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UNIVERSIDAD
AUTNOMA DE
YUCATAN
MANUAL DE PRACTICAS
DE LABORATORIO DE QUIMICA
FORENSE Y LEGAL
PRCTICA 1
TCNICAS COLORIMTRICAS PARA LA DETERMINACIN DE DROGAS
DE ABUSO
INTRODUCCIN
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OBJETIVO
Realizar ensayos colorimtricos y de precipitacin sobre diversas
sustancias para la identificacin presuntiva de sustancias activas de acuerdo
a su composicin qumica y poder clasificarlas infiriendo el efecto que podra
causar sobre el sistema nervioso central.
MATERIALES
Tubos de ensaye
Pipetas de transferencia
Aplicadores de madera
Esptula
Frascos gotero
Matraces volumtricos
Vidrios de reloj
Probetas
Vasos de precipitados
Frascos goteros y frascos mbar
Placas porta objetos
Guantes desechables
REACTIVOS
Subnitrato de bismuto
cido ntrico
Yoduro de potasio
Vainillina
Acetaldehdo
Etanol
Cloroformo
Nitrato de cobalto
Nitrito de sodio
cido sulfrico
Vanadato de amonio
Formaldehdo
cido clorhdrico
Nitrato de cobalto
Isopropilamina
Carbonato de sodio
Nitroprusiato de sodio
Nitrato de potasio
Sulfato de cobre
Piridina
MUESTRAS
Caf
Tabaco
Medicamentos en presentacin de comprimidos
Polvo para hornear
Azcar glass
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PROCEDIMIENTO
Preparacin de reactivos
Dragendorff
Disolver 8 g de subnitrato de bismuto en 20 mL de HNO 3 10 N (de
densidad 1.18; se prepara mezclando 20 mL de cido ntrico concentrado
con 50 mL de agua destilada). Vaciar la solucin sobre otra que contiene
22.7 g de KI en la menor cantidad posible de agua (20- 25 mL). Dejar en
reposo para decantar el KNO3, separar y diluir a 100 mL.
Duquenois
Disolver 2 g de vainillina y 0.3 mL de acetaldehdo en 100 mL de etanol.
Guardar en frasco oscuro.
Liebermann
Disolver 1 g de nitrito de sodio en 10 mL de cido sulfrico (realizar en
fro y bajo campana, libera humos marrones).
Marquis
Mezclar 1 mL de solucin de formaldehdo con 9 mL de cido sulfrico
concentrado. Preparar antes de ser empleado.
Parry Koppanyi
Solucin A. Preparar una solicin de nitrato cobaltoso al 1% en metanol.
Solucin B. Preparar una solucin de isopropilamina al 5% en metanol.
Simon
Solucin A. Preparar una solucin acuosa de carbonato sdico al 20%.
Solucin B. Preparar una solucin etanlica de acetaldehdo al 50%.
Solucin C. Preparar una solucin acuosa de nitroprusiato de sodio al
1%.
Tiocianato de Cobalto
Disolver 6 g de nitrato de cobalto y 18 g de tiocianato de potasio en 100
mL de agua.
Zwikker
Mezclar 40 mL de una solucin de sulfato de cobre al 10% con 1 mL de
piridina y aforar a 100 mL con agua.
Anlisis de muestras
Dragendorff
Para aminas y alcaloides.
Agregar 0.5 mL de reactivo a la muestra y calentar en bao mara
durante 3 minutos.
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Duquenois
Para Cannabis Sativa.
Realizar una extraccin con 1 mL de la solucin etanlica de vainillina y
agregar 1 mL de cido clorhdrico concentrado. Despus de la aparicin de
un color azul/violeta, realizar una extraccin con cloroformo.
Liebermann
Para anfetaminas.
Colocar una pequea cantidad de la muestra (1 a 2 mg de polvo o una o
dos gotas si se trata de un lquido) en una placa y agregar el reactivo de
Liebermann
Marquis
Para anfetaminas y opiceos
Colocar una pequea cantidad de la muestra (1 a 2 mg de polvo o una o
dos gotas si se trata de un lquido) en una placa y agregar el reactivo de
Marquis.
Parry-Koppanyi
Para barbituratos.
Agregar la solucin de nitrato cobaltoso a unas gotas del extracto en
placa. Agregar una gota de solucin de isopropilamina.
Simon
Para anfetaminas.
Colocar una pequea cantidad de la muestra (1 a 2 mg de polvo o una o
dos gotas si se trata de un lquido) sobre una placa y agregar una gota de la
solucin A (nitroprusitato y acetaldehdo). Agregar a continuacin una gota
de la solucin B (solucin de carbonato de sodio).
Tiocianato de cobalto
Para cocana.
Colocar una pequea cantidad de la muestra (1 a 2 mg de polvo o una o
dos gotas si se trata de un lquido) en una placa y agregar el reactivo de
Tiocianato de cobalto.
Zwikker.
Para barbituratos
Agregar 0.5 mL de la solucin de sulfato de cobre a una fraccin del
residuo de la muestra o a 0.5 mL del extracto en un tubo de ensayo.
Incorporar igual volumen de solucin clorofrmica de piridina.
INTERPRETACION DE RESULTADOS
Dragendorff. Origina precipitados de color naranjarojo con los
alcaloides.
Duquenois. La aparicin de una coloracin azul/violeta en la fase
orgnica indica la presencia de Cannabis sativa.
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Liebermann. La aparicin de un colorrojo-naranja indica presencia
de anfetaminas.
Marquis. La aparicin de un color rojo oscuro a morado indica la
presencia de herona; la aparicin de un color amarillo-rosado indica la
presencia de metadona; la aparicin de un color marrn oscuro indica la
presencia de anfertaminas; la presencia de una coloracin prpura a negro
o azul indican la presencia de MDMA.
Parry-Koppanyi. Frente a este reactivo, la aparicin de una
coloracin violeta indica la presencia de barbituratos.
Simon. Produce un color azul la metanfetamina y otras aminas
secundarias. La anfetamina y otras aminas primarias producen un color
rosado que cambia lentamente a rojo cereza. Este ensayo puede utilizarse
para diferenciar la metanfetamina de la anfetamina.
Tiocianato de cobalto. La presencia de cocana produce una
coloracin azul.
Zwikker. Frente a este reactivo, la aparicin de una coloracin rojo
violeta indica la presencia de barbituratos.
REFERENCIAS
Flanagan, R.J.; Braithwaite, R.A.; S.S. Brown, S.S.; B. Widdop, B.; de
Wolff, F.A. Basic Analytical Toxicology. 1995. World Health Organization
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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE YUCATAN
FACULTAD DE QUMICA
LABORATORIO DE QUMICA FORENSE Y LEGAL
PRCTICA 2
IDENTIFICACION DE RESIDUOS DE DISPARO 1: DERIVADOS
NITRADOS
INTRODUCCIN
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OBJETIVO
Identificar residuos nitrados depositados alrededor del orificio de
entrada del proyectil, las heridas, objetos y superficies provocadas por
armas de fuego. Esta prueba se basa en la reaccin sobre los nitritos y
nitratos resultantes de la deflagracin de la plvora.
MATERIALES
Telas limpias estriles y libres de apresto
Agua destilada
Pipetas de transferencia
Tubo de ensayo de vidrio
Aplicadores de madera
Guantes
Placas portaobjetos
Tijeras
Gradilla
REACTIVOS
A. DETERMINACION DE NITRATOS
Difenilamina
cido sulfrico
B. DETERMINACION DE NITRITOS
Agua destilada
Solucin de nitrito de potasio 0.01 M.
Acido sulfanlico
Alfa-naftilamina
Prepararacin
Solucin A (cido sulfanlico en cido actico)
Disolver 0,5 g de cido sulfanlico en 30 mL de cido actico glacial y
120 mL de agua destilada. Filtrar si es necesario (guardar en
refrigeracin).
Solucin B (-naftilamina en cido actico)
Disolver 0,1 g de N-1-naftiletilendiamina en 120 mL de agua destilada
calentando, enfriar, agregar 30 mL de cido actico glacial y filtrar
(guardar en refrigeracin).
TOMA DE MUESTRA
En caso de que la sospecha de residuos nitrados se encuentre en una
prenda, a esta se le cortaran dos fragmentos cercanos al orificio problema,
y otros dos en un rea lejana de este como un blanco de muestra.
Si se trata de superficies como orificios en paredes, puertas, vehculos etc.,
la muestra se levanta humedeciendo un fragmento de tela de algodn libre
de almidn o un hisopo con agua destilada, el cual se frotar alrededor y
dentro del orificio sospechoso. De igual manera otra tela o hisopo sobre la
misma superficie, pero a cierta distancia de la zona sospechosa.
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CONTROLES
Control negativo: se humedecer una tela con agua destilada, de
preferencia la misma usada en la toma de la muestra
Control positivo: se impregnar una tela con una solucin de nitrito de
potasio 0.01 M.
PROCEDIMIENTO
A. DETERMINACIN DE NITRATOS
1. Colocar y marcar las placas porta objetos de la siguiente manera:
a. Control negativo
b. Control positivo
c. Muestra
d. Blanco de muestra
2. Colocar una tela de control negativo en la placa as marcada.
3. Colocar una tela de control positivo en la placa as marcada
4. Colocar la muestra en la placa as marcada
5. Colocar el blanco de muestra en la placa as marcada
6. Preparar la solucin de Lungen: En un tubo de ensayo de vidrio con
capacidad de 3 mL se le depositar en el fondo una pizca de
difenilamina y agregar 1 ml de cido sulfrico; se mezcla con la
pipeta de trasferencia para disolver los cristales.
7. Agregar una gota de la solucin anterior a cada una de las placas
marcadas como control negativo, positivo, muestra y blanco de
muestra.
8. Observar el cambio de color en cada placa.
B. DETERMINACIN DE NITRITOS
1. Colocar y marcar las placas porta objetos de la siguiente manera:
a. Control negativo
b. Control positivo
c. Muestra
d. Blanco de muestra (opcional; en caso de ser necesario)
2. Colocar una tela de control negativo en la placa as marcada.
3. Colocar una tela de control positivo en la placa as marcada
4. Colocar la muestra en la placa as marcada
5. Colocar el blanco de muestra en la placa as marcada (opcional; en
caso de ser necesario)
6. . Agregar una gota de la solucin A en cada una de las placas
marcadas como control negativo, positivo, muestra y blanco de
muestra.
7. Agregar una gota de la solucin B en cada una de las placas
marcadas como control negativo, positivo, muestra y blanco de
muestra.
8. Observar el cambio de color en cada placa.
A. IDENTIFICACION DE NITRATOS
POSITIVA: La formacin inmediata de un color azul intenso sobre la tela
indica una reaccin positiva a nitratos.
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NEGATIVA: Si la tela se oscurece, pero no aparece dicha coloracin, se
considera negativa lo que indica que no se encuentran nitratos en las telas.
B. IDENTIFICACION DE NITRITOS
POSITIVA: La formacin de un color rojo sobre la tela indica una reaccin
positiva a la presencia de nitritos
NEGATIVA. S la tela queda de color rosa o fucsia la prueba es negativa a la
presencia de nitritos.
REFERENCIAS
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FACULTAD DE QUMICA
LABORATORIO DE QUMICA FORENSE Y LEGAL
PRCTICA 3
IDENTIFICACION DE RESIDUOS DE DISPARO 2: RODIZONATO DE
SODIO
INTRODUCCIN
OBJETIVO
Identificar si una persona dispar un arma de fuego o si estuvo en
contacto con ella, mediante procedimientos qumicos previamente
analizados en el laboratorio de qumica legal.
MATERIALES
Placas de vidrio
Pipetas de transferencia
Aplicadores de madera
Matraz aforado 100 mL
Microscopio estereoscpico
Tela de algodn libre de aprsto de aproximadamente 2 x 2 cm
Balanza analtica
Frascos de gotero de vidrio mbar
Tubos de ensaye de 13 x 100
Tijeras
Guantes
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REACTIVOS
Solucin acuosa de acido ntrico al 5%
Solucin buffer pH 2.79
a. Bitartrato de sodio 1.9 g
b. cido tartrico 1.5 g
Agua destilada 100 mL
Solucin acuosa de Rodizonato de sodio al 0.2 % (20 miligramos de
acido rodizonico en 10 mL de agua destilada) preparar diariamente y
cuidar de la luz.
PROCEDIMIENTO
1. Humedecer las telas en solucin de HNO3 al 5%.Tomar la muestra
frotando la tela en el rea de inters (2/5 partes de la mano, parte
dorsal y palmar, izquierda y derecha, cada una con tela diferente).
Sujetar firmemente la mano en estudio, apoyndose en la zona de la
mano a la altura del dedo anular y meique.
2. Si la tela se va a embalar, doblarla con la parte de la muestra hacia
adentro.
3. Se pasan las telas en orden ascendente (de la punta de los dedos
hacia la mueca) para arrastrar todo lo que se pueda haber
depositado en la mano, abriendo los poros ya que ah se pudieran
alojar los residuos de disparo, se deslizaran en los cuatro bordes de
la tela.
4. Ya que los cuatros trapos han sido ocupados correctamente, se
procede a aplicar la solucin buffer. Ya que esta solucin asegura que
la reaccin se lleve a cabo en un pH controlado, colocando dos gotas
de la solucin buffer en cada trapo, que han sido puestas en pedazos
de vidrio etiquetadas correctamente.
5. Ya que se encuentran puestas en las placas de vidrio debidamente
marcados se le agregan gotas de la solucin de rodizonato de sodio a
cada tela, cubrindola, no sumergindola y se les lleva al microscopio
para saber si la prueba sali positiva o negativa a la reaccin con el
rodizonato de sodio.
6. Se lleva al microscopio para su observacin.
REFERENCIAS
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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE YUCATAN
FACULTAD DE QUMICA
LABORATORIO DE QUMICA FORENSE Y LEGAL
PRCTICA 4
IDENTIFICACION DE RESIDUOS DE DISPARO 3: PRUEBA DE
WALKER
INTRODUCCIN
OBJETIVO
Identificar nitritos en ropas, desprendidas a raz de la deflagracin de
plvora y localizadas alrededor del orificio de entrada del proyectil de arma
de fuego, a fin de terminar si el disparo fue prximo o a una distancia tal
que no permita la maculacin de la plvora.
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MATERIALES
Papel fotogrfico azo o kodabromide, grados 2 o 3.
Papel filtro de preferencia tamao carta
Gasa del tamao de una hoja oficio
Papel cebolla tamao oficio
Guantes
Lpiz de grafito
Cinta adhesiva masquin u otra
Plancha
Campana de extraccin
Cubrebocas
Algodn
Aspersores
Tijeras
REACTIVOS
cido sulfanlico 0.5% disuelto en agua destilada
-naftilamina al 0.5% disuelto en metanol
cido actico 25% disuelto en agua destilada
Agua destilada
PROCEDIMIENTO
A. SENSIBILIZACION DEL PAPEL FOTOGRFICO
El papel fotogrfico se desensibiliza en una solucin de hiposulfito,
durante tres minutos; despus se lava durante tres minutos con agua
destilada, y finalmente se deja secar.
PROCEDIMIENTO
1. Sobre una mesa de trabajo de preferencia de acero inoxidable, se
coloca el papel fotogrfico o papel filtro (fijarlo con cinta adhesiva) con
la superficie gelatinosa hacia arriba.
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2. Ubicar el orificio de la prenda, y el rea problema se pone sobre la
superficie gelatinosa del papel fotogrfico (fijar la tela).
3. Con un lpiz de grafito se marca en el papel fotogrfico el orificio de la
prenda.
4. Dos lienzos de gasa se humedecen con la solucin de cido actico, y
se colocan sobre la prenda.
5. Se coloca una o dos hoja de papel cebolla sobre el lienzo humedecido.
6. Con la plancha previamente caliente (sin quemar) se presiona el papel
cebolla por aproximadamente 5 a 10 minutos. Se repite esta presin en
toda la prenda sin arrastrar la plancha, se levanta y se coloca en otra
zona, sin repetir alguna de preferencia.
7. Una vez cubierta toda el rea de la prenda, se procede a retirar con
cuidado todos y cada uno de los objetos que se fueron colocados sobre
el papel fotogrfico.
REFERENCIAS
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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE YUCATAN
FACULTAD DE QUMICA
LABORATORIO DE QUMICA FORENSE Y LEGAL
PRCTICA 5
MANCHAS DE SANGRE SEGN SU MECANISMO DE PRODUCCION
INTRODUCCIN
OBJETIVO
Conocer la forma y caractersticas fsicas de las manchas de sangre segn
su mecanismo de produccin.
MATERIALES
Sangre animal o pintura de consistencia viscosa de color rojo
Papel estraza
Papel opalina
Cinta adhesiva
Cartulina
Guantes
Pipetas de transferencia
Regla o flexmetro
Transbordador
Lpiz o pluma
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Tubos de ensayo
PROCEDIMIENTO
1. En un pliego de cartulina o dos, dejar caer gotas de sangre o pintura a
diferentes alturas de forma perpendicular. Identificar cada una de ellas.
5 cm 60 cm
15 cm 1m
30 cm 2m
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REFERENCIAS
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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE YUCATAN
FACULTAD DE QUMICA
LABORATORIO DE QUMICA FORENSE Y LEGAL
PRCTICA 6
RASTROS DE SANGRE
INTRODUCCIN
OBJETIVO
Utilizar la tcnica de hemascein para la identificacin de sangre
latente en el lugar de hechos.
MATERIALES
Lmparas de UV con una longitud de onda de 415-480nm.
Lentes o pantallas de color naranja o amarillo intenso con filtro
Dos fragmento de block o ladrillo de cermica (diferentes superficies)
Refrigerador
Sangre humana
Sangre de animal
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REACTIVOS
Reactivo de Hemascein
Agua destilada
PROCEDIMIENTO:
1. En una superficie embarrar sangre dejarla unos 10 o 15 minutos.
2. Transcurrido el tiempo limpiar la superficie dejar secar
3. Esparcir a una distancia de aproximadamente 30 cm el reactivo de
hemascein, con ayuda de un aspesor.
4. Ponerse los lentes o usar las pantallas de color naranja o amarillo
intenso con filtro
5. Usar la lmpara UV
6. Observar la coloracin y formas de las manchas
OBJETIVO
Determinar el grupo sanguneo en sangre seca que se encuentra
impregnada en prendas de vestir o sobre la superficie de ob jetos
relacionados con algn hecho de sangre.
MATERIALES
Tubos de ensayo de 10 X 75
Tubos de ensayo de 13 x 100
Pipetas de transferencia
Tijeras
Aplicadores de madera
Guantes desechables
Tela estril y sin apresto, de algodn
Telas manchadas con sangre conocida de tipo A y B (controles)
Gradillas para tubos de ensayo de 10 x 75
Bao mara a temperatura constante fijarla a 57 C
Centrfuga
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Refrigerador
REACTIVOS
Sueros hemoclasificadores anti-A, anti-B
Solucin fisiolgica, fra y a temperatura ambiente
Metanol
PROCEDIMIENTO
La prueba de rastreo hemtico consta de tres etapas: la primera se basa
en una prueba presuntiva para identificar sangre (que no se hace en esta
prctica), la segunda para determinar el origen de la sangre y la tercera
para determinar el grupo sanguneo en sangre seca del sistema ABO.
Toma de la muestra
1. A una tela limpia se le agregan unas gotas de solucin salina.
2. Para levantar la muestra de la superficie donde se encuentre
absorberla con solucin salina en pequeos trozos de tela de
algodn de color blanco, sin apresto y esterilizada, impregnado no
frotar. En caso que la muestra se encuentre en una fibra solo se corta
un fragmento de aprox. 2 x 2 cm
3. En el primer caso se deja secar. En caso que haya sido cortada y este
seca, se procede directo con el siguiente paso. S e corta un
fragmento para determinar el origen de la sangre y el resto de la tela
se fija (paso 4).
4. Fijar las manchas de sangre impregnadas en la tela, cubrindolas
con metanol cuando menos durante 15 minutos. Despus de ese
tiempo eliminar el metanol totalmente
INTERPRETACIN DE RESULTADOS
POSITIVO. Si hay dos lneas de color rosa, uno en la zona de pruebas "T" y
en la zona de control "C", el resultado de la prueba es positiva, e indica que
el nivel de hemoglobina humana es igual o superior 0.05 g/mL.
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NEGATIVO. Si slo hay una lnea de color rosa (en la zona de control "C"), el
resultado de la prueba es negativo. Esto puede indicar que no est presente
la hemoglobina humana igual o superior 0.05 g/mL.
INVALIDA. si no existe la lnea rosa visible en el rea de control C, la
prueba es inconcluyente. repita la prueba y reexamine el procedimiento con
cuidado
Anti B pB aB bB 0B
Anti A pA aA bA 0A
INTERPRETACIN DE RESULTADOS
Si hay aglutinacin en el tubo problema de la hilera anti-A,
marcada como aA, el grupo corresponder al A.
Si hay aglutinacin en el tubo problema de la hilera anti-B,
marcada como bB, el grupo corresponder al B
Si hay aglutinacin en los tubos problema marcados: aA y bB, el
grupo de la muestra analizada corresponder al AB
Si no hay aglutinacin en los tubos problema marcados: aA y bB,
el grupo sanguneo corresponder al O
REFERENCIAS
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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE YUCATAN
FACULTAD DE QUMICA
LABORATORIO DE QUMICA FORENSE Y LEGAL
PRCTICA 7
GRUPO SECRETOR
INTRODUCCIN
OBJETIVO
El alumno aprender a identificar el estado secretor de las sustancias
de grupo sanguneo en muestras biolgicas de origen forense.
MATERIALES
Tubos de ensaye de 10 x 75
Tubos de 13 x 65
Pipetas automticas (micropipetas), de 50, 150, 200250 L
Papel parafilm
Gradilla
Tijeras
Aplicadores de madera
REACTIVOS
Sueros hemoclasificadores anti-A, anti-B
Solucin fisiolgica a temperatura ambiente
MUESTRAS BIOLGICAS
Sangre lquida reciente del grupo "A " y "B"
Saliva reciente grupo "A", "B", y "O"
Muestra problema
PROCEDIMIENTO:
A. Preparacin de las soluciones, control y muestra.
Preparacin de los antisueros:
Dilucin 1:5. 1 mL de anitsuero (anti-A y anti-B), se diluyen en 4 mL
de solucin fisiolgica.
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Preparacin de la suspensin de glbulos rojos
Realizar una solucin de glbulos rojos del grupo sanguneo "A" y "B" al
2%
CONTROL "B"
Marcar tubos de ensaye como CB (muestra control B)
Aadir 150 L de solucin fisiolgica
Aadir 50 L de saliva del grupo B
CONTROL "O"
Marcar tubos de ensaye como CO (muestra control O)
Aadir 150 L de solucin fisiolgica
Aadir 50 L de saliva del grupo O
PROCEDIMIENTO
1. Rotular los tubos de ensayo como se muestra en el cuadro:
MxB aB bB oB
MxA aA bA oA
M= muestra problema
x=nmero de muestra
a,b,o= Son las muestras con grupos conocidos
A= antisuero A B= antisuero B
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4. Agregar 50 L de la solucin CO a los tubos
marcados como oA y oB
5. Agregar 50 L de la solucin Mx a los tubos
marcados como M x A y Mx B
50 L = Mx 50 L=CA 50 L=CB 50 L=CO
MxB aB bB oB
MxA aA bA oA
20 L Anti-B MxB aB bB oB
20 L Anti-A MxA aA bA oA
8. Agregar 20 L de la solucin al 2% de GR A, a
los controles y a las muestras que fueron marcados como aA, bA, oA,
MxA
9. Agregar 20 L de la solucin al 2% de GR B a los
controles y a las muestras que fueron marcados como aB, bB, oB, MxB.
20 L de GR 2% B MxB aB bB oB
20 L de GR 2% A MxA aA bA oA
SECRETOR DE GRUPO
A B
SANGUNEO
+ + "O"
+ "A"
+ "B"
"AB" Pgina 26
+ + NO SECRETOR
REFERENCIAS
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FACULTAD DE QUMICA
LABORATORIO DE QUMICA FORENSE Y LEGAL
PRCTICA 8
IDENTIFICACIN DE SEMEN CON FINES FORENSES
INTRODUCCIN
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microscopio ptico. Existen mltiples colorante que ponen de manifiesto la
presencia de clulas espermticas.
OBJETIVO
Conocer la metodologa utilizada en la investigacin de manchas
sospechosas a semen y seleccionar la alternativa idnea para la tincin y
diagnstico citolgico del espermatozoide acorde a las exigencias y
condiciones actuales de la qumica en funcin de contribuir a la
administracin de justicia en presuntas vctimas de delitos sexuales.
MATERIALES
Tubos de ensaye
Pipetas de transferencia
Papel filtro
Gradilla
Tijeras limpias
Torundas de alcohol
Aplicadores de madera
Placas porta objetos
Guantes desechables
Hisopos
Microscopio ptico
Reloj temporizador
Vrtex
Centrifuga
REACTIVOS
Kit de Fosfatasa cida
Kit de inmunoensayo para la determinacin del antgeno prosttico
especfico (protena p30)
Tincin con Rojo rpido nuclear
MUESTRAS BIOLGICAS
Hisopos contaminados con material seminal como control
Muestra problema
Otras muestras para comparar falsos positivos
PROCEDIMIENTO
A. DETERMINACIN DE FOSFATASA CIDA
Preparacin del reactivo (ampollas)
1. Tomar la ampolla etiquetada como S1 y romperla; esta ampolla
contiene el qumico seco para el reactivo.
2. Tomar la ampolla etiquetada como S2 y romperla (asegurarse de
que el reactivo no est dentro de la cabeza de la ampolla).
3. Tomar la ampolla etiquetada como S3 y romperla (asegurarse de
que el reactivo no est dentro de la cabeza de la ampolla).
4. Utilizar una pipeta desechable para evacuar los lquidos de la
ampollas S2 y S3 y depositarlos en la ampolla S1.
5. Mezclar la suspensin en la ampolla S1 usando una pipeta, hasta
que se disuelva completamente el componente slido.
6. Extraer la mezcla con la misma pipeta, usndola como aplicador.
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7. Humedecer con agua destilada una pieza de papel filtro de tamao
considerable
8. Poner en contacto el papel filtro sobre la mancha durante pocos
segundos pero si la tela es tipo lana, entonces, tendr que estar en
contacto por ms tiempo.
9. Aplicar el reactivo preparado directamente sobre el papel filtro y
observar el color purpura caracterstico.
INTERPRETACION DE RESULTADOS
POSITIVA. S el fluido seminal est presente, se observar un color intenso,
iniciar dbil pero se ir intensificando en pocos segundos.
INTERPRETACIN DE RESULTADOS
POSITIVO. Si hay dos lneas, uno en la zona de pruebas "T" y en la zona de
control "C", el resultado de la prueba es positiva, e indica que el nivel de
p30 es igual o superior a 4 ng/mL.
NEGATIVO. Si slo hay una lnea de color rosa (en la zona de control "C"), el
resultado de la prueba es negativo. Esto puede indicar que no est presente
o que el nivel de p30 est por debajo o 4 ng/ml.
INVALIDA. si no existe la lnea rosa visible en el rea de control C, la
prueba es inconcluyente. Repita la prueba y reexamine el procedimiento con
cuidado
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1. Cortar un fragmento de la tela problema y del hisopo con el
control positivo.
2. Sumergir cada uno en un mililitro aproximadamente de solucin
fisiolgica o en su caso agua destilada (el tamao del corte
depende del tamao de rea donde se encuentre la mancha
sospechosa, si es en una persona viva o cadver, con el hisopo
que se obtuvo de las reas genitales realizar el frotis en el
momento de la toma).
3. Humedecer ligeramente la tela o hisopo con la muestra
sospechosa e impregnar el portaobjetos con ella.
4. Cubrir el frotis preparado con el colorante.
5. Dejarlo actuar durante 30 minutos.
6. Retirar el colorante y lavar con agua.
7. Observar al microscopio con objetivo 40x.
INTERPRETACIN DE RESULTADOS
Las cabezas de los espermatozoides se observarn coloreadas en su
ncleo de un color rosa carmes.
REFERENCIAS
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