Abstracto

Se sugiere que el aclaramiento heptico del pptido amiloide (1-40) [A (1-40)] del plasma, que
est mediado en gran medida por la protena relacionada con el receptor de lipoprotenas de
baja densidad (LRP-1), desempea un papel en la prevencin A (1-40) acumulacin en el
cerebro. Las investigaciones epidemiolgicas sugieren una alta incidencia de deposicin
cerebral A en la diabetes mellitus tipo II resistente a la insulina. El propsito de este estudio
fue aclarar el efecto de la insulina sobre la depuracin heptica de A (1-40). La expresin de
LRP-1 en la membrana plasmtica heptica aument de una manera dependiente del tiempo
mediante infusin portal de insulina y fue 2,2 veces mayor que en controles no tratados
despus de una infusin de 10 min, mientras que la expresin en lisado completo no fue
afectada por Tratamiento con insulina. La absorcin heptica aparente de [125I] A (1-40)
tambin fue inducida por la insulina de una manera dependiente del tiempo. El aumento de la
absorcin de [125I] A (1-40) por la insulina era dependiente de la concentracin (EC50 230 pM)
y fue completamente eliminado por la protena asociada al receptor (2 M), un inhibidor de
LRP-1. En conclusin, la insulina plasmtica facilita la translocacin de LRP-1 a la membrana
plasmtica heptica a partir de la piscina intracelular, resultando en un aumento insignificante
de la captacin heptica A (1-40) de la sangre circulante. El mecanismo actualmente propuesto
explicara los resultados epidemiolgicos que demuestran que la diabetes mellitus tipo II es un
factor de riesgo de la enfermedad de Alzheimer.
El pptido amiloide (A), un pptido de 39 a 43 aminocidos derivado de la escisin proteoltica
de la protena precursora amiloide, es el principal constituyente de los depsitos de amiloide
cerebral parenquimatoso y cerebrovascular en la enfermedad de Alzheimer (EA). La forma de
40 aminocidos de A, A (1-40) es la forma predominante de amiloide cerebrovascular (Castan
et al., 1996) y representa aproximadamente el 90% del A presente en la circulacin (Seubert et
al , 1992). Bajo condiciones fisiolgicas, el plasma A (1-40) se elimina rpidamente de la
circulacin con una vida media de 1,2 a 15 min en roedores (Poduslo et al., 1997, Hone et al.,
2003, Ghiso et al., 2004 , Kandimalla et al., 2005). Este rpido aclaramiento del plasma A (1-40)
est mediado en gran parte por el hgado (Honeetal., 2003; Ghiso et al., 2004), y la protena
relacionada con el receptor de lipoprotena de baja densidad (LRP-1) es el principal receptor
responsable Para la captacin heptica A (1-40) (Tamaki et al., 2006). Se ha demostrado que
una reduccin en el aclaramiento del plasma A (1-40) por rganos sistmicos est asociada con
un aumento en la acumulacin de A (1-40) en el cerebro (Mackic et al., 1998, 2002), lo que
indica que el acmulo sistmico La eliminacin de A (1-40), especialmente por el hgado,
podra desempear un papel importante en la determinacin de los niveles de plasma A (1-40)
disponibles para el transporte en el cerebro a travs de la barrera hematoenceflica (Mackic et
al., 1998 , 2002). La diabetes mellitus tipo II (DM), que se caracteriza por una respuesta
atenuada a la sealizacin de la insulina en los tejidos perifricos (resistencia a la insulina),
est asociada con un mayor riesgo tanto de demencia vascular como de AD (Yoshitake et al.,
1995, Leibson et al. , 1997, Ott et al., 1999). Aunque la patognesis exacta no est clara, se han
propuesto varios mecanismos para explicar la alta incidencia de la EA en pacientes con DM
tipo II, incluyendo dao isqumico y dao a travs de metabolitos txicos de glucosa y
glicacin avanzada de protenas funcionales (Biessels y Kappelle, 2005). Evidencia reciente y
creciente pone de relieve el papel directo de la insulina en el vnculo entre la EA y la DM tipo
II. La infusin intravenosa de insulina, mientras que el mantenimiento de la glucosa plasmtica
a un nivel basal de ayuno produce una mejora notable de la memoria para los pacientes con
AD (Craft et al., 1996). Tambin es probable que la insulina afecte al proceso de depuracin de
A, ya que se ha informado de que los niveles plasmticos de protena precursora amiloide, uno
de los ligandos de LRP-1, estn inversamente correlacionados con los niveles plasmticos de
insulina (Boyt et al., 2000). Esto sugiere una asociacin directa entre la insulina plasmtica y la
liberacin mediada por LRP-1 de la protena precursora de amiloide en la periferia y plantea la
posibilidad de que la resistencia perifrica a la insulina en el DM de tipo II cause un
aclaramiento de A mediado por LRP-1 conduciendo a Cerebral Una acumulacin. Por lo tanto,
el propsito del presente estudio fue aclarar el efecto de la insulina plasmtica en la expresin
y localizacin de LRP-1 en hepatocitos y en la depuracin heptica de A (1-40) de la circulacin.
Materiales y mtodos
Animales. Las ratas Sprague-Dawley (SD) fueron suministradas por Charles River (Yokohama,
Japn). Se permiti a los animales acceso ad libitum al agua del grifo y una dieta estndar de
peletizacin (CRF-1, Oriental Yeast, Tokio, Japn). Para el estado de ayuno, los animales se
mantuvieron en ayunas durante 48 h con libre acceso al agua. Las investigaciones descritas en
este informe se ajustaron a los requisitos del Comit de Cuidado de Animales, Escuela de
Postgrado de Ciencias Farmacuticas, Universidad de Tohoku (Sendaishi, Japn).
Reactivos. Se adquirieron [125I] A (1-40) (2200 Ci / mmol), Na [125I] (17 Ci / mg) y [3H] agua (1
mCi / g) de PerkinElmer Life y Analytical Sciences (Waltham, MA ). Se adquirieron insulina
recombinante humana, 2-macroglobulina (2M) y clorhidrato de xilazina de Sigma (St. Louis,
MO). El hidrocloruro de ketamina se adquiri de Sankyo (Tokio, Japn). La protena asociada a
receptor (RAP) se adquiri de Oxford Biomedical Research (Oxford, MI). Todos los dems
productos qumicos eran productos comerciales de calidad de reactivo.
Preparacin e Iodacin de 2M activado con metilamina. 2M se incub con metilamina 200
mM en fosfato de sodio 50 mM y NaCl 150 mM, pH 7,4, durante 1 hora a temperatura
ambiente. (2) Se incub 2M (8,6 mg / ml) con metilamina como se describi anteriormente
(Ashcometal, 1990). La macroglobulina activada con metilamina 2 (2M *) se dializ
extensivamente con NaHCO _ {3} 100 mM y NaCl 500 mM, pH 8,3, usando una unidad de
centrifugacin Centricon (YM - 10, Millipore, Billerica, MA). 2M * (10 g) con Na [125I] (250 Ci)
en 1 mg / ml de cloramina-T, y 250 mM de fosfato sdico, pH 7,5, durante 1 min a 25C. Se
elimin el 125I no incorporado haciendo pasar la mezcla de reaccin a travs de una columna
de desalinizacin de sal de D-sal (Pierce, Rockford, IL) equilibrada con solucin salina
tamponada con fosfato (PBS) que contena albmina de suero bovino al 0,5%. Se recogi [125I]
2M * (17,9 Ci / g) en el volumen vaco del efluente de la columna. El porcentaje de [125I] 2M *
precipitable por el cido tricloroactico fue de 99,1%.
La captacin heptica Mtodo ndice. La captacin unidireccional de [125I] 2M * y [125I] A (1-
40) se determin por inyeccin en una vena porta de rata, como se ha descrito previamente
(Pardridge y Mietus, 1979). Las ratas se anestesiaron mediante inyeccin intramuscular de
ketamina (125 mg / kg) y xilazina (1,25 mg / kg), y sus temperaturas rectales se mantuvieron a
37 C usando una almohadilla de calentamiento. Se lig la arteria heptica y se inyectaron
rpidamente en la vena porta 200 l de tampn HEPES de Ringer, pH 7,4, que contena tanto 0,2
Ci de compuesto yodado como 4,0 Ci de agua [3H] como referencia interna altamente
difusible. Dieciocho segundos despus de la inyeccin, el lbulo principal derecho fue
extirpado del hgado y solubilizado en Solvable (PerkinElmer Life and Analytical Sciences). Para
el estudio de inhibicin, se administraron 200 l de RAP 2M o solucin salina a travs de una
vena porta 30 s antes de la inyeccin del trazador si era necesario. Se midieron los niveles de
125I y 3H en el hgado y en las soluciones de inyeccin usando un contador (ALC300; ALOCA,
Tokio, Japn) y un contador de centelleo lquido (TRI-CARB 2050CA; PerkinElmer),
respectivamente.
Determinacin de la LUI. La LUI se define en la ecuacin 1 y se determin usando la
ecuacin En este caso, ET y ER son las fracciones del compuesto yodado y del agua [3H],
respectivamente, extradas por el hgado en una sola muestra pasar. El valor de ET se puede
estimar cuando LUI y ER se determinan experimentalmente. Debido a que el valor de ER de
[3H] agua se indica como 65 4% (Pardridge y Mietus, 1979), la siguiente ecuacin es vlida: ET
LUI0.65 (3) Las extracciones fraccionarias aparentes consisten en absorcin intracelular,
distribucin al espacio intersticial , Y retencin en el espacio vascular. Por lo tanto, la
extraccin extravascular del compuesto yodado (E), que slo se debe a la captacin
intracelular, se obtuvo de la siguiente manera: Ens Ens Ens Ens Ensaya Ens representa la
extraccin fraccionada para su distribucin en el espacio vascular y extracelular. En este
clculo, se utiliz el valor Ens de 13 3% (Pardridge y Mietus, 1979).
Tratamiento de la insulina de ratas.
Las ratas se anestesiaron con una inyeccin intramuscular de ketamina y xilazina, y se infundi
insulina en la vena porta a 5 l / min de hgado y una concentracin de 420 nM, excepto en
dependencia de la concentracin mostrada en la Fig. 4C. La concentracin de insulina en el
flujo sanguneo portal (Cinsulina, portal) se estim de la siguiente manera: Cinsulina, portal I0F
(5) Aqu, I0 y F son la velocidad de infusin de insulina (en picomoles por minuto por gramo de
hgado) y la sangre portal (En mililitros por minuto por gramo de hgado), respectivamente. En
este clculo, se utiliz el valor de F declarado de 1,4 ml / (min g de hgado) (Pardridge y Mietus,
1979). La concentracin de insulina en plasma de rata se determin mediante el uso de ensayo
de inmunoabsorcin enzimtica unido a enzimas de Mercodia Ultrasensitive Rat (Mercodia AB,
Uppsala, Suecia).
Anlisis de Western Blot. Se obtuvo lisado completo del sobrenadante (1000 g, 10 min) de
homogeneizados de hgado de rata en tampn de lisis hipotnico (Tris 10 mM, NaCl 10 mM y
MgCl2 1,5 mM, pH 7,4). Para obtener la fraccin de membrana plasmtica, los homogenados
se centrifugaron a 10.000 g durante 10 min a 4 C y el sobrenadante se centrifug a 100.000 g
durante 1 h a 4 C. Los grnulos se resuspendieron en HEPES 10 mM y sacarosa 250 mM, pH
7,4, y se cubrieron con una solucin de sacarosa al 38% y luego se centrifugaron a 100.000 g
durante 40 min a 4C usando un rotor giratorio (SW40Ti, Beckman Coulter, Fullerton, CA). La
capa turbia se recogi y se centrifug a 100.000 g durante 1 h a 4 C, y la fraccin de
membrana plasmtica se obtuvo a partir de los grnulos. Las protenas se sometieron a
electroforesis en condiciones no reductoras en gel de poliacrilamida SDS-gel de Tris / glicina al
7,5% (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Las protenas separadas fueron posteriormente
electrotransferidas a una membrana de nitrocelulosa (Toyo Roshi, Tokio, Japn), y la
membrana se trat con solucin de bloqueo (Tris 25 mM, NaCl 125 mM, leche desnatada al 5%
y Tween20 al 0,1%, pH 8,0) Anticuerpo contra cadena de LRP - 1 (0,1 g / ml, American
Diagnostica, Greenwich, CT), subunidad Na K + ATPasa 1 (1: 10.000; Upstate Biotechnology,
Lake Placid, NY) o actina (Sigma 1: 2000) Insulina facilita LRP-1 mediada heptica A Liquidacin
851 en ASPET Journals el 5 de junio de 2017molpharm.aspetjournals.orgDownloaded de
durante 16 h a 4 C. La membrana se lav con Tween 20 al 0,1% en PBS y despus se incub
con IgG anti-ratn conjugada con peroxidasa de rbano picante (1: 5000, MP Biomedicals,
Irvine, CA) durante 1 h. La inmunoreactividad se visualiz con un kit de quimioluminiscencia
mejorado (Supersignal western pico quimioluminescent substrate: Pierce) y se expuso a una
pelcula X-OmatAR (Eastman Kodak, Rochester, NY). Se determinaron intensidades de banda
relativas en el lisado completo (LRP-1 / -actina) y en la fraccin de membrana plasmtica (LRP-
1 / Na, K-ATPasa) a partir de imgenes densitomtricas utilizando el software Scion Image Beta
WIN 4.02 (Scion Corporation, Frederick, MARYLAND).
Anlisis inmunohistoqumico. Las ratas se anestesiaron con una inyeccin intramuscular de
ketamina y xilazina y se perfundieron transcardialmente con paraformaldehdo al 4% en
tampn de fosfato 0,1 M, pH 7,4 (40 ml / min, 10 min). Se aisl el hgado y se sumergi en PBS
que contena 500 mM de sacarosa durante 16 ha 4 C para proteger contra la congelacin. Las
secciones congeladas (10 m de grosor) se hicieron usando un criostato (CM1900, Leica,
Heidelberg, Alemania) y luego se montaron sobre lentes deslizantes silanizadas (Dako North
America, Inc., Carpinteria, CA). Despus de que las secciones se incubaron con suero de cabra
al 1% (Nichirei, Tokio, Japn) durante 1 h a temperatura ambiente, se aplic un anticuerpo
diluido contra la cadena de LRP-1 (0,1 g / ml) a las secciones y se incubaron durante 16 h a
4C. Las secciones se lavaron con solucin salina Trisbuffered que contena CaCl _ {2} 1 mM y
luego se incubaron con IgG anti - ratn conjugado con isotiocianato de fluorescena (1: 200;
MP Biomedicals) durante 1 h a temperatura ambiente. Los ncleos se tieron con yoduro de
propidio 1,5 M (Invitrogen, Carlsbad, CA) y se montaron secciones utilizando medio de
montaje Vectashield (Vector Laboratories, Burlingame, CA). Las secciones se analizaron
utilizando un microscopio de fluorescencia confocal de barrido lser (TSC SP, Leica). Anlisis
estadstico. Todos los datos se presentan como la SEM media. La significacin estadstica de las
diferencias entre las medias se determin utilizando la prueba t de Student de dos colas no
apareada para dos grupos y por anlisis unidireccional de varianza seguido por la prueba de
Dunnett para ms de dos grupos.
Resultados
La insulina plasmtica aumenta la expresin de LRP-1 en la membrana plasmtica del
hgado. Para aclarar el efecto de la insulina plasmtica en la expresin y localizacin del LRP-1
en el hgado, las ratas en ayunas recibieron una infusin de insulina de 2,1 pmol / (min g de
hgado) en la vena porta para cada uno de los perodos indicados en Fig.1 y La expresin de
LRP-1 en el hgado se determin por anlisis de transferencia Western. La concentracin de
insulina en el flujo sanguneo portal estim ser de 1,5 nM de la ecuacin 5. Como se muestra
en la Fig. 1, la expresin de LRP-1 en la fraccin de membrana plasmtica se increment por
infusin de insulina de una manera dependiente del tiempo y se obtuvo un aumento de 2,16
veces despus de 10 min de tratamiento, mientras que la expresin de LRP-1 en todo el lisado
no fue Afectados (Fig. 1, A y B). Ni el nivel de actina ni de protena Na, K-ATPasa, que eran
controles de carga para el lisado entero y la fraccin de membrana plasmtica,
respectivamente, se vieron afectados por el tratamiento con insulina.
La ingesta de nutrientes afecta a la expresin de LRP-1 en la membrana plasmtica del
hgado. Bajo nuestras condiciones experimentales, las concentraciones plasmticas de insulina
fueron 250 22 y 60 17 pM en ratas alimentadas y en ayunas, respectivamente (media SEM, n
3). La expresin de LRP-1 en la fraccin de membrana plasmtica fue 2,22 veces mayor en el
hgado de ratas alimentadas en comparacin con la de ratas en ayunas, mientras que la
expresin en todo el lisado no fue afectada por la ingesta de nutrientes (Fig. 2, A y B ). La
localizacin intracelular de LRP-1 en el hgado se examin mediante anlisis
inmunohistoqumico (Fig. 2, C-F). Bajo condiciones de alimentacin, la fluorescencia verde
derivada de LRP-1 se detect principalmente en la membrana plasmtica de los hepatocitos y
las clulas de Kupffer (Fig. 2, C y D). En los hepatocitos, LRP-1 se localiz en la membrana
sinusoidal, y no se observ fluorescencia significativa en la membrana canalicular. En
condiciones de ayuno, la fluorescencia verde se detect en el compartimento citoplasmtico
de los hepatocitos (Fig. 2, E y F).
La insulina plasmtica aumenta la absorcin mediada por LRP-1 de 2M * en el hgado. Para
clarificar el efecto de la insulina plasmtica en la funcin de la LRP-1 en el hgado, se determin
la absorcin heptica de 2M *, que es un ligando de LRP-1, mediante el mtodo LUI. Bajo
condiciones de alimentacin, la extraccin extravascular de [125I] 2M * fue 32,4 4,6% (Figura
3A). La absorcin heptica de [125I] 2M * se inhibi significativamente en un 76,4% despus
del pretratamiento con RAP, una molcula que interacciona con LRP-1, lo que indica la mayor
participacin de LRP-1 en la absorcin heptica de 2M *. En condiciones de ayuno, la captacin
heptica de [125I] 2M * fue 62,0% inferior a la de las condiciones alimentadas, y no se observ
una inhibicin significativa por PAR. La absorcin heptica de [125I] 2M * en condiciones de
ayuno se increment significativamente con el tratamiento con insulina de una manera
dependiente del tiempo (Figura 3B). La captacin de [125I] 2M * se increment2,39 veces en el
tratamiento con mintranstrato de insulina y luego comenz a nivelarse, lo que se correlaciona
con el aumento de la expresin de LRP-1 en la fraccin de membrana plasmtica del hgado
(Figura 1).
La insulina plasmtica induce la captacin mediada por LRP-1 de A (1-40) por el hgado. Bajo
condiciones de alimentacin, la extraccin extravascular de [125I] A (1-40) fue 69,5 3,1%
(Figura 4A). La absorcin heptica de [125I] A (1-40) se inhibi significativamente en un 47,8%
despus del pretratamiento con RAP. En condiciones de ayuno, la captacin heptica de [125I]
A (1-40) fue 42,8% inferior a la de las condiciones alimentadas, y no se observ ninguna
inhibicin significativa por PAR. La absorcin heptica de [125I] A (1-40) bajo condiciones de
ayuno se increment significativamente por el tratamiento con insulina de una manera
dependiente del tiempo (Figura 4B, E), como en el caso de [125I] 2M * (Figura 3B ). La
absorcin de [125I] A (1-40) por el hgado se increment 1,70 veces despus de un tratamiento
con insulina de 10 min y luego alcanz el estado estacionario. El aumento dependiente de
insulina en la absorcin de [125I] A (1-40) se suprimi por completo mediante el
pretratamiento con RAP (Figura 4B; F). La facilitacin de la absorcin de [125I] A (1-40) fue
dependiente de la concentracin de insulina, y la absorcin aument a la concentracin
estimada de insulina en el flujo sanguneo portal superior a 0,1 nM y alcanz una meseta en
concentraciones mayores de 1 nM (Fig. 4C). Se determin una respuesta medio-mxima a una
concentracin de insulina plasmtica estimada de 230 pM (EC50).
Discusin
El presente estudio demuestra que la insulina plasmtica induce la translocacin subcelular de
LRP-1 a la membrana plasmtica en hepatocitos y aumenta la funcin de transporte aparente
de LRP-1. Adems, se demostr que la captacin heptica mediada por LRP-1 de A (1-40) de la
circulacin estaba bajo la regulacin de la insulina en plasma.
Al infundir a las ratas en ayunas con insulina a travs de una vena porta, la expresin de LRP-1
en la fraccin de la membrana plasmtica heptica aument de manera dependiente del
tiempo y alcanz el estado estacionario en 10 minutos (Fig. 1), lo que sugiere que la insulina
podra facilitar la translocacin De LRP-1 desde la piscina intracelular hasta la membrana
plasmtica en hepatocitos. Esta regulacin ms corta de la PRL-1 se produjo en el nivel
transcripcional post-, debido a que la expresin en todo el lisado no fue afectada por el
tratamiento con insulina, y la LRP-1 fue trasladada a la membrana plasmtica bajo condiciones
alimentadas (Figuras 1 y 2). Adems, el aumento de la captacin heptica de 2M * por el
tratamiento con insulina se correlaciona con el aumento de la expresin de LRP-1 en la
membrana plasmtica heptica (Fig. 2). Estos resultados demuestran claramente que la
insulina plasmtica induce la translocacin subcelular de LRP-1 a la membrana plasmtica,
dando lugar a un aumento en la funcin de LRP-1 en el hgado. La extraccin de [14C] carboxil-
inulina no fue afectada ni por la ingesta de nutrientes ni por el tratamiento con insulina (datos
no mostrados), lo que sugiere que la insulina no afecta la extraccin fraccionaria para su
distribucin en el espacio vascular y extracelular. El mecanismo de regulacin de la
translocacin de LRP-1 por insulina ha sido estudiado en los adipocitos. La unin de RAP a la
membrana plasmtica de los adipocitos se increment tratando a las ratas con insulina, y la
unin alcanz un mximo despus de un tratamiento de 4 a 5 minutos (Descamps et al.,
1993). Se ha informado de que el aumento de la localizacin de la superficie celular de LRP-1
se asocia con la activacin de la fosfatidilinositida 3-quinasa, y la insulina probablemente
estimula la tasa de translocacin LRP-1 de la piscina intracelular a la membrana plasmtica
debido a la tasa de internalizacin de LRP- No se redujo por el tratamiento con insulina (Ko et
al., 2001). Tambin se ha informado de que el tratamiento con insulina induce la localizacin
caveolar de LRP-1, lo que puede aumentar la localizacin estable en la membrana plasmtica
(Zhang et al., 2004). LRP-1 puede compartir estos mecanismos en el hgado, mientras que el
anlisis adicional se requiere para una comprensin ms profunda del mecanismo de la
regulacin de insulina regulada LRP-1.
En el hgado, LRP-1 media el aclaramiento a granel de lipoprotenas, proteasas plasmticas,
complejos de proteasa-inhibidor, y A (1-40) mostrados en este estudio (Nykjaer y Willnow,
2002). Por ejemplo, LRP-1 media la captacin heptica de restos de quilomicrones, la
lipoprotena que transporta los lpidos de la dieta desde el intestino hasta el hgado. Por lo
tanto, la regulacin de la insulina de LRP-1 es probable que desempear un papel fisiolgico en
el mantenimiento de la homeostasis lipdica sistmica en respuesta a las condiciones de
alimentacin mediante la facilitacin de la depuracin heptica de los lpidos de la dieta, que
se incrementan por la ingesta de nutrientes. Esto tambin podra explicar la hiperlipidemia
asociada con la DM despus de la atenuacin de LRP-1-dependientes de captacin. Hemos
identificado anteriormente LRP-1 como un principal receptor responsable de la captacin
heptica de plasma A (1-40) (Tamaki et al., 2006). El presente estudio demuestra que la
absorcin heptica de A (1-40) es inducida por la insulina de una manera dependiente del
tiempo y la concentracin (Figura 4). Como en el caso de 2M *, la induccin de la captacin es
RAP sensible y se correlaciona con el aumento de la expresin de LRP-1 en la membrana
plasmtica heptica (Figura 1). Por lo tanto, la translocacin inducida por insulina de LRP-1
conduce a la induccin de la captacin heptica de A (1-40). Este mecanismo explica el informe
de que el nivel plasmtico de la protena precursora amiloide, uno de los ligandos de LRP-1,
est inversamente correlacionado con el nivel de insulina en plasma (Boyt et al., 2000). El
anlisis de la dependencia de la concentracin revel que la CE50 de insulina para la
facilitacin de la captacin (0,23 nM) era comparable con las concentraciones plasmticas bajo
condiciones alimentadas (0,25 nM). Esta observacin indica que los niveles de insulina en
plasma eran lo suficientemente altos para activar la translocacin subcelular de LRP-1 bajo
condiciones alimentadas. Por lo tanto, bajo condiciones fisiolgicas, el aclaramiento heptico
del plasma A (1-40) podra ser regulado dinmicamente por cambios dependientes de la dieta
en el nivel de insulina en plasma. Sin embargo, en pacientes con DM tipo II, es posible que el
aclaramiento heptico del plasma A (1-40) no sea inducido por la insulina plasmtica, porque
la translocacin de LRP-1 a la membrana plasmtica se vera afectada debido a la atenuacin
de la insulina Respuesta de sealizacin. Esta alteracin de la induccin de la depuracin
heptica A (1-40) es probable que sea una de las causas de la acumulacin de A en el
cerebro. Las ratas SD envejecidas exhiben caractersticas de resistencia a la insulina (Narimiya
et al., 1984, Barzilai y Rossetti, 1996, Field y Gibbons, 2000). Nuestro informe anterior
demostr que el aclaramiento heptico de A (1-40) se redujo en ratas SD de 13 meses de edad
en comparacin con las ratas SD de 7 semanas de edad (Tamaki et al., 2006). Esta evidencia
apoya el deterioro de la depuracin heptica A (1-40) por la resistencia a la insulina. Sin
embargo, es necesario un anlisis adicional para aclarar la atenuacin de la funcin y
translocacin de LRP-1 en el hgado de pacientes con DM tipo II. El presente estudio propone
que la induccin de la funcin LRP-1 en el hgado sera eficaz para el tratamiento de la DA en el
tipo II DM. Aunque se desconoce el mecanismo molecular de induccin de la translocacin y
funcin del LRP-1 en el hgado por insulina, el gen LRP-1 humano tiene un elemento de
respuesta al proliferador peroxisoma predicho, y la rosiglitazona, que es un ligando PPAR
(receptor activado por proliferador de peroxisoma) MRNA transcripcin y expresin funcional
de LRP-1 (Gauthier et al., 2003). Los ligandos de PPAR, como las tiazolidinedionas (rosiglitazona
y pioglitazona), tambin aumentan la sensibilidad perifrica a la insulina, y se utilizan para el
tratamiento del DM tipo II (Peraldi et al., 1997). Por lo tanto, es posible que los ligandos PPAR
permitan la recuperacin de la funcin atenuada de LRP-1 en el hgado de pacientes con DM
tipo II. Es interesante que la evidencia reciente sugiera que el tratamiento con ligando PPAR
reduce los niveles de cerebro A y tiene un efecto protector sobre el dficit de aprendizaje y
memoria en ratones modelo AD (Heneka et al., 2005; Pedersen et al., 2006) y en pacientes con
Leve a moderada (Risner et al., 2006). Por lo tanto, las tiazolidindionas podran ser
especialmente eficaces para el tratamiento de AD en DM de tipo II atenuando la resistencia a
la insulina y estimulando la transcripcin de ARNm de LRP-1, conduciendo ambas a la
activacin de la eliminacin de A (1-40) mediada por LRP-1 en el hgado. El presente estudio
demuestra que la insulina plasmtica facilita la translocacin intracelular de LRP-1 a la
membrana plasmtica en el hgado y aumenta la funcin de transporte aparente de LRP-
1. Adems, la captacin heptica de plasma Se ha demostrado que la A (1-40) mediada por
LRP-1 est regulada por la insulina plasmtica, lo que sugiere una relacin causal entre la
depuracin heptica A (1-40) reducida y la resistencia a la insulina. Los presentes hallazgos
aumentan nuestra comprensin de la funcin de la insulina en la regulacin del plasma A (1-
40) clearancemediatedLRP-1andofthelinkbetweenADand tipo II DM.