JUAN ANBAL CUBAS LEN

Facultad de Medicina Humana Hiplito Unanue

Escuela de Medicina
Universidad Nacional Federico Villa Real
 Ao de la Integracin Nacional y el Reconocimiento de Nuestra Diversidad

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL

Facultad de Medicina Hipolito Unanue

Escuela de Medicina

CLULAS MADRE
Trabajo presentado por

JUAN ANBAL CUBAS LEN

Como asignacin para el curso de

Gentica Humana
bajo la direccin de la Dra. Ismena Gamboa

Lima Per

Julio de 2012
CONTENIDO

PRESENTACIN v

INTRODUCCIN vii

Captulo 0.

Introduccin 1
1. Definicin .......................................................................................................................................... 2

2. Caractersticas Biolgicas ........................................................................................................... 3

3. Propiedades ...................................................................................................................................... 4

Captulo 1.

Mtodos de obtencin de clulas

madre 5
1. Embriones crioconservados: ..................................................................................................... 5

2. Blastmeros individuales............................................................................................................ 5

3. Activacin de ovocitos por transferencia nuclear somtica .......................................... 5

4. Partenognesis ................................................................................................................................ 6

Captulo 2.

Tipos de clulas madre 7

1. De acuerdo al tejido que originan ............................................................................................ 7

2. De acuerdo al tejido de donde se pueden obtener ............................................................ 9

iii
Captulo 3.

Usos 17

Captulo 4.

Aplicaciones en medicina humana 19

1. Clulas Madre en la reparacin de Tejido Miocrdico poste-
riormente a un infarto. ............................................................................................................... 21

2. Ejemplos de Aplicacin de Clulas Madre .......................................................................... 23

3. Investigaciones Realizadas ....................................................................................................... 24

Captulo 5.

ltimos avances 29
1. Clulas madre derivados del Amnios: en busca de las aplicacio-
nes clnicas ...................................................................................................................................... 29

2. Las clulas madre mesenquimales y el tratamiento del lupus

eritematoso sistmico: ............................................................................................................... 29

3. Terapia celular con troncales mesenquimales para la atenua-

cin de la formacin de cicatrices durante la cicatrizacin de la
herida ................................................................................................................................................ 30

4. Generacin de clulas pluripotentes inducidas en enfermeda-

des especficas de pacientes con cariotipos diferentes del sn-
drome de Down ............................................................................................................................. 30

REFERENCIAS 33

iv
PRESENTACIN

De qu muri la ovejita Dolly? Fue feliz? Bueno, esto nunca lo sabremos Por
qu y para qu elegir una clula de ubre para crear una oveja? Qu son las clulas
madre de las que todo el mundo habla ltimamente sin demasiada precisin que
digamos? Por qu tanta polmica? Por qu los gobiernos europeos estn siendo
tan reticentes a dar luz verde a la investigacin con clulas embrionarias humanas,
aunque sean de sobrantes inviables para reproduccin? Ya est bien de tantas
preguntas! El presente informe no pretende dar las respuestas, sino un trabajo
ms que ayudara a cada uno a optar un criterio y opinin sobre la manipulacin de
clulas madre.
Entonces sigamos con las preguntas: Qu son las clulas madre? Para qu sirven?
Por qu tanta polmica sobre su uso? El estudio de las clulas madre es la conse-
cuencia del conocimiento sobre cmo un organismo se desarrolla desde el huevo
recin fecundado hasta el individuo adulto. Nos encontramos en una de las reas
ms fascinantes de la biologa actual que, como toda buena investigacin, a cada
respuesta hallada le surgen nuevos retos y misterios por develar. Pocos debates
estn despertando tantas pasiones y polmicas entre la comunidad cientfica, dife-
rentes grupos sociales y gobiernos como el uso de clulas embrionarias.

Juan Anbal Cubas Len

Lima, 2012

v
INTRODUCCIN

Desde el siglo XIX, es sabido que todo organismo viviente se desarrolla a partir de
otros organismos vivientes y todas las clulas, que son los elementos estructurales
de tales organismos, proceden de otras clulas, clulas preexistentes. Estos con-
ceptos son principios fundamentales de la teora celular, los cuales (en coherencia
con la teora mendeliana de la herencia y la teora de la evolucin de las especies
de Darwin) son eje fundamental del desarrollo de la medicina moderna.
El cuerpo humano est formado por un nmero elevadsimo de clulas que puede
llegar a un nmero de 14 cifras, es decir unos 100 billones de clulas. Todas estas
clulas se desarrollan a partir de las clulas madre totipotenciales, pluripotenciales
y multipotenciales que proceden, todas ellas, del vulo fecundado y que forman el
inicio de la gestacin del embrin.

vii
Captulo 0.

Introduccin
Durante las ltimas dos dcadas se han producido grandes descubrimientos y
avances notables en el conocimiento de la biologa celular y molecular de las
clulas madre (CM), esto ha conllevado al desarrollo de potenciales usos terapu-
ticos y el desarrollo de la ingeniera de tejidos, sin mencionar los invaluables
datos biolgicos obtenidos.
Ya desde 1916 Danchakoff describe la presencia de una clula como precursora de
otras en la mdula sea, lo que fue propuesto nuevamente aos ms tarde por Sa-
bin y Maximow (1924).
A principios de los sesentas, un elegante experimento de Till and McCulloch
(1961) demostr que un tipo celular de la mdula sea, era capaz de ser in-
ducida a diferenciarse en todos los tipos celulares de estirpe hematolgica; es as
que por primera vez se identifica a las CM hematopoyticas. Ms tarde, en 1981,
los cientficos descubrieron la manera de derivar clulas madre embrionarias de
embriones tempranos de ratn.
El estudio detallado de la biologa de las clulas madre de ratones condujo al des-
cubrimiento por parte de Thomson y su equipo, en 1998, de un mtodo para obte-
ner clulas madre de embriones (blastocistos) humanos y hacer crecer las clulas
en el laboratorio. Estas clulas se llaman clulas madre embrionarias humanas. Los
embriones utilizados en estos estudios fueron creados con fines reproductivos a
travs de los procedimientos de fertilizacin in vitro. Cuando ya no eran necesarios
para tal fin, fueron donados para la investigacin con el consentimiento informado
del donante. En 2006, los investigadores hicieron otro gran avance al identificar las
condiciones que permitiran a algunas clulas adultas especializadas para "repro-
gramar" genticamente para asumir una de las clulas madre-como estado. Este
nuevo tipo de clulas madre, llamadas clulas madre pluripotentes inducidas
(iPSCs).
Las clulas madre son tpicamente definidas como clulas indiferenciadas que
tienen la habilidad de perpetuarse a travs de la autorrenovacin con el potencial
de generar clulas maduras (especializadas) diferencindose hacia tejidos espec-
ficos. Este tipo de clulas pueden hallarse desde el embrin hasta en tejidos
adultos. Gracias a los adelantos en mtodos de fenotipificacin, ha sido posi-
ble caracterizarlas fenotpicamente, de este modo se han podido aislarlas las clu-

1
las madre de complejas poblaciones celulares heterogneas.
En la actualidad est muy difundido el uso clnico de clulas madre adultas y
actualmente se est apuntando al empleo de clulas madre embrionarias, debido
a que sus caractersticas biolgicas la hacen un mejor candidato para la terapia
celular. A pesar del enorme potencial del uso teraputico de las clulas madre
embrionarias, hay cuestiones ticas por resolver, pues debe plantearse la inte-
rrogante de que si vale la pena sacrificar embriones para producir clulas ma-
dre para reparar rganos y tejidos defectuosos en adultos, con la finalidad de
poder curar enfermedades como la esclerosis mltiple, el Alzheimer o el cncer.
Nos enfrentamos al dilema de sacrificar una vida para salvar otra, pero
cundo empieza en s la vida de un ser humano?, es que acaso podra conside-
rarse a un cigoto como un ser humano, o slo debemos considerarlo como un
potencial ser humano, carente de conciencia, sentimientos o alma. Esta discusin
permanecer latente por muchos aos.

1. Definicin
Las clulas madre (CM) son clsicamente definidas por su capacidad para generar
clulas diferenciadas, por una parte de su capacidad de autorrenovacin, por otro
lado, con el fin de preservar la integridad y la funcin del tejido al que pertene-
cen. El concepto de clulas madre, implica el concepto de divisiones asimtricas
cuyos mecanismos estn empezando a ser dilucidados. Despus de una divisin
asimtrica, las clulas madre deben dar lugar a una clula idntica a s misma y
para generar al mismo tiempo una clula cuyo destino es la diferenciacin. Los fac-
tores que regulan este fenmeno complejo se han identificado en algunos sistemas
celulares bajo condiciones experimentales.

Figura 1: Divisin celular y diferenciacin de clulas madre.

2
2. Caractersticas Biolgicas
Las clulas madre se caracterizan por:

Capacidad de autorrenovacin

Es la capacidad que tienen las CM para replicarse sin alterar sus propieda-
des biolgicas ni su programacin gentica heredada de una clula pro-
genitora. Se ha reportado que la autorenovacin es dependiente de cito-
quinas especficas; un tpico ejemplo es la autorrenovacin de las clulas
madre de ratn, que necesitan al factor inhibidor de leucemia (Lif), para man-
tener su estado indiferenciado, pues en ausencia de esta citoquina, las CM
comienzan a diferenciarse la contraparte humana de esta citoquina es la
activina y el factor de crecimiento de fibroblastos. La capacidad de auto
renovacin de las CM humanas est regulada por una serie de vas molecu-
lares en las que se destacan: WNT, Sonic Hedgehog (SHH) , Notch, PTEN,
BMI1.

Replicacin ilimitada / Inmortalidad

Las clulas madre persisten a lo largo de la vida de un individuo, las CM

tienen la capacidad de replicarse ilimitadamente, gracias a su elevada tasa
de expresin de los genes TERT y TERC, que codifican la enzima telome-
rasa. La actividad de la enzima telomerasa previene el acortamiento de los
telomeros, lo que constituye un punto crtico para el envejecimiento celu-
lar. Esta caracterstica biolgica promueve la acumulacin de mutaciones
durante toda la existencia de las CM que podran causar daos en genes
especficos y provocar incremento en la tasa de proliferacin celular conlle-
vando a neoplasias.

Expresin de marcadores primitivos

Una CM tiene un perfil de expresin de genes diferentes a las clulas

adultas; conforme las CM van diferencindose, la expresin de estos genes
disminuye, y por el contrario, empiezan a expresarse genes de linajes ce-
lulares especficos; por lo tanto es posible identificar marcadores que se ex-
presan solo en CM, la identificacin de estos marcadores ha sido usado
ampliamente para identificar clulas madre a partir de poblaciones celu-
lares mixtas. Un marcador ampliamente conocido es OCT4 que se expresa
citoplasmticamente en todas las CM y cuya expresin se pierde a medida
que las clulas madre se diferencian. Un marcador de la superficie celular es
CD34 que se expresa en CM hematopoyticas y CD133 en CM neurales
(Singh y col 2003). Otros marcadores identificados mediante perfiles ge-
nmicos son LIN28, NANOG, DNMT3B, TGIF, TDGF1.

3
 Plasticidad

Es una de las caractersticas biolgicas ms importantes de las clulas

madre, por su implicancia en usos teraputicos. La plasticidad se define
como la propiedad de las CM adul tas para diferenciarse en tejidos com-
pletamente distintos (de diferentes linajes) al que se originaron estas c-
lulas. Las CM reprograman sus caractersticas biolgicas, y adoptan las carac-
tersticas de las clulas del tejido hospedero y la expresin de sus marca-
dores especficos. Un ejemplo de plasticidad, son las clulas madre hema-
topoyticas, que se diferencian a tipos maduros de clulas sanguneas,
adems estas mismas clulas son capaces de diferenciarse en clulas de
tejido neural, el cual es normalmente derivado de clulas del ectodermo
embrinico; del mismo modo las clulas madre neurales pueden diferen-
ciarse hacia clulas hematopoyticas gracias a su plasticidad.

3. Propiedades
Cabe resaltar que las clulas madre estn definidas por dos propiedades:
Su capacidad para proliferar y dar lugar a los tipos celulares diferenciados de
un tejido in vivo.
Su capacidad de autorrenovacin con formacin de otras clulas progenito-
ras

4
Captulo 1.

Mtodos de obtencin de clulas

madre
Existen diferentes tcnicas para la obtencin directa de clulas madre embriona-
rias, y tcnicas basadas en la reprogramacin celular:

1. Embriones crioconservados:
La criopreservacin o crioconservacin es un mtodo que utiliza nitrgeno lquido
(-196 C) para detener todas las funciones celulares y as poderlas conservar du-
rante aos. Estos embriones son procedentes de los tratamientos de reproduccin
humana asistida, que cuando se fecundan ms de los necesarios pueden ser dona-
dos por los pacientes que se someten a este tratamiento. Estos embriones criopre-
servados en fase de blastocisto pueden conservarse durante cinco aos, segn lo
reglamenta el R.D. 413/1996.

2. Blastmeros individuales
Con esta tcnica, probada primero en ratones y despus en humanos, se consigue
no destruir el embrin. Se utilizaron vulos fecundados de ratn que se dejaron
crecer hasta que tuviesen de 8 a 10 clulas. Una de estas clulas se extrae y se cul-
tiva. Con esta tcnica se ha logrado obtener dos lneas celulares estables que mos-
traban un cariotipo normal y presentaban marcadores caractersticos de pluripo-
tencialidad. El embrin del que se obtiene esta clula es completamente viable por
lo que se puede implantar en un tero y seguir un desarrollo normal.

3. Activacin de ovocitos por transferencia nuclear

somtica
Consiste en extraer un ncleo de un vulo no fertilizado y sustituirlos por el ncleo
de una clula somtica adulta. Al encontrarse en un ambiente propicio, el cito-
plasma del vulo, este ncleo es capaz de reprogramarse. Una ventaja de esta tc-

5
nica es obtener clulas madre que contengan la misma dotacin gentica que el
paciente y evitar as problemas de rechazo. Esta tcnica slo se ha realizado en
animales, no en humanos. Las mutaciones producidas en el ADN de estas clulas
adultas hacen que se produzcan problemas durante la diferenciacin.

4. Partenognesis
Este proceso reproductivo no se da en mamferos. Sin embargo, la partenognesis
puede ser inducida en mamferos mediante mtodos qumicos o fsicos in vitro.
Como resultado de esta activacin, se obtiene una masa celular denominada parte-
note de las que se pueden aislar clulas pluripotenciales. Esta tcnica slo es apli-
cable en mujeres.

6
Captulo 2.

Tipos de clulas madre

1. De acuerdo al tejido que originan

De acuerdo al tipo de tejido que originan, existen cuatro tipos de clulas madre

Totipotentes

El trmino totipotencial (del latn totus, que significa completo) hace refe-
rencia al potencial que tienen estas clulas de generar un embrin completo
(tejido embrionario y extraembrionario).

Figura 2: Clasificacin y evolucin de clulas madre

Pluripotentes

El trmino Pluri (del latn plures, que significa muchos o varios) es utiliza-
do para describir las clulas madre pluripotentes que pueden dar origen a
progenitores que forman cualquiera de las tres capas germinales embriona-
rias: mesodermo, endodermo y ectodermo. Es importante destacar que para
que una clula madre pueda considerarse como pluripotente tiene que cum-
plir las siguientes condiciones: en primer lugar, una nica clula debe ser ca-
paz de diferenciarse a progenitores especializados procedentes de cualquier
capa embrionaria; en segundo lugar, demostrar la funcionalidad in vitro e in

7
 vivo de las clulas en las que se ha diferenciado, y, finalmente, que se produz-
ca un asentamiento claro y persistente de stas en el tejido blanco, tanto en
presencia como en ausencia de dao en los tejidos en los cuales se injerta
Han sido aisladas de tres lneas celulares: clulas cancerosas embrionarias,
clulas embrionarias pluripotentes, y clulas embrionarias germinales. Estas
clulas pluripotentes poseen varias caractersticas en comn, entre ellas, al-
gunos marcadores moleculares como la isoenzima de la fosfatasa alcalina, un
dominio del factor de transcripcin Oct4, alta actividad de la telomerasa, y
varios marcadores de membrana reconocidos por anticuerpos monoclonales.

Multipotentes

Las clulas madre multipotenciales son aquellas que pueden dar origen a
precursores relacionados solamente con una de las tres capas embrionarias;
por ejemplo, clulas madre que dan origen a tejidos derivados exclusivamen-
te del endodermo como tejido pancretico o pulmonar.

Unipotentes.

La ltima categora corresponde a las clulas madre unipotenciales, que co-

rresponden a las clulas que solo pueden generar clulas hijas que se dife-
rencian a lo largo de una sola lnea celular, tal como su nombre lo refiere (del
latn unus: uno). Hasta hace algunos aos, se consideraba a las clulas madre
hematopoyticas de mdula sea en esta categora, ya que se relacionaban
solamente con la generacin de clulas sanguneas.

Figura 3: Diferenciacin de clulas madre.

8
2. De acuerdo al tejido de donde se pueden obtener
De acuerdo al tipo de tejido donde se pueden obtener, existen tres tipos de clulas
madre

Clulas Madre Embrionarias

Son las clulas se derivan de la masa celular interna del embrin temprano
en la etapa de blastocisto, entre el 5 y 6 da de la embriognesis en la fase
de preimplantacin.

Figura 4: Embrin humano en el da 5, obtenida despus de la fe-

cundacin in vitro. Tenga en cuenta que las clulas escamosas del
trofoblasto, dentro de la cavidad (el blastocele), pegado a las clulas
del trofoblasto, es la masa celular interna que forma el feto. En esta
etapa, el blastocisto est rodeado por la zona pelcida, una mem-
brana gruesa translcida compuesta de glicoprotenas.

Desde 1981 es posible en ratones aislar y cultivar clulas madre embriona-

rias de la masa celular interna, estas mantienen su capacidad de pluripoten-
cialidad. En 1998, Thomson y su equipo aislaron por primera vez de las clu-
las madre embrionarias a partir de blastocistos humanos. Desde entonces,
muchos grupos han informado del aislamiento de lneas de clulas madre. La
tasa de xito de aislamiento es muy variable y depende del estado de conser-
vacin (fresco o congelado) de los embriones, la calidad y la tecnologa utili-
zada. Los embriones en una etapa ms temprana o ms tarda (7 - 8 da
despus de la fertilizacin) se utiliza tambin con xito.
Estas clulas son pequeas (2-3 micras) con alta relacin ncleo-citoplasma,
adherentes, forman colonias planas y compactas en cultivo como se observa
en la Figura 5.

9
Figura 5: La colonia indiferenciada de clulas madre embrionarias humanas (flecha slida) en
apoyo de fibroblastos (flecha punteada) (microscopio ptico x 20 (A) x 50 (B)). Las clulas ma-
dre de embriones humanos son clulas pequeas que forman la colonia plana y muy compacta.

Las clulas madres embrionarias se caracterizan in vitro e in vivo por su po-

tencial para dar lugar a tres capas primarias embrionarias: endodermo, ecto-
dermo, mesodermo y los distintos tejidos adultos.
Las clulas madre embrionarias se autorrenouevan y son pluripotenciales
siendo estas sus principales caractersticas. La pluripotencia est bajo el con-
trol de las redes de factores de transcripcin y cambios epigenticos (factores
intrnsecos), y bajo el control del entorno celular (factores extrnsecos).
El uso de clulas madre embrionarias se asocia con cuestiones ticas y el des-
ajuste inmunolgico, lo que podra afectar a su uso generalizado en la clnica.
Las clulas madre pluripontentes inducidas (IPSC)
Estas son obtenidas a partir de la tecnologa que permite la generacin de un
autlogo de clulas madre pluripotentes sin necesidad de utilizar una fuente
de clulas embrionarias. Son reprogramados a partir de clulas somticas
con sobreexpresin de los cuatro factores de reprogramacin, Oct4, Sox2,
Klf4 y c-Myc. Tanto las clulas madre embrionarias y las clulas iPS son clu-
las madre pluripotentes con capacidad de autorrenovacin por tiempo inde-
finido y se pueden diferenciar en casi todos los tipos de clulas del cuerpo, lo
que las hace valiosas para el estudio de la biologa del desarrollo temprano,
para el modelado y como terapia para las enfermedades huma-
nas. Especficamente, las clulas iPS humanas podra ser utilizada para gene-
rar especficos del paciente linajes para una variedad de investigacin trasla-
cional. Las lneas celulares que se han podido obtener a partir de este tipo de
clulas pluripotentes son la sangunea, la muscular y existen otras que estn
siendo desarrolladas en diversos estudios.

10
Figura 6: La diferenciacin de la sangre derivados de iPSCs in vitro y in vivo . (a) derivados de
la sangre clones IPSC se diferencian espontneamente a travs de la formacin de cuerpos
embrioides, y se analizaron por medio de inmunocitoqumica para marcadores de linaje de
tres capas germinales embrionarias (endodermo FOXA2, mesodermo CD31 y ectodermo -
III-tubulina). (b) El trasplante de CMPi en cpsula renal de ratones SCID-beige result en la
formacin de teratoma. Histologa de los tejidos de los teratomas demostrado que las clulas
de las tres capas germinales, incluyendo muscular, glandular, y neuronales, como los tejidos
de roseta. (c) Diagrama esquemtico que describe el protocolo de diferenciacin gradual
guiada para la diferenciacin de IPSC en la isla-como las clulas. Acta, activina A, CYC, la
ciclopamina, DE, endodermo definitivo, FGF10, el factor de crecimiento de fibroblastos 10, el
GLP-1, pptido similar al glucagn-1; HGF1, el factor de crecimiento de hepatocitos-1, IGF, la
insulina factor de crecimiento-1; ILV, indolactam V, ISL, los islotes, como las clulas del endo-
dermo, PE, de pncreas, PG, intestino primitivo, Ra, todo trans del cido retinoico, Wnt,
Wnt3a. (d) A travs del protocolo de la diferenciacin dirigida, HPC o PBMC derivados de
IPSC clones fueron inducidos a endodermo definitivo (da 5), endodermo pancretico (da
10), y productoras de insulina de los islotes como las clulas (da 24). Inmunotincin demos-
trado la expresin de marcadores especficos de la etapa en la progenie de IPSC en el da 5, y
FOXA2 SOX17), el da 10 (NKX6.1 y PDX1), y el da 24 (INS). Las barras de escala indican 50
micras.

11
 Clulas madre perinatales
Las clulas madre perinatales puedan ser aislados de la placenta que nor-
malmente se desecha despus del parto, son una fuente de clulas ideal en
trminos de disponibilidad, el menor nmero de preocupaciones de carcter
tico, menos dao en el ADN, y as sucesivamente. Numerosos estudios han
demostrado que algunas de las clulas derivadas de la placenta poseen carac-
tersticas de clulas madre pluripotentes, como la capacidad de diferencia-
cin, en particular en clulas amniticas epiteliales (AE).
Hay evidencia creciente de que la placenta humana contiene clulas madre
pluripotentes o multipotentes o ambas cosas. Diversas clulas madre pluripo-
tentes se han aislado de diferentes partes de la placenta humana, tales como
el amnios, corion, el cordn umbilical, y la sangre fetal. Como la placenta deri-
vados de las clulas, estas clulas madre tienen ventajas comunes.

Clulas madre adultas

Las clulas madre adultas o clulas madre somticas existen en todo el cuerpo
despus del desarrollo embrionario y se encuentran dentro de los diferentes
tipos de tejido. Estas clulas madre se encuentran en tejidos como el cerebro,
la mdula sea, la sangre, los vasos sanguneos, msculos, la piel y el hgado.
Las clulas madre adultas permanecen en un estado de reposo en el que no se divi-
den durante aos hasta que se finalmente se activan por una enfermedad o una le-
sin de los tejidos.
Las clulas madre adultas pueden dividirse o auto-renovarse indefinidamente, lo
que les permite generar una amplia gama de tipos de clulas del rgano de origen, o
incluso regenerar el rgano original completo. En general se cree que las clulas
madre adultas estn limitadas en su capacidad de regenerarse en funcin a su tejido
de origen. No obstante, hay ciertas evidencias que sugieren que se pueden dividir
hasta convertirse en otros tipos de clulas.
Se cree que una clula madre adulta es una clula indiferenciada que se encuentra
entre las clulas diferenciadas en un tejido u rgano que puede renovarse y pueden
diferenciarse para producir todos o algunos de los principales tipos de clulas espe-
cializadas del tejido u rgano. Las principales funciones de las clulas madre adultas
en un organismo vivo son mantener y reparar el tejido en el que se encuentran. Los
cientficos tambin usan el trmino de clulas madre somticas. A diferencia de las
clulas madre embrionarias, de las cuales ya se conoce su origen, el origen de las c-
lulas madre adultas en algunos tejidos maduros todava est bajo investigacin.
Es cada vez ms evidente que el concepto clsico de que slo existen clulas madre
en algunos tejidos adultos es incorrecta. La existencia de clulas madre adultas en la
mayor parte de los tejidos adultos, incluidos el hematopoytico, neuronal, epidrmi-
co, gastrointestinal, msculo esqueltico, msculo cardaco, hgado, pncreas o pul-
mn, no admite controversia. A su vez, cada vez es ms evidente que las clulas ma-
dre adultas derivadas de estos rganos no slo pueden generar clulas maduras de
dicho tejido, sino tambin tejidos derivados de otras capas embrionarias, siendo el

12
caso ms tpico el de las clulas madre hematopoyticas, capaces de diferenciarse a
hepatocitos, msculo cardaco, endotelio o a tejidos derivados de las tres capas em-
brionarias.
Clulas madre de la mdula sea Se han descrito diferentes tipos de clulas
madre en la mdula sea: hematopoyticas (HSC), mesenquimales (MSC), las
llamadas Side Population Cells (SP) y recientemente las clulas progenitoras
adultas multipotenciales o MAPC.
Clulas madre hematopoyticas (HSC) han sido identificadas tanto in vitro
como in vivo por varios laboratorios y se vienen utilizando clnicamente
desde hace ms de 50 aos. El trasplante alognico de progenitores hemato-
poyticos ha demostrado definitivamente que existen clulas madre multipo-
tenciales hematopoyticas en la mdula sea y en la sangre perifrica. Hay
numerosos estudios que han permitido identificar las HSC en modelos muri-
nos, como las clulas que expresan los marcadores Sca-1, Thy-1, c-Kit y no
expresan marcadores especficos de linaje (Lin-). Estudios de repoblacin
han demostrado que estas clulas contribuyen en un modelo de trasplante a
la reconstitucin de todas las lneas celulares hematopoyticas. Tambin se
han aislado clulas madre hematopoyticas en humanos a partir de mdula
sea, cordn umbilical, sangre perifrica o hgado fetal. En general, la ausen-
cia de expresin de marcadores de lnea (Lin-), CD38-, c-kitlo, Thy-1+ y la ex-
presin de CD34 se ha asociado a poblaciones enriquecidas en HSC, aunque
no se ha podido identificar los marcadores especficos de la clula madre he-
matopoytica multipotencial. Independientemente del potencial hematopo-
ytico, trabajos recientes indican que las HSC pueden ser, en determinadas
circunstancias, ms potentes de lo esperado, es decir, diferenciarse hacia te-
jidos derivados de distintas capas embrionarias. Las clulas madre hemato-
poyticas de mdula sea y de sangre perifrica son capaces de contribuir a
la angiognesis y vasculognesis in vivo, de tal forma que las clulas CD34+
no slo contienen progenitores hematopoyticos sino tambin clulas proge-
nitoras endoteliales. Hoy da hay abundantes pruebas de que existe un pro-
genitor comn endotelial y hematopoytico (hemangioblasto). De igual forma
que ocurre con las HSC, las clulas madre endoteliales o angioblastos pueden
ser movilizadas a la sangre perifrica mediante factores de crecimiento o si-
tuaciones de estrs. Se caracterizan por la expresin de marcadores de super-
ficie como AC133 y VEGFR-2, marcadores que tambin expresan las HSC y
que apoyan nuevamente la relacin entre ambos tipos de clulas madre. Tan-
to las HSC como las clulas madre endoteliales son capaces, en modelos expe-
rimentales de isquemia, de contribuir a regenerar las estructuras vasculares
daadas, gracias a su capacidad de diferenciarse aclulas endoteliales madu-
ras, favoreciendo la angiognesis y la vasculognesis. En modelos de isque-
mia perifrica, los progenitores endoteliales son movilizados desde la mdula
sea y contribuyen a la neoangiognesis. Asimismo, en un modelo de isque-

13
mia cardaca en rata, las poblaciones de clulas CD34+, CD117bright,
AC133+, VEGFR2+ contribuyen a reparar el miocardio daado gracias a su
capacidad de mejorar la vasculognesis. Uno de los aspectos ms controver-
tidos en cuanto a la potencialidad de las HSC es su capacidad para diferen-
ciarse a clulas musculares cardacas. En un modelo murino de infarto agudo
de miocardio, el grupo de Orlic y Anversa demostraron que la inyeccin de
clulas de mdula sea Liny c-kit+ (fenotipo de marcadores de superficie t-
pico de HSC) en el corazn daado daba como resultado la colonizacin de
estas clulas en ms de la mitad del rea infartada5. Estas HSC adquirieron
un fenotipo caracterstico de clulas de miocardio y endoteliales y contribu-
yeron a la mejora y supervivencia de los animales. Sin embargo, en estudios
posteriores utilizando el mismo modelo, no ha sido posible reproducir estos
hallazgos y no se han encontrado pruebas claras de transdiferenciacin. Co-
mo en otras ocasiones, es necesario que se realicen nuevos estudios antes de
que efectivamente podamos demostrar la existencia o no de esta capacidad
por parte de las HSC de transdiferenciarse a clulas musculares cardacas.
Otra de las potencialidades atribuidas a las HSC es su capacidad para diferen-
ciarse en hepatocitos. Basndose en que las clulas ovales (clulas madre he-
pticas) expresan marcadores de superficie tradicionalmente asociados a
HSC (c-kit, flt-3, Thy-1 y CD34), se ha sugerido que stas podran diferenciar-
se a clulas ovales y hepatocitos. El grupo de Lagasse y colaboradores ha de-
mostrado que clulas madre hematopoyticas de mdula sea con el fenotipo
Lin, c-kit+, Thy-1, Sca-1 son capaces de regenerar el hgado en un modelo de
dao heptico fulminante4, mientras que utilizando modelos de quimerismo
en pacientes sometidos a trasplantes de mdula sea o de hgado y aprove-
chando la posibilidad de utilizar el cromosoma Y como marcador del origen
de la clula, tambin se ha podido demostrar que un porcentaje de hepatoci-
tos proviene de clulas madre de origen no heptico. Nuevamente, la capaci-
dad transdiferenciadora de las HSC a hepatocitos ha sido cuestionada por es-
tudios recientes. Estudios en un modelo murino de tirosinemia hereditaria
sugieren que la capacidad de las HSC de contribuir a la regeneracin heptica
est justificada principalmente por la existencia de fenmenos de fusin celu-
lar entre las HSC y los hepatocitos y no realmente por el hecho de que las HSC
sean capaces de diferenciarse a hepatocitos.
El potencial de las HSC para adquirir caractersticas de msculo esqueltico,
neuronas adultas as como clulas de la gla, y de contribuir a otros tejidos
como el epitelio pulmonar, gastrointestinal, renal o la piel se han descrito re-
cientemente15. Sin embargo, a pesar de todos estos esfuerzos, ninguno de los
estudios publicados hasta el momento demuestra que una nica clula madre
hematopoytica contribuya de forma robusta y funcional a la regeneracin de
un tejido distinto del hematopoytico y, por tanto, en sentido estricto no
cumple los criterios necesarios para hablar de versatilidad. Cada uno de los
trabajos mencionados puede ser criticado en este sentido. Sin embargo, si
14
tomamos los estudios de forma conjunta, s que aportan pruebas de la exis-
tencia de HSC con estas caractersticas y potencialidades.
Las clulas madre mesenquimales (MSC), a veces llamados clulas mesen-
quimales del estroma se han descrito en muchos tejidos. Bajo condiciones fi-
siolgicas, estas clulas asumen el papel de apoyo necesario para mantener
las clulas del compartimiento especializadas y especficas de tejido, sino
tambin en funcin del tejido, proporcionando de clulas madre progenito-
ras-capaces de proporcionar clulas especializadas en el cuerpo. Este es el
caso de las MSCs de la mdula sea capaz de soportar tanto el proceso de la
hematopoyesis que pueden diferenciarse en osteoblastos que participan en la
resorcin sea. Aparte de un estado estable, estas clulas participan activa-
mente en la cicatrizacin de heridas y la regeneracin de tejidos, sino tam-
bin por su disfuncin puede participar en el proceso del cncer. Todas estas
propiedades y otras caractersticas, tales como la inmunosupresin y su plas-
ticidad en respuesta a su entorno, que las principales herramientas terapu-
ticas en el campo de la terapia celular. Despus de describir lo que el CSM, es-
ta revisin se centrar en su participacin en la homeostasis y la regenera-
cin, sin tener en cuenta sus posibles repercusiones en el proceso del cncer.
Las clulas madre mesenquimales (MSC) han sido aislados a partir de una va-
riedad de tejidos, como la mdula sea, msculo esqueltico, la pulpa dental,
sea, cordn umbilical y tejido adiposo. Las MSC se utilizan en la medicina
regenerativa basada principalmente en su capacidad de diferenciarse en ti-
pos celulares especficos, y tambin como biorreactores de factores solubles
que promuevan la regeneracin de los tejidos de los progenitores de tejidos
celulares daados. Adems de estas propiedades regenerativas, las MSC tie-
nen una capacidad inmunomoduladora, y provocan efectos inmunosupreso-
res en una serie de situaciones. No slo son clulas inmunoprivilegiadas, de-
bido a la baja expresin de clase II complejo mayor de histocompatibilidad
(MHC-II) y molculas co-estimuladoras en su superficie celular, pero tambin
interfieren con las diferentes vas de la respuesta inmune por medio de inter-
acciones directas de clula a clula y la secrecin de factor soluble in vitro, las
CMM inhibe la proliferacin de clulas T de clulas B ,de clulas NK y las clu-
las dendrticas (DC), que producen lo que se conoce como la divisin de aner-
gia arresto. Adems, las MSCs puede detener una variedad de funciones celu-
lares inmunes: la secrecin de citoquinas y la citotoxicidad de clulas T y NK;
maduracin de clulas B y la secrecin de anticuerpos; maduracin y activa-
cin de citoquinas, as como la presentacin de antgenos. Se cree que las
MSCs necesitan ser activado para ejercer sus habilidades de inmunomodula-
cin. Estudios han sido diseados para probar la eficacia de la terapia de MSC
en dos escenarios diferentes inmunes: la prevencin o el tratamiento de los
episodios de rechazo del injerto, y la capacidad para suprimir la respuesta
inmunolgica anormal en las enfermedades autoinmunes e inflamatorias.

15
16
Captulo 3.

Usos
Hay muchas maneras en las cuales las clulas madre humanas pueden ser utiliza-
das para la investigacin bsica y clnica.. Sin embargo, hay muchas cuestiones tc-
nicas complejas para concretar estas aplicaciones de clulas madre, que sern su-
peradas solamente con investigaciones intensas y continuas Los estudios de clu-
las madre embrionarias humanas pueden brindar informacin sobre los complejos
procesos que ocurren durante el desarrollo humano. Una meta fundamental de
este trabajo es identificar cmo se diferencian las clulas madre indiferenciadas.
Algunas de las condiciones mdicas ms serias, tales como cncer y defectos de
nacimiento, se deben a la divisin y a la diferenciacin anormal de clulas. Una me-
jor comprensin de los controles genticos y moleculares de estos procesos puede
brindar informacin sobre cmo tales enfermedades aparecen y a la vez sugerir
nuevas estrategias para la terapia. Un problema significativo de las aplicaciones de
las clulas madre es que los cientficos no entienden todava completamente las
seales que activan genes especficos y su influencia en la diferenciacin de la clu-
la madre.
Las clulas madre humanas podran ser tambin utilizadas para probar nuevas
drogas. Por ejemplo, las nuevas medicaciones para la cura de enfermedades po-
dran ser probadas en las lneas de clulas madre humanas pluripotentes para ob-
tener una mayor eficacia. Otras clases de clulas se utilizan ya para estos fines. Las
lneas celulares de cncer se utilizan, por ejemplo, para probar potenciales drogas
antitumorales. Pero, la disponibilidad de clulas madre pluripotentes permitira la
prueba de drogas en una gama ms amplia de variedades celulares. Sin embargo,
para la experimentacin eficaz de las diversas drogas, las condiciones experimen-
tales deben ser idnticas al comparar las diferentes drogas. Por lo tanto, los cient-
ficos tendrn que controlar exactamente la diferenciacin de las clulas madre y el
tipo especfico de clula en la cual las drogas sern probadas.
Quizs el uso potencial ms importante de las clulas madre humanas es la genera-
cin de las clulas y de los tejidos que se podran utilizar para las terapias celula-
res. Hoy en da, los rganos y tejidos donados son utilizados para sustituir el tejido
enfermo o destruido, pero la necesidad de tejidos y rganos para ser transplanta-
dos supera las fuentes disponibles. Las clulas madre, dirigidas a diferenciarse en
tipos especficos de clulas, ofrecen la posibilidad de una fuente renovable de clu-
las y tejidos de reemplazo en enfermedades incluyendo Parkinson, Alzheimer, le-

17
siones de la mdula espinal, quemaduras, enfermedades cardacas, diabetes y artri-
tis reumatoide.
Para concretar la promesa de las terapias celulares para tales enfermedades de
alta incidencia y debilitantes, los cientficos deben ser capaces de manipular y re-
producir fcilmente las clulas madre, y stas deben poseer las caractersticas ne-
cesarias para su diferenciacin, el trasplante y, el crecimiento y adaptacin apro-
piados a largo plazo. Lo que sigue es una lista de pasos de tratamientos basados en
clulas que los cientficos tendrn que aprender a controlar y manipular perfecta-
mente para trasladar estos tratamientos al paciente. Para ser tiles para los pro-
psitos de trasplante, las clulas madre deben cumplir lo siguiente:
Proliferar extensamente y generar suficientes cantidades de tejido.
Diferenciarse hacia los tipos deseados de clula.
Sobrevivir en el husped despus de trasplante.
Integrarse al rgano luego del trasplante.
Funcionar apropiadamente para aumentar la sobrevida del husped.
Evitar daar el husped.
Con el propsito de evitar el problema del rechazo inmune propio de los organis-
mos, los cientficos estn experimentando diversas estrategias de investigacin
que les permita generar tejidos que no sean rechazados.
El estudio de las terapias con clulas madre es verdaderamente apasionante, pero
siguen existiendo problemas tcnicos significativos que slo podrn ser superados
con aos de investigacin intensiva.

18
Captulo 4.

Aplicaciones en medicina
humana
El estudio de las clulas madre permitir conocer los mecanismos de especializa-
cin celulares.
Qu mecanismos hacen que un gen sea activo y haga su trabajo y qu mecanismos
inhiben la expresin de ese gen. El cncer, por ejemplo, es un caso de especializa-
cin celular anormal.
Las clulas madre pueden servir para probar nuevos medicamentos en todo tipo
de tejidos, antes de hacer las pruebas reales en animales o en humanos.
Las clulas madre tendrn aplicaciones en terapias celulares, medicina regenerati-
va o ingeniera tisular. Muchas enfermedades son consecuencia de malfunciones
celulares o destruccin de tejidos.
Uno de los remedios, en casos muy graves, es el trasplante. Las clulas madre plu-
ripotentes estimuladas a desarrollarse como clulas especializadas, ofrecen fre-
cuentemente la posibilidad de reemplazar clulas y tejidos daados. As se podrn
emplear para casos de Parkinson y Alzheimer, lesiones medulares, quemaduras,
lesiones de corazn o cerebrales, diabetes, osteoporosis y artritis reumatoide.
Los estudios de clulas madre embrionarias humanas pueden brindar informacin
sobre los complejos procesos que ocurren durante el desarrollo humano. Algunas
de las condiciones mdicas ms serias, tales como cncer y defectos de nacimiento,
se deben a la divisin y a la diferenciacin anormal de clulas. Una mejor compren-
sin de los controles genticos y moleculares de estos procesos puede brindar in-
formacin sobre cmo tales enfermedades aparecen y a la vez sugerir nuevas es-
trategias para la terapia.
Las clulas madre humanas podran ser tambin utilizadas para probar nuevas
drogas. Por ejemplo, las nuevas medicaciones para la cura de enfermedades po-
dran ser probadas en las lneas de clulas madre humanas pluripotentes para ob-
tener una mayor eficacia. Otras clases de clulas se utilizan ya para estos fines. Las
lneas celulares de cncer se utilizan, por ejemplo, para probar potenciales drogas
antitumorales.
Pero, la disponibilidad de clulas madre pluripotentes permitira la prueba de dro-
19
gas en una gama ms amplia de variedades celulares. Sin embargo, para la experi-
mentacin eficaz de las diversas drogas, las condiciones experimentales deben ser
idnticas al comparar las diferentes drogas. Por lo tanto, los cientficos tendrn que
controlar exactamente la diferenciacin de las clulas madre y el tipo especfico de
clula en la cual las drogas sern probadas.
Quizs el uso potencial ms importante de las clulas madre humanas es la genera-
cin de las clulas y de los tejidos que se podran utilizar para las terapias celula-
res. Hoy en da, los rganos y tejidos donados son utilizados para sustituir el tejido
enfermo o destruido, pero la necesidad de tejidos y rganos para ser transplanta-
dos supera las fuentes disponibles. Las clulas madre, dirigidas a diferenciarse en
tipos especficos de clulas, ofrecen la posibilidad de una fuente renovable de clu-
las y tejidos de reemplazo en enfermedades incluyendo Parkinson, Alzheimer, le-
siones de la mdula espinal, quemaduras, enfermedades cardacas, diabetes y artri-
tis reumatoide.

Figura 7: Experimento de cultivo e implante de clulas madre en roedores.

Por ejemplo, puede llegar a ser posible generar clulas sanas del msculo cardaco
en el laboratorio y luego trasplantar las clulas en los pacientes con enfermedad
cardaca crnica. Las investigaciones preliminares en ratones y otros animales in-
dica que las clulas estromales de mdula sea, trasplantadas en un corazn daa-
do, puede tener efectos beneficiosos. Si estas clulas pueden generar clulas mus-
culares del corazn o estimular el crecimiento de nuevos vasos sanguneos que
repoblen el tejido del corazn, o ayudar a travs de algn otro mecanismo de for-
ma activa en la investigacin. Por ejemplo, las clulas inyectadas pueden lograr
reparacin mediante la secrecin de factores de crecimiento, en lugar de incorpo-
rarlo en el corazn. Prometedores resultados de los estudios en animales han ser-
vido como base para un pequeo nmero de estudios exploratorios en los seres
humanos. Otros estudios recientes en los sistemas de cultivo de clulas indican que
puede ser posible dirigir la diferenciacin de las clulas madre embrionarias o

20
adultas clulas de mdula sea en clulas del msculo cardaco.
Para concretar la promesa de las terapias celulares para tales enfermedades de
alta incidencia y debilitantes, los cientficos deben ser capaces de manipular y re-
producir fcilmente las clulas madre, y stas deben poseer las caractersticas ne-
cesarias para su diferenciacin, el trasplante y, el crecimiento y adaptacin apro-
piados a largo plazo. Lo que sigue es una lista de pasos de tratamientos basados en
clulas que los cientficos tendrn que aprender a controlar y manipular perfecta-
mente para trasladar estos tratamientos al paciente. Para ser tiles para los prop-
sitos de trasplante, las clulas madre deben cumplir lo siguiente:
Proliferar extensamente y generar suficientes cantidades de tejido.
Diferenciarse hacia los tipos deseados de clula.
Sobrevivir en el husped despus de trasplante.
Integrarse al rgano luego del trasplante.
Funcionar apropiadamente para aumentar la sobrevida del husped.
Evitar daar el husped.

Con el propsito de evitar el problema del rechazo inmune propio de los organis-
mos, los cientficos estn experimentando diversas estrategias de investigacin
que les permita generar tejidos que no sean rechazados.
Un problema significativo de las aplicaciones de las clulas madre es que los cient-
ficos no entienden todava completamente las seales que activan genes especfi-
cos y su influencia en la diferenciacin de la clula madre.

1. Clulas Madre en la reparacin de Tejido Miocrdico

posteriormente a un infarto.
Esta es una de las reas de ms inters actual en la aplicacin de clulas madre.
Mltiples trabajos han sido publicados o estn en desarrollo para establecer y me-
jorar esta terapia. A pesar del entusiasmo y el esfuerzo dedicado todava es un
campo incipiente en el que tendremos que esperar a una mayor interaccin entre
los hallazgos bsicos y resultados clnicos. Las vallas en su aplicacin en la actuali-
dad son:
Determinar el tipo de clula madre a utilizar. Tres son las que se han
considerado: clulas madre hematopoyticas, mesenquimticas y miocrdi-
cas. Las dos primeras se han utilizado en clnica por la facilidad de su obten-
cin y por su potencial de diferenciarse en msculo estriado.
Determinar la va de administracin de las clulas madre: movilizacin
perifrica, inyeccin intracoronaria o inyeccin intramiocrdica.

21
 Esto est directamente relacionado al fenmeno de homing. Si las clulas
madre con capacidad de diferenciarse a una clula miocrdica tienen siste-
mas de anidamiento, anclaje y subsistencia similares a las de los precursores
hematopoyticos, entonces podra servir simplemente movilizar estas clulas
a la circulacin para que se aniden al pasar por el msculo daado. Los expe-
rimentos clnicos basados en este principio han resultado poco efectivos. Mu-
chos estudios estn centrndose en la actualidad en la inyeccin intracorona-
ria de clulas madre hematopoytica y mesenquimtica. Un estudio randomi-
zado usando precursores hematopoyticos post infarto en humanos demos-
tr un incremento significativo en la fraccin de eyeccin a los seis meses del
mismo, pero ese mismo grupo comprob una nula mejora en el anlisis de
18 meses. Adems la mortalidad no fue diferente en ambos grupos. Estos re-
sultados apuntan a que probablemente existen mecanismos de homing para
estas clulas, que son capaces de regenerar tejido infartado o producir neo-
vascularizacin, pero los efectos no se mantienen en el tiempo. Nuevamente
mucho trabajo en investigacin bsica ser necesaria para explicar el fen-
meno e intentar desarrollar condiciones para prolongar el efecto positivo. Es-
tudios con mayor nmero de pacientes sern necesarios para definir si esta
aproximacin es efectiva. Pocos han explorado la inyeccin intramiocrdica
por el riesgo asociado y la dificultad de definir con precisin la topografa del
dao inducido por el infarto.
Determinar en qu momento de la evolucin del infarto es necesario
aplicarlas; precozmente o despus que el dao ya est establecido pero an-
tes de la cicatrizacin definitiva. Esto tambin guarda relacin con la disponi-
bilidad de clulas madre autlogas en tiempos cortos. Las clulas hematopo-
yticas son fciles de movilizar y de conseguir en poco tiempo. En teora se
podra disponer de un concentrado de estas clulas (CD34) en pocas horas si
se necesita. Por el contrario las clulas madre mesenquimticas, que tambin
se pueden diferenciar a miocitos al menos en modelos de laboratorio, requie-
ren de un cultivo primario de dos semanas para poder purificar una cantidad
suficiente que sea til. Esto es un impedimento para su uso en la fase aguda
postinfarto, por lo que habra que plantear la conveniencia de tener estas c-
lulas, autlogas o alognicas, previamente congeladas para usar en este fin.
Debido a que las mismas no generan aparentemente una respuesta inmune y
por el contrario pueden inducir tolerancia inmune podra ser una ventaja pa-
ra el uso de clulas alognicas.
Conocer los mecanismos de accin del efecto regenerativo potencial de
la aplicacin de las clulas, lo que llevara a contestar muchas de las pre-
guntas anteriores. Tres son los mecanismos aducidos tericamente: integra-
cin al msculo cardaco y diferenciacin en miocitos; fusin celular con mio-
citos presentes en el tejido daado; formacin neovascular. Hay resultados de
laboratorio que apoyan en parte a cualquiera de estas tres teoras.

22
 Finalmente tampoco se conoce el potencial de dao que la aplicacin de clu-
las madre en el miocardio pueda tener, ya que no se conocen los mecanismos
de homing ni las seales diferenciadoras del tejido miocrdico.
El uso de clulas madre mesenquimticas, que tambin poseen la capacidad
de diferenciarse a tejido conectivo, hueso o cartlago podra provocar ms
dao que bien si por ejemplo induce proliferacin de la ntima de la arteria
por donde se inyecta.

2. Ejemplos de Aplicacin de Clulas Madre

Segn public Science Abril de 2000, a dos bebs que nacieron con un defecto
gentico que les ocasionaba severa inmunodeficiencia, les extrajeron clulas
madre de mdula sea. Se cultivaron las clulas, se reemplaz el gen defec-
tuoso y se transfirieron de nuevo a los nios. Este experimento, en el que se
emplearon clulas madre de los propios bebs, constituy el primer xito de
curacin mediante terapia gentica.
Un trabajo de la Universidad Johns Hopkins, en Baltimore, presentado duran-
te el encuentro anual de la Sociedad Americana de Neurociencia explicaba
que la inyeccin de clulas madre en el lquido cefalorraqudeo de los anima-
les, lograba devolver el movimiento a unos roedores con parlisis.
Los expertos introdujeron clulas madre neuronales en los roedores parali-
zados por un virus que ataca especficamente a las neuronas motoras y com-
probaron que el 50 por ciento recuperaba la habilidad de apoyar las plantas
de una o de dos de sus patas traseras.
Las investigaciones son muy prometedoras y avanzan muy rpidamente, pe-
ro queda mucho por hacer para llegar a aplicaciones clnicas reales. Todava
falta por conocer los mecanismos que permiten la especializacin de las clu-
las madre humanas para obtener tejidos especializados vlidos para el tras-
plante.
Recientemente han sido utilizadas las clulas madre encontradas en la sangre
del cordn umbilical para tratar pacientes con cncer. Durante la quimiote-
rapia, la mayora de las clulas en crecimiento mueren por los agentes citot-
xicos. El efecto secundario de la quimioterapia es lo que los trasplantes de c-
lulas madre tratan de revertir; la sustancia que se encuentra sana dentro del
hueso del paciente, el tutano, es remplazada por aqullas perdidas en el tra-
tamiento. En todos los actuales tratamientos de clulas madre, obtener clu-
las madre de un donante con el mismo tipo de sangre es preferible a usar las
del paciente mismo. Solo si (siempre como ltimo recurso y si no se encontr
un donante con el mismo tipo de sangre) es necesario para el paciente usar
su propias clulas madre y si el paciente no tiene guardada su propia colec-
cin de clulas madre (sangre del cordn umbilical), entonces la sustancia
23
 contenedora en los huesos ser obtenida antes de la quimioterapia, y re-
inyectada despus.
El trasplante de clulas madre hematopoyticas se ha usado desde hace 50
aos con xito para tratar mltiples enfermedades: talasemias, anemia falci-
forme, anemia de Fanconi, errores congnitos del metabolismo, anemia apl-
sica grave, inmunodeficiencias combinadas graves. Tambin han sido em-
pleadas para el tratamiento de tumores: Leucemias agudas mieloides y lin-
foides, leucemias crnicas mieloides, mielodisplasias, linfomas, mielomas,
tumores slidos de rin, mama, ovario y neuroblastoma.
Esto se consigue mediante el trasplante de mdula sea. La mdula sea con-
tiene las clulas madre precursoras de las clulas sanguneas y linfticas. Se
sola sacar del hueso de la cadera, pero actualmente se est sacando de la
sangre perifrica tras tratamiento con factores estimulantes del crecimiento.
El xito del trasplante de mdula, al igual que en cualquier otro trasplante,
depende de la compatibilidad HLA. Pero adems de poder producirse rechazo
del individuo al tejido trasplantado, el trasplante de mdula sea presenta la
particularidad de que tambin puede darse en sentido inverso, rechazo del
tejido trasplantado al individuo.
Sin embargo el rechazo GVHD puede presentar una ventaja y ser de inters
como inmunoterapia, ya que puede reconocer a las clulas malignas con las
que compite como extraas y permitir una remisin ms rpida de la leuce-
mia.
Tras destruir la mdula por radiacin o quimioterapia se realiza el trasplante.
A las dos semanas aparecen nuevas clulas sanguneas, y tras varios meses
(autlogos) o ms de un ao se restituye la funcin inmune. Tambin es posi-
ble el empleo de clulas madre de cordn con la misma finalidad.

3. Investigaciones Realizadas
Las clulas madre extradas del cordn umbilical, pueden ser muy eficaces para
tratar leucemias agudas y crnicas, anemia hereditaria, anemia aplstica o adqui-
rida; talasemia (as se llama a la alteracin de la hemoglobina que provoca anemias
severas).

Diabetes
Cientficos llevan tiempo trabajando con la idea de que es posible superar la
diabetes mediante un trasplante de clulas madre. Un grupo de cientficos de
la Universidad de Harvard, en Estados Unidos ha anunciado que ha encontra-
do un compuesto qumico capaz de convertir las clulas madre pancreticas
en clulas betas generadoras de insulina.

24
 Alzheimer, Enfermedad de Lou Gehrig y Enfermedad de Huntington

Investigadores estn estudiando mecanismos diferentes para aproximarse a

estas enfermedades a travs de la terapia celular.
En el caso de la Enfermedad de Lou Gehrig, conocida tambin como Esclero-
sis lateral amiotrfica y la cual se caracteriza por una destruccin progresiva
de las funciones motoras que lleva a la parlisis y muerte, los cientficos han
usado las clulas madre para restaurar las propiedades naturales a las clulas
y as poco a poco el paciente pueda recuperar su movilidad.

Parkinson

El objetivo para tratar este mal es transformar las clulas madre de tal forma
que hagan el papel de las neuronas (las clulas tpicas del sistema nervioso),
luego que sobrevivan y funcionen como productoras de dopamina.

Lesiones de la espina dorsal

Las clulas madre pueden ayudar a reparar el tejido de la espina daado y

reparar las funciones de movilidad.
En un estudio publicado en el Journal of Neuroscience, cientficos del Krembil
Neuroscience Center en el Toronto Western Research Institute y la University
of Toronto concluan esto luego de haber experimentado con ratas.
Se transplantaron cellas del cerebro a los animales que luego viajaron a tra-
vs de la espina de las ratas, se incorporaron al tejido daado y se desarrolla-
ron como el tipo de clula destruida en el sitio lesionado. All, produjeron
mielina.
El estudio mostr que las ratas que pudieron restaurar su mielina en la espi-
na lesionada mostraron alguna recuperacin y caminaron con ms coordina-
cin.

Derrame cerebral

Investigadores estn estudiando si pueden recuperarse las partes daadas

provocadas por derrame del cerebro, con clulas madre.
Los cientficos intentaron transplantar clulas madre a ratones para tratar la
prdida de masa cerebral despus de un ataque cerebral severo. En los estu-
dios, las clulas transplantadas no slo sobrevivieron, sino que migraron a las
reas daadas del cerebro confirmando que son atradas por las zonas con
enfermedades y su potencial para regenerarlas.

Enfermedades del corazn

De acuerdo con el National Institutes of Health, las clulas madre tambin se
pueden transformar en nuevas clulas del corazn y en clulas vasculares del
endotelio, por lo que los cientficos estn explotando esta habilidad con la

25
 meta de proveer tejido de reemplazo a un corazn daado.
De hecho, los investigadores ya estn pensando en que los pacientes en ries-
go de padecer algn infarto donen sus clulas por adelantado, para que stas
sean genticamente programadas y usadas cuando las necesiten sin llegar a
una emergencia.

Artritis
Investigadores identificaron clulas madre con capacidad para convertirse en
condrocitos, clulas que envuelven los cartlagos, en los huesos de personas
incluso mayores de 75 aos.

Quemaduras
Se estn estudiando tcnicas basadas en la terapia con clulas madre para
tratar quemaduras que pueden daar extensas partes de la piel y provocar
marcas en el tejido y prdida de funciones, como por ejemplo falta de tacto.
Estas clulas madre tienen la propiedad de poder transformarse en keratino-
citos, clulas de la piel con funciones especficas que pueden regenerar el te-
jido.
Un ensayo de investigadores de Rice University asegura que la membrana
amnitica fetal ha sido probada como un tratamiento efectivo para las cr-
neas qumicamente quemadas.
Por otro lado la Internacional Society or Stem Cell Research (ISSCR), asegura
que la regeneracin de la retina sera posible con clulas madre aisladas de
los ojos, lo cual puede llevar a una posible cura para el dao a la vista.
En resumen, las expectativas del uso de las clulas madre en medicina son al-
tas y han estimulado un enorme inters y conseguido grandes recursos para
su investigacin. Si bien en reas como el trasplante hematopoytico ya han
dado resultados muy positivos permitiendo tratar con xito a muchos pacien-
tes, la mayora de otras aplicaciones potenciales est en una fase preclnica.
Es esperable que en un futuro no muy lejano veamos la madurez en reas es-
pecficas de la medicina regenerativa y la incorporacin de otras patologas a
este campo.
El estudio de las terapias con clulas madre es verdaderamente apasionante,
pero siguen existiendo problemas tcnicos significativos que slo podrn ser
superados con aos de investigacin intensiva.

Controversias en el uso de las Clulas Madre

La controversia sobre las clulas madre es el debate tico sobre las investiga-
ciones de la creacin, uso y destruccin de las clulas madres embrionarias.
La oposicin a las investigaciones dice que esta prctica puede llevar a la clo-
nacin y fundamentalmente a la desvalorizacin de la vida humana. Contra-

26
riamente, las investigaciones mdicas opinan que es necesario proceder con
las investigaciones de las clulas madre embrionarias porque las tecnologas
resultantes podran tener un gran potencial mdico, y que el exceso embrio-
nario creado por la fertilizacin in vitro puede ser donado para las investiga-
ciones.
Esto en cambio, produjo conflictos con el movimiento Pro-Life (Pro-Vida),
quienes adjudican la proteccin de embriones humanos.
El constante debate ha hecho que autoridades de todo el mundo busquen re-
gularidad en los trabajos y marquen el hecho de que las investigaciones de
las clulas madre embrionarias representan un desafo tico y social.
De acuerdo con muchas religiones y sistemas ticos, la vida comienza en la
fecundacin. Segn sus argumentos, cualquier medida intencional para dete-
ner el desarrollo despus de la concepcin se considera como la destruccin
de una vida humana. Otros crticos no tienen un problema moral con la inves-
tigacin con clulas madre, pero tienen miedo de un precedente para la expe-
rimentacin humana. Algunos crticos apoyan la idea de la investigacin, pero
quieren que se impongan estrictas normas legales que impidan la experimen-
tacin gentica, como la clonacin y que garanticen que los embriones slo se
obtengan a travs de fuentes apropiadas. Prevenir que la investigacin con
clulas madre se convierta en una pendiente resbaladiza hacia experimentos
genticos humanos es considerado por la mayora de la sociedad un punto
importante en la controversia de las clulas madre.
Dentro de la comunidad mdica, existen diferentes posturas, entre ellas que
los blastocitos o embriones son organismos vivos que dentro de 9 meses se-
rn seres humanos con derechos, por esto, no es tico destruir el blastocito o
embrin para obtener las clulas madre, mientras que otros consideran que
en la edad temprana de un embrin lo que se tiene es un brote de clulas con
su masa interna.

27
28
Captulo 5.

ltimos avances

1. Clulas madre derivados del Amnios: en busca de las

aplicaciones clnicas
En el prometedor campo de la medicina regenerativa, las clulas madre perinatales
son de gran inters como las clulas madre con potencial de aplicaciones clni-
cas. Las clulas madre perinatales puedan ser aislados de la placenta humana que
normalmente se desecha, que son una fuente de clulas ideal en trminos de dis-
ponibilidad, el menor nmero de preocupaciones de carcter tico, menos dao en
el ADN, y as sucesivamente. Numerosos estudios han demostrado que algunas de
las clulas derivadas de la placenta poseen caractersticas de clulas madre pluri-
potentes, como la capacidad de diferenciacin, en particular en amniticas epitelia-
les (AE) clulas. El epitelio amnitico humano contiene un nmero relativamente
grande de clulas madre con marcadores positivos clulas como una fuente de c-
lulas madre de adultos. En esta revisin, se introduce un modelo de teora de por
qu las clulas AE tantas poseen caractersticas de clulas madre. Tambin descri-
be el trabajo previo sobre las aplicaciones teraputicas y discutir la pluripotencia
de las clulas AE y peligros potenciales para el amnios derivados de la investiga-
cin con clulas madre.

2. Las clulas madre mesenquimales y el tratamiento

del lupus eritematoso sistmico:
Los pacientes con lupus eritematoso sistmico (LES) se mantienen en mayor riesgo
de muerte prematura, sobre todo entre los adultos jvenes. Hasta el 45% de los
casos presentan dao temprano rgano final, relacionado con la actividad persis-
tente o enfermedad renal. La afectacin renal, que ocurre en 40 a 50% de los pa-
cientes en la mayora de series, se asocia con tasas de mortalidad de aproximada-
mente ocho veces mayor de lo esperado, y se mantiene slo en parte responde a
los mejores tratamientos disponibles. De hecho, el tratamiento con ciclofosfamida
no ha mejorado la supervivencia del paciente en comparacin con los corticoste-
roides, y el mayor ensayo controlado comparando el micofenolato mofetilo con

29
ciclofosfamida intravenosa en nefritis lpica alcanzaron la remisin completa en
slo el 8,6% y 8,1% de los pacientes, respectivamente. Sin lugar a dudas hay una
necesidad de tratamientos ms eficaces y seguros para el LES.

3. Terapia celular con troncales mesenquimales para la

atenuacin de la formacin de cicatrices durante la
cicatrizacin de la herida
Las cicatrices son una consecuencia de cicatrizacin de heridas cutneas que pue-
den ser tanto antiesttico y perjudicial para la funcin del tejido. El tejido cicatri-
cial se genera por deposicin excesiva de tejido de la matriz extracelular por los
fibroblastos de curacin de heridas y miofibroblastos, y aunque es inferior a la piel
no lesionada, es capaz de restablecer la integridad de la frontera entre el cuerpo y
su entorno. La cicatrizacin no es un proceso necesario para reparar los tejidos
drmicos. Ms bien, el tejido cicatricial se forma debido a los mecanismos especfi-
cos que se producen durante el proceso de cicatrizacin de heridas de adultos y
son modulados principalmente por la respuesta inflamatoria en el sitio de la lesin.
Clulas madre adultas derivadas de tejido mesenquimal, que participa en el proce-
so normal de cicatrizacin, son mediadores trficos de la reparacin de teji-
dos. Estas clulas participan en la atenuacin de la inflamacin en la herida y la
reprogramacin de las clulas inmunes residentes de curacin y de la herida para
favorecer la regeneracin de tejidos y de inhibir la formacin de tejido fibrti-
co. Como resultado, estas clulas se han considerado y probado como un posible
candidato para una terapia celular para promover la menor cicatrizacin de heri-
das. Donde se determina que los mecanismos especficos por los cuales las clulas
madre mesenquimales pueden limitar la fibrosis de los tejidos y se resumen re-
cientes in vivo estudios en los que estas clulas se han utilizado con xito para limi-
tar la formacin de cicatrices.

4. Generacin de clulas pluripotentes inducidas en en-

fermedades especficas de pacientes con cariotipos
diferentes del sndrome de Down
El sndrome de Down (SD), la principal causa de retraso mental, es causado por la
trisoma de todos o algunos de cromosoma 21 humano, e incluye tres cariotipos
bsicos: la trisoma 21, la translocacin y mosaicismo. La derivacin de DS espec-
ficos de las clulas madre pluripotentes inducidas (iPSCs) nos proporciona nuevos
modelos de DS que se pueden utilizar para determinar el mecanismo de DS y de
elaborar enfoques teraputicos para los pacientes con SD.

Mtodos

30
 En el presente estudio, los fibroblastos de pacientes con sndrome de Down
de diferentes cariotipos fueron reprogramadas en iPSCs a travs de la sobre-
expresin de cuatro factores: Oct4, Sox2, Klf4 y c-Myc, mediante el uso de
vectores lentivirales. Las capacidades de la IPSC-DS en la autorrenovacin y
pluripotencialidad in vitro y in vivo fueron examinados.

Resultados

El IPSC-DS mostraron caractersticas similares a las de clulas madre em-

brionarias humanas, en particular, la morfologa, el marcador de superficie
(SSEA4, TRA-1-60 y TRA-1-81) la expresin, pluripotentes especficas de fac-
tores de transcripcin-los niveles de expresin, y la metilacin estado del
promotor OCT4. La pluripotencia de IPSC-DS Tambin se ensay in vitro y in
vivo . Cuerpos embrionarios se formaron y mostraron la expresin de marca-
dores diferenciados para tres capas germinales. Por otra parte, IPSC-DS for-
man teratomas cuando se inyectan en clsicos no obesos diabticos combi-
nada severa inmunodeficientes (NOD-SCID) los ratones.

Conclusiones

iPSCs fueron generados a partir de pacientes con sndrome de Down. Los

iPSCs derivados de diferentes tipos de sndrome de Down pueden ser utiliza-
dos en el modelado de DS, la optimizacin de la atencin al paciente, el des-
cubrimiento de frmacos, y, finalmente, las terapias de reemplazo celular au-
tlogo.

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