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Actividad antibacteriana in vitro de Curcuma longa (Zingiberaceae)

frente a bacterias nosocomiales en Montera, Colombia


Nelson Mndez lvarez, Alberto Angulo Ortz & Orfa Contreras Martnez*

TA
Grupo de Qumica de los Productos Naturales, Universidad de Crdoba, Cra. 6 N 76-103 Montera, Colombia;
nemendez15@gmail.com, aaangulo@correo.unicordoba.edu.co, *oicontreras@correo.unicordoba.edu.co

EN
Recibido 00-X-2015. Corregido 00-X-2015. Aceptado 00-X-2015.

PR
Abstract: In vitro antibacterial activity of Curcuma longa (Zingiberaceae) against nosocomial bacteria in
Montera, Colombia. Bacterial resistance is a growing health problem worldwide that has serious economic

IM
and social impacts, compromising public health, and the therapeutic action of current antibiotics. Therefore, the
search for new compounds with antimicrobial properties is relevant in modern studies, particularly against bac-
teria of clinical interest. In the present study, in vitro antibacterial activity of the ethanol extract and essential oil

DE
of Curcuma longa (Zingiberaceae) was evaluated against nosocomial bacteria, using the microdilution method.
Escherichia coli strains, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Proteus sp. were used, Salmonella
sp. and Bacillus sp., isolated from nosocomial infections in a hospital in the city of Monteria and reference
BA
strains of S. aureus ATCC 43300, S. aureus ATCC 29213, S. aureus ATCC 25923, P. aeruginosa ATCC 27853, E.
coli ATCC 25922 and K. pneumonia ATCC 700603. The ethanol extract antibacterial profile was more efficient
UE
at higher concentrations (1 000 ppm), obtaining significant percentages of reduction of more than 50 % against
K. pneumoniae ATCC 700603 and a clinical isolate of E. coli; while compared to Bacillus clinical isolate, was
more active than the essential oil. For the rest of microorganisms, the reduction percentages obtained at a con-
PR

centration of 1 000 ppm varied between 17 and 42 % with ethanolic extract, and 8 to 43 % with essential oil. At
concentrations of 100 and 500 ppm antibacterial activity of the extracts was lower. The results indicated that the
F/

ethanolic extract and essential oil of C. longa rhizomes have active compounds with antibacterial properties that
could be used in future research as a therapeutic alternative for the treatment of infections caused by nosocomial
pathogens. Rev. Biol. Trop. 64 (3): 000-000. Epub 2016 September 01.
OO

Key words: Curcuma longa, antibacterial activity, Zingiberaceae, essential oil, microdilution.
PR
GE

Uno de los grandes retos a los que se Khan, Ahmad, & Mehboob, 2015). Ante esta
enfrentan las unidades de salud a nivel mun- situacin, es conveniente fomentar la bsqueda
dial, tiene que ver con el tratamiento y control de nuevos medicamentos a partir de fuentes
PA

de infecciones nosocomiales producidas por naturales, ya que las perspectivas futuras en


bacterias con resistencia o multiresistencia el uso de las drogas antibiticas de hoy son
antibitica. Este creciente problema de salud todava inciertas. Por ello, la identificacin y
pblica, tiene gran importancia en la actuali- evaluacin de molculas con actividad biol-
dad, por las implicaciones econmicas, sociales gica, aisladas de fuentes naturales, es cada vez
y humanas que causa. Adems, genera una ms relevante en los estudios modernos a nivel
complicacin importante en el cuidado hospi- mundial (Negi, 2012). La bsqueda de nue-
talario del paciente, que aumenta el ndice de vos compuestos con actividad antibacteriana,
morbilidad y mortalidad, el tiempo de hospi- dentro de la medicina herbolaria tradicional,
talizacin y los costos asociados, el personal representa un factor determinante para el tra-
sanitario y el desgaste de los sistemas de salud tamiento de las infecciones producidas por
(Barahona et al., 2014; lvarez et al., 2014; microorganismos. Sin embargo, es necesario

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categorizar este tipo de estudios, porque la Condimentarias y Afines, de sus cultivos ubi-
actividad antimicrobiana de extractos vegetales cados en el municipio de Canalete (84724
puede diferir entre cepas de una misma especie. N - 761428 W, altitud 50 msnm, 28 C),
Adicionalmente, sus propiedades pueden variar Departamento de Crdoba, Colombia, en febre-
en funcin de los rganos vegetales empleados, ro 2013 durante la estacin seca. La confirma-
los mtodos de extraccin y pueden cambiar en cin taxonmica fue realizada en el Herbario
funcin de las estaciones o periodos de recolec- de la Universidad de Crdoba, donde reposa
ta y las diferentes condiciones fisicoqumicas una muestra (HUC-003112).
del terreno (Martnez, Betancourt, Alonso, &
Jauregui, 1996; Jain, Bansal, & Bhasin, 2009). Obtencin del extracto crudo: Los rizo-
En general, las plantas y sus constitu- mas se lavaron con agua destilada estril;
yentes ocupan una posicin importante en el seguidamente, fueron cortados en rodajas de
conocimiento de nuevas sustancias y princi- 2-4 mm de espesor y se secaron durante ocho
pios activos (Gurib, 2006). En el mundo, se horas a temperatura ambiente. Posteriormente,
han desarrollado numerosas investigaciones fueron pulverizados 300 g y sometidos a per-
enfocadas a la bsqueda de nuevos compuestos colacin por 48 horas con 1.5 L de etanol al
con propiedades antimicrobianas (Saha & Paul, 96 %. El disolvente se concentr al vaco a 45
2014; Baharudin, Hamid, & Susanti, 2015). C en un rotaevaporador (BCHI Rotavapor
Curcuma longa L. (Zingiberaceae) se ha uti- R-200) hasta obtener el extracto crudo. A este
lizado desde la antigedad como condimento, extracto se le realiz una marcha fitoqumica
colorante y estimulante aromtico (Chairman, preliminar, que es una prueba para determinar
Jayamala, Christy, & Singh, 2015), y se le han de manera cualitativa la presencia o ausencia
atribuido propiedades antifngicas (Al-Daihan de alcaloides, flavonoides, taninos, esteroides,
et al., 2013), antibacterianas (Rawat & Rawat, antraquinonas y saponinas, siguiendo la meto-
2015), antiparasitarias (Singh, Mehta, Mehta, dologa descrita en Sanabria (1983).
& Shukla, 2011), antivirales (Kim et al., 2009),
antioxidantes, antiinflamatorias (Ramadan, Al- Obtencin del aceite esencial: A partir
Kahtani, & El-Sayed, 2011) y anticancergenas de 500 g de rizoma, previamente cortados en
(Annapurna, Suhasin, Raju, Jaya, & Siva, rodajas y secados al sol durante dos horas, se
2011). Si bien C. longa ha sido ampliamente obtuvieron 2.8 mL de aceite esencial, mediante
estudiada por sus propiedades antibacterianas destilacin por arrastre con vapor de agua en
(Rao & Mittal, 2014; Gaikwad, Bodhankar, un equipo tipo Clevenger. El aceite obtenido se
Ittadwar, & Waikar, 2014; Chairman et al., sec con Na2SO4 anhidro y se almacen a 4 C
2015), ha sido pobremente caracterizada en el protegido de la luz.
contexto regional (Falco, Martnez, Rodrguez,
Nez, & Sevillano, 2011; Garca, Olaya, Sie- Microorganismos usados: Se emplearon
rra, & Padilla 2011; Coy & Acosta 2013), y en cepas de Escherichia coli, Pseudomonas aeru-
especial, frente a bacterias intrahospitalarias. ginosa, Klebsiella pneumoniae, Proteus sp.,
Por ello, en la presente investigacin se evalu Salmonella sp. y Bacillus sp., aisladas a partir
la actividad antibacteriana in vitro del extracto de infecciones nosocomiales en el Hospital San
etanlico y del aceite esencial de C. longa, Jernimo de Montera y cepas de referencia S.
frente a bacterias nosocomiales. aureus ATCC 43300, S. aureus ATCC 29213,
S. aureus ATCC 25923, P. aeruginosa ATCC
MATERIALES Y MTODOS 27853, E. coli ATCC 25922 y K. pneumoniae
ATCC 700603. Los cultivos bacterianos se
Material vegetal: Los rizomas de C. crioconservaron a una temperatura de -20 C
longa fueron donados por la Secretara Tc- en medio BHI (infusin cerebro corazn) que
nica de Plantas Medicinales, Aromticas, contena 30 % (v/v) de glicerol y 0.6 % de

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agar. Las cepas de trabajo fueron mantenidas y como control de crecimiento, se utilizaron
por subcultivos peridicos preservados a 4 C. pozos con BHI sin el extracto, pero inoculados
Para todo el estudio se sigui la normatividad con el microorganismo. Los controles positivos
tica establecida por el Ministerio de Salud de fueron antibiticos comerciales (vancomicina,
Colombia, en su resolucin N008430 de 1993. ciprofloxacina y cloranfenicol), mientras que
los negativos fueron DMSO al 10 % y Tween-
Preparacin y estandarizacin del in- 80 al 5 %. La bandeja de microdilucin se
culo bacteriano: Partiendo de un cultivo ax- incub a 36 1 C por 24 horas. Tras la incu-
nico, se tomaron de 3 a 5 colonias y se bacin, el crecimiento bacteriano se detect
sembraron en 9 mL de caldo BHI (Merck), e por medicin de la densidad ptica a 630 nm
incubadas a 36 1 C durante 16-18 horas. en un lector de ELISA (ChroMate 4300). Para
Tras la incubacin, se realizaron diluciones evaluar la viabilidad celular, se adicionaron
seriadas de la suspensin bacteriana, midiendo 20 L de una solucin alcohlica (0.5 mg/
la densidad ptica de cada dilucin a 630 nm mL) de bromuro de 3-(4,5-dimetil-2-tiazolil)-
en un espectrofotmetro (GENESYSTM 20, 2,5-difeniltetrazolium (MTT). Todos los ensa-
Thermo Spectronic), hasta alcanzar una absor- yos fueron realizados por triplicado.
bancia comprendida entre 0.08 y 0.13 (Valgas, Se utiliz un diseo experimental com-
Souza, Smnia, & Smnia, 2007). Esta absor- pleto aleatorizado, en el que se utilizaron tres
bancia correspondi a 2x108 UFC/mL, y a una rplicas para cada uno de los tratamientos
turbidez 0.5 en la escala de MacFarland (CLSI, anteriormente mencionados (concentraciones
2009; Alves, Guzman, Figueroa, Tello, & De del extracto y controles). Con las absorbancias
Olivera 2011). obtenidas se construyeron tablas en el progra-
ma Microsoft Excel, expresando los resulta-
Actividad antibacteriana: Para los ensa- dos como medias desviaciones estndar. El
yos de actividad antibacteriana, el extracto efecto de las concentraciones de los extractos
etanlico y el aceite esencial, se diluyeron en sobre el crecimiento de los microorganismos
dimetilsulfxido DMSO al 10 % y Tween-80 se determin con el porcentaje de reduccin del
al 5 %, respectivamente, a una concentracin crecimiento bacteriano propuesto por (Sandasi,
inicial de 2000 ppm (Matasyoh, Kiplimo, Leonard, & Viljoen, 2010) y ajustado por los
Karubiu, & Hailstorks, 2007; Valgas et al., autores, de la siguiente forma:
2007). Las concentraciones a ensayar (100, % RC = [(CC - CE) (ATC - CE)]*100/(CC - CE)
500 y 1000 ppm), se obtuvieron por adicin
de caldo BHI (Valgas et al., 2007). La activi- Dnde: % RC es el porcentaje de reduc-
dad antibacteriana se evalu por el mtodo de cin del crecimiento bacteriano; CC es la
microdilucin, siguiendo la metodologa imple- absorbancia obtenida para el control de creci-
mentada por Valgas et al. (2007), y teniendo en miento; CE es la absorbancia obtenida para el
cuenta las recomendaciones del Clinical and control de esterilidad; y ATC es la absorbancia
Laboratory Standards Institute - CLSI sobre obtenida para una determinada concentracin
la preparacin y estandarizacin del inculo del extracto, CC-CE expresa el crecimiento
bacteriano, que se ajust como se describi real de la bacteria, y ATC-CE el crecimiento
previamente. Luego, 100 L de las diferen- real de la bacteria a una determinada concen-
tes concentraciones del extracto etanlico y tracin del extracto.
el aceite esencial, fueron distribuidas en una
microplaca de 96 pozos. Cada pozo de prueba RESULTADOS
fue inoculado con 10 L de la suspensin bac-
teriana. Como control de esterilidad se utiliza- Los resultados de la actividad antibacteria-
ron pozos que contenan el extracto, pero que na del extracto etanlico y del aceite esencial
no fueron inoculados con el microorganismo, de los rizomas de C. longa se resumen en el

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cuadro 1. De forma general, se observa que clnicos de P. aeruginosa [Pa (AI)] y K. pneu-
a medida que aumenta la concentracin del moniae [Kp (AI)] (Fig. 1), pero con porcentajes
extracto etanlico y del aceite esencial, se de reduccin inferiores al 50 %.
produce una disminucin en las absorbancias, La actividad antibacterial del aceite esen-
reflejando una reduccin en el crecimiento cial fue menor que el observado con el extracto
bacteriano (medido este como porcentaje de etanlico, y solo a concentracin de 1000
reduccin de crecimiento, como fue descri- ppm mostr un porcentaje de reduccin del
to previamente). A todas las concentraciones crecimiento, superior al 50 % contra un ais-
evaluadas, el extracto etanlico mostr porcen- lado clnico del gnero Bacillus [B (AI)]. A
tajes de reduccin de ms del 50 % frente al esta concentracin se obtuvieron los mayores
crecimiento de la cepa K. pneumoniae ATCC porcentajes de reduccin contra el resto de los
700603 [Kp ATCC 700603], y un aislado clni- microorganismos usados, destacando porcen-
co de E. coli [Ec (AI)], siendo esta reduccin tajes de 43, 43, 39 y 33 % frente a S. aureus
evidente, a medida que aumentaba la concen- ATCC 25923 [Sa ATCC 25923], K. pneumo-
tracin del extracto. Este comportamiento fue niae [Kp (AI) y Kp (AII)] y S. aureus ATCC
observado tambin contra las cepas S. aureus 43300 [Sa ATCC 43300], respectivamente.
ATCC 25923 [Sa ATCC 25923], P. aerugino- Con el resto de bacterias se obtuvieron porcen-
sa ATCC 27853 [Pa ATCC 27853] y aislados tajes inferiores (Fig. 2).

CUADRO 1
Absorbancias obtenidas por el mtodo de microdilucin

TABLE 1
Absorbance obtained by microdilution method

Extracto etanlico
Bacterias Cdigo
C. crec. 100 ppm 500 ppm 1 000 ppm C. est.
E. coli Ec (AI) 0.6750.069 0.4530.011 0.4420.005 0.4220.021 0.2520.012
K. pneumoniae ATCC 700603 Kp ATCC 700603 0.6680.030 0.4380.010 0.4190.020 0.4160.008 0.2640.007
P. aeruginosa ATCC 27853 Pa ATCC 27853 0.6030.023 0.5890.059 0.5870.045 0.5450.050 0.2520.014
P. aeruginosa Pa (AI) 0.5590.021 0.5550.013 0.5480.029 0.4980.029 0.3000.035
S. aureus ATCC 25923 Sa ATCC 25923 0.5180.006 0.4840.052 0.4560.019 0.4050.021 0.2520.007
K. pneumoniae Kp (AI) 0.5710.040 0.4710.014 0.4570.001 0.4510.005 0.2760.009
Aceite esencial
S. aureus ATCC 43300 Sa ATCC 43300 0.6590.062 0.5560.027 0.5530.007 0.5170.006 0.2330.004
S. aureus ATCC 25923 Sa ATCC 25923 0.8790.078 0.6560.046 0.6300.025 0.6180.030 0.2690.008
S. aureus ATCC 29213 Sa ATCC 29213 0.6920.052 0.6740.086 0.6250.030 0.5910.058 0.3340.089
E. coli ATCC 25922 Ec ATCC 25922 0.8670.029 0.8480.013 0.7870.033 0.7370.010 0.2520.009
E. coli Ec (AII) 1.0950.025 1.1030.007 1.0190.020 0.9090.098 0.2540.005
E. coli Ec (AI) 0.6750.069 0.6540.016 0.6490.051 0.5970.017 0.2520.009
Proteus sp. Proteus (AI) 1.0280.014 0.9230.036 0.8750.019 0.8170.031 0.2690.005
Bacillus sp. B (AI) 0.8180.027 0.6370.044 0.5820.052 0.5040.100 0.2520.009
K. pneumoniae Kp (AI) 0.9750.015 0.9260.016 0.8040.039 0.6680.036 0.2630.014
K. pneumoniae Kp (AII) 1.1130.011 1.1090.027 1.1050.039 0.7860.125 0.2640.005
Salmonella sp. S (AI) 0.9530.036 0.9290.021 0.9000.045 0.8970.014 0.2670.009
P. aeruginosa ATCC 27853 Pa ATCC 27853 1.2910.150 1.2460.067 1.1180.141 1.0060.056 0.2490.002

C. crec: control de crecimiento, C. est: control de esterilidad.

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Fig. 1. Porcentajes de reduccin del crecimiento bacteriano obtenidos
con el extracto etanlico de los rizomas de Curcuma longa.
Fig. 1. Reduction percentages of bacterial growth obtained
with the ethanolic extract of Curcuma longa rhizomes.

Fig. 2. Porcentajes de reduccin del crecimiento bacteriano obtenidos


con el aceite esencial de los rizomas de Curcuma longa.
Fig. 2. Reduction percentages of bacterial growth obtained with
the essential oil from the rhizomes of Curcuma longa.

Los ensayos colorimtricos basados en DISCUSIN


la adicin de MTT, reflejaron el crecimiento
bacteriano, tras el viraje de color experimenta- Los resultados obtenidos en este estudio
do en cada uno de los pozos de la microplaca, indican que el extracto etanlico y el aceite
excepto en el control de esterilidad. Se eviden- esencial de los rizomas de C. longa poseen
ci igualmente la inactividad de los controles propiedades antibacterianas. El extracto etan-
negativos frente al crecimiento bacteriano. Es lico fue el de mayor potencial contra las bacte-
de resaltar que las absorbancias obtenidas en rias evaluadas, con significativos porcentajes
los pozos de prueba se mantuvieron por encima de reduccin del crecimiento bacteriano. Hay
del control de esterilidad y por debajo del con- reportes en la literatura cientfica que muestra
trol de crecimiento, segn lo esperado. valores de concentracin mnima inhibitoria
El anlisis fitoqumico cualitativo prelimi- (MIC) y concentracin mnima bactericida
nar del extracto etanlico, revel la presencia (MBC) de extractos de crcuma contra dife-
de saponinas, taninos, alcaloides y flavonoides. rentes cepas bacterianas, que varan en el rango

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de 5 a 55 mg/mL (Chakraborty, Nath, Saikia, (Shan, Cai, Brooks, & Corke, 2007). Un estu-
& Sengupta, 2014); estas son concentraciones dio reciente, revela que S. aureus muestra
superiores a las empleadas en este estudio. deformidad morfolgica, con prdida parcial
Asimismo, otros estudios han demostrado que de la membrana citoplasmtica, al ser tratado
los extractos hidroetanlicos obtenidos de los con extractos obtenidos de los rizomas de C.
rizomas, tienen actividad antifngica y anti- longa (Gupta, Mahajan, & Sharma, 2015).
bacteriana frente a S. aureus ATCC 6538 y El perfil fitoqumico del extracto etanlico
E. coli ATCC 25922 (Falco et al., 2011). Por evaluado es consistente con los reportes biblio-
otra parte, el extracto etanlico de las hojas grficos, destacando la presencia de saponinas,
y fracciones de diferente polaridad (hexano, taninos, alcaloides y flavonoides (Chairman et
acetato de etilo, butanol y etanol) presentaron al., 2015), siendo estos ltimos responsables
actividad antimicrobiana contra S. aureus, E. de la actividad antibacteriana en varias plantas
coli y Aspergillus niger, mientras que los cur- (Cordell, Quinn, & Farnsworth, 2001). Los
cuminoides (curcumina, demetoxicurcumina resultados de este trabajo permiten concluir que
y bisdemetoxicurcumina) tuvieron actividad la C. longa que crece en la regin de Canalete,
frente a S. aureus y S. epidermidis (Garca Crdoba, es capaz de producir compuestos con
et al., 2011). En otro estudio (Coy & Acosta, potencial antibacteriano frente a patgenos
2013) con el aceite esencial de C. longa, se nosocomiales, lo que amerita continuar con
obtuvo los siguientes porcentajes de inhibicin la bsqueda de los componentes responsables
de crecimiento de 70, 60, 10 y 10 %, respec- de esta actividad, que puedan emplearse como
tivamente, frente a S. aureus ATCC 6538, E. alternativa teraputica para el tratamiento de
faecalis ATCC 29212, E. coli ATCC 25922 y infecciones causadas por bacterias.
Salmonella tiphymurium ATCC 14028s, res-
pectivamente. Investigaciones similares resal-
AGRADECIMIENTOS
tan diversas propiedades biolgicas en otras
especies de crcuma, incluyendo la actividad Este trabajo fue realizado en el marco
antibacteriana y antifngica de C. xanthorrhiza del proyecto FCB-11-08, financiado por la
(Mary et al., 2012), C. cedoaria y C. malabari- Divisin de Investigacin de la Universidad
ca (Wilson et al., 2005). de Crdoba. Los autores agradecen a Catalina
Los resultados obtenidos en este estudio, Tovar, del Grupo de Investigacin en Enferme-
evidencian el perfil antibacteriano de extractos dades Tropicales y Resistencia Bacteriana de
obtenidos de C. longa. Las propiedades anti- la Universidad del Sin, por la donacin de las
bacterianas del extracto etanlico y el aceite cepas ATCC.
esencial de esta especie, pueden explicarse por
el efecto sinrgico entre los diferentes com-
ponentes qumicos de los extractos y/o por la RESUMEN
presencia de otros componentes que incluso La resistencia bacteriana es un problema de salud
pueden ser activos a bajas concentraciones creciente a nivel mundial que genera graves impactos eco-
(Sokovi, Glamolija, Marin, Brki, & van nmicos y sociales, comprometiendo la accin teraputica
Griensven, 2010). Los metabolitos activos de de los antibiticos actuales. Por ello, la bsqueda de nuevos
compuestos con propiedades antimicrobianas se hace ms
las plantas pueden exhibir su efecto antimicro- relevante en los estudios modernos, en especial frente a
biano, por la degradacin de la pared celular, bacterias de inters clnico. En el presente estudio se evalu
disrupcin de la membrana citoplasmtica, sali- la actividad antibacteriana in vitro del extracto etanlico
da de componentes celulares, alteraciones en la y el aceite esencial de Curcuma longa L (Zingiberaceae),
sntesis de ADN y ARN, en el transporte de contra bacterias nosocomiales utilizando el mtodo de
microdilucin. Se utilizaron cepas de Escherichia coli,
electrones y en la absorcin de nutrientes, afec- Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Proteus
tando la produccin de energa y modificando sp., Salmonella sp. y Bacillus sp., aisladas de infecciones
constituyentes en cidos grasos y fosfolpidos nosocomiales en un centro hospitalario de la ciudad de

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Montera y cepas de referencia de S. aureus ATCC 43300, (INICC) multidimensional hand hygiene approach
S. aureus ATCC 29213, S. aureus ATCC 25923, P. aerugi- in three cities of Colombia. International Journal of
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ATCC 700603. El perfil antibacterial del extracto etanlico
fue ms evidente a las concentraciones ms altas (1000 Chairman, M., Jayamala, M., Christy, V., & Singh, R.
ppm), obteniendo porcentajes de reduccin significativos (2015). Phytochemical screening and antimicrobial
activity of Curcuma longa natural dye. General
de ms del 50 % frente a K. pneumoniae ATCC 700603 y
Medicine, 3,171.
un aislado clnico de E. coli, mientras que, frente al aislado
clnico del gnero Bacillus fue ms activo el aceite esen- Chakraborty, B., Nath, A., Saikia, H., & Sengupta, M.
cial. Para el resto de los microorganismos los porcentajes (2014). Bactericidal activity of selected medicinal
de reduccin obtenidos a una concentracin de 1000 ppm plants against multidrug resistant bacterial strains
variaron entre 17 y 42 % con el extracto etanlico y entre from clinical isolates. Asian Pacific Journal of Tropi-
8 y 43 % con el aceite esencial. A concentraciones de 100 cal Medicine, 7(Suppl. 1), S435-S441.
y 500 ppm la actividad antibacteriana de los extractos fue
menor. Los resultados obtenidos indican que el extracto Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). (2009).
etanlico y el aceite esencial de los rizomas de C. longa Instituto de Estndares Clnicos y de Laboratorio.
poseen compuestos activos con propiedades antibacte- Mtodos para Pruebas de sensibilidad a los antimi-
rianas que podran emplearse en investigaciones futuras, crobianos por dilucin para bacterias que crecen en
condiciones aerbicas. Estndar aprobado-Octava
como una alternativa teraputica para el tratamiento de
Edicin Documento CLSI M07-A8, 29(2),100.
infecciones producidas por patgenos nosocomiales.
Cordell, G., Quinn, M., & Farnsworth, N. (2001). The
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