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3 Mecanismos de reparacin del ADN

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Como acabamos de ver, la estabilidad de la copia del material gentico en un

entorno celular considerado como normal est muy comprometida, por lo que si
no hay nada que se oponga a ello, el nmero de mutaciones por clula y
generacin sera de tal calibre que la vida resultara difcil o imposible en tales
circunstancias. Sin embargo, como ya se adelant, la clula ha adquirido a lo
largo de la evolucin toda una serie de mecanismos que tienden a reducir el
dao que se produce en el ADN (Wood, 1996). En ocasiones estos actan
haciendo desaparecer el agente inductor del dao, como es el caso de las
enzimas antioxidantes: superxido dismutasa (SOD), catalasa, etc.,
neutralizando de esta forma especies reactivas del oxgeno, que de otra forma
podran atacar el ADN, mientras que otros mecanismos (tal vez los ms
variados) trataran de reparar el dao producido en esta molcula. Las
caractersticas generales de estos sistemas de reparacin aparecen
comentadas en la Tabla 2.

Ubicuidad: en todas las clulas.

Redundancia: varios sistemas por clula.

Complejidad: numerosos elementos intercambiables en la mayora

de los casos.

Eficiencia: nunca al 100% (unos ms que otros).

Variabilidad funcional: un mismo sistema podra actuar de manera

diferente en cada tipo de clula.

Homologa interespecfica: por lo general bien conservados

evolutivamente.

Tabla 2. Caractersticas generales de los sistemas de reparacin y supervisin

del ADN.

La importancia que tiene el mantener una copia sana del material gentico
para la clula, ha hecho que desde una etapa muy temprana, los seres vivos
desarrollasen toda una serie de estrategias para reparar los daos que se
producen de manera constante en el ADN. Los primeros estudios que analizaron
estos mecanismos se llevaron a cabo en procariotas, ms tarde el campo se
ampli a eucariotas. En ambos casos se observ que dichos mecanismos son
redundantes, es decir que la clula no confa la supervisin y reparacin de su
genoma a uno slo de ellos, sino que dispone de varios que en muchos casos
interaccionan. Se calcula que una clula de mamfero dispone de al menos 130
genes involucrados en tales funciones, y no resultara extrao que, a medida
que se conozca mejor el papel de los distintos genes humanos, aparezcan
nuevos loci relacionados con la reparacin del ADN. Estos datos, por s solos,
dan una idea de la importancia que para una clula tiene el mantener su
genoma sin defectos. Pero el aspecto ms representativo de la importancia de
los mecanismos de reparacin del ADN tal vez sea el gran nmero de patologas
cuya etiologa se asocia a fallos en elementos moleculares en dichos
mecanismos.

En la mayora de los casos, en estos mecanismos intervienen numerosos

componentes, por lo que su modo de accin no deja de ser complejo. En
nuestro caso presentaremos los ms relevantes (Tabla 3), y dentro de cada uno
se presenta de forma simplificada su mecanismo de accin.

REPARACIN DIRECTA

Por estos mecanismos se reparan: metilacin de guanina, y en algunos vertebrados dmeros d

No intervienen nucleasas ni ADN-polimerasas.

REPARACIN INDIRECTA

Hay intervencin de nucleasas y ADN-polimerasas. Se necesita hebra molde perteneciente a

cromosoma o al homlogo.

Escisin de base. Reparan casos de alteraciones puntuales en bases nitrogenadas. Se origina

y luego se retira el nucletido AP y se resintetiza la hebra.

Escisin de nucletido. Reparan alteraciones que distorsionan la conformacin del dplex y que
obstaculizaran la transcripcin y replicacin. Generalmente inducidos por bases alteradas o ma
apareadas. Una nucleasa escinde una porcin de la hebra prxima al lugar del dao. Inmediata
resintetiza una nueva siguiendo el molde complementario.
Recombinacin de regiones homlogas/ Unin de fragmentos terminales de hebras rotas. Repa
en las que se ven afectadas ambas hebras, o en las que no existe una hebra complementaria q
actuar de molde fiable. Mecanismo ms complejo que los anteriores.

Tabla 3. Diferentes sistemas de reparacin del ADN en eucariotas segn su

mecanismo de accin.

La etapa ms importante del proceso tal vez sea aquella en la que se detecta el
punto o puntos del genoma donde se localiza la alteracin. Se cree que una de
las condiciones para que esto se pueda llevar a cabo es que la molcula de ADN
se encuentre descompactada, lo que permitira al sistema de deteccin
rastrear dicha regin en busca de errores, que se localizaran por la distorsin
estructural que un apareamiento de bases incorrecto produce en el dplex. En
este sentido hay evidencias de que tanto la replicacin como la transcripcin del
ADN son etapas donde se lleva a cabo una intensa actividad por parte de los
sistemas de reparacin.

Los sistemas de reparacin indirecta intervienen sobre el ADN, en replicacin

(fase S), transcripcin o sobre hebras de ADN seccionadas. Como ya se
coment anteriormente, la propia polimerasa del ADN, o algunos de los
componentes del mecanismo transcripcional, llevan a cabo la supervisin de la
copia recin sintetizada. En otros casos hay complejos moleculares que
cooperan con la polimerasa del ADN resolviendo casos en los que esta ha de
replicar o transcribir una determinada zona del genoma en la que se detecta una
alteracin. A pesar de la gran cantidad de mecanismos y molculas que
intervienen en estos procesos hay un denominador comn en todos ellos, y es
que la mayora estn conservados evolutivamente.

Otros de los mecanismos que actuaran para preservar la integridad del material
gentico seran aquellos que, en lugar de intervenir reparando la copia del ADN,
lo haran supervisando la integridad de los desoxirribonucletidos que sern
utilizados para la sntesis del ADN, ya que algunos derivados de estos pueden
ser incorporados por la polimerasa en lugar del d-ribonucletido normal
pudiendo dar lugar a una mutacin , tal es el caso del 8-hidroxi-dGTP.

8.3.1 Mecanismos de reparacin directa

8.3.1.1 Recuperacin de guaninas metiladas

Una de las alteraciones que se conocen en el ADN es el caso de la metilacin

de restos de guanina para formar O6-metilguanina; en este caso la clula
dispone de una enzima suicida que localiza el lugar de la alteracin y
seguidamente transfiere el grupo metilo desde la guanina a un resto de cistena
en su centro activo, la enzima queda ahora inactivada, ya que este proceso no
es reversible (Figura 4).

Figura 4. Recuperacin de guaninas metiladas por accin de la guanina metil-

transferasa.
8.3.1.2 Reparacin de dmeros de pirimidina

Un sistema similar acta en procariotas y en muchos eucariotas, en l interviene

una enzima que detecta dmeros de pirimidina que se producen en restos
adyacentes C-C, C-T (siendo el ms frecuente T-T). En procariotas la enzima
que repara esta alteracin es la fotoliasa. En primer lugar la enzima localiza el
punto donde se ubica el dmero y seguidamente se posiciona sobre l y repara
la alteracin (Figura 5).
 Figura 5. Reparacin de dmeros de pirimidina.

Esta enzima adems tiene una interesante peculiaridad, y es que se activa por
irradiacin con longitudes de onda visibles prximas al U.V. Aunque en algunos
vertebrados se han detectado enzimas que actan de manera similar a la
fotoliasa no se ha descrito todava para el caso del ser humano, donde este tipo
de alteraciones se repara por otros mecanismos. En este caso, los dmeros de
pirimidina (que se supone un tipo de lesin frecuente que producira el
envejecimiento de la piel) se pueden reparar por otro mecanismo (escisin de
nucletido) que se describir ms adelante.

8.3.2 Mecanismos de reparacin indirecta

En general estos mecanismos actan eliminando la base alterada utilizando

diferentes estrategias:

8.3.2.1 Reparacin por escisin de base

En este caso la base alterada es retirada del ADN por un tipo de enzimas
denominados glicosidasas. Hay varias y cada una se ocupa de un tipo de
modificacin (Hipoxantina-ADN glicosidasa, uracil-ADN -glicosidasa, etc.).
Cuando estas retiran la base daada se genera un sitio AP (tambin se pueden
generar sitios AP por otras causas), que resultara muy mutagnico si se dejase
sin reparar, ya que bloqueara la replicacin o transcripcin del ADN en ese
punto, por lo que seguidamente interviene una endonucleasa que retira el resto
de ribosa fosfato del sitio AP, dejando un hueco de un nucletido que es
rellenado inmediatamente por la accin de una polimerasa del ADN, por ltimo la
hebra es sellada por la ligasa (Figura 6).
Figura 6. Mecanismo de reparacin por escisin de base.

8.3.2.2 Reparacin por escisin de nucletido o hebra

Este mecanismo de reparacin es muy similar al anterior, y de hecho comparte

con aqul algunos de sus elementos moleculares. En una primera etapa, el
sistema reconoce el punto de la lesin. Seguidamente acta una endonucleasa
que corta un pequeo fragmento de la hebra que presenta la lesin a ambos
lados de la misma dejando entre el nucletido afectado y ambos puntos de corte
varios nucletidos. Luego se retira esta porcin de la hebra al tiempo que una
polimerasa de ADN comienza la sntesis del fragmento que sustituir al
eliminado, tomando como molde la hebra sana (Figura 7).
Figura 7. Mecanismo de reparacin por escisin de nucletido.

Como en el caso anterior la ligasa sellar la hebra nueva, dejando de esta forma
reparada la alteracin (en la descripcin de estos mecanismos, y para su
simplificacin, se omiten otras protenas que intervienen en el proceso, y que
son tambin importantes para que este se lleve a cabo). Son muchas las
alteraciones que se reparan por este mecanismo, entre ellas los dmeros de
pirimidina, bases alteradas, etc. En bacterias este sistema est muy bien
estudiado y se parece mucho al que acta en levaduras (eucariotas
unicelulares), aunque en estas ltimas consta de ms elementos y es por ello
ms complejo. En mamferos el sistema es similar al de levaduras lo que
demuestra que est evolutivamente bien conservado.
8.3.3 Mecanismos de reparacin por recombinacin

Este mecanismo es complejo, y a diferencia de los hasta ahora estudiados,

utiliza una estrategia de recombinacin similar a la que opera en el intercambio
de cromtidas que se da en la meiosis, uniendo regiones homlogas de los
cromosomas paternos y maternos. El tipo de alteraciones que se reparan
mediante este mecanismo suelen ser aquellas que, por diferentes razones, no
permiten disponer de hebra molde (rotura de hebras, apareamientos anmalos
entre bases, etc.). Este ltimo tipo de anomala ha de ser reparada antes de que
la zona sea replicada por la polimerasa, ya que de no ser as se podra bloquear
el proceso replicativo en dicho punto o inducir una mutacin permanente en la
descendencia celular. Si durante la fase S del ciclo celular, la polimerasa de ADN
se encuentra una alteracin que no ha sido reparada anteriormente, puede
ocurrir que introduzca un nucletido al azar con el consiguiente riesgo de
mutacin, o contine su labor dejando sin replicar la zona alterada hasta su
reparacin. En este ltimo caso la solucin al problema consiste en retirar la
porcin de una de las hebras no replicadas y seguidamente sintetizar una hebra
nueva de ADN por un mecanismo que toma como molde la hebra
complementaria del cromosoma homlogo (Figura 8). Se han descrito varias
polimerasas del ADN que participan en la resolucin de problemas de este tipo.
En general estas polimerasas no poseen la alta fidelidad de copia de la
polimerasa normal (la que replica el genoma en la fase S del ciclo celular), por lo
que cabe esperar una tasa de error incrementada con respecto al que presenta
esta ltima, y parece que cada una de ellas se especializa en solucionar un
tipo especfico de alteracin.
Figura 8. Mecanismo de reparacin de cromosomas fragmentados. Reparacin
mediante recombinacin.

En general la fase S del ciclo celular resulta crtica para la vida de la clula, ya
que en ella el material gentico a replicar ha de estar en las mejores condiciones
posibles antes de ser transferida a la descendencia, de tal forma que si dicha
copia est muy daada podra bloquear el proceso replicativo, hasta el punto de
que la clula opte por el suicidio (apoptosis) para evitar que pasen genes
defectuosos a la descendencia. El mismo sistema que regula la entrada en
apoptosis alerta a los mecanismos de reparacin de errores en la copia del ADN
celular a transcribir. En caso de que este sistema falle podran acumularse un
nmero excesivo de mutaciones en la clula. En este sistema de control
participan numerosas protenas, aunque una de ellas, la denominada p53 juega
un papel decisivo en el mismo. Una prueba evidente de la importancia de esta
protena en el control del ciclo celular la tenemos en el hecho de que una de las
mutaciones ms frecuentes en tumores afecta a dicha protena, este aspecto se
tratar ms en detalle en el siguiente apartado.

El sistema de reparacin por recombinacin homloga se cree que es utilizado

con frecuencia por la clula para llevar a cabo la reparacin de cromosomas
rotos. Este tipo de lesin, como ya se ha comentado, puede producirse por
ataque de radicales hidroxilo sobre el dplex de ADN. De no repararse, la
presencia de tales alteraciones provocar graves daos a la clula, y su
descendencia ser con toda probabilidad inviable debido a la prdida de una
cantidad importante de material gentico. Por ello la clula es particularmente
sensible a este tipo de lesin, y para remediarlo pone en marcha complejos
mecanismos de reparacin en los que intervienen un elevado nmero de
protenas.

Adems de esta estrategia de reparacin que se basa en la recombinacin

homloga, se sabe que la clula dispone de otra no menos sofisticada (aunque
menos estudiada) para reparar el mismo tipo de lesin. En este mecanismo la
reparacin de la rotura se produce por empalme entre los extremos de los
fragmentos del dplex truncado (Barnes, 2001