolgicas satisfacen las
necesidades en cuanto a los rangos de temperatura requeridas por los
microorganismos. La desventaja que tienen es que estos aparatos funcionan con
are seco, lo que determina la deshidratacin de los medios de cultivo. Por lo tanto,
el crecimiento de cualquier cultivo experimental que se realice en incubadora no
debe prolongare por ms de nueve das.

Tcnicas de siembra

Mtodo de siembra por estra en placa

Es el mtodo ms fcil y el ms usado para obtener cultivos axnicos. Para ello,

con un asa de siembra se tomauna muestra de la poblacin mixta y a continuacin
se hacen estras sobre la superficie de un medio slidopreparado en una placa
Petri (a las placas Petri tambin se les denomina simplemente placas). Conforme

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 MICROBIOLOGIA

se van haciendo estras en zigzag con el asa, cada vez se van depositando en la
superficie del medio menosmicroorganismos. A continuacin, se flamea el asa, se
toca en la regin donde se han realizado las ltimasestras y se contina la
siembra con la misma tcnica, en la superficie de medio sin sembrar an.
Repitiendo esteproceso varias veces se logra separar clulas individuales. A
continuacin, las placas se incuban en un lugar adecuado, permitiendo que las
clulas aisladas experimenten un nmero suficiente de divisiones para formar
colonias visibles. Aunque cada colonia posiblemente representa un clon derivado
de una sola clula, no podemos asegurarlo. Quizs, dos clulas quedaron
depositadas tan juntas que han originado una nica colonia mixta. Por tanto, para
asegurarnos de que hemos obtenido un cultivo axnico, conviene repetir el
procedimiento a partir deuna colonia bien aislada en la primera placa. Las colonias
que se desarrollen la segunda vez, sern, casi con todaseguridad, cultivos
axnicos.

Mtodos de vertido en placa y extensin en placa

En estos mtodos, las suspensiones de clulas microbianas se diluyen antes de

su siembra en placa. Se siguenestas tcnicas cuando la muestra contiene tantos
microorganismos, que la dilucin no se puede realizar en una sola etapa. Por
ejemplo, una suspensin con mil millones de clulas por mililitro debe ser diluida
10

veces paraobtener una suspensin con un centenar de clulas por mililitro, Por
tanto, se realizan diluciones seriadas (envarias etapas), normalmente de diez en
diez, pero a veces de cien en cien.

Para realizar diluciones de diez endiez, se aade 1 ml de la suspensin bacteriana

a 9 ml (de medio estril o solucin salina, igualmente estril. Se agita
vigorosamente para diluir las clulas y el proceso se repite cuantas veces sea
necesario. A continuacin, sepuede proceder de dos maneras diferentes.

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 MICROBIOLOGIA

En el mtodo de vertido en placa, las muestras diluidas se mezclan con agar

fundido y se vierten en placa. Algunas colonias quedarn embebidas en el agar y
otras crecern en la superficie. Las colonias superficiales se extendern y sern
ms grandes.

En el segundo mtodo (extensin en placa), las muestras diluidas se

siembrandirectamente en la superficie de la placa de agar, extendindolas con
avuda de un asa de Diralsky de cristal estril. La suspensin se absorbe en el
agar, dejando las clulas microbianas sobre la superficie. En ambas tcnicas las
placas se incuban hasta la aparicin de las colonias. Como en el mtodo de
siembra por estra, no existe la seguridad de que las colonias que aparecen en las
placas sembradas por extensin o en el agar solidificado sembrado por el mtodo
del vertido en placas sean cultivos axnicos hasta que se repita el proceso. Las
dos tcnicas de siembra por dilucin presentan la ventaja de que permiten obtener
un mayor nmero decolonias aisladas que el mtodo de siembra por estra, por
tanto se eligen cuando se ha de seleccionar una cepa a partir de una mezcla con
varios tipos de microorganismos. Para obtener un cultivo axnico mediante este
mtodo:

(a) Hacer diluciones seriadas de la suspensin bacteriana hasta obtener una

muestra con slo unos pocoscientos de bacterias-

(b) verter la muestra en un tubo con agar a sobrefusin, mezclar y verter el

contenido en una placa Petri.

(c) Despus de la incubacin, se desarrollan colonias en el agar (ms pequeas) y

en su superficie (ms grandes).

Mtodo de aislamiento por siembra por estra en placa: Para obtener un cultivo
axnico:

(a) esterilizar un asa de siembra por flameado en la llama de un mechero.

(b) introducirla en la suspensin bacteriana para recoger una muestra.

(c) sembrar haciendo estras sobre la superficie de un medio slido en una placa
Petri, y

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 MICROBIOLOGIA

(d) volver a esterilizar el asa, tocar en la zona de la placa ya sembrada y hacer un

segundo grupo de estras enuna regin nueva de la placa. Repetir el proceso una
tercera y una cuarta vez, hasta conseguir que los grupos de clulas se diluyan y se
separen clulas aisladas.

(e) Despus de la incubacin, se desarrollan colonias aisladas. Para estar seguro

de que el cultivo es puro, repetir el proceso entero; para ello tomar una colonia
aislada y sembrar por estras una segunda placa.

3.2.4 El crecimiento de los cultivos axnicos

Una vez que se obtiene un cultivo puro, normalmente se ha de propagar (se le

hace crecer de nuevo). Seguramente, el investigador desear obtener ms clulas
para poder trabajar con ellas. Para cultivar microorganismos en el laboratorio, se
ha de preparar un medio de cultivo, lquido o slido, con todos los nutrientes
necesarios para su crecimiento. Los medios slidos se hacen generalmente,
aadiendo agar a los lquidos (

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 MICROBIOLOGIA

CONCLUSIONES

El aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales se realiza, en la

mayora de los casos, mediante la produccin de colonias aisladas en cultivos
slidos. El crecimiento explosivo de las bacterias permite producir un gran
nmero de ellas a partir de una nica clula inicial de forma que, tras un
periodo de incubacin en las condicione ambientales adecuadas, se produce
una colonia observable a simple vista y formada por individuos iguales (un clon
bacteriano).
SIEMBRA O CULTIVO: es la operacin que consiste en depositar
aspticamente microorganismos en un medio de cultivo
Los instrumentos empleados corrientemente en la siembra son:
Asa de Siembra:
Pipeta Pasteur:

La tcnica general de siembra depender de:

a) Estado fsico del material a sembrar ( slido o lquido )

b) Estado fsico del medio de cultivo ( agar o caldo )

c) Ambiente en el cual crece el microorganismo ( aerobiosis, microaerofilia o

anaerobiosis
AISLAMIENTO Y TRANSPLANTE (TRASPASO)
Cuando se realiza una siembra en medios slidos es deseable obtener las
bacterias en forma asiladas. Sin embargo, generalmente las muestras tienen
una flora mixta, que se manifiesta por el desarrollo de distintas especies
bacterianas: algunas son saprfitas (flora normal) o contaminantes del proceso
de muestreo y otras son las que tienen un rol patgeno.
Para realizar diagnsticos microbiolgicos el organismo debe ser primero
aislado y mantenido puro en condiciones de laboratorio.
Si en la placa de agar ha crecido ms de un tipo de bacterias, se debe realizar
el aislamiento de 1 colonia a otro medio de cultivo semejante o a medios
selectivos.
Si fuese necesario las colonias se sometern a uno o ms re-aislamientos,
hasta obtener cultivos puros; es decir, presenten la misma morfologa y
microscpicamente correspondan a un solo tipo de bacteria.

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 MICROBIOLOGIA

Slo en este momento se puede proceder a la identificacin de la especie

bacteriana mediante el traspaso de 1 sola colonia a una batera de medios
diferenciales.
El aislamiento de los microorganismos se puede conseguir por los siguientes
procedimientos:
BIBLIOGRAFIA

Libros de texto

P. R. MURRAY. Microbiologa Mdica. 2006. Mosby (Elsevier Science).

B. C. MIMS. Microbiologa Mdica. 2 Edicin. 2002. Mosby (Elsevier Science).

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Edicin.1999. MedMaster, Inc. P.O. Box 640028. Miami, FL 33164. USA. (270 pginas

AGRONOMIA Pgina 37
 MICROBIOLOGIA

INTRODUCCION

La finalidad de las coloraciones es, entre otras, hacer visibles los grmenes y revelar su
estructura. El estudio microscpico de un germen puede ser realizado de diversas
maneras, incluidas los preparados en fresco. Pueden adems utilizarse tcnicas
especiales como contraste de fases, el campo oscuro, la fluorescencia, etc.

En su mayor parte los microorganismos son demasiado pequeos para observarse a

simple vista: protozoos, algas, hongos, bacterias y virus.

Estos microorganismos difieren en caractersticas tales como forma de nutricin,

estructura, tamao, composicin entre otros aspectos; es por ello que se emplea el
estudio microscpico el facilita notablemente la observacin; principalmente en las
bacterias se facilita al tratarlas con colorantes o tintes los cuales facilitan tambin la
observacin de ciertas estructuras celulares.

En este informe daremos a conocer que pasos debemos seguir para una coloracin. Y
tambin damos a conocer un anlisis de los resultados obtenidos en la prctica.

OBJETIVOS

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 MICROBIOLOGIA

o Definir que es un colorante y una tincin y ver sus diferentes usos en la

microbiologa
o Aprender los pasos a seguir para hacer una coloracin (GRAM) en el
desarrollo de la prctica
o Determinar formas de bacterias de acuerdo a su tincin

o Conocer el mecanismo bsico y ventajas de una tincin.

o Aprender conceptos bsicos relacionados a:

Proceso de preparacin de un frotis

Tincin Gram

Tincin cido-Resistente

o Identificar caractersticas en las bacterias en estudio

o en base a las diferentes tinciones.

CAPITULO l

FUNDAMENTO TEORICO

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 MICROBIOLOGIA

1. Colorantes
Los colorantes son sustancias de origen qumico o biolgico, generalmente tintes,
pigmentos, reactivos u otros compuestos, empleados en la coloracin de tejidos
microorganismos para exmenes microscpicos, debiendo tener al menos, un
grupo cromforo que le proporcione la propiedad de teir.

2. Fuente de obtencin de los colorantes.

Atendiendo a la fuente de obtencin, los colorantes se clasifican en naturales y
sintticos.

Colorantes naturales. Los colorantes naturales son bsicamente histolgicos,

encontrndose entre los empleados con mayor frecuencia, los siguientes:

ndigo: Se obtiene de diversas especie de plantas del genero indigfera que

contiene indican, el cual se fermenta para producir el colorante.
Carmn: Se produce, mediante el tratamiento con alumbre y otras sales metlicas
a hembras del insecto cochinilla "Coccus castis".
Orcena y Tornasol: Se obtiene mediante el procesamiento industrial de lquenes
de los gneros: Le canora tinctoria y Rosella tinctoria.
Hematoxilina: Este colorante se extrae con ter de la madera de un rbol oriundo
de Mxico y de algunos paises suramericanos denominados Hematoxilium
campechianum.
Colorantes sintticos. Se obtiene de la anilina, o es mas exactamente del
alquitrn de hulla siendo todos derivados del benceno.

3. Clasificacin
Los colorantes se clasifican, teniendo en cuenta si la propiedad tintorial se
encuentra en el anin o el catin de su estructura qumica. Sobre esta base se
pueden dividir en tres grupos: bsicos, cidos y neutros.

Colorantes bsicos: La accin colorante est a cargo del catin, mientras que el
anin no tiene esa propiedad, por ejemplo: - cloruro de azul de metileno+.

Colorante cido: Sucede todo lo contrario, la sustancia colorante esta a cargo del
anin, mientras que el catin no tiene propiedad, por ejemplo: eosinato- de sodio+

Colorantes neutros: Estn formados simultneamente por soluciones acuosas de

colorantes cido y bsicos, donde el precipitado resultante, soluble exclusivamente
en alcohol, constituye el colorante neutro, que tiene la propiedad tintorial de sus
componentes cidos y bsicos, por ejemplo: la giemsa.
AGRONOMIA Pgina 40
 MICROBIOLOGIA

4. Afinidades tintoriales.
En el proceso de la coloracin, ocurre una combinacin de reacciones fsicas y
qumicas.

Reaccin fsica.
Ocurre un fenmeno de absorcin similar al que tiene lugar en las materias
porosas, considerando que el colorante penetra en los intersticios del cuerpo
coloreable y se mantiene all por la cohesin molecular.

Reaccin qumica
Las clulas microbianas son ricas en cidos nucleicos que portan cargas negativas
en formas de grupos fsfato combinndose como colorante bsicos cargados
positivamente. Los colorantes cidos que tienen la accin colorante en el anin no
tien la clula, emplendose como colorante de contraste para colorear su
entrono, como por ejemplo: la tinta china o la eosina que no colorea al
microorganismo, pero si el fondo del campo microscpico.

5. Toxicidad de los colorantes. Ventajas y Desventajas.

Los colorantes son sustancias txicas, por lo tanto el proceso de la tincin
generalmente resulta letal para los microorganismos, provocando su
inmovilizacin, lo cual puede significar una ventaja o desventaja para el
investigador segn sean los objetivos con la sustancia colorante. Veamos algunos
Ejemplos:

Al ocasionar la muerte de los microorganismos sometidos al proceso de tincin se

reducen las posibilidades de contaminacin para el manipulador.
Los colorantes pueden ser txicos para el manipulador, algunos incluso han
resultado cancerigenos por lo que ha habido la necesidad de retirarlos del
mercado.
Algunos colorantes solo tienen afecto letal para determinadas especies o gneros
bacterianos, siendo utilizados como constituyentes de medios de cultivo selectivo
para impedir el desarrollo de microorganismos indeseables y favorecer el
desarrollo de las especies que nos interesa estudiar. Por ejemplo: el verde de
malaquita.
Otros se emplean como desinfectantes microbianos, mas que para teir, con fines
de microscopia, por sus propiedades bacterianas o bacteriostticas.
Algunos tipos de colorantes son empleados no para teir, sino como indicadores
de pH, formando parte de la composicin de los medios de cultivo para indicar los
cambios de basicidad o acidez que se vayan produciendo en el medio como
consecuencia de su actividad metablica. Ejemplo: rojo fenol, azul de bromotimol,
etc.
6. Mtodos de coloracin
Atendiendo a los objetivos que se persigan, los mtodos de coloracin se
clasifican en: Tincin simple, tincin compuesta y tincin especial.

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Tincin simple: En la tincin simple se utiliza un solo colorante con el que

se tie rpidamente el microorganismo, utilizndose fundamentalmente
para observar su morfologa y tamao. Los colorantes empleados con
mayor frecuencia para este tipo de tincin son los siguientes: azul de
metileno, violeta cristal y fuscina fenicada, entre otros.
Tincin compuesta: En este tipo de tincin, se utiliza ms de una
sustancia tintrea. Los colorantes se aplican, a la preparacin, separados o
juntos, formando parte de una solucin. En consecuencia se puede
determinar algunas caractersticas propias de diversos gneros que
permiten diferenciarlo de los dems, por lo que reciben tambin el nombre
de coloraciones diferenciales. Entre los mtodos mas utilizados se
encuentran: La coloracin de Gram. y la de Ziehl Neelsen.
Tincion especiales: sirven para colorear partes especficas de
microorganismos como endoesporas flagelos y detectar presencia de
capsulas.
Coloracion Diferencial o Tincion Diferencial
Las tinciones diferenciales son aquellas tinciones que se usan para
diferenciar de manera mas explicita los microorganismos. Estas tinciones
utilizan los colorantes diferenciales, que se componen de ms de una
sustancia tintrea. En algunas tcnicas de coloracin, las tinciones
diferenciales ms importantes que se emplean en bacteriologa son las de
Gram y la tincin cido-resistente. Ambas tinciones se utilizan para obtener
informacin acerca de la composicin de las capas de la pared celular de
las clulas bacterianas.

Caracterstica
Tincin Tipo Uso Ejemplo
s

Tie ncleos,
cidos
nucleicos y
Hematoxili Bsica / estructuras Tincin histolgica
na Acidoflica basoflicas general
(mitocondrias y
ribosomas) en
azul.

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Tie protenas y
estructuras con
cida / afinidad por los Tincin histolgica
Eosina
Basoflica cidos en general
diferentes
tonos de rojo

Los
ncleos
aparecen
en azul
(hematoxili
na).

Los
cidos
Tincin nucleicos Tincin histolgica
hematoxili asociados a general
na-eosina protena (ej.
ribosomas)
Bicompone en violeta
nte
Anfiflica Fibra
muscular en
rojo

Tejido
conectivo
en rosado

Similar a la
Tincin tincin H&E con
Tincin histolgica
hemalumbr colores ms
general
e-eosina marcados y
definidos

Tincin Policromti
HOPS ca Los
ncleos
aparecen
en azul
(hematoxili
na).

La
elastina

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aparece en
negro
(orcena).

Fibra
muscular en
rojo
(filoxina)

Tejido
conectivo
(colgeno)
en amarillo
(safranina)

Los
ncleos
aparecen
en azul
(hematoxili
na).
Tincin
Fibra
HPS muscular en
rojo
(filoxina)

Tejido
conectivo
(colgeno)
en amarillo
(safranina)
Tincin de Permite ver la Se utiliza para
Papanicola cromatina con diferenciar clulas
u mucha en muestras de
claridad. secreciones
biolgicas (esputo,
Los LCR, orina, etc.) y en
ncleos raspados y biopsias.
aparecen Permite distinguir
de color con relativa facilidad
entre azul y
clulas con
negro.
transformaciones
neoplsicas,
Clulas
con alto levaduras y
contenido bacterias.
de

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queratina
en amarillo

Glucge
no en
amarillo

Clulas
superficiale
s de naranja
a rosado

Clulas
intermedias
y
parabasales
entre
turquesa y
azul

Las
clulas
metaplsica
s muestran
coloracione
s mezcladas
(por
ejemplo,
verde y
rosa).
Pancromti
Tincin de ca
Extendidos
Romanows de
Romanows sanguneos
ky
ky

Tincin de
Wright

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Tincin de
Giemsa

Tincin de
Jenner

Tincin de
Leishman

Tincin de
Field

Tincin de
May
Grnwald

Tincin de
May
Grnwald-
Giemsa

Tie de azul
Diagnstico de
oscuro restos anemias
Supravital de cidos
Tincin con regenerativas
nucleicos, y los
azul de metacromtic
proteoglicanos
metileno Demostracin de
a cidos en estructuras
varios tonos de metacromticas
violeta.

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Tie los
Diagnstico de
Tincin con depsitos de
hemopoyesis
azul de hemosiderina y
ineficaz,
prusia hierro de color
y hemocromatosis
azul-celeste

Tricrmica
Los
ncleos
aparecen
en marrn o
negro.

Keratina
y msculo
Tincin en rojo
tricrmica
de Masson Los
citoplasmas
aparecen
en tonos de
rosa.

El
colgeno y
el hueso, en
azul o
verde.

Tincin
Smil tricrmica
tricrmica
de Masson
de Lillie

Tincin Smil tricrmica

tricrmica de Masson. Los
AZAN de citoplasmas
Heidenhan aparecen en
tonos de rojo
ms profundos
y el conectivo
en tonos ms
intensos de

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azul.

Tincin
Smil tricrmica
tricrmica
de Masson
de Mallory

Los
ncleos
celulares
aparecen
en colores
de marrn a
negro.

Tincin de Colgen
Van Gieson o (tejido
conectivo
fibroso):
color rosa o
rojo.

Msculo
y
citoplasma:
color
amarillo.
Tincin de
Movat Negro =
ncleos,
fibras
elsticas

Amarillo
= colgeno,
fibras
reticulares

Azul =
sustancia
basal,
mucina

Rojo
brillante =
fibrina

Rojo =

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msculo
Tincin
Tricrmica
tricrmica
Argntica
de Gmri

Tincin de
Warthin-
Starry

Tie de tonos
de marrn y
negro los
Tincin de
depsitos de
Von Kossa
fosfato
inorgnico en
hueso.
Argntica

Tincin de
Golgi

Tincin de
Bielchowsk
y

Tincin de
Jones

7. TINCION DE GRAM

La tincin de Gram o coloracin de Gram es un tipo de tincin diferencial empleado en

bacteriologa para la visualizacin de bacterias, sobre todo en muestras clnicas. Debe su
nombre al bacterilogo dans Christian Gram (1853-1938), que desarroll la tcnica en
1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfologa celular bacteriana, como para
poder realizar una primera aproximacin a la diferenciacin bacteriana, considerndose
bacterias gram positivas a las que se visualizan de color morado, y bacterias gram
negativas a las que se visualizan de color rosa, rojo o grosella.

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Metodologa

Recoger muestras.
Hacer el extendido con un palillo de madera.
Dejar secar a temperatura ambiente o fijarlas utilizando un mechero.
Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado tres veces
aproximadamente).
Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar un minuto.
Enjuagar con agua no directamente sobre la muestra
Agregar lugol y esperar un minuto aproximadamente.
Agregar alcohol acetona y esperar entre 5 y 30 segundos segn la concentracin
del reactivo (parte crtica de la coloracin). (las gram - se decoloran, las gram + no)
Enjuagar con agua.
Tincin de contraste agregando safranina o fucsina bsica y esperar un minuto.
Este tinte dejar de color rosado-rojizo las bacterias gram negativas.
luego lavar levemente con agua

Explicacin

El cristal violeta (colorante catinico) penetra en todas las clulas bacterianas (tanto gram
positivas como gram negativas) a travs de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto
formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales
estn presente para solubilizar el yodo, y actan de mordiente, haciendo que el cristal
violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la clula bacteriana. El I2 entra en las
clulas y forma un complejo insoluble en solucin acuosa con el cristal violeta..

La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloracin, ya que

en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos gram positivos no se
decoloran, mientras que los gram negativos s lo hacen.

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Para poner de manifiesto las clulas gram negativas se utiliza una coloracin de
contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina.
Despus de la coloracin de contraste las clulas gram negativas son rojas, mientras que
las gram positivas permanecen violetas.

La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la tcnica. Sirve para hacer una
tincin de contraste que pone de manifiesto las bacterias gram negativas. Al trmino del
protocolo, las gram positivas se vern azul-violceas y las gram negativas, se vern rosas
(si no se hizo la tincin de contraste) o rojas (si se us, por ejemplo, safranina).

Esta importante coloracin diferencial fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884.
En este mtodo de tincin, la extensin bacteriana se cubre con solucin de uno de los
colorantes de violeta de metilo, que se deja actuar durante un lapso determinado. Se
escurre luego el exceso de violeta de metilo y se aade luego una solucin de yodo, que
se deja durante el mismo tiempo que la anterior; despus se lava el portaobjetos con
alcohol hasta que ste no arrastre ms colorante. Sigue a tal tratamiento una coloracin
de contraste, como safranina, fucsina fenicada diluida, pardo Bismarck, pironin B o hasta
inclusive verde de malaquita.

Pasos para realizar la tincin

Los pasos que se han de seguir para realizar la tincin son los siguientes:

o Se fija la muestra mediante calor.

o Cristal Violeta (tie todas las bacterias, gram positivas y gram negativas)
durante 1 minuto.

o Se fija con Lugol, 1 minuto.

o Se decolora con una mezcla de alcohol y cetona (los gram negativos se

decoloran).

o Safranina (colorante de contraste, que tie a los gram negativos), 1 minuto.

Los tiempos para aplicar cada colorante son orientativos. En la tincin, las gram positivas
se observarn de color azul-violeta, y las gram negativas de color rosa.

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Bacterias resistentes a la tincin gram

Las siguientes bacterias de naturaleza grampositiva se tien como gramnegativas:

Mycobacterias (estn encapsuladas).

Mycoplasmas (no tienen pared).

Formas L (prdida ocasional de la pared).

Protoplastos y esferoplastos (eliminacin total y parcial de la pared, respectivamente).

Utilidades

En el anlisis de muestras clnicas suele ser un estudio fundamental por cumplir

varias funciones:

Identificacin preliminar de la bacteria causal de una infeccin.

Utilidad como control calidad del aislamiento bacteriano.
A partir de la tincin de Gram pueden distinguirse varios morfotipos distintos: Los
cocos son de forma esfrica. Pueden aparecer aislados despus de la divisin
celular (micrococos), aparecer por pares (diplococos), formar cadenas
(estreptococos), o agruparse de manera irregular (estafilococos).

Los bacilos poseen forma alargada. En general suelen agruparse en forma de

cadena (estreptobacilos) o en empalizada.

Fundamentos de diferenciacin de gram positivo y gram negativo

Los fundamentos de la tcnica se basan en las diferencias entre las paredes celulares de
las bacterias gram positivas y gram negativas

La pared celular de las bacterias gram positivas posee una gruesa capa de
peptidoglicano, adems de dos clases de cidos teicoicos: anclado en la cara interna de
la pared celular y unido a la membrana plasmtica, se encuentra el cido lipoteicoico, y
ms en la superficie, el cido teicoico que est anclado solamente en el peptidoglicano
(tambin conocido como murena).

Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las gram negativas es delgada, y se

encuentra unida a una segunda membrana plasmtica exterior (de composicin distinta a
la interna) por medio de lipoprotenas. Tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a
una membrana exterior por lipoprotenas. La membrana exterior est hecha de protena,
fosfolpido y lipopolisacrido.

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Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tien diferencialmente debido a estas direrencias
constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere
su rigidez a la pared celular bacteriana, y las gram positivas lo poseen en mucha mayor
proporcin que las gram negativas.

Factores que alteran la tincin de Gram

Edad de la bacteria.
Errores del operador.
Uso de antibiticos

CONCLUSIONES

La coloracin celular y tejidos son una combinacin de fenmenos fsicos y

qumicos de absorcin: los fenmenos fsicos de absorcin, capilaridad y smosis
participan en cierto grado. La afinidad de colorantes bsicos por los tejidos cidos
y viceversa indican que hay reaccin qumica.
Un colorante es una sustancia que es capaz de teir las fibras vegetales y
animales. Los colorantes se han usado desde los tiempos ms remotos,
emplendose para ello diversas materias procedentes de vegetales (crcuma,
ndigo natural, etc.) y de animales (cochinilla, moluscos, etc.) as como distintos
minerales.
Tincin Simple: utiliza un solo colorante.
Tincin de Gram:
Dividida en gram positivo y gram negativo
Utiliza varios colorantes (cristal violeta 1m, Yodo 1m, lavado con alcohol, Safranina
30 seg)
Tincin cido Resistente:
Una vez teidos, conservan su color resistiendo al lavado con cido mineral
reducido. En esta tincin las bacterias cido resistentes conservan el colorante
primario color rosa o rojo, los dems microorganismos son decolorados por el
cido y toman el color azul.
Tincin de Giensa:
El colorante se aplica a un frotis de sangre y se utiliza cuando se sospeche de
protozoos en la sangre para observar materias ncleos de la clulas.
Tincin de Esporas:
Se usa verde de malaquita en contraste con safranina.
Tincin de Cpsula:
Colorante nigrosuna, aqu se observa microorganismos encapsulados creando
resistencias.
Tincin de Flagelos:
Se usa mordiente el cual aumenta el tamao del microorganismo.
Azul brillante de Coomassie

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Coomassie blue (tambin conocido como azul brillante) es un colorante que tie
en forma no especfica a todas las protenas con un fuerte color azul. Se utiliza
frecuentemente para teir las corridas de protenas en las electroforesis en gel.
Azul de metileno
El azul de metileno se utiliza para teir clulas animales, para hacer ms visibles
sus ncleos. Es tambin utilizado para teir los extendidos de sangre para ser
utilizados en citologa y como colorante vital en el recuento de reticulocitos.
Carmn
El carmn es un colorante de un intenso color rojo que puede ser utilizado como
sal de litio para teir glicgeno, mientras que las sales de alumbre-carmn son
colorantes que se adhieren al ncleo. Las tinciones con carmn requieren del uso
de un mordiente, que usualmente es aluminio o alumbre.
Cristal violeta
El cristal violeta, al ser combinado con un mordiente adecuado, tie las paredes
celulares de color prpura. El cristal violeta es un componente importante en la
coloracin de Gram.
Eosina La eosina se utiliza ms frecuentemente como contracoloracin de la
hematoxilina, impartiendo un color que va del rosado al rojo al material
citoplasmtico, membrana celular, y algunas estructuras extracelulares..
Fucsina cidaLa fucsina cida puede ser utilizada para colorear colgeno, msculo
liso o mitocondrias. Forma parte de la coloracin tricrmica de Mallory donde se
utiliza para colorear ncleo y citoplasma. En la tincin de Van Gieson
(picrofucsina), la fucsina es la responsable de dar el color rojo a las fibras de
colgeno. Tambin es una coloracin tradicional para colorear mitocondrias
(mtodo de Altmann).
Hematoxilina La hematoxilina es un colorante nuclear. Utilizado con un mordiente,
la hematoxilina tie los ncleos celulares de color azul violeta a negro. Con gran
frecuencia se utiliza en combinacin con eosina en la coloracin H&E
(hematoxilina y eosina), una de las ms comunes utilizadas en histologa.
Lugol El yodo se utiliza en qumica analtica como indicador para el almidn.
Cuando se mezcla almidn con una solucin de yodo, se desarrolla un color
intensamente azul, representando la formacin del complejo de inclusin
yodo/almidn.
Naranja de acridina El naranja de acridina es un colorante fluorescente, catinico y
selectivo para cidos nucleicos til para demostraciones sobre el ciclo celular. Es
capaz de atravesar la membrana celular e interacta con el ADN y el ARN por
intercalacin o interacciones electrostticas.
Safranina La safranina (o safranina O) es un colorante nuclear. Colorea los
ncleos celulares de rojo, y se utiliza principalmente como contracoloracin.
Tambin puede ser utilizada para darle una coloracin amarilla al colgeno.

Sudan La coloracin de Sudn se utiliza para destacar sustancias "sudanoflicas",

por lo comn, lpidos. Tambin se utiliza para determinar los niveles de grasa en

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materia fecal para diagnosticar esteatorrea. Hay varios colorantes de la familia

sudan, por ejemplo: Sudan III, Sudan IV, Oil Red O, y Sudan Black B.
Verde de metilo
El verde de metilo se utiliza frecuentemente en microscopia de campo claro, para
teir la cromatina de las clulas y facilitar as su visualizacin.
Verde malaquita
El verde malaquita (conocido tambin como diamond green B o victoria green B)
puede ser utilizado como contracoloracin azul-verdosa en combinacin con la
safranina un ejemplo es la coloracin de Gimenez para bacterias. Tambin se
puede utilizar directamente para colorear endosporas.

BIBLIOGRAFIA

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Baltimore: Williams & Wilkins.

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