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Processos Bioqumicos
Separao/ Purificao de
Produtos Biotecnolgicos
Fone: 3159-5027
Conceitos: Abordagem
Rompimento celular
Separao de protenas
Centrifugao
Processamento
downstream
A viabilidade da produo e comercializao de
biomolculas depende do custo do produto
100
80
60 95%
90%
40
85%
20 80%
0 70%
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Nmero de etapas do processo
109
I
Cromatografia por adsoro
Processos com Membranas
Teraputico
II
US$/k
Filtrao
Extrao
g
Diagnstico
III Precipitao
Membranas
Industrial
BIOMOLCULAS etanol
gua
10-3
10-9 Concentrao do Material Inicial 103
(kg/m3)
Cultura Estoque Pr-inculo
UPSTREAM Preparo Meio de Cultura Esterilizao
Cultivo em Frascos Agitados Processo fermentativo
Produto Intracelular Produto Extracelular
Fragmentos Celulares:
Filtrao
Fragmentos
Celulares
Sobrenadante
-PRODUTO-
Centrifugation Centrifugation
Centrifugation to remove
to remove cells to remove cells
medium
Culture supernatant Culture supernatant Cell pellet
Protein Cell lysis
precipitation Centrifugation
Liquid preparation Protein fraction Intracellular fraction
to animal feed Protein
1 or 2 purification
market precipitation
steps
Semi-purified Protein fraction
protein 3-4 purification
steps
Lyophilisation
Bottling Homogeneous
protein
To chemicals market
Sterile
bottling
To pharmaceuticals market
Etapas do processamento
1-Separao de clulas
Protenas Intracelulares
Protenas extracelulares
Neste caso, menor complexidade nas etapas iniciais
do processamento de Downstream.
Fermentao remoo das clulas por
centrifugao ou filtrao
Etapas do processamento
Ultrafiltrao
Ultrafiltrao
Etapas do processamento
3 - Purificao
As tcnicas de purificao so baseadas nas caractersticas
fsico-qumicas das protenas, tais como tamanho,
carga, solubilidade, hidrofobicidade.
Estagios:
Design: uma srie de etapas de purificao, onde deve-se
conhecer:
qual o maior contaminante?
informaes detalhadas da origem do produto e dos contaminantes,
caractersticas fsicas do produto.
1-Filtrao
A eficincia deste mtodo depende da natureza fsica
das partculas do produto;
Pode ser usada antes da primeira etapa de purificao,
com o objetivo de concentrar a biomassa;
1-Filtrao
Mtodos de purificao
3-Centrifugao
- Tambm depende da natureza fsica do produto
de interesse;
3-Centrifugao
Mtodos de purificao
4-Precipitao
5-Cromatografia
Cromatografia de afinidade
Mtodos de purificao
1-Cromatografia de afinidade
baseado em interaes especficas entre um
ligante imobilizado e a protena de interesse.
1. Heterogeneidade de N- e C-terminais
muito importante o uso de mtodos que gerem
protenas com um NH2-terminal como o encontrado na
protena autntica.
3. Glicosilao
Muitas protenas teraputicas produzidas pela
tcnica do DNA recombinante so
glicoproteicas.
4. Processamento proteoltico
As proteases exercem um importante papel no
processamento, maturao, modificao ou
isolamento de protenas recombinantes.
BIBLIOGRAFIA
Walsh, G. Biopharmaceuticals,
Biochemistry and Biotechnology, 2
edio, Ed. Wiley, 1998, p. 134-140
Para produtos intracelulares ou ligados membrana
CRITRIOS PARA SELEO DA TCNICA DE
ROMPIMENTO
- Tamanho da clula
- tolerncia a tenses de cisalhamento
- necessidade de controle de temperatura
- tempo de operao
- rendimento do processo
- gasto de energia
- custo e capital de investimento
Clulas envolvidas s com membranas (clulas animais e
hibridomas - so linhagens celulares desenvolvidas para produzir um anticorpo desejado em grande quantidade)
facilmente rompidas
CITOPLASMA
Leveduras lipdios
protenas parede celular
manana
75 nm
glicano
membrana citoplasmtica
CITOPLASMA
Fungos Filamentosos
glicano
glicoprotena
quitina/microfibrila
membrana citoplasmtica
CITOPLASMA
biotecnolgico
Partcula Dimetro
Glicose oxidase 70
Ovoalbumina 58
E. coli 1 a 2 m
Leveduras 2 a 15 m
Fungos filamentosos 5 a 10 m
S. cerevisiae 4 a 5 m
Cor Escurecimento
Branqueamento
Desenvolvimento de cores desejadas (p.ex., escurecimento em produtos cozidos)
Hidrlise de lipdeos cidos graxos livres reagem com Textura, sabor, valor nutricional
protena
Oxidao de lipdeos Produtos de oxidao reagem com Textura, sabor, cor, valor
diversos outros constituintes nutricional; pode ocorrer a
formao de substancias
txicas
No perecveis - tempo de
conservao indefinido
acar, farinhas, leguminosas,
cereais, alimentos que sofreram
algum processo de
conservao.
Alterao de alimentos
Queijo Camembert
Queijo Brie (Penicillium)
(Penicillium)
Alterao de alimentos
As reaes de escurecimento de alimentos esto entre
as mais importantes alteraes que sofrem os
alimentos, seja na forma in natura ou durante a cadeia
de processamento e armazenamento.
Eficientes catalisadores
Aceleram as reaes por um fator de 108 a 1010
Atuam em pequenas concentraes: 10-3 a 10-4 %
do catalisador
Enzimas
Produzem quinonas
Oxidam compostos substancias que
fenlicos do alimento possuem carbonilas
(taninos e tirosina)
Geram Polimerizadas
MELANOIDINAS =
COLORAO
ESCURA
Escurecimento Enzimtico
Temperatura
Modificao da atmosfera
Alterao desejvel:
A reao de Maillard;
O mecanismo do cido ascrbico ;
Caramelizao.
Escurecimento No Enzimtico
temperatura,
tempo,
umidade,
meio cido ou alcalino e
Componentes dos alimentos mais susceptveis a
participarem da reao.
No caso da reao de Maillard, alm da cor tem-se a
formao do aroma.
Escurecimento No Enzimtico
Escurecimento No Enzimtico
Escurecimento No Enzimtico
1- Reao de Maillard
1- Reao de Maillard
GLICOSILAMINA
Escurecimento No Enzimtico
1- Reao de Maillard
A partir dessa reao, se verifica:
polimerizao do HMF
Formao da melanoidina.
EVANGELISTA, 1992; CHEFTEL, 1992)
Escurecimento No Enzimtico
1- Reao de Maillard
Caractersticas:
2- Caramelizao:
2- Caramelizao:
Escurecimento No Enzimtico
2- Caramelizao:
FURFURAL
Escurecimento No Enzimtico
z Rano oxidativo ou autooxidao
z Perxidos
z odor desagradvel
DEFEITOS
- Alterao do pH: salmoura
- Estufamento: microrganismos
- Escurecimento: processamento
Indstria de Processamento de Alimentos