Manual de Prácticas Biología 02092016

PRCTICA No.
TEORIA DE LA GENERACIN ESPONTNEA
OBJETIVO:
El alumno ser capaz de comprender la teora de la generacin espontnea, as
como el proceso por el cul los microorganismos se originan de materiales inertes.
INTRODUCCIN.
Pueden los microorganismos originarse a partir de materiales inertes o lo

hacen a partir de microorganismos preexistentes?. En esta prctica el alumno
tendr la oportunidad de explorar por si mismo el problema.
MARCO TERICO.
El origen de la vida
El origen de la vida ha tenido en todas las civilizaciones una explicacin cuyo

denominador comn era la intervencin divina. La ciencia, sin embargo, ante esta
gran pregunta necesitaba buscar causas, reglas o mecanismos que dieran a ese
hecho una justificacin constatable.
La generacin espontnea de la vida fue una teora autorizada y desautorizada

consecutivamente en varias ocasiones entre 1668 y 1862, ste ltimo ao en que
se disip la incgnita. En 1668 el mdico italiano Francesco Redi demostr que las
larvas de mosca de las carnes en descomposicin se producan a causa de
puestas previas, y no espontneamente por la propia carne. La generacin
espontnea quedaba en parte desautorizada (no exenta de polmica) a pesar del
1
arraigo que esa teora tena en la historia de la biologa.
La polmica sobre la generacin espontnea se aviv an ms cuando en 1677

Antoni Van Leeuwenhoek, un fabricante de microscopios y pionero en
descubrimientos sobre los protozoos, desautoriz de nuevo la antigua teora
cuando experiment sobre microorganismos slo visibles al microscopio, ante la
aparente constatacin de que estos seres aparecan espontneamente en los
alimentos en descomposicin. Demostr que las pulgas y gorgojos no surgan
espontneamente a partir de granos de trigo y avena, sino que se desarrollaban a
partir de diminutos huevos.1,2,3
Tuvieron que transcurrir cien aos para que en 1768 el fisilogo italiano Lazzaro
Spallanzani (fundador de la biologa experimental) demostrase la inexistencia de
generacin espontnea. Hirviendo un caldo que contena microorganismos en un
recipiente de vidrio, y cerrndolo despus hermticamente para evitar la entrada
de aire, el lquido se mantuvo claro y estril. Los inmovilistas de esa poca no
dieron validez al experimento, a pesar de su rotundidad, y expusieron como
argumento que se haba alterado el aire del interior del recipiente por efecto del
calor, eliminando los principios creadores de la vida.
El problema segua sin resolverse definitivamente en la segunda mitad del siglo

XIX, hasta que el bilogo francs Louis Pasteur se propuso emprender una serie
de experimentos para solventar la cuestin de la procedencia de esos
microorganismos que, en apariencia, se generaban espontneamente. En 1862
Pasteur lleg a la conclusin de que los grmenes penetraban en las sustancias
procedentes de su entorno. Ese descubrimiento dio lugar a un debate feroz con el
bilogo francs Flix Pouchet, y ms tarde con el respetado bacterilogo ingls
Henry Bastion; ste ltimo mantena que la generacin espontnea poda darse en
condiciones apropiadas. Una comisin de la Academia de Ciencias acept
oficialmente en 1864 los resultados de Pasteur, a pesar de ello los debates
duraron hasta bien entrada la dcada de 1870.
En la actualidad, la base de referencia de la teora evolutiva del origen de la vida

se debe al bioqumico sovitico Alexandr Ivnovich Oparin, aunque el britnico
John Burdon Sanderson Haldane sostuvo una idea similar. Oparin postul en 1924
que las molculas orgnicas haban podido evolucionar reunindose para formar
sistemas que fueron hacindose cada vez ms complejos, quedando sometidos a
las leyes de la evolucin. Segn esta teora, los ocanos contenan en sus
orgenes gran cantidad de compuestos orgnicos disueltos. En un proceso que
requiri mucho tiempo, esas molculas se fueron agrupando en otras mayores y
stas a su vez en complejos temporales. 2
Alguno de esos complejos se convirti en un protobionte tras adquirir una serie de

propiedades, por las cuales poda aislarse e introducir en su interior ciertas
molculas que le rodeaban y liberar otras. Las funciones metablicas, la
reproduccin y el crecimiento habran aparecido despus de que el protobionte
adquiriera la capacidad de absorber e incorporar las molculas a su estructura,
para finalmente conseguir separar porciones de s mismo con iguales
caractersticas.
La teora de Oparin fue experimentada con validez por Stanley Miller en 1953,
como parte de su tesis doctoral dirigida por H. Urey; consiguiendo obtener
compuestos orgnicos complejos despus de reproducir las condiciones primitivas
del planeta en un aparato diseado al efecto.
Miller cre un dispositivo, en el cual la mezcla de gases que imitan la atmsfera

primitiva, es sometida a la accin de descargas elctricas, dentro de un circuito
cerrado en el que herva agua y se condensaba repetidas veces. Se producan as
molculas orgnicas sencillas, y a partir de ellas otras ms complejas, como
aminocidos, cidos orgnicos y nucletidos.
Se abri as camino a la obtencin de numerosas molculas orgnicas. En

condiciones de laboratorio se han conseguido sintetizar azcares, glicerina,
aminocidos, polipptidos, cidos grasos, o porfirinas que es la base de la clorofila
y hemoglobina, etc.
Una condicin indispensable para la evolucin de la vida a partir de materia

orgnica no viva, era la existencia de una atmsfera terrestre carente de oxgeno
libre. En opinin de Haldane, que sostena esa idea, durante el proceso
biogentico los compuestos orgnicos no podran ser estables en una atmsfera
oxidante (con O2); seran los organismos fotosintticos los que posteriormente
produciran el O2 atmosfrico actual.1,2,5,3
En resumen, la vida surgi en unas condiciones ambientales muy distintas a las

actuales, las de la Tierra primitiva, a partir de molculas orgnicas que no
competan con ningn otro organismo vivo. Mediante la intervencin de la
2,5
seleccin natural se habran ido diversificando hasta los actuales organismos.
MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO
8 matraces de 150 ml.

600 ml de caldo nutritivo
Tubo de vidrio recto de 8 a 10 cm. de largo
Tubo de vidrio en forma de S, de 8 a 10 cm de largo
Parafina o cera para sellar
Algodn
Tapn de goma para un matraz
Papel aluminio
Cuerda o hilo
Autoclave u olla de presin
Bolsas de polipapel
Cinta testigo
Bao Mara
METODOLOGA
Vierta 75 ml de caldo en cada uno de los matraces:

Matraz 1: Tpelo con algodn. No lo caliente.
Matraz 2: Tpelo con algodn. Calintelo suavemente en un bao de agua
hirviendo durante 10 minutos.
Matraz 3: Calintelo suavemente en bao de agua hirviendo durante 10 minutos y
djelo destapado.
Matraz 4: Calintelo suavemente en bao de agua hirviendo durante 10 minutos.
Despus de calentado tpelo con un tapn. Selle el tapn al vidrio con cera o
parafina.
Matraz 5: Colquelo en la olla de presin o en el autoclave durante 15 minutos a
una presin de 15 libras. Despus de esterilizarlo, destapelo.
Matraz 6: Tpelo con algodn. Cubra el tapn de algodn y el cuello del matraz
con una o dos capas de papel aluminio. Amrrelo fuertemente. Colquelo en la
olla de Presin o en el autoclave como hizo con el matraz 5.
Matraz 7: Tpelo con algodn a travs del cual se ha insertado un tubo de vidrio
recto. Colquelo en la olla de presin o en el autoclave como hizo con el anterior.
Matraz 8: Tpelo con algodn a travs del cual se ha insertado el tubo de vidrio en
forma de S . Colquelo en la olla de presin o en el autoclave igual que los
anteriores.
Coloque los matraces en una mesa de trabajo (evite la luz directa del sol) durante
8-10 das. Observe los cambios en los matraces, al principio, diariamente y
despus cada semana. Anote sus observaciones.
SEGUNDA SESIN:
Cuando aparezcan cambios en los matraces, haga una preparacin hmeda de

una gota de caldo y obsrvela al microscopio con el objetivo de menor aumento y
despus con el objetivo de 40 60x. Si tiene dificultades para observar prepare un
frotis coloreado con azul de metileno y use el objetivo de inmersin. Pida
instrucciones a su profesor.
Prepare un cuadro que muestre los datos de observacin y lo que ha sucedido en
cada matraz.
RESULTADOS
Realizar un cuadro que muestre los datos de observacin y lo que ha sucedido en

cada matraz.
CUESTIONARIO
1.- Con base en las observaciones realizadas en los matraces Cules son sus
conclusiones sobre el origen y fuente de los microorganismos.
2.- Que aplicaciones prcticas sugiere este experimento?
3. Plantee una actividad biotecnolgica donde aplique esta prctica.
REFERENCIAS
1.- Carlos M. Barzizza 1949.Microbiologa.

2.- Bowen W. S. 1963. Microbiologa General y aplicada.. Editorial salvat.
3.- Burdon K.L. 1971. Microbiologa editorial Impresora Publi-mex.
4.- Seeley H.W. 1973. Microbios en accin. Manual de laboratorio para
microbiologa. Edit. Blume S.A.
5.- Palieroni N.J. 1970. Principios generales de microbiologa. Edit. Sec. Gral. De
los estado Americanos.
PRCTICA No. 2
FISOLOGA DE PROTOZOARIOS DE VIDA LIBRE
OBJETIVO:
El alumno ser capaz de conocer la estructura y fisiologa que tienen las distintas
formas de protozoarios.
INTRODUCCIN
La mayora de los protozoarios, tanto de vida libre como parsita, se parecen

claramente a los animales en sus hbitos alimenticios, ingieren partculas slidas,
las ingieren y luego las expulsan al exterior. Cuando las amibas o los Paramecium
se desarrollan junto con bacterias en el cultivo de laboratorio, estos se alimentan
de las mismas bacterias. Sin embargo, los organismos parsitos de la clase
Sporozoa se nutren por adsorcin directa de materiales alimenticios solubles a
travs de sus paredes celulares.
A pesar de sus necesidades fisiolgicas especializadas, muchos protozoarios
incluyendo variedades patgenas, pueden crecer en tubos de ensayo en el
laboratorio, en medios enriquecidos con sangre y otras sustancias proteicas
complejas, semejantes a las mezclas utilizadas para el cultivo de bacterias
patgenas.
MARCO TERICO
El reino protoctista abarca una gran cantidad de organismos eucariticos, cuya

diversidad los hace difciles de caracterizar. Los protistlogos calculan que hay
cerca de 200 000 especies de protistas entre extintas y existentes. Estos
organismos comparten su principal caracterstica con los animales, plantas y
hongos: la estructura celular eucaritica. Las clulas eucariticas poseen ncleos
verdaderos y otros organelos delimitados por membrana, como mitocondrias y
plstidos. Su ncleo se divide por meiosis y mitosis, aunque estos procesos
presentan variaciones. Sin embargo, dicha caracterstica hace que la separacin
entre los protistas y el reino monera sea bastante clara. Dentro de este reino, el
tamao de los organismos vara de protozoarios unicelulares a quelpos, algas
cafs gigantes, que pueden alcanzar una longitud hasta de 60 m. Casi todos los
protistas son organismos unicelulares microscpicos. Sin embargo, algunos
poseen una organizacin colonial; otros son cenocticos (multinuclaeados, pero no
multicelulares) y otros multicelulares. Casi todos los protistas multicelulares
poseen una forma corporal simple, sin tejidos especializados.
La palabra protista se deriva del griego que significa el primero. Los protistas
unicelulares realizan todas las funciones en una clula. Por ejemplo La regulacin
de agua con frecuencia es controlada por organelos especficos, llamados
vacuolas contrctiles.
Muchos protistas son de vida libre, en tanto que otros forman sociedades
simbiticas con otros organismos. Tales asociaciones van desde el mutualismo,
donde ambos miembros se benefician, hasta el parasitismo, siendo algunos
protistas importantes patgenos de plantas y animales.
Microscopio
Portaobjetos y cubreobjetos
Goteros
Tubos capilares pipetas Pasteur
Tubos de ensayo
Balanza granataria
Agua destilada
Parrilla
Cultivo de Paramecium
Levadura de pan
cido actico diluido
Lugol
Rojo congo
Solucin de metilcelulosa o gelatina
Probeta de 50 ml
METODOLOGA
1. En un tubo de ensayo colocar un gramo de levadura de pan y disolverla en

50 ml de agua destilada.
2. Hervir durante 5 min. esta mezcla.
3. Aadir 0.1 gr de rojo congo, seguir calentando a fuego lento sin hervir
durante 8 min. (no quemar la levadura). Por ltimo deje enfriar la mezcla.
4. En un portaobjetos, adicionar una gota de gelatina o metilcelulosa y una
gota de cultivo que contenga gran cantidad de Paramecium.
5. Adicionar en uno de los extremos de la gota de cultivo, otra de la
suspensin de levadura.
6. Coloque con cuidado un cubreobjetos, observe al microscopio reduciendo y
abriendo el diafragma hasta observar las vacuolas contrctiles.
7. En un portaobjetos, adicionar una gota del cultivo de Paramecium y con
ayuda de un capilar o pipeta Pasteur, colocar cido actico diluido.
8. Observar inmediatamente al microscopio a seco fuerte y anote lo que
sucedi.
9. Repetir el paso anterior, sustituyendo el cido actico por lugol.
Nota: Para detener el moviemiento del protozoario se puede adicionar una gota
de metilcelulosa o gelatina o grenetina preparada.
RESULTADOS
Se esperan diferentes reacciones al colocarle al cultivo de Paramecium tanto el

lugol como el cido actico.
CUESTIONARIO
1. Qu color tienen las clulas de levadura?
2. mencione, por cul organelo entran las clulas de levadura al
Paramecium? (ingestin)
3. realice un esquema en el que indiquela posicin de las vacuolas contrtiles
en el Paramecium.
4. Explique la funcin de las vacuolas contrctiles.
6.
REFERENCIAS
1. BROCK, T. D. y SMITH, O. W. Microbiologa. Mxico. Prentice may.

Hispanoamericana. 1997
2. CARPENTER, P. L. Microbiologa. Mxico. Interamericana. 1985.
3. VILLE, C. A. ET AL., Biologa 2. Mxico Interamericana. Mc GrAW-Hill.
1992
PRCTICA No. 3
DIFERENCIACION DE CLULAS PROCARIOTES Y EUCARIOTES
OBJETIVO
Observar e identificar microscpicamente las diferencias que existen dentro de los
cuerpos celulares procariotas y eucariotas.
INTRODUCCIN
En la naturaleza existen dos tipos de clulas, una de ellas ha recibido el nombre
de procaritica (del griego antes del ncleo), la otra evolucion de la clula
procaritica y en la actualidad, se encuentra en protistas, vegetales, hongos y
animales, esta recibe el nombre de eucaritica (ncleo verdadero).
La diferencia marcada entre estas dos clulas consiste en que la clula eucaritica
posee material gentico dentro de una estructura limitada por una membrana
nuclear y normalmente otros organelos, mientras que el material gentico de las
procaritas no est dentro de una membrana.
MARCO TERICO
La mayora de los sistemas biolgicos estn formados por unidades llamadas
clulas. Cada clula es una entidad viva completa; la biounidad ms pequea
capaz de mantener una existencia independiente. Este concepto (una de las
doctrinas bsicas unificadoras de la biologa) fue elaborado por Schleiden y
Schwan en 1839, ms de 150 aos despus del primer reconocimiento evidente
de la naturaleza celular de las plantas superiores por Robert Hooke. La nica
excepcin a este conceptos son los virus, que no tienen capacidad de vida
independiente, debido en gran parte a su lapso de vida, pues deben asociarse y
vivir dentro de las clulas a fin de reproducirse, as que no son, en el sentido ms
amplio, verdaderos organismos vivos. 1
Las clulas de los organismos ms simples son capaces de realizar todas las
actividades especficas. Necesitan, por lo tanto, de la capacidad para comunicarse
unas con otras, de manera que las actividades de grupos de clulas
especializadas puedan coordinarse y los productos de un proceso metablico de
un grupo de ellas puedan transferirse a otro grupo para promover el metabolismo.
Cada una de las clulas de un organismo multicelular porta inicialmente, y quiz
por toda su vida, la totalidad de la informacin inmediatamente, por lo tanto, la
clula debe tener algn sistema de seleccin y ciertas instrucciones externas que
la habiliten para seleccionar la informacin apropiada. 2
Es evidente que el organismo influye sobre el patrn de desarrollo de las clulas

individuales o, en otras palabras, el comportamiento de una de ellas es
influenciado por las otras. Para comprender el comportamiento de un organismo,
deben conocerse ntimamente los detalles del comportamiento y capacidades de
las clulas que no constituyen. Inversamente, el estudio de las actividades y
reacciones de una sola clula o de sus partes es una pretensin estril, a menos
que se la estudie en la perspectiva de todo el organismo del que es una parte y el
cual controla y dirige su comportamiento y desarrollo. 3
Las clulas y los organismos formados por ellas, pueden dividirse en dos tipos; las
procariticas (pro, antes y karyotic, que posee ncleo; por lo tanto, clulas que
carecen de ncleo organizado o membrana nuclear) y las eucariticas (eu, bueno;
por lo tanto, clulas que poseen un ncleo bien definido separado del citoplasma
por una membrana). Las bacterias y las algas verdeazules son procariticas, son
pequeas, cercanas a 1 micra de dimetro y muestran comparativamente escasa
organizacin estructural. Las clulas eucarticas son por lo regular mucho ms
grandes (10-100 micras o mayores) y poseen una compleja estructura interna,
inclusive numerosos organelos de funcin especfica. Aunque las clulas pueden
llegar a ser ms y ms complejas con el transcurso del tiempo, es probable que
sean tan simples y sencillas como la complejidad de su comportamiento lo
requiera. Los sistemas biolgicos tienden a menudo a seguir el principio de la
navaja de Occam: la manera ms simple y directa de hacer algo es la ms
idnea. Las formas costosas (en trminos de energa y materia) y complicadas de
hacer las cosas, no tienen la probabilidad de sobrevivir a la evolucin como las
ms simples, para el mismo fin. Este razonamiento (realmente no merece ser
calificado de principio) ha sido til en el estudio y comprensin de los complejos
sistemas de control intracelular e intercelular de organismos pluricelulares. 1,3
La clula es la unidad morfolgica ms pequea todava capaz de vida

independiente, que aparece como organismo autnomo en los seres
monocelulares. En los metazoos forma grandes agregados y es un organismo
elemental o un componente en el marco de la estructura superior.2
La expresin de clula se encuentra por primera vez en Robert Hooke quien en
1667 describi cells, little boxes en tapones de botellas. Originariamente, pues, el
trmino significa estructuras que encierran un hueco. Con el transcurso del tiempo
el concepto cambia hasta adquirir importancia el contenido. 3
La doctrina celular surgida en la segunda mitad del siglo pasado fue

extraordinariamente fructfera. Virchow formul en 1855 el axioma ovnis cellula e
cellula; el concepto de generacin primaria hubo, pues, de ser definitivamente
abandonado. Alrededor de 1875, Strasburger, Btschli y Flemming descubrieron la
divisin nuclear: se haba dado el primer paso hacia la comprensin de la divisin
celular hereditariamente idntica.1La morfologa, la fisiologa y la patologa
dirigieron su atencin hacia la clula.
Adems del ncleo, la clula contiene otras varias formaciones ms pequeas: los
organelos celulares. Estas partculas ayudan a participar en la formacin de
estructuras biolgicas mayores dentro de una clula o por mediacin de una
clula, en la que son englobadas en un organismo dotado de las propiedades de
la vida. La clula es capaz de multiplicacin (capaz, pues, de desarrollo a travs
de mutaciones), es irritable (muestra recepcin de estmulos y respuesta a los
mismos), tiene que mantener su estructura de acuerdo con el segundo principio de
la termodinmica (entropa) con el auxilio de un metabolismo. En la clula y en la
totalidad del organismo, los procesos fisicoqumicos estn ordenados de tal
manera que sirven para la conservacin de estas propiedades. A travs del
metabolismo la clula se halla en relacin con un intercambio mayor de
materiales. Representa un sistema abierto un equilibrio fluido. La clula
contiene el principio del acoplamiento de reaccin que se autorregula. 2,3
La clula a secas no existe. Aparece siempre en una determinada figura,

diferenciacin, determinacin. Ninguna clula muestra simultneamente todas las
diferenciaciones posibles. No obstante, casi todas las clulas tienen en comn
1
algunas formaciones: los organelos celulares.
MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPO
Microscopio de contraste de fase o campo claro.

Puente de tincin.
Pipetas Pasteur.
Asa bacteriolgica.
Mechero Bunsen.
Porta objetos.
Cubreobjetos.
Cristal violeta.
Lugol.
Alcohol-acetona.
Safranina.
Muestra de cebolla blanca, morada y Cambray
Cepa bacteriana pura.
Agua corriente y destilada
Lanceta estril
Agua encharcada
Torundas con alcohol
Azul de metileno
Bistur con navaja
Pinza de diseccin sin dientes
Aguja de diseccin
Orina
Un chcharo
Muestra de semen
Una cepa de un hongo (hongo de tortilla, de pan, de gelatina o de frutas)
Aceite de inmersin
METODOLOGA
Cebolla
1. Colocar en el porta objetos una capa delgada de los diferentes tipos de
cebolla
2. Encima de ellas ponerles cubre objetos.
3. Observar al microscopio con los objetivos 10, 40x y 100x, describir lo
observado y dibujar. Posteriormente, agregar una gota de azul de metileno
a las muestras y observar a 100x.
4. En otro porta objetos, realizar un frotis con una gota de sangre obtenida de
la puncin del dedo pulgar (de la mano contraria a la que utiliza para
escribir), con la lanceta estril. Observar a 10x, 40x y 100x y luego agregar
azul de metileno a la muestra y nuevamente observar a 100x.
Chcharo
1 En otro porta objetos colocar una capa delgada de chcharo
2 Adicionar una gota de lugol
3 Poner un cubreobjetos y observar en el microscopio a 10x y 40x.
Hongo
1 Colocar una gota de azul de metileno en un portaobjetos
2 Tomar una muestra de hifas y esporas de su muestra de hongos, con la
tcnica del diurex (pide apoyo a tu profesor). No colocar cubreobjetos.
3 Observar en el microscopio a 10x y 40x.
Cepa bacteriana
1 Colocar una gota de agua destilada en un portaobjetos
2 Tomar una asada de una cepa pura de bacteria en condiciones aspticas
3 Extender la muestra con el asa en el portaobjetos o realizar un frotis
4 Secar a la flama con un mechero o al aire. Si lo hace a la flama evite
quemar la muestra
5 Realizar una tincin Gram
Tcnica de tincin de Gram (modificada por Hucker)
1. Coloque el frotis en el puente de coloracin.

2. Cubra el frotis con cristal violeta y djelo actuar durante 1 min. Escurra el
colorante y lave con un chorro suave de agua corriente.
3. Cubra el frotis con lugol y deje actuar durante 1 min. Escurra y lave con
agua.
4. Decolore con alcohol-acetona de 5 a 30 seg. y lave con agua corriente.
5. Cubra el frotis con safranina y deje actuar durante 1 min. Escurra y lave con
agua corriente.
6. Deje secar al aire.
7. Repita el proceso anterior con cada uno de los frotis.
8. Observe las preparaciones en el microscopio con el objetivo de 40x,
9. Puedes observar con el objetivo de inmersin
10. Realice esquemas a colores de cada una de las preparaciones observadas
al microscopio.
11. En otro porta objetos realizar un frotis sanguneo y observar al microscopio
12. En otro porta objetos colocar una gota de orina y observar al microscopio
AGUA DE CHARCO
1 En otro porta objetos colocar una gota de agua encharcada
2 Adicionar una gota de azul de metileno o safranina o verde de malaquita
3 Observar al microscopio con el objetivo de 10x y 40x.
RESULTADOS Y CONCLUSIONES
Se observarn diferencias considerables con respecto a las clulas trabajadas.
Dibuje cada muestra observada en el microscopio, compare las clulas e indique
si se trata de clulas procariotas o eucariotas y porque?.
CUESTIONARIO:
1. Esquematice la estructura de la clula procariote y mencione las funciones de
la misma.
2. Esquematice la estructura de la clula eucariote y mencione las funciones de la
misma.
3. Mencione las diferencias entre ambas clulas.
5.
REFERENCIAS
1. AUDESIRK, T. Y GERALD, A. Biologa, la vida en la tierra.4 ed. Mxico.
Prentice Hall. 1996
2. VILLE, C.A. et al., Biologa. 2 ed. Mxico. Interamericana McGraw-Hill.
1992
3. BROCK, T. D. y SMITH, O. W. Microbiologa. Mxico. Prentice-Hall
Hispanoamericana.1987
PRCTICA No. 4
EFECTO DE LA PRESIN OSMTICA EN LA GERMINACIN
OBJETIVO
El alumno ser capaz de observar el efecto que tienen diferentes presiones
osmticas sobre la germinacin de la semilla, en diversas soluciones.
INTRODUCCIN
El paso de las molculas al interior de las clulas est regida por la permeabilidad
de las membranas, siguiendo las leyes de difusin en algunos compuestos,
cuando las molculas no penetran por difusin lo hacen por smosis.
La presin osmtica es la fuerza que se requiere para equilibrar la tendencia del

agua a moverse desde una solucin con una concentracin ms alta de molculas
libres de agua; hacia una ms baja.
MARCO TERICO
La presin osmtica es la propiedad coligativa ms importante por sus
aplicaciones biolgicas, como son medios lquidos del organismo (sangre, lquidos
intersticiales e intracelulares) que en conjunto constituyen lo que se ha llamado
medio interno. El medio interno se considera dividido en compartimentos que
contienen disoluciones diferentes, separadas por membranas de propiedades
caractersticas, cuyo estudio fisiolgico requiere un conocimientos fisicoqumico
preciso de la presin osmtica as como de difusin y smosis.
La difusin es un proceso por el cual las molculas de un gas, un lquido o un

slido, tienden a alcanzar una distribucin homognea a todo el espacio que les
es accesible. Por difusin, las molculas del soluto tienden a esta homogeneidad
en el seno del disolvente, lo que se alcanza al paso de un cierto tiempo. Al poner
en contacto dos disoluciones acuosas por ejemplo de NaCl y KNO 3, los solutos
difunden en toda su masa, esencialmente de la misma manera que difunden dos
gases encerrados en recipientes que comunican libremente.
La difusin a travs de la membrana es el tipo de difusin de mayor importancia

biolgica, porque la presencia de membranas de las ms variadas caractersticas
condiciona el paso de disolvente y disoluciones en todas las estructuras celulares.
Por eso se estudian los fenmenos de difusin y permeabilidad en la fisiologa,
desde la gnesis de potenciales elctricos en la clula nerviosa hasta los ms
elementales mecanismos de secrecin glandular2.
Las membranas biolgicas o artificiales, se han definido aproximadamente como

estructuras laminares caracterizadas por poros de determinadas dimensiones. El
comportamiento de la membrana frente a determinadas circunstancias depende
fundamentalmente de la relacin entre el dimetro de los poros y el dimetro de
las partculas. La presencia de una membrana separando dos medios diferentes,
determina ciertas restricciones en el proceso de difusin de las sustancias 3.
Las membranas se clasifican esquemticamente en cuatro grupos fundamentales-
impermeables, dialticas y permeables- segn sus propiedades referentes a la
filtracin y smosis. En Fisiologa, al hablar de disolvente, prcticamente en todos
los casos, se refiere al agua, pero los solutos pueden ser muy variables:
coloidales, como protenas y polisacridos; verdaderos, de tipo salino o molecular
como NaCl, KHCO3, glucosa, urea, etc.3
Membranas impermeables. Son aquellas que no las pueden atravesar ni el

disolvente, ni los solutos; por ejemplo, aunque no en un sentido muy riguroso, los
tegumentos.
Membranas semipermeables. Las pueden atravesar libremente el agua, pero no
permiten el paso de solutos verdaderos o cristaloides de ninguna clase. Son
ejemplos conocidos las membranas de pergamino o de ferrocianuro cprico.
Membranas dialticas. Son permeables al agua y a solutos verdaderos pero no las
atraviesan los solutos coloidales por ejemplo las membranas de colodin, celofn
o el endotelio capilar.1
Membranas permeables. Permiten el paso de agua y disoluciones verdaderas y
coloidales y slo son impermeables a las dispersiones groseras. Son ejemplos
tpicos los filtros de arcilla y el papel de filtro hmedo. 1
Las membranas biolgicas en general, aunque pueden incluirse en algunos de

estos grupos para sistematizar conceptos, en realidad no encajan estrictamente en
ninguno de ellos porque son de propiedades intermedias. Adems, las membranas
celulares junto a sus propiedades de permeabilidad comparables a las de
membranas artificiales, presentan otro fenmeno que es la variabilidad selectiva.
Es decir, el paso de sustancias est condicionado en parte, por los fenmenos
metablicos de la membrana o el protoplasma que modifican el tipo de difusin
que sera previsible atendiendo slo a sus propiedades fisicoqumicas. 1,2
smosis. Es la difusin de lquidos a travs de membranas. Supongamos dos

disoluciones de concentracin desigual, por ejemplo NaCl 1M y 2M
respectivamente, separadas por una membrana semipermeable que como se ha
dicho, permite el paso de agua pero no de sal. El agua tiende a atravesar la
membrana, pasando de la disolucin ms diluda a la ms concentrada, es de
decir, en el sentido de igualar las concentraciones. Y si los volmenes de las dos
disoluciones indicadas fueran iguales, el equilibrio se alcanzara cuando a los
lados de la membrana se llegase a la misma concentracin (1.5 M ) de sal. 1,3
La tendencia a igualarse las concentraciones que est en correspondencia con la

presin osmtica, se explica segn el segundo principio de la Termodinmica, por
la existencia de una diferencia en la presin de vapor. Esto es lo que en rigor
podemos considerar como esencial para el concepto de presin osmtica que no
es en s misma una presin mecnica ejercida por las partculas del soluto sobre
las paredes de la vasija, como supona la teora del bombardeo y no est de ms
puntualizarlo as, desde el principio para precisar conceptos pues que vara valorar
la presin osmtica se hace referencia con frecuencia a sus efectos mecnicos. 1
MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPO

Soluciones de sacarosa (no electrolito) 0.0 M; 0.1 M; 0.2M; 0.3M; 0.4M;
0.5M; 0.6M.
Cloruro de sodio (electrolito) 0.0 M; 0.1 M; 0.2M; 0.3M; 0.4M; 0.5M; 0.6M.
Agua destilada
Algodn
Cajas de Petri
Semillas de trigo, frijol o acelga
Caja de cartn
METODOLOGA
Colocar en las cajas de Petri una capa delga de algodn y humedecer con
agua y las soluciones abundantemente (0.0 M; 0.1 M; 0.2M; 0.3M; 0.4M;
0.5M; 0.6M.). Colocar de 3 a 5 ml de una de las soluciones por cada caja
dependiendo si son cajas pequeas o grandes.
Poner dos repeticiones para cada concentracin (0.0 M; 0.1 M; 0.2M; 0.3M;
0.4M; 0.5M; 0.6M.)
Colocar enseguida de 5 a 10 semillas por caja dependiendo del tamao de
la caja
Las semillas debern estar dentro de un ambiente tibio y obscuro
Observar cada 24 horas y anotar el nmero de semillas germinadas
Observar por 5 das y medir diariamente ( si es necesario) el tamao de la
plntula
Graficar los datos de concentracin contra el porcentaje de geminacin.
RESULTADOS
Las reacciones de las semillas ante las diversas concentraciones de sacarosa o
cloruro de sodio se reflejarn en la morfofisiologa de la semilla-pltula.
CUESTIONARIO
1.Esqumatiza la membrana celuluar tpica de una clula
2.Qu significa transporte activo y transporte pasivo?
3. Anote 2 ejemplos de transporte activo y 2 de pasivo en una clula
REFERENCIAS
1. AUDESIRK, T. Y GERALD, A. Biologa, la vida en la tierra. 4 ed. Mxico.
Prentice-Hall. 1996
2. VILLE, C.A. et al., Biologa. 2 ed. Mxico. Interamericana McGraw-Hill.
1992
PRCTICA No. 5
EXTRACCIN DE ADN
OBJETIVO:
El alumno ser capaz de extraer el cido Desoxirribonucleico (ADN) de un tejido

animal; as como confirmar su estructura fibrilar y el repliegue del ncleo.
INTRODUCCIN
El ADN est formado por un polmero de nucletidos. Cada nucletido contiene

una base nitrogenada que consiste en una purina (adenina o guanina) o una
pirimidina (citosina o timina). Las bases se unen mediante enlaces covalentes a la
desoxirribosa (azcar de 5 carbonos). La cadena polimrica est unida mediante
grupos fosfato, que unen al carbono 5 de la desoxirribosa de un nucletido con el
carbono 3 de la desoxirribosa del nucletido adyacente. Cada molcula de ADN
est compuesta por dos cadenas de polinucletidos, que forman una estructura de
doble hlice. Las dos cadenas se extienden en direccin opuesta, de manera que
en cada exttremo de la molcula del ADN, una cadena expone un carbono 5
desoxirribosa y la otra cadena expone un carbono 3 desoxirribosa. Por lo tanto,
las cadenas son antiparalelas entre s.
MARCO TERICO
La existencia de material gentico capaz de replicacin, almacenaje, expresin y

mutacin se deduce de los patrones de herencia observados en los organismos.
Tanto las protenas como los cidos nuclicos se consideraron, inicialmente,
candidatos posibles para el material gentico. Las protenas son ms diversa que
los cidos nuclicos, un requerimiento del material gentico, y se vieron
favorecidas debido a los avances en la qumica de protenas que se hicieron esa
poca.
En 1952, estudios y experimentos de transformacin hechos en bacterias

infectadas por bacterifagos sugirieron firmemente que el AND es el material
gentico en bacterias y en la mayora de los virus.
Inicialmente, solo evidencias circunstanciales apoyaban la idea de que el ADN

controlaba la herencia en eucariotas. stas incluan la distribucin del ADN en la
clula, anlisis cuantitativos de ADN, y estudios de mutagnesis inducida por UV.
Las recientes tcnicas de ADN recombinante, as como experimentos con ratones
transgnicos, han proporcionado pruebas experimentales directas de que el ADN
es el material gentico en eucariotas.
El establecimiento del ADN. Como material gentico prepar el terreno para la

expansin de la investigacin en gentica molecular, y ha servido de piedra
angular para importantes investigaciones durante medio siglo.
Un hgado de pollo
Una varilla de vidrio
Un mortero
Vasos de precipitado de 250 ml
Pipeta graduada de 10 ml
Probeta de 50 ml
Alcohol 96
Cloruro de Sdico al 2 M
SDS Jabn lquido
Arena de mar perlas de vidrio
Trozo de gasa
Microscopio
Colorantes bsicos
Portaobjetos
cubreobjetos
METODOLOGA
Triturar medio hgado de pollo en un mortero.

Aadir arena o las perlas de vidrio, para que al triturar se puedan romper
las membranas y queden los ncleos sueltos.
Aadir al triturado, 50 ml de agua corriente.
Remover hasta hacer una especie de papilla o pur.
Filtrar varias veces sobre una gasa, para separar los restos de tejidos que
hayan quedado por romper.
Medir el volumen del filtrado con la probeta.
Aadir al filtrado un volumen igual de cloruro sdico al 2 M (esto para seguir
produciendo el estallido de los ncleos para que queden libres las fibras de
cromatina.
A continuacin, aadir 2 ml de SDS jabn lquido (se recomienda DAWN)
(la accin de este detergente es formar un complejo con las protenas y
separar las del ADN. As quedar libre de las protenas que tiene asociadas.
Aadir mediante una pipeta 50 ml de alcohol del 96. (se debe hacer de tal
forma que el alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos
capas. Es decir adiconar lentamente el alcohol. No agitar. En la
interfase, precipita el ADN.
Introducir una varilla de vidrio e ir moviendo en la misma direccin.
NOTA: esta prctica puede complementarse con una tincin especfica de ADN.
Se debe tomar una muestra de las fibras que se van depositando sobre la
varilla de vidrio y depositarlas sobre un portaobjetos y cubrirlas con un
cubreobjetos.
Teir durante unos minutos con un colorante bsico
Observar al microscopio
RESULTADOS
Sobre la varilla se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que
son el resultado de la agrupacin de muchas fibras de ADN.
CUESTIONARIO
1. Cmo defines al DNA?
2. Menciona el fundamento del uso del alcohol en esta prctica y el por qu de

la concentracin del mismo.
3. Qu otros compuestos estaras esperando encontrar dentro de la muestra

a parte del DNA?
REFERENCIAS
1.- GARDNER E. (1985) Principios De Gentica. Limusa. Mxico
2.- BARAHONA A. Y DANIEL PIERO (1994). Gentica: Continuidad De La

Vida.
SEP-CONACYT-FCE. Mxico (La Ciencia Desde Mxico).
3.- SMITH-KEARY (1979). Gentica. Estructura Y Funcin.Publicaciones

Cultural.Mxico
4. Ville C.A., Solomon E. , Davis P.W. 1987 El Fascinante Mundo De La

Biologa. Vol. 3. Primera Edicin, Ed. Nueva Editorial Interamericana S.A. De
C.V. Mxico, D.F. Pg. 252-260. 472-475
PRCTICA No. 6
FIGURAS MITTICAS EN PICES DE RAZ DE HABA
OBJETIVO:
El alumno ser capaz de cuantificar el nmero de cromosomas en pices de

cebolla durante el proceso de mitosis.
INTRODUCCIN.
Es la divisin celular que consiste en que a partir de una clula se obtienen 2

clulas hijas, genticamente idnticas a la madre. Se produce en cualquier clula
eucarionte, ya sea diploide o haploide y como mantiene invariable el nmero de
cromosomas, las clulas hijas resultarn diploides, si la madre era diploide o
haploide. La divisin del citoplasma se llama citocinesis, y la divisin del ncleo,
cariocinesis. Algunas clulas no realizan mitosis y permanecen en un estado
interfsico, pero otras la realizan frecuentemente (clulas embrionarias, clulas de
zonas de crecimiento, clulas de tejidos sujetos a desgaste.).
MARCO TERICO
MITOSIS
Es la divisin celular que consiste en que a partir de una clula se obtienen 2
clulas hijas, genticamente idnticas a la madre. Se produce en cualquier clula
eucarionte, ya sea diploide o haploide y como mantiene invariable el nmero de
cromosomas, las clulas hijas resultarn diploides, si la madre era diploide o
haploide. La divisin del citoplasma se llama citocinesis, y la divisin del ncleo,
cariocinesis. Algunas clulas no realizan mitosis y permanecen en un estado
interfsico, pero otras la realizan frecuentemente (clulas embrionarias, clulas de
zonas de crecimiento, clulas de tejidos sujetos a desgaste.).
Funcin: crecimiento y desarrollo del organismo multicelular, y la regeneracin de
tejidos expuestos a destruccin de clulas. En unicelulares, cumple la funcin de
reproduccin asexual.
Cada mitosis est precedida por una interfase, donde se produce la duplicacin
del material gentico. Acta como un mecanismo que asegura que cada clula hija
reciba la misma informacin gentica.
Etapas: Profase, Prometafase, Metafase, Anafase y Telofase.
1. PROFASE: La cromatina se condensa para formar los cromosomas y los 2
centrolos migran a polos opuestos organizando un sistema de microtbulos
(aparato mittico) para permitir la migracin de los cromosomas. El aparato
mittico est constituido por:

Centrolos: Estn rodeadas por el centrosoma. A medida que cada centrolo
migra, tiene un hijo y cuando llega al polo se ven 2.

steres: Conjunto de microtbulos cortos que se extienden desde cada
centrolo.

Huso acromtico: Tiene forma de ovoide y formado por muchos
microtbulos sin ramificaciones.
Cada cromosoma est constituido por 2 cromtidas unidas por el centrmero. La
envoltura nuclear se desorganiza y sus fragmentos no se distinguen del retculo
endoplasmtico. Desaparece el nucleolo.
1.
PROMETAFASE: Los cromosomas condensados migran hacia la placa
ecuatorial del huso acromtico.
2.
METAFASE: Los cromosomas se alinean en el plano ecuatorial, y cada uno
estn unido por su centrmero a una fibra del huso acromtico.
3.
ANAFASE: Las 2 cromtides de cada cromosoma se separan por fisin del
centrmero y se dirigen hacia polos opuestos. El movimiento de los
cromosomas hijos hacia los polos se debe a un acortamiento de las fibras
cromosmicas y se alargan las fibras interzonales.
4.
TELOFASE: El huso mittico y los steres se desorganizan. Alrededor de
cada grupo cromosmico se organiza una envoltura nuclear a partir del
retculo endoplasmtico y de la envoltura original. Los cromosomas se
dispersan y retoman el aspecto de cromatina que tenan antes de iniciarse
1,2,3
la divisin. Los nucleolos reaparecen a partir de sus organizadores.
Citocinesis:
1. La divisin del citoplasma se produce junto con la telofase. Se produce un
surco en la membrana plasmtica, producidos por un anillo de
microfilamentos unidos a ella. Las 2 clulas hijas se separan,
distribuyndose el hialoplasma y los organelos de un modo equitativo.
2. Cuando no ocurre citocinesis luego de la cariocinesis, los dos ncleos
quedan en el mismo citoplasma y resulta una clula binucleada.
Divisin en clulas vegetales:

No hay centrolos ni steres pero se organiza el huso acromtico.

Citocinesis: el citoplasma se divide mediante un tabique, que se forma por
la agrupacin de microtbulos y vesculas. Las vesculas crecen, se
ordenan y se funden entre s originando la placa celular. Finalmente se
1,2,3
arman las paredes celulares a partir de celulosa, hemicelulosa y pectina.
Meiosis
Es un proceso de reduccin cromtica por el que los cromosomas se reducen a la
mitad. En la meiosis I (etapa reduccionaria) se reduce el nmero diploide de
cromosomas a la mitad (haploide) pero an los cromosomas son dobles. En la
meiosis II (etapa ecuacional) se mantiene el nmero cromosmico haploide
conseguido en la etapa anterior. Los cromosomas son simples. 1,2,3

Meiosis I: Est precedida por una interfase durante la cual se duplica el
material gentico.
1. PROFASE I: La envoltura nuclear y el nucleolo se desorganizan, los
centrolos migran a polos opuestos, duplicndose y se ordena el huso
acromtico. Se divide en 5 etapas: Leptonema, Cigonema, Paquinema,
Diplonema y Diacinesis.
2. PROMETAFASE I: Los cromosomas migran al plano ecuatorial de la clula.
3. METAFASE I: Los cromosomas se alinean en el plano ecuatorial. Los 2
cromosomas del bivalente se unen por medio del centrmero a la misma
fibra del uso acromtico.
4. ANAFASE I: Los 2 cromosomas homlogos unidos a la misma fibra del
huso se repelen y migran a polos opuestos. Cada cromosoma est formado
por 2 cromatides.
5. TELOFASE I: Cuando los cromosomas llegaron a los polos, se
desorganizan el huso acromtico y los steres, se reorganizan la envoltura
nuclear y los nucleolos y se constituyen los ncleos hijos.
Citocinesis: Se produce simultneamente con la telofase, y da como resultado 2
clula hijas con un nmero haploide de cromosomas.
Intercinesis: Es un perodo que tiene lugar entre la meiosis I y II y no se realiza
duplicacin del ADN.

Meiosis II: Los procesos de esta divisin son semejantes a los de una
mitosis en una clula haploide.
1. PROFASE II: Se condensan los cromosomas, se desintegran los nucleolos,
los centrolos migran a los polos y se duplican, formacin del huso
acromtico y se desorganiza la envoltura nuclear.
2. PROMETAFASE II: Los cromosomas condensados migran a la placa
ecuatorial de la clula.
3. METAFASE II: Los cromosomas se alinean en la placa ecuatorial, y cada
cromosoma se une a una fibra del huso acromtico.
4. ANAFASE II: Se fusiona el centrmero y se separan las 2 cromtidas de
cada cromosoma. Cada una migra a un polo diferente.
5. TELOFASE II: Los grupos cromosmicos llegan a los polos, el huso
acromtico se desorganiza, se reorganizan la envoltura nuclear y el
nucleolo, se dispersan los cromosomas y se transforman en cromatina.
Citocinesis: Separacin de los citoplasmas de las clulas hijas.
El proceso meitico parte de una clula diploide que da como resultado 2
haploides, y a partir de stas dos (meiosis II) se obtienen 4 haploides.
Meiosis, variabilidad gentica y evolucin
La reproduccin sexual introduce una importante proporcin de variaciones
genticas. Cuanto mayor sea la diversidad de gametas formadas en cada
progenitor, mayor ser la probabilidad de originar combinaciones diferentes por
fecundacin, y mayor ser la diversidad de los descendientes. Una clula diploide,
con 2 pares de cromosomas homlogos, originar por meiosis 4 gametas
haploides (uno de la madre y otro del padre). En la Metafase I se va a determinar
en qu sentido migrarn en la Anafase I. Hay dos opciones:
1.
Puede ocurrir que los 2 cromosomas paternos migren juntos a un polo y los
dos maternos al opuesto.
2.
Puede ocurrir que migren al mismo polo el cromosoma materno del par
homlogo y el paterno del par homlogo. Los otros cromosomas, migran al
polo opuesto. 1,2,3
pices de raz
Tubos de ensaye
Gradilla
Mechero
Vaso de precipitado de 250 ml.
Bistur
Agua destilada
8- hidroxiquinolina
Cloroformo
Alcohol etlico al 95%
cido actico glacial
cido clorhdrico
Sol. Acetato-orcena
METODOLOGA
PRETRATAMIENTO
Se colocan los cortes de raz, perfectamente lavados con agua destilada en una
solucin de 8-hidrxiquinolina 0.02 M por 3 a 5 horas a 18oC.
FIJACIN
Se lavan los cortes con agua destilada y se transfieren a una soluxcin modificada
de Carnoy 86 partes de cloroformo, 3 partes de alcohol etlico al 95% y 1 de cido
actico glacial) mnimo 12 horas en refrigeracin.
HIDRLISIS
Se transfieren los cortes a una solucin de cido clorhdrico 1 N a 50oC durante
15 minutos.
TINCIN
En un tubo de ensaye se colocan los cortes de raz y se sumergen en solucin de
acetato-orcena. Se calientan, sin que hiervan por 3 minutos. En un portaobjetos
se colocan los cortes de raz. Con un bistur se cortan los pices (2-3 nm) que se
reconocern por ser la parte mas teida. Se les aade una gota de acetato-
orcena y se aplastan con la tcnica del squash.
RESULTADOS
Realizar esquemas de lo observado.

Comparar los resultados en un cuadro con lo observado por los diferentes
equipos.
CUESTIONARIO
1.- Qu es un cromosoma?
2.- Cul es la fase dentro de la mitosis en la que se observan mejor los
cromosomas?
3.- Cual es la funcin del cido clorhdrico sobre los pices de raz?
4.- Porqu los pices de raz de cebolla se considera como un buen espcimen
para la observacin de cromosomas
5.- Plantee una actividad biotecnolgica donde aplique esta prctica.
REFERENCIAS
1.- GARDNER E. (1985) Principios de Gentica. Limusa. Mxico
2.- BARAHONA A. y DANIEL PIERO (1994). Gentica: Continuidad de la vida.

SEP-CONACYT-FCE. Mxico (la ciencia desde Mxico).
3.- SMITH-KEARY (1979). Gentica. Estructura y Funcin.Publicaciones

cultural.Mxi
PRCTICA No. 7
FIGURAS MEITICAS EN GNADAS DE CHAPULN

OBJETIVO:
1. Elaborar preparaciones temporales de gnadas de dos especies de
insectos: chinche o
frailecillo (Stenomacra marginella) y grillo (Achaeta domestica).
2. Identificar en dichas preparaciones las diferentes fases de la meiosis y de la

gametognesis.
INTRODUCCIN
En las clulas eucariontes somticas existen dos juegos de cromosomas 1,

heredados por cada uno de los progenitores. A esta condicin se le denomina
estado diploide o 2N. Las clulas somticas mantienen su condicin diploide
durante la replicacin celular o mitosis. Durante la formacin de gametos el
nmero de cromosomas de la especie se reduce a la mitad (N) por medio de la
meiosis. El nmero de cromosomas de la especie se reestablece cuando se
forma el cigoto durante la fertilizacin. La meiosis, por consiguiente, ocurre en el
tejido germinal de especies con reproduccin sexual.
La meiosis es un tipo de divisin celular que involucra una sola replicacin
del material gentico (Fase S del ciclo celular) y dos divisiones nucleares
sucesivas conocidas como Meiosis 1 y Meiosis 11 (Figura 1. A). La meiosis 1 o
primera divisin meitica, que es ms compleja que la segunda, es una divisin
reduccional en la que se pasa de una clula diploide (con 2N cromosomas con
dos cromtidas hermanas [4cr) a dos clulas haploides (con N cromosomas de
dos cromtidas hermanas cada uno [2c]). La segunda divisin o meiosis 11 es
similar a una divisin mittica en la que a partir de las dos clulas haploides N [2c]
generadas en la primera divisin se producen cuatro clulas haploides con N [1 c]
cromosomas de una sola cromtida. Para su mayor entendimiento, el proceso es
dividido en fases que describen los eventos ocurridos durante sta.
MEIOSIS I
PROFASEI
Durante toda esta fase la membrana nuclear permanece inalterada. Consta de
cinco etapas: leptoteno, zigoteno, paquiteno, diploteno y diacinesis.
Leptoteno 3. Los cromosomas comienzan a condensarse

manteniendo unidos los telmeros 4 a la envoltura nuclear. A lo
largo de los cromosomas van apareciendo pequeos
engrosamientos conocidos como crommeros. En este momento slo es posible
distinguir uno de dos juegos de autosomas y el par de cromosomas sexuales o
slo uno de ellos.
2 4c: significa que cada cromtida (ADN) se replic en la fase S anterior a la
meiosis. Cada gen est representado cuatro veces, uno en cada cromtida y
puede ser el mismo alelo o diferente.
3 Las imgenes de las fases de la meiosis presentadas son de testculo de
langosta (Locusta migratoria) y fueron tomadas de
htto://www.vcbio.science.ru.nl/en de la Universidad de Radboud, Nederlands.
4 Telmeros: extremos de los cromosomas de eucariontes.
las dos cromtidas hermanas de cada cromosoma ya que stas estn muy unidas
entre
s.
A mayor aumento, en los
cromosomas
se puede apreciar un eje
proteico 5 de no histonas que
posteriormente tendr gran
importancia en el apareamiento
entre cromosomas homlogos.
Zigoteno. Los cromosomas homlogos (CH) se

acercan hasta quedar apareados en toda su
longitud, crommero a crommero de las
cromtidas no hermanas (slo las adyacentes).
La disposicin de stos a lo largo de las cromtidas parece estar
determinado genticamente. Incluso se utiliza la disposicin de
estos engrosamientos para poder distinguir cada cromosoma
durante la profase l.
El reconocimiento de los CH se facilita gracias a que sus telmeros se encuentran
anclados en regiones muy prximas de la membrana nuclear. El eje proteico
central juega un papel
importante en el apareamiento
de los CH al formar los
elementos laterales del
complejo sinaptotmico 6. En
este apareamiento tambin est implicada la secuencia de genes de cada
cromosoma, que evita el apareamiento entre cromosomas no homlogos. Durante
esta fase concluye la replicacin del ADN (2% restante) que recibe el nombre de
zig-ADN.
Paquiteno. Los CH estn perfectamente

apareados formando estructuras denominadas
bivalentes, en esta fase se produce el
intercambio de
material
gentico entre los CH o
recombinacin gentica. sta
est mediada por una estructura proteica de 90 nm de dimetro
llamada ndulo de recombinacin. En l se encuentran las
enzimas que median en el proceso de recombinacin. Durante
esta fase se produce una pequea sntesis de ADN, que
probablemente est relacionada con fenmenos de reparacin de
ADN ligados al proceso de recombinacin (HRR7).
Diploteno. Como los cromosomas estn ms condensados se pueden distinguir
las dos cromtidas de cada cromosoma, por lo que a los bivalentes descritos en
el paquiteno se
5 La imagen del eje proteico y la del complejo sinaptotmico fueron tomadas de
htto: / /users. servicios. retecal.es/touente/meiosis/imaoes/
6 estructura proteica con forma de escalera formada por dos elementos laterales y
uno central que se van cerrando a modo de cremallera y que garantiza el
apareamiento entre homlogos, ver imagen
7 HRR: Homologous recombination repair
observan ahora como ttradas. Adems en este momento se pueden observar los
lugares del cromosoma donde se ha producido la recombinacin como
estructuras en forma de X denominadas quiasmas. En este punto la meiosis
puede sufrir una pausa, como ocurre en el caso de la formacin de los vulos
humanos. La lnea germinal de los vulos humanos sufre esta pausa hacia el
sptimo mes del desarrollo embrionario continuando la meiosis hasta alcanzar la
madurez sexual. A este estado de latencia se le conoce como dictiotena.
~
Diacinesis. Apenas distinguible del diploteno. En esta fase
podemos observar los cromosomas algo ms condensados y ms
claramente los quiasmas. Al final de sta y por tanto de la profase I
se presenta la fragmentacin en vesculas de la envoltura nuclear.
Durante toda la profase I continu la sntesis de ARN en el ncleo. Al final de la
diacinesis cesa la sntesis de ARN y ya no se ve el nucleolo.
METAFASEI
Comienza con la fragmentacin de la membrana nuclear. En
clulas animales se forma el huso acromtico a partir de los
centrolos ubicados en los centrosomas y que se colocan en los
polos de la clula. Los CH se unen a los microtbulos (MTs)
cinetocricos del huso por medio del centrmero movindose al centro de la
clula. En esta fase los quiasmas son todava visibles.
ANAFASEI
Los CH se separan y se mueven hacia los polos opuestos guiados
por los MTs del huso. Como consecuencia desaparecen los
quiasmas. Cabe hacer notar que los cromosomas de origen paterno
y materno tienen la misma probabilidad de migrar hacia los polos, y
que estos cromosomas han recombinado. De aqu que la meiosis contribuye de
manera importante a generar diversidad, materia prima de la evolucin.
TELOFASEI
Esta fase de la meiosis vara segn la especie. En algunas se
forman dos nuevas membranas nucleares y se separan las dos
nuevas clulas haploides N [2c] con dos cromtidas cada una de
ellas y unidas por su centrmero. En algunas otras no se forma envoltura nuclear
y se pasa directamente a la segunda divisin meitica.
PROFASE 11
En esta fase desaparece la membrana nuclear, sr es que se reintegr
nuevamente, y comienza el ensamble del nuevo huso acromtico. Recordar que
en este momento cada clula contiene un nmero haploide de cromosomas, cada
uno de ellos con dos cromtidas.
METAFASE 11
Los cromosomas se colocan en el centro de la clula
unidos al huso por su centrmero y con cada una de
sus cromtidas de cara a los polos la clula, formando la placa
ecuatorial.
ANAFASE 11
Los centrmeros se separan por despolimerizacin de las
protenas que los unen y las cromtidas hermanas son
arrastradas por los MTs hacia polos opuestos por las
fibras del huso.
TELOFASE 11
En esta fase se desensambla el huso acromtico y los
cromosomas se descondensan. Se vuelve a formar la envoltura
nuclear alrededor de los cromosomas situados en los polos. Al
final se obtienen cuatro clulas haploides N [c] con cromosomas de una sola
cromtida cada uno de ellos 8.
ESPERMIOGNESIS
En los individuos del sexo masculino, los espermatocitos secundarios o gametos
N [1 c] presentan una "especializacin" que consiste en la modificacin de sus
estructuras para producir los espermatozoides. En las preparaciones de las
gnadas masculinas de los insectos que se proporcionarn en esta prctica. se
podrn observar las espermtidas (Figura 1.8) y los espermatozoides9 (Figura
1.C).
Fig. 1.A. Figuras meiticas; B,

espermtidas; C, espermatozoides en
testculo de saltamontes
(Locusta migratoria).
Para ver una animacin de la meiosis ir a la pgina:
htto://www.iohnkvrk.com/meiosis.html Consulta: httg: / /users.servicios.
retecal.es/touente/meiosis/

Pinzas de relojero
Agujas de diseccin
Portaobjetos y cubreobjetos
Placa de unicel
Alfileres
Navaja de rasurar (Gillete)
Frascos goteros
Toallas de papel
Microscopio ptico
Microscopio estereoscpico
cido lacto-actico: cido lctico 85%: cido actico 60%: agua
desionizada 1:1 :1. ,( Colorante lacto-aceto-orcena: orcena (sinttica) 1
% en volmenes iguales de cido lctico 85%: cido actico 60%.
Caliente la mezcla a ebullicin y hierva varios minutos. Enfre y filtre. Si
posteriormente forma precipitados hay que filtrarla.
cido actico 45% recin preparado.
MATERIAL BIOLGICO
Adultos de chinche (Stenomacra marginella) fijados en alcohol 70%. Este
hemptero habita en el follaje de diversos rboles y arbustos. Madura
sexualmente previo a la poca de lluvias y es comn encontrarlo en las
estaciones Primavera- Verano. Lo ms adecuado es colectarlos durante la
cpula, lo que permite diferenciar a los machos que son ms pequeos.
Sus cromosomas son grandes y fcilmente visibles. En los gametos de las
hembras se pueden observar 12 bivalentes y en los de los machos 11, por
lo que presentan un sistema de determinacin del sexo XX/XO. (Insecta:
Heteroptera: Largidae.
Machos adultos de grillo domstico (Acheta domestica (Linnaeus) (Insecta:

Orthoptera: Gryllidae) fijados en alcohol 70%.
METODOLOGA
1. Colectar adultos de ambas especies. Dormirlos con ter y colocarlos en

alcohol de 70 (En este caso se les proporcionarn los insectos ya fijados
en alcohol de 70).
2. Iluminar el microscopio de manera que la luz llegue en un ngulo y el fondo
se vea oscuro.
3. Colocar el insecto en un cuadrito de unicel con la regin abdominal
hacia arriba, y sujetarlo con alfileres de cabeza de la siguiente
manera: Uno en el primer artejo de cada extremidad superior y un
tercero en el lmite inferior de la cabeza. Aadir una gota de cido
actico 45% sobre el insecto.
4. Con la navaja de rasurar cortar longitudinalmente el abdomen cuidado
de cortar slo la cutcula.
5. Con pinzas de relojero eliminar o abrir ambos lados de la cutcula para
exponer el interior del insecto.
6. Con las pinzas apresar transversalmente la parte superior del tubo
digestivo y jalarlo hacia fuera, para sacar todo el sistema digestivo y
los otros rganos.
7. Al quitar los rganos mediante el paso anterior, se podrn ver a ambos
lados del insecto unas estructuras semejantes a racimos y pegadas al
dorso. stas son las gnadas.
8. Aadir gotas de cido actico 45%. Nunca dejar que se sequen las
gnadas.
9. Colocar en un portaobjetos, una pequea parte del tejido de las
gnadas. Esto es importante porque si se coloca mucho tejido, al
hacer el "squash" ms adelante, no se podrn ver los cromosomas
Debido a que las clulas se vern en varias capas, y no se podr "
ejercer presin suficiente sobre ellas.
10. Remover con cuidado el cido actico aplicando una porcin de una
toalla de papel absorbente sobre la zona del portaobjetos en donde
se haya extendido el actico, sin tocar la muestra.
11. Aadir suavemente una gota de 1 N HCL por 30 segundos y eliminarla
absorbiendo con mucho cuidado con una pipeta Pasteur o el extremo
de una toalla de papel.
12. Rpidamente enjuagar suavemente con cido lacto-actico para
impedir que precipite el colorante.
13. Aadir una gota del colorante y esperar 15 mins.
14. Enjuagar suavemente con gotas de cido lacto-actico.
15. Colocar un cubreobjetos sobre el tejido.
16. Golpear intermitente y suavemente sobre el cubreobjetos con la punta de

un lpiz o una pluma, cuidando que ste no se deslice. Ensayar varias
veces hasta adquirir la habilidad de presionar sin deslizar el cubreobjetos
o romperlo. AL hacerlo puede observarse que el tejido se disgrega
fcilmente.
17. Observar las clulas en el microscopio ptico. Ajustar la iluminacin de
Khler y buscar las zonas rosas (citoplasma) con regiones nucleares
(magenta).
18. Para hacer preparaciones permanentes se congelan colocndolas sobre
hielo seco. Una vez congeladas se desprende el cubreobjetos con la
ayuda de una navaja de rasurar o navaja muy delgada. Se colocan los
portaobjetos en una jarra de Coplin con etanol helado y ah se dejan
hasta que el alcohol disminuya su temperatura a la del ambiente (T A). Se
sacan del etanol y se secan al aire. Se conservan de esa manera por
periodos largos aTA.
RESULTADOS
Dibuje detalladamente las observaciones encontradas y corrobore con su profesor.

CUESTIONARIO
1.-Esquematice y explica las etapas del ciclo celular tpico
2.- Plantee una actividad biotecnolgica donde aplique esta prctica.
BIBLIOGRAFA
Modificacin del procedimiento elaborado por Jeanette Holden, Queen's

University, Kingston, Ontario. ~:Dr.Thomas Miller's Lab Web Page. Pag~
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PRCTICA No. 8
IDENTIFICACIN DE CROMOSOMAS POLlTNICOS EN LAS CLULAS DE

LAS GLNDULAS SALlVALES EN LARVAS DE
Drosophila melanogaster y Drosophila pseudoobscura.
OBJETIVO:
a. Observar el bandeo natural e identificar las estructuras ms

relevantes de los cromosomas politnicos de las glndulas salivales
de Drosophila.
b. Ubicar la utilidad de los cromosomas politnicos en la localizacin de

genes y en la identificacin de cambios estructurales en los
cromosomas.
INTRODUCCIN.
Drosophila melanogaster tiene cuatro pares de cromosomas, un par sexual y tres

pares autosmicos. Los cromosomas sexuales, al igual que en otras especies
superiores son: el cromosoma X (tambin denominado cromosoma 1), que
presenta forma de barra y tiene el centrmero en un extremo y el cromosoma Y
que tiene forma de bastn. La hembra presenta dos cromosomas X y el macho un
cromosoma X y un Y (XX Y XY, respectivamente). De los cromosomas
autosmicos, los pares 2 y 3 son los ms grandes del genoma, cada uno de ellos
est dividido por el centrmero en un brazo derecho y un brazo izquierdo. Los
cromosomas del par 4 son sumamente pequeos y aparecen como puntos
diminutos en las clulas somticas en metafase (Fig. 1).
MARCO TERICO
En 1881 E. G. Balbiani encontr estructuras peculiares en los ncleos de ciertas

clulas secretoras de los dpteros. Sin embargo stas no fueron reconocidas
como cromosomas sino hasta 1933, cuando T. Painter, E. Heitz y H. Bauer los
redescubrieron y analizaron la constancia que presentan en el arreglo y densidad
relativa las diferentes bandas o discos de que se componen; entonces
establecieron que dichas estructuras eran realmente cromosomas y los
denominaron cromosomas politnicos. Se ha descrito la presencia de este tipo
de cromosomas en tejidos secreto res como tbulos de Malpiphi, recto, intestino y
glndulas salivales de los dpteros.
La politenia es una forma especial de poliploida. Los cromosomas politnicos se
originan durante el ciclo celular atpico al inicio de la fase larvaria. El inicio de la
politenia queda sealado por el estrecho acercamiento de los cromosomas
homlogos en una forma que recuerda a la asociacin de los cromosomas en la
profase meitica. Una vez alcanzado este arreglo las clulas entran al proceso de
endomitosis, en el cual el ciclo celular queda constituido nicamente por una fase
G y una fase S, no ocurre mitosis, de manera que en cada ciclo, el material
gentico se replica pero no se lleva a cabo la segregacin de los cromosomas
replicados. De esta manera, cada cromosoma consta de 1024 juegos
cromosmicos que permanecen integrados en una sola estructura, lo que hace
evidente la presencia de bandas de diferente espesor y afinidad cromtica en
patrones caractersticos a cada cromosoma y, en consecuencia, propias de cada
especie de Drosophila (Fig. 2).
Durante el desarrollo de la mosca, aparecen abultamientos o "puffs" en diferentes
regiones de los cromosomas, as como zonas ampliamente distendidas
denominadas "Anillos de Balbiani" (Fig. 3). Por estudios a nivel molecular se ha
establecido que las reas abultadas de los cromosomas politnicos son reas en
las que se acumula RNA, probablemente como parte de una sntesis intensa de
protenas. La variabilidad del patrn de abultamiento refleja la actividad de genes
tejido-especfico dependientes del desarrollo del organismo.
En las clulas de las glndulas salivales de la mosca, cinco brazos largos parten
de un centro comn llamado cromocentro, el cual es una estructura radial y
representa una coalescencia de las reas heterocromticas alrededor de los
centrmeros de los cuatro pares cromosmicos. El cromosoma se forma por la
atraccin mutua y asociacin estrecha de los centrmeros.
En el caso de los cromosomas politnicos se encuentra que de cada cromosoma

en forma de V (pares 2 y 3) salen dos brazos, izquierdo y derecho (2L, 2R y 3L,
3R, respectivamente); del cromosoma X slo se extiende uno, ya que su
centrmero es terminal. El cromosoma y est formado principalmente por
heterocromatina y se queda en su mayor parte formando el cromocentro. En
ocasiones es posible ver al cromosoma 4 saliendo del cromocentro en una
extensin muy corta.
El estudio de los patrones de bandas e interbandas en los cromosomas

politnicos ha resultado en la elaboracin de mapas citolgicos los cuales
aportaron evidencias de la localizacin lineal de los genes y las relaciones de
ligamiento entre los mismos, por otro lado, el anlisis de las alteraciones en los
patrones de bandeado ha permitido la asociacin de ciertos genes con bandas e
interbandas especficas. Al compararse los mapas citolgicos obtenidos de estos
estudios con los mapas genticos, constituidos a partir del anlisis de datos de
entrecruzamiento utilizando marcadores fenotpicos en cruzas experimentales, se
ha observado que existe consistencia en la informacin aportada por ambos tipos
de mapas.
Los cromosomas politnicos tambin son importantes en el anlisis de

aberraciones cromosmicas como deficiencias, duplicaciones, inversiones y
translocaciones, y ha sido de enorme utilidad en estudios de mutagnesis
experimental.
Adems, los cromosomas politnicos son una herramienta extraordinaria en el

estudio de los polimorfismos genticos de diferentes especies del gnero
Drosophila, entre las que se puede mencionar a D. pseudoobscura, D. willistoni,
D. azteca, D. nebulosa y D. persimi/is, aportando informacin de gran importancia
para establecer relaciones filogenticas y proponer patrones evolutivos.
Larvas de Drosophila melanogaster y de D. pseudoobscura de tercer estadio

Solucin fisiolgica de NaCI al 0.7%
Acetorcena al 2%
2 agujas de diseccin o 2 pinzas de relojero
Toallas de papel
Cubreobjetos
Portaobjetos
Lpiz con goma nueva
Platina de vidrio
Barniz de uas
Etiquetas
Microscopio de diseccin
Microscopio ptico
METODOLOGA
1. Con la ayuda de una aguja de diseccin extraiga una larva de tercer estadio de
un cultivo maduro, seleccione aquellas de mayor tamao y coloque la larva
sobre una platina o portaobjetos en una gota de solucin salina.
2. Con la ayuda de dos agujas disecte la larva. Coloque una aguja en el rea de
las mandbulas y la otra en la parte central del cuerpo. Con un movimiento
rpido separe la regin ceflica del resto del cuerpo para obtener las
glndulas que quedarn adheridas a la zona de la mandbula. Las glndulas
salivales son transparentes y tienen por lo general, una franja de tejido graso
adherido lateralmente en cada una de ellas; con mucho cuidado procure retirar
la grasa tanto como le sea posible (Fig. 5 a y b).
3. Coloque una gota de acetorcena en un portaobjetos
limpio
4. y transfiera las glndulas con sumo cuidado para no perderlas, deje teir de 30
a 45 minutos sin dejar secar.
5. Coloque un cubreobjetos con una pequea gota de colorante (si es necesario),
cubra la preparacin con una toalla de papel o papel higinico y haga presin
con el dedo pulgar siguiendo un movimiento circular o golpee con la goma de
un lpiz siguiendo crculos hasta dispersar el tejido (squash), teniendo cuidado
de no romper el cubreobjetos.
6. Revise si se obtuvieron figuras (a 40 X) Y selle con barniz de uas. Esta
preparacin es semipermanente. Etiquete la preparacin.
7. Analice la laminilla a 40 o 100X para identificar con ayuda del mapa citolgico
el patrn de bandeo natural y los distintos brazos de cada cromosoma;
determine, si le es posible, la presencia de alteraciones (duplicaciones,
inversiones, deficiencias o translocaciones ).
RESULTADOS:
Dibuje las estructuras que observ en cada una de las preparaciones y coloque el
nombre de aquellas que pudo identificar.
CUESTIONARIO
1. Defina bandeo y mencione su importancia en la gentica
2. Defina cromosoma politnico y explque el por qu de su nombre.
3. Explique por qu en esta prctica se utilizaron las glndulas salivales de las
larvas de mosca y no de cualquier otro organismo.
BIBLIOGRAFA
1. De Garay, A. 1988. Gentica de poblaciones y evolucin. Textos UAP.

2. Demerec M. y S.P. Kaufmann 1975 Gua de Drosophila. Introduccin a la
gentica y citologa de Drosophila me/anogaster. Departamento de
Gentica, Institucin ICarnegie de Washington. Cold Spring Harbor, Nueva
Cork, pp 21-33.
3. Goodenough U. 1981, Gentica, Ediciones Omega, S.A. pp. 57-58
4. Guzmn J., L. Levine, O., Olvera, J. Powell, M. E. De la Rosa y V. Salceda,
1992. IPopulation Genetics of mexican Drosophila IX. East-West distribution
of inversion polymorphism in Drosophila pseudoobscura. Southwestern
Naturalist.
5. Kalthoff K (1996) Analysis of biological development. McGraw-Hill, New
York, 738 pp
6. Mertens T, Hemmersmith R (1991) Genetics. Laboratory Investigations,
McMillan Publishing Co., 9a ed., New York, 263 pp.
7. Olvera O., J. Poewll, M.E. de la Rosa, V. Salceda, M.I. Gaso, J. Guzman, W.
rAnderson, L. Levine (1979) Population Genetics of Mexican Drosophila VI.
8. Cytogenetic aspects of the inversion polymorphism in Drosophila
pseudoobscura. .
9. Evolution 33( 1), 381-395.
10. Ramos PH. Abundis, J.C. Gaytn, M.G. Ordaz, P.G. Orozco, J.
Maldonado, J.Hernndez, E. Gonzlez, P. Reyes, E. Galicia, J.A.
Muoz (1993). Manual de laboratorio de Gentica de Drosophi/a
melanogaster, McGraw-Hill, Mxico, 100- 106 p.
11. Russell P. J. (1996). Genetics. 4a. ed. Harper & Collins, New York.
196-198,220, 568-570 p.
12. Weaver R.F., Hedrick P.W. (1997) Genetics 3a. ed. WMC. Brown Publishers,
London. 638pp.
PRCTICA No. 9
CURVA DE CRECIMIENTO BACTERIANO
OBJETIVO:
El alumno ser capaz de conocer la fisiologa bacteriana por medio de el anlisis
de la curva de crecimiento de una especie bacteriana.
INTRODUCCIN
Todos los seres vivos tienen ciertos requerimientos nutricionales para llevar a cabo
las funciones vitales propias de la especie, del aporte de estos nutrientes en el
medio que se encuentre el organismo a estudiar dependern las funciones
fisiolgicas, sus caractersticas y rapidez de presentacin. Durante miles de aos
los organismos han generado adaptaciones al medio que se encuentre para
garantizar su sobre vivencia, por ello es importante estudiar cmo influye los
cambios en el aporte nutricional sobre el comportamiento de la especie a estudiar,
en este caso, una bacteria a la cual se le cambiarn la concentracin de nutrientes
en el medio para evidenciar los cambios por medio del crecimiento bacteriano, y
ser determinado espectrofotometra.
MARCO TERICO
Entendemos por crecimiento microbiano el aumento del nmero de

microorganismos a lo largo del tiempo. Por tanto, no nos referimos al crecimiento
de un nico microorganismo (ciclo celular) sino al demogrfico de una poblacin.
Denominamos ciclo celular al proceso de desarrollo de una bacteria considerada

de forma aislada. A lo largo del ciclo celular, tiene lugar la replicacin del material
de la bacteria, la sntesis de sus componentes celulares, el crecimiento para
alcanzar un tamao doble del inicial y su divisin por biparticin de la bacteria para
dar lugar a dos clulas hijas. La duracin del ciclo celular coincide con el tiempo
de generacin y depende, en general, de los mismos factores de los que depende
este.
El crecimiento de una poblacin resulta de la suma de los ciclos celulares de todos

sus individuos. Este crecimiento suele ser asincrnico puesto que cada
microorganismo se encuentra en un punto diferente del ciclo celular. Por
consiguiente, en un momento determinado en una poblacin se encuentran
clulas que acaban de dividirse, otras que estn replicando su ADN y
elongndose, otras que estn iniciando la divisin celular, etc.
Las poblaciones de bacterias pueden crecer de una forma explosiva acumulando

grandes nmeros en un periodo de tiempo muy reducido. Puesto que el efecto
nocivo (infecciones o intoxicaciones) de los microorganismos depende de su
nmero en la mayora de los casos, entender cmo se produce el crecimiento
microbiano es importante para poder evitar o reducir dichos efectos nocivos.
Se denomina crecimiento equilibrado a aqul en el que la biomasa, nmero de

clulas, cantidad de protenas, de ADN, etc., evolucionan en paralelo. El
crecimiento equilibrado probablemente ocurra en muy contadas ocasiones en
condiciones naturales.Por tanto, es principalmente un concepto de aplicacin en el
laboratorio. Sin embargo, es til porque permite estudiar el crecimiento de
microorganismos.
Las bacterias crecen siguiendo una progresin geomtrica en la que el nmero de

individuos se duplica al cabo de un tiempo determinado denominado tiempo de
generacin (). De esta forma, podemos calcular el nmero de bacterias (N) al
cabo de un nmero de generaciones (n) usando la ecuacin siguiente:
N = N0 2n
Donde N0 es el nmero de clulas en el momento actual. El nmero de

generaciones se puede calcular de la siguiente forma:
n=t/
donde t es el tiempo transcurrido.
Los tiempos de generacin de bacterias creciendo en ambientes favorables

pueden ser muy cortos (valores de de 20 min). Esto lleva a que una nica clula
(N0 = 1) creciendo con un = 20 min, llegue a poder producir 4.7 x 10 21 clulas en
24 horas.Si la bacteria crece en un medio lquido, las clulas que se producen en
cada divisin continan su vida independientemente en la mayora de los casos
formando una suspensin de clulas libres.
Cuando una clula aislada comienza a crecer sobre un substrato slido, el

resultado del crecimiento al cabo del tiempo es una colonia. Se denomina unidad
formadora de colonia (UFC) a una clula viva y aislada que se encuentra en un
substrato y en condiciones ambientales adecuadas y produce una colonia en un
breve lapso de tiempo. Una UFC tambin puede corresponder a ms de una
clula cuando stas forman parte de grupos unidos fuertemente (estreptococos o
diplococos, por ejemplo) ya que cada grupo formar una sola colonia.
Cuando algunos tipos de bacterias o de levaduras patgenas crecen sobre

superficies forman biopelcuas (biofilms) en los que las clulas se asocian entre s
mediante capas de polisacridos que forman una pelcula que recubre la superficie
sobre la que se encuentran las clulas.
Los biofilms son muy importantes porque los microorganismos que los forman
resultan ms resistentes a antibiticos y al ataque de clulas del sistema inmune y,
por consiguiente, las infecciones que producen son ms difciles de tratar. La
presencia de biopelculas es un problema serio en los implantes ortopdicos,
catteres, etc. El sarro de los dientes es un ejemplo de biofilm.
CONCEPTO DE MUERTE DE UN MICROORGANISMO.
Desde el punto de vista microbiolgico, un microorganismo muere cuando pierde

de forma irreversible la capacidad de dividirse. El fundamento de esta definicin es
que si un microorganismo ha perdido la capacidad de dividirse no podr formar
una colonia sobre un medio de cultivo y no ser posible detectar su presencia por
los mtodos microbiolgicos tradicionales.
Es decir: cuando no se produce aumento en el nmero de microorganismos no

hay crecimiento. Sin embargo, un microorganismo puede estar muerto desde el
punto de vista microbiolgico y continuar desarrollando una actividad metablica
que se traduzca, por ejemplo, en liberacin de toxinas.
Por otra parte, hay que considerar que la capacidad de multiplicacin (crecimiento)
de un microorganismo puede verse transitoriamente afectada por lesiones o por
las condiciones fsicas o qumicas del entorno. En estos casos, podramos
considerar como muertos microorganismos que pueden reanudar su crecimiento si
las condiciones son de nuevo favorables.
NECESIDADES METABLICAS
El aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales se realiza, en la mayora

de los casos, mediante la produccin de colonias aisladas en cultivos slidos.
El crecimiento explosivo de las bacterias produce un gran nmero a partir de una

nica clula inicial de forma que, tras un periodo de tiempo de incubacin en las
condiciones ambientales adecuadas, se produce una colonia de individuos
iguales.
Para crecer, un microorganismo necesita nutrientes que le aporten energa y

elementos qumicos para la sntesis de sus constituyentes celulares.
Dependiendo de la fuente de carbono que utilizan, los microorganismos se pueden

clasificar en:
auttrofos: si es el CO2 atmosfrico (microorganismos que fotosintetizan)

hetertrofos si utilizan carbono orgnico.
Los microorganismos de importancia clnica son todos ellos hetertrofos.
La frmula elemental de un microorganismo es, aproximadamente, C4H7O2N lo

que supone que los componentes de las clulas son: carbono que representa
alrededor del 50% del peso seco, oxgeno (32%), nitrgeno (14%) y debe estar
disponible, normalmente, en forma de NH 4 o de aminocidos a los que se pueda
tomar su grupo amino; fsforo (3%) y debe estar en forma de PO 43-, azufre que
representa en torno al 1% y procede de aminocidos sulfurados o de SO 42-; y otros
elementos traza entre los que se encuentran Fe, K, Mg, Mn, Co, Mb, Cu y Zn.
La elaboracin de medios de cultivo que permitan aislar microorganismos a fin de

iniciar posteriores cultivos puros requiere proporcionar los nutrientes antes citados
y, en ciertos casos, algunos aminocidos o vitaminas que determinados tipos de
microorganismos no pueden sintetizar.
DETECCIN Y MEDIDA DEL CRECIMIENTO
Existen diferentes sistemas para detectar y medir el crecimiento de

microorganismos; los principales son: recuento directo, medida de la masa de las
clulas, recuento d viables, medida del nmero de partculas, medida de
parmetros bioqumicos y medida de la actividad metablica.
Recuento directo: consiste en la observacin al microscopio de volmenes

muy pequeos de suspensiones de bacterias. Se usan unos portaobjetos
especiales denominados cmaras de Petroff-Hausser. Para que la medida sea
correcta es necesario que la densidad de clulas sea del orden de 105 por ml.
Medida de la masa de clulas: el sistema se basa en que las clulas en
suspensin dispersan la luz causando la turbidez del cultivo. La turbidez depende
de la masa en suspensin y, por tanto, midiendo esta se puede estimar aquella.
Este es el parmetro de medida ms fcil de usar en los cultivos de laboratorio. La
densidad de clulas debe ser del orden de 10 5 por ml.
Recuento de viables: consiste en sembrar un volumen determinado de

cultivo o muestra sobre el medio de cultivo slido adecuado para estimar el
nmero de viables contando el nmero de colonias que se forman puesto que
cada una de estas deriva de una UFC. Para que la medida sea correcta desde el
punto de vista estadstico, es necesario contar ms de 300 UFC. En ciertas
ocasiones en las que la densidad de microorganismos es demasiado baja, stos
se pueden recolectar por filtracin a travs de una membrana (de 0.2 m de
tamao de poro) y posterior colocacin de la membrana en un medio de cultivo
adecuado para que se formen las colonias.
Medida del nmero de partculas usando contadores electrnicos de

partculas. Estos sistemas no nos indican si las partculas corresponden a clulas
vivas o muertas; pero nos pueden dar una idea del tamao de las partculas.
Medida de parmetros bioqumicos tales como la cantidad de ADN, ARN,

protenas, peptidoglicano, etc. por unidad de volumen.
Medida de actividad metablica de las bacterias como que respiran
producen una disminucin del potencial redox del medio en que se encuentran
como consecuencia del consumo de oxgeno (utilizacin de colorantes sensibles a
oxidacin-reduccin tales como el azul de metileno).
CICLO DE CRECIMIENTO DE POBLACIONES.

En un cultivo bacteriano en medio lquido, se pueden diferenciar cuatro fases en la
evolucin de los parmetros que miden el crecimiento microbiano:
Fase lag o de adaptacin: Durante la que los microorganismos adaptan su

metabolismo a las nuevas condiciones ambientales (de abundancia de nutrientes)
para poder iniciar el crecimiento exponencial.
Fase exponencial o logartmica: en ella la velocidad de crecimiento es
mxima y el tiempo de generacin es mnimo. Durante esta fase las bacterias
consumen los nutrientes del medio a velocidad mxima. La evolucin del nmero
de clulas durante esta fase se explica con el modelo matemtico descrito
anteriormente. Esta fase corresponde a la de infeccin y multiplicacin dentro del
organismo del agente infeccioso.
Fase estacionaria: en ella no se incrementa el nmero de bacterias (ni la
masa u otros parmetros del cultivo). Las clulas en fase estacionaria desarrollan
un metabolismo diferente al de la fase de exponencial y durante ella se produce
una acumulacin y liberacin de metabolitos secundarios que pueden tener
importancia en el curso de las infecciones o intoxicaciones producidas por
bacterias.
Los microorganismos entran en fase estacionaria bien porque se agota

algn nutriente esencial del medio, porque los productos de desecho que han
liberado durante la fase de crecimiento exponencial hacen que el medio sea
inhspito para el crecimiento microbiano o por la presencia de competidores u
otras clulas que limiten su crecimiento.La fase estacionaria tiene gran
importancia porque probablemente represente con mayor fidelidad el estado
metablico real de los microorganismos en muchos ambientes naturales.
Fase de muerte: se produce una reduccin del nmero de bacterias viables

del cultivo.
Las fases, parmetros y cintica de crecimiento discutidas para el caso de los

medios lquidos se presentan tambin en los slidos. La cintica de crecimiento,
en este caso, slo se puede seguir utilizando unos sistemas de deteccin
especiales siendo el ms sencillo, la medida del nmero de clulas viables por
unidad de superficie o por unidad de masa.
FACTORES FSICOS Y QUMICOS QUE INFLUYEN EN EL CRECIMIENTO

BACTERIANO.
Temperatura: Cada microorganismo tiene una temperatura de crecimiento

adecuada. Si consideramos la variacin de la velocidad de crecimiento en funcin
de la temperatura de cultivo, podemos observar una temperatura mnima por
debajo de la cual no hay crecimiento; a temperaturas mayores se produce un
incremento lineal de la velocidad de crecimiento con la temperatura de cultivo
hasta que se alcanza la temperatura ptima a la que la velocidad es mxima. Por
encima de esta temperatura ptima, la velocidad de crecimiento decae
bruscamente y se produce la muerte celular.
El aumento de la velocidad de crecimiento con la temperatura se debe al

incremento generalizado de la velocidad de las reacciones enzimticas con la
temperatura. Se denomina coeficiente de temperatura a la relacin entre el
incremento de la velocidad de reaccin y el de temperatura. En trminos
generales, la velocidad de las reacciones bioqumicas suele aumentar entre 1.5 y
2.5 veces al aumentar 10C la temperatura a la que tienen lugar.
La falta de crecimiento a temperaturas bajas se debe a la reduccin de la

velocidad de las reacciones bioqumicas y al cambio de estado de los lpidos de la
membrana celular que pasan de ser fluidos a cristalinos impidiendo el
funcionamiento de la membrana celular.
La muerte celular a altas temperaturas se debe a la desnaturalizacin de protenas

y a las alteraciones producidas en las membranas lipdicas a esas temperaturas.
Es importante tener en cuenta que a temperaturas bajas, el metabolismo celular
es lento y las clulas paran de crecer; aunque suelen morir. Sin embargo, cuando
la temperatura es superior a la ptima, se produce la muerte celular rpidamente y
las clulas no pueden recuperar su capacidad de divisin si baja posteriormente la
temperatura. Esto permite esterilizar por calor y no por fro.
Hay varios tipos de microorganismos en funcin de sus temperaturas de

crecimiento mnima, mxima y ptima.
Los microorganismos psicrtrofos son mesfilos que pueden crecer a

temperaturas bajas. Por tanto, se les puede considerar como psicrfilos
facultativos. Esto es importante desde el punto de vista aplicado porque cuando se
encuentran contaminando alimentos, son capaces de crecer en condiciones de
refrigeracin (4 - 8C) y de producir infecciones en los consumidores del alimento
(30 - 35 C).
Desde el punto de vista clnico, los microorganismos capaces de producir

infecciones en pacientes son los mesfilos y algunos psicrtrofos ya que sus
temperaturas ptimas de crecimiento coinciden con las corporales.
Actividad de agua (aw): Se denomina actividad de agua a la relacin entre

la presin de vapor de agua del substrato de cultivo (P) y la presin de vapor de
agua del agua pura (P0). El valor de la actividad de agua est relacionado con el
de la humedad relativa (HR).
El valor de la actividad de agua nos da una idea de la cantidad de agua disponible

metablicamente. Por ejemplo: comparemos el agua pura donde todas las
molculas de agua estn libremente disponibles para reacciones qumicas con el
agua presente en una disolucin saturada de sal comn (NaCl) donde una parte
importante de las molculas de agua participa en la solvatacin de los iones de la
sal disuelta. En este ltimo caso, la actividad de agua mucho menor que en el
primero. conforme aumenta la cantidad de solutos en el medio, disminuye su
actividad de agua.
El agua es un substrato en muchas reacciones bioqumicas (proteasas y lipasas,

por ejemplo). Cuando no hay agua disponible, estas reacciones se detienen y el
metabolismo se para. Esta falta de agua tambin detiene muchas de las enzimas
que podran degradar las estructuras biolgicas. Por ello, las clulas que no
crecen por falta de agua no mueren rpidamente: los sistemas de degradacin
tampoco funcionan y no las degradan.
Es decir: cuando un microorganismo se encuentra en un substrato con actividad
de agua menor que la que necesita, su crecimiento se detiene. Esta detencin del
crecimiento no suele llevar asociada la muerte del microorganismo, sino que ste
se mantiene en condiciones de resistencia durante un tiempo ms o menos largo.
En el caso de las esporas, la fase de resistencia puede ser considerado
prcticamente ilimitada.
La gran mayora de los microorganismos requiere valores de actividad de agua

muy altos para poder crecer. Los valores mnimos de actividad para diferentes
tipos de microorganismos son, a ttulo orientativo, los siguientes: bacterias
aw>0.90, levaduras aw>0.85, hongos filamentosos aw>0.80.
En funcin de su tolerancia a ambientes con baja aw, los microorganismos que

pueden crecer en estas condiciones se clasifican en halotolerantes, halfilos y
xerfilos segn toleren o requieran condiciones salinas o hipersalinas,
respectivamente.
La reduccin de la actividad de agua para limitar el crecimiento bacteriano tiene

importancia aplicada en industria alimentaria. La utilizacin de almbares,
salmueras y salazones reduce la actividad de agua del alimento para evitar su
deterioro bacteriano.
pH: Es un parmetro crtico en el crecimiento de microorganismos ya que

cada tipo de microorganismo tiene un rango de pH en el que puede vivir
adecuadamente, fuera de este rango muere. El pH intracelular es ligeramente
superior al del medio que rodea las clulas ya que, en muchos casos, la obtencin
de energa metablica depende de la existencia de una diferencia en la
concentracin de protones a ambos lados de la membrana citoplsmica. El pH
interno en la mayora de los microorganismo est en el rango de 6,0 a 8,0.
Los rangos de pH tolerables por diferentes tipos de microorganismos son,

tambin, distintos. Hay microorganismos acidfilos que pueden vivir a pH=1.0 y
otros alcalfilos que toleran pH=10.0.
Hay que considerar que, como consecuencia del metabolismo, el pH del medio de
crecimiento suele tender a bajar durante el cultivo. Por otra parte, la bajada del pH
del medio que producen ciertos microorganismos les confiere una ventaja
selectiva frente a otros competidores. As, por ejemplo, las bacterias lcticas que
producen grandes cantidades de cido lctico como consecuencia de su
metabolismo primario reducen el pH del medio a valores inferiores a los
soportables por otras bacterias competidoras (llegan a bajar el pH del medio hasta
4.5). De esta forma, las bacterias competidoras mueren y las lcticas se
convierten en la poblacin dominante. Valores disminuidos del pH se puede deber
a varios factores, uno de los cuales es la liberacin de cidos orgnicos de cadena
corta (frmico, actico, lctico) por ciertas bacterias.
En este sentido, hay que tener en cuenta que la accin bactericida de estos cidos
orgnicos de cadena corta es ms potente que la debida nicamente a la bajada
del pH que producen. Esto es, los cidos orgnicos de cadena corta son txicos
para algunas bacterias por s mismos. El efecto letal del pH cido sobre los
microorganismos tiene aplicacin en la conservacin de alimentos acidificndolos.
De esta forma, la adicin de cido actico en forma de vinagre permite la
conservacin de alimentos perecederos (escabeches, por ejemplo) y la produccin
de cidos en el curso de fermentaciones naturales permite alargar la vida de los
alimentos (coles fermentadas, por ejemplo).
Potencial redox: nos indica la capacidad del substrato para aceptar o

donar electrones, esto es: sus caractersticas oxidantes o reductoras. Uno de los
factores que intervienen en el potencial redox, aunque no el nico, es la
concentracin de oxgeno [O2].
Hay microorganismos que requieren ambientes oxidantes para crecer, mientras que
otros necesitan ambientes reductores. El metabolismo de ambos tipos de
microorganismos presenta diferencias notables. El requerimiento de condiciones
oxidantes o reductoras no debe confundirse con la necesidad de presencia o
ausencia de oxgeno para que se produzca el crecimiento. En general, cuando un
microorganismo requiere un ambiente oxidante se dice que desarrolla un metabolismo
oxidativo (o respirativo) mientras que los microorganismos que requieren ambientes
reductores (o menos oxidantes) realizan un metabolismo fermentativo.
Un microorganismo es aerobio cuando necesita oxgeno para vivir y es anaerobio

cuando o bien no lo necesita (anaerobios facultativos como las bacterias entricas, o
como Saccharomyces cerevisiae; o anaerobios aerotolerantes como las bacterias
lcticas) o cuando muere en presencia de oxgeno (anaerobios estrictos como los
clostridios).
Hay microorganismos que, aunque viven en presencia de oxgeno, no son capaces de

utilizarlo como aceptor final de electrones y deben desarrollar un metabolismo
fermentativo (los estreptococos, por ejemplo). Por otra parte, hay microorganismos
que pueden desarrollar ambos tipos de metabolismo. Esto es: en presencia de
oxgeno desarrollan un metabolismo oxidativo y en su ausencia, fermentativo. El
rendimiento de los procesos fermentativos es menor que el de los respirativos: las
bacterias y las levaduras producen menos biomasa cuando crecen fermentando que
cuando lo hacen respirando.
En el curso de ciertas reacciones metablicas redox se forman compuestos altamente

reactivos (radicales libres, formas superxido) que pueden daar las protenas,
membranas y cidos nucleicos produciendo la muerte de las clulas. Las clulas se
defienden de estos compuestos reactivos mediante las enzimas de: superxido
dismutasa y catalasa. Los anaerobios estrictos carecen de ambas enzimas o tienen
niveles muy bajos de estas, de forma que no pueden sobrevivir en presencia de
oxgeno. La deteccin de estas enzimas tiene valor taxonmico.
POR EQUIPO
1 Matraz Erlenmeyer 100ml
1 Microscopio
5 Portaobjetos y cubreobjetos
1 Asa bacteriolgica calibrada 0.1ml micropipeta 10 a 100ul
6 Tubos de ensayo 7x100 con tapa de baquelita
2 Mecheros Bunsen o Fisher
2 pipetas graduadas de 5ml
50ml de solucin salina fisiolgica (SSF) estril
1 esptula
2 cubetas para espectrofotmetro
1 agitador magntico
1 Frasco de torundas con alcohol
1 Pizeta con agua destilada
Papel absorbente
MATERIAL POR GRUPO
4 tubos 7x100
Espectrofotmetro
Estufa de incubacin
Autoclave
Balanza analtica
Parrilla con agitacin
Agitador magntico
Medio nutritivo bacteriolgico
Cultivo bacteriano fresco
Agua destilada
Jabn para manos
Cloro
Franela
METODOLOGA
1. Preparar 40ml de medio nutritivo segn instrucciones.
2. Marcar una pipeta para usar exclusivamente con el medio de cultivo.
3. Marcar la otra pipeta para usar exclusivamente con la Solucin Salina
Fisiolgica (SSF).
4. Se marcarn 2 tubos con el nmero 1, 2 con el nmero 2 y 2 con el nmero
3.
5. En el caso de los tubos por grupo slo un equipo preparar dichos tubos,
los marcarn con los nmeros 1b, 2b y 3b, y estos sern utilizados como
blancos en cada lectura.
6. Vaciar con la pipeta 5ml de medio, en el tubo 1b, 2.5ml de medio y 2.5 de
SSF en el tubo 2b y 1.25ml con 3.75ml en el tubo 3b.
7. Vaciar 5ml de medio en cada tubo 1, tapar sin apretar
8. Vaciar 5ml de medio en cada tubo 2 tapar sin apretar.
9. Vaciar 2.5ml de medio en cada tubo 3 y adicionar 2.5ml de SSF, tapar sin
apretar.
10. Vaciar 1.25ml de medio en cada tubo 4 medio y adicionar 3.75ml de SSF,
tapar sin apretar.
11. Esterilizar en autoclave 15min a 121C, 15lbs de presin.
12. Dejar enfriar.
13. Limpiar el rea de trabajo con cloro para tener un rea desinfectada para
trabajar.
14. Encender los mecheros
15. Inocular 0.01ml de cultivo bacteriano fresco en cada tubo 2, 3 y 4
16. Homogenizar los inculos con vrtex con la mano
17. Uno de cada tubo se llevar a incubar 24hr a 36C.
18. El resto de los tubos se leern en el espectrofotmetro en este momento.
Leer cada tubo por espectrofotometra a 540nm en absorbancia, como
blanco se utilizar el tubo 1b, 2b y 3b, asegurarse de aplicar autocero. Para
cada concentracin de medio a leer tener precaucin de llenar lo suficiente
la cubeta para que el espectro lea adecuadamente, tambin tener
precaucin de enjuagar perfectamente la pizeta luego de cada lectura.
19. Los tubos de la incubadora se sometern a lectura luego del tiempo
indicado bajo las mismas condiciones de la primera lectura.
RESULTADOS.
Se trazar una grfica con los resultados obtenidos de ambas lecturas, en el eje
de las X estarn los muestreos y en el de las Y las unidades de absorbancia, se
evidenciar entonces el crecimiento por el aumento en las unidades de absorbacia
de los tubos incubados. El alumno notar que el crecimiento bacteriano no fue
igual en todos los tubos ya que las bacterias no tenan la misma concentracin de
nutrientes y esto.
CUESTIONARIO
1.- Por qu se puede inferir que el aumento en las unidades de absorbancia
significa que aument la poblacin bacteriana?
2.- Cules son las fases de una curva de crecimiento bacteriano?
3.- Qu funcin tienen los blancos en una lectura de espectrofotometra?
4. Plantee una actividad biotecnolgica donde aplique esta prctica
GLOSARIO
Agar: elemento solidificante muy utilizado para la preparacin de medios de

cultivos. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica
al enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el
crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l.
Cepa: variante gentica especfica de un organismo. Conjunto de

individuos de una misma especie existente en una colonia o cultivo.
Inculo: inoculum (microbio) pequea cantidad de un producto que

contiene bacterias y que se toma, por ejemplo, para hacer un cultivo, una
resiembra o infectar determinados animales de experimentacin.
Metabolito: metabolito (Bioqum.) producto del metabolismo inmediato.
Microflora intestinal: la microflora intestinal son bacterias intestinales cuya

principal funcin es fermentar la sustancias aportadas por los alimentos (por
ejemplo, las fibras alimentarias), que no pueden digerirse en el intestino delgado.
Esta fermentacin produce, entre otras molculas, cido lctico y cidos grasos de
cadena corta (actico, propinico y butrico.
Probiticos: las sustancias probiticas (bacterias vivas) y las prebiticas

(componentes alimentarios de los que viven stas). Las bacterias buenas o
"probiticas" ayudan a mantener un equilibrio bacteriano saludable, estimulan la
inmunidad intestinal y evitan la aparicin de organismos patgenos que causan las
alteraciones estomacales e intestinales. Algunos ejemplos de alimentos
probiticos son: ciertos yogures, productos lcteos fermentados y otros alimentos
como verduras y productos de soja fermentados.
REFERENCIAS
4. BROCK, T. D. y SMITH, O. W. Microbiologa. Mxico. Prentice Hall.
Hispanoamericana. 1997
5. CARPENTER, P. L. Microbiologa. Mxico. Interamericana. 1985.
6. MC FADDIN J., Pruebas bioqumicas para la identificacin de Bacterias de
Importancia Clnica. Ed. Panamericana.
7. VILLE, C. A. ET AL., Biologa 2. Mxico Interamericana. Mc Graw-Hill.
1992.

Manual de Prácticas Biología 02092016

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PRCTICA No.

TEORIA DE LA GENERACIN ESPONTNEA

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Se abri as camino a la obtencin de numerosas molculas orgnicas. En

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1. BROCK, T. D. y SMITH, O. W. Microbiologa. Mxico. Prentice may.

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Las membranas biolgicas en general, aunque pueden incluirse en algunos de

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2. Menciona el fundamento del uso del alcohol en esta prctica y el por qu de

3. Qu otros compuestos estaras esperando encontrar dentro de la muestra

4. Plantee una actividad biotecnolgica donde aplique esta prctica.

1.- GARDNER E. (1985) Principios De Gentica. Limusa. Mxico

2.- BARAHONA A. Y DANIEL PIERO (1994). Gentica: Continuidad De La

3.- SMITH-KEARY (1979). Gentica. Estructura Y Funcin.Publicaciones

4. Ville C.A., Solomon E. , Davis P.W. 1987 El Fascinante Mundo De La

FIGURAS MITTICAS EN PICES DE RAZ DE HABA

El alumno ser capaz de cuantificar el nmero de cromosomas en pices de

Es la divisin celular que consiste en que a partir de una clula se obtienen 2

MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO

Realizar esquemas de lo observado.

1.- GARDNER E. (1985) Principios de Gentica. Limusa. Mxico