UNIVERSIDAD AUTONOMA DE

CAMPECHE
FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICO
BIOLOGICAS.
Lic. En Qumico Farmacutico Bilogo.
BACTERIOLOGA

Prctica 3: Exudado farngeo y

nasofarngeo
Docente: Patricia Margarita Garma
Quen
Alumno: Adolfo Abdulihamil Ku Cohuo
Ramiro Mijangos Peralta
Esmar Arroyo Lopez.
Cobos Noj Fernando
Kantun Canul Eder I.
Cardoso Cahuich William

4to SEMESTRE GRUPO B

30/Marzo/2017

PRCTICA 3. EXUDADO FARNGEO Y

NASOFARNGEO
GENERALIDADES
El estudio del exudado farngeo y nasofarngeo es importante para
el diagnstico de ciertas infecciones consideradas dentro de las
principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el mundo.
Dentro de las principales bacterias patgenas causantes de
infeccin estn los estreptococos, adems de otras enfermedades
no bacterianas como la difteria, la tosferina y la candidiasis. Es
muy importante conocer la flora normal en las vas respiratorias
altas y bajas para un buen reporte, ya que la nasofarngeo es un
sitio expuesto y se debe distinguir a los patgenos de los
comensales con ayuda del cultivo. El exudado farngeo y
nasofarngeo son las muestras clnicas ms empleadas para el
estudio bacteriolgico de una infeccin de vas respiratorias
superiores y es requisito importante que sean tomadas en forma
adecuada para garantizar resultados confiables y correctos.

OBJETIVO:
Realizar los exudados farngeo y nasofarngeo correctamente para
que ste sirva como apoyo al diagnstico clnico en caso de
enfermedades de vas respiratorias.

MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS:

MATERIALES REACTIVOS
 - Placas de Petri con Agar:
Sangre de camero al 5%, Sal
y Manitol, MacConkey,
ThayerMartin, Hemina
bacitracina extracto de
levadura(GHBL). medio de
Biggy.
- Tubos de 13 x 100 con caldo
Soya Tripticasa, pruebas
bioqumicas. TSI, LIA, MIO,
CS y Urea
- Abate lenguas estriles.
- Frasco con cloro.
- Sensidiscos de Optoquina.
- Hisopos estriles.
- Sensidiscos de Novobiocina.
- Colorantes de Gram.
- Sensidiscos de Bacitracina
de 0.04 U.

PROCEDIMIENTO:
Toma de muestra y transporte:
INDICAR AL PACIENTE QUE INCLINAR LA CABEZA
EXUDADO DEL PACIENTE HACIA
DEBE VENIR AL LABORATORIO
FARINGEO: ATRS Y REALIZAR LA
SIN ASEO BUCAL, Y NO DEBE
INGERIR NINGUNA TOMA DE MUESTRA.
ANTIBACTERIANO
 Prueba de Optoquina:
Se utiliza para la diferenciacin de Streptococos
pneumoniae
PARA LA (sensible)
TOMA DE MUESTRAde otros estreptococos -
Hemoliticos.
SE La sensibilidad
USO UN ISOPO esY una medida de fragilidad
RECOLECTAR MUESTRA SIN
de la membrana
TOCAR LAbacteriana.
LENGUA, La
Y optoquina (clorhidrato de
etilhidrocupremia, se utiliza una solucin acuosa de
REALIZANDO CIRCULOS.
1/4000 para impregnar los discos quedando al final en
ellos 5 mg de optoquina.

Prueba de Bacitracina:
se busca en ciertas bacterias son sensibles a la
bacitracina. Se inocula el microorganismo es AS segn
tcnica de Kerby-Bauer, utilizando discos de bacitracina
(0.04 u), es sensible en cualquier zona de inhibicin del
desarrollo. Es til para identificar especies del genero de
streptococos.
Prueba de Oxidasa:
Es utilizada para la deteccin de la enzima citocromo-C-
Oxidasa, presente en los gneros Pseudomonas,
Neisseria, Moraxella, Vibrio, Aeromonas. Los discos
contienen oxalato de dimetil para fenilendiamina el cual
es el sustrato de la enzima oxidasa. Los microorganismos
que producen la enzima oxidasa se evidencia porque en
presencia de oxigeno atmosfrico y citocromo C, se oxida
el sustrato presente en los discos a un compuesto de
color rojo-fucsia.
Prueba de Catalasa:
La catalasa es una enzima que descompone el perxido
de hidrogeno en agua y oxgeno. Se usa con mucha
frecuencia para diferentes miembros de la familia
Micrococaceae de miembros de la familia
Streptococaceae.
Prueba de Coagulasa:
Se usa para distinguir entre diferentes tipos de
Staphylococcus. Un resultado de coagulasa (+), indica
que la muestra contiene Staphylococcus aureus. Esta
protena tambin es producida por versina pestis. Si es
(+) se podr observar aglutinacin macroscpica en el
plasma a los 10 s, Si es (-) no se observar aglutinacin.

RESULTADOS:
Prueba de catalasa:
Se obtuvo un resultado positivo.
Se observ efervescencia al agregar un poco de muestra
a la solucin de agua oxigenada en el portaobjeto.

Prueba de Coagulasa:
Se deposit la muestra microbiana en el tubo con 0.5 ml
de suero y se sell con papel parafilm y se dej encubar
durante 4 hrs.
Al trmino de la incubacin, la prueba se report
negativo, debido a que no formo ninguna aglutinacin y
no obtuvo ningn cambio.

Prueba de oxidasa:
Al trmino de la prueba se report
como positivo.
Se observ un halo de color violeta en el papel sobre la
muestra.

Prueba de
Optoquina y
Bacitracina:
Se colocaron los discos en el agar sangre previamente
estriado y se dej incubar
durante 24 Se observ que era hrs.
resistente a Bacitracina y
Tincin sensible a la Optoquina de Gram:
Se observo en el microscopio, la
tincion en objetivo 100x con
aceite de inmersion.
Como resultado obtuvimos Estreptococos Gram positivo,
con hemolisis alpha de color verde en el agar sangre.

Se cree que la la posible bacteria sea el Estreptococo

pneumoniae
Devido a que en el cultivo se observo halos de color verde
alrededor de la colonia, en la tincion de gram se observo
dos coloraciones diferentes tanto gram positivo como
gran negativo esto se debe aque las colonias estavan
muy sercanas alas otras, tambien se cree debido a que se
observo en el antibiograma resistencia a bacitracina y
sensible a la optoquina, debido a estos resultados se cree
que es estreptococo pneumoniae.
Nota las pruebas bioqumicas no la contemplamos debido
a que al estar muy cercas las bacterias pudieron dar un
falso positivo

CUESTIONARIO:
1.- Explique la importancia clnica del aislamiento e
identificacin de este grupo de microorganismos
causantes de enfermedades de vas respiratorias, en un
laboratorio de bacteriologa clnica.
Su aislamiento es importante , porque este tipo de bacterias (Streptococcus) es
muy comn en infecciones y es una de las principales causas de mortalidad y
morbilidad en las personas y, tambin es importante en laboratorio para saber a
qu antibiticos es muy sensible y a cuales no, esto porque algunas bacterias son
muy resistentes a antibiticos y es ms difcil de tratarlas.

2.- Por qu es necesario realizar un antibiograma?

Porque podemos medir la sensibilidad de una cepa bacteriana responsable de una
infeccin a uno o varios antibiticos para su tratamiento.

3.- Qu microorganismos son los ms frecuentes de

aislar en un exudado nasofarngeo?
Los organismos ms frecuentes de aislar en un exudado farngeo son los
Streptococcus del grupo A. Los estreptococos del grupo A son bacterias que
suelen estar presentes en la garganta y sobre la piel, lo cual son los ms
comunes.
4.- Qu otras enfermedades son causadas por
microorganismos en vas respiratorias, tanto altas como
bajas?
En vas respiratorias altas:

Nasofaringitis.

Adenoiditis.

Faringoamigdalitis

Sinusitis

Laringitis

Otitis media

En vas respiratorias bajas:

Bronquiolitis

Neumonas

TRATAMIENTO Y DISPOSICION DE RESIDUOS

Diagrama ecolgico: Aislamiento e identificacin de
bacterias.
D1. Inactivar con Hipoclorito de sodio al 5% durante 10-15
min y desechar en el retrete.
D2. Esterilizar en autoclave 121C, 15 min y desechar
como residuo orgnico.
D3. Inactivar con Hipoclorito de sodio al 5% durante 10-15
min. Lavar y secar para su reus.
D4. Esterilizar en autoclave 121C, 15 min y desechar
como residuo orgnico.
D5. Colectar los residuos en recipientes, etiquetar y
confinar en almacn temporal hasta su desecho final
como RP.
D6. Esterilizar en autoclave 121C, 15 min y desechar
como residuo orgnico, lavar y secar los tubos para su
reso.

ANEXOS:
Prueba de Optoquina:
Streptococcus pneumoniae y Streptococcus grupo viridans son cocos
Gram positivos que presentan colonias alfa hemolticas cuando crecen
en medios slidos suplementados con 5-10 % de sangre de carnero. Se
pueden diferenciar mediante la realizacin de pruebas bioqumicas como
ser la prueba de sensibilidad a la optoquina y la prueba de solubilidad en
bilis. La optoquina inhibe el desarrollo de Streptococcus pneumoniae
mientras que otros estreptococos no son inhibidos o presentan una zona
pequea de inhibicin alrededor del disco. La correlacin entre la
sensibilidad a la optoquina y la prueba de solubilidad en bilis ha sido
demostrada por varios autores.

Prueba de Bacitracina:
La bacitracina es un antibitico que inhibe la sntesis de pared celular
bacteriana, y a la concentracin que se encuentra en los discos (0.04 U)
inhibe el crecimiento de los estreptococos beta hemolticos del grupo A
de Lancefield pero no inhibe el desarrollo de otros estreptococos beta
hemolticos.
Los micrococcus y los estomatococcus tambin son inhibidos, mientras
que los estafilococos coagulasa negativo son resistentes.
Un resultado sensible, es presuntivo de la presencia de estreptococo
grupo A, y se puede incrementar adems el valor diagnstico mediante
la realizacin de la prueba del PYR (PYR-A-Enterococos.
Prueba de Oxidasa:
Esta prueba est basada en la identificacin de una enzima bacteriana llamada
citocromo C oxidasa y para reducir el nombre se le dice oxidasa.
Todas las bacterias aerobias obtienen su energa en forma de ATP a partir del
proceso de respiracin tambin llamado cadena respiratoria, este se lleva a cabo
en la membrana celular bacteriana, en las siguientes lneas se dar una breve
explicacin de la cadena respiratoria solo con la finalidad de entender de donde
proviene y que realiza la enzima citocromo C oxidasa, entindase que todo este
proceso tiene la finalidad de producir ATP.
En la respiracin hay una secuencia de enzimas y transportadores que pasan los
electrones desde sus sustratos hasta llegar al citocromo C, la enzima
llamada citocromoC oxidasa le quita electrones al citocromo C, estos electrones
son transferidos por la enzima al oxgeno siendo este el ltimo aceptor de
electrones en la cadena respiratoria, finalmente debido a que el oxgeno tiene un
exceso de electrones puede atraer tomos de Hidrgeno formando dos posibles
productos: Agua o perxido de hidrgeno.

Prueba de Catalasa:
El perxido de hidrgeno es el producto final del metabolismo oxidativo de
carbohidratos, a esta va metablica recibe el nombre de metabolismo aerobio-
oxidativo.
La acumulacin del perxido es muy toxico por lo que la mayora de las bacterias
aerobias y anaerobias facultativas exceptuando a Streptococcus sp. producen
una enzima llamada catalasa que degrada el perxido de hidrgeno obteniendo
agua y oxigeno gas.

Prueba de Coagulasa:
Una endocoagulasa o coagulasa ligada o "clumping factor" que est unida a la
pared celular. Esta acta directamente sobre el fibringeno provocando la
formacin de cogulos o grumos cuando se mezcla una suspensin bacteriana
con plasma citratado (test en lmina).

Tincin de Gram:
Los lavados con agua tienen el objetivo de arrastrar mecnicamente el exceso de
colorante y quitar el alcohol-acetona.
El colorante cristal violeta es de naturaleza bsica y por lo tanto tiene afinidad por
sustancias cargadas negativamente como la pared celular de cualquier bacteria. Por lo
que bacterias Gram positivas y Gram negativas son teidas de color violeta.
Un mordiente es una sustancia que aumenta la fijacin de algn colorante sobre una
superficie determinada, en este caso el cristal violeta aumenta su fijacin a la pared
celular bacteriana usando de mordiente al lugol, en la pared bacteriana el lugol forma un
complejo con el cristal violeta insoluble en agua lo que evita que se disuelva y se pierda el
colorante durante el enjuague.
las paredes de los Gram positivos son ricos en cidos teicoicos no saturados estos
muestran gran afinidad por los agentes oxidantes, todos los mordientes por ejemplo el
lugol son agentes oxidantes y su efecto en general consiste en dar un caracter ms
acidez de los cidos teicoicos lo que aumenta la afinidad de estos por el colorante bsico
cristal violeta. La mezcla de alcohol-acetona es un disolvente orgnico que decolora la
pared bacteriana disolviendo el complejo cristal violeta-lugol, esta decoloracin no afecta
a las bacterias Gram positivas, hay varias explicaciones al respecto, les menciono las dos
ms aceptadas.
-Una teora dice:
El alcohol-acetona, deshidrata la pared rica en peptidoglicano de los microorganismos
Gram positivos lo cual cierra los poros de la pared, propiciando una barrera que no
permite la salida del complejo cristal violeta-lugol.
En la pared de las bacterias gramnegativas hay poco pptido glicano y una gran
cantidad de lpidos estos ltimos son disueltos por el alcohol-acetona, lo que permite el
escape del complejo cristal violeta-lugol. Otra teora dice: Las bacterias Gram positivas
tienen una capa muy gruesa de peptidoglicano con gran cantidad de enlaces
entrecruzados de cidos teicoicos los cuales son poco solubles en alcohol-acetona
formando una especie de barrera en la pared bacteriana que no permite la slida del
complejo cristal violeta-lugol por ende se retiene el cristal violeta-lugol en la pared en el
proceso de decoloracin.
La safranina es un colorante catinico que tie las paredes bacterianas ya que estas
tienen compuestos cargados negativamente, por consiguiente las bacterias Gram
negativas se tien de color rosa, sin embargo las bacterias Gram positivas no se tien
debido a que su pared celular est saturada del colorante cristal violeta y esto no permite
la entrada de la safranina.

BIBLIOGRAFA:
http://microbitosblog.com/2011/09/27/pruebas-
bioquimicas-primarias/
http://www.britanialab.com.ar/espanol/BACITRACIN
A.htm
http://www.britanialab.com/productos/194_hoja_tec
nica_es.pdf