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UNIVERSIDADE DE SO PAULO

FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS


Programa de Ps-Graduao em Tecnologia Bioqumico-Farmacutica
rea de Tecnologia Qumico-Farmacutica

Avaliao de eficcia da sanitizao de um sistema de


purificao de gua. Esterilizao de artigos mdicos,
dissipao residual do xido de etileno e uso da
protena verde fluorescente (GFP) como
indicador de controle do processo

Fbio Nunes Dias

Dissertao para obteno do grau de


MESTRE

Orientadora:
Profa. Dra. Thereza Christina Vessoni Penna

So Paulo
2007
Fbio Nunes Dias

Avaliao de eficcia da sanitizao de um sistema de


purificao de gua. Esterilizao de artigos mdicos,
dissipao residual do xido de etileno e uso da
protena verde fluorescente (GFP) como
indicador de controle do processo

Comisso Julgadora
da
Dissertao para obteno do grau de Mestre

Profa. Dra. Thereza Christina Vessoni Penna


Orientadora/Presidente

Profa. Dra. Cristina Northfleet de Albuquerque


1o. examinador

Dra. Marina Ishii


2o. examinador

So Paulo, 22 de Agosto de 2007.


... Moiss, que havemos de beber? (*)
Ento, Deus o instruiu a jogar um lenho
nas guas e elas se tornaram doces.

xodo 15:2227.

(*)
Indagao dos israelitas a Moiss diante de uma fonte de guas amargas, aps andarem trs dias
no deserto de Sur.
"No meio de qualquer dificuldade
encontra-se a oportunidade."

Albert Einstein
A verdadeira sabedoria consiste em saber
como aumentar o bem-estar do mundo.

Benjamin Franklin
DEDICATRIA

Adriana, minha esposa, com amor e gratido por sua compreenso e apoio
ao longo do perodo de elaborao deste trabalho. Pelos inmeros sonos solitrios,
enquanto velava-me a chama da busca pelo conhecimento. Ladrilhavam o caminho
as obras de muitos mestres. Sobre elas, meus pensamentos percorreram em
direo ao futuro e voc.

Ao Sr. Antnio e Sra. Helenita, meus pais, senhores de toda minha devoo.
Com carinho e gratido, por terem me mostrado atravs de suas experincias de
vida, a infinita generosidade de Deus e por terem me ensinado a Ele tudo confiar.

Prof. Dra. Thereza Christina Vessoni Penna, minha orientadora, que alm
de excelente profissional acadmico tambm um ser humano maravilhoso e que
por simples inspirao, forma indivduos melhores como profissional, cidado, filho e
esposo. Com seu esprito otimista, voa longe, vai frente, retira as pedras, endireita
os caminhos: ensina-nos a crescer!
Dra. Thereza Christina, meus agradecimentos por tudo o que contribuiu
para o meu crescimento cientfico e intelectual nestes anos de convivncia.
AGRADECIMENTOS

Ao Dr. Srgio Luiz Nogaroto, presidente da Nipro Medical Ltda., pela


oportunidade da realizao deste estudo, pelo espao e materiais cedidos, por
manter e incentivar o relacionamento entre a universidade e a indstria, como um
benefcio ao conhecimento cientfico.

Ao Prof. Dr. Adalberto Pessoa Jnior, por ter acreditado no meu potencial
quando do ingresso neste curso e por toda sua ateno e apoio.

Aos amigos Ivan e Alzira, pela amizade, apoio e confiana. Pela lio
aprendida e nunca esquecida.

Marina, ngela, Priscila, Irene e a todos os alunos de Iniciao Cientfica do


Laboratrio de Microbiologia Industrial, pela ajuda e amizade.

Prof Dra. Cristina Northfleet de Albuquerque, pelas valiosas sugestes que


somaram-se finalizao deste trabalho.

Ao Anthony, Cludia, Lcia, Elisngela, Snia, Zlia, Dinalva, Wagner,


Michaella, Danielly, Cley, Luis, Roberto, Carlos e Zena, Marcos e Ordlia, pelo
carinho e amizade.
SUMRIO
RESUMO
ABSTRACT

PRIMEIRA PARTE

1. INTRODUO 4

1.1. Conflitos pela gua 4

1.2. Disponibilidade de gua 5

1.3. gua e saneamento 7


1.3.1. Ano Internacional do Saneamento 8
1.3.2. Saneamento no Brasil 9

1.4. Dia Mundial da gua 10

1.5. Doenas de origem hdrica 11


1.5.1. Escherichia coli 12
1.5.2. Pseudomonas 14
1.5.3. Rotavrus 14

1.6. Biofilmes bacterianos 15

1.7. Fornecimento de gua pelo sistema pblico 16

1.8. Padres de potabilidade da gua para consumo humano 18


1.8.1. Padro microbiolgico 19
1.8.2. Padro fsico-qumico 19
1.8.3. Padro para substncias qumicas de risco sade 20
1.8.4. Padro de radioatividade para gua potvel 21

1.9. gua para aplicao na rea da sade 21


1.9.1. gua purificada 21
1.9.2. Parmetros para a gua purificada e gua para injeo (USP 30) 24
1.9.3. Outras guas destinadas rea da sade 24

1.10. Aplicao 25

2. OBJETIVO 28

3. DESCRIO DA INDSTRIA 29

3.1. Edwards Lifesciences 29

3.2. Nipro Medical 30

4. MATERIAIS E MTODOS 31

4.1. Sistema de purificao 31

4.2. Anlise microbiolgica 33


4.3. Identificao microbiana 35
4.3.1. Sistema BBL Crystal para identificao rpida de microrganismos 36
4.3.1.1 Sistema para identificao rpida de Gram-positivos 38
4.3.1.2 Sistema para identificao rpida de Gram-negativos 39

4.4. Teste de endotoxinas pelo mtodo gel-clot (LAL) 40

4.5. pH, condutividade e substncias oxidveis 41

5. LIMPEZA E DESINFECO 42

6. RESULTADOS 44

6.1 Contagens heterotrficas 44

6.2. Identificao de microrganismos 60


6.2.1. Gram-negativos 65
6.2.2. Gram-positivos 66

6.3. Endotoxinas 66

6.4. pH, condutividade e substncias oxidveis 68

7. DISCUSSO 69

8. CONCLUSO 72

9. REFERNCIAS 73

10. ANEXOS 77

Anexo 1. Colorao de clulas pelo mtodo de Gram 77

Anexo 2. Oxidase 79

Anexo 3. Indol 80

Anexo 4. Mtodo Gel-clot 81

Anexo 5. Mtodo para substncias oxidveis 82

SEGUNDA PARTE

1. INTRODUO 84

1.1. Esterilizao de artigos mdicos 84

1.2. Histrico sobre os oxigenadores de sangue 86

2. OBJETIVO 89

3. MATERIAIS E MTODOS 90
3.1. Oxigenadores de sangue e conjuntos de tubos de PVC 90

3.2. Parmetros do ciclo de esterilizao 91

3.3. Carga 93
3.3.1. Oxigenadores 94
3.3.2. Conjuntos de tubos de PVC 94

3.4. Indicadores biolgicos 95


3.4.1. Esporos de Bacillus atrophaeus 95
3.4.2. Protena verde fluorescente (GFP) 96

3.5. Determinao dos resduos 96


3.5.1. Cromatgrafo gasoso 96
3.5.2. Extrao dos resduos 97
3.5.3. Curvas padres 99
3.5.4. Nveis de concentrao residual 101

3.6. Limites mximos de resduos de ETO, EC e EG 102

4. RESULTADOS E DISCUSSO 103

4.1. Concentrao de GFP 105

4.2. Dissipao do gs ETO 107

5. CONCLUSO 114

6. REFERNCIAS 115

Anexo 01 Informao para os Membros de Bancas Julgadoras de Mestrado/Doutorado 117

Anexo 02 Declarao de Dispensa de Anlise do Comit de tica em Pesquisa 119


LISTA DE TABELAS

PRIMEIRA PARTE

Tabela 1. Procedimento de limpeza e sanitizao dos estgios do sistema de purificao de gua 43


Tabela 2. Contagens heterotrficas (log10 UFC/100mL) dos estgios do sistema de purificao 45
Tabela 3. Reaes bioqumicas dos microorganismos Gram-negativos isolados do sistema de
purificao de gua 63
Tabela 4. Reaes bioqumicas dos microorganismos Gram-positivos isolados do sistema de
purificao de gua 64

SEGUNDA PARTE

Tabela 1. Concentrao de GFP remanescente aps o processo de esterilizao por ETO 106
Tabela 2. Dissipao dos resduos em oxigenadores Vital 108
Tabela 3. Dissipao dos resduos em conjuntos de tubos de PVC 109
LISTA DE QUADROS

PRIMEIRA PARTE

Quadro 1. A Sabesp em nmeros 17


Quadro 2. Padro microbiolgico de potabilidade da gua para consumo humano 19
Quadro 3. Padro de aceitao da gua para consumo humano 19
Quadro 4. Padro de potabilidade para substncias qumicas de risco sade 20
Quadro 5. Padro de radioatividade para gua potvel 21
Quadro 6. Parmetros para a gua purificada e gua para injeo (USP 30) 24
Quadro 7. Estgios do sistema de purificao de gua 31

SEGUNDA PARTE

Quadro 1. Especificao tcnica dos oxigenadores 113


LISTA DE FIGURAS

PRIMEIRA PARTE

Figura 1. Manh de 5/07/1967 incio da Guerra dos Seis Dias 5


Figura 2. Distribuio do consumo da gua 6
Figura 3. Distribuio da gua no planeta 7
TM
Figura 4. (A) Componentes termoplsticos injetados; (B) Oxigenador Vital 26
Figura 5. Detalhe dos estgios do sistema de purificao de gua 32
Figura 6. Coleta de amostra de gua 34
Figura 7. Assentamento de membrana filtrante sobre agar 34
TM TM
Figura 8. BBL Crystal - Kit para identificao de microrganismos 35
TM TM
Figura 9. Tela para introduo do perfil gerado pelo Kit BBL Crystal 37
Figura 10. Tela para visualizao da identificao microbiana gerada pelo Kit BBLTM CrystalTM 38
TM TM
Figura 11. Manipulao do Kit BBL Crystal 39
Figura 12. Reposio do filtro 5m 42
Figura 13. Contagens heterotrficas dezembro de 2002 e janeiro de 2003 47
Figura 14. Contagens heterotrficas dezembro de 2003 e janeiro de 2004 49
Figura 15. Contagens heterotrficas novembro e dezembro de 2004 50
Figura 16. Contagens heterotrficas janeiro e fevereiro de 2005 51
Figura 17. Contagens heterotrficas fevereiro/2005 52
Figura 18. Contagens heterotrficas junho e julho de 2005 53
Figura 19. Contagens heterotrficas agosto e setembro de 2005 54
Figura 20. Contagens heterotrficas dezembro de 2005 55
Figura 21. Carga dos filtros de areia 55
Figura 22. Carvo ativado granulado 56
Figura 23. Drenagem dos cilindros 56
Figura 24. Contagens heterotrficas julho e agosto de 2006 58
Figura 25. Contagens heterotrficas novembro e dezembro de 2006 59
Figura 26. Contagens heterotrficas janeiro dezembro de 2006 60
Figura 27. Microrganismos isolados no sistema de purificao de gua 62
Figura 28. (A) Gram-negativo; (B) Gram-positivo 78
SEGUNDA PARTE

Figura 1. Oxigenador Vital 91


Figura 2. Conjunto de tubos de PVC 91
Figura 3. Cmara de esterilizao 93
Figura 4. Plete com carga para esterilizao 94
Figura 5. Distribuio dos sensores de temperatura e umidade e indicadores biolgicos na carga 95
Figura 6. Extrao dos resduos de ETO, EC e EG 99
Figura 7 A. Curva de calibrao padro ETO 100
Figura 7 B. Curva de calibrao padro EC 100
Figura 7 C. Curva de calibrao padro EG 101
Figura 8. Parmetros de temperatura, umidade e presso para ciclo de 2 horas 104
Figura 9. Parmetros de temperatura, umidade e presso para ciclo de 4 horas 104
Figura 10. Parmetros de temperatura, umidade e presso para ciclo de 8 horas 104
Figura 11. Concentrao de GFP remanescente aps o processo de esterilizao por ETO 107
Figura 12. Dissipao de resduos de ETO em oxigenadores Vital 110
Figura 13. Dissipao de resduos de ETO em Conjuntos de tubos de PVC 111
Figura 14. Dissipao de resduos de ETO em oxigenadores Oxim-II-34 Ultra 112
DIAS, F. N. Avaliao de eficcia da sanitizao de um sistema de purificao
de gua. Esterilizao de artigos mdicos, dissipao residual do xido de
etileno e uso da protena verde fluorescente (GFP) como indicador de controle
do processo. [Dissertao de Mestrado Faculdade de Cincias Farmacuticas da
Universidade de So Paulo, 2007].

RESUMO

A gua exerce papel fundamental nas diferentes fases do processo de fabricao de artigos
para sade (mdico-hospitalares, farmacuticos, e clnicos), exigindo elevado grau de
pureza, que certifique a sua inocuidade. Portanto, se faz necessrio maior controle dos
sistemas de purificao de gua e suas etapas de tratamento, onde a formao de biofilmes
pode contaminar os artigos para sade e, consequentemente, causar injria a pacientes
submetidos aplicao dos mesmos.
Embora os artigos mdicos sejam esterilizados por xido de etileno (ETO), seu processo de
manufatura deve prever o mnimo acrscimo possvel de contaminantes.
Considerando que a gua purificada e a esterilizao dos artigos para sade so fatores
determinantes para o sucesso de sua aplicao, este trabalho foi dividido em duas partes
distintas.
A primeira parte aborda o controle das etapas de purificao da gua, que destinada
lavagem de componentes termoplsticos, que so utilizados na fabricao de artigos para
sade.
Os nveis mximos de carga microbiana (expressos em ciclos de log10 UFC/100mL)
encontrados ao longo do sistema de purificao de gua foram: 3,48 log10 na gua de
entrada; 3,57 log10 nos filtros multimeios; 3,75 log10 nos abrandadores; 4,97 log10 no filtro de
carvo ativado; 2,53 log10 na osmose reversa; 2,70 log10 no tanque de estocagem e
distribuio; 2,56 log10 na lmpada ultravioleta; 2,53 log10 nos filtros 0,05m; 1,98 log10 nos
pontos de uso.
Flavimonas oryzihabitans e Micrococcus luteus foram as bactrias Gram-negativa e Gram-
positiva, respectivamente, isoladas e identificadas com maior freqncia na gua, em
diferentes estgios do sistema, inclusive aps a passagem dessa atravs das membranas
de osmose reversa.
A segunda parte do estudo teve como objetivo determinar o tempo de aerao necessrio
para que os oxigenadores de sangue e conjuntos de tubos de PVC, aps esterilizao por
ETO, permaneam em aerao, para dissipao dos resduos de ETO. Avaliou-se tambm
a potencialidade da protena verde fluorescente (GFP) como biossensor no processo de
esterilizao.
O processo de esterilizao destes artigos mdicos foi monitorado com indicadores
biolgicos Bacillus atrophaeus, protena verde fluorescente (GFP) e controles de
temperatura, presso e umidade em ciclos de 2 h (ciclo curto), 4 h (meio ciclo) e 8 h (ciclo
longo).
As curvas de dissipao, determinadas por cromatografia gasosa, confirmaram nveis
residuais menores que 25 ppm para ETO e etileno cloridrina (EC); e inferiores a 250 ppm
para etileno glicol (EG), ao final do processo de esterilizao para os oxigenadores; e, aps
221 horas de aerao, para os conjuntos de tubos de PVC.
Nos ciclos de esterilizao, as redues na intensidade de fluorescncia da GFP ocorreram
em funo do tempo de exposio ao ETO; enquanto germinao de esporos e/ou
crescimento de B. atrophaeus no foi observado.

PALAVRAS-CHAVE: gua purificada. Osmose reversa. Sanitizao. xido de etileno.


Esterilizao de artigos mdicos.
DIAS, F. N. Evaluation of effectiveness of the sanitization of a water purification
system. Sterilization of medical devices, residual dissipation of ethylene oxide
and the use of green fluorescent protein (GFP) as an indicator of process
control. [Dissertao de Mestrado Faculdade de Cincias Farmacuticas da
Universidade de So Paulo, 2007].

ABSTRACT

The water exerts important paper in different phases of critical items manufacture in the
health care units, pharmaceutical industries, hospitals and clinics, becoming necessary a
rigorous control of the water purification systems, storage and distribution, in order to prevent
biofilms formation and cross-contamination between devices and patients, who are submitted
to critical articles and parenteral solution application. The sterilization of critical devices by
ethylene oxide (ETO) should predict minimum addition of possible contaminants and
residues.
Considering that the purified water and the sterilization are crucial factors for medical
devices, this work was divided in two parts.
The first part evaluated continuously the stages of the system for the purification of the water,
which purity level is critical and determines the quality of the washing of thermoplastic
components used in the manufacture of critical items.
The maximum levels of heterotrophic load (log10 UFC/100mL) found throughout the water
purification system were: 3.48 log10 in the water inlet; 3.57 log10 in the multimedium filters;
3.75 log10 in the softeners; 4.97 log10 in the activated carbon filter; 2.53 log10 in the reverse
osmosis; 2.70 log10 in the tank of storage and distribution; 2.56 log10 in the UV lamp; 2.53
log10 in the 0.05m filters; 1.98 log10 in the consumption points.
Flavimonas oryzihabitans and Micrococcus luteus were the main Gram-negative and Gram-
positive bacteria, respectively found in the purified water after reverse osmosis.
The second part of this study had as objective the determination of the needed aeration time
for blood oxygenators and sets of PVC tubing must be kept in aeration room for dissipation of
ETO residues; and also evaluated the possibility of GFP as biosensor.
ETO is used as in a mixture (10% ETO and 90% CO2). Residual levels of ETO and its
derivatives, ethylene chloridrin (ECH) and ethylene glycol (EG), which remain in these
devices, must be controlled to prevent serious injuries to the patients.
The sterilization process of the oxygenators and sets of PVC tubing was monitored with
Bacillus atrophaeus and fluorescent green protein (GFP). The temperature, pressure and
humidity were controlled in the sterilization cycles of 2 h (short cycle), 4 h (half cycle) and 8 h
(long cycle).
The dissipation curves of the residues were determined by gaseous chromatography and the
residual concentrations were lower than 25 ppm of ETO and ECH and lower than 250 ppm of
EG immediately after the sterilization processes for oxygenators and after 221 hours of
aeration for the sets of PVC tubing. Reductions in the fluorescence intensity of GFP were
observed as a function of the exposition time to the ETO. No growth of B. atrophaeus spores
was observed after cycles.

KEYWORDS: Purified water. Reverse osmosis. Sanitization. Ethylene oxide. Medical


devices sterilization.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 3

PRIMEIRA PARTE

Avaliao de eficcia da sanitizao de um

sistema de purificao de gua


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 4

1. INTRODUO

1.1. Conflitos pela gua

A histria antiga marcada por guerras provocadas pela invaso dos pases

com gua pelos que ficaram sem ela. Esse foi um dos motivos das seculares

invases dos pases da regio da Mesopotmia pelos povos de deserto.

O controle do rio Eufrates foi a base do poder da Primeira Dinastia da

Babilnia, possibilitando ao Rei Hamurbi a unificar a Mesopotmia, elevando a

regio norte uma posio hegemnica (MACDO, 2004).

A Guerra dos Seis Dias em 1967, teve a sua origem numa disputa sobre

gua, em que se pretendia desviar o curso do Rio Jordo, a principal fonte de gua

potvel para Israel.

Anos de desentendimento e confrontos culminaram numa guerra de excluso

de partes, em que Israel quadruplicou o territrio que controlava e ganhou controle

completo do dobro dos recursos de gua potvel (ASSER, 2007).

Os israelenses, com o auxlio dos EUA, atacaram de surpresa o Egito, a Sria

e a Jordnia, que preparavam uma ofensiva conjunta contra Israel (Figura 1). O

conflito durou menos de uma semana e mudou o mapa geopoltico do Oriente

Mdio.

Israel anexou ao seu territrio, em 130 horas de combate, a Pennsula do

Sinai e a Faixa de Gaza do Egito; a Cisjordnia e a parte oriental (rabe) de

Jerusalm (administradas pela Jordnia); e as Colinas de Golan, da Sria (SCHUL e

SPIEGEL, 2007).

Outros exemplos de conflitos, onde a gua tem sido motivo de disputas so:

ndia e Paquisto, que compartilham bacias hidrogrficas; os rios Nger e Nilo, na


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 5

frica, que possui parte do seu territrio desrtico; Estados Unidos da Amrica e

Mxico, devido construo de barragens pelos EUA no rio Colorado, que deixam

pouca gua para o Mxico (DIAS et al., 2006).

Figura 1. Manh de 5/07/1967 incio da Guerra dos Seis Dias. Fonte: www.unificado.com.br

1.2. Disponibilidade da gua

A gua um dos recursos naturais fundamentais para a vida e para as

diferentes atividades humanas. A sua abundncia no planeta causa a falsa

sensao de inesgotabilidade. Inmeras so as previses relativas escassez de

gua, em conseqncia da desconsiderao da sua esgotabilidade. Segundo a

FAO, agncia das Naes Unidas para agricultura e alimentao, sediada em Roma,

o consumo de gua dobrou em relao ao crescimento populacional no ltimo

sculo e dentro de 20 anos, uma proporo de dois teros da populao do mundo

deve enfrentar escassez de gua (FAO, 2007).

A irrigao para cultivos agrcolas atualmente responde por 46% de toda a

gua retirada de lagos, rios e reservatrios subterrneos (Figura 2).


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 6

Figura 2. Distribuio do consumo da gua. Fonte: O Estado de So Paulo, 22 de maro de 2007.

Em vrias partes do mundo, agricultores que tentam produzir alimentos

suficientes e obter renda, tambm enfrentam estiagens sistemticas e crescente

competio por gua.

A gua propicia sade, conforto e riqueza ao homem, por meio de seus

incontveis usos, dos quais se destacam o abastecimento das populaes, a

irrigao, a produo de energia, o lazer e a navegao. A crise da falta de gua

leva a humanidade a refletir sobre esta problemtica em benefcio prprio e das

geraes futuras.

Setenta e um por cento da superfcie da crosta terrestre so cobertos por

gua. O restante projeta-se acima do nvel do mar, formando os continentes e as

ilhas.

De toda a gua do planeta, 97,5% salgada, sendo imprpria para consumo

humano. Os 2,5% restantes so de gua doce (Figura 3), que esto distribudos na
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 7

forma de geleiras e calotas polares, no subsolo, em lagos, rios e pntanos e na

atmosfera (O Estado de So Paulo, 2007).

97,50%

77,20%

22,40%
0,36%
2,50% 0,04%

gua gua Geleiras e Subsolo Lagos, rios Atmosfera


salgada doce calotas e pntanos
polares

Figura 3. Distribuio da gua no planeta.

O Brasil um pas privilegiado, pois aqui esto 11,6% de toda a gua doce do

planeta. Porm, 80% desta gua esto na Amaznia, onde vivem apenas 5% da

populao brasileira. L se encontra o maior rio do mundo em volume de gua, o

Amazonas. J o nordeste, por exemplo, possui quase um tero da populao e

dispe apenas de 3,3% de toda gua do pas (MACDO, 2004).

1.3. gua e saneamento

Em todo o mundo, cerca de 1 bilho de pessoas no tm acesso a fontes

seguras de gua para consumo e sobrevivncia e 2,4 bilhes de pessoas no tm

acesso a nenhum tipo de saneamento.

Fornecer acesso a quantidades suficientes da gua potvel, destinao

sanitria das excretas e a promoo de comportamentos de sade e higiene, so de


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 8

suma importncia para reduzir o crescimento de doenas causadas por estes fatores

de risco (OMS, 2007).

O principal benefcio dos programas de abastecimento de gua e

esgotamento sanitrio se refere reduo da morbimortalidade de uma srie de

infeces.

A peste que assolara a cidade de Milo, levou Leonardo da Vinci a ocupou-se

em solucionar problemas urbansticos. Por volta de 1.486 ao estilo renascentista,

elaborou a planta da cidade ideal (la ideale citt), que seria erguida ao lado de um

grande rio, para assegurar o transporte de mercadorias e facilitar a higiene do lugar

(Museo Scienza, 2007).

As diarrias bacterianas, a clera epidmica e a febre tifide, transmitidas

principalmente pela ingesto de gua contaminada, so mais efetivamente

prevenidas atravs de medidas que assegurem a qualidade da gua.

O mesmo no ocorre para outros tipos de diarria (vrus e protozorios),

poliomielite, hepatite A, infeces cutneas e oculares, onde as intervenes mais

eficazes se relacionam com a melhoria da higiene pessoal e domstica, que pode

ser estimulada com uma disponibilidade suficiente de gua e programas de

educao sanitria.

1.3.1. Ano Internacional do Saneamento

A Organizao das Naes Unidas (ONU) est preocupada com o progresso

lento e insuficiente em proporcionar servios bsicos de saneamento e consciente

do impacto da sua falta na sade das pessoas, na reduo da pobreza e no

desenvolvimento econmico e social e no meio ambiente, em particular nos recursos


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 9

hdricos. Diante deste quadro, declarou que 2008 ser o Ano Internacional do

Saneamento, com nfase para a necessidade de implantao de servio de esgoto

sanitrio (ONU, 2007).

O saneamento um problema timidamente discutido pelas populaes e a

destinao das excretas humanas so assuntos ainda impopulares.

Aproximadamente dois milhes de pessoas morrem a cada ano devido s

doenas diarricas. A maioria delas so crianas com menos de cinco anos de

idade. Os mais afetados so as populaes dos pases subdesenvolvidos, que

vivem em condies extremas da pobreza, moradores de periferias ou habitantes

rurais.

Entre os problemas principais que so responsveis para esta situao esto

a falta de prioridade dada ao setor do saneamento, a falta de recursos financeiros e

comportamentos insuficientes de higiene.

O Ano Internacional do Saneamento foi criado pela Organizao das Naes

Unidas em dezembro de 2006 para ajudar a acelerar o progresso no saneamento,

pondo uma luz sobre esta crise silenciosa.

1.3.2. Saneamento no Brasil

O abastecimento de gua constitui questo fundamental e demanda soluo,

em razo dos riscos que a ausncia ou o fornecimento inadequado de gua

representam para a sade pblica, mas o esgotamento sanitrio tambm representa

um grande problema. Enquanto a rede de gua e os servios de coleta de lixo e

limpeza urbana se encontram na maioria dos municpios brasileiros, a rede de


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 10

esgotamento sanitrio est espacialmente concentrada na regio Sudeste e nas

reas mais urbanizadas das demais regies do pas.

A hepatite A e a febre tifide, assim como a maioria das diarrias, so

doenas adquiridas pelo consumo de gua contaminada por dejetos, e esto

relacionadas, portanto, com o esgotamento sanitrio, a distribuio e o tratamento

de gua de abastecimento.

H doenas relacionadas com o esgotamento sanitrio, mas tambm com as

enchentes e o sistema de coleta e destino do lixo, como o caso da leptospirose,

transmitida principalmente pelo contato com a gua contaminada pela urina de ratos.

Investigando-se as internaes motivadas por um grupo de doenas

agrupadas pela FIOCRUZ relacionadas falta de saneamento, como diarrias,

hepatite A, febres entricas e dengue, verifica-se que, no Brasil, em 1993 ocorreram

730 internaes por cem mil habitantes, enquanto em 2002, houve 375 internaes.

Rondnia (1.200) e Piau (1.198) tinham, em 2002, a pior situao, enquanto So

Paulo (105) e Distrito Federal (120) tinham os melhores quadros gerais (IBGE,

2004).

1.4. Dia Mundial da gua

A Organizao das Naes Unidas, atravs da resoluo A/RES/47/193, de

22 de dezembro de 1992, declarou o dia 22 de maro de cada ano como o Dia

Mundial da gua. Este dia tem sido marcado, desde 1993, com vrias iniciativas

nacionais e internacionais com o intuito de sensibilizar o pblico em geral para a

necessidade de conservar os recursos hdricos e para algumas questes em

particular, tambm relacionadas com a gua.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 11

O Dia Mundial da gua deste ano (Folha de So Paulo, 2007) teve como

tema a escassez. Segundo informaes da Agncia Nacional de guas (ANA),

pesquisas recentes apontam que, se mantidas as tendncias atuais, mais de 45%

da populao mundial no poder contar com a quantidade mnima de gua para o

consumo dirio em 2050.

A cada ano, uma agncia diferente da ONU produz um kit sobre o tema e

distribui nas redes de agncias contatadas ao redor do planeta.

O trabalho tem como objetivos abordar vrios assuntos relacionados gua:

problemas de abastecimento de gua potvel; aumentar a conscincia pblica sobre

a importncia de conservao, preservao e proteo da gua; aumentar a

conscincia dos governos, agncias internacionais, organizaes no-

governamentais e setor privado; estimular a participao e cooperao da populao

civil.

1.5. Doenas de origem hdrica

A qualidade da gua, por si s (em particular a qualidade microbiolgica da

gua), tem uma grande influncia sobre a sade. Se no for adequada, pode

ocasionar surtos de doenas e causar srias epidemias. Os riscos sade,

associados gua, podem ser de curto prazo, quando resultam da poluio de gua

causada por elementos microbiolgicos ou qumicos, ou de mdio e longo prazo

(quando resultam do consumo regular e contnuo, durante meses ou anos, de gua

contaminada com produtos qumicos, como certos metais ou pesticidas).


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 12

A gua serve de veculo para a transmisso de uma variedade de doenas

causadas por microrganismos, resultantes da ingesto de gua contaminada ou

emprego de gua poluda para irrigao, pesca e recreao.

Os dejetos provenientes do homem e de animais representam a principal

fonte de contaminao da gua. Assim, o tratamento da gua para consumo

humano importantssimo na preveno de doenas.

Os mtodos microbiolgicos tm sido largamente empregados na

monitorao da contaminao fecal e determinao da presena de microrganismos

patognicos na gua.

Vrios tipos de microrganismos patognicos podem ser encontrados na gua.

A patogenicidade dos microrganismos depende de fatores como a capacidade de

produo de toxinas e a resistncia do hospedeiro. Qualquer microrganismo

patognico em potencial, caso encontre um hospedeiro debilitado. Os principais

gneros patognicos so: Salmonella, Shigella, Vibrio, Yersnia, Escherichia,

Klebsiella e Enterobacter (MACDO, 2004).

1.5.1. Escherichia coli

Os coliformes fecais tm como principal representante a espcie Escherichia

coli, parte da flora intestinal normal do homem e de uma variedade de mamferos,

so importantes indicadores de contaminao fecal na gua. Esta espcie

compreende os seguintes grupos:

E. coli enteropatognica responsvel por surtos de diarrias infantis e

infeces hospitalares. Este microrganismo produz citotoxinas que


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 13

agem sobre as clulas das vilosidades causando atrofia e destruio

celular, levando desidratao.

E. coli enteroinvasora provoca infeco intestinal em crianas com

mais de dois anos e em adultos. Invade e destri o epitlio do clon por

meio de toxinas, desenvolvendo um processo inflamatrio que diminui

a absoro de gua e nutrientes, caracterizando um quadro

disentrico.

E. coli enterotoxignica responsvel pela chamada diarria do

viajante, que atinge crianas e adultos. Produz enterotoxinas que

provocam diarria aquosa e por no penetrarem no epitlio intestinal,

no aparecem nas fezes muco, sangue ou leuccitos.

E. coli enterohemorrgica produz citotoxinas que provocam a diarria

sanguinolenta, caracterizando a doena chamada colite hemorrgica.

A diarria pode durar alguns dias, ou diversas semanas, como o caso da

diarria persistente.

A diarria ocorre no mundo todo e causa 4% de todas as mortes.

responsvel por infeces gastrintestinais que matam ao redor de 2.2 milhes de

pessoas mundialmente todos os anos, a maioria crianas.

A gua contaminada a principal causa da diarria e o uso da gua limpa na

higiene uma importante medida de preveno (WHO, 2007).


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 14

1.5.2. Pseudomonas

Tambm merecem ateno as bactrias capazes de induzir infeces

externas no corpo, quando o risco decorre do simples contato com a gua

contaminada, mesmo sem ingesto. Um exemplo comum a Pseudomonas

aeruginosa, que est amplamente distribuda na natureza (solo, gua e alimentos) e

no homem, podendo causar doenas em indivduos debilitados. As manifestaes

clnicas variam de meningite, infeces de ferimentos, ouvidos, olhos e do trato

urinrio at sepsis com necrose hemorrgica de pele.

Pseudomonas aeruginosa permanece como um dos mais prevalentes

agentes de infeces hospitalares em todo o mundo. A despeito dos avanos

tecnolgicos em relao ao desenvolvimento de frmacos de maior potncia

antibacteriana, suas caractersticas naturais de resistncia a mantm em papel de

destaque referente s dificuldades teraputicas (ARRUDA, 1998).

Outro dado preocupante tem sido o fato da presena de Pseudomonas

aeruginosa em garrafes de gua mineral. Dados revelam o alto nmero de

garrafes contaminados por esta bactria, principalmente devido falta de cuidado

no transporte e armazenamento dos garrafes vazios, aliados falta de higienizao

adequada destes recipientes nas empresas engarrafadoras (MACDO, 2004).

1.5.3. Rotavrus

Outro agente preocupante o Rotavrus que tem sido considerado, em todo o

mundo, o principal responsvel por diarria em crianas menores de cinco anos e

tem sido a principal causa de surtos de diarria nosocomiais e em creches ou pr-

escolas. Praticamente todas as crianas se infectam nos primeiros anos de vida,


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 15

porm, os casos graves ocorrem principalmente em crianas at dois anos de idade,

sendo que, crianas prematuras, de baixo nvel scio-econmico ou com deficincia

imunolgica esto mais sujeitas a desenvolver um quadro mais grave da doena.

Em adultos, mais rara, tendo sido registrados surtos em espaos fechados

como escolas, ambientes de trabalho ou em hospitais.

A infeco causada pelo Rotavrus varia de um quadro leve, com diarria

lquida e durao limitada a quadros graves com desidratao, febre e vmitos,

podendo ocorrer tambm casos assintomticos.

Os Rotavrus, eliminados em alta quantidade nas fezes de crianas

infectadas, so transmitidos pela via fecal-oral, por gua ou alimentos, por contato

pessoa-a-pessoa, objetos contaminados e, provavelmente, tambm por secrees

respiratrias, mecanismos que permitem uma alta capacidade de alastramento

dessa doena (Secretaria de Estado da Sade de So Paulo, 2003).

1.6. Biofilmes bacterianos

Os biofilmes tambm devem ser considerados de extrema importncia na

transmisso de microrganismos, sendo a fonte da maioria das bactrias livres,

flutuantes encontradas na gua (MACDO, 2004). Muitas destas bactrias podem

causar doenas.

Os biofilmes bacterianos so um conjunto de microrganismos rodeados por

uma substncia que eles mesmos secretam (glicoclix), que os adere uma

superfcie e ajuda-os a se protegerem contra a maioria dos agentes antimicrobianos.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 16

Diferentes microrganismos vivem em um biofilme e ajudam-se mutuamente.

Os restos celulares de uma espcie podem servir de alimento para outra e,

utilizando seus recursos bioqumicos, constroem uma colnia comum.

Um biofilme inicia-se com a adeso de uma bactria pioneira e pode

desenvolver-se e elevar-se sobre a superfcie interna dos equipamentos e

tubulaes de um sistema de tratamento de gua. Ao atingir um nvel de maior

turbulncia do fluxo de gua, poder desprender fragmentos que contaminaro todo

o sistema com bactrias e matria orgnica e servir ainda como base para novas

formaes de biofilmes.

O desenvolvimento de um biofilme maduro pode durar de algumas horas a

semanas, dependendo do tipo do sistema, fluxo e temperatura. Pseudomonas

aeruginosa uma bactria pioneira comum.

1.7. Fornecimento de gua pelo sistema pblico

A Companhia de Saneamento Bsico do Estado de So Paulo SABESP,

possui um patrimnio lquido de US$ 4 bilhes e emprega aproximadamente 18 mil

colaboradores. Produz 100 mil litros de gua por segundo para abastecer uma

populao correspondente a 60% do total do Estado de So Paulo (SABESP, 2007).


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 17

Companhia de Saneamento Bsico do Estado de So Paulo - Sabesp


Dados Gerais
Populao Total Atendida 25 milhes de pessoas
Municpios Atendidos 367
ndice de tratamento de gua 100%
ndice de esgotos coletados 78%
ndice de esgotos tratados 62%
gua
Produo de gua Tratada 1.574,6 milhes de m
Ligaes cadastradas de gua 6,5 milhes
Estaes de Tratamento de gua 200
Reservatrios 2.037
Capacidade dos reservatrios 2,7 bilhes de litros
Poos 1.073
Adutoras 4.523 quilmetros
Redes de distribuio de gua 54.957 quilmetros
Centrais de Controle Sanitrio 15
Esgoto
Estaes de tratamento de esgotos 441
Capacidade de tratamento de esgotos 38,1 mil litros/segundo
Redes coletoras de esgotos 37.173 quilmetros
Coletores, emissrios e interceptores 1.682 quilmetros
Ligaes cadastradas de esgotos 4,9 milhes

Quadro 1. A Sabesp em nmeros. Fonte: www.sabesp.com.br

Uma das principais fontes de captao de gua na regio metropolitana de

So Paulo a Bacia do Guarapiranga, que sofre com a ocupao desordenada e

irregular.

O avano populacional desordenado traz problemas crescentes e

compromete a qualidade da gua. Floraes de algas originadas pelo aumento de

cargas poluidoras em seu leito so frequentemente registradas.

Toda gua fornecida populao tratada, atravs de processo

convencional, com a finalidade de reduzir as impurezas at os nveis de

potabilidade.

O processo realizado pela Sabesp o convencional e consiste nas seguintes

etapas:

Pr-clorao: Adio de cloro assim que a gua chega estao para facilitar

a retirada de matria orgnica e metais.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 18

Pr-alcalinizao: Adio de cal ou soda gua para ajustar o pH aos valores

exigidos para as fases seguintes do tratamento.

Coagulao: Adio de sulfato de alumnio, cloreto frrico ou outro

coagulante, seguido de uma agitao violenta da gua para provocar a

desestabilizao eltrica das partculas de sujeira, facilitando sua agregao.

Floculao: Mistura lenta da gua para provocar a formao de flocos com as

partculas.

Decantao: Passagem da gua por grandes tanques para decantar os flocos

de sujeira formados na floculao.

Filtrao: Passagem da gua por tanques que contm leito de pedras, areia e

carvo antracito para reter a sujeira que restou da fase de decantao.

Ps-alcalinizao: Correo final do pH da gua para evitar problemas de

corroso ou incrustao das tubulaes.

Desinfeco: Adio de cloro gua antes de sua sada da Estao de

Tratamento para manter um teor residual, at a chegada na casa do consumidor, e

garantir que a gua fornecida atenda aos limites estabelecidos.

Fluoretao: Adio de flor gua para a preveno de cries.

1.8. Padres de potabilidade da gua para consumo humano

A gua doce da natureza, presente nos rios, lagos e lenis subterrneos,

contm substncias como sais dissolvidos, partculas em suspenso e

microrganismos que podem gerar contaminao e danos sade. Portanto, a gua

potvel deve estar em conformidade com o padro de potabilidade da gua para

consumo humano (Portaria 518/Ministrio da Sade/Brasil).


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 19

A desinfeco da gua com cloro uma das tcnicas mais antigas de

tratamento. Desde que passou a ser utilizada houve queda no ndice de mortalidade

infantil e reduo das doenas provocadas pela gua contaminada.

1.8.1. Padro microbiolgico

PARMETRO VMP(1)

Escherichia coli ou coliformes termotolerantes(2) Ausncia em 100mL

Quadro 2. Padro microbiolgico de potabilidade da gua para consumo humano.


(1)
Notas: Valor Mximo Permitido; (2) A deteco de Escherichia coli deve ser preferencialmente adotada.

1.8.2. Padro fsico-qumico

PARMETRO UNIDADE VMP(1)


Alumnio mg/L 0,2
Amnia (como NH3) mg/L 1,5
Cloreto mg/L 250
Cor Aparente uH(2) 15
Dureza mg/L 500
Etilbenzeno mg/L 0,2
Ferro mg/L 0,3
Mangans mg/L 0,1
Monoclorobenzeno mg/L 0,12
Odor - No objetvel(3)
Gosto - No objetvel(3)
Sdio mg/L 200
Slidos dissolvidos totais mg/L 1.000
Sulfato mg/L 250
Sulfeto de hidrognio mg/L 0,05
Surfactantes mg/L 0,5
Tolueno mg/L 0,17
Turbidez UT(4) 5
Zinco mg/L 5
Xileno mg/L 0,3
Quadro 3. Padro de aceitao da gua para consumo humano.
Notas: (1) Valor mximo permitido; (2)
Unidade Hazen (mg Pt-Co/L); (3)
Critrio de referncia; (4)
Unidade de
turbidez.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 20

1.8.3. Padro para substncias qumicas de risco sade

PARMETRO UNIDADE VMP(1)


INORGNICAS
Antimnio mg/L 0,005
Arsnio mg/L 0,01
Brio mg/L 0,7
Cdmio mg/L 0,005
Cianeto mg/L 0,07
Chumbo mg/L 0,01
Cobre mg/L 2
Cromo mg/L 0,05
Fluoreto(2) mg/L 1,5
Mercrio mg/L 0,001
Nitrato mg/L 10
Nitrito (como N) mg/L 1
Selnio mg/L 0,01
ORGNICAS
Acrilamida g/L 0,5
Benzeno g/L 5
Benzo[a]pireno g/L 0,7
Cloreto de Vinila g/L 5
1,2 Dicloroetano g/L 10
1,1 Dicloroeteno g/L 30
Diclorometano g/L 20
Estireno g/L 20
Tetracloreto de Carbono g/L 2
Tetracloroeteno g/L 40
Triclorobenzenos g/L 20
Tricloroeteno g/L 70
Alaclor g/L 20
Aldrin e Dieldrin g/L 0,03
Atrazina g/L 2
Bentazona g/L 300
Clordano (ismeros) g/L 0,2
2,4 D g/L 30
DDT (ismeros) g/L 2
Endossulfan g/L 20
Endrin g/L 0,6
Glifosato g/L 500
Heptacloro e Heptacloro epxido g/L 0,03
Hexaclorobenzeno g/L 1
Lindano (-BHC) g/L 2
Metolacloro g/L 10
Metoxicloro g/L 20
Molinato g/L 6
Pendimetalina g/L 20
Pentaclorofenol g/L 9
Permetrina g/L 20
Propanil g/L 20
Simazina g/L 2
Trifluralina g/L 20
Quadro 4. Padro de potabilidade para substncias qumicas de risco sade.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 21

PARMETRO UNIDADE VMP(1)


CIANOTOXINAS
Microcistinas(3) g/L 1
DESINFETANTES E PRODUTOS SECUNDRIOS DA DESINFECO
Bromato mg/L 0,025
Clorito mg/L 0,2
Cloro livre(4) mg/L 5
Monocloramina mg/L 3
2,4,6 Triclorofenol mg/L 0,2
Trihalometanos Total mg/L 0,1
Quadro 4 (Continuao). Padro de potabilidade para substncias qumicas de risco sade.
Notas: (1) Valor Mximo Permitido; (2) Os valores recomendados para a concentrao de on fluoreto devem
observar legislao especfica vigente relativa fluoretao da gua, em qualquer caso devendo ser respeitado
o VMP desta tabela; (3) aceitvel a concentrao de at 10 g/L de microcistinas em at 3 (trs) amostras,
consecutivas ou no, nas anlises realizadas nos ltimos 12 (doze) meses; (4) Anlise exigida de acordo com o
desinfetante utilizado.

1.8.4. Padro de radioatividade para gua potvel

PARMETRO UNIDADE VMP(1)


Radioatividade alfa global BQ/L 0,1(2)
Radioatividade beta global BQ/L 1,0(2)

Quadro 5. Padro de radioatividade para gua potvel.


Notas: (1) Valor mximo permitido; (2) Se os valores encontrados forem superiores aos VMP, dever ser feita a
identificao dos radionucldeos presentes e a medida das concentraes respectivas. Nesses casos, devero ser
aplicados, para os radionucldeos encontrados, os valores estabelecidos pela legislao pertinente da Comisso
Nacional de Energia Nuclear - CNEN, para se concluir sobre a potabilidade da gua.

1.9. gua para aplicao na rea da sade

1.9.1. gua purificada

A gua purificada utilizada como excipiente na produo de preparaes

comerciais, aplicaes farmacuticas, limpeza de dispositivos semi-crticos, reas e

equipamentos, assim como na preparao de produtos qumico-farmacuticos e

meios bacteriolgicos (PENNA et al., 2002).


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 22

A gua purificada tambm deve ser usada para todos os testes onde o uso de

gua indicado e deve obedecer as exigncias para a pureza qumica e orgnica e

deve ser protegida da contaminao microbiana.

A qualidade mnima da gua de alimentao do sistema para a produo da

gua purificada a gua potvel (USP 30, 2007).

A gua purificada para finalidades industriais, especialmente para a

manufatura de dispositivos mdico-hospitalares e preparao de solues

parenterais, requer rigor no controle de sistemas de purificao, armazenamento e

distribuio, para minimizar a formao do biofilmes resistentes aos procedimentos

do sanitizao, que acumulam e liberam bactrias e endotoxinas. Estes podem

espalhar na gua durante o processo de purificao (PENNA et al., 2001),

contaminando os dispositivos mdicos que, consequentemente, transformam-se em

um fator de risco potencial para os pacientes que submetidos a procedimentos

invasivos ou administraes parenterais (DIAS et al., 2006).

Em lactrios, a gua foi identificada como o veculo de contaminao na

reconstituio do leite em p usado em formulaes lactrias de base teraputica e

nutritiva para crianas hospitalizadas. A gua para preparar estas formulaes foi

positiva em 33.3% para o grupo de coliformes totais e 16.6% para o grupo de

coliformes fecais (SALLES e GOULART, 1997).

A contaminao bacteriana de solues de dilise tem sido relatada (PREZ-

GARCA e RODRIGUEZ-BENTEZ, 2000; HOENICH et al., 2006; VORBECK-

MEISTER et al., 1999) como um problema de sade pblica. A causa pode ser a

gua usada nas preparaes de solues, principalmente no ambiente hospitalar.

O papel da contaminao bacteriana da gua de dilise com respeito s

doenas inflamatrias crnicas associadas terapia de hemodilise


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 23

menosprezado (LONNEMANN, 2000). No obstante, as substncias pirognicas de

origem bacteriana derivaram dos lquidos contaminados da dilise com a

conseqente induo a uma resposta inflamatria nos pacientes renais.

Os hospitais tm a obrigao de controlar a qualidade microbiolgica da gua

usada para as preparaes de dilise e evitar a contaminao bacteriana e a

disseminao patognica.

Conseqentemente, a sanitizao peridica de todas as etapas do sistema de

purificao de gua deve ser executada para manter o nvel de qualidade da gua.

A gua potvel, quando usada em formulaes farmacuticas, deve ser

purificada, de acordo com as exigncias requeridas para a gua purificada, gua

para a injeo ou gua estril (MACDO, 2004).

Para produzir gua de acordo com os padres de segurana estabelecidos

para aplicaes na sade, os sistemas de purificao de gua mais utilizados em

hospitais, indstrias farmacuticas e de produtos hospitalares, so aqueles que

dispem da integrao operacional de equipamentos com leitos de filtrao e

deionizao, projetados para remover material particulado, microrganismos,

pirognios e componentes de carbono orgnico.

A osmose reversa descrita pela Farmacopia Americana (USP30, 2007)

como uma das operaes usadas para produzir a gua purificada. Os sistemas

equipados com a osmose reversa requerem pr-tratamento da gua que alimenta o

sistema, gerando custos significativos de operao e manuteno. No obstante,

estes procedimentos so imperativos para garantir a eficcia do sistema em remover

elementos orgnicos de baixo peso molecular (OZAKI e LI, 2002), incluindo

partculas, pirognios e microrganismos.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 24

Conseqentemente, os pontos de amostragem da gua devem ser

incorporados ao projeto e operao do sistema de purificao de gua (SAAD, 1992)

para assegurar a anlise peridica das diferentes etapas de purificao com relao

ao controle dos padres da gua e da manuteno dos equipamentos para prevenir

o crescimento microbiano no sistema.

Dado o grau de importncia da qualidade da gua na rea da sade,

pretendeu-se aqui, alertar as indstrias e estabelecimentos de sade, quanto

problemtica da contaminao da gua como um fator causador de injria a

pacientes e expor meios que possam ser de utilidade para a soluo de problemas e

controle da qualidade da gua utilizada.

1.9.2. Parmetros para a gua purificada e gua para injeo (USP 30)

Parmetro gua purificada gua para injeo


Condutividade < 1,3 S/cm at 25C < 1,3 S/cm at 25C
Carbono orgnico total (TOC) < 0,5 ppm < 0,5 ppm
Bactrias 100 UFC/mL 10 UFC/100mL
Endotoxinas No especificado < 0,25 UE/mL

Quadro 6. Parmetros para a gua purificada e gua para injeo (USP 30).

1.9.3. Outras guas destinadas rea da sade

gua para hemodilise a gua que atende aos requisitos da gua potvel

e que foi submetida a um tratamento adicional, por processo apropriado, para reduzir

componentes qumicos e microbiolgicos. No contem nenhum antimicrobiano

adicionado e no destinada a injeo.

gua purificada estril gua purificada esterilizada e empacotada

apropriadamente. No contm nenhum agente antimicrobiano. No deve ser usada


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 25

em preparaes destinadas administraes parenterais. Para tais finalidades usar

gua para injeo, gua bacteriosttica para injeo, ou gua estril para injeo.

gua para a injeo obtida atravs da gua potvel que foi purificada por

um processo de purificao adequado para remoo de produtos qumicos e

microrganismos. No contm nenhuma substncia adicionada e utilizada na

preparao de solues parenterais.

gua estril para irrigao preparada a partir da gua para injeo,

esterilizada e empacotada apropriadamente. No contm nenhum agente

antimicrobiano ou outra substncia adicionada.

gua estril para inalao preparada com gua para injeo, esterilizada

e empacotada apropriadamente. No contm nenhum agente antimicrobiano, a no

ser que seja utilizada em umidificadores ou dispositivos similares. No deve ser

usada para administrao parenteral.

gua bacteriosttica para injeo preparada a partir da gua para injeo,

esterilizada e empacotada apropriadamente, contendo um ou mais agentes

antimicrobianos. Deve-se us-la com a devida considerao quanto

compatibilidade dos agentes antimicrobianos com a substncia medicinal nela

dissolvida ou diluda.

1.10. Aplicao

A manufatura de produtos mdico-hospitalares emprega o uso da gua

purificada para lavar componentes termoplsticos injetados (cilindros, tampas, filtros,

e reservatrios, antes do uso na linha de montagem) e tambm em testes para a

deteco de possveis vazamentos no produto. Os componentes termoplsticos


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 26

injetados so usados na manufatura de artigos mdico-hospitalares tais como

oxigenadores de sangue usados em operaes cardiopulmonares com circulao

extracorprea (RGERS et al., 2005).

Os oxigenadores de sangue, uma vez manufaturados, so esterilizados por

gs xido de etileno (ETO). Entretanto, o processo de esterilizao no elimina

materiais particulados e contaminantes microbianos, tais como restos celulares e

endotoxinas bacterianas que causam reaes pirognicas nos pacientes. Estes

contaminantes so removidos dos componentes dos oxigenadores de sangue

lavando-os com gua purificada antes de serem montados (Figura 4. (A) e (B)).

A B

Figura 4. (A) Componentes termoplsticos injetados; (B) Oxigenador VitalTM

A manuteno de sistemas de purificao de gua exige a limpeza e

sanitizao rotineira de cada estgio do sistema de purificao para remover

material particulado acumulado e impedir o crescimento bacteriano. Os

contaminantes geralmente provm da gua de alimentao do sistema e diminuem a

eficincia do sistema e aumentam o custo da produo de gua purificada

(MALTAIS e STERN, 2001; REDONDO e LOMAX, 2001).

A contaminao microbiolgica pode tambm ser evitada melhorando o

desempenho do sistema de determinados elementos do sistema de purificao de

gua. Os espaos inoperantes (pontos mortos) devem ser eliminados, pois


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 27

promovem a formao bacteriana e crescimento de biofilmes pelo acmulo de gua

parada.

Para aumentar o nvel de pureza da gua e vida til dos equipamentos de

filtrao, essencial que a sanitizao seja realizada rotineiramente, em todos os

estgios do sistema, com agentes qumicos que conduzem morte dos

microrganismos (PENNA et al., 2001).


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 28

2. OBJETIVO

O objetivo principal deste trabalho constituiu em avaliar, sistematicamente, o

sistema de purificao de gua de uma indstria mdico-hospitalar e seus

procedimentos de limpeza e sanitizao.

Com esta finalidade, foi realizada anlise microbiolgica que compreendeu a

contagem heterotrfica no perodo de 2003 a 2006 e o isolamento e identificao

dos microrganismos contaminantes do sistema, com intuito de melhorar o

desempenho de cada estgio do processo de purificao, para prevenir a

recontaminao bacteriana na gua purificada.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 29

3. DESCRIO DA INDSTRIA

3.1. Edwards Lifesciences

Sediada na Califrnia, EUA, a Edwards Lifesciences Corporation projeta,

desenvolve e comercializa uma linha completa de produtos e servios para

tratamento de doena cardiovascular em estgio terminal (EDWARDS, 2007). Como

lder mundial em fornecimento de vlvulas cardacas de tecido para reposio e

produtos de reparos de vlvulas cardacas, a companhia focaliza quatro reas

principais: cirurgia cardaca, atendimento crtico, sistemas vasculares e produtos e

servios de perfuso.

No Brasil desenvolveu, comercializou e vendeu oxigenadores e acessrios

destinados a cirurgias de corao utilizando circulao extracorprea.

Em dezembro de 2006 transferiu a ttulo de venda, todo o business de

oxigenadores Nipro Medical, incluindo patentes de produtos.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 30

3.2. Nipro Medical

A Nipro Medical a subsidiria da Nipro Corporation, sediada em Osaka,

Japo, direcionada rea mdica, que inclui a manufatura e o comrcio de

dispositivos para dilise, agulhas de insulina, infuso, monitorao de acar no

sangue e produtos do sistema circulatrio (NIPRO, 2007).

A diviso mdica a maior unidade da Nipro e soma 44% do rendimento total

da companhia. Sua diviso farmacutica representou 17% das vendas em 2005.

A companhia opera em 37 locais, com 4 bases de manufaturas e 34 pontos

de venda. Nos ltimos anos, a Nipro tem expandido em nmero de manufaturas e

capacidade de produo global.

A diviso mdica foi expandida, em dezembro de 2006, com a aquisio do

negcio de produtos para perfuso da Edwards Lifesciences.

No Japo, a Nipro possui dois centros de pesquisa e trs fbricas. No Brasil,

sua subsidiria localiza-se em Sorocaba e pretende ampliar o mercado da rea

cardiopulmonar, com produo em So Paulo SP.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 31

4. MATERIAIS E MTODOS

4.1. Sistema de purificao

O sistema de purificao de gua, objeto deste estudo, compreende trs

etapas principais: Pr-tratamento, Purificao, Estocagem/Distribuio. Os pontos de

amostragem para anlise microbiolgica esto distribudos em cada estgio do

sistema de purificao de gua (Quadro 7 e Figura 5).

Pontos de
Estgios do sistema de purificao
amostragem
Entrada de gua potvel I
Filtros multimeios II
Pr-tratamento
Abrandadores III
Filtro de carvo ativado IV e V
Osmose reversa VI
Purificao
Deionizador VII
Tanque de estocagem VIII
Lmpada ultravioleta IX
Filtros 0,05m X
Estocagem e distribuio
Consumo Teste de vazamentos* XI
Consumo Lavadora automtica** XII
Consumo Pia** XIII
Quadro 7. Estgios do sistema de purificao de gua.
*Teste realizado para deteco de vazamentos em cmaras de oxigenao de sangue.
**Lavadora automtica e pia para lavagem, localizadas no interior de sala limpa classe 100.000 (ISO 08).
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 32

Figura 5. Detalhe dos estgios do sistema de purificao de gua. (I gua de entrada, II filtros
multimeios, III abrandadores, IV e V filtro de carvo, VI osmose reversa, VII deionizador, VIII
tanque de estocagem, IX lmpada ultravioleta, X filtros 0,05m, XI teste de vazamentos, XII
lavadora automtica, XIII pia de lavagem).

No processo de purificao, a gua proveniente do sistema de abastecimento

pblico (I) armazenada em um reservatrio de fibra de vidro com capacidade para

10.000 litros de gua. Uma bomba de 413 kPa de presso, com fluxo de 34 L/min,

pressuriza a gua atravs do sistema de purificao (U.S. Filter, Lowell, MA, USA).

Chegando ao sistema de purificao, a gua passa por dois filtros multimeios

(II) em paralelo, compostos por nveis de antracito, areia, granada e cascalho,

capazes de remover material particulado maior que 10m e segue atravs de dois

abrandadores (III) de sdio alternados, que removem a dureza da gua por meio da

troca de ons clcio e magnsio por ons sdio. As resinas de troca inica dos

abrandadores so alimentadas automaticamente por um tanque com salmoura.

Uma vez abrandada, a gua atravessa um filtro de carvo ativado (IV e V),

que remove o cloro da gua para que no danifique as membranas de osmose

reversa, sensveis ao cloro.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 33

A gua passa atravs de um filtro de 5m que retm impurezas e, ento,

alcana a unidade da osmose reversa (VI), onde forada por presso, a atravessar

tangencialmente as membranas, que removem aproximadamente 97% de slidos

dissolvidos, bactrias, endotoxinas e matria orgnica.

A etapa seguinte a passagem da gua atravs de duas colunas paralelas de

resina mista de troca aninica e catinica (VII) para remover os ons que no foram

retidos pelas membranas de osmose reversa. A gua segue para um tanque de

armazenamento (VIII) com capacidade para 1.500 litros de gua, equipado com um

dispositivo em forma de esfera pulverizadora (spray ball) para alvio de presso ou

vcuo que mantm as paredes internas do tanque constantemente molhadas para

impedir o crescimento bacteriano.

A gua armazenada neste tanque circula continuamente, passando sob uma

lmpada ultravioleta de 254 nanmetros (IX) que minimiza a proliferao

microbiolgica, e ento atravessa trs filtros microbiolgicos de 0,05 m (X) que

retm microrganismos e pirognios.

Um volume de aproximadamente 3.000 litros de gua purificada produzido

diariamente.

A gua distribuda aos pontos do uso (XI, XII, XIII), no interior de uma Sala

Limpa (classe 100), onde so manufaturados os produtos mdico-hospitalares

destinados a cirurgias cardiovasculares.

4.2. Anlise microbiolgica

Em intervalos previamente estabelecidos, cada ponto de amostragem foi

sanitizado com lcool 70% filtrado e 100 mL de amostra de gua foram envasados
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 34

em sacos estreis de polietileno (Figura 6) do tipo Whril-Pak (Nasco, Modesto, CA,

EUA).

Figura 6. Coleta de amostra de gua

A anlise microbiolgica da gua coletada nos pontos de I a XIII foi realizada

por meio de filtrao vcuo em membranas filtrantes de 0,45 m que foram

assentadas em placas de Petri contendo meio de cultura R2A gar (Becton,

Dickinson and Company, Sparks, MD, USA) para contagem de heterotrficos e meio

de cultura m-Endo (Becton, Dickinson and Company, Sparks, MD, USA), para

contagem de coliformes (Figura 7. A e B).

A B

Figura 7. (A) Assentamento de membrana filtrante sobre agar. (B) Unidades Formadoras de Colnia

As placas foram incubadas em posio invertida, respectivamente

temperatura de 332C, por 72 horas (contagem de heterotrficos) e 35.00.5C, por

24 horas (contagem de coliformes). Aps o perodo de incubao, as unidades

formadoras de colnias (UFC/100 mL) presentes na superfcie das membranas

filtrantes foram contadas.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 35

Para a contagem total, foi considerado o mximo de 300 unidades formadoras

de colnia na superfcie das membranas filtrantes. As colnias de coliformes fecais

exibem uma cor rsea a vermelho escuro, com um brilho verde-metlico, quando em

meio seletivo.

As colnias foram selecionadas e isoladas, transferindo-se cada colnia

individualmente para placas de Petri contendo meio de cultura TSA e incubando-as

a 30-35C por 18-24 h.

4.3. Identificao microbiana

As colnias desenvolvidas foram avaliadas morfologicamente e submetidas

aos testes de oxidase e indol, seguidas por testes bioqumicos de identificao de

gnero e espcie, usando-se os micro-mtodos padronizados BBLTM CrystalTM

(Becton, Dickinson and Company, Sparks, MD, USA) para identificao de

microrganismos (Figura 8).

Figura 8. BBLTM CrystalTM - Kit para identificao de microrganismos.

Com a tcnica de colorao de Gram, as unidades formadoras de colnias

isoladas so identificadas como Gram-negativa ou Gram-positiva.

Para a identificao dos microrganismos Gram-negativos foram utilizados os

painis BBLTM CrystalTM Enteric/Non-Fermenter e para os Gram-positivos foram

utilizados os painis Gram-positive BBLTM CrystalTM.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 36

Os micro-mtodos empregados so modificaes de mtodos clssicos de

identificao microbiana e seus princpios bsicos so reaes bioqumicas e

enzimticas realizadas com cepas-padro.

A interpretao das reaes foi realizada de acordo com a leitura da alterao

de cores, resultantes das reaes bioqumicas nos substratos especficos do painel,

com mudana do pH.

Esta leitura gera um perfil numrico que comparado com os perfis padres

da base de dados do software para o sistema de identificao BBLTM CrystalTM.

A identificao de microrganismos dificultada no s devido ao seu tamanho

microscpico, mas, tambm, porque muitos so transparentes ou praticamente

incolores. Para observ-los e diferenci-los necessrio recorrer primeiramente s

tcnicas de colorao.

Um dos mtodos de colorao mais utilizados a colorao de Gram,

desenvolvida pelo dinamarqus Christian Gram em 1884. Este mtodo permite

dividir as bactrias nas classes Gram-positivas e Gram-negativas (Anexo 1).

Esta diferenciao est relacionada diferente estrutura, composio e teor

lipdico presente na parede celular das bactrias Gram-positivas e Gram-negativas.

4.3.1. Sistema BBL Crystal para identificao rpida de


microrganismos

Os micro-mtodos para a identificao bioqumica dos microrganismos so

relatados desde 1918.

O interesse em sistemas miniaturizados de identificao trouxe grande

vantagem por requerer pouco espao, vida til prolongada e fcil utilizao.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 37

Muitos dos testes usados nos sistemas BBL Crystal so modificaes de

mtodos clssicos e incluem testes para fermentao, oxidao, degradao e

hidrolise de vrios substratos.

O resultado de um teste padro, para cada microrganismo, convertido

numericamente e armazenado em uma base de dados usado como a base para

identificao (Figura 9 e 10).

A identificao obtida a partir de uma anlise comparativa entre o teste de

reao do microrganismo padro queles investigados.

Figura 9. Tela para introduo do perfil gerado pelo Kit BBLTM CrystalTM
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 38

Figura 10. Tela para visualizao da identificao microbiana gerada pelo Kit BBLTM CrystalTM

4.3.1.1 Sistema para identificao rpida de Gram-positivos

Este sistema tem possibilita identificar at 88 microrganismos gram-positivos

clinicamente importantes.

O sistema para identificao rpida de Gram-positivos BBL Crystal um

mtodo miniaturizado de identificao, que emprega substratos convencionais

modificados, fluorognicos e cromognicos, para identificao de bactrias Gram-

positivas aerbicas.

O kit contm 29 substratos desidratados e um controle de fluorescncia

dispostos em poos de reao em um cassete plstico. O inoculo preparado para

encher todos os poos de reao, que re-hidrata os substratos e inicia a reao

(Figura 11).
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 39

Depois do perodo de incubao, os poos so examinados quanto

mudana de colorao e presena de fluorescncia que resultam das atividades

metablicas dos microrganismos.

Figura 11. Manipulao do Kit BBLTM CrystalTM - (1) Alada de crescimento microbiano em agar TSA.
(2) Transferncia para tubo com soro fisiolgico 0,9%. (3) Homogeneizao. (4) Recolhimento do
inculo com pipeta de Pasteur. (5) Transferncia do inculo para o kit. (6) kit inoculado.

4.3.1.2 Sistema para identificao rpida de Gram-negativos

Este sistema permite identificar bactrias Gram-negativas aerbicas

clinicamente significativas que pertencem famlia das Enterobacteriaceae, assim

como, bacilos Gram-negativos no-fermentadores mais freqentemente isolados.

O sistema para identificao rpida de Gram-negativos um mtodo

miniaturizado de identificao que emprega substratos convencionais modificados e

cromognicos para detectar enzimas que os microrganismos utilizam para

metabolizar vrios substratos.

O kit contm 30 substratos desidratados dispostos em poos de reao em

um cassete plstico. O inoculo preparado para encher todos os poos de reao,


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 40

que re-hidrata os substratos e inicia a reao. Testes adicionais de oxidase (Anexo

2) e indol (Anexo 3) so necessrios para facilitar e aumentar o grau de confiana da

identificao.

Depois do perodo de incubao, os poos so examinados quanto

mudana de colorao que resultam das atividades metablicas dos

microrganismos.

4.4. Teste de endotoxinas pelo mtodo gel-clot (LAL)

As amostras de gua so coletadas em frascos de vidro esterilizados por

calor seco (despirogenizao), identificadas e levadas ao laboratrio.

O teste feito em duplicata e inclui a amostra a ser testada, um controle

positivo, um controle negativo e uma curva padro.

H dois tipos de tcnicas para o teste de endotoxinas descritos pela

Farmacopia Americana (USP 30, 2007): a tcnica de gel-clot (Lisado de

Amebcitos de Lmulus - LAL), com base na formao de gel, e a tcnica

fotomtrica. Nesta ltima incluem-se o mtodo turbidimtrico, com base na da

turbidez, e o mtodo cromognico, baseado na alterao de colorao.

A tcnica do gel-clot (Anexo 4) utiliza extrato de amebcitos obtido do

caranguejo em ferradura (Limulus polyphemus ou Tachypleus tridentatus) que foi

preparado e caracterizado para o uso como Reagente LAL. Baseia-se na formao

do gel quando na presena de endotoxinas bacterianas.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 41

4.5. pH, condutividade e substncias oxidveis

A leitura do valor de pH (USP 30, 2007) executada utilizando-se um

instrumento potencimetro (pHmetro) da marca Metrohm, modelo 744 (Oberdorfstr,

Herisau, Switzerland).

A condutividade (USP 30, 2007) eltrica na gua uma medida de ons

dissociados na gua que varia em funo do valor de pH e da temperatura.

Estes ons tm impacto significativo na pureza qumica da gua em seu

propsito para uso em aplicaes farmacuticas.

A condutividade medida por um condutivmetro da marca Orion modelo 105

(Beverly, MA, EUA). Devido temperatura ter um impacto substancial nas leituras de

condutividade, este instrumento possui um sistema automtico de compensao de

temperatura, para indicar o valor real que teoricamente seria observado na

temperatura nominal de 25C.

O teste de substncias oxidveis (Anexo 5) substitui os testes de medio de

carbono orgnico total (TOC). As molculas orgnicas so introduzidas na gua de

entrada por fontes diversas. Nos sistemas de purificao e nos sistemas da

distribuio, podem ser introduzidas por biofilmes que se desenvolvem no sistema.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 42

5. LIMPEZA E SANITIZAO

A limpeza e a sanitizao de todos os estgios do sistema de purificao de

gua (Tabela 1) foram realizados semestralmente, ou aps a interrupo da

operao do sistema por tempo superior a 24 horas, ou aps procedimentos de

manuteno operacionais, ou quando resultados microbiolgicos foram

insatisfatrios (U.S. FILTER, 1995).

A limpeza dos filtros multimeios, dos abrandadores e do filtro de carvo, foi

feita com soluo de Bissulfito de sdio 1% (m/v) com um tempo de contato de 90

minutos. Um pr-filtro de 5m (Figura 12) foi utilizado entre o filtro de carvo ativado

e a osmose reversa, pois o carvo ativado granular comumente libera uma grande

quantidade de partculas que pode danificar as membranas de osmose reversa. Na

ocasio das sanitizaes, este filtro foi substitudo por filtro novo.

Figura 12. Reposio do filtro 5m. Filtro usado (esquerda) e filtro novo (direita)

Na sanitizao das membranas de osmose reversa, inicialmente foi feita uma

limpeza com soluo de Hidrxido de sdio concentrao de 0,4% (m/v), com um

tempo de contato de 30 minutos. Em seguida, uma soluo de cido ctrico na

concentrao de 2,2% (m/v) permanece em contato por 30 minutos sobre as


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 43

membranas e ento foi executada a sanitizao com Proxitane 1512 (Perxidos do

Brasil Ltda., Curitiba, PR, BR) na concentrao de 1% (v/v) e tempo de contato de

180 minutos.

O Proxitane 1512 uma mistura em equilbrio contendo cido peractico

(15%), perxido de hidrognio (23%), cido actico (16%) e veculo estabilizante.

efetivo contra uma larga variedade de microrganismos, oxidando componentes

imprescindveis sobrevivncia de bactrias, vrus, fungos e esporos bacterianos.

O tanque de estocagem e o loop de distribuio foram sanitizados com

soluo de Hipoclorito de sdio concentrao de 0,4% e tempo de contato de 240

minutos.

Tabela 1. Procedimento de limpeza e sanitizao de cada estgio do sistema de purificao de gua.

Pontos de Tempo de
Estgios Componentes Agentes qumicos
amostragem contato
gua potvel I - -
Filtros multimeios II Bissulfito de sdio 1% 90 min
Pr-
Tratamento Abrandadores III Bissulfito de sdio 1% 90 min
Filtro de carvo IV e V Bissulfito de sdio 1% 90 min
Filtro 5m - - -
Osmose Reversa VI Proxitane 1% 180 min
Tratamento
Deionizador VII - -
Tanque de VIII Hipoclorito de sdio 0,4% 240 min
estocagem
Estocagem Lmpada U.V. IX - -
e
Filtros 0,05m X Hipoclorito de sdio 0,4% 240 min
Distribuio
Pontos de uso XI, XII e XIII Hipoclorito de sdio 0,4% 240 min
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 44

6. RESULTADOS

6.1 Contagens heterotrficas

O equipamento do sistema de purificao de gua estudado integra

operacionalmente todos os estgios necessrios para produzir gua purificada

utilizada no processo de lavagem de componentes termoplsticos para montagem

de oxigenadores de sangue. A gua purificada tambm usada em testes contra

vazamentos nestes oxigenadores, com propsito de garantir a manufatura de um

produto seguro, integrante de cirurgias cardacas bem sucedidas.

Este estudo monitorou o sistema de purificao de gua, atravs de anlises

microbiolgicas e fsico-qumicas durante o perodo de janeiro de 2003 a dezembro

de 2006, com o propsito de avaliar a qualidade microbiolgica da gua produzida,

identificando os pontos crticos de contaminao, perda de capacidade operacional

dos componentes do sistema e eficincia dos procedimentos da limpeza e

sanitizao (Tabela 2).


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 45

Tabela 2. Contagens heterotrficas (log10 UFC/100mL) dos estgios do sistema de purificao.


I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII XIII
Dez/02 - Antes da sanitizao 1,52 0,48 0,00 0,00 0,85 1,52 1,41 0,00 1,97 1,83 0,00 0,60 1,45
Jan/03 - Aps a sanitizao 1,60 2,06 0,78 1,83 2,26 1,68 0,30 0,30 0,30 0,30 0,30 0,30 0,30
Fev/03 0,78 2,34 0,60 2,42 2,43 0,60 1,53 1,60 1,30 1,56 1,81 1,90 1,41
Mar/03 1,96 1,15 1,08 1,45 1,88 0,30 2,14 2,20 2,11 2,07 0,60 0,30 0,60
Abr/03 - - - - - - - - - - 0,60 0,60 0,30
Jun/03 1,75 2,30 2,21 0,78 1,15 0,30 2,56 2,09 1,86 0,60 1,30 0,30 0,30
Set/03 1,83 0,00 1,89 2,35 2,78 1,38 2,75 2,19 2,56 0,90 0,30 0,00 1,00
Out/03 - - - - - 2,53 2,47 2,48 2,44 2,53 0,60 0,78 0,30
Dez/03 - Antes da sanitizao 1,70 2,36 2,25 2,43 1,58 1,08 2,37 2,26 2,48 2,20 0,00 0,30 1,79
Jan/04 - Aps a sanitizao 2,51 1,34 1,92 2,70 3,88 0,30 2,00 1,73 0,78 0,00 0,00 0,30 0,78
Fev/04 - - - - - - - - - - 1,15 1,00 1,30
Abr/04 2,32 2,79 1,48 2,85 2,09 0,00 1,95 1,30 0,30 0,00 0,30 0,00
Jun/04 1,89 0,30 1,60 3,30 3,40 1,08 2,11 2,05 0,90 1,85 1,00 1,26
Jul/04 1,73 1,20 0,78 3,32 3,26 1,20 1,92 1,62 0,78 1,83 1,92 1,98
Jul/04 1,66 1,20 1,83 3,51 3,38 1,20 1,51 1,62 0,78 1,08 0,90 1,00

Substitudo por leitos de resina de troca aninica e catinica


Ago/04 2,15 1,26 1,15 3,34 2,48 1,45 2,11 2,45 2,16 0,90 0,60 0,78
Set/04 2,78 2,43 2,60 3,40 3,95 1,26 2,30 1,60 0,00 1,20 1,00 0,60
Out/04 2,00 2,00 2,70 2,95 3,28 1,38 2,70 2,00 1,30 0,00 1,00 0,00
Nov/04 2,38 2,56 3,43 3,78 3,68 0,60 1,91 1,58 0,90 0,60 0,30 0,30
Dez/04 - Antes da Sanitizao do Pr-
3,08 3,57 3,75 4,24 3,88 1,08 2,16 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
tratamento
Dez/04 - Aps a Sanitizao do Pr-
2,34 3,06 3,49 3,36 3,76 1,48 2,09 1,58 2,06 0,00 0,60 1,08
tratamento
Jan/05 2,60 2,60 3,92 4,23 4,42 1,00 2,23 1,62 0,30 0,60 0,30 0,90
Fev/05 - Antes da sanitizao do Estgio
2,78 3,00 3,30 4,08 3,90 0,00 2,01 0,90 0,00 0,00 1,15 1,86
de Tratamento
Fev/05 - Aps da sanitizao do Estgio
2,18 3,48 3,70 4,58 4,60 0,00 2,15 1,34 0,00 2,21 1,00 1,00
de Tratamento
Fev/05 - Antes da sanitizao do estgio
2,70 3,48 3,60 3,30 4,20 0,00 1,20 1,89 1,70 1,76 0,30 1,15
de Estocagem e Distribuio
Fev/05 - Aps a sanitizao do estgio
2,38 3,30 3,60 3,90 3,70 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
de Estocagem e Distribuio
Mar/05 2,51 2,85 3,51 4,04 3,90 0,30 1,94 1,73 0,78 1,32 0,30 0,60
Abr/05 2,41 2,70 3,46 3,95 3,78 0,78 1,79 1,62 1,15 0,90 0,00 1,08
Mai/05 2,63 2,78 3,04 4,00 3,85 1,26 1,91 1,88 1,38 1,15 0,78 1,08
Jun/05 3,17 1,90 3,24 4,97 4,81 1,53 2,16 2,04 0,78 1,15 0,30 0,00
Jul/05 - Antes da sanitizao 2,30 1,74 2,70 3,78 3,48 0,00 2,06 2,31 0,00 1,48 0,30 0,00
Jul/05 - Aps a sanitizao 1,60 1,51 1,08 2,60 2,00 1,43 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
Jul/05 - 3 Dias Aps a Sanitizao 2,76 1,95 1,48 3,36 3,00 1,00 1,83 0,48 0,48 0,70 0,00 0,00
Ago/05 2,49 3,29 2,70 3,78 4,20 1,23 1,53 1,99 0,70 0,48 1,18 0,00 0,00
Set/05 - Antes da sanitizao do Pr-
3,08 2,57 2,45 3,00 2,82 1,56 1,81 0,90 0,00 0,95 1,40 0,00 0,90
tratamento
Set/05 - Aps a sanitizao do
3,48 2,71 2,67 4,18 4,31 1,38 1,80 1,49 1,51 0,78 1,04 0,00 0,00
Pr-tratamento
Out/05 2,78 2,62 3,20 4,04 4,18 0,90 1,73 1,34 1,15 0,78 0,95 0,30 0,00
Dez/05 - Antes da sanitizao 2,00 1,30 2,30 2,30 3,45 0,00 0,30 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
Dez/05 - Aps a sanitizao 2,20 2,79 3,02 3,18 3,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
Jan/06 2,72 2,93 2,29 4,03 4,17 0,90 1,72 0,90 0,00 0,48 1,36 0,00 0,30
Fev/06 2,54 2,45 2,38 4,09 4,12 0,30 1,20 1,00 0,00 0,00 0,78 0,00 0,00
Mar/06 2,86 2,60 2,53 3,78 3,60 0,60 1,00 1,20 0,00 1,08 0,90 0,60 0,00
Abr/06 2,73 2,69 2,41 3,95 3,90 1,08 1,34 1,08 0,95 0,70 0,30 0,00 0,00
Mai/06 2,92 2,79 2,43 4,15 4,23 1,26 1,20 1,20 1,30 0,90 0,60 0,70 0,30
Jun/06 2,57 2,59 2,32 4,04 3,85 0,90 1,45 0,60 0,78 0,30 0,00 0,00 0,30
Jul/06 2,84 2,61 2,59 3,90 4,00 0,60 1,08 0,70 0,60 0,60 0,00 0,00 0,00
Ago/06 - Antes sanitizao 2,85 2,74 2,45 4,00 3,95 0,00 0,78 0,48 0,95 0,30 0,00 0,00 0,00
Ago/06 - Aps a sanitizao 2,93 1,88 1,90 2,41 2,28 0,00 0,00 0,00 0,30 0,00 0,00 0,00 0,30
Set/06 2,73 1,75 1,96 2,28 2,36 0,00 1,08 0,30 0,00 0,30 0,30 0,00 0,00
Out/06 2,86 1,83 2,16 2,57 2,20 0,60 0,90 0,60 0,30 0,30 0,70 0,00 0,30
Nov/06 3,01 1,94 2,06 2,26 2,32 0,00 0,30 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
Dez/06 - Antes da sanitizao 2,89 1,92 1,81 2,34 2,40 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,30 0,30
Dez/06 - Aps a sanitizao 2,95 1,86 1,83 2,30 2,20 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,30 0,00 0,00

(I gua de entrada, II filtros multimeios, III abrandadores, IV e V filtro de carvo, VI osmose


reversa, VII deionizador, VIII tanque de estocagem, IX lmpada ultravioleta, X filtros 0,05m,
XI teste de vazamentos, XII lavadora automtica, XIII pia de lavagem).
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 46

Em janeiro de 2003, aps a sanitizao completa do sistema de purificao, a

carga microbiana de 1,60 log10, arrastada com a gua de entrada, fornecida pelo

abastecimento municipal (I), foi elevada para 2,26 log10 no filtro de carvo ativado

(IV e V) e reduzida 1,68 log10 pelas membranas de osmose reversa (VI).

Deste estgio em diante, a carga microbiana foi reduzida a 0,30 log10 nas

etapas subseqentes (VII, VIII, IX, X) e este valor foi mantido aos pontos do uso

(XI, XII, e XIII).

A sanitizao completa do sistema foi capaz de reduzir um ciclo logartmico a

carga microbiana no deionizador (VII) e etapas subseqentes. Entretanto, o

processo de limpeza dos equipamentos, que compem o Pr-tratamento, no foi

eficiente entre a gua de entrada e o filtro de carvo ativado, como mostra a Figura

13.

2,5 2,5

2,0 2,0
Log10 UFC/100mL

1,5 1,5

1,0 1,0

0,5 0,5

0,0 0,0
I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII XIII

Jan/03 - Aps Sanitizao Dez/02 - Anterior Sanitizao

Figura 13. Contagens heterotrficas dezembro de 2002 e janeiro de 2003 (I gua de entrada, II
filtros multimeios, III abrandadores, IV e V filtro de carvo, VI osmose reversa, VII
deionizador, VIII tanque de estocagem, IX lmpada ultravioleta, X filtros 0,05m, XI teste de
vazamentos, XII lavadora automtica, XIII pia de lavagem).

Entre janeiro de 2003 a janeiro 2004, um aumento de aproximadamente 2

log10 foi observado na carga microbiana aps a passagem atravs do deionizador.

Mesmo aps os procedimentos de sanitizao, o deionizador, exibia diferencial de


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 47

presso alto, devido saturao de suas membranas, que impediram sua

regenerao. Aps as membranas de osmose reversa, a gua permeada era

recontaminada, e conseqentemente os pontos do consumo alcanaram cargas

microbianas ao nvel da gua de entrada (1,7 log10).

Em fevereiro de 2003, a carga de 2,42 log10 proveniente do filtro de carvo

ativado foi reduzida aos nveis de 0,60 log10 pela osmose reversa e aumentada a

1,53 log10 na unidade de deionizao, permanecendo neste nvel nos pontos de uso.

Em maro de 2003, a carga de 1,88 log10 presente no filtro de carvo ativado

foi reduzida a 0,30 log10 aps a passagem pela osmose reversa e aumentada, com a

passagem pelo deionizador, a 2,14 log10. Esta biocarga foi reduzida novamente a

0,30 log10 aps a passagem atravs dos filtros 0,05 m.

Em junho de 2003, a biocarga de 1,15 log10 que presente no filtro de carvo

foi reduzida mais uma vez a 0,30 log10 na unidade de osmose reversa. Entretanto,

aumentou para 2,56 log10 na unidade de deionizao e retornou a 0,30 log10 aps a

passagem pelos filtros 0,05 m.

Do ms de setembro de 2003 a dezembro de 2003, a carga microbiana aps

a osmose reversa, foi aumentada em 1,0 log10, atingindo valores de at 2,53 log10

nos filtros 0,05 m, o que acarretou a presena de at 1,79 log10 de biocarga nos

pontos de consumo.

A capacidade da unidade de osmose reversa em reduzir mais de 2 ciclos

logartmicos a carga microbiana proveniente do filtro de carvo ativado diminuiu para

1 ciclo logartmico, como observado no perodo de junho de 2003 a dezembro de

2003, devido saturao das membranas de osmose reversa.

Embora a populao microbiana em dezembro de 2003 no excedesse 2,50

log10, em janeiro de 2004, aps a sanitizao completa do sistema de purificao de


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 48

gua, a unidade de carvo ativado aumentou para 3,88 log10 a carga microbiana

proveniente dos filtros multimeios (1,34 log10).

Esta biocarga foi ento reduzida a nveis to baixos quanto 0,30 log10 (Figura

14), enfatizando a eficincia do cido peractico na sanitizao das membranas de

osmose reversa.

Por outro lado, a unidade de deionizao introduziu novamente cerca de 2

ciclos logartmicos de contaminao microbiana na gua, que foram removidos pelos

filtros 0,05 m, sendo mantidos nveis inferiores a 1,0 log10 nos pontos de consumo.

A eficiente sanitizao do tanque de estocagem, dos filtros 0,05 m, e dos

pontos do consumo, com Hipoclorito de sdio, resultou na diminuio da populao

heterotrfica.

4,0 4,0

3,5 3,5

3,0 3,0
Log 10 UFC/100mL

2,5 2,5

2,0 2,0

1,5 1,5

1,0 1,0

0,5 0,5

0,0 0,0
I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII XIII

Jan/04 - Aps Sanitizao Dez/03 - Anterior Sanitizao

Figura 14. Contagens heterotrficas dezembro de 2003 e janeiro de 2004 (I gua de entrada, II
filtros multimeios, III abrandadores, IV e V filtro de carvo, VI osmose reversa, VII
deionizador, VIII tanque de estocagem, IX lmpada ultravioleta, X filtros 0,05m, XI teste de
vazamentos, XII lavadora automtica, XIII pia de lavagem).

O deionizador mostrou ser uma fonte de contaminao da gua aps as

membranas de osmose reversa, uma vez que a sanitizao com cido peractico

no era suficiente para manter os nveis microbianos alcanados pela osmose


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 49

reversa, culminando na substituio desta unidade, em fevereiro de 2004, leitos de

resina de troca aninica e catinica.

Nos meses subseqentes a julho de 2004, apesar da ocorrncia de nova

sanitizao do sistema de purificao de gua com limpeza do filtro de carvo

ativado com soluo de Bissulfito de sdio a 1% (tempo de contato: 30 minutos em

circulao e 60 minutos em repouso), no houve reduo da carga microbiana

presente no filtro de carvo, que permaneceu superior a 3,0 log10 e alcanou 4,24

log10 em dezembro de 2004 e assim mantendo-se nos meses seguintes, at agosto

de 2005.

O tanque de estocagem e distribuio apresentou uma populao microbiana

que permaneceu ao nvel de 2,00 log10, mas que foi reduzida entre 1 e 2 ciclos

logartmicos, permitindo que a gua alcanasse os pontos do uso com uma

populao microbiana de 2 a 10 UFC/100mL.

Em dezembro de 2004 foi realizada uma sanitizao parcial no sistema de

purificao de gua (somente nos pontos II, III, IV, e V), que no reduziu

significativamente as contagens microbianas nas diferentes etapas subseqentes.

Por exemplo, a carga microbiana presente no filtro de carvo ativado foi reduzida em

apenas 1,0 log10. Com as membranas de osmose reversa, houve reduo adicional

de mais 1,0 log10 e a gua pde alcanar os pontos do uso com uma biocarga de

aproximadamente 1 log10 (Figura 15).


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 50

5,0 5,0
4,5 4,5
4,0 4,0
Log10 UFC/100mL

3,5 3,5
3,0 3,0
2,5 2,5
2,0 2,0
1,5 1,5
1,0 1,0
0,5 0,5
0,0 0,0
I II III IV V VI VIII IX X XI XII XIII

Dez/04 - Aps Sanitizao (I to V ) Dez/04 - Anterior Sanitizao Nov/04

Figura 15. Contagens heterotrficas novembro e dezembro de 2004 (I gua de entrada, II


filtros multimeios, III abrandadores, IV e V filtro de carvo, VI osmose reversa, VII
deionizador, VIII tanque de estocagem, IX lmpada ultravioleta, X filtros 0,05m, XI teste de
vazamentos, XII lavadora automtica, XIII pia de lavagem).

Em fevereiro de 2005, dando continuidade sanitizao iniciada em

dezembro de 2004, uma sanitizao foi conduzida (somente no ponto VI), e no foi

suficiente para alcanar nveis abaixo de 10 UFC/100mL no tanque de estocagem.

Aps ter deixado o filtro de carvo ativado com biocarga de 4,60 log10, as

membranas de osmose reversa retiveram toda esta biocarga na gua. Entretanto, o

nvel microbiano aumentou em 2 log10 aps a permanncia da gua no tanque de

estocagem (Figura 16).


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 51

5,0 5,0
4,5 4,5
4,0 4,0
3,5 3,5
Log10 CFU/100mL

3,0 3,0
2,5 2,5
2,0 2,0
1,5 1,5
1,0 1,0
0,5 0,5
0,0 0,0
I II III IV V VI VIII IX X XI XII XIII

Fev/05 - Aps a Sanitizao (VI) Fev/05 - Anterior Sanitizao Jan/05

Figura 16. Contagens heterotrficas janeiro e fevereiro de 2005 (I gua de entrada, II filtros
multimeios, III abrandadores, IV e V filtro de carvo, VI osmose reversa, VII deionizador, VIII
tanque de estocagem, IX lmpada ultravioleta, X filtros 0,05m, XI teste de vazamentos, XII
lavadora automtica, XIII pia de lavagem).

A sanitizao parcial do sistema de purificao de gua somente foi

suficientemente capaz de manter os nveis heterotrficos abaixo de 1 UFC/100mL, a

partir das membranas de osmose reversa at os pontos do uso, com a concluso da

sanitizao nas etapas VIII, IX, X, XI, XII, e XIII. A sanitizao destes estgios

importante para assegurar a reduo de 4,0 log10 (Figura 17), conseguidos pela

osmose reversa e por sua manuteno aos pontos do uso.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 52

4,5 4,5
4,0 4,0
Log 10 UFC/100mL 3,5 3,5
3,0 3,0
2,5 2,5
2,0 2,0
1,5 1,5
1,0 1,0
0,5 0,5
0,0 0,0
I II III IV V VI VIII IX X XI XII XIII

Fev/05 - Aps Sanitizao (VIII to XIII) Fev/05 - Anterior Sanitizao


Fev/05 - Aps Sanitizao (VI)

Figura 17. Contagens heterotrficas Fevereiro/05 (I gua de entrada, II filtros multimeios, III
abrandadores, IV e V filtro de carvo, VI osmose reversa, VII deionizador, VIII tanque de
estocagem, IX lmpada ultravioleta, X filtros 0,05m, XI teste de vazamentos, XII lavadora
automtica, XIII pia de lavagem).

O tanque de estocagem, que pode aumentar o nvel microbiano a nveis

acima de 1 log10, deve ser freqentemente sanitizado para evitar sobrecarregar a

capacidade de reteno dos filtros 0,05 m, visto que a biocarga permaneceu em 1

log10 durante os meses maro a junho de 2005.

Em julho de 2005, a sanitizao completa do sistema de purificao reduziu a

carga microbiana da gua em 1 log10 (Figura 18) no filtro de carvo ativado e

assegurou um nvel abaixo de 10 UFC/100mL na gua, aps a passagem atravs

das membranas de osmose reversa, mantendo este nvel at os pontos do uso.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 53

5,0 5,0
4,5 4,5
4,0 4,0
Log 10 UFC/100mL

3,5 3,5
3,0 3,0
2,5 2,5
2,0 2,0
1,5 1,5
1,0 1,0
0,5 0,5
0,0 0,0
I II III IV V VI VIII IX X XI XII XIII

Jul/05 - Aps Sanitizao Jul/05 - Aterior Sanitizao Jun/05

Figura 18. Contagens heterotrficas junho e julho de 2005 (I gua de entrada, II filtros
multimeios, III abrandadores, IV e V filtro de carvo, VI osmose reversa, VII deionizador, VIII
tanque de estocagem, IX lmpada ultravioleta, X filtros 0,05m, XI teste de vazamentos, XII
lavadora automtica, XIII pia de lavagem).

No intuito de obter uma limpeza mais eficaz do leito de carvo ativado, em

setembro de 2005 uma limpeza foi conduzida com soluo de Bissulfito de sdio

1% (m/v), com circulao desta soluo por uma hora, numa taxa de fluxo de 34

L/minuto. Aps este perodo, a soluo foi drenada e substituda por uma nova

soluo de Bissulfito de sdio 1% que permaneceu em circulao por mais uma

hora. Aps a drenagem desta soluo de limpeza, foi feito enxge de 20 minutos

com gua potvel.

Antes da limpeza com a soluo de Bissulfito de sdio 1%, a biocarga

encontrada no filtro de carvo ativado era de 3,0 log10 e aps o enxge e j com o

sistema em operao, uma nova contagem microbiana foi executada e encontrou

uma biocarga de 4,31 log10 no filtro de carvo ativado, mostrando que a limpeza com

soluo de Bissulfito de sdio 1% no eficaz limpeza deste equipamento

(Figura 19).
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 54

5,0 5,0
4,5 4,5
Log 10 UFC/100mL 4,0 4,0
3,5 3,5
3,0 3,0
2,5 2,5
2,0 2,0
1,5 1,5
1,0 1,0
0,5 0,5
0,0 0,0
I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII XIII
Set/05 - Aps Sanitizao (I ao V) Set/05 - Anterior Sanitizao (I ao V)
Ago/05

Figura 19. Contagens heterotrficas agosto e setembro de 2005 (I gua de entrada, II filtros
multimeios, III abrandadores, IV e V filtro de carvo, VI osmose reversa, VII deionizador, VIII
tanque de estocagem, IX lmpada ultravioleta, X filtros 0,05m, XI teste de vazamentos, XII
lavadora automtica, XIII pia de lavagem).

A eficincia da sanitizao completa equivalente a sanitizao parcial nas

etapas VIII, IX, X, XI, XII, e XIII, isto , ambos rendem os mesmos resultados.

Conseqentemente, toda sanitizao deve incluir as etapas de estocagem e

distribuio e seus pontos do uso, para assegurar uma reduo significativa na

populao microbiana a nveis abaixo de 10 UFC/100mL, bem como a manuteno

de tais nveis durante todo o sistema (Figura 20).


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 55

3,5 3,5

3,0 3,0
Log 10 UFC/100mL
2,5 2,5

2,0 2,0

1,5 1,5

1,0 1,0

0,5 0,5

0,0 0,0
I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII XIII

Dez/05 - Aps Sanitizao Dez/05 - Anterior Sanitizao

Figura 20. Contagens heterotrficas dezembro de 2005 (I gua de entrada, II filtros


multimeios, III abrandadores, IV e V filtro de carvo, VI osmose reversa, VII deionizador, VIII
tanque de estocagem, IX lmpada ultravioleta, X filtros 0,05m, XI teste de vazamentos, XII
lavadora automtica, XIII pia de lavagem).

Em agosto de 2006 foram substitudas as cargas do filtro de carvo ativado e

dos filtros multimeios, seguido de nova sanitizao do sistema de purificao de

gua. Os filtros do multimeios foram restitudos com cinco camadas de areia de

diferentes granulometrias (Figura 21), em ordem decrescente a partir do fundo at o

topo do cilindro.

Figura 21. Carga dos filtros de areia (1 - cascalho de 4,0 a 6,0 mm; 2 - areia de 2,4 a 4,0 mm; 3 -
areia de 1,0 a 2,4 mm; 4 - areia de 0,30 a 1,0 mm; 5 - areia verde (Greensand) de 0,30 a 0,35 mm.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 56

O carvo ativado foi restitudo com uma carga de 34 quilogramas de carvo

granulado de 8x30 mesh (Figura 22).

Figura 22. Carvo ativado granulado

Para conseguir a troca destas cargas, foi necessrio remover os cilindros

(torpedos) de sua composio no Pr-tratamento e dren-los com ajuda de jatos de

gua, at que a antiga carga fosse completamente removida de dentro do cilindro

(Figura 23).

Figura 23. Drenagem dos cilindros (1 - Jato dgua para drenagem do carvo ativado; 2 - cilindro
parcialmente drenado; 3 - viso externa do cilindro vazio; 4 - viso interna do cilindro vazio).

O acmulo de sujidades pde ser observado, quando da abertura das

vlvulas dos cilindros, expondo seus interiores. A gua drenada juntamente com a

antiga carga dos filtros multimeios, apresentou colorao de ferrugem, devido

grande reteno de ferro feita por este processo, alm de uma infinidade de

partculas em suspenso. Este fato no foi observado no filtro de carvo ativado.

Nesta, a gua dentro do cilindro estava isenta de partculas que pudessem ser

observadas facilmente a olho nu.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 57

Os cilindros vazios foram limpos e reposicionados no sistema de purificao.

Com a ajuda de um cone, a nova carga foi introduzida nos cilindros, com o cuidado

de deixar espao suficiente na parte superior do cilindro, de modo que permitisse a

expanso dos meios no momento das contralavagens realizadas periodicamente. As

vlvulas dos cilindros dos filtros multimeios foram fechadas e deixou-se correr fluxo

de gua atravs dos cilindros. Esta lavagem inicial foi necessria para remover

partculas indesejveis misturadas ao meio, bem como a lavagem da areia verde

que desprende uma quantidade grande de p que origina-se pelo atrito entre seus

grnulos.

Quando o fluxo de gua mostra-se lmpido, indica que todas as partculas

indesejveis foram removidas e o sistema pode ser colocado em operao. Este

mesmo processo foi realizado no filtro de carvo ativado com a nova carga.

Todas as conexes do Pr-tratamento foram restabelecidas e ento, o

processo da limpeza deste estgio foi iniciada, bem como tambm os outros

estgios do sistema, com procedimento usual de sanitizao.

Aps a sanitizao, foram coletadas amostras de gua em cada um dos

pontos de coleta no sistema de purificao, para a avaliao microbiolgica.

Partindo da gua de entrada, com uma carga microbiana de 2,93 log10, foram

observados 1,88 log10 aps os filtros multimeios, 1,90 log10 aps os abrandadores, o

filtro de carvo ativado apresentou 2,41 log10 e 2,28 log10 nos pontos IV e V

respectivamente e, nos pontos subseqentes s membranas de osmose reversa

foram encontrados valores no superiores a 0,30 log10 (Figura 24).


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 58

4,5 4,5
4,0 4,0
3,5 3,5

Log10 UFC/100mL
3,0 3,0
2,5 2,5
2,0 2,0
1,5 1,5
1,0 1,0
0,5 0,5
0,0 0,0
I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII XIII

Ago/06 - Aps Sanitizao Ago/06 - Anterior Sanitizao Jul/06

Figura 24. Contagens heterotrficas julho e agosto de 2006 (I gua de entrada, II filtros
multimeios, III abrandadores, IV e V filtro de carvo, VI osmose reversa, VII deionizador, VIII
tanque de estocagem, IX lmpada ultravioleta, X filtros 0,05m, XI teste de vazamentos, XII
lavadora automtica, XIII pia de lavagem).

Os programas de sanitizao foram importantes para garantir a manuteno

da capacidade de purificao de gua qual o sistema proposto.

Aps a troca da carga do filtro de carvo ativado e filtros multimeios, o

sistema mostrou reduo da populao microbiana presente nestas etapas e

demonstrou regularidade de reteno microbiana pela osmose reversa, entre os

intervalos de sanitizao de julho e dezembro de 2006, assegurando nveis

microbianos inferiores a 10 UFC/mL nos pontos de consumo de gua purificada,

neste perodo (Figura 25).


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 59

4,0 4,0
3,5 3,5

Log10 UFC/100mL
3,0 3,0
2,5 2,5
2,0 2,0
1,5 1,5
1,0 1,0
0,5 0,5
0,0 0,0
I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII XIII

Dez/06 - Aps a Sanitizao Nov/06


Dez/06 - Anterior Sanitizao Dez/06 - 27 dias aps a Sanitizao

Figura 25. Contagens heterotrficas novembro e dezembro de 2006 (I gua de entrada, II


filtros multimeios, III abrandadores, IV e V filtro de carvo, VI osmose reversa, VII
deionizador, VIII tanque de estocagem, IX lmpada ultravioleta, X filtros 0,05m, XI teste de
vazamentos, XII lavadora automtica, XIII pia de lavagem).

A manuteno de baixos nveis de biocarga da gua no estgio de Pr-

tratamento importante para no sobrecarregar a capacidade de reteno

microbiana das membranas de osmose reversa. Como observado entre janeiro e

julho de 2006, entre 2 programas de sanitizao, a biocarga da gua de entrada era

acrescida de 2,0 log10 e atingia nveis de 4,0 log10, saturando a capacidade das

membranas reterem at 3,0 log10 da biocarga proveniente do filtro de carvo ativado.

A troca das cargas dos filtros multimeios e carvo ativado reduziu em 2,0 log10

a populao microbiana proveniente da gua de entrada do sistema nas etapas II e

III e manteve a biocarga inferior a 3log10 nas etapas IV e V. Esta biocarga foi

totalmente removida da gua na passagem pela osmose reversa e mantida at os

pontos de consumo, caracterizando a estabilidade operacional do sistema de

purificao (Figura 26).


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 60

4,5
4,0
3,5

Log10 UFC/100mL 3,0


2,5
2,0
1,5
1,0
0,5
0,0

o
06

o
6

06
06

06
6
o

o
6

l/0

/0
/0
/0

t /0
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a
n/

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Sa

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Sa

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io
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p
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-A
-A

nt
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-A
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6
06

/0
6
o/
06

ez
/0
IV V I
Ag
o/

D
ez
Ag

D
Figura 26. Contagens heterotrficas janeiro dezembro de 2006 (I gua de entrada, IV e V
filtro de carvo ativado).

6.2. Identificao de microrganismos

Os fatores que favorecem o crescimento bacteriano no sistema de purificao

de gua so pontos mortos, espaos com baixa circulao de gua e o filtro de

carvo ativado, que contribuem formao de biofilmes extremamente difceis de

serem erradicados qumica ou fisicamente.

As bactrias Gram-negativas so os contaminantes mais frequentemente

citados, seguidas de algumas bactrias Gram-positivas, encontrados na gua de

hemodilise. Pseudomonas spp so geralmente as bactrias mais encontradas.

Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas maltophilia e Pseudomonas vesicularis

foram encontrados em culturas de sangue de pacientes com reaes pirognicas e

estes microrganismos tambm foram isolados da gua da torneira e de dialisadores.

Arvanitidou (1998), em um estudo da qualidade microbiolgica da gua e de

dialisatos em centros de hemodilise na Grcia, isolou coliformes totais, coliformes


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 61

fecais, Pseudomonas spp., Streptococcus e afirmou que estes microrganismos no

deveriam ser encontrados normalmente na gua tratada ou dialisatos, porque

representam um fator de risco adicional para os pacientes submetidos dilise.

Vorbeck-Meister (1999) analisou a gua e as amostras da fileira aps cada

etapa do sistema de tratamento de gua para dilise e no observou nenhuma

bactria de origem fecal. Encontrou P. aeruginosa na entrada de uma mquina de

dilise e P. aeroginosa e Enterococcus na sada das mquinas de dilise.

Os microrganismos isolados (Figura 27), das amostras de gua para a

avaliao heterotrfica do sistema de purificao de gua deste estudo, foram

identificados atravs do kit BBLTM CrystalTM (Tabelas 3 e 4).

Uma maior quantidade de microrganismos foi identificada no estgio de pr-

tratamento, aps a gua de entrada do sistema. Estes filtros realizam a filtrao

primria d gua e retm uma diversidade de microrganismos. A espcie

Flavimonas oryzihabitans (Pseudomonas oryzihabitans) foi identificada em todos os

estgios do sistema, mesmo aps procedimentos de sanitizao, indicando a

possvel formao de biofilme, causado por este agente.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 62

I Bergeyella Flavimonas
Leifsonia aquaticum
gua potvel zoohelcum oryzihabitans
II Flavimonas Chryseobacterium
Micrococcus luteus Acinetobacter lwoffii Pediococcus species
Filtros multimeios oryzihabitans indologenes
III Flavimonas Chryseobacterium
Gardnerella vaginalis Acinetobacter lwoffii Pediococcus species
Abrandadores oryzihabitans indologenes
IV e V Flavimonas Chryseobacterium
Pseudomonas putida Acinetobacter lwoffii Pediococcus species
Filtro de carvo oryzihabitans indologenes
VI
Myroides odoratus
Osmose reversa
VII Corynebacterium Flavimonas
Deionizadores renale group oryzihabitans
VIII
Myroides odoratus
Estocagem/Distribuio
IX Lactococcus
Micrococcus luteus
Lmpada UV raffinolactis
X
Filtros 0,05
XI
Consumo
XII
Consumo
XIII Flavimonas
Consumo oryzihabitans

Figura 27. Microrganismos isolados no sistema de purificao de gua.


Tabela 3. Reaes bioqumicas dos microrganismos Gram-negativos isolados do sistema de purificao de gua.

Flavimonas Chryseobacterium Acinetobacter Pseudomonas Myroides Bergeyella


Ingredientes ativos Cdigo
oryzihabitans indologens lwoffii putida odoratus zoohelcum
Arabinose ARA - - - - - -
Manose MNS - - - + - -
Sacarose SUC - - - - - -
Melibiose MEL - - - - - -
Ramnose RHA - - - - - -
Sorbitol SOR - - - - - -
Manitol MNT - - - - - -
Adonitol ADO - - - - - -
Galactose GAL - - - + - -
Inositol INO - - - - - -
p-n-p-fosfato PHO - + - + + +
p-n-p --Glucosdeo BGL - + - - - -
p-n-p--Galactosdeo NPG - - - - - -
Prolina nitroanilida PRO + - - + + -
p-n-p bis-fosfato BPH - - - + + -
p-n-p-xilosdeo BXY - - - - - -
p-n-p--arabinosdeo AAR - - - - - -
p-n-p-fosforilcolina PHC - - - - + -
p-n-p--glucurondeo GLR - - - - - +
p-n-p-N-acetil glucosamidina NAG - + - - - -
-L-glutamil p-nitroanilida GGL + - - + + -
Esculina ESC - - - - - -
p-nitro-DL-fenilamina PHE - - - - - -
Uria URE + + + + + +
Glicina GLY + + + + + +
Citrato CIT - - - + + -
cido malnico MLO - - - + + -
cloridrato de trifenil tetrazlio TTC - - - + + -
Arginina ARG + + - + - -
Lisina LYS + + - - - -
Oxidase - + - - + +
Resultados de testes adicionais
Indol + + - - - -
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 64
Tabela 4. Reaes bioqumicas dos microrganismos Gram-positivos isolados do sistema de purificao de gua.

Lactococcus Coryneobacterium Coryneobacterium Garnerella Leifsonia Pediococcus Micrococcus


Ingredientes ativos Cdigo
raffinolactis renale group bovis vaginalis aquaticum species luteus
Controle negativo fluorescente FCT Not applied Not applied Not applied Not applied Not applied Not applied Not applied
L-fenilamina-AMC FPH + - + + + + +
L-triptofano FTR + - + + + + +
4MU-fosfato FHO - - - - + - -
Trehalose TRE + - - - - - -
Sacarose SUC + - - - - - -
Arabinose ARA + - - - - - -
p-nitrofenil--D-glucosdeo BGL + - - - + - -
p-nitrofenil-fosfato PHO - - - + + + +
Uria URE - - - - - + +
4MU--D-glucosdeo FGC + - - - + - -
4MU--D-glucosdeo FGS + - - + + - +
L-arginina FAR + - + + + - +
4MU--D-glucurondeo FGN - - - - - - -
Lactose LAC - - - - - - -
Manitol MNT + - - - - - -
Glicerol GLR - - - - - - -
p-nitrofenil--D-celobiosideo PCE + - - - - - -
p-nitrofenil--D-maltosdeo PAM + - - + + - -
Esculina ESC + - - - - - -
L-valina FVA + - - - + + +
L-cido piroglutmico-AMC FPY - - - - - - -
4MU-N-acetil--D-glucosamindeo FGA + - - - - - -
L-isoleucina FIS + - - - + + -
Metil- & -glucosdeo MAB - - - - - - -
Maltotriose MTT + - - - - - -
Frutose FRU + - - - - - -
Prolina & Leucina-p-nitroalinida PLN + - + + + + +
o-nitrofenil--D-galactosdeo (ONPG)
PGO + - - - - - -
& p-nitrofenil--D-galactosdeo
Arginina ARG - - - + + + +
+Bacilo x x x x
Teste de Gram
+Coco x x x
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 65

6.2.1. Gram-negativos

Pseudomonas oryzihabitans foram reclassificadas como Flavimonas

oryzihabitans. So relacionadas a muitas infeces como a bacteremia, infeco do

trato urinrio, infeco de ferida, abscessos, conjuntivites, endocardites, desordem

em dilise peritonial ambulatorial contnua, meningites e infeces associadas a

dispositivos invasivos em pacientes debilitados. Pseudomonas so encontradas em

abundncia como formas livres no solo, na gua doce e em ambientes marinhos.

Estas bactrias so clinicamente importantes porque so resistentes maioria dos

antibiticos e so capazes de sobreviver em circunstncias que outros poucos

organismos podem tolerar. Produzem tambm uma camada de limo resistente aos

agentes desinfetantes (BENDIG, et al., 1989).

Classificado previamente como Flavobacterium spp, a espcie

Chryseobacterium pode ser multi-resistente e associada bacteremia, meningites,

spsis abdominal e a infeco de feridas (HSUEH, et al., 1997).

A espcie Acinetobacter associada com a infeco em pacientes

debilitados. Podem ser multiresistentes e causam septicemia, infeco do trato

urinrio, abscessos, infeces de feridas, endocardites, meningites e osteomielites

(BERGOGNE-BRZINE e JOLY-GUILLOU, 1991).

Myroides odoratus, classificado previamente como o Flavobacterium spp,

associado a infeces no trato urinrio e a infeces de feridas (VANCANNEYT et

al., 1996).

A Bergeyella zoohelcum, classificada previamente como Weeksella

zoohelcum, tem sido relacionada mordidas de ces e gatos. As infeces relatadas

so infeces de feridas, septicemias e meningites (REINA e BORRELL, 1992).


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 66

6.2.2. Gram-positivos
Lactococcus geralmente so isolados de seres humanos e so associados

bacteremia, endocardites e infeces do trato urinrio (ELLIOTT et al., 1991).

Corynebacterium foi isolado do material clnico e associado com as infeces

tais como a septicemia, peritonites, infeco do olho, infeco de ferida,

endocardites, osteomielites, meningites e abscessos. A Leifsonia aquaticum

chamada tambm de Corynebacterium aquaticum (FUNKE et al., 1997).

A espcie do gnero Gardnerella associada a infeces a espcie G.

vaginalis, comumente associada com vaginoses bacterianas, spsis intrauterina e

neonatal (HILLIER, 1993).

Pediococcus so associados bacteremias, abscessos e infeco pulmonar

em pacientes debilitados (SARMA e MOHANTY, 1998).

Micrococcus uma espcie comum na flora da pele. associada

bacteremia, endocardites e artrites spticas (PECES et al., 1997).

6.3. Endotoxinas

Embora a Farmacopia Americana (USP30, 2007) no estabelea limite para

concentrao de endotoxinas na gua purificada, foi adotado para o sistema de

purificao de gua estudo, o limite mximo de 1 UE/mL.

O limite de 0,25 UE/mL foi estabelecido, para a concentrao de endotoxinas

na gua usada para dilise, pela Farmacopia Americana (USP30, 2007).

Usando o mtodo cromognico de deteco de endotoxinas, Vorbeck-Meister

(1999) mostrou que amostras da gua de entrada apresentaram altos nveis de

endotoxinas (0,56 9,10 UE/mL) e os nveis de endotoxinas eram frequentemente

elevados aps a passagem por leito de troca inica (0,13 - >9,49 UE/mL) e o
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 67

tratamento com osmose reversa conduziu a uma diminuio satisfatria dos nveis

de endotoxinas em todas as amostras (<0,03 UE/mL).

No obstante, aps a gua passar atravs do sistema de tubulao das

mquinas de dilise, um aumento na concentrao de endotoxinas foi observado,

assim como tambm os resultados das contagens de colnias.

No sistema de purificao de gua, objeto deste estudo, os testes de

endotoxinas pelo mtodo do gel-clot (sensibilidade do reagente LAL 0,125 UE/mL)

foram realizados em amostras de gua nos pontos de consumo no interior da sala

limpa (XI a XIII).

Nestes pontos os testes so realizados trs vezes por semana os valores

encontrados foram de <0,125 a 0,75 UE/mL.

Na gua de entrada no so realizados testes de endotoxinas rotineiramente,

mas no estgio de Pr-tratamento, foram encontrados valores de at 2 UE/mL aps

o filtro de carvo ativado.

De acordo com Hoenich (2006), o programa de controle de qualidade usado

nos centros de dilises controlados pelo Instituto de Pesquisa Renal (Renal

Research Institute, New York, N.Y., USA) descreveu que se o teste de LAL

sensibilidade 0,06 UE/mL fosse positivo, mas negativo para sensibilidade 0,25

UE/mL, uma sanitizao completa do sistema deve ser programada para breve.

Entretanto, se o teste de LAL 0,25 UE/mL for positivo, a sanitizao executada

imediatamente.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 68

6.4. pH, condutividade e substncias oxidveis

As leituras de pH e condutividade foram realizadas nos pontos de consumo

de gua purificada (XI, XII e XIII) e os resultados destas medies durante todo o

perodo de janeiro de 2003 a dezembro de 2006, apresentaram mdias semestrais

de condutividade que variaram entre 0,8 e 1,3 S/cm2, valores mdios semestrais de

pH entre 5,6 e 6,1 e resultados aprovados nos ensaios de verificao da presena

de substncias oxidveis.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 69

7. DISCUSSO

A sanitizao (desinfeco) consiste em remover contaminantes e materiais

incrustados no interior dos equipamentos de purificao de gua e deve ser

conduzido com uma freqncia regular. Estes procedimentos devem ser seguidos,

principalmente em estabelecimentos de sade e indstrias de dispositivos mdicos,

para impedir ocorrncias como a morte de 68 pacientes submetidos hemodilise,

em abril 1996, no Instituto de Doenas Renais (Caruaru, PE, Brasil), devido

presena de toxinas de cianobactrias presentes na gua usada para hemodilise,

que resultou em danos renais fatais para aqueles pacientes (COELHO, 2006).

A presena destas toxinas foi confirmada no filtro de carvo ativado usado no

sistema de purificao de gua daquele hospital, sugerindo que ateno especial

deve ser dada a tal equipamento, incluindo freqente sanitizao ou substituio do

carvo ativado por processos qumicos para retirada do cloro.

Hoenich (2006) afirma que biofilmes bacterianos liberam endotoxinas na gua

e que estas potencialmente podem atravessar as membranas de dilise devido a

seus baixos pesos moleculares (0,5 a 200 kDa). As endotoxinas transferidas aos

pacientes, podem desencadear efeitos imediatos de reaes pirognicas.

Embora o sistema de purificao de gua, objeto deste estudo, tenha

capacidade de produo mxima de 10.000 L/dia, a demanda de gua utilizada para

lavagem dos componentes termoplsticos dos oxigenadores de sangue de cerca

de 3.000 L/dia. Para assegurar a pureza e qualidade da gua purificada, os sistemas

de purificao devem incluir a integrao operacional dos equipamentos, devem ser

constantemente sanitizados e sua eficincia deve ser regularmente avaliada.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 70

A eficincia dos sistemas de purificao de gua depende da correta e

freqente manuteno e reposio dos elementos filtrantes e da sanitizao com

produtos qumicos especficos.

Este estudo avaliou a qualidade microbiolgica da gua atravs da contagem

heterotrfica (log10UFC/100mL, incubao a 32,52,5C) das amostras coletadas em

todos os estgios do processo do sistema de purificao de gua.

Foram encontrados nveis mximos de 3,48 log10 na gua de entrada (I), 3,57

log10 nos filtros multimeios (II), 3,75 log10 nos abrandadores (III), 4,97 log10 aps o

filtro de carvo ativado (VI e V), 2,53 log10 aps a osmose reversa (VI), 2,70 log10 no

tanque de estocagem e distribuio (VIII), 2,56 log10 aps a lmpada ultravioleta

(IX), 2,53 log10 aps os filtros 0,05m (X) e 1,98 log10 nos pontos de consumo (XI,

XII e XIII).

Considerando o limite mximo de 4,00 log10/100mL (100 UFC/mL) para a

gua purificada, todos os pontos desde a gua de entrada apresentaram valores

abaixo deste limite, exceto no leito de carvo ativado que remove o cloro da gua de

entrada, promovendo um ambiente propcio ao aumento da carga microbiana na

gua.

O uso dos filtros de carvo ativado justificado pela preservao das

membranas de osmose reversa que so sensveis aos compostos clorados. Prez-

Garcia e Rodrguez-Bentez (2000) explicam que o leito de carvo ativado que

elimina o cloro, realmente promove a proliferao bacteriana e explica ainda que o

tipo de meio de cultura utilizado para contagem heterotrfica e a condio de

incubao tm considervel influncia nos resultados.

Um estudo similar foi conduzido por Vorbeck-Meister (1999), que pesquisou a

qualidade da gua usada em sete enfermarias de dilise, onde observou valores


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 71

excedendo 100 UFC/mL (incubados a 22C) em 20,0% das amostras da gua de

entrada, em 66,7% aps a troca de inica, em 33,3% aps a osmose reversa, em

12,5% e 50,0% na gua examinada na entrada e sada das mquinas de dilise,

respectivamente. Usando uma temperatura de incubao de 37C, obteve valores

que excedem 100 UFC/mL somente em 10,0% das amostras de gua da entrada e

em 66,7% na sada das mquinas.

Comparando o desenvolvimento de biofilmes entre dois sistemas de

tratamento de gua (SMEETS et al., 2003), um apenas com osmose reversa (centro

A) e outro com osmose reversa e deionizao eltrica, desinfetado continuamente

por luz ultravioleta e tratado com oznio uma vez por semana (centro B), Smeets

obteve contagens acima de 100 UFC/mL em 16% das amostras incubadas a 22C e

37C no centro A contra 3% das amostras no centro B, somente.

Com a ltima sanitizao realizada no sistema de purificao de gua, pde

ser observada reduo considervel na carga microbiana presente no filtro de

carvo ativado, indicando mais uma vez, que este promove o crescimento

bacteriano, devendo ter sua carga substituda em intervalos menores, esterilizados a

vapor se aplicvel ao equipamento, ou substitudo por processo qumico de retirada

do cloro.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 72

8. CONCLUSO

As melhorias realizadas no sistema de purificao de gua, como a

substituio do mdulo do antigo deionizador por leitos de resina de troca aninica e

catinica, a eliminao de pontos estagnados e a implantao de equipamentos de

controle, trouxeram resultados positivos para a qualidade da gua purificada, assim

como trouxe a conscientizao e comprometimento dos envolvidos com o processo.

O filtro de carvo ativado (IV e V) promoveu as maiores contagens

microbiolgicas no sistema de purificao de gua, uma vez que remove o cloro da

gua de entrada proveniente do abastecimento pblico, favorecendo a proliferao

bacteriana.

O filtro de carvo ativado mostrou-se incapaz de regenerar-se aps repetidas

sanitizaes, alm de liberar uma grande quantidade de partculas que impregnaram

o filtro de 5m.

A monitorao microbiolgica rotineira do sistema de purificao de gua e a

identificao dos microrganismos resistentes so fatores chaves para a escolha dos

agentes sanitizantes a serem utilizados.

O uso da lmpada ultravioleta e dos filtros 0,05m, contribuiu para que a gua

chegasse aos pontos de uso com baixos nveis microbianos, cumprindo com os

limites descritos na Farmacopia Americana (USP30, 2007).

O uso industrial da gua purificada, particularmente nas indstrias mdicas e

farmacuticas, requer rigoroso controle dos sistemas de purificao, armazenagem e

distribuio, onde frequentemente desenvolvem-se biofilmes. Estes, acumulam

bactrias, conduzindo ao risco de contaminao dos processos de manufatura,

podendo consequentemente, causar injrias aos pacientes que se submetem a

procedimentos invasivos e administrao de solues parenterais.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 73

9. REFERNCIAS

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Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 77

10. ANEXOS

Anexo 1. Colorao de clulas pelo mtodo de Gram

Colocar uma pequena alada de gua destilada em uma lmina de

microscopia limpa.

Encoste a ala de inoculao (estril ou flambada pelo bico de Bunsen) em

uma colnia de bactrias, retirando-lhe uma mnima quantidade. Espalhe

uniformemente esta suspenso sobre a superfcie da lmina. Deixe secar

temperatura ambiente e fixe o esfregao na lmina, passando-a sobre a chama do

bico de Bunsen. Deixar esfriar temperatura ambiente.

Cobrir o esfregao da cultura em estudo (previamente fixado lmina de

vidro) com uma soluo de violeta de genciana. Deixar atuar durante 1 minuto.

Todas as clulas ficam coradas de violeta (corante primrio).

Escorrer o corante e lavar com gua. Secar levemente com papel filtro.

Cobrir com lugol e deixar atuar durante 1 minuto. Escorrer a soluo de lugol,

lavar com gua e secar.

Gotejar a soluo descorante de lcool-acetona sobre a lmina at que no

saia mais corante.

Neste passo ocorre a diferenciao entre bactrias Gram-negativas e Gram-

positivas. As primeiras deixam escapar a colorao violeta e as ltimas a retm. As

clulas de bactrias Gram-positivas ficam coradas de violeta-escuro e as Gram-

negativas ficam praticamente incolores.

Lavar com gua e secar com papel filtro.

Cobrir o esfregao com soluo de safranina e deixar atuar por 2 minutos. As

clulas incolores de bactrias Gram-negativas ficam coradas de cor-de-rosa.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 78

Escorrer o corante, lavar com gua e retirar o excesso de gua com papel

filtro. Deixar secar completamente temperatura ambiente.

Colocar uma gota de leo de imerso sobre o esfregao e observar ao

microscpio, com objetiva de aumento de 100x.

As clulas que apresentarem cor rsea (perderam a colorao violeta durante

a diferenciao pelo lcool e adquiriram a cor da safranina) so Gram-negativas

(Figura 28 A).

As clulas que se apresentarem coradas de violeta escuro so Gram-

positivas (Figura 28 B).

O processo de colorao baseia-se, principalmente, no diferente teor lipdico

da parede celular das clulas Gram-positivas e Gram-negativas.

Em ambos os grupos de clulas, o corante violeta reage com o iodo e cria um

complexo cristalino que fica retido no citoplasma.

As clulas Gram-negativas apresentam parede celular com alto teor lipdico,

que so dissolvidos pelo lcool, permitindo a sada do complexo violeta-iodo. Estas

clulas tomam ento, a cor do corante de contraste, a safranina.

Nas clulas Gram-positivas, a pequena quantidade de lipdios presente na

parede celular dissolvida pelo lcool, criando poros diminutos na parede celular

que so fechados pela ao desidratante do lcool. Assim, o corante fica retido no

interior das clulas.

A B
Figura 28. (A) Gram-negativo; (B) Gram-positivo
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 79

Anexo 2. Oxidase

um teste qualitativo utilizado para identificao de bactrias Gram-negativas

no fermentadoras. A prova baseia-se na produo de uma enzima chamada

indofenol oxidase. Esta enzima oxida o corante redox, presente no reativo,

resultando numa mudana de cor de amarelo para prpura escura, que percebida

visualmente aps 1 minuto adio do reagente sobre a colnia.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 80

Anexo 3. Indol

um teste qualitativo que auxilia na identificao de organismos aerbicos,

anaerbicos ou facultativos.

Este teste determina a habilidade da bactria produzir Indol atravs da

desaminao do aminocido Triptofano na presena de enzimas triptofanase.

Bactrias que possuem a enzima triptofanase so capazes de degradar o triptofano

com produo do indol, cido pirvico e amnia (NH3).

A alterao do pH do meio contendo um indicador e a conseqente viragem

da cor indicar um teste triptofano desaminase positivo.

O Indol produzido reage com o DMACA (p-dimetilaminocinamaldedo) contido no

reagente, produzindo cor do azul ao azul esverdeado.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 81

Anexo 4. Mtodo gel-clot

Transferir 100 L da amostra a ser testada para dois tubos de reao

10x75mm em estante adequada.

Adicionar 100 L de reagente LAL previamente reconstitudo, no controle

negativo, na amostra a ser testada e no controle positivo.

Vedar os tubos de reao com tampa apropriada ou filme de parafina. Agitar

levemente os tubos e incubar em banho-maria esttico a 37+/- 01C por 60+/- 02

minutos. Retirar cuidadosamente, um tubo de cada vez, do banho-maria e com um

movimento suave, invert-lo a 180 e observar.

Retirar um tubo de cada vez diretamente do banho-maria e invert-lo a

aproximadamente 180 em um movimento suave. Se houve formao de um gel

firme no fundo do tubo, o resultado dado como positivo. O teste negativo se

caracteriza pela ausncia da formao do gel ou pela formao de uma massa

viscosa que no se adere no fundo do tubo quando invertido a 180.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 82

Anexo 5. Mtodo para substncias oxidveis

Em 100 mL de gua, adiciona-se 10 mL de cido sulfrico 2 N e aquece-se

at a fervura.

Adiciona-se 0,2 mL de permanganato de potssio 0,1 M que tornar uma

soluo cor-de-rosa. Ferve-se por 5 minutos.

A colorao cor-de-rosa da soluo no deve desaparece completamente. A

perda desta colorao indica presena de substncias oxidveis na amostra.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 83

SEGUNDA PARTE

Esterilizao de artigos mdicos, dissipao residual do xido de etileno


e uso da protena verde fluorescente (GFP) como indicador
de controle do processo
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 84

1. INTRODUO

1.1. Esterilizao de artigos mdicos

Para esterilizao de artigos mdicos, os dois mtodos comumente utilizados

so os processos por irradiao gama e por xido de etileno (ETO).

O ETO largamente utilizado para esterilizao de produtos sensveis

esterilizao por calor mido ou aqueles que so deteriorados pela radiao gama

(FERRAZ et al., 2002; AFFATATO et al., 2003).

Os oxigenadores de membrana e os conjuntos de tubos de PVC so

industrialmente submetidos esterilizao por ETO.

Os oxigenadores de membrana capilar simulam a respirao pulmonar natural

atravs da troca de gases no sangue por uma membrana (fibra oca microporosa).

um dispositivo essencial usado em perfuses com circulao extracorprea

nas cirurgias cardiopulmonares, devido a sua capacidade de intercambiar os gases,

fazendo possveis a adio do oxignio e a remoo do dixido de carbono no

sangue do paciente.

O reservatrio de sangue venoso com trocador de calor, armazena, filtra,

rompe bolhas, esfria/aquece o sangue proveniente do paciente. O sangue flui do

corpo do paciente ao oxigenador e bombeado de volta ao paciente atravs de

tubos de PVC conectados, com fluxos de sangue de 0,5 a 7,0 L/min.

O ETO na temperatura e na presso ambiente um gs incolor liquefeito a

temperaturas abaixo de 10C. No processo de esterilizao, sob presena de vapor

de gua, se decompe geralmente em etilenocloridrina (EC) e em etilenoglicol (EG)

como resduos secundrios.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 85

As concentraes residuais de ETO e seus derivados podem permanecer

adsorvidos nas paredes dos dispositivos mdicos, dependendo principalmente do

tipo polimrico e do tamanho do artigo mdico (LUCAS et al., 2003; FURUHASHI e

MIYAMAE, 1982).

ETO, EC e EG so substncias potencialmente txicas, mutagnicas e

carcinognicas (LUCAS et al., 2003; FURUHASHI e MIYAMAE, 1982; ASAKAWA et

al., 1993; PAGE e CYR, 2000; FOST et al., 1991; ISO 14937; ISO 11134), que

requerem sua remoo dos dispositivos mdicos por processos de aerao, para

evitar efeitos adversos em pacientes submetidos ao uso destes dispositivos, como

por exemplo, nas cirurgias cardiopulmonares com circulao extracorprea (CEC).

Para assegurar a remoo destes resduos dos oxigenadores de membrana e

dos conjuntos de tubos de PVC e assegurar que possam ser utilizados com

segurana em pacientes, as anlises de resduos de ETO e seus derivados so

realizadas por cromatografia gasosa (Portaria 482; ISO 10993-7).

A concentrao total de ETO, EC e EG remanescente nestes dispositivos

mdicos foi avaliada atravs da extrao por uso simulado do produto, mtodo de

referncia recomendado, e foram comparados frente aos limites mximos permitidos

pelos padres nacionais e internacionais (Portaria 482; AAMI; ISO 11135).

O processo de esterilizao por ETO foi monitorado por esporos de Bacillus

atrophaeus ATCC 9372 (Bacillus subtilis variao niger) como indicadores biolgicos

(IB) (RUTALA, 1998; USP 30, 2007) e foi tambm avaliado pela protena verde

fluorescente recombinante (GFP Green Fluorescent Protein), utilizada com o

propsito de ser um potencial indicador capaz de sinalizar a distribuio da

penetrao do gs ETO na carga a ser esterilizada.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 86

A GFP uma protena globular, compacta e cida, em forma de barril,

composta de um monmero de 27 a 29 kDa, que apresenta o cromforo situado no

centro geomtrico. A protena apresenta-se estvel s temperaturas de 70 C e

resistncia desnaturao qumica.

A GFP emite mxima fluorescncia quando excitada por luz ultravioleta (360-

400 nm), apresenta pico mximo de excitao em 394 nm e pico mximo de

emisso em 509 nm. A GFP expressa no citoplasma de cepas de E. coli (DH5-),

tem sido estuda como indicador biolgico em uma variedade de aplicaes como

processos de esterilizao e desinfeco (ISHII et al., 2005).

Uma vez que a GFP exibe estabilidade s condies extremas tais como a

exposio ao calor e produtos qumicos denaturantes em um largo valor de pH (ISHII

et al., 2005; MAZZOLA et al., 2006), pode ser aplicada como um potencial marcador

em processos de esterilizao por ETO, indicando a eficincia do processo, pela

indicao da extenso da penetrao do gs e sua atividade sobre os materiais,

atravs da medida do decaimento de intensidade fluorescente remanescente aps o

processo (ISHII et al., 2004).

1.2. Histrico sobre os oxigenadores de sangue

Os oxigenadores so dispositivos mdicos utilizados em circulao

extracorprea para introduzir o oxignio no sangue e eliminar o gs carbnico,

simulando o processo de respirao natural.

O sucesso das cirurgias cardacas, onde h a necessidade desses aparelhos,

depende de um conjunto de fatores e, o avano da tecnologia na construo de

oxigenadores mais eficientes forte aliado em benefcio ao paciente.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 87

Os primeiros oxigenadores permitiam o contato direto entre o oxignio e o

sangue. Este tipo inclui os oxigenadores de pelculas (telas, cilindros e discos) e os

oxigenadores de bolhas. Durante muitos anos os oxigenadores de bolhas foram os

mais usados em circulao extracorprea. Estes aparelhos foram os responsveis

pela rpida expanso da cirurgia cardaca, devido sua relativa facilidade de

construo e uso clnico (SOUZA e ELIAS, 2006).

O gs introduzido no sangue venoso atravs de um dispersor que regula a

transferncia gasosa, pela criao de uma mistura em propores adequadas de

diversos tamanhos de bolhas. Cada uma das bolhas formadas funciona como um

alvolo independente, no qual a parede da bolha constituda por uma lmina de

sangue. A bolha contm oxignio no seu interior e est imersa em uma atmosfera de

oxignio.

Com a introduo dos oxigenadores de membrana, os oxigenadores de

bolhas foram, progressivamente, substitudos.

Durante os processos de oxigenao e remoo de dixido de carbono no

pulmo natural, no h contato direto entre o sangue dos capilares pulmonares e o

ar dos alvolos.

O sangue e o gs esto separados pela membrana alvolo-capilar, que uma

membrana semipermevel, ou seja, que permite a passagem dos gases de um lado

para o outro, mas no permite a passagem de gua ou de eletrlitos.

Ao final dos anos setenta, contudo, os progressos da tecnologia permitiram a

construo de membranas do tipo expandido ou microporosas, de diversos

materiais, principalmente o teflon e o polipropileno. A membrana microporosa tem

pequenos orifcios microscpicos na sua superfcie, os microporos, que so


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 88

atravessados pelas molculas dos gases. A difuso dos gases muito mais rpida e

eficiente.

O desenvolvimento da tecnologia de produo de membranas

semipermeveis no formato de fibras capilares ou fibras ocas permitiu a construo

de uma moderna gerao de oxigenadores.

Os oxigenadores de membranas no permitem interface direta com o

oxignio. Nestes, existe uma membrana, que separa o sangue do gs utilizado para

as trocas gasosas, no havendo contato direto entre ambos. Estes oxigenadores

so considerados mais fisiolgicos, principalmente, pela reduo da interface gs-

sangue.

A utilizao das membranas capilares permitiu a criao de vrios tipos de

oxigenadores, como os oxigenadores de membranas planas (promoviam um grande

seqestro de plaquetas e seu uso foi descontinuado), os oxigenadores de

membranas espiraladas (h um nico modelo deste oxigenador no mercado) e os

oxigenadores de membranas capilares (atualmente os mais utilizados).

Oxigenadores com membrana capilar linear, como o modelo Oxim-II-34-Ultra,

foram utilizados com sucesso por vrios anos at que foram substitudos pelo novo

conceito de membranas dispostas em forma de esteiras duplas, em ngulo cruzado

e fluxo de gases contrrio ao fluxo de sangue, que reduz a rea efetiva de

membrana e aumenta a eficincia da troca gasosa. Isto resultou em aparelhos

menores, que requerem um menor volume de priming (volume de preenchimento).

O oxigenador VitalTM possui o menor priming dentre os oxigenadores modelo

adulto disponveis no mercado atual e, com isto, permite a hemodiluio que elimina

a necessidade de transfuses de sangue ao paciente.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 89

2. OBJETIVO

Atravs de anlises de residual de ETO e de seus produtos derivados, EC e

EG, em oxigenadores de sangue e conjuntos de tubos de PVC, o objetivo deste

estudo foi determinar o intervalo de tempo em que estes artigos mdicos devem

permanecer em sala de aerao forada, necessrio para que atinjam nveis

residuais de ETO, EC e EG definidos pelas legislaes vigentes, aps serem

esterilizados.

Tendo como finalidade avaliar a distribuio e a penetrao do gs na carga a

ser esterilizada, foram utilizadas amostras liofilizadas de GFP em ciclos de

esterilizao de 2, 4 e 8 horas, como um potencial indicador alternativo, proposto ao

controle dos parmetros de processo da esterilizao, capaz de indicar a relao

entre a perda na emisso de fluorescncia da GFP pela exposio ao gs ETO.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 90

3. MATERIAIS E MTODOS

3.1. Oxigenadores de sangue e conjuntos de tubos de PVC

O oxigenador de membrana capilar Vital (Figura 1) um oxigenador de

sangue, que possui estrutura em policarbonato e agrega diversos componentes que

realizam funes vitais ao funcionamento do corpo humano, suportando a vida de

pacientes quando submetidos cirurgia de peito aberto. Possui uma rea de 2 m2 de

membrana de fibra oca que permite a troca de gases em fluxo mximo de sangue de

at 7 L/min, indicado para pacientes adultos.

Um reservatrio para sangue venoso conjugado a este dispositivo com um

trocador de calor que permite aquecer ou esfriar o sangue do paciente e possui

componentes que filtram e quebram bolhas de ar do sangue no circuito.

Os conjuntos de tubos de PVC (Figura 2) foram projetados para o transporte

do sangue venoso extrado do doente cardaco at o oxigenador de sangue,

retornando-o como sangue arterial ao corpo do paciente, durante prticas de

perfuso com circulao extracorprea (CEC) em cirurgias cardiopulmonares.

O circuito de CEC conectado por uma cnula venosa e uma cnula arterial

onde o sangue da cnula venosa drenado para o reservatrio de sangue venoso.

Um tubo ligado uma bomba peristltica leva o sangue venoso cmara de

oxigenao e o sangue oxigenado (arterial) retorna ao paciente pela cnula arterial.

Os conjuntos de tubos de PVC so compostos por filtro de gs, filtro de

sangue arterial e tubos de PVC com medidas de: (i) 0,35m x (13mm x 1,8mm); (ii)

7,05m x (8mm x 1,6mm); (iii) 17,7m x (80,8 x 10,2mm); (iv) 2,1m x (15mm x 2,4mm)

e (v) 1,04m x (13mm x 2,4mm).


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 91

O PVC o material mais utilizado na produo de cateteres, bolsas de

sangue e tubos para artigos utilizados em CEC (GRANADOS et al., 2001 ).

Os oxigenadores de sangue e os conjuntos de tubos de PVC so

manufaturados em uma Sala Limpa classe 100.000, ISO 8 (ISO 14644-1),

embalados individualmente em sacos de polietileno com janelas de Tyvek e

acondicionados em caixas de papelo e assim esterilizados por ETO.

Figura 1. Oxigenador Vital

Figura 2. Conjunto de tubos de PVC

3.2. Parmetros do ciclo de esterilizao

O processo de esterilizao por ETO, foi executado usando-se uma mistura

de gs esterilizante (10% ETO e 90 % CO2) a uma concentrao de 47030 mg/L no

interior da cmara esterilizadora, calculados pela relao de peso/volume do cilindro

com a mistura.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 92

Concentrao de ETO = (P(mg) / C(%)) / V(L)

Onde: P= peso do gs injetado (53x106 mg )

C = porcentagem de ETO na mistura (10% peso/volume)

V = volume total da cmara (11,760 L)

Os parmetros de processo foram ajustados para condicionamento em vapor

(505C) e tempos de exposio ao ETO de duas horas (ciclo curto), quatro horas

(ciclo mdio) e oito horas (ciclo longo). O tempo de exposio ao gs, para cada

produto, foi determinado a partir do valor-D, ajustado para um nvel de segurana de

esterilidade de 10-6. O ciclo de 2 horas destinado esterilizao dos oxigenadores

de sangue, enquanto o ciclo de 4 horas corresponde metade de um ciclo para

esterilizao dos conjuntos de tubos de PVC, de 8 horas de exposio ao gs ETO.

Aps a exposio ao gs, os produtos permanecem em sala de aerao

(405C) com ventilao forada (26 trocas de ar por hora e mximo de 30% de

umidade relativa) para dissipao dos resduos do gs.

O ciclo de esterilizao composto por quatro etapas:

(i) Condicionamento: O ar da cmara esterilizadora evacuado e a presso

reduzida de 92 kPa (ambiente) para 62 kPa. O vapor injetado para umidificao

da carga, que eleva a presso a 122 kPa a uma temperatura de 505C (uma hora

para carga de oxigenadores e duas horas para conjuntos de tubos de PVC).

(ii) Exposio ao ETO: O gs ETO injetado e presso eleva-se de 122 kPa para

2852 kPa a 505C. O tempo do ciclo para a exposio da carga de oxigenadores

de duas horas e de oito horas para os conjuntos de tubos de PVC.

(iii) Evacuao: Aps a exposio ao ETO, a cmara evacuada e a presso chega

a 62 kPa. Ento, ar comprimido filtrado (0,22 m) a 505C injetado dentro da


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 93

cmara e a presso eleva-se a 804 kPa. Novas evacuaes com injees de ar

comprimido filtrado so processadas por mais quatro vezes.

(iv) Aerao: A carga de oxigenadores esterilizados permanece por dois dias em

sala de aerao e os conjuntos de tubos de PVC permanecem por oito dias na sala

de aerao. Estes perodos foram estabelecidos atravs da curva da dissipao de

resduos de ETO.

3.3. Carga

Os ciclos de esterilizao foram realizados em uma indstria de produtos

cardiopulmonares (Nipro Ind. Com. Prod. Cardiopulmonares Ltda., So Paulo, SP,

BR), em cmara de esterilizao (Anton Pfaf Ltda, So Paulo, SP, BR) medindo 1,4x

4,2x 2,0m e volume de 11,76 m3, com capacidade para acomodar trs pletes por

ciclo de esterilizao (Figuras 3 e 4).

Figura 3. Cmara de esterilizao


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 94

Figura 4. Plete com carga para esterilizao

3.3.1. Oxigenadores

Para os ciclos de esterilizao de oxigenadores, cada plete (1,2 x 1,2 x 1,9

m) composto por 48 caixas (medindo 33 x 56 x 28 cm), dispostas em seis camadas

com oito caixas por camada. Um ciclo de esterilizao compreende trs pletes que

totalizam 144 oxigenadores de sangue com uma densidade igual a 0,07g/cm3 para

cada oxigenador.

3.3.2. Conjuntos de tubos de PVC

Para os conjuntos de tubos de PVC, cada plete (medindo 1,2 x 1,2 x 1,7 m)

carregado com 96 caixas de papelo (medindo 35,5 x 39,0 x 13,5 cm) dispostas

em doze camadas com oito caixas por camada. Cada ciclo de esterilizao
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 95

compreende trs pletes que totalizam 288 conjuntos de tubos de PVC com uma

densidade igual a 0,16 g/cm3 para cada conjunto de tubos de PVC.

3.4. Indicadores biolgicos

3.4.1. Esporos de Bacillus atrophaeus

Para monitorar os ciclos da esterilizao, os esporos de Bacillus atrophaeus

(Bacillus subtilis variao niger) ATCC 9372 (SGM Biotech, Inc., Bozeman, MT,

USA) disponveis em tiras de papel com populao de 1,7x106 esporos foram

usados como indicadores biolgicos convencionais. As tiras foram distribudas

geometricamente atravs da cmara (dentro das caixas de papelo) cobrindo os

pontos mais frios e de maior dificuldade penetrao do gs ETO (Figura 5).

Aps cada ciclo de esterilizao, os indicadores biolgicos foram imersos em

meio de cultura Trypticase Soy Broth (TSB) e incubados a 361C durante sete dias.

O crescimento dos esporos sobreviventes notado pela alterao de cor do

meio TSB e confirmado atravs da transferncia de da alquota de 1mL para o meio

de cultura Tryptic Soy Agar (TSA) e incubao a 351C por 24 horas.

Figura 5. Distribuio dos sensores de temperatura e umidade e indicadores biolgicos na carga.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 96

3.4.2. Protena verde fluorescente (GFP)

Alquotas de 1,0 mL de GFP purificada (PENNA et al., 2004), na concentrao

de 5,44g. mL-1, solubilizada em meio tamponado com pH 8,0 foi liofilizada em

vials de vidro com tampa de rosca e septo em papel grau cirrgico, que permite a

penetrao do gs e seu contato com a protena. Os vials com GFP liofilizada

foram embalados em embalagens Tyvek e dispostos nos pletes com: (i) Conjuntos

de tubos de PVC, em ciclos longos e ciclos mdios; e (ii) Oxigenadores de sangue,

em ciclos curtos. Os vials foram distribudos nos mesmos pontos da cmara em

que os indicadores biolgicos Bacillus atrophaeus e os sensores de temperatura e

umidade foram dispostos.

3.5. Determinao dos resduos

As curvas de dissipao e a concentrao residual de ETO, EC e EG foram

determinadas com auxlio de cromatgrafo gasoso.

3.5.1. Cromatgrafo gasoso

A cromatografia gasosa (CG) um mtodo instrumental para a separao e

identificao de compostos de produtos qumicos, que permite identificar e medir a

quantidade de vrios componentes de uma amostra.

Um cromatgrafo gasoso modelo HP 6890 (Hewlett-Packard Company,

Wilmington, DE, USA) equipado com uma coluna capilar de polietileno glicol
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 97

(HP19091N-133) medindo 30m (250m x 0,25 m) foi usado para a anlise dos

resduos de ETO, EC e EG.

O gs de arraste utilizado o nitrognio com taxa de fluxo constante de 1,8

mL/min. A temperatura mxima do injetor automtico (1,0 L), de 260C e presso

de 18 psi. O detector de ionizao de chama (FID - Flame Ionization Detector) opera

a 250C e com fluxo de gs hidrognio de 35,0 mL/min, controlados pelo software

ChemStation HP6890.

Os compostos so retidos na fase estacionria, e alcanam o detector de

chama em tempos diferentes produzindo um sinal caracterstico a cada composto. O

princpio de funcionamento do detector baseia-se na gerao de um sinal eltrico a

partir da combusto da amostra na chama.

Um conjunto de picos (sinais) produzido emitido pelo software ChemStation

em forma grfica em funo do tempo de reteno de cada composto. A rea de

cada pico relacionada quantidade de cada componente na amostra.

3.5.2. Extrao dos resduos

Um oxigenador de cada ciclo de esterilizao foi retirado imediatamente aps

a esterilizao. Os pletes com os demais oxigenadores ficaram expostos em sala

de aerao, sendo retirado um oxigenador nos intervalos de tempo descritos na

Tabela 2.

Para os conjuntos de tubos de PVC, a cada ciclo de esterilizao, um

conjunto de tubos foi retirado aps 72 horas de aerao e uma unidade retirada nos

intervalos de tempo descritos na Tabela 3.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 98

Os produtos foram retirados de posies crticas para circulao e penetrao

do gs no plete (ponto 4 no plete 1, ponto 9 no plete 2 e ponto 15 no plete 3) e

substitudos com um produto similar para manter a configurao do plete no intuito

de evitar a criao de um fluxo de ar preferencial devido ausncia do produto

retirado.

A extrao por uso simulado foi realizada sobre condies que representam o

maior desafio (pior caso) para a utilizao do produto, conforme descrito na ISO

10993-7.

O uso simulado para oxigenadores e tubos de PVC consiste no preparo de

um circuito, simulando uma cirurgia cardaca com CEC, onde a gua purificada

cobre desde a entrada do sangue venoso at a sada do sangue arterial do produto.

Cada produto analisado foi manuseado com equipamento de proteo individual

(EPI) adequado.

Os conjuntos de tubos de PVC so conectados e formam um nico circuito,

enquanto os oxigenadores necessitam ser conectados por tubos que no tenham

sido expostos ao ETO, para simular a passagem do sangue venoso do reservatrio

para a cmara de oxigenao e retorno ao paciente (Figura 6). O circuito

conectado a uma bomba peristltica que promove uma circulao contnua de gua

purificada (<10 UFC/mL e condutividade < 1,3 S/cm)(USP 30, 2007) por todo o

circuito.

Aps a extrao, esta gua foi analisada quanto presena de resduos de

ETO, de EC e de EG.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 99

Figura 6. Extrao dos resduos de ETO, EC e EG

O volume de gua purificada utilizada na extrao foi de 4,0 litros para os

oxigenadores e de 2,0 litros para os conjuntos de tubos de PVC, sendo o suficiente

para que o circuito fosse totalmente preenchido. A circulao de gua foi mantida a

temperatura de 37C (temperatura corprea) atravs de um trocador de calor. A

gua permaneceu em um fluxo constante de 6 L/min, bombeado por uma mquina

de CEC.

Aps um perodo de seis horas de recirculao da gua em um circuito

fechado, esta gua (extrato) foi retirada dos produtos e analisada quanto aos

resduos de ETO, EC e EG por cromatografia gasosa.

3.5.3. Curvas padres

Para determinar a curva de calibrao do cromatgrafo foram utilizados os

padres de ETO (Solutech, So Paulo, SP, Brazil), EC (Sigma, Saint Louis, MO,

USA) nas concentraes de 5,0 g/mL, 25,0 g/mL e 50,0 g/mL e padres de EG
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 100

(Sigma, Saint Louis, MO, USA) nas concentraes de 50 g/mL, 250 g/mL e 500

g/mL.

Cada um dos padres de ETO foram injetados duas vezes e o desvio padro

relativo da curva padro no excedeu 5% para ETO e EC e 10% para EG no

intervalo dos padres usados e o quadrado do coeficiente de correlao (r)

superiores a 0,99, calculados pela equao y=mx+b, onde y corresponde rea do

pico e x a concentrao dos padres que tiveram os resultados calculados pelo

software ChemStation, representadas pelas curvas de calibrao (Figura 7 - A, B e

C).

60
Concentrao (g/mL)

50

40

30

20
y = 22,472x - 18,232
10 R2 = 0,9957

0
0 1 2 3 4
Padres

Figura 7 A. Curva de calibrao padro ETO

60
Concentrao (g/mL)

50

40

30

20
y = 22,686x - 18,706
10 R2 = 0,9963

0
0 1 2 3 4
Padres

Figura 7 B. Curva de calibrao padro EC


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 101

600

Concentrao (g/mL)
500

400

300

200
y = 224,79x - 183,2
100 R2 = 0,9959

0
0 1 2 3 4

Padres

Figura 7 C. Curva de calibrao padro EG

3.5.4. Nveis de concentrao residual

Os nveis de resduos foram determinados a partir da concentrao (g/mL)

indicada pelo software Chemstation HP6890, multiplicada pelo volume do extrato

total (2000mL e 4000mL para os oxigenadores e tubos de PVC, respectivamente),

dividida por 1000g/g (para resultados em mg) ou dividida pelo peso da amostra

(para os resultados em ppm) (NOGAROTO e PENNA, 2006) como segue:

Nvel de resduo (mg) = ( Concentrao (g/mL) * Volume(mL) / 1000 (g/g) )

Nvel de resduo (ppm) = ( Concentrao (g/mL) * Volume(mL) / Peso da amostra (g) )

Onde:

Concentrao residual (g/mL) = Valor calculado pelo ChemStation HP6890

Volume (mL) = Volume total utilizado na extrao por uso simulado

Peso da amostra (g) = Peso de cada oxigenador ou conjunto de tubos


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 102

As amostras foram pesadas em balana semi-analtica modelo AS2000

(Marte, Santa Rita do Sapuca, MG, Brasil). O peso dos oxigenadores de membrana

foi de 1694,4587,10g e dos conjuntos de tubos de PVC foi de 1714,3814,96g.

3.6. Limites mximos de resduos de ETO, EC e EG

Os resultados obtidos foram comparados com os limites mximos de resduos

em oxigenadores de sangue e conjuntos de tubos de PVC estabelecidos:

Portaria Interministerial 482 (i) ETO 25 ppm, (ii) EC 25 ppm, (iii) EG 250 ppm.

ISO 10993-7 (i) ETO 60 mg, (ii) EC 12 mg, (iii) EG no aplicvel.

De acordo com a ISO 10993-7, no h necessidade de expressar resultados

de EG, pois quando os limites de ETO e EC so devidamente controlados, no h

riscos de haver resduos de EG biologicamente significantes para o paciente.

Enquanto a ISO 10993-7 estabelece limites com base na quantidade total de

resduos de ETO em cada dispositivo mdico, como a mdia de dose diria ao

paciente, independente do peso ou tamanho do dispositivo, para a legislao

brasileira, o peso do produto um fator importante, pois a concentrao (em ppm)

dos resduos de ETO pode diminuir quando o peso do dispositivo aumenta.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 103

4. RESULTADOS E DISCUSSO

Trs ciclos da esterilizao foram executados de acordo com os parmetros

de temperatura, umidade e presso pr-estabelecidas (Figuras 8, 9 e 10), com 2, 4 e

8 horas de exposio mistura gasosa esterilizante, que compreendem ciclos de

esterilizao para oxigenadores, meio ciclo (de tubos de PVC) e ciclo para tubos de

PVC.

O tempo de exposio ao gs, para cada produto, foi determinado a partir do

valor-D, ajustado para um nvel de segurana de esterilidade de 10-6.

A avaliao com a cmara cheia indicou que as reas mais frias coincidem

com o centro geomtrico dos pletes e prximos s portas da cmara esterilizadora:

(i) 44,26 (1,10) C para ciclo de 2 h, (ii) 44,64 (1,32) oC para ciclo de 4 h; (iii) 43,69

(2,19) C para ciclo de 8 h.

Aps a injeo de ETO, durante o perodo de exposio, a temperatura e

umidade relativa na cmara, sob uma presso de 285 (2) kPa, variou entre (i) 44,26

(1,10) C e 51,91 (1,41) C e umidade relativa de 58,45 (13,28) % e 91,90

(8,34)% para o ciclo de 2 h; (ii) 48,44 (1,46)C e 50,28 (0,70)C e umidade

relativa de 58,20 (13,24) % e 99,51(4,63) % para o ciclo de 4 h e 45,33 (1,78) C

e 49,07 (1,12)C com umidade relativa entre 87,36 (6,67)% e 95,51 (3,16)% para

ciclo de 8 h.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 104

Ciclo de 2 horas

Temperatura (C) e Umidade (%)


Temperatura Umidade Presso
120 350

100 300

Presso (kPa)
250
80
200
60
150
40
100

20 50

0 0
Incio do ciclo

Injeo de vapor

Exposio
Injeo de gs

Evacuaes
Condicionamento

Figura 8. Parmetros de temperatura, umidade e presso para ciclo de 2 horas.

Ciclo de 4 horas
Temperatura Umidade Presso
Temperatura (C) e Umidade (%)

120 350

100 300

Presso (kPa)
250
80
200
60
150
40
100

20 50

0 0
Incio do ciclo

Injeo de vapor

Exposio
Injeo de gs

Evacuaes
Condicionamento

Figura 9. Parmetros de temperatura, umidade e presso para ciclo de 4 horas

Ciclo de 8 horas
Temperatura Umidade Presso
Temperatura (C) e Umidade (%)

120 350

100 300
Presso (kPa)

250
80
200
60
150
40
100

20 50

0 0
Incio do ciclo

Injeo de vapor

Exposio
Injeo de gs

Evacuaes
Condicionamento

Figura 10. Parmetros de temperatura, umidade e presso para ciclo de 8 horas


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 105

4.1. Concentrao de GFP

A concentrao inicial de GFP era de 5,44g/mL em cada vial. Aps o

processo de esterilizao, a protena liofilizada foi re-hidratada em gua estril e a

concentrao remanescente foi quantificada por espectrofluormetro (Shimadzu

Corporation, Kyoto, Japan) e comparadas com a concentrao inicial no exposta ao

ETO. As concentraes de GFP remanescentes aps 2, 4 e 8 horas de exposio

mistura esterilizante so apresentadas na Tabela 1 e Figura 11.

Duas horas de exposio da GFP ao gs ETO, mostrou decaimento da

concentrao de GFP que variou de 0,17% no ponto 17 a 10,19% no ponto 10.

Nesta configurao, o processo no resultou na deteriorao da concentrao de

GFP nos pontos 4, 6, 8, 14 e 16. O decaimento mdio da concentrao de GFP foi

de 2,88% e 1,73% para os pletes 1 e 3 respectivamente, e 5,95% no plete 2.

Quatro horas de exposio mistura do gs esterilizante em meio ciclo de

esterilizao de conjuntos de tubos de PVC reduziram a concentrao inicial da GFP

em todos os pontos monitorados na cmara esterilizadora que variaram de 8,69% a

29,62%, respectivamente nos pontos 14 e 11 da cmara.

O ciclo de 8 horas de exposio permitiu o mximo decaimento (entre 22,49%

e 23,89%) na concentrao de GFP oposto ao mximo decaimento (entre 1,73% e

5,95%) encontrado no ciclo de 2 horas de exposio, indicando que a intensidade de

fluorescncia da protena estvel ao ETO.

Um perodo de 2 horas da exposio ao ETO forneceu um declnio mdio na

concentrao de GFP de 1,73%.

A exposio da GFP ao ETO por um perodo de 8 horas permitiu maior

uniformidade das condies internas da cmara, apresentando reduo da


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 106

concentrao de GFP similar nos trs pletes, sendo a reduo mdia de 23,52%,

22,49% e 23,89% para os pletes 1, 2 e 3, respectivamente.

A maior perda de concentrao da GFP foi no centro da cmara de

esterilizao, correspondente ao plete 2, nos pontos 10 e 11 (parte superior do

plete), prximo ao misturador de ar da cmara. Coincidentemente, a distribuio de

ETO de forma tal que a maior concentrao de GFP foi verificada no centro da

carga e as menores na superfcie externa da carga, indicadas pela reduo de

fluorescncia da GFP.

Os esporos de Bacillus atrophaeus (ATCC 9372), utilizados nos ciclos de

esterilizao foram incubados a 361C por 7 dias e no apresentaram crescimento.

Tabela 1. Concentrao de GFP remanescente aps o processo de esterilizao por ETO.

Concentrao inicial (5,44 g/mL)


2 horas 4 horas 8 horas
Concentrao Perda Concentrao Perda Concentrao Perda
(g/mL) (%) (g/mL) (%) (g/mL) (%)
1 5,26 3,41 4,45 18,23 4,39 19,45
2 5,17 5,08 4,20 22,87 4,56 16,34
3 5,20 4,51 4,62 15,26 4,07 25,32
plete 1

4 5,48 -0,54 4,57 16,05 4,06 25,48


5 5,05 7,33 4,66 14,38 4,04 25,78
6 5,59 -2,53 4,48 17,79 3,88 28,74
Mdia 2,88 17,43 23,52
7 5,22 4,19 4,57 16,09 4,24 22,12
8 5,46 -0,15 4,49 17,53 4,19 23,02
plete 2

9 5,03 7,72 4,57 16,09 4,46 18,04


10 4,89 10,19 3,90 28,34 4,23 22,29
11 5,02 7,81 3,83 29,62 3,98 26,98
Mdia 5,95 21,53 22,49
12 5,06 7,22 4,38 19,62 4,34 20,28
13 5,15 5,41 4,07 25,26 4,34 20,30
14 5,85 -7,33 4,97 8,69 4,30 21,06
Plete 3

15 5,11 6,29 4,83 11,39 3,85 29,41


16 5,52 -1,40 4,45 18,25 4,09 24,90
17 5,44 0,17 4,13 24,19 3,96 27,38
Mdia 1,73 17,90 23,89
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 107

Figura 11. Concentrao de GFP remanescente aps o processo de esterilizao por ETO.

4.2. Dissipao do gs ETO

Trs ciclos de esterilizao foram processados para cada linha de produto.

Para o oxigenador Vital, seis amostras foram analisadas totalizando 18 amostras e

para os conjuntos de tubos de PVC, nove unidades foram analisadas no primeiro e

terceiro ciclos e seis unidades no segundo ciclo, totalizando 24 amostras analisadas.

O nvel de resduo de cada amostra analisada (oxigenador e conjunto de

tubos de PVC) foi calculado em ppm e mg como descrito nas Tabelas 2 e 3, para

atender s normas nacionais e internacionais.

A partir dos resultados obtidos, as curvas lineares de dissipao foram feitas

com base nos limites estabelecidos para oxigenadores de sangue e conjuntos de

tubos de PVC, determinando o tempo de reteno necessrio em sala de aerao

forada.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 108

Tabela 2. Dissipao dos resduos em oxigenadores Vital.

Tempo de Resduo de Resduo de


Ciclo de
aerao ETO ETO
esterilizao
(h) (ppm) (mg)
0 22,99 37,48
2 16,19 26,65
1 4 12,51 20,49
10 10,63 17,33
14 11,83 19,30
16 11,72 19,25
0 23,77 38,72
2 18,78 35,30
2 4 17,19 31,85
10 13,54 23,69
14 13,69 24,68
16 10,93 19,47
0 17,89 30,16
2 15,79 25,68
3 4 14,61 23,82
10 13,47 23,77
14 10,67 17,10
16 8,66 14,52
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 109

Tabela 3. Dissipao dos resduos em conjuntos de tubos de PVC

Tempo de Resduo de Resduo de


Ciclo de
aerao ETO ETO
esterilizao
(h) (ppm) (mg)
72 221,47 374,38
96 129,99 223,87
120 65,37 111,91
168 21,71 37,00
1 192 21,62 36,99
216 20,82 35,49
240 9,79 16,72
264 19,00 32,46
288 7,79 13,28
72 125,46 215,87
122 54,44 93,53
2 194 13,86 23,91
240 5,42 9,35
264 6,08 10,46
286 2,69 4,64
72 151,48 259,19
100 138,85 234,54
120 83,00 142,06
143 57,24 97,78
3 168 20,97 36,97
192 20,22 34,61
216 3,07 5,22
240 6,35 10,97
264 6,43 11,08

A quantidade mxima residual de ETO nos oxigenadores de sangue logo

aps o processo de esterilizao foi de 24,12 ppm e 38,42 mg, isto , inferiores aos

limites estabelecidos pela legislao vigente.

De acordo com as curvas da dissipao de ETO, os oxigenadores Vital no

necessitam de aerao forada aps a esterilizao (Figura 12). Os nveis residuais

de EC e EG no excederam os limites mximos estabelecidos desde a primeira

amostra analisada, de forma que no foi necessrio fazer a regresso linear da

dissipao destes resduos.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 110

70
Concentrao (mg e ppm)

60

50

40

30

20

10

0
0 2 4 6 8 10 12 14 16
Tempo de aerao

ppm Limite (ppm) mg Limite (mg) Linear (mg) Linear (ppm)

Figura 12. Dissipao de resduos de ETO em oxigenadores Vital

Entretanto, observa-se que aps 16 horas de permanncia na sala de

aerao, a concentrao mxima de ETO foi de 11,72 ppm e 19,47 mg (Tabela 2).

Enquanto aguardam o resultado dos indicadores biolgicos B. atrophaeus, a

carga de oxigenadores permanece por dois dias em sala de aerao e so ento

liberados com nveis ainda mais baixos de ETO.

Nos conjuntos de tubos de PVC, de acordo com a Tabela 3, as primeiras

amostras de cada ciclo de esterilizao foram analisadas aps 72 horas de aerao,

tendo sido encontrados valores mximos de residual de ETO de 222 ppm e 488 mg.

Para alcanar os limites de residual estabelecidos pelas normas vigentes, a

regresso linear expressa pelo grfico (Figura 13) mostra que so necessrias 216

horas de permanncia na sala de aerao. Aps este perodo, 21 ppm e 46,2 mg de

residual de ETO foram alcanados, sendo valores abaixo do recomendado.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 111

400

350
Concentrao (mg e ppm)

300

250
- - - - 204 horas (mg)
200

150 _____ 216 horas (ppm)

100

50

0
70 90 110 130 150 170 190 210 230 250 270 290

Tempo de aerao

ppm Limite (ppm) mg Limite (mg) Linear (mg) Linear (ppm)

Figura 13. Dissipao de resduos de ETO em Conjuntos de tubos de PVC

Os produtos esterilizados por ETO geralmente requerem aerao por 15 dias

ou mais, quando se trata de dispositivos mdicos, dependendo do polmero do

dispositivo (VINK e PLEIJSIER, 1986).

Estudos sobre resduos de ETO em polmeros demonstram que polmeros

com caractersticas vtreas (como o policarbonato) retm menores quantidades e

que materiais porosos (como o PVC) tendem a reter maiores quantidades de ETO

devido a baixos coeficientes de difuso (LUCAS et al., 2003).

O ETO prontamente adsorvido por muitos polmeros, mas no se dissipa

facilmente, mesmo em aerao forada (GRANADOS et al., 2001). Entretanto, com

a melhoria e o controle dos processos de esterilizao por ETO e o uso da aerao

forada com ventilao e temperatura adequada, os nveis aceitveis de residual de

ETO e seus derivados so alcanados mais rapidamente.

A permanncia dos produtos esterilizados em aerao por longos perodos,

faz com que os fabricantes acumulem grandes estoques para suprir o mercado,

acarretando custos.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 112

A otimizao do processo de aerao permite que o produto seja liberado

para venda mais rapidamente, diminuindo o armazenamento de estoques, o que

gera economia e preos mais competitivos ao produto.

Enquanto o oxigenador Vital alcana os limites mximos de residual de

ETO permitidos assim que o ciclo de esterilizao termina, seu modelo predecessor

no mais fabricado, o oxigenador Oxim-II-34 Ultra, exigia 29 horas de aerao para

alcanar tais limites (Figura 14).

Isto pode ser explicado pelo desenho diferenciado e material de construo

de cada oxigenador, conforme comparado na Quadro 1.

60

50
Concentrao (mg e ppm)

40 -- -- -- 29 horas (ppm)

30

20

10

0
5 10 15 20 25 30 35 40 45 50

Tempo de aerao

ppm Limit (ppm) Linear (ppm)

Figura 14. Dissipao de resduos de ETO em oxigenadores Oxim-II-34 Ultra


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 113

Quadro 1. Especificao tcnica dos oxigenadores.

Oxigenador Vital
Corpo Policarbonato
Tipo de membrana Membrana capilar oca (esteira)
Material da membrana Polipropileno
2
rea da membrana 2m
Volume de priming inicial 180mL
Oxigenador Oxim-II-34 Ultra (modelo antecessor)
Corpo Polimetilmetacrilato (Acrlico)
Tipo de membrana Membrana capilar oca (linear)
Material da membrana Polipropileno
rea da membrana 2,1m2
Volume de priming inicial 480mL

A diferena na dissipao do resduo de ETO entre cada produto analisado

pode ser relacionada aos materiais usados em cada produto. Os tubos de PVC tm

uma rea de superfcie e capacidade maior de absoro de ETO em relao aos

oxigenadores de policarbonato e acrlico.


Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 114

5. CONCLUSO

O desempenho fsico do processo de esterilizao, associado ao

monitoramento com Bacillus atrophaeus e a protena verde fluorescente (GFP),

mostrou-se adequado para os parmetros de distribuio do calor, umidade e

concentrao do gs na carga, controlando o processo.

A GFP liofilizada mostra sua potencialidade como biossensor da penetrao

do gs e sua distribuio por entre os dispositivos mdicos em processo de

esterilizao, indicando diferenas na ao do gs dentro da cmara e sobre os

dispositivos mdicos. O decaimento de sua concentrao proporcional ao tempo

de exposio ao gs.

O uso da GFP apresenta vantagens frente ao uso de indicadores biolgicos

convencionais, pois seu tempo de resposta menor e possibilita correlacionar a

quantidade de fluorescncia remanescente com a quantidade de agente esterilizante

que foi exposta.

O oxigenador em policarbonato apresentou menor afinidade em reter resduos

de ETO do que os tubos de PVC.

O ETO adsorvido nas paredes dos artigos em PVC levam uma permanncia

maior destes produtos em sala de aerao forada, fazendo disto, um desafio para

os processos de esterilizao por xido do etileno.

O controle de processo e dos resduos aps a esterilizao dos oxigenadores

e dos conjuntos de tubos de PVC extremamente importante, devido ao seu contato

com o sangue e rgos vitais de pacientes, podendo aumentar a possibilidade de

contaminao por transferncia dos resduos aos pacientes, causando-lhes danos

irreparveis.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 115

6. REFERNCIAS

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National Formulary. Rockville, MD, USA, 2007.

VINK, P.; PLEIJSIER, K. Aeration of ethylene oxide-sterilized polymers. Biomaterials,


1986.
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 117

Anexo 01 Informao para os Membros de Bancas


Julgadoras de Mestrado/Doutorado
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 118

UNIVERSIDADE DE SO PAULO
Faculdade de Cincias Farmacuticas
Secretaria de Ps-Graduao

Informaes para os Membros de Bancas Julgadoras de


Mestrado/Doutorado

1. O candidato far uma apresentao oral do seu trabalho, com durao


mxima de trinta minutos.

2. Os membros da banca faro a argio oral. Cada examinador


dispor, no mximo, de trinta minutos para argir o candidato, exclusivamente sobre
o tema do trabalho apresentado, e o candidato dispor de trinta minutos para sua
resposta.

2.1 Com a devida anuncia das partes (examinador e candidato),


facultada a argio na forma de dilogo em at sessenta minutos por examinador.

3. A sesso de defesa ser aberta ao pblico.

4. Terminada a argio por todos os membros da banca, a mesma se


reunir reservadamente e expressar na ata (relatrio de defesa) a aprovao ou
reprovao do candidato, baseando-se no trabalho escrito e na argio.

4.1 Caso algum membro da banca reprove o candidato, a Comisso


Julgadora dever emitir um parecer a ser escrito em campo exclusivamente indicado
na ata.
4.2 Ser considerado aprovado o aluno que obtiver aprovao por
unanimidade ou pela maioria da banca.

5. Dvidas podero ser esclarecidas junto Secretaria de Ps-


Graduao: pgfarma@usp.br, (11) 3091 3621.

So Paulo, 18 de maro de 2005.

Profa. Dra. Bernadette D. G. M. Franco


Presidente da CPG/FCF/USP

Av. Prof. Lineu Prestes, 580, Bloco 13 A - Cidade Universitria - CEP 05508-900 - So Paulo - SP
Fone: (11) 3091 3621 - Fax (11) 3091 3141 e-mail: pgfarma@usp.br
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 119

Anexo 02 Declarao de Dispensa de Anlise do Comit


de tica em Pesquisa
Dissertao de Mestrado Fbio Nunes Dias 120

UNIVERSIDADE DE SO PAULO
FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS

DECLARAO DE DISPENSA DE ANLISE DO COMIT DE TICA EM


PESQUISA

So Paulo, 09 de Abril de 2007.

Eu, Fbio Nunes Dias, nmero USP 5507251, matriculado no curso de Ps-
Graduao da Faculdade de Cincias Farmacuticas, no Programa de Ps-
Graduao em Tecnologia Bioqumico-Farmacutica, juntamente com minha
orientadora, Prof Dra. Thereza Christina Vessoni Penna, declaramos para os
devidos fins, que o Projeto de Mestrado intitulado Avaliao de eficcia da
sanitizao de um sistema de purificao de gua. Esterilizao de artigos mdicos,
dissipao residual do xido de etileno e uso da protena verde fluorescente (GFP)
como indicador de controle do processo dispensou anlise do Comit de tica em
Pesquisa e/ou do Comit de tica em Experimentao Animal desta instituio, em
razo de todos os ensaios terem sido realizados por meio in vitro, no envolvendo
humanos ou animais.

Atenciosamente,

Fbio Nunes Dias


Mestrando

Prof Dra. Thereza Christina Vessoni Penna


Orientadora