Universitatea Politehnica din Bucuresti

Facultatea Stiinta si Ingineria Materialelor

Biosenzori Optici.
Aplicatii in medicina.

Studenti: Miuleti Marius Iulian

Vleju Liviu

Grupa: 1031B

Bucuresti

2010
 1.1Notiuni introductive

Biosenzorii (senzorii chimici si biochimici) sunt dispozitive care

realizeaza conversia marimilor ce caracterizeaza substantele din punct de
vedere chimic si biochimic in semnale electrice (fig.1.1).

Fig.1.1 Model tipic al unui biosensor pentru detectarea unor particule(molecule, ioni) in mediu lichid sau
gazos

Aceste marimi sunt concentratiile, presiunile partiale sau activitatile

unor particule cum ar fi atomii, moleculele, ionii, sau compusi biologici care
se afla in gaze, lichide si solide, marimi prin care o stare chimica sau
biochimica este determinata.

Biosenzorii sunt dispozitive analitice formate dintr-un material biologic

imobilizat (enzime, anticorpi, celule vii, microorganisme, sau combinatii ale
acestora) in contact apropiat cu un dispozitiv corespunzator care realizeaza
conversia semnalului biochimic intr-un semnal electric masurabil. Acesta va
detecta speciile electroactive produse sau consumate intr-o reactie
enzimatica (fig1.2).
 Fig.1.2 Structura unui lant de masurare cu biosenzor.

Pana in present au fost realizate mai multe variante constructivepentru

biosenzori si numarul acestora este intr-o permanenta crestere. In tabelul
1.1 sunt prezentate principalele combinatii utilizate current.

Tabelul 1.1 Variante constructive de biosenzori

 1.2 Scurt istoric In domeniul senzorilor chimici si
biochimici
In tabelul 1.2 vor fi prezentate principalele momente care au marcat
evolutia senzorilor chimici si biochimici, autorii i referintele bibliografice
corespunzatoare.

Tabelul 1.2 Scurt istoric al evoluiei senzorilor chimici i biochimici

Anul Senzor chimic sau biochimic

1885 Celul electrochimic cu doi electrozi de platin

1888 Electrozi metalici n soluii de sare

1897 Electrod de hidrogen pentru pH

1904 Senzor cu fir cald pentru gaze

1906 Electrodul de sticl

1909 Indicatori de culoare pentru pH

1913 Celul cu doi electrozi Cu/Pt pentru msurarea ionilor de clor n soluii

1922 Electrozi cu pictur de mercur pentru polarografie

1923 Senzor tip combustie catalitic

1925 Electrod de antimoniu (Sb) pentru pH

1928 Celul cu doi electrozi Zn/Ae pentru concentraia ionic de oxigen dizolvat

1929 Utilizarea electrozilor de sticl pentru msurarea pH-lui

1933 Celul cu doi electrozi pentru msurarea concentraiei de anioni

1938 Senzor de umiditate care utilizeaz film de clorur de litiu (LiCl)

1941 Senzor paramagnetic de oxieen

1952 Senzor de gaz cu celul galvanic

1957 Celul cu doi electrozi cu membran depus pentru msurarea concentraiei de oxigen

1958 Electrod de sticl de pH cu membran pentru msurarea pCOo din snge

1959 Senzor termocatalitic cu fir pentru gaze combustibile

1961 Senzor cu electrolit solid pentru msurarea concentraiei oxigenului eazos

1962 Conceptele de baz ale senzorilor biochimici. Electrozi enzimatici

1962 Senzor de gaz cu oxid semiconductor

1964 Electrozi ion-selectivi cu membran de cauciuc siliconic

1964 Senzor piezoelectric cu cristal de cuar

1965 Electrozi ion-selectivi cu electroliti solizi

1967 Senzor de glucoza

1967 Senzor de gaz cu oxid semiconductor

1967 Senzor conductometric cu SnOo

 1970 Celula electrochimic cu doi electrozi pentru msurarea concentraiei de CO

1970 Senzor de gaz cu fibr optic

1972 Senzor de test imunologic piezoelectric

1974 Senzor enzimatic cu termistor

1975 Senzor enzimatic cu FET (EnFET)

1976 Senzor amperometric de oxigen cu dielectric solid

1977 Senzor imunologic potentiometric

1979 Senzor imunolocic cu FET

1979 Senzori chimici SAW(cu unde acustice de suprafa)

1980 Senzor de pH cu fibr optic

1982 Senzor chhmc cu SPR (rezonant "piasmon" de suprafa)

1984 Senzori chimici optoelectronici integrai

1986 Receptrod neuronal

1988 Cromatograf pentru lichide de nalt performant cu radiaie n ultraviolet si n vizibil

1990 Senzor piezoelectric pentru msurarea concentraiei substanelor odorante

1992 Sistem computerizat ELISA pentru studiul interaciunii antien-anticon)

1995 Senzori inteligeni cu fibre optice

1.3 Tendinte actuale in domeniul biosenzorilor

I. Senzori chimici cu electrolit lichid

In aceast categorie intr senzorii poteniometrici, amperometrici,
conductometrici (electrozi de pH, electrozi ion-selectivi i enzimatici), unii
senzori calorimetrici etc. Un interes deosebit este acordat acestei arii de
cercetare n ntreaga Europ, care are numeroase grupuri industriale i
academice implicate n U.K., unde cea mai mare parte a iniiativei SERC este
canalizat spre acest domeniu i spre cmpul dispozitivelor cu FET n lichide,
cu accent pe folosirea biosenzorilor. Frana, Suedia, Italia, Olanda, i
Germania depun eforturi importante n aceast arie de aciune avnd ca
baz biosenzorii.

II. Senzori chimici cu electrolit solid

 Studiile din literatura de specialitate privind folosirea conductorilor
ionici n stare solid pentru analize chimice sunt dominate de senzorii pe
baz de dioxid de zirconiu (Zr02) pentru msurarea concentraiei de oxigen
(O2). Cele mai multe grupuri de specialiti din Frana, Germania i U.K. pun
un accent deosebit pe cercetarea electroliilor la temperaturi joase, pe
investigarea conductorilor i pe utilizarea acestor tipuri de materiale la
detectarea unor specii chimice cu "dispozitive micro-ionice".

III. Senzori chimici cu conductie ionic

Dei se depune un efort deosebit n acest domeniu n Frana,
Germania, Elveia i U.K., efortul global european nu se poate compara cu
munca i rezultatele obinute n Japonia. Volumul de munc se concentreaz
pe adsorbia gazului n MOS. Foarte important n dezvoltarea acestui tip de
senzori sunt nelegerea mecanismelor de adsorbie a gazului i cunoaterea
modificrilor de conductivitate. Un numr de ri europene sunt interesate n
utilizarea ca senzori de gaz a unor materiale organice, cum ar fi: filmele
macromoleculare Langmuir-Blodgett (LB) i polimeri. Aspectul filmului LB
conteaz foarte mult pentru acest tip de senzori. n U.K., Frana, i
Germania sunt cercetate intens acest tip de filme.

lV. Senzori chimici ChemFET pentru lichide

Acest domeniu este apropiat de acela al dispozitivelor cu electrolit

lichid, al dispozitivelor FET ion-selective i imunochimice. Aceste dispozitive
sunt larg studiate n cele mai multe ri europene, n special n U.K., Frana,
Germania, Olanda, Suedia i Elveia. Dispozitivele FET pentru msurri n
domeniile gazoase i lichide, sunt interesante datorit faptului c pot fi
obinute relativ uor, graie tehnologiei din electronica convenional a
semiconductoarelor. In prezent o atenie deosebit este acordat dezvoltrii
membranelor selective i a acoperirilor n scopul mbuntirii dispozitivelor
"Chem-FET".

V. Senzori chimici GasFET pentru Baze

 In Suedia se acord un interes deosebit dezvoltrii senzorilor chimici
cu ajutorul FET-urilor cu poart dintr-un metal catalitic. Aceast tehnic este
aplicat unui mare numr de gaze cum ar fi: H2, H2S i NH3, amine, alcooli
i hidrocarburi nesaturate.

VI. Senzori chimici calorimetrici

Se urmrete dezvoltarea senzorilor de gaz calorimetrici tip pelistor, cu
rezisten ndelungat la aciunea catalizatorilor toxici i a umiditii. O
atenie limitat a fost acordat altor dispozitive bazate pe msurarea cldurii
de reacie cu ajutorul pirometrelor sau a termocuplelor. In ceea ce privete
dezvoltarea viitoare a acestui tip de senzor, o atenie deosebit se acord
utilizrii tehnologiei microelecroniceiui vederea miniaturizrii, a realizrii lor
n variant integrat.

VII. Senzori chimici optoelectronici

Tehnicile de realizare a senzorilor chimici pe baza dispozitivelor optice
i optoelectronice tind s devin din ce n ce mai utilizate, majoritatea
implicnd folosirea fibrelor optice. Direcia principal de investigare n acest
domeniu o reprezint dezvoltarea membranelor sensibile din punct de
vedere chimic i biochimic, att pentru mediile lichide, ct i pentru cele
gazoase, n ultimul caz lucrndu-se n special n spectrul de radiaie IR
(infrarou). De asemenea, se acord o mare atenie miniaturizrii i creterii
duratei de via, respectiv a posibilitilor de sterilizare pentru senzorii "in-
vivo" utilizai n medicin. O categorie limitat a acestor senzori, o reprezint
senzorii care utilizeaz fenomenele SPR (rezonana plasmon de suprafa) i
de atenuare a radiaiei luminoase n straturile subiri. O alta categorie de
senzori, dezvoltai i comercializai de companiile scandinave, sunt cei care
utilizeaz efectele optoacustice i optotermice.

VIII. Senzori chimici cu detecie de mas

 n cele mal multe ri europene se acord o deosebit atenie
investigrii efectului piezoelectric, n particular a acoperirilor absorbante
asociate folosite, n special n detectarea i msurarea concentraiilor
gazelor. De exemplu, o companie suedez dezvolt i comercializeaz
senzori piezoelectrici pentru analiza amestecului de gaze anestezice. Aceasta
explic de ce n Europa nu s-a urmrit cu promptitudine dezvoltarea
dispozitivelor SAW (cu unde acustice de suprafa), cum s-a procedat n
SUA, de exemplu. Exist totui o preocupare n cretere n acest sens n
U.K., Italia, Germania, Belgia i Olanda.

2.Biosenzori cu fibre optice

2.1 Generaliti
Senzorii cu fibre optice sunt dispozitive care au n componen una sau
mai multe fibre optice cu rolul de a sesiza i transporta semnale optice
modulate de anumii msuranzi, prin intermediul unor elemente de sesizare
dispuse la captul sau de-a lungul fibrelor optice.
Din punct de vedere al terminologiei, trebuie precizat c senzorii cu
fibre optice (uneori numai prile lor active) pot fi gsii n literatura de
specialitate sub numele de "optrod / optrozi", respectiv "optod / optode".
Este adevrat c termenii nu sunt consacrai nc n limba romn, ceea ce
poate da natere la preri diferite n ceea ce privete genul acestor
substantive. Astfel, primul termen, "the optrode", vine din limba englez i
este rezultatul compunerii termenilor din expresia "the optical electrode"
(electrod optic). Acest termen a fost introdus n anul 1975 de Opitz N. i
Lubbers D.W.. Tot ei, n acelai an, revin cu un alt termen, "the optode",
care-i are originea n expresia din limba greac "optikos odos" (cale optic).

Avantajele senzorilor chimici i biochimici cu fibre optice:

n anumite configuraii, nu necesit un element de referin ca n cazul
senzorilor poteniometrici. De asemenea, nu mai apare problema tensiunii
electromotoare de jonciune, att de incomod n poteniometrie;
este posibil miniaturizarea. Tehnologia senzorilor chimici cu fibre optice
permite realizarea celor mai mici senzori, acest lucru fiind de o mare utilitate
n cazul analizelor cu volum mic de substan, dar mai ales n cazul
msurrilor invazive (in-vivo) din medicin sau analiza clinic curent;
 permit transmisia informaiei de msurare la distane relativ mari, de zeci
sau sute de metri, sau chiar mai mari, prin utilizarea amplificatoarelor
utilizate n telecomunicaiile cu fibre optice;
permit msurarea n medii periculoase, greu accesibile sau nocive;
msurrile nu sunt influenate de perturbaiile de natur electromagnetic;
n msurrile biomedicale este eliminat complet riscul intrrii n contact a
pacienilor cu semnale electrice periculoase;
fibrele optice sunt realizate din materiale nemetalice i implicit inoxidabile,
ceea ce face ca senzorii s prezinte o foarte bun stabilitate chimic atunci
cnd sunt n contact cu soluii electrolitice;
n majoritatea cazurilor, influena temperaturii asupra msurtorilor este
foarte redus, de multe ori chiar neglijabil;
senzorii (optrozii) sunt relativ ieftini i se pot nlocui uor.

Dezavantaje ale senzorilor chimici cu fibre optice:

lumina mediului ambiant poate interfera cu semnalul optic util. n aceste
condiii este necesar ca partea activ a senzorului s lucreze la ntuneric sau
ca semnalul optic s fie codat n vederea eliminrii influenei luminii
provenite din mediul ambiant;
senzorii cu reactiv-indicator au o stabilitate n timp destul de redus
deoarece nu pot fi splai. Efectul este acela de apariie a unui drift. n unele
cazuri este posibil compensarea acestui drift prin diferite metode, cum ar fi:
corelarea semnalelor obinute prin excitarea senzorului cu radiaii luminoase
de lungime de und diferit, raportarea semnalului la o serie de parametrii ai
senzorului independeni de valoarea msurandului
senzorii cu reactiv i membran permeabil prezint uneori timpi de
msurare relativ mari deoarece, din momentul introducerii senzorului n
analit, ncepe un proces de transfer de mas la nivelul membranei
senzorului, care nceteaz n momentul obinerii echilibrului, cnd este
disponibil i rezultatul msurrii. Durata transferului de mas depinde de
mai muli parametri, dintre care cei mai importani sunt constanta de difuzie
i solubilitatea soluiei-analit. Prezena membranei, cu toate c nrutete
timpul de msurare, are avantajul de a mbunti considerabil selectivitatea
senzorului. Astfel, dac electrozii de oxigen utilizai pentru reaciile
enzimatice sunt puternic afectai de interferenele produse de specii chimice
cum ar fi acidul ascorbic, acidul uric etc, n cazul senzorilor de oxigen cu
fibre optice cu reactiv-indicator i membran permeabil, aceste interferene
sunt practic inexistente;
fibrele optice utilizate n prezent au impuriti a cror natur spectral
conduce la apariia unor fenomene cum ar fi absorbia zgomotului de fond,
fluorescenta i mprstierea Raman. Fibrele optice de plastic (de pre redus),
cele mai utilizate n realizarea senzorilor, pot funciona corect numai ntr-un
domeniu limitat de lungimi de und (420-4-800 nm), pentru radiaia
ultraviolet fiind necesare fibre optice de cuar, care sunt mult mai scumpe.
senzorii cu fibre optice necesit o gam larg de accesorii (surse de lumin
stabile i cu timpi de via mari, conectori de calitate foarte bun,
fotodetectori cu sensibilitate i stabilitate ridicate etc.) care, n funcie de
aplicaie, pot fi destul de scumpe;
sunt necesare combinaii reactiv-indicator-membran care s asigure
valori ridicate ale sensibilitii i selectivitii i care s prezinte o bun
stabilitate pe termen lung (muli indicatori sufer o micorare a sensibilitii
dup imobilizare sau dup dizolvarea ntr-un polimer).

Cu toate dezavantajele prezentate, senzorii chimici cu fibre optice

reprezint o alternativ foarte atractiv pentru multe aplicaiile prin
facilitile pe care le ofer. Domeniile n care aceti senzori au ctigat un
important teren sunt: controlul polurii apei i aerului, controlul proceselor
biotehnologice, analiza apei de mare, testele de chimie clinic i tehnicile
biomedicale invazive (msurri in-vivo), domenii care vor fi prezentate n
continuare.

2.2 Structura sistemelor de msurare cu senzori cu fibre optice

Sistemele de msurare cu senzori cu fibre optice au dou seciuni (fig. 2.1):
seciunea optic;
seciunea electronic.

A. n seciunea optic, suportul energetic al informaiei manipulate

(sau, n unele cazuri, chiar energia manipulat) este radiaia optic (radiaie
electromagnetic din spectrul vizibil i infrarou). n continuare, se prezint
elementele funcionale ale acestei seciuni.
A.l. Fibrele optice constituie canalul de transmisie a informaiei sau a
energiei luminoase n sistem, iar n cazul senzorilor intrinseci ele pot
constitui i elementul sensibil prin intermediul cruia mrimea necunoscut
poate fi msurat (aceasta moduleaz unul dintre parametrii luminii ghidate
prin fibra activ).
 Fig. 2.1 Structura unui sistem de msurare cu fibre optice

A.2. Conectorii optici asigur cuplarea eficient i stabil a radiaiei de

la sursa optic la fibr, de la fibr la fotodetector i ntre fibre (sau ntre fibre
i alte componente optice). Conectarea poate fi permanent sau temporar
(demontabil). Indiferent de soluia de conectare, pregtirea capului de fibr
este o operaie obligatorie, o conectare incorect pregtit i executat
putnd introduce atenuri considerabile. Pregtirea capului de fibr
presupune tierea i lustruirea. O fibr corect pregtit trebuie s aib faa
perpendicular pe axa fibrei i s fie perfect lustruit, fr rugoziti sau
crpturi n zona miezului.
Conectarea permanent a fibrelor optice (din sticl) se face prin
fuziune controlat. Fibrele, cu feele pregtite n prealabil, se pun cap la cap
i se aliniaz, dup care zona de conectare se nclzete cu arc electric pn
aproape de punctul de topire al fibrei. Prin acest procedeu, se pot obine
atenuri mai mici de 0,1 dB. In prezent, instalaiile de fuziune sunt portabile
i permit executarea operaiei n teren.
Conectarea demontabil se face cu conectori special proiectai. Pentru
aplicaii generale, sunt n competiie mai multe tipuri de conectori: SMA,
FC/PC, SC etc. Principial, toate tipurile de conectori au o structur similar.
Partea principal a conectorului este ferula, care are rolul de a asigura
centrarea perfect a fibrei. De exemplu, un conector bun pentru fibra optic
de 125 um trebuie s asigure o concentricitate de 3-J-5 um. Un ansamblu de
conectare include conectorul mobil ("tat"), n care se introduce fibra optic,
i conectorul fix ("mam"), n care se introduce sursa optic sau
fotodetectorul.
 A.3. Elementele de prelucrare a radiaiei optice sunt dispozitive
necesare pentru modificarea caracteristicilor fasciculelor luminoase din
diferite zone ale seciunii optice. Cele mai uzuale prelucrri sunt:
focalizarea, colimarea, expandarea sau reflexia fasciculului optic;
divizarea sau compunerea unor fascicule;
polarizarea sau analiza luminii polarizate;.
filtrarea radiaiei optice.

Toate aceste prelucrri se pot face cu dispozitive optice clasice, cum ar

fi lentilele, curburile divizoare, prismele de polarizare, oglinzile etc. Aceste
elemente, fragile i cu volum mare, pot fi folosite n faza de dezvoltare n
laborator a senzorilor cu fibre optice, dar nu sunt indicate n cazul exploatrii
industriale. Din aceast cauz, s-au dezvoltat elemente optice discrete
compatibile cu dimensiunea fibrelor optice sau ghiduri de und integrate
care pot realiza toate aceste funcii:
lentilele GRIN sunt dispozitive cilindrice, cu diametrul de aproximativ un
milimetru, realizate din sticl cu variaie gradual a indicelui de refracie pe
direcie radial. Cu aceste dispozitive, se pot realiza colimarea, focalizarea
sau expandarea unui fascicul, cuplarea luminii de la diode laser la fibr,
cuploare i divizoare Y pentru fibre optice. Lentilele GRIN se fixeaz n
supori, de forma i dimensiunile conectorilor standard, n care se fixeaz i
fibra, realizndu-se un ansamblu robust i de dimensiuni mici;
divizarea sau compunerea unor fascicule se poate obine i cu ajutorul
cuptoarelor din fibr n X sau Y. Puterea optic este transferat dintr-o fibr
n alta cu diferite rapoarte de cuplare;
polarizoarele cu fibre optice se pot realiza folosind fibre speciale, cu
birefringen ridicat (Hi-Bi) sau fibre obinuite. Simpla cuplare a luminii
nepolarizate n fibre Hi-Bi are ca efecte transmisia doar a luminii polarizate
dup o direcie preferenial, determinat de structura fibrei, i eliminarea
celorlalte componente ale luminii. Dac se folosete fibr obinuit, n
aceasta trebuie s se introduc o birefringen ridicat. Fibra se nfoar pe
tambururi cu raza de curbur mic, amplificnd astfel pierderile prin curbare
pe direcia radial a bobinei de fibr i transmisia luminii polarizate n plan
perpendicular;
cu ajutorul unor fibre dopate corespunztor, se pot realiza filtre optice de
bun calitate sau amplificatori optici i chiar laseri cu fibre optici,
cu ajutorul unor depuneri metalice, se pot realiza oglinzi chiar pe
suprafaa capetelor fibrelor optice sau pe alte suprafee care trebuie s
realizeze funcia de reflexie (n cazul unor sisteme de msurare).

A.4. Optrodul in cazul sistemelor de msurare, elementul specific este

senzorul (pptrodul), la nivelul cruia fasciculul optic incident este modulat de
semnalul de msurare (Xm).
 B. Seciunea electronic asigur integrarea sistemelor cu fibre optice n
sistemele electrice i electronice convenionale. n continuare, se prezint
elementele funcionale ale acestei seciuni.

B.1. Blocul electronic de comand (B.E.C.) a sursei optice conine:

sursa optic (S.O.): n marea majoritate a aplicaiilor, sursele optice sunt
diode superluminescente sau diode laser;
circuitele de alimentare electric, protecie i modulare a sursei optice. In
cazul sistemelor de comunicaie, acest bloc conine - n principal - un circuit
de intrare (C.L), cu rol de adaptare a semnalului electric de intrare, Xin, i
un generator de curent comandat (G.C.C.), care furnizeaz curentul de
excitaie a sursei optice (majoritatea surselor optice utilizate n sistemele cu
fibre optice sunt comandate n curent). In cazul sistemelor de msurare,
blocul electronic de comand conine, de regul, numai un generator de
curent comandat de un reglaj intern sau de un oscilator intern (excitarea
optrozilor se face, n general, cu semnale optice stabile, continue sau
alternative).

B.2. Blocul electronic de recepie (B.E.R.) are o structur asemntoare, att

pentru sistemele de msurare, ct i pentru cele de comunicaie, i este
compus din:
fotodetectorul FD (n afara unor aplicaii speciale de senzori cu fibre optice,
acesta este o fotodiod pin sau o fotodiod cu avalan, iar n cazul
sistemelor de comunicaie poate fi i un fototranzistor);
circuitele electronice de adaptare i amplificare primar a semnalului
electric generat de fotodetector (C.A.);
circuitele de prelucrare electric a informaiei (C.P.), acestea avnd funcii
specifice n funcie de aplicaie (filtrri, prelucrri analogice sau digitale).

2.3 Tipuri de senzori chimici cu fibre optice

In figura 2.2 sunt prezentate schematic diferite tipuri de senzori cu
fibre optice.
Practic, n toate cele ase variante sunt observate patru elemente
principale care intr n structura unui sistem de msurare care conine un
senzor cu fibre optice: o surs de lumin (S), unul sau mai muli detectori de
lumin (D), una sau mai multe fibre optice i elementul de sesizare
(optrodul) care este n contact direct cu fibra sau fibrele optice.
 Fig. 2.2 Scheme de realizare a senzorilor chimici cu fibre optice

In figura 2.2.a este prezentat un senzor care utilizeaz o singur fibr

optic. Fasciculul luminos emis de sursa S trece printr-o oglind/filtru dicroic
i prin fibra optic, excitnd volumul optrodului. Fasciculul luminos, modulat
la nivelul optrodului se ntoarce pe acelai drum optic (fibr optic), oglinda
reflectndu-1 ctre dispozitivul fotoelectric de detecie.
Schema din figura 2.2.b prezint un divizor de fascicul n Y (un
splitter), un element care are rolul de a despica un fascicul luminos n dou
fr a-i modifica proprietile. In aceast situaie, fasciculul emis de sursa S
este condus printr-un bra al splitterului la fibra optic ce conine optrodul,
fasciculul modulat fiind condus napoi la splitter i divizat pe cele dou brae
ala acestuia. Acest fascicul este analizat de detectorul D, situat la captul
celui de-al doilea bra al acestui divizor de fascicul.
Schema din figura 2.2.c este o variant a schemei anterioare, care
prezint particularitatea utilizrii efective a dou fibre optice, una pentru
fasciculul luminos incident i una pentru cel modulat. Avnd n vedere c
divizoarele de fascicul sunt destul de scumpe, acest tip de senzor este unul
dintre cele mai utilizate, fiind ieftin i relativ uor de realizat. Pentru optrozii
cu suprafa activ mare se poate utiliza schema din figura 8.2.d, situaie n
care se utilizeaz mai mult fibre optice, att pentru fluxul luminos incident,
ct i pentru cel modulat.
Ultima schem, prezentat n figura 2.2.e, utilizeaz o singur fibr
optic, optrodul fiind realizat de-a lungul fibrei optice pe o anumit poriune
(senzor cu optrod distribuit).

Optrozi cu membran depus

Cea mai simpl soluie de realizare a unui optrod (variant 2.2.a sau
2.2.b) este aceea de a uiliza suprafaa circular a captului activ al unei fibre
optice aplicndu-i, prin depunere sau lipire, o membran cu proprieti
selectiv-senzitive (fig. 2.3). Membrana este realizat astfel nct s prezinte
o bun reflexie difuz. Pentru aceasta, n corpul membranei este incorporat
un indicator absorbant, ale crui particule, prin mprtiere, provoac
modificri ale intensitii fluxului luminos reflectat.

Fig. 2.3 Optrod cu membran depus

In acest caz apar trei fenomene: absorbia, refelxia difuz i

mprtierea. Este important ca membrana s satisfac urmtoarele cerine:
a) suportul membranei s permit ncorporarea indicatorului;
b) s prezinte o structur poroas (permeabil), astfel nct s permit
difuzia speciilor chimice;
c) proprietile fizice, n condiii de umiditate, trebuie s fie compatibile cu
mediul de msurare (de exemplu, o membran hidrfoba nu se va utiliza
pentru analii solubili n ap);
d) suportul s nu conin n compoziia sa specii chimice absorbante, astfel
nct s modifice sensibilitatea optrodului;
e) grosimea activ a membranei nu trebuie s depeasc 500 um, deoarece
peste aceast adncime, apare o atenuare puternic a luminii, zona
respectiv fiind practic inutil;
f) concentraia particulelor-indicator din membran trebuie s fie optim: o
concentraie prea mic duce la o micorare a sensibilitii printr-o intensitate
redus a luminii reflectate, iar o concentraie prea mare provoac un
fenomen de saturaie care, de asemenea, duce (pe alt cale) la reducere a
sensibilitii.
Dezavantajul principal al acestui tip de optrod este acela c,
intensitatea fluxului luminos reflectat (recepionat) este mic i deci
sensibilitatea este redus.

Optrozi cu celul de mprstiere

O configuraie mult mai eficient de optrod este cea cu celul de
mprstiere. Acest tip de optrod permite realizarea, att n varianta cu o
singur fibr optic ("single fiber Y- coupled"), ct i n varianta cu dou
fibre optice ("twin-lightguide"). Cele dou variante constructive sunt
prezentate n figurile 2.4 (pentru variantele 2.2.a i 2.2.b) i 2.5 (pentru
variantele cu dou fibre optice sau cabluri cu fibre optice - 2.2.c i 2.2.d). n
ambele situaii, indicatorul este fie prezent n soluie, fie -n general-
imobilizat pe-suprafaa unor particule suport convenabile. Suprafaa activ a
optrodului este mult mai mare de data aceasta, ea fiind practic o membran
selectiv-permeabil, care permite speciilor-analit s ptrund n interior, dar
oprete indicatorul s prseasc celula. In general, membrana este un tub
de dializ celulozic pentru analiii lichizi solubili n ap, respectiv o
membran hidrfoba din cauciuc siliconic pentru analiii gazoi.

Fig. 2.4 Optrod cu celul de mprstiere

Fig.2.5 Optrodcu celul de mprtiere cu dou fibre optice ("twin-lightguide")

Se observ c n interiorul celulei sunt introduse particule de

mprtiere care, pentru lucrul n spectrul vizibil, sunt de dimensiunea unui
micron. Rezultatul const n apariia unei mprtieri, care mbuntete
considerabil sensibilitatea senzorului. Rezultate foarte bune s-au obinut prin
utilizarea particulelor n suspensie prezente n gelurile poliacrilamidice i n
latexul polistirenic.
Din punct de vedere chimic i biochimic, exist trei configuraii de baz
pentru optrozi. Aceste configuraii (fig. 2.6) difer prin complexitate i
principiu de funcionare i vor fi prezentate pentru cazul optrodului cu o
singur fibr optic, dar ei pot fi realizai dup toate schemele din figura 2.2,
mai puin ultima (cazul senzorilor distribuii).
n figura 2.6.a este prezentat optrodul cu msurare direct a proprietilor
intrinseci chimico-optice ale analitului. In acest caz, radiaia luminoas emis
de/prin fibra optic va excita analitul, iar "rspunsul optic" al acestuia,
modulat de proprietile sale (implicit de concentraie), va fi captat de fibra
optic i analizat.
In figura urmtoare, 2.6.b, este prezentat un optrod cu sistem de
conversie chimico-optic (cum ar fi un indicator imobilizat). Concentraia
analitului va modifica/modula proprietile optice ale acestui sistem, iar fibra
optic va prelua, practic, un semnal indirect dependent de concentraia
analitului.

Fig. 2.6 Principii de funcionare pentru optrozii chimici

Ultimul tip este optrod cu dublu sistem de conversie chimico-optic i

bioreactiv, este cel mai complex din cele prezentate (fig. 2.6.c).
Acest optrod se folosete n cazul n care, pentru analitul de studiat nu
este cunoscut un indicator satisfctor, caz n care se folosete un sistem
bioreactiv (o enzim, de exemplu) care reacioneaz cu analitul, produii de
reacie influennd corespunztor sistemul se conversie chimico-optic.
 Din punctul de vedere al "locului" unde are loc modularea parametrilor
radiaiei luminoase, optrozii se mpart n dou mari clase: optrozi
extrinseci i optrozi intrinseci.
Performanele optrozilor extrinseci (fig. 2.7.a,b,c) sunt independente
de fibrele optice, acestea avnd numai rolul de transport al celor dou
fascicule de lumin (incident i modulat) i depind numai de caracteristicile
zonei active a acestora. In consecin, se pot utiliza fibre optice obinuite,
ceea ce implic un pre sczut.
Cele trei variante de optrozi au la baz clasificarea anterioar, valabil,
de altfel, i pentru optrozii intrinseci.
Particularitile celor trei figuri sunt urmtoarele:
n figura 2.7.a analitul (A) se afl n faz omogen;
n figura 2.7.b conversia chimico-optic este realizat de un sistem de
conversie realizat de un cuplu reactiv - indicator (R - i);
n figura 2.7.c se folosete un sistem reactiv intermediar R care, prin
reacia E cu analitul A modific proprietile chimice unui sistem reactiv
enzimatic B+P (analit B plus produs de reacie P). Produsul de reacie P va
modifica proprietile chimico-optice ale sistemului de conversie principal
compus din indicatorul / i markerul ("labei") L.

Fig. 2.7 Tipuri de optrozi chimici extrinseci i intrinseci

 In optrozii intrinseci, fibrele optice sau ghidurile de und sunt
elemente intrinseci de detecie (de exemplu, n refractometrie) sau formeaz
un suport special al stratului senzitiv (spectroscopia evanescent), integrat
pe acest suport.
Din punct de vedere al fenomenului care st la baza funcionrii,
optrozii intrinseci pot fi de dou tipuri:
refractometrici (un mediu activ preia rolul cmii fibrei optice, aceasta
fiind n prealabil ndeprtat);
cu und evanescent - EWS.
De asemenea, senzorii intrinseci cu fibre optice pot fi:
cu cma activ (ICBO - "intrinsec coating-based optrodes");
cu miez activ.

Optrozii care utilizeaz fenomenul de evanescen sunt prezentai tot

n figura 2.7. Elementele specifice celor trei variante prezentate n figur
sunt:
n figura 2.7.d analitul este adsorbit de suprafaa activ a fibrei optice
(ghidului de und) i interacioneaz direct cu unda evanescent care apare
sub excitaia cu radiata luminoas; partea care se va "ntoarce" n fibr va
avea caracteristile optice modulate de concentraia analitului;
n figura 2.7.e este utilizat un sistem de conversie chimico-optic realizat cu
reactivul R, cu indicatorul / sau markerul L.
n figura 2.7.f, in mod analog cu figura 2.7.c, se mai folosete un analit
intermediar B (aceste dou sisteme prezint, de fapt, o structur "multistrat"
n faz heterogen, ntre zonele analiilor A i B fiind absolut necesare
membrane de separare.
Spre deosebire de optrozii extrinseci, unde zona activ era, n
exclusivitate, la un capt al fibrei sau fibrelor optice, n acest caz zona activ
poate fi i suprafaa exterioar a miezului fibrei optice sau chiar cmaa
activa a acesteia. In aceste situaii se utilizeaz fibre optice de construie
special. Comparativ cu optrozii extrinseci utilizarea utilizarea acestor
dispozitive pentru msurarea mrimilor chimice i biochimice este mai
redus. Un domeniu n care acest tip de senzori are un succes deosebit este
acela al studiului reaciilor anticorp-ligand.

3. Aplicaii tipice ale senzorilor chimici i biochimici cu fibre optice.

Exemple
Senzorii chimici cu fibre optice pot fi utilizai pentru msurarea celor
mai diverse mrimi de natur chimic i biochimic. In tabelul 3.1 sunt
prezentate cteva exemple reprezentative de optrozi chimici, cu fenomenele
specifice utilizate.
 Tabelul 3.1 Exemple de optrozi chimici i fenomenele utilizate la realizarea lor

I. Msurarea vH-lui
Un numr nsemnat de optrozi de pH au fost realizai, utiliznd membrane
ion-permeabile pentru ionii de hidrogen i indicatori colorimetrici de pH
imobilizai. Unul din optrozii cei mai utilizai este optrodul extrinsec cu dou
fibre optice, cu indicator ncapsulat ntr-un volum activ separat de analit cu
ajutorul unei membrane permeabile de dializ (fig. 3.1). Acest optrod are la
baz modificarea reflectantei i este excitat la dou lungimi de und, una
unde absorbanta este maxim i cealalt, de referin, unde absorbanta este
minim. Absorbanta absolut a sistemului indicator, corespunztoare celor
dou lungimi de und este dat de relaia:

A=K
10 10d+1

unde: K este o constant dependent de sistemul optic;

D - densitatea optic corespunztoare lungimii de und active a optrodului;
= pH pKin unde Kin reprezint constanta puterii ionice a indicatorului.

Fig. 3.1 Optrod extrinsec cu celul de mprtiere cu dou fibre optice ("twin-lightguide")
 In 1980, Peterson J.I. i colectivul su a realizat pe acest principiu un
optrod de pH prin folosirea fenolului rou. Spectrul de absorbie al acestuia
este prezentat n figura 3.2. Acesta este imobilizat prin legtur covalent pe
sfere poliacrilamidice cu diametrul de 5-s-lO um, care sunt introduse n
interiorul unui tub de dializ celulozic (permeabil pentru ionii de hidrogen).

Fig. 3.2 Spectrul de absorbie al fenolului rou

Performanele care au fost obinute cu acest senzor sunt urmtoarele:

domeniu fiziologic: 7-5-7.4;
exactitate: 0.15%;
variaie cu temperatura: 0.017 pH / C;
influena triei ionice: < 0.01 pH (pentru o variaie a triei ionice mai
mici de 11%).

Un important domeniu de utilizare al optrozior de pH l reprezint

monitorizarea sngelui in-vivo, n special n timpul interveniilor chirurgicale.
In general este necesar monitorizarea temperaturii i a trei concentraii:
pH, p02, pC02 (fig. 3.3).

Fig. 3.3 Optrod multitest pentru pH, p02, pC2

 II. Msurarea concentraiei fiziologice de oxigen
Posibilitatea monitorizrii on-line a concentraiei fiziologice de oxigen
din snge reprezint o necesitate major n domeniul chirurgiei. n 1975 a
fost realizat primul sistem in-vivo de oximetrie, utiliznd senzori cu fibre
optice. Hemoglobina, un indicator potrivit, este prezent permanent n
compoziia sngelui, avnd vitalul rol de agent responsabil de transferul de
oxigen la nivel sangvin.
Uzual, reflectanta hemoglobinei poate fi monitorizat la dou lungimi
de und:
la 650 nm, corespunztor maximului de reflectant al oxihemoglobinei;
la 850 nm, punct n care oxigenul saturat i hemoglobina dezoxigenat au
aceeai absorbie.
Optrozii din aceast categorie utilizeaz, deci, hemoglobina
imobilizat, aceasta modificndu-i culoarea n funcie de concentraia de
oxigen. O alt soluie presupune utilizarea unui indicator fluorescent
imobilizat pe o membran permeabil polimeric (substrat). Absorbia
oxigenului n membran produce scderea eficienei fluorescentei
indicatorului. Au fost studiai diveri indicatori. Un exemplu reprezentativ
este perilen-dibutiratul, absorbit pe o membran poroas din polipropilen.
Indicatorul a fost excitat cu un flux luminos cu lungimea de und de 468 nm,
emisia fluorescent fiind detectat la 514 nm (o deplasare Stokes de 46
nm).

III. Msurarea concentraiei de dioxid de carbon

Concentraia de dioxid de carbon poate fi msurat indirect, prin
msurarea pH-lui unui amestec de bicarbonat-acid carbonic la echilibru. In
1985, Opitz N. i Lubbers D.W. au realizat un optrod pe acest principiu,
utiliznd o membran permeabil pentru dioxidul de carbon (teflon) care
ncapsula o soluie de bicarbonat de sodiu ntr-un gel tamponat. Pentru
msurarea pH-lui s-au utilizat doi indicatori: fenolul rou (varianta cu
absorbie) i metil-umbeliferona (varianta fluorescent).
O nou realizare privind msurarea presiunii pariale de dioxid de
carbon, utiliznd un senzor cu fibre optice, a fost anunat n 1993. Optrodul
include un reactiv-indicator ncapsulat ntr-o cavitate realizat dintr-o
membran siliconic permeabil pentru dioxidul de carbon (fig.3.4).
Reactivul i modific pH-ul n funcie de valoarea concentraiei de dioxid de
carbon.
 Fig.3.4 Optrod pentru msurarea concentraiei de CO2

Ca indicatori de pH au fost utilizai fenolul rou i bromtimolul albastru.

Senzorul a fost testat pentru o vitez de curgere a gazului de aproximativ
200 nl/min. S-a obinut o exactitate de 0.32%, pentru un domeniu de
msurare de 300-550 atm.

IV. Msurarea concentraiei de glucoza

Un important succes cu un senzor cii fibre optice (variant modern a
senzorilor optoelectronici), a fost obinut de cercettorii Mansouri S. i
Schultz J.S., care au realizat un senzor de glucoza (fig. 3.5). Elementul
sensibil este realizat dintr-un cilindru obinut dintr-o membran de dializ i
este conectat la un fluorimetru printr-o fibr optic. Pe suprafaa intern a
membranei este imobilizat lectin concavalin A (Con A) cu rol de legare a
carbohidrailor, iar n interiorul cilindrului este introdus Dextran (compus cu
mas molecular foarte mare) marcat cu fluorescein (FITC-Dextran =
Fluorescein IzoTioCianat-Dextran), acesta avnd rolul unui ligand
competitiv. Glucoza din mediul exterior difuzeaz prin membrana de dializ
n interiorul senzorului i intr n competiie cu Dextranul n vederea legrii
cu lectina Con A. La echilibru, nivelul concentraiei de fluorescein liber din
interior este detectat de fibra optic prin modularea fasciculului emis,
concentraie corelat cu cea a glucozei.
 Fig. 3.5 Senzor de cu fibr optic pentru msurarea concentraiei de glucoza

Cu acest biosenzor, glucoza sangvin a fost msurat, obinndu-se

un rspuns liniar n domeniul 50-400 mg% (0.5-4 g/dm3). Timpul de
msurare este de aproximativ ase minute.
Alt metod const n utilizarea sistemelor optice bazate pe
bioluminescen i chemiluminescen. Aceste metode au o sensibilitate
foarte bun, rivaliznd cu metodele RadioImunoAnalizei (RIA) i
FluoroImunoAnalizei (FIA).
Principiul biosenzorilor care utilizeaz bioluminescen a fost confirmat
de un sistem de msurare a concentraiei de ATP (adenozintrifosfat) n
domeniul 10-7-10-6 mol/dm3.

In concluzie, domeniul senzorilor chimici i biochimici cu fibre optice

este n plin dezvoltare, datorit avantajelor pe care acetia le prezint. In
acest sens, trebuie subliniate n principal posibilitatea miniaturizrii, ceea ce-
i face accesibili pentru msurrile in-vivo, necesitatea unor cantiti mici de
analit i faptul c prezint timpi de rspuns mici, proprietate care permite
posibilitatea realizrii monitorizrii permanente (msurri n timp real).
Aceste avantaje, utile n diverse domenii de aplicaii, au fcut ca senzorii cu
fibre optice s fie din ce n ce mai utilizai n domeniul biomedical. O imagine
sugestiv, n acest sens, este redat n tabelul 3.2, n care sunt prezentate
comparativ cteva din caracteristicile specifice testelor clinice realizate prin
metodele convenionale de laborator i metoda optoelectronic cu senzori cu
fibre optice.

Tabelul 3.2 Elemente comparative ntre metodele clasice de laborator i sistemele cu senzori cu
fibre optice

De asemenea, sondele i senzorii cu fibre optice au ptruns n

domeniul medical, nu numai pentru testele biochimice, dar i n alte seciuni
ale acestui domeniu. In tabelul 3.3 sunt prezentate cteva din aceste
aplicaii.

Tabelul 3.3 Aplicaii medicale ale fibrelor optice