RECOMBINACIN

GENTICA
 Concepto y caractersticas de la recombinacin

Proceso por el cual elementos genticos de

dos genomas independientes se unen en un
solo genforo

eucariotas
Reproduccin sexual

Bacterias
Transferencia de material gentico

Transformacin
Conjugacin
Transduccin
Recombinacin y mutaciones:
Variabilidad gentica
 Transformacin: ADN
exgeno ingresa a la bacteria

Transfeccin (ADN viral)

Transduccin: vector es bacteria o virus

Conjugacin: transferencia de ADN entre dos bacterias

Contacto directo
Caractersticas de los procesos de transferencia
de material gentico

1. Polaridad (donador y receptor)

2. Material gentico endogenote (receptor) y exogenote (donador)

3. El material gentico transferido debe integrarse por recombinacin

(excepto plsmidos)

4. Diploidia temporal e incompleta (clula merozigoto)

5. El exogenote en la clula:

-Se integra (homologa)

-Persiste y se replica diploidia parcial (plsmidos)
-Persiste y no se replica
-Es destruido por los sistemas de restriccin
2. Tipos de Recombinacin

a) Recombinacin homloga o generalizada

b) Recombinacin especfica de sitio

c) Transposicin
a) Recombinacin homloga o generalizada

Intercambio de DNA entre dos zonas homlogas con

secuencias parecidas pero no idnticas de dos
elementos genticos distintos

Protena RecA

'RecA' es una protena multifuncional implicada en la recombinacin

homloga del 'DNA'. RecA envuelve al ADN de cadena sencilla que ha
entrado en una clula, protegindolo de la degradacin POR nucleasas
Modelo molecular de Holliday
Alineamiento
A B
ADN donador
ADN receptor
a b
Endonucleasa Polimerasas
hace muesca en el DNA Ligasas
Helicasa
ADN donador Protena recA
Protenas de unin
a cadena sencilla

SSB (single-stranded DNA

ADN donador binding proteins o Protenas
ligantes de ADN monocatenario)
ADN receptor

Invasin de Estructura de Holliday

banda

Formacin de heteroduplex
Modelo molecular de Holliday
Alineamiento
A B
ADN donador
ADN receptor A B A b
a b
Endonucleasa
hace muesca en el DNA
Helicasa
a b a B
ADN donador
Protenas de unin
a cadena sencilla

ADN donador - Nucleasas cortan

formando recombinates
ADN receptor - Ligasas unen los
fragmentos

Invasin de
banda
Estructura de Holliday

Formacin de heteroduplex
 Recombinacin generalizada

Rotacin 180
 Recombinacin generalizada

Rotacin 180
b) Recombinacin especfica de sitio

- Entre secuencias idnticas

(sitios de fijacin att)

- No interviene RecA
 sitios de fijacin att: attachment

b) Recombinacin
especfica de sitio Fago lambda

- Entre secuencias idnticas

(sitios de fijacin att)

- No interviene RecA

Escherichia coli

Integrasa
(int)
 Recombinacin especfica de sitio

ATAT
lambda
Fago A TAT
TATA
Integrasa TAT A
integrasa
(int)
ATAT A TAT
E.coli
TATA TAT A

ATAT ATAT
TATA TATA
c) Transposicin Secuencia de insercin (IS)

Un gen se mueve a otro

lugar gracias a elementos transposasa
transponibles
Transposn
-Baja frecuencia 10-5 a 10-7

Un transposn o elemento gentico transponible es una secuencia de ADN

que puede moverse de manera autosuficiente a diferentes partes del
genoma de una clula, un fenmeno conocido como transposicin

-No ocurre entre secuencias homlogas

-No usa sistema de recombinacin general
-No interviene la protena RecA
transposasa

Reconoce y corta en secuencias diana especficas

Insercin del transposn

Rellena los huecos y liga

Secuencias repetidas
 Transposicin Replicativa

Recombinacin
entre los
Plsmido que transposones.
Secuencia diana Separacin en
contiene un
transposn dos molculas
Formacin de
circulares
cointegrado

Resolucin del Transposn

cointegrado original Secuencia diana
con el transposn
inserto
Una diana (o blanco) de restriccin es la secuencia de ADN
reconocida por una enzima con actividad hidrolasa especfica
3.- Sistema de restriccin-modificacin
-Limita la transferencia de material gentico
-Barrera frente ADN extrao

Endonucleasas de restriccin, restrictasas o enzimas de restriccin

Reconocen secuencias especficas y simtricas y cortan ambas cadenas

Tipo I Tipo II
Cortan en puntos Cortan en la secuencia
prximos a la secuencia Ej: EcoRI
Ej: EcoK, EcoB
Ingeniera gentica
Enzimas de restriccin tipo II
Simetra binaria
Secuencias palindrmicas

Extremos cohesivos
Enzimas de restriccin tipo II Simetra binaria
Secuencias palindrmicas

Extremos romos

Extremos cohesivos
 Sistemas de modificacin

-Proteccin del propio ADN de la accin de endonucleasas por metilacin

(replicacin)

Metilasa

Enzima de restriccin enzima de modificacin

Ej: EcoRI EcoRI metilasa